專利名稱：烏腺金絲桃提取物及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種提取物及其應用。
背景技術：
現代醫學的心律失常屬于祖國醫學的“心悸、怔忡”范疇，是心血管疾病的常見病多發病之一。心律失常可使血液循環狀態失常，當發生心律失常時，心房和心室收縮程序改變，能使心排血量下降30％左右，引起病人心虛、胸悶、無力等癥狀，使本身心臟病加重。心律失常嚴重時可致竇性停博、竇房阻滯和心動過緩，出現心動過速綜合癥。心律失常還可導致瘁死，臨床統計發現發生瘁死最多的原因是心律失常，其中以室性心動過速、室顫及傳導阻滯引起瘁死的發生率最高。所以針對心律失常的治療長期以來一直是醫學界集中關注并致力研究解決的熱門課題。目前用于治療心律失常的主要是西醫藥物，具有起效快的優點，但是眾所周知的西醫藥物具有明顯的副作用，甚至會損害其它臟器；目前用于治療心臟病的西醫藥物主要存在引起房室傳導阻滯的副作用，抑制心臟的自律性、傳導性以及心臟的收縮功能，有誘發心動過速或室顫、心動過緩、心絞痛加重、心肌梗死的可能。
烏腺金絲桃是金絲桃科金絲桃屬多年生草本植物，大多生長于草原區山地、林緣、灌叢、草甸草原。在中藥大辭典(1977年7月第1版、2003年5月第12次印刷)中金絲桃(烏腺金絲桃)具有清熱解毒，祛風濕，消腫的作用。目前尚未有用烏腺金絲桃及其提取物治療心臟病的報道。
發明內容
本發明是為了解決現有治療心臟病的西醫藥物存在嚴重副作用的問題和烏腺金絲桃沒有用于心臟病治療報道，而提供一種烏腺金絲桃提取物及其應用。
本發明的烏腺金絲桃提取物是從烏腺金絲桃中提取出來的，提取是按如下步驟進行的一、取烏腺金絲桃陰干品粉碎成粗粉，采用乙醇純提去除雜質，濾出的提取液；二、將提取液在低于80℃的條件下減壓濃縮至相對密度為1.10～1.40的清膏，上樣于大孔樹脂柱上，按清膏與樹脂的質量比為1∶4～8的比例上樣，再以質量濃度為30％～90％、體積為大孔樹脂柱體積2～5倍的乙醇洗脫，收集洗脫液以低于60℃的條件下減壓干燥至水分含量小于5％，然后粉碎成細粉；即得到烏腺金絲桃提取物。
本發明所述提取的步驟一中乙醇純提采用常規方法。
本發明所述提取的步驟二中清膏的相對密度是指在60℃的條件下清膏相對于水的密度。
本發明中所述提取的步驟一中的粗粉指能全部通過藥典標準二號篩，并含有能通過藥典標準四號篩不超過40％的粉末。
本發明中所述提取的步驟二中的細粉指能全部通過藥典標準五號篩，并含有能通過藥典標準六號篩不少于95％的粉末。
本發明的烏腺金絲桃提取物，通過動物實驗說明(1)具有抗缺氧、明顯保護缺血大鼠心肌組織SOD活性，脂質過氧化物MDA的生成，具有明顯的抗脂質過氧化物作用；(2)對CaCl2誘發小鼠心律失常有明顯的對抗作用，與模型組相比使小鼠恢復竇性心律的比例并耐受較大劑量CaCl2的快速注射的保護率提高30％～40％；(3)對氯仿誘發小鼠心律失常有明顯抑制作用；(4)有增加心肌收縮力的作用，可改善心肌舒張功能，減慢心率并使心率趨向穩定規整的作用，除空白組外，各給藥組均可使心率減慢，并在實驗中觀察到給藥后心電圖形更加穩定規整，現象明顯、重現性好。
本發明的烏腺金絲桃提取物，急性毒性預實驗中未能測出0％、100％致死的劑量數值，未觀察到毒性反應，遂進行實驗動物最大耐受量實驗，小鼠單次灌胃給予最大濃度、最大容積的供試品半流體狀溶液，給藥后連續觀察14天，小鼠的一般狀況未見異常、體重增長未受抑制、無死亡例、未觀察到毒性反應，測得小鼠對本發明烏腺金絲桃提取物最大耐受量為37.6g/kg。
本發明烏腺金絲桃提取物，以4g/kg的劑量對大鼠三個月連續給藥的長期毒性實驗中，一般狀況及生理指標未見異常，未觀察到毒性反應及副作用發生。
所以，本發明的提取物對缺血性心臟病具有抗缺氧及心肌功能保護作用；并有增加心肌收縮力、改善心肌舒張功能的作用；特別對快速型心律失常可使心率減慢、穩定規整，竇性恢復率提高；量效關系明顯，無毒副作用。
本發明的烏腺金絲桃提取物可以與具有活血化瘀、調補氣血功用的川芎、丹參、桃仁、紅花、益母草、牛膝、黃芪、黨參、人參、甘草等中藥配伍應用。
本發明的烏腺金絲桃提取物，可以采用常規方法制成膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸劑、顆粒劑、片劑、丸劑或散劑。
本發明將烏腺金絲桃提取物從烏腺金絲桃中提取出來，提取物在藥物安全有效的基礎上，使質量可控，增加藥物的穩定性，減少服用量。
本發明的烏腺金絲桃提取物用于治療心臟病。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式的烏腺金絲桃提取物是從烏腺金絲桃中提取出來的，提取是按如下步驟進行的一、取烏腺金絲桃陰干品粉碎成粗粉，采用乙醇純提去除雜質，濾出的提取液；二、將提取液在低于80℃的條件下減壓濃縮至相對密度為1.10～1.40的清膏，上樣于大孔樹脂柱上，按清膏與樹脂的質量比為1∶4～8的比例上樣，再以質量濃度為30％～90％、體積為大孔樹脂柱體積2～5倍的乙醇洗脫，收集洗脫液以低于60℃的條件下減壓干燥至水分含量小于5％，然后粉碎成細粉；即得到烏腺金絲桃提取物。
具體實施方式
二本實施方式與具體實施方式
一的不同點是所述提取的步驟二中將提取液在60～75℃的條件下減壓濃縮至相對密度為1.20～1.30的清膏。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一的不同點是所述提取的步驟二中將提取液在70℃的條件下減壓濃縮至相對密度為1.25的清膏。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一、二或三的不同點是所述提取的步驟二中清膏的相對密度是指在60℃的條件下清膏相對于水的密度。其它步驟及參數與具體實施方式
一、二或三相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一的不同點是所述提取的步驟一中的粗粉指能全部通過藥典標準二號篩，并含有能通過藥典標準四號篩不超過40％的粉末。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一的不同點是所述提取的步驟二中的細粉指能全部通過藥典標準五號篩，并含有能通過藥典標準六號篩不少于95％的粉末。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一的不同點是所述提取的步驟二中按清膏與樹脂的質量比為1∶6的比例上樣。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一的不同點是所述提取的步驟二中以質量濃度為55％～75％、體積為大孔樹脂柱體積3～4倍的乙醇洗脫。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
九本實施方式與具體實施方式
一的不同點是所述提取的步驟二中以質量濃度為65％、體積為大孔樹脂柱體積3.5倍的乙醇洗脫。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十本實施方式與具體實施方式
一的不同點是所述提取的步驟二中收集洗脫液以30～55℃的條件下減壓干燥至水分含量為4.5％。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十一本實施方式與具體實施方式
一的不同點是所述提取的步驟二中收集洗脫液以低于50℃的條件下減壓干燥至水分含量為4％。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十二本實施方式與具體實施方式
一的不同點是所述提取的步驟一中乙醇純提為以質量濃度為60％～90％的乙醇、在低于80℃的條件下提取1～3小時。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十三本實施方式的烏腺金絲桃提取物用于治療心臟病。
具體實施方式
十四本實施方式的烏腺金絲桃提取物是從烏腺金絲桃中提取出來的，提取是按如下步驟進行的一、取烏腺金絲桃陰干品粉碎成粗粉，采用乙醇純提去除雜質，濾出的提取液；二、將提取液在75℃的條件下減壓濃縮至相對密度為1.25的清膏，上樣于大孔樹脂柱上，按清膏與樹脂的質量比為1∶6的比例上樣，再以濃度為70％、體積為4倍的大孔樹脂柱體積的乙醇洗脫，收集洗脫液以50℃的條件下減壓干燥至水分含量小于5％，然后粉碎成細粉；即得到烏腺金絲桃提取物。
本實施方式中所述提取的步驟二中清膏的相對密度是指在60℃的條件下清膏相對于水的密度。
本實施方式中所述提取的步驟一中的粗粉指能全部通過藥典標準二號篩，并含有能通過藥典標準四號篩不超過40％的粉末。
本實施方式中所述提取的步驟二中的細粉指能全部通過藥典標準五號篩，并含有能通過藥典標準六號篩不少于95％的粉末。
將本實施方式的提取物進行如下動物實驗 1、對異丙腎上腺素致小鼠心肌缺血的影響 1.1對異丙腎上腺素所致心肌缺血小鼠常壓耐缺氧生存時間的影響 昆明種小鼠60只，隨機分為6組①正常對照組；②模型組；③陽性對照組普萘洛爾30mg/kg；④低劑量組0.1g/kg；⑤中劑量組0.2g/kg；⑥；高劑量組0.4g/kg。各組小鼠灌胃預防給藥7天，自預防給藥第6天給藥后30分鐘，模型組和受試組動物連續2天接受皮下注射異丙腎上腺素，每次劑量20mg/kg，每天1次，正常對照組皮下注射等容積生理鹽水，造模導致小鼠出現急性心肌缺血。末次給藥15min后將小鼠放入容積為200ml的密閉廣口瓶中，瓶塞密封瓶口，瓶內放有25g鈉石灰，以呼吸停止為指標，觀察并記錄小鼠存活時間，結果如表1所示。
表1 對小鼠生存時間的影響(
n＝10) 與模型組相比※※P＜0.01；※與模型組相比P＜0 05 表1說明本實施方式的提取物明顯延長了異丙腎上腺素合并密閉所致常壓缺氧狀態下的小鼠存活時間，有抗缺氧作用。
1.2對異丙腎上腺素所致心肌缺血小鼠血清中CK和LDH的影響 異丙腎上腺素致小鼠心肌缺血模型小鼠分組同上。各組小鼠分別按照同上給藥劑量灌胃預防給藥，每天1次，連續7天。第5天開始，除正常對照組外，各組小鼠皮下注射異丙腎上腺素20mg/kg(正常對照組皮下注射等容積生理鹽水)，連續3天。末次給藥后2小時，小鼠眼球采血處死，離心分離血清測定磷酸肌酸酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)活性。迅速開胸摘取心臟，心肌組織在4℃下勻漿，離心提取，測定超氧化物歧化酶(SOD)活性及過氧化脂質丙二醛(MDA)含量，結果如表2、表3所示。
表2對異丙腎上腺素所致心肌缺血小鼠血清中CK和LDH的影響(
n＝10) 與模型組相比※※P＜0.01；※與模型組相比P＜0 05 表3 對異丙腎上腺素所致心肌缺血小鼠心肌組織SOD活性和MDA含量的影響(
n＝10) 與模型組相比※※P＜0.01；※與模型組相比P＜0 05 表2說明，對異丙腎上腺素所致心肌缺血小鼠血清CK和LDA升高有明顯降低作用，說明本實施方式的提取物對急性心肌缺血有保護作用。表3說明，本實施方式的提取物能保護異丙腎上腺素所致心肌缺血小鼠心肌組織SOD活性，對心肌組織MDA的升高有明顯有降低作用，心肌缺血時伴有氧自由基生成，后者可轉變成羥自由基引起心肌細胞膜脂質過氧化，破壞膜功能而加劇心肌缺血，SOD是降解脂質過氧化物特異性酶，心肌缺血時SOD活性降低，所以本實施方式的提取物能明顯保護缺血大鼠心肌組織SOD活性，減少脂質過氧化物MDA的生成，具有明顯的抗脂質過氧化物作用。
2、對大鼠離體心臟左心室功能的影響 方法Wistar大鼠32只，隨機分為4組，分別為空白組、烏腺金絲桃提取物40mg/ml、20mg/ml、10mg/ml組。應用Langendorff系統進行大鼠離體心臟灌注，用Medlab生物信號采集處理系統測定生理參數左室收縮壓(LVSP)、左室內壓上升速率最大值(+dP/dt)max、左室舒張期末壓(LVEDP)、左室內壓下降速率最大值(-dP/dt)max和心率(HR)的變化情況，實驗結果如表4所示。
表4 烏腺金絲桃對大鼠LVSP、LVEDP、(±dp/dt)max及心率的影響(
n＝8) ※P＜0.05 從表4可以看出空白組給藥前后各項指標無顯著性變化。高劑量組給藥后10分鐘使左室收縮壓(LVSP)、左室舒張期末壓(LVEDP)值升高、心率數值(HR)下降，與給藥前相比有顯著差異。中劑量組給藥后5分鐘即能顯著升高左室收縮壓(LVSP)、左室內壓上升和下降速率最大值(±dp/dt)max，并使心率下降與給藥前相比有顯著差異。低劑量組只在給藥后10分鐘心率顯著下降，其他數值未見顯著差異。LVSP主要反映心肌的收縮能力，而LVEDP則間接反映心室的舒張順應性，(±dP/dt)max分別反映收縮期和舒張期心肌的收縮功能的敏捷性。從表4看出，本實施方式的提取物對LVSP、(+dP/dt)max有顯著增高作用，且作用時間長，對(-dP/dt)max有顯著降低作用，表明本實施方式的提取物有增加心肌收縮力的作用，同時使敏捷性提高，可改善心肌舒張功能，減慢心率并使心率趨向穩定規整的作用。除空白組外，各給藥組均可使心率減慢，并在實驗中觀察到給藥后心電圖形更加穩定規整，現象明顯、重現性好，所以本實施方式的提取物具有抗快速型心律失常作用。
3、對氯化鈣致小鼠心律失常的保護作用 昆明種小鼠50只，隨機分為5組，每組10只①對照組；②陽性對照組維拉帕米65mg/kg；③低劑量組0.1g/kg；④中劑量組0.2g/kg；⑤高劑量組0.4g/kg。各組小鼠灌胃預防給藥7天，對照組給予同體積生理鹽水，末次給藥1小時后，將小鼠用20％烏拉坦腹腔注射麻醉(20mg·kg-1)，仰臥位固定，記錄標準II導聯心電圖，3.5％氯化鈣(120mg·kg-1)3s內勻速尾靜脈推注，監測心電圖變化，記錄30min，觀察小鼠心律失常出現時間、持續時間和第一次心律失常出現后20秒內心律恢復情況，統計室顫率和死亡率，結果如表5和表6所示。
表5心律失常出現及持續時間(秒)(
n＝10) 與模型組相比※※P＜0.01；※與模型組相比P＜0 05 表6 恢復竇性心律及追加注射后保護率 表5和表6說明，本實施方式的提取物減少了心律失常后動物死亡數并使大多數動物心律失常后轉為竇性心律，表明其對CaCl2誘發小鼠心律失常有明顯的對抗作用。使多數小鼠恢復竇性心律并耐受較大劑量CaCl2的快速注射，對心律失常小鼠有明顯的保護作用。
4、對氯仿誘發小鼠心律失常的影響 昆明種小鼠60只，隨機分為5組①對照組；②陽性對照組維拉帕米65mg/kg；③低劑量組0.1g/kg；④中劑量組0.2g/kg；⑤高劑量組0.4g/kg。各組小鼠灌胃預防給藥7天，對照組給予同體積生理鹽水，末次給藥1小時后，將小鼠逐一放入置有3～4ml氯仿棉球的倒置燒杯內(以后每換1只小鼠加入1ml氯仿)，至呼吸停止，立即取出剖開胸腔，肉眼檢查心臟活動節律，計算心室纖顫發生率，結果如表7所示。
表7對氯仿誘發小鼠心律失常的影響 表7說明本實施方式的提取物明顯抑制氯仿誘發的小鼠心律失常。
權利要求
1.烏腺金絲桃提取物，其特征在于烏腺金絲桃提取物是從烏腺金絲桃中提取出來的，提取是按如下步驟進行的一、取烏腺金絲桃陰干品粉碎成粗粉，采用乙醇純提去除雜質，濾出的提取液；二、將提取液在低于80℃的條件下減壓濃縮至相對密度為1.10～1.40的清膏，上樣于大孔樹脂柱上，按清膏與樹脂的質量比為1∶4～8的比例上樣，再以質量濃度為30％～90％、體積為大孔樹脂柱體積2～5倍的乙醇洗脫，收集洗脫液以低于60℃的條件下減壓干燥至水分含量小于5％，然后粉碎成細粉；即得到烏腺金絲桃提取物。
2.根據權利要求1所述的烏腺金絲桃提取物，其特征在于所述提取的步驟二中將提取液在60～75℃的條件下減壓濃縮至相對密度為1.20～1.30的清膏。
3.根據權利要求1所述的烏腺金絲桃提取物，其特征在于所述提取的步驟二中將提取液在70℃的條件下減壓濃縮至相對密度為1.25的清膏。
4.根據權利要求1、2或3所述的烏腺金絲桃提取物，其特征在于所述提取的步驟二中清膏的相對密度是指在60℃的條件下清膏相對于水的密度。
5.根據權利要求1所述的烏腺金絲桃提取物，其特征在于所述提取的步驟二中按清膏與樹脂的質量比為1∶6的比例上樣。
6.根據權利要求1所述的烏腺金絲桃提取物，其特征在于所述提取的步驟二中以質量濃度為55％～75％、體積為大孔樹脂柱體積3～4倍的乙醇洗脫。
7.根據權利要求1所述的烏腺金絲桃提取物，其特征在于所述提取的步驟二中以質量濃度為65％、體積為大孔樹脂柱體積3.5倍的乙醇洗脫。
8.根據權利要求1所述的烏腺金絲桃提取物，其特征在于所述提取的步驟二中收集洗脫液以30～55℃的條件下減壓干燥至水分含量為4.5％。
9.根據權利要求1所述的烏腺金絲桃提取物，其特征在于所述提取的步驟二中收集洗脫液以低于50℃的條件下減壓干燥至水分含量為4％。
10.烏腺金絲桃提取物的應用，其特征在于烏腺金絲桃提取物用于治療心臟病。
全文摘要
烏腺金絲桃提取物及其應用，它涉及了一種提取物及其應用。本發明解決了現有治療心臟病的西醫藥物存在嚴重副作用的問題和烏腺金絲桃沒有用于心臟病治療報道。本發明的烏腺金絲桃提取物是從烏腺金絲桃中提取出來的，提取是按如下步驟進行的一、回流；二、濃縮、上樣、洗脫、干燥；即得到烏腺金絲桃提取物。本發明的烏腺金絲桃提取物用于治療心臟病。本發明的提取物具有明顯抑制心律失常，量效關系明顯，無毒副作用的優點。
文檔編號A61K36/185GK101167767SQ20071014455
公開日2008年4月30日 申請日期2007年11月2日 優先權日2007年11月2日
發明者冀 李, 高彥宇 申請人:冀 李, 高彥宇