專利名稱：：一種防治人乳頭瘤病毒感染的復方疫苗組合物、復方疫苗陰道噴霧劑及其用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種防治人乳頭瘤病毒感染的復方疫苗組合物、復方疫苗陰道噴霧劑及其用途，屬于具有針對性治療適應癥的疫苗制劑領域。
背景技術：
：人乳頭瘤病毒(HPV)是最常見的性傳播疾病的病原體，最近報道表明，全球一半以上的成人被HPV所感染，約有30%通過性傳播。有報道指出，與其它性傳播疾病不同，HPV很易通過與感染的皮膚或與污染的物品直接接觸而傳播。因為病毒存活在生殖道的外層皮膚細胞之內和陰道宮頸、肛門和尿道細胞內，避孕套不能保護所有這些部位的病毒傳播，因此所謂的安全性行為不能阻止HPV的傳播。HPV感染十分常見，美國的資料表明，大約有2000萬人感染有HPV，約有80%的女性在50歲以前將有HPV感染。目前已鑒定的HPV型別已達100多個，每個性活動期的婦女可接觸多種型別的HPV，它感染特定部位或引起特定臨床癥狀。HPV與人類疾病的關系見下表<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>在HPV引起的人類疾病中，婦女宮頸的HPV感染最為常見，危害性也最大，HPV是慢性宮頸炎的主要病原。在宮頸粘膜柱狀上皮和鱗狀上皮轉變的區帶處，是嗜粘膜型乳頭瘤病毒繁殖的部位，也是慢性宮頸炎的好發部位。慢性宮頸炎的病因復雜，1989年中國病毒基因工程國家重點實驗室和北京天壇醫院合作研究發現，慢性宮頸炎患者宮頸中HPV的檢出率均明顯高于正常宮頸。HPV16感染與慢性宮頸炎關系更為密切，我國的研究發現，慢性宮頸炎患者的宮頸組織和洗液中，HPV16的檢出率可高達20-50%。目前所知，HPV是人類腫瘤病毒病因中最為重要的一類病毒，它與人類皮膚與粘膜的良性與惡形腫瘤關系最為密切，是宮頸癌的病因。大量的研究表明，宮頸癌發生以前有一系列不正常的細胞改變，稱為子宮頸上皮內腫瘤形成(cervicalintra印ithelialneoplasia,CIN)I,II和III，其中CINIII即是原位癌。HPV可以引起CIN，在輔助因子的作用下，可以發展成宮頸癌。依據如下1組織癌前變化(CIN)有規律地與某些型別的HPV有關，2在子宮癌組織中可以有規律地檢出HPVDNA序列，有97.9y。的宮頸癌組織中可以發現HPVDNA序列，主要是HPV16或HPV18，但有地區性的差異，3不僅是宮頸癌組織而且來自宮頸癌的細胞株，如HeLa、SIHA和CASKI均含有HPV16、18或其它型別的HPVDNA，后者于染色體上一個位點或多個位點處整合并有轉錄，4人類生殖器的癌前組織學病理改變,與動物乳頭瘤病毒感染時所引起的病理改變是相一致的，如常有凹空細胞(Koilocytosis)，5HPVDNA的存在方式與癌變過程有一定聯系，在癌前病灶中，HPVDNA呈游離狀態，在浸潤癌組織細胞中則呈整合狀態并有一定的整合部位，即在E1-E2之間，6宮頸癌的高發區，陰莖癌的發生也疣狀表皮發育不良癥至少12，17和20可以惡化3，5，8，9，10,12，14，15，17，19，25,28，36，40趾疣和尋常疣良性4花斑糠疹斑肉類與動物管理人員的尋常疣Bowen氏病樣丘疹喉、食道癌，某些支氣管癌皮膚疣，免疫缺陷患者皮膚疣，接受腎移植者皮膚、中間疣喉癌非生殖器Bowen氏病角化棘皮瘤(Kerato-acanthoma)黑色素瘤Bowenoi満灶多發性濕疣和皮膚扁平疣生殖器疣有30"/。Pj以惡化常是良性667122o12444癌性知知知化性性性性性惡未未未原良惡良n較高，7—般認為檢出HPV16或HPV18的患者不一定就發展成惡性腫瘤，在HPV感染的基礎上加上其它的輔助因子才發生癌變，可能的輔助因子包括a.某些其它病毒(如HSV，CMV)或微生物(如沙眼衣原體)的合并感染，后者可能導致宿主細胞和HPV基因表達的改變，b.激活生長因子和癌基因，c.宿主免疫狀態的異常，d.對抗原和代謝物引起的炎癥反應，e.放射線照射，f.類放射藥物,煙草代謝物和其它致癌物質,g.自然的避孕藥的激素紊亂，h.刺激導致創傷上皮的反復出現。引起宮頸癌的HPV型別較多，近年來研究者鑒定了有30個型別的HPV與宮頸癌有關，癌癥患者最常見的型別依次為16，18，45，31，33，52，58和35，其中前4種型別占全球宮頸癌病因的80%。宮頸癌是世界上婦女僅次于乳腺癌的第二位最常見的癌癥，是全球婦女癌癥死亡率的第三位。全球每年有約50萬新宮頸癌病例，每年有27萬婦女死于此病。2006年6月，美國FDA批準了Merck公司開發生產的4價(6,11，16，和18型)HPV疫苗GARDASI1^，不僅是人類第一個特異性預防癌癥的疫苗，也是第一個不僅預防宮頸癌，也預防性疣的疫苗。GARDASIL預防由HPV16，18引起的宮頸癌；宮頸癌前病變(宮頸上皮內瘤形成cervicalintra印ithelialneoplasia(CIN)2/3和原位腺癌(AIS));陰戶前癌(陰戶上皮內瘤形成intra印ithelialneoplasia(VIN)2/3)和陰道前癌(陰道上皮內癌形成(ValN)2/3)。在臨床試驗中GARDASIL可以預防過去未接觸過HPV的，由HPV16和18引起的宮頸癌，效果達到100y。。GARDASIL同樣還可預防由HPV6，11，16和18引起的性疣和低度宮頸病灶(CIN1)，批準用于9-26歲的女性，雖然GARDASIL是四價疫苗，可以預防由HPV6、11、16和18引起的感染，預防宮頸癌和性疣，美國FDA批準用于9-26歲的女性，目前還存在如下問題1.HPV有100多個型別，GARDASIL疫苗可預防HPV6、11、16和18引起的感染，但是對其它HPV型感染無任何作用。而且，由于HPV6、11、16和18的被抑制，根據病毒干擾原理，很可能會促進陰道和宮頸其它型別的HPV感染；2.GARDASIL疫苗對已有的HPV6、11、16和18感染無治療作用；3.GARMSIL疫苗的使用年齡段為9-26歲，對26歲以上已婚婦女的HPV感染無能為力；4.GARDASIL疫苗要免疫程序是在6個月內上臂肌肉注射接種3次，推薦的用法是在選擇的日期打第l針，2個月后打第2針，在第1針6個月后打第3針。所以，GARDASIL疫苗注射應用不利于推廣。陰道粘膜局部免疫，無痛苦，易于接受，依從性好；5.GARDASIL疫苗只能產生系統免疫，而陰道和宮頸的HPV感染為粘膜局部感染；因此，局部粘膜免疫比系統免疫更為重要；6.陰道粘膜免疫有較寬的抗原交叉保護譜；7.GARDASIL疫苗價格昂貴，每劑量為120美元，完整的一個免疫程序需要360美元，廣大的發展中國家顯然無力支付這樣高的費用。在專利文獻方面，申請號為200380109729.2的中國專利公布了題為HPV-16和HPV-18L1VLP疫苗，文中包含HPV16的VLP和HPV18的VLP的組合物在制備用于預防由一組致癌HPV型中的一種或多種HPV型引起的感染和/或疾病藥物中的用途，這種疫苗是HPV的VLP和佐劑聯合應用，佐劑是鋁鹽和3D-MPL的組合，在這篇專利申請中提到了這種包含HPV16和HPV18的VLP的混合物在預防由HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66和HPV68引起的感染性疾病的發生。同時在這片文章中還提到了這種疫苗可以通過口服、局部、皮下、粘膜(陰道內)、靜脈內、肌肉、鼻肉、舌下、真皮內及通過栓劑供給。2006年10月的《國際腫瘤學雜志》公布了題為"人乳頭瘤病毒疫苗臨床試驗進展"一文，文中提到了治療HPV感染的疫苗，這類疫苗包括多肽疫苗，病毒載體疫苗以及DNA疫苗，結果表明用HPV16E743-77的35個氨基酸長的肽制成的多肽疫苗具有治療治療HPV病毒感染的效果，同樣HPV16和HPV18的E6和E7蛋白重組痘苗病毒載體疫苗也可以治療HPV病毒的感染。申請號為200510049486.9題為"一種多肽疫苗及其制備方法"的中國專利公布了一種HPV的治療性疫苗，這種疫苗是由一份HPV16E7n-2。，1份HPV16E7,3，l份破傷風類毒素制成，該發明中的疫苗是以注射劑型的形式進行使用的。而本發明人在長期研究中發現了一種新的疫苗組合物，即在HPV16的VLP和HPV18的VLP的組合物基礎上輔以人干擾素等細胞因子，既可預防宮頸癌又可治療HPV感染，包括慢性宮頸炎、宮頸上皮發育不良，包括CINI、II、III度等，防治兩用，而且適用于任何年齡的已婚婦女，可以反復使用；將組合物制成噴霧劑特別是陰道噴霧劑，使用方便，而且陰道粘膜免疫的免疫譜較廣，不僅對HPV16和18感染有預防作用，對其它型別HPV感染也有一定的交叉保護作用；不僅能產生系統免疫，也能產生局部粘膜免疫，此外還有成本低，價格低，便于個體自用，無疼痛等優點。
發明內容本發明的目的在于提供一種防治人乳頭瘤病毒感染的復方疫苗組合物。本發明的另一目的在于提供一種根據上述復方疫苗組合物制備的復方疫苗陰道噴霧劑。本發明的又一目的在于提供上述復方疫苗組合物和陰道噴霧劑在預防或治療女性生殖器的人乳頭瘤病毒感染上的用途。本發明提供的防治人乳頭瘤病毒(HPV)感染的復方疫苗組合物，包括HPV-16的L1蛋白的病毒樣顆粒、HPV-18的Ll蛋白的病毒樣顆粒和人干擾素，其比例為40120mg:2060mg:100-300萬單位，所述人干擾素包括天然的人干擾素和/或通過基因技術構建的重組人干擾素。其中，HPV-16和HPV-18L1蛋白為L1全長基因按酵母的密碼偏嗜性改造后在酵母中表達并純化。這種改造可以用生物學軟件VectorNTI10對HPV16，18的密碼子進行全基因改造，Ll蛋白形成病毒樣顆粒(VLP)，形成完整的空間構像，保持其抗原性。HPV-16和HPV-18的L1蛋白的VLP制備已經為現有技術，具體參見專利W09913056。HPV-16和HPV-18的L1蛋白的VLP可引起較好的免疫反應。人干擾素作為一種具有廣譜抗病毒、抗細胞分裂、免疫調節活性的蛋白質，是細胞因子的一種，近半個世紀的基礎和臨床研究證明它是一種重要的廣譜抗病毒、抗腫瘤藥物。人干擾素首先與特異性細胞受體結合，調節信號傳遞，激活細胞基因表達，從而發揮人干擾素的生物學活性。迄今為止，已知人干擾素存在多個型別，如干擾素-a,p，S，y,e,k,X,t，co，limitin等，它們的主要特點和可能的臨床應用各不相同，國內外大量的研究證明干擾素-a，p,y對hpv的感染和治療都有作用，目前在臨床治療中也發揮了重要作用。本發明人經過大量研究發現，HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒、HPV-18的Ll蛋白的病毒樣顆粒和人干擾素在臨床治療時起協同作用，效果優于單獨使用人干擾素，試驗結果可見實驗例2。其原因在于HPV-16和HPV-18的Ll蛋白的VLP可引起較好的免疫反應，促使人體產生抗體蛋白，抗體蛋白與人千擾素協同作用，抑制HPV病毒的增殖。上述復方疫苗組合物中還優選包括人白細胞介素-2，與HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒的比例為10-20萬單位40120mg。人白細胞介素-2(IL-2)也是一種細胞因子，不僅能夠治療HPV感染的作用，抑制HPV繁殖，還可擴張毛細血管，促進疫苗的免疫反應；又可刺激機體細胞免疫水平，后者與病毒感染密切有關。同時，上述復方疫苗組合物中還可以包括人白細胞介素-12、胸腺素P4以及乳鐵蛋白中的一種或者2種以上的組合，其與組合物中HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒的比例為10—50萬單位1—10mg:5—100mg:40120mg。白細胞介素-12、胸腺素P4以及乳鐵蛋白也屬于細胞因子，是由免疫細胞和某些非免疫細胞經誘導而合成和分泌的一類生物活性的小分子，在細胞生長、活化、炎癥、免疫、造血、腫瘤發生、組織修復等生物學過程中發揮著重要的作用，作為免疫佐劑，有促進陰道免疫反應，其中胸腺素e4也具有治療HPV感染的作用。此外，本發明復方疫苗組合物還可以包括天然多糖，天然多糖與HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒的比例為12mg:40120mg，天然多糖包括纖維素、透明質酸、淀粉、幾丁質、殼聚糖或上述幾種物質的衍生物中的一種或者幾種，天然多糖能夠增加組合物在粘膜表面停留的時間，擴展上皮細胞層的細胞間隙，使HPVL1蛋白和細胞因子進入粘膜上皮內，直接與樹突狀細胞相接觸，充分發揮免疫作用。上述復方疫苗組合物可以制成各種劑型，如片劑、膠囊劑、注射劑、吸入粉霧劑或噴霧劑等等。但為了使用方便，本發明優選將上述復方疫苗組合物制成復方疫苗陰道噴霧劑，制備方法為將所述各組分溶于蒸餾水中即得。這是因為陰道和宮頸的HPV感染為粘膜局部感染；因此，局部粘膜免疫比系統免疫更為重要；而且陰道粘膜免疫有較寬的抗原交叉保護譜，在陰唇和會陰部同時有HPV感染時，易于擴展新適應癥。復方疫苗陰道噴霧劑中各組分含量為HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒40120mg/ml，優選80mg/ml;HPV-18的Ll蛋白的病毒樣顆粒2060mg/ml，優選40mg/ml;人干擾素100-300萬單位/ml。其中，人干擾素單位至少為IOO萬單位，這是因為根據我們在1985-1989年臨床試驗數據，在宮頸直接貼敷，每次至少為IOO萬單位才有明顯效果。上述復方疫苗陰道噴霧劑還可以包括人白細胞介素-2:10-20萬單位/ml，其作用如在前述組合物中作用相同。此外，上述復方疫苗陰道噴霧劑中還可以包括以下濃度的其它細胞因子的一種或2種以上的組合人白細胞介素-12:10—50萬單位/ml胸腺素p4:l—10mg/ml人乳鐵蛋白5—100mg/ml。為了增加復方疫苗陰道噴霧劑的使用效果，其中還可以添加天然多糖，天然多糖的濃度為12rag/ml。天然多糖能夠增加噴霧劑的粘稠度和在粘膜表面停留的時間擴展上皮細胞層的細胞間隙，使HPVL1蛋白和干擾素進入粘膜上皮內，直接與樹突狀細胞相接觸，充分發揮免疫作用。此外，為了不破壞陰道的酸性環境，可以將復方疫苗陰道噴霧劑的pH調節為4.04.5，pH的調節優選磷酸緩沖液，磷酸緩沖液參見《實用藥劑工作手冊》，為現有技術。同時，為了維持人體正常的鹽度平衡和滲透壓，復方疫苗陰道噴霧劑還可以含有質量百分比濃度為0.9%的NaCl。本發明還提供了上述的復方疫苗陰道噴霧劑在預防或治療女性生殖器的人乳頭瘤病毒感染上的用途。上述的人乳頭瘤病毒為與宮頸癌和尖銳濕疣相關的16，18，31，33，35，39，45，51，52，56,58，59，68，6，11,26，40,42，43，44，53，54，55，62或66型別，人乳頭瘤病毒感染包括慢性宮頸炎或子宮頸上皮內瘤形成I、II和III，感染的部位在女性宮頸、陰道壁、前庭、陰唇或會陰。本發明復方疫苗組合物和復方疫苗陰道噴霧劑，既可預防宮頸癌，又可治療HPV感染；適用于任何年齡的已婚婦女；預防和治療性傳播的HPV感染引起的慢性宮頸炎，宮頸上皮發育不良，包括CINI、II、III度，抑制HPV繁殖，預防宮頸癌。本發明復方疫苗陰道噴霧劑的用法為每療程共使用4次，每次1.0毫升，前2次使用間隔l周，后2次使用間隔3周。每晚睡前病人或伴侶給藥，采取截石位將噴霧嘴直接指向宮頸，前、左、右各噴2下,后噴4下，每噴1次為0.1毫升。每次使用均為一次性。如已經有HPV感染需要治療時，可以重復多次使用。綜上所述，本發明的優越性概括如下1.復方陰道噴霧HPV疫苗既可預防宮頸癌又可治療HPV感染，包括慢性宮頸炎、宮頸上皮發育不良，包括CINI、II、III度等，防治兩用；2.適用于任何年齡的已婚婦女，可以反復使用；3.陰道粘膜免疫的免疫譜較廣，不僅對HPV16和18感染有預防作用，對其它型別HPV感染也有一定保護作用；4.由于干擾素的廣譜抗病毒活性，它可抑制由于HPV16和18的被抑制而導致其它型別HPV的繁殖；5.不僅能產生系統免疫，也能產生局部粘膜免疫；6.不含任何可能有對陰道有刺激性的物質。7.成本低，價格低，便于個體自用，無疼痛。具體實施方式-實施方式中，天然多糖中各組分均購于美國Sigma公司。細胞因子中人干擾素是購買自北京遠策藥業股份有限公司生產的干擾素a2b(商品名遠策素)，人白細胞介素-2(IL-2)是購買自北京遠策藥業股份有限公司生產的IL-2(商品名遠策欣)，細胞因子的其他組分為自制，其參考文獻如下人乳鐵蛋白參考文獻應革，吳淑華，王靜，趙小東，陳建明，張曉光，侯云德。重組巴氏畢赤酵母高密度發酵表達人乳鐵蛋白的研究，中華實驗和臨床病毒學雜志，2002(4):181-185胸腺素P4(TB4)參考文獻(1)CheYK,YangH,LuF,PuQ,LiRD,ZhaoZL.CloningexpressioninE.coliandbiologicalactivityofhumanthymosinbeta(4).ShengWuHuaXueYuShengWuWuLiXueBao(Shanghai).2002Jul;34(4):502-505.(2)LiQY,JonesPL,LaffertyRP，SaferD,LevyRJ.Thymosinbeta4regulation,expressionandftmctioninaorticvalveinterstitialcells.JHeartValveDis.2002Sep;ll(5):726-35.人白細胞介素-I2(IL-12)參考文獻(1)王自力，梁國棟,付士紅,周國林，劉禮初,陳飛,施侶元,侯云德.重組腺病毒介導的白細胞介素-12(IL-12)在肝癌細胞中的表達.病毒學報,1999，15(2):119-124(2)曲春楓,孫宗棠.人IL-12的克隆、表達及生物活性的鑒定.中國免疫學雜志，1999，15(1):1349(3)LeongSR，ChangJC，OngR，DawesQStemmerWP，PunnonenJ.OptimizedexpressionandspecificactivityofIL-12bydirectedmolecularevolution.ProcNatlAcadSci.2003,100(3):1163-8.實施例1:復方疫苗組合物，由以下成分組成HPV-16的L1蛋白的病毒樣顆粒40gHPV-18的LI蛋白的病毒樣顆粒20g人干擾素100Xl(f萬單位將上述各組分混勻后按《藥劑學》(畢殿洲主編，人民衛生出版社，第四版)的方法加入蒸餾水溶解至1000ml制成吸入粉霧劑。實施例2:復方疫苗組合物，由以下成分組成HPV-16的L1蛋白的病毒樣顆粒120gHPV-18的L1蛋白的病毒樣顆粒60g人干擾素300X1(T萬單位人白細胞介素-2:10Xl(r萬單位將上述各組分混勻后按《藥劑學》(畢殿洲主編，人民衛生出版社,第四版)的方法制成分散片1000片。實施例3:復方疫苗組合物，由以下成分組成HPV-16的L1蛋白的病毒樣顆粒80gHPV-18的Ll蛋白的病毒樣顆粒40g人干擾素200Xl(f萬單位人白細胞介素-2:20X103萬單位人白細胞介素-12:10Xl(f萬單位將上述各組分混勻后按《藥劑學》(畢殿洲主編，人民衛生出版社,第四版)的方法制成膠劑500個。實施例4:復方疫苗組合物，由以下成分組成HPV-16的L1蛋白的病毒樣顆粒100gHPV-18的L1蛋白的病毒樣顆粒50g人干擾素150乂103萬單位人白細胞介素-12:50X103萬單位胸腺素(34:lg人乳鐵蛋白5g透明質酸lg將上述各組分混勻后按《藥劑學》(畢殿洲主編，人民衛生出版社,第四版)的方法制成注射劑1000支。實施例5復方疫苗組合物，由以下成分組成HPV-16的L1蛋白的病毒樣顆粒90gHPV-18的L1蛋白的病毒樣顆粒30g人干擾素250Xl(^萬單位人白細胞介素-2:15X103萬單位人白細胞介素-12:20Xl(^萬單位胸腺素P4:10g人乳鐵蛋白100g淀粉2g將上述各組分混勻后按《藥劑學》(畢殿洲主編，人民衛生出版社,第四版)的方法加入蒸餾水溶解至1000ml制成吸入粉霧劑。實施例6:復方疫苗陰道噴霧劑，為將HPV-16的L1蛋白的病毒樣顆粒80gHPV-18的L1蛋白的病毒樣顆粒40g人干擾素200X103萬單位加入蒸餾水溶解至1000ml，搖勻后制得。實施例7復方疫苗陰道噴霧劑，為將HPV-16的L1蛋白的病毒樣顆粒120gHPV-18的L1蛋白的病毒樣顆粒60g人干擾素300Xl()3萬單位人白細胞介素-2:10X103萬單位NaCl9g加入蒸餾水溶解至1000ml，搖勻后制得。實施例8復方疫苗陰道噴霧劑，為將HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒40gHPV-18的Ll蛋白的病毒樣顆粒20g人干擾素100xl(f萬單位人白細胞介素-2:20xl(f萬單位人白細胞介素-12:10乂103萬單位殼聚糖lgNaCl9g加入蒸餾水溶解至1000ml，搖勻后，用磷酸緩沖液調節pH到4制得。實施例9復方疫苗陰道噴霧劑，為將HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒90gHPV-18的Ll蛋白的病毒樣顆粒50g人干擾素20(^103萬單位人白細胞介素-12:50xl()3萬單位胸腺素P4:lg人乳鐵蛋白5g透明質酸0.2g淀粉0.3g幾丁質1.5gNaCl9g加入蒸餾水溶解至1000ml，搖勻后，用磷酸緩沖液調節pH到4.5制得。實施例10復方疫苗陰道噴霧劑，為將HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒110gHPV-18的Ll蛋白的病毒樣顆粒30g人干擾素250xl(f萬單位人白細胞介素-2:15xl()3萬單位胸腺素P4:10g人乳鐵蛋白100g纖維素lg淀粉0.5gNaCl9g加入蒸餾水溶解至1000ml，搖勻后，用磷酸緩沖液調節pH到4.2制得。實施例11復方疫苗陰道噴霧劑，為將HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒80gHPV-18的Ll蛋白的病毒樣顆粒40g人干擾素人白細胞介素-2:人白細胞介素-12:胸腺素P4:乳鐵蛋白纖維素幾丁質NaCl200x103萬單位20x103萬單位50x103萬單位5g50g0.5g0.5g9g加入蒸餾水溶解至lOOOml，搖勻后，用磷酸緩沖液調節pH到4.5制得'實驗例l此實驗為本發明復方疫苗陰道噴霧劑對小鼠的免疫原性測定選4周雌性Balb/c小鼠，給予實施l的吸入粉霧劑、6—11的復方疫苗陰道噴霧劑20ul，在第一次免疫后3周和6周加強免疫2次，在第三次免疫后2周取小鼠血清，用市售的HPV疫苗GARDASIL為抗原，ELISA方法檢測小鼠血清抗體滴度。測定結果如表1表l小鼠血清抗體滴度實驗分組小鼠血清抗體滴度實施例11:64實施例61:64實施例71-'64實施例81:64實施例91:64實施例101128實施例111:128說明本發明復方疫苗陰道噴霧劑可以引起較好的免疫反應。實驗例2此實驗為本發明復方疫苗陰道噴霧劑實施例6和實施例11對人乳頭瘤病毒(HPV)感染及宮頸上皮內瘤樣變(CIN)療效的的臨床觀察研究對象選擇為HPV感染合并濕疣或CINI-II。入選標準1.年齡^18歲，有性生活史的女性；2.HPV高危型DNA檢測為陽性；3.病理檢查為濕疣或CINI-II;4.無藥物過敏史。剔除標準1.免疫功能低下者，如腫瘤術后或放、化療后，艾滋病及系統性紅斑狼瘡等；2.妊娠和哺乳期婦女；3.患有急性生殖道炎癥，如淋病、支原體或衣原體感染等；篩査流程1.宮頸細胞學(TCT)檢査；2.陰道鏡指示下宮頸活檢；3.病理檢査結果為濕疣或CINI-II;4.HPV高危型DNA檢測陽性者入選實驗方法實驗組用藥為本發明的復方疫苗陰道噴霧劑，對照組藥物為a-2b干擾素栓劑，空白對照組不使用任何藥物。實驗組藥物使用方法如說明書中所述；對照組患者使用a-21)干擾素栓劑，使用時間與次數與實驗組一致；空白對照組陰道內不使用任何藥物。停藥3天后復査。用藥期間注意事項性生活均應使用避孕套；電話隨訪，督促用藥，監測有無副反應。藥物效果評判標準1.對HPV高危型DNA檢測陽性治療有效RLU/C0〈1(或HPV高危型轉為陰性);好轉RLU/C0比值下降2/3;無效RLU/CO比值無變化或增高。2.病理學診斷有效CIN/濕疣轉為炎癥；無效無變化或病變進展。實驗結果-_表2不同用藥組別對HPV高危型DNA檢測陽性患者治療情況<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>經卡方檢驗，實驗組的顯效率(有效+好轉)均高于干擾素對照組和空白對照組(P〈0.05)表3不同用藥組別對CINI-II/濕疣患者治療情況<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>經卡方檢驗，實驗組的有效率均高于干擾素對照組和空白對照組(P〈0.1)以上結果說明本發明復方疫苗陰道噴霧劑對人體HPV感染和CINI-II/濕疣的治療有顯著療效，且效果好于單獨使用干擾素。權利要求1、一種防治人乳頭瘤病毒感染的復方疫苗組合物，其特征在于，包括HPV-16的L1蛋白的病毒樣顆粒、HPV-18的L1蛋白的病毒樣顆粒和人干擾素，其比例為40～120mg∶20～60mg∶100-300萬單位，所述人干擾素為天然的人干擾素和/或通過基因技術表達的重組人干擾素。2、根據權利要求1所述的復方疫苗組合物，其特征在于，所述的復方疫苗組合物還包括人白細胞介素-2，人白細胞介素-2與所述的HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒的比例為10-20萬單位:40120mg。3、根據權利要求1或2所述的復方疫苗組合物，其特征在于，所述的復方疫苗組合物還包括其它細胞因子，所述的其它細胞因子為人白細胞介素-12、胸腺素P4以及乳鐵蛋白中的一種或者2種以上的組合，所述的復方疫苗組合物中人白細胞介素-12和/或胸腺素e4和/或乳鐵蛋白與所述的HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒的比例為10—50萬單位1—10mg:5—100mg:40120mg。4、根據權利要求1所述的復方疫苗組合物，其特征在于，所述的復方疫苗組合物還包括天然多糖；天然多糖與所述的HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒的比例為1~2mg:40120mg;所述的天然多糖是纖維素、透明質酸、淀粉、幾丁質、殼聚糖或上述幾種物質的衍生物的一種或者2種以上的組合。5、一種根據權利要求l一4任何一項所述的復方疫苗組合物制備的復方疫苗陰道噴霧劑，其特征在于，制備方法為將所述各組分溶于蒸餾水中即得。6、根據權利要求5所述的復方疫苗陰道噴霧劑，其特征在于，所述噴霧劑包括HPV-16的Ll蛋白的病毒樣顆粒40120mg/ml，優選80mg/ml;HPV-18的Ll蛋白的病毒樣顆粒2060mg/ml，優選40mg/ml;人干擾素100-300萬單位/ml更優選進一步包括人白細胞介素-2:10-20萬單位/ml。7、根據權利要求6所述的復方疫苗陰道噴霧劑，其特征在于，所述噴霧劑還包括以下濃度的其它細胞因子的一種或2種以上的組合人白細胞介素-12:10—50萬單位/ml胸腺素P4:l—10mg/ml人乳鐵蛋白5—100mg/ml8、根據權利要求6或7所述的復方疫苗陰道噴霧劑，其特征在于，所述的復方疫苗陰道噴霧劑中還包括天然多糖l2mg/ml;所述的天然多糖是纖維素、透明質酸、淀粉、幾丁質、殼聚糖或上述幾種物質的衍生物的一種或者一種以上的組合。9、根據權利要求5—8任何一項所述的復方疫苗陰道噴霧劑，其特征在于，所述復方陰道疫苗噴霧劑的pH為4.04.5，所述pH的調節優選磷酸緩沖液，所述復方陰道疫苗噴霧劑還進一步優選包括質量百分比濃度為0.9%的NaCl。10、權利要求l一4任何一項所述的復方疫苗組合物或權利要求5—9任何一項所述的復方疫苗陰道噴霧劑在預防或治療女性生殖器的人乳頭瘤病毒感染上的用途，所述的人乳頭瘤病毒為與宮頸癌和尖銳濕疣相關的16，18，31，33，35，39,45，51，52，56，58，59，68，6，11，26，40，42，43，44，53,54，55，62或66型別，所述人乳頭瘤病毒感染的部位在女性宮頸、陰道壁、前庭、陰唇、會陰，所述人乳頭瘤病毒感染為慢性宮頸炎或子宮頸上皮內瘤形成I、II和III。全文摘要本發明涉及一種防治人乳頭瘤病毒感染的復方疫苗組合物、復方疫苗陰道噴霧劑及其用途，屬于具有針對性治療適應癥的疫苗制劑領域。本發明產品既可預防宮頸癌，又可治療HPV感染；適用于任何年齡的已婚婦女；預防和治療性傳播的HPV感染引起的慢性宮頸炎，宮頸上皮發育不良，包括CINI、II、III度，抑制HPV繁殖，預防宮頸癌。文檔編號A61K39/12GK101181636SQ200710188168公開日2008年5月21日申請日期2007年11月13日優先權日2006年11月14日發明者侯云德,鄭麗舒申請人:北京金迪克生物技術研究所