專利名稱：：三角葉薯蕷皂苷脂質體及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及三角葉薯蕷皂苷脂質體及其制備方法和用途，屬于醫藥領域。技術背景隨著人們社會生活的發展變化，心血管疾病日趨嚴重的危害著人類所期望的壽命和生存質量，是世界上發病率、死亡率最高的疾病之一。據有關資料統計，我國一些心血管疾病的發病率冠心病為10%、急性心肌梗塞為15.4/10萬，加上人口老齡化的加快，以及以腦卒中和心肌梗死為主要表現的具有致殘、致死后果的心血管疾病的發病率急劇上升，并逐多呈年輕化趨勢。目前，我國大約有心血管疾病患者1300多萬，并且每年以10%的發病率增長，心血管疾病的防治成為全世界共同關心的問題。心血管疾病成為人類健康的大敵，而防治心腦血管疾病的藥物日趨凸顯其重要地位。而目前防治心血管疾病的藥物還是以西藥為主，其具有的毒副作用可能并不符合大多數心血管疾病的慢性過程。黃姜，學名盾葉薯蕷(DioscoreazingiberensisC.H.Wright)，系薯蕷科薯蕷屬植物，為我國特有的野生植物資源。三角葉薯蕷皂苷(Deltonin)是盾葉薯蕷所含有的多種皂苷的一種。三角葉薯蕷皂苷具有在對抗心血管疾病方面的多種藥理活性，如保護血管內皮細胞，降血脂，預防和治療血栓，改善冠狀動脈供血以及預防和治療心肌梗死。藥物在人體內發揮藥理作用，不僅僅與其本身的藥理活性有關，還與承載藥物的藥物傳遞系統(DDS)關系密切。納米脂質體是極具開發潛力的藥物載體，其作為難溶于水的藥物輸送載體具有許多優越性可將難溶藥物以納米級包埋于脂質體形成的疏水腔內，使得藥物粒子溶解度增大；能促進被包裹的難吸收性的藥物在腸道的傳遞，提高其生物利用度；而且納米脂質體制備簡單，可多途徑給藥，易于規模化生產。對同一藥物選用不同的膜材不同的制備方法包封率會有很大的差距，因而在制備時針對包封藥物要在膜材和制備方法上多做篩選，同時還要解決產品穩定性及被包藥物泄露的問題。因此制備脂質體的瓶頸在于如何尋找合適的輔料及輔料用量，尋找合適的藥脂比，使其在包封率、載藥量、穩定性方面均適應臨床需要。目前，尚無將三角葉薯蕷皂苷制成脂質體的相關報道。
發明內容本發明所解決的技術問題是提供三角葉薯蕷皂苷的新劑型，以三角葉薯蕷皂苷為活性成分，加入脂類物質制備而得的脂質體，具有治療心血管疾病的作用。本發明脂質體是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.515份；其中，所述脂類為脂肪酸、甘油酯、蠟質類、類固醇類中的至少一種。可以采用高壓均質法、薄膜法、逆向蒸發法、冷凍干燥法或熔融法中任一種方法制備而得，制備而得的脂質體粒徑形態均一，粒徑為l6um，包封率高，穩定性好，符合藥典要求，具有極好的治療心血管疾病的效果。具體實施方式本發明三角葉薯蕷皂苷脂質體，它是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.515份；脂類采用脂肪酸、甘油酯、蠟質類、類固醇類中的至少一種；具體地，脂肪酸采用硬脂酸、棕櫚酸、癸酸、二十二酸中的至少一種；甘油酯采用三月桂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯中的至少一種；蠟質類采用鯨蠟醇十六酸酯；類固醇類采用膽固醇。根據組分篩選實驗三角葉薯蕷皂苷脂質體優選如下重量配比的組分三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.510份。綜合考慮包封率、載藥量和穩定性，優選組分配比為三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.55份。上述脂質體中還可以加入O.110份乳化劑，乳化劑采用磷脂、膽酸鹽、泰洛沙姆、短鏈醇中的至少一種；具體地，磷脂采用大豆卵磷脂、雙肉豆蔻磷脂酰膽堿、雙肉豆蔻磷脂酰甘油中的至少一種。本發明三角葉薯蕷皂苷脂質體是由高壓均質法、薄膜法、逆向蒸發法、冷凍干燥法或熔融法中任一種方法制備而得的，因影響本發明脂質體的主要因素為輔料及輔料用量，而制備方法對產品的影響不大，故任意脂質體的制備方法均可以應用到本發明脂質體的制備。本發明脂質體既可以作為制劑直接使用，也可以作為其他制劑的原料應用，如本發明脂質體可以為口服制劑、吸入劑、氣霧劑或噴霧劑的原料。以下具體實施例中說明。但本發明的保護范圍不局限于此。實施例l高壓均質法制備三角葉薯蕷皂苷脂質體取卵磷脂(成都科龍化工試劑有限公司)2.5g，膽固醇(成都科龍化工試劑有限公司)0.5g，在加入15ml三角葉薯蕷皂苷磷酸鹽緩沖液(含有三角葉薯蕷皂苷0.5g)升溫至8(TC;將此高溫液相加入到同等溫度的雙肉豆蔻磷脂酰甘油溶液中，快速混勻lmin(8500rpm)，再通過500bar高壓混勻3次；最后降溫固化即得。包封率為65%。實施例2薄膜法制備三角葉薯蕷皂苷脂質體將卵磷脂(成都科龍化工試劑有限公司)1.25g，膽固醇(成都科龍化工試劑有限公司)0.3g溶解于60ml乙醚，用250ml茄形瓶在旋轉蒸發儀上減壓蒸發以除去乙醚，可見脂質在錐形瓶壁上形成一薄膜，再加入15ml三角葉薯蕷皂苷磷酸鹽緩沖液(含有三角葉薯蕷皂苷0.3g)旋轉水化得到三角葉薯蕷皂苷脂質體。包封率為70%。實施例3逆向蒸發法制備三角葉薯蕷皂苷脂質體取卵磷脂2.5g，膽固醇lg用120ml乙醚溶解于250ml錐形瓶中，再加入20ml三角葉薯蕷皂苷8%甘露醇水溶液(含有三角葉薯蕷皂苷0.4g)，水浴超聲使成為均一的單相體系，再減壓蒸發除去乙醚至凝膠狀態，后繼續減壓蒸發10min，得到三角葉薯蕷皂苷脂質體。包封率為50%。實施例4冷凍干燥法制備三角葉薯蕷皂苷脂質體取卵磷脂1.75g，膽固醇0.3g用70ml乙醚溶解于250ml錐形瓶中，在旋轉蒸發儀上減壓蒸發出去乙醚，脂質在瓶壁上成一薄膜，加入20ml磷酸鹽緩沖液旋轉水化得到空白脂質體，加入適量海藻糖，混勻，在真空中冷凍干燥，隨即用三角葉薯蕷皂苷磷酸鹽緩沖液(含有三角葉薯蕷皂苷0.3g)振搖進行分散，得到三角葉薯蕷皂苷脂質體。包封率為55%。實施例5熔融法制備三角葉薯蕷皂苷脂質體取卵磷脂2g，膽固醇lg熔融混勻，將三角葉薯蕷皂苷磷酸鹽緩沖液(含有三角葉薯蕷皂苷0.4g)加入熔融液中，在組織攪拌機中高速攪拌，至脂質體形成。包封率為42%。將實施例15制備而得的三角葉薯蕷皂苷脂質體冷凍干燥后，裝入粉末吸入裝置，得到粉末吸入劑。將脂質體粉末裝在定量裝置中，由患者主動吸入。實施例6三角葉薯蕷皂苷脂質體質量檢査1、三角葉薯蕷皂苷脂質體的粒徑及其形態粒徑測定三角葉薯蕷皂苷脂質體適量經磷酸鹽緩沖液稀釋后，用Zeta電位及粒度測定儀測定其粒徑大小。形態觀察三角葉薯蕷皂苷脂質體適量置銅網上，經磷鎢酸復染后，于透射電鏡下觀察脂質體結構。取適量經稀釋后，置于光學顯微鏡下觀察其形態和分布。三角葉薯蕷皂苷脂質體為大單室脂質體，圓形或橢圓形，外形圓整光滑，形態分布均一。平均粒徑為lum。2、包封率測定取三角葉薯蕷皂苷脂質體混懸液適量，置低溫高速離心機中，4°C，20000gX30min離心，取上清液20yl，用磷酸鹽緩沖液稀釋至5ml，搖勻。RP—HPLC法測定游離的三角葉薯蕷皂苷按下式計算包封率。EntrappingEfficiency(%)=(C總-C游離)/C總XlOC)0/03、脂質體體外泄漏分別考察三角葉薯蕷皂苷脂質體在(25±0.5)。C和(37±0.5)。C恒溫水浴中持續震蕩5天的體外釋放狀況。將脂質體適量置于透析袋內，釋放介質為磷酸鹽緩沖液，震蕩頻率為80r/min，持續震蕩5天，分別ld，2d，3d，4d，5d取透析液lml，并同時補充同溫新鮮磷酸鹽緩沖液lml，RP-HPLC測定透析液中游離的三角葉薯蕷皂苷。透析完成后，剪破透析袋，收集袋內的脂質體并用10。/。TritonX-IOO破環，作為時間無窮大時的藥物泄露量，計算其累積釋放量，評價三角葉薯蕷皂苷脂質體的體外穩定性。體外釋放實驗結果表明三角葉薯蕷皂苷脂質體在25。C和37。C介質中藥物釋放緩慢，37°C5天的體外累積釋放量占時間無窮大時脂質體釋放量的1.89%，25°C5天的體外累計釋放量占時間無窮大時脂質體釋放量的O.38%。以下通過輔料及輔料篩選實驗說明本發明脂質體的有益效果。發明人在前期研究過程中發現，制劑主要存在脂質體包封率偏低的技術缺陷，而且制劑不穩定，這就限制了本脂質體發揮更好的藥理活性。早期試驗當藥脂比小于l:15時，載藥量小，無法適用于臨床需求；當藥脂比大于l:0.5時包封率較低，約為20%30%，在25。C和37'C介質中藥物釋放較快，37'C5天的體外累積釋放量占時間無窮大時脂質體釋放量的5.2%，25'C5天的體外累計釋放量占時間無窮大時脂質體釋放量的3.2%。通過發明人長期研究得出當藥脂比為l:0.515時，可以較好的適應臨床需求，篩選實驗結果如下一、將三角葉薯蕷皂苷與不同的輔料制成脂質體檢測其包封率，檢測結果見表14。表l三角葉薯蕷皂苷硬脂酸(乳化劑為雙肉豆蔻磷脂酰甘油)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2三角葉薯蕷皂苷三棕櫚酸甘油酯(乳化劑為雙肉豆蔻磷脂酰甘油)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3三角葉薯蕷皂苷鯨蠟醇十六酸酯(乳化劑為雙肉豆蔻磷脂酰甘油)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表4三角葉薯蕷皂苷膽固醇(乳化劑為雙肉豆蔻磷脂酰甘油)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表l中的脂質體的平均粒徑，多分散系數以及Zeta電位數據，詳見表5<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表14說明三角葉薯蕷皂苷與脂類的重量配比在1份210份均能實現包封率大于45%的目的，而制備脂質體時脂質量濃度越高，脂質體粒徑越大；而皂苷質量濃度相對更低，雖然包封率高，但載藥量低。但隨投藥量增加，體系游離藥物增多，體系穩定性變差；這兩種情況均不利于該脂質體在臨床中的應用。因此根據實際需要可選擇藥脂比為l:5。權利要求1.三角葉薯蕷皂苷脂質體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷1份、脂類0.5～15份；所述脂類為脂肪酸、甘油酯、蠟質類、類固醇類中的至少一種。2根據權利要求l所述的三角葉薯蕷皂苷脂質體，其特征在于，所述脂肪酸為硬脂酸、棕櫚酸、癸酸、二十二酸中的至少一種；所述甘油酯為三月桂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯中的至少一種；所述蠟質類為鯨蠟醇十六酸酯；所述類固醇類為膽固醇。3根據權利要求l所述的三角葉薯蕷皂苷脂質體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.510份。4根據權利要求3所述的三角葉薯蕷皂苷脂質體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.55份。5根據權利要求14任一項所述的三角葉薯蕷皂苷脂質體，其特征在于，還含有O.520份的乳化劑；其中，所述乳化劑為磷脂、膽酸鹽、泰洛沙姆、含碳數為15的短鏈醇中的至少一種6根據權利要求5所述的三角葉薯蕷皂苷脂質體，其特征在于，所述磷脂為大豆卵磷脂、雙肉豆蔻磷脂酰膽堿、雙肉豆蔻磷脂酰甘油中的至少一種。7根據權利要求5所述的三角葉薯蕷皂苷脂質體，其特征在于，由高壓均質法、薄膜法、逆向蒸發法、冷凍干燥法或熔融法中任一種方法制備而得。8以權利要求7所述的三角葉薯蕷皂苷脂質體制備而得的制劑，其特征在于，所述制劑為口服制劑、吸入劑、氣霧劑或噴霧劑。9權利要求l所述的三角葉薯蕷皂苷脂質體的制備方法，它包括如下步驟A、稱取下述重量配比的組分三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.515份；B、按照高壓均質法、薄膜法、逆向蒸發法、冷凍干燥法或熔融法中任一種方法制備，即得。10權利要求l所述的三角葉薯蕷皂苷脂質體在制備治療心血管疾病的藥物中的應用。全文摘要本發明屬于醫藥領域，涉及三角葉薯蕷皂苷脂質體及其制備方法和用途，本發明脂質體是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷1份、脂類0.5～15份；所述脂類為脂肪酸、甘油酯、蠟質類、類固醇類中的至少一種。可以采用高壓均質法、薄膜法、逆向蒸發法、冷凍干燥法或熔融法中任一種方法制備而得，制備而得的脂質體粒徑形態均一，粒徑為1～6μm，包封率高，穩定性好，符合藥典要求，具有極好的治療心血管疾病的效果。文檔編號A61K9/127GK101152149SQ20071020191公開日2008年4月2日申請日期2007年9月29日優先權日2007年9月29日發明者揚何,侯曉敏,冀承杰,丹李,旺王,程驚秋,蒙魏,文黃申請人:四川大學華西醫院