專利名稱：：氧化苦參堿在制備治療急性、慢性心功能不全疾病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種藥物的臨床新用途，特別是氧化苦參堿在制備治療急性、慢性心功能不全疾病的藥物中的應用，屬于藥品的
技術領域：
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背景技術：
：氧化苦參堿(Oxymatrine)是從中藥苦豆子中提取的或化學合成等途徑獲得的一種生物堿，其分子式為C15H24N202.H20，分子量為282。為無色骨子狀結晶(丙酮)，熔點2080。C，易溶于水。心功能不全(心衰)是由不同病因引起的心臟舒縮功能異常，以致在循環血量和血管舒縮功能正常時，心臟泵出的血液達不到組織的需求，或僅能在心室充盈壓增高時滿足代謝需要。此時神經體液因子被激活參與代償，形成具有血液動力功能導演和神經體液激活多方面特征的臨床綜合征。簡單地說，心功能不全就是由于心臟功能異常，不能滿足身體各組織器官對于心臟泵血的需求而引起的一系列臨床癥狀。心功能不全按其發展進程可分為急性心功能不全和慢性心功能不全。心功能不全是一種癥候群，疲勞、氣短、心悸、體重減輕、肌肉松弛萎縮、整日臥床是臨床常見的綜合征，其發病率較高，死亡率亦高。慢性心功能不全基本病因是各種慢性心肌病損和長期心室負荷過重。在我國，引起慢性心功能不全包括原發性和繼發性兩類，病因包括不明原因和瓣膜疾病為主，其次為高血壓和冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(慢性心功能不全)，其誘因主要是感染、心律失常、水電解質紊亂、過度疲勞、精神壓力過重、環境氣候急劇變化及妊娠、分娩并發其他疾病等。臨床上，慢性心功能不全以左心功能不全最常見，它主要影響患者的肺循環，可表現為呼吸困難、咳嗽、咳痰、咯血、夜尿增多、疲乏無力。氧化苦參堿臨床主要用于過敏性皮膚病及白細胞減少的治療。1994年上海市傳染病醫院實驗發現氧化苦參堿有抗麻鴨乙型肝炎病毒作用，并在上海市多家綜合醫院采用氧化苦參堿治療慢性乙型肝炎均取得良好療效。1998年2月24日氧化苦參堿被衛生部批準為國家治療慢性乙型肝炎五類新藥。目前未見有將氧化苦參堿用于治療急性、慢性心功能不全疾病的報道。本發明的目的在于，提供氧化苦參堿在制備治療急性、慢性心功能不全疾病藥物中的應用。本發明的技術方案是，將氧化苦參堿用在制備治療急性、慢性心功能不全疾病的藥物中。氧化苦參堿應用于制備治療急性、慢性心功能不全疾病的藥物，可采用任何一種適合于臨床上使用的口服或非口服制劑。可以是散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、微囊劑、丸劑、滴丸、軟膠囊、口服液、糖漿劑、分散片、噴霧劑或氣霧劑，也可以是靜脈注射劑、肌肉注射劑、吸入劑或凝膠劑等。本發明將氧化苦參堿應用于制備治療急性、慢性心功能不全疾病的藥物，是以氧化苦參堿為原料，采用常規制備工藝，加入適當輔料制備成任何一種適合于臨床上使用的口服或非口服制劑，如散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、微囊劑、丸劑、滴丸、軟膠囊、口服液、糖漿劑、分散片、噴霧劑或氣霧劑、靜脈注射劑、肌肉注射劑、吸入劑、凝膠劑等；所用的輔料包括常規的溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑、潤滑劑、潤滑劑、濕潤劑、增稠劑、增溶劑、基質等藥物輔料。與現有技術比較，本發明為氧化苦參堿提供了臨床新用途，擴大了其應用范圍。本發明將氧化苦參堿用于制備治療急性、慢性心功能不全疾病的藥物，其對急性心功能不全疾病的藥物療效可通過氧化苦參堿對實驗性大鼠與犬急性心肌梗死模型的影響來表現；對慢性心功能不全疾病的藥物療效可通過長期給予去甲腎上腺素誘導大鼠高交感活性慢性心功能不全、狹窄大鼠腹主動脈復制慢性心功能不全模型的影響來表現。以下是本發明的實驗例實驗例l:氧化苦參堿對實驗性大鼠急性心肌梗死的影響1.實驗方法1.1模型制備與給藥取SD大鼠50只，雌雄各半，體重200250g，隨機分為5組，g卩正常組(給予等容積生理鹽水)、模型組(給予等容積生理鹽水)、藥物組分為三個劑量組7.5mg/kg、15mg/kg、30mg/kg，給藥容積為10ml/kg;各組與手術前20min腹腔注射給藥l次；結扎后60min在給藥1次。在大鼠胸骨左側，與胸骨平行作長約2cm的縱開口，切開皮膚，鈍性分離胸大肌，暴露肋骨。用棉線將皮膚與肌肉做荷包縫合，打一松結。套上呼吸機，用止血鉗在距胸骨2mm處插入第5，6肋骨之間，擴大切口，小心用鑷子破心包膜，擠壓腹部，暴露心臟于體外，用無損傷縫線結扎左心耳下的冠狀動脈，將心臟小心的放回胸腔，擠壓空氣，迅速抽緊已備用的松結，緊閉胸腔，待動物恢復自主呼吸后，關閉呼吸機。觀察心電圖的改變，并可以通過心電圖的改變確定是否結扎到冠狀動脈，以J點高抬O.lmv作為模型成功的標準；于6h記完心電圖后，頸總動脈插管取血，血清用于檢測乳酸脫氫酶(LDH)，肌酸激酶(CK)，觀察生化指標的改變。手術后6h記錄完ECG，剪開胸腔，取出心臟，放于預先放有磷酸緩沖液的平皿中，擠去心臟中的剩余血液，剪去附著肌肉的脂肪組織，并剪去心房，只留下心室部分。用吸水紙將液體吸干，然后用手術刀將心臟切成5-6片，稱重，作為染色前心臟總重量，放于P/。TTC中，37。C水浴染色5min后取出，吸干水，把染色的正常心肌(紅色)與不被染色的梗死區切開，梗死區稱重，計算心肌梗死面積百分率。心肌梗死面積％=未染色心肌重量/全心重量X100%。1.2數據分析與統計方法所有數據以x士s表示，統計學分析采用student-T檢驗。2.結果2.l氧化苦參堿對大鼠急性心肌梗死模型的影響模型組結扎20min分鐘后，J點位移顯著增加，而氧化苦參堿注射給藥后三個劑量組心電圖J點位移未見明顯增加，與模型組比較差異顯著。梗死面積測定的結果提示，氧化苦參堿注射給藥后高、中2個劑量組明顯降低急性心肌梗死的梗死率，與模型組比較差異顯著(p〈0.05)，高、中2劑量組明顯降低血清中LDH、CK的活力。實驗結果見表1與表2。該實驗結果提示氧化苦參堿對急性心肌梗死動物模型具有一定的保護作用。表l氧化苦參堿對大鼠冠脈結扎所致心肌梗死的梗死百分率值影響(x士s)(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>與假手術組比較##P〈0.01;與模型組比較*p<0.05，**p<0.01,表2氧化苦參堿對大鼠冠脈結扎所致心肌梗死CK、LDH的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與模型組比較#P<0.05，##P<0.01;與正常對照組比較傘P〈0.05，**P<0.01。實驗例2:氧化苦參堿對離體兔心臟缺血再灌注損傷的保護作用l.方法1.l實驗方法新西蘭家兔，體重2.0-2.4kg，隨機分為4組，每組8只，g卩模型組、氧化苦參堿三劑量組2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg。動物耳緣靜脈注射肝素，15min后擊斃處死，開胸，將心臟迅速取出，移至貯有冷Locke灌流液的培養皿中，盡量洗出心臟血液，修剪后，在液面下迅速把主動脈接于灌流的套管上，并以線結扎固定。立即以通入95。/。的02和5。/。C02的Locke液進行灌流。灌流瓶高距心臟5060cm，灌流液溫度保持38士0.5。C。三根電極分別插于左右心耳和心尖部，連于二道生理記錄儀，持續心電監測。心臟復跳及ECG顯示正常后，穩定15min，再進行實驗，該期間出現心律失常者棄去。造模采用停灌缺血再復灌損傷關閉主動脈套管，使心臟停灌而致心肌缺血，45min后松開套夾，恢復自然灌流。藥物加入到灌流液中，于復灌的開始5min內灌完。1.2冠脈灌注量的測定在心臟下用漏斗和量筒收集流出液，記錄流出液量，即為冠脈流量。停灌前，連續3次測量每分鐘灌流液的流出量，以其平均值作為給藥前的正常灌注量。復灌后，于5、10、15、30、45、60min時記錄冠脈灌注量。1.3灌出液生化測定生化儀測定灌出液中乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活力。1.4組織形態學檢査實驗結束后，取心臟，于10%福爾馬林溶液中固定，常規取材、染色、切片，在光學顯微鏡下作病理組織學檢査。1.5統計方法所有資料采用student-t檢驗；P〈0.05為差異具有顯著性，P〈0.Ol差異具有極顯著性。2.實驗結果2.l氧化苦參堿對離體兔心缺血再灌注冠脈灌注量的影響缺血再灌注后冠脈灌注量在15min時顯著下降，給予氧化苦參堿后，氧化苦參堿中、高劑量組在15min后的冠脈灌注量明顯高于模型組(P〈0.05，P〈0.01)，表明氧化苦參堿能顯著對抗缺血損傷所引起的冠脈灌注量的下降，增加急性心功能不全的供血且隨著劑量的增高作用增強，呈較好的量效關系。結果見表3。表3氧化苦參堿對離體兔心缺血再灌注冠脈流量的影響(X士S)(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與模型組組比較P<0.05，**P<0.01。2.2氧化苦參堿對離體兔心缺血再灌注心肌灌流液中LDH的影響給予氧化苦參堿后低、高劑量組于30min、中劑量組于45min后灌出液中LDH活力顯著低于模型組(P〈0.05;P〈0.01)，中、小劑量組45min后、高劑量組30min后灌出液中LDH活力的變化率均明顯小于模型組(P〈0.05;P〈0.01)，表明氧化苦參堿可對抗缺血再灌注心肌中的LDH的外漏。結果見表4。表4對離體兔心缺血再灌注心肌灌出液中LDH的影響(X士S)(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與模型組組比較P<0.05，**P<0.01。2.3氧化苦參堿對離體兔心缺血再灌注心肌灌出液中CK的影響給予氧化苦參堿后，中劑量組心臟灌出液中CK活力于再灌注45min后、高劑量組心臟灌出液中CK活力于再灌注30min后均顯著低于模型組(P〈0.05;P〈0.01)，表明氧化苦參堿對缺血再灌注所引起的心肌CK外漏具有拮抗作用，且隨著劑量的增高作用增強，呈一定的量效關系。結果見表5。表5氧化苦參堿對離體兔心缺血再灌注心肌灌出液中CK的影響(X士S)(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實驗例3:氧化苦參堿對壓力超負荷所致心功能不全動物模型的影響l.方法1.l腹主動脈狹窄所致大鼠心肌肥厚模型的建立參考Doering等的方法行腹主動脈狹窄并稍加改良。大鼠用50mg.kg—工戊巴比妥鈉麻醉后，于劍突下35cm處打開腹腔，在左腎動脈上方游離腹主動脈，沿其長軸置7號針頭(直徑約為0.7mm)，以3-0絲線繞腹主動脈與7號針頭一起結扎，隨后抽出針頭，使腹主動脈殘留管腔的直徑約為0.7mm。假手術組動物除不行腹主動脈狹窄術外，其他操作相同。大鼠均在25'C左右動物房(空調控制)內喂養，每籠5只，自由飲水飲食。1.2實驗分組及給藥實驗共分為5組，每組10只，即假手術組(給予等容積的溶劑)、模型組(給予0.5%CMC-Na)、氧化苦參堿5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg。各組均于每日上午給藥1次，灌胃容積為10ml/kg。各組大鼠于末次給藥后45min處死。1.3體重變化的測定大鼠手術前測體重，手術后每周測l次體重，觀察大鼠體重變化規律了解手術和藥物對大鼠體重的影響。1.4心肌重量參數的測定大鼠處死后，迅速開胸取出心臟，表面吸干后，分別稱心臟和左心室重量，測定全心重(HW)/體重(BW)和左心室重(LVW)/體重(BW)，將左心室迅速置液氮中備用。1.5心肌組織^+-K+ATPase，Ca2+-Mg2+ATPase測定取出大鼠心臟，以10倍量Tris-HCl(pH7.4)緩沖液在冰浴下制成10%的心臟勻漿，于4。C，1000g離心10min棄去沉淀后，取上清按試劑盒說明書檢測^+-K+ATPase，Ca2+-Mg2+ATPaSe。蛋白定量用考馬斯亮蘭法，以牛血清白蛋白為標準。2.實驗結果2.l氧化苦參堿對大鼠體重的影響動物行腹主動脈狹窄手術后，體重增長緩慢，整個實驗過程中模型組各周次動物體重與假手術組比較明顯減輕(P〈0.01)。而給藥組均具有不同程度的改善作用，結果見表6。表6氧化苦參堿對壓力超負荷誘導心功能不全大鼠體重的影響(；士s).<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>#P〈0.05，抑P〈0.01vs假手術組，*P〈0.05，**P〈0.01vs模型組。2.2氧化苦參堿對心臟指數和左心室指數的影響30d后，模型組心臟指數和左心室指數較假手術顯著增加(p〈0.01)。給予氧化苦參堿均具有明顯的防治作用，氧化苦參堿三劑量組5、10、20mg/kg心臟指數分別降低27.2。/0(p〈0.05)、21.9%(p〈0.05)和32.3%(p〈0.01);左心室指數分別降低25.7%(p〈0.05)、22.0%(p〈0.05)和33.2%(p〈0.01)。結果見表7。表7氧化苦參堿對對壓力超負荷誘導心功能不全大鼠心指數與左室指數的影響(z±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.3氧化苦參堿對左心室勻漿Na，K-ATPase、Ca，Mg-ATPase、hydroxyproline的影響ATPase酶活力是反應心肌能量利用的指標之一。心功能不全的大鼠ATPase活力降低，腹主動脈狹窄30d后，模型組^+-1(11￡136及(]￡12+-]^211￡136活力明顯降低與假手術組比較差異顯著(P〈0.01)。氧化苦參堿三個劑量組^+-1(11&36及0&2+-]^211&36活力明顯增加。結果提示氧化苦參堿對心功能不全過程中ATPase活力的降低具有明顯改善作用。結果見表8。心肌膠原蛋白水解成為羥脯氨酸，以羥脯氨酸表示心肌膠原蛋白的含量。模型組羥脯氨酸的含量比假手術組增加。而各給藥組羥脯氨酸的含量均明顯降低，提示心肌纖維化程度降低。結果見表8。表8.氧化苦參堿對壓力超負荷誘導心功能不全大鼠Na+，K+-ATPase、Ca2+，Mgz+-ATPaSe和羥脯氨酸的影響(z±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實驗例4:氧化苦參堿對去甲腎上腺素誘導心功能不全動物模型的影響l.方法1.l去甲腎上腺素誘導實驗性大鼠心功能不全模型的復制大鼠ip去甲腎上腺素1.5mg'kg—、d—、2次/d，連續ipl5d，空白對照組大鼠ip生理鹽水給予，其余操作均同于模型組。大鼠均自由引水飲食，環境溫度為22士5'C，每籠5只。1.2實驗分組及給藥實驗共分為5組，每組10只，即空白對照組(ig給予等容積溶劑+ip生理鹽水)、模型組(給予等容積溶劑+ip3.0mg/kg)、氧化苦參堿組(ig20mg/kg+ip3.Omg/kg)、氧化苦參堿組(igl0mg/kg+ip3.0mg/kg)、氧化苦參堿組(ig5mg/kg+ip3.Omg/kg)。各組均于每日上午igl次，ig容積為10ml.kg—、自造模之日ig給予研究藥物。各組大鼠與末次給藥后45min處死。1.3體重變化的測定大鼠造模前測體重，注射NE后第7d、14d、15d各測l次體重，觀察大鼠體重變化規律，研究NE和藥物對大鼠體重的影響。1.4心肌重量參數的測定大鼠處死后，迅速開胸取出心臟，表面吸干后，在冰冷的環境下剪去心房及右心室，分別稱心臟和左心室重量(左心室+室間隔)，測定全心重(HW)/體重(BW)和左心室重(LVW)/體重(BW)，將左心室用迅速置液氮中備用。1.5左心室組織NatK+ATPase，Ca2+-Mg2+ATPase取出大鼠左心室，以10倍量Tris-HCl(pH7.4)緩沖液在冰浴下制成10%的心臟勻漿，于4。C，1000g離心10min棄去沉淀后，取上清進行Na+-K+ATPase，Ca2+-Mg2+ATPase。蛋白定量用考馬斯亮蘭法，以牛血清白蛋白為標準。檢測原理利用Pi與酸性鉬酸銨反應生成磷鉬酸復合物，該復合物呈藍色，其顏色深淺與無機磷的生成量呈正比例關系，ATPase可分解ATP生成ADP及無機磷，測定無機磷的量可判斷ATPase活力的高低。1.6左心室羥脯氨酸的測定心肌勻漿方法同上。首先以組織消化液水解膠原為羥脯氨酸。檢測原理利用羥脯氨酸在氧化劑的作用下所產生的氧化產物與二甲氨基苯甲醛作用呈現紫紅色，在550nm處比色，測定吸光度，判斷羥脯氨酸含量。2.結果2.l氧化苦參堿對去甲腎上腺素誘導心功能不全大鼠體重的影響連續ip去甲腎上腺素，模型組動物體重增長緩慢。各給藥組動物體重與模型組比較未見明顯變化。結果見表9。表9氧化苦參堿對去甲腎上腺素誘導心功能不全大鼠體重的影響(z±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2.2氧化苦參堿對去甲腎上腺素誘導心臟指數和左心室指數的影響去甲腎上腺素3.Omg.kg—1,d—工連續ip給藥15d復制大鼠心功能不全，其心指數和左室指數較空白對照組顯著增加。給予氧化苦參堿，均具有明顯的防治作用，與模型組比較，差異顯著，結果見表IO。表10氧化苦參堿對去甲腎上腺素誘導心功能不全大鼠心指數和左室指數的影響(z±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>#P〈0.05，抑P〈0.01vs假手術組，*P〈0.05，**P〈0.01vs模型組。2.3氧化苦參堿對去甲腎上腺素誘導心功能不全大鼠左心室均漿Na+，K+-ATPaSe、Ca2+，Mg2+-ATPase、hydroxyproline、SOD、MDA的景，向本實驗中3.Omg.kg—\d—E連續ip給予15d，模型組Na+-K+ATPase及Ca2+-Mg2+ATPase活力明顯降低，與空白對照組比較差異顯著。氧化苦參堿各劑量組NatK+ATPase及Ca2+-Mg^ATPase活力明顯增加。細胞外基質病變是心肌肥厚病變過程中的重要病理組成部分之一，細胞外基質的主要成分是膠原纖維蛋白，膠原水解成為羥脯氨酸，因此可以通過檢測羥脯氨酸的量表示心肌膠原的含量。模型組羥脯氨酸的含量比對照組增加。氧化苦參堿高中劑量組明顯降低羥脯氨酸的含量(P〈0.05)。結果見表ll。表ll氧化苦參堿對去甲腎上腺素誘導心功能不全大鼠ATPase和羥脯氨酸含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>#P〈0.05，抑P〈0.01vs假手術組，*P〈0.05，**P〈0.01vs模型組。3.結論本試驗結果顯示，氧化苦參堿對多種因素誘導的急、慢性心功能不全具有一定的改善作用。具體實施方式實施例l取氧化苦參堿20g，加入制備膠囊的相應輔料，混勻，裝入1號或2號、或3號膠囊，制成IOOO粒。用于治療急性和慢性心功能不全疾病，每粒裝氧化苦參堿520mg，每次13粒，一日13次。實施例2:注射劑取氧化苦參堿20g，加入制備注射劑的相應輔料，制成1000支注射劑，用于治療急性和慢性心功能不全疾病，每支O.5ml5ml。成人靜脈注射，每次13支，一日13次。實施例3:口崩片取氧化苦參堿20g，按常規制備工藝制成口崩片1000片，用于治療急性和慢性心功能不全疾病。每次13片，一日13次。實施例4:顆粒劑取氧化苦參堿20g，按常規制備工藝制成1000袋，用于治療急性和慢性心功能不全疾病。每袋12.5克，每次O.52袋，一日13次。實施例5:片劑取氧化苦參堿20g，按常規制備工藝制成片劑1000片，用于治療急性和慢性心功能不全疾病。每次13片，一日13次。實施例6:滴丸取氧化苦參堿20g，按常規制備工藝制成滴丸1000粒，用于治療急性和慢性心功能不全疾病。每次13粒，一日13次。權利要求1.氧化苦參堿在制備治療急性、慢性心功能不全疾病藥物中的應用。全文摘要本發明公開的是氧化苦參堿在制備治療急性、慢性心功能不全疾病的藥物中的應用。本發明以氧化苦參堿為原料，按常規制備工藝制成任何一種適合于臨床上使用的口服或非口服制劑，如散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、微囊劑、丸劑、滴丸、軟膠囊、口服液、糖漿劑、分散片、噴霧劑或氣霧劑、靜脈注射劑、肌肉注射劑、吸入劑、凝膠劑，用于治療急、慢性心功能不全疾病。文檔編號A61K31/4375GK101185647SQ20071020181公開日2008年5月28日申請日期2007年9月21日優先權日2007年9月21日發明者沈祥春,玲陶申請人:沈祥春