專利名稱：：鬼箭羽在抗iv型變態反應藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥
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，具fr^及鬼箭羽在抗iv型變態反應藥物中的應用。背彔技術IV型變態反應又稱遲發型變態反應，是以單核細胞浸潤和細胞變性壞死為主要特征的局部變態反應性炎癥，由致敏T淋巴細胞與相應抗原結合而引起，抗體和補體均不參與。該類反應發生較遲緩，一般需經4872小時。當致敏T淋巴細胞與相應抗原結合后，刺激耙細胞改變細胞膜通透性，使細胞內K+逸出，Na+進入細胞，結果使細胞的滲透壓發生改變，細胞膨脹，最后裂解。但參與該反應的致敏T淋巴細胞并未破壞，仍可繼續破壞其他靶細胞。另外，致敏T細胞在殺傷靶細胞時，還會釋放出各種淋巴因子，弓l起單核細胞浸潤為主的炎癥變化，甚至壞死。主要病變是以單核細胞為主、由溶酶體酶類引起的組織壞死。除接觸性皮炎和某些自身免疫性疾病外，其他W型變態反應都無個體差異。W型變態反應的發病機理與細胞免疫反應基本相同，兩者同時并存。由此可見，一方面，因細胞免疫的防護作用而對機體有利，另一方面，導致組織細胞損傷而對機體有害。目前認為，致敏T淋巴細胞的形成是發生本反應的關鍵。傳染性變態反應、接觸性皮炎、異體組織移植排斥反應等都屬IV型變態反應。鬼箭羽&o/yw肪aiatesr(Th皿b.)Sieb.屬衛茅科植物，又叫四棱麻，四方柴，湖北省恩施少數民族自治洲稱為八樹或鱗片草。是生于山坡灌木林中的特有民間藥材，味苦，性寒，有活血、破瘀、殺蟲之功效，中藥常用之降血糖，主要成份為豆甾-4-稀-3酮、豆^-4-稀-3.6酮、P谷稱醇和0-羥基豆甾-4-稀-3酮四種甾體成份，以及雙氫黃酮醇(香橙素)，a-兒茶素和去氫雙兒茶素A蘭種黃烷成份。恩施民間常用之治療生漆過敏性皮炎。
發明內容本發明的目的是提供一種鬼箭羽提取物，該提取物具有良好的抗IV型變態反應作用，可用于制備抗W型變態反應的藥物。本發明中鬼箭羽的藥用部位為莖皮，在制備上述用途的藥物時，可以將鬼箭羽的莖皮進行提取，將提取物制成藥物。本發明所述的鬼箭羽提取物是以五w;y^wafe加s(Thunb.)Sieb.的莖皮為原料，采用本領域已知的常規化學提取方法制備得到總提取物。根據本發明，將鬼箭羽的莖皮粉碎，用有機溶劑或/和水提取制備得到總提取物，所用的有機溶劑可采用醇類，如乙醇，甲醇等，其中優選50%—80%(體積比)乙醇a將總提取物溶于水后，分別相繼用石油醚、酯類(或鹵代烴類)溶劑萃取，取酯類(或卣代烴類)溶劑萃取相，回收溶劑后干燥即得到Jill性部位，所用得酯類或鹵代烴類溶劑可以采用乙酸乙酯，氯仿或二氯甲烷等，其中,乙酸乙酯。脂溶性部位也可以直接通過二氧化碳(ca)超臨界萃取獲得，用目前國內外廣泛用于篩選抗IV型變態反應的動物模型(綿羊紅細胞致小鼠遲發型足跖腫脹橄欖油致小鼠接觸性皮炎；5-HT致大鼠腹腔肥大細胞釋放組胺；5-HT誘導豚鼠回腸收縮)進行動物實驗。證實了本發明鬼箭羽提取物能明顯抑制綿羊紅細胞誘發的小鼠遲發型足跖腫脹能顯著抑制橄椎油致小鼠接觸性皮炎劑量依賴性抑制5-HT致大鼠腹腔肥大細胞釋放組胺；抑制5-HT誘導豚鼠回腸收縮，由此說明鬼箭羽具有確切的抗IV型變態反應作用，因此可以用于制備抗IV型變態反應的藥物。以鬼箭羽提取物為活性部位，配以適當載體或賦形劑可以制成片劑，顆粒劑，膠襄或口服液等常用得藥物劑型，具體實旌方式現結合實例，對本發明作詳細描述，不限制本發明。實施例1鬼箭羽乙醇總提取物制備取鬼箭羽基皮干品，用藥物粉碎機進行粉碎后，用70%乙酵浸泡，6(fC水浴回流提取3次，合并回流液過濾后收集于旋轉蒸發瓶中減壓蒸餾，回收至無醇味,干燥得棕褐色干浸膏。實施例2鬼箭羽總黃烷制備將乙醇提取物用蒸餾水溶解，相繼用等體積石油醚，乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，分別回收溶劑，真空，(8(TC)后得到石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、萃取后剩余物。經成分鑒定總黃烷主要存在于乙酸乙酯萃取物。實簏例3m箭羽提取物對綿羊紅細胞致小鼠遲發型足跖腫脹的影響1.動物清潔級ICR小鼠，2(W5g,2-3月齡，S早各半，由同濟醫科大學醫學實驗動物中心提供，受試動物雌雄分開普通飲食喂養5天后開始實驗，控制室溫為22土21C,濕度為55±15%。2.藥物醋酸潑尼松，江蘇淮陰制藥廠提供；鬼箭羽提取物，由實例1及2所制備。3.實驗方法清潔級ICR小鼠抑只，雌雄各半，隨機分為8組。于綿羊紅細胞攻擊同時及其后16h,兩次灌胃鬼箭羽醉提取物或總黃烷，陽性對照組灌胃潑尼松，空白對照組灌胃等容量生理鹽水。4.實驗結果鬼箭羽醇提取物能明顯抑制對200mg和500mgkg皿'，總黃烷50mg，100mg^200mgkg'1及潑泥松5Qm^g-l均能明顯抑制綿羊紅細胞誘發的小鼠遲發型足跖腫脹,但黃烷作用明顯強于醇提取物,其中20011^^時與潑尼私、相當。結果見表l表1鬼箭羽醇提取物及總黃烷對綿羊紅細胞致小鼠遲發型足跖腫脹的影響組別劑量(m^cg-l》n跖腫脹度(l(T，mm)抑制率(％)對照組一1048.1土11.3一醇提取物訓1046.7±11.427.52001033.2±12.7*31.85001029.8±15.6*34.6總黃焼501033.4±8.5*#62.8謂1022.9±12.7*#鄰.42001016.7±14.6*#100潑尼松501014.8±13.8*#74注:與對照組比較，*:P<0.01與醇提取物組比較弁:P〈0.01實施例4鬼箭羽提取物對橄欖油致小鼠接觸性皮炎的影響1.動物清潔級ICR小鼠，20-25g,2-3月齡，$早各半，由同濟醫科大學醫學實驗動物中心提供。受試動物雌雄分開普通飲食喂養5天后開始實驗，控制室溫為22土21C,濕度為55±15%。2.藥物賽庚疲，江蘇第四制藥廠提供鬼箭羽提取物,由實例1及2所制備。3.實驗方法清潔級ICR小鼠100只，隨機分為10組，每組10只。雄性ICR小鼠，腹部刮毛2他后，用5%PC無水乙醇液1S0nL涂于腹部，4d后用1%PC液橄欖油液20pL涂于小鼠右耳廊兩側攻擊，分別于其后2h和24h測量兩耳廊厚度差。試驗組小鼠于PC功擊同時及其后l他兩次ig鬼箭羽醇提取物或總黃烷，陽性對照組ig潑尼松或賽庚啶，空白對照組ig等容量生理鹽水4.結果實驗結果見表2a表2鬼箭羽醉提取物及總黃烷對PC小鼠接觸性皮炎的影響(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與對照組比較:AP〈0.05*2:P<0.01由表2可見賽庚啶20ragkg一1明顯抑制早期相(2h)無明顯后期相抑制作用，潑尼松50mgkg一'無顯著作用,其醇提取物IOO、2加、SOOmgkg-1,黃烷100、200mgkg4及潑尼松50呢kg—'具明顯抑制后期相反應(24h)。表明鬼箭羽醇提取物，總黃烷及潑尼松對后期相抑制作用強于早期相，而賽庚啶是抑制早期相強于后期相。實施例5鬼箭羽對5-HT致大鼠腹腳E大細胞釋放組胺的影響1.動物清潔級SD大鼠，體重(16(M80g)$早各半，由同濟醫科大學醫學實驗動物中心提供。受試動物雌雄分開普通飲食喂養5天后開始實驗，控制室溫為22土21C,濕度為55±15%。2.藥物色甘酸二鈉，R本funakoshi藥品公司提供鬼箭羽提取物,由實例1所制備。3.實驗方法清潔級SD大鼠40只，隨機分為5組，每組8只。取雄SD大鼠,制備腹腔肥大細胞2.9Xl(f細胞/ml懸乳液,經甲苯胺藍染色鑒定細胞存活率高于90%后。取腹腔肥大細胞懸液1.8ml,經10min371C預溫孵加入自藥物0.1ml(浸試藥物用PBS,PH-7.0),37t孵l(tein，再加入10ug/邁lC卿ound48/80.0.經37t!溫孵后，冷卻終止反應.在5"以下,2000rpm離心5min后,取上清液熒光法測定組胺量。于沉淀物中加入PBS2ml(磷酸緩沖液)冰凍并超聲融化三次再離心沉淀(2000rpa,5min),取上清液熒光法測定組胺，并計算出組胺釋放率,公式為組胺釋放率％=釋5，自^，量x腿釋放量+殘余量4.實驗結果結果見表3表3鬼箭羽醇提取物對coi^mind4g^0誘導SD大鼠腹腔肥大細胞釋放組胺的影響(灶s，『8)組別濃渡釋放率％抑制率％—肌2t4.5醇提取物20069.壯7.921.850052.5±5.6*38.8100038.7±6.9*49J色甘酸二鈉5加62.2±5.1*22.4與對照組比較由表3可知鬼箭羽醉提取物200,500和lOOOjifi/ml,濃度能依賴性抑制組胺釋放。其200|ig/ml與色甘酸二鈉相當。實攄例5鬼箭羽對&~1^致離體麻||回腸^1的彩響1.動物清潔級展鼠，體重(7(KK50g)4早各半，由同濟醫科大學醫學實驗動物中心提供，受試動物雌雄分開普通飲食喂養5天后開始實驗，控制室溫為22土21C,濕度為55土15%。2.藥物賽庚啶，江蘇第四制藥廠提供；鬼箭羽提取物，由實例1所制備。3.實驗方法取豚鼠回腸標本，懸于雙層臺氏液溶糟中，32t!恒溫(保持通氣)，腸上端經張力換能器與臺式平衡記錄儀連接，20min后，加入12fiM5-HT,測得最大收縮反應(100%),洗去5-HT加入50，100,200,500ng/ml鬼箭羽醇提取物或賽庚啶，每次給藥10秒后再加入5-HT,測定收縮最大幅度，并計算出收縮百分率。4.實驗結果結果見表4由表4可知，鬼箭羽醇提取物Sft"500pg/m1,賽庚腚5ng/mi,均有依賴性抑制5"HT所致豚鼠回腸收縮作用，但當鬼箭羽醇提取物濃度增至100jjgtol時，抑制作用再也不會增強，表明此時已達最大效應濃度。表4鬼箭羽醇提取物對5^HT誘導豚鼠回腸收縮的影響(Xfcs，n-8)組別濃渡(ng/ml)釋放率％抑制率％對照組100醇提取物5025.8l加61.3±19.836.820058.歸8.738.750050.4±汰135.8賽庚啶519.3±13.283.權利要求1.一種鬼箭羽提取物，其特征在于所述提取物為由鬼箭羽莖皮提取得到的鬼箭羽總提取物或脂溶性部位。2.權利要求1所述的鬼箭羽提取物在制備抗IV型變態反應藥物中的用途。3.根據權利要求2所述的藥物，其特征在于所說的藥劑是任何一種藥劑學上所有的劑型。全文摘要本發明涉及醫藥
技術領域：
，是衛茅科植物鬼箭羽提取物用于制備抗IV型變態反應藥物中的用途。用目前國內外廣泛用于篩選抗IV型變態反應的動物模型(綿羊紅細胞致小鼠遲發型足跖腫脹；橄欖油致小鼠接觸性皮炎；5-HT致大鼠腹腔肥大細胞釋放組胺；5-HT誘導豚鼠回腸收縮)，證實了本發明鬼箭羽提取物能明顯抑制綿羊紅細胞誘發的小鼠遲發型足跖腫脹；能顯著抑制橄欖油致小鼠接觸性皮炎；劑量依賴性抑制5-HT致大鼠腹腔肥大細胞釋放組胺；抑制5-HT誘導豚鼠回腸收縮，由此說明鬼箭羽具有確切的抗IV型變態反應作用，因此可以用于制備抗IV型變態反應的藥物。文檔編號A61P37/00GK101422501SQ20071016581公開日2009年5月6日申請日期2007年10月31日優先權日2007年10月31日發明者劉可云,劉杰書,羅洪斌,胡澤華,黃德斌申請人:黃德斌;胡澤華;劉可云