專利名稱：喜樹堿類藥物緩釋微膠囊的制備方法
技術領域：
本發明涉及 一種喜樹堿類藥物緩釋微膠囊的制備方法。
技術背景尋找開發抗癌活性物質和研制新型高效毒副作用小的抗癌藥物制劑是當今醫藥科學中一項迫切和重要的研究內容。喜樹堿(CPT)是從中國特 有植物喜樹中分離得到的具廣譜抗癌活性的天然化合物，它通過可選擇性 地抑制拓撲異構酶，干預腫瘤細胞DNA復制，從而達到抑制腫瘤細胞生長 的作用，喜樹堿這一獨特抗癌機理的發現，引起全世界醫藥界研究領域的 極大興趣。但是由于喜樹堿具毒副作用大、水溶性差、體內半衰期短等缺 點，使得其應用受到一定的限制。微囊技術是一種用高分子成膜材料把固體、液體或氣體包覆形成微小 粒子的技術。藥物微囊化后，既提高了藥物的穩定性，又可實現對藥物緩 釋的目的，降低毒副作用，延長藥物在體內活性時間，也可使藥物濃集于 靶區，提高療效，降低毒副作用。此外，通過微膠囊的包埋還可增加水難 溶型藥物在水中的分散性。因此，釆用微囊藥物傳遞系統是解決喜樹堿類 藥物諸多缺點的一種有效途徑。因此，為獲得低毒副作用、水分散性好的 喜樹堿藥物制劑，許多科學工作者已開始從這方面著手進行研究。目前， 在已有喜樹堿類藥物微粒傳遞系統的專利中，脂質體、微凝膠體、微乳液、 聚合物微粒等多種微粒結構已被作為喜樹堿類藥物的微載體，如專利"IO-羥基喜樹堿長循環脂質體及其凍干制劑；10-羥基喜樹堿長循環囊泡及其凍 干制劑； 一種10-羥基喜樹堿自微乳組合物；喜樹堿衍生物的納米微粒、制 備方法及其藥物用途；載有喜樹堿的聚乙二醇-聚(丙交酯-己內酯)納米 粒子及其制備方法； 一種羥基喜樹堿聚乳酸納米粒的制備方法"等。本發明 所采用的技術與以上專利中所用技術均不相同，而且至今尚未有用該技術 制備喜樹堿類藥物微膠囊的報道。盡管近年來對喜樹堿類藥物緩釋微囊給藥研究取得了一些進展，但面 臨的困難仍然很多，主要表現在以下幾方面(1)篩選生物相容性和生物 降解性優良的囊壁材料；(2)改善微粒制備方法，提高收率；(3)提高藥物載量；(4)實現藥物釋放速率可控，降低起始爆釋率，獲得藥物連續平 穩釋放；(5)提高藥物在體內循環時間。
發明內容
本發明的目的在于針對喜樹堿類藥物的上述不足之處，提供一種喜樹 堿類藥物緩釋微膠囊的制備方法。本發明釆用的技術方案是(1)將喜樹堿或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿微晶體分散于去離子 水中，超聲1 ~ 100分鐘以分散喜樹堿或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿微 晶體，制成混懸液，(2 )將喜樹堿或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿微晶體置于含有0.01 ~ 100mg/mL的聚陽離子試劑的0.01 ~ 10mol/LpH值為、.1 ~ 6之間的鹽溶液中 吸附0.1-100分鐘，離心或過濾除去未被吸附的聚陽離子，用0.01-lmmol/L鹽酸重復洗滌1 ~ 10次，每次洗滌0.1 ~ 100分鐘，(3) 將喜樹堿或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿置于含有0.01 ~ 100mg/mL的聚陰離子試劑的0.01 ~ 10mol/LpH值為1 ~6之間鹽溶液中吸 附O.l ~100分鐘，離心或過濾除去未被吸附的聚陰離子，用0.01~lmmol/L 鹽酸重復洗滌1~10次，每次洗滌0.1 100分鐘，(4) 依次重復步驟(2)和(3)，得組裝了不同高分子層數的喜樹堿 或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿的緩釋微膠囊。這種微膠囊很穩定，把該藥物微膠囊分散于水性中可構成多種類型的 微納米藥物口服液或注射液，把該藥物微膠囊與輔料混合，可構成藥物膠 囊、片劑等。本發明的方法具有以下優點(1) 囊壁厚度小，喜樹堿類藥物微晶體為微米級，囊壁厚度為納米級，(2) 藥物的包封率與載藥率高，(3) 藥物釋放速度可以通過囊壁的厚度或包覆層數控制，(4) 本發明工藝簡單，反應條件溫和，易操作，重現性好，環境友好， 為喜樹堿類及其它具有療效高，但毒性大，水溶性差等特點藥物的應用研 究提供物質基礎與技術保障，具有良好的應用前景，(5) 本發明特別適用于包覆喜樹堿或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿 藥物微晶體。(6) 本發明能夠控制藥物釋放速率、使之平穩釋放、延長藥物在體內 循環時間的、生物利用度高的喜樹堿類藥物緩釋微膠囊，從而解除癌癥患 者釆用喜樹堿類藥物進行化療時由于劇烈的毒副作用而帶來的痛苦，減少 給藥頻率，為患者用藥提供方便。
圖l是本發明包覆了 5個單層殼聚糖/海藻酸鈉(Cffl/ALG)的喜樹堿 微膠囊，最外層用異硫氰酸熒光素(FITC)進行熒光標記的激光共聚焦顯 微鏡熒光照片。圖2是包覆了 5個單層殼聚糖/海藻酸鈉(Cffl/ALG)的喜樹堿微膠囊 的激光共聚焦顯微鏡透射照片。圖3是喜樹堿微晶體用殼聚糖/海藻酸鈉(Cffl/ALG)包覆5個單層， 再用二甲基亞砜(DMSO)溶解釋放出喜樹堿，所得高分子空殼最外層用 FITC標記的共聚焦顯微鏡熒光照片。圖4是喜樹堿微晶體用殼聚糖/海藻酸鈉(CHI/ALG)包覆5個單層， 再用二甲基亞砜(DMSO)溶解釋放出喜樹堿，所得高分子空殼的共聚焦 顯微鏡透射照片。圖5是包覆層數對喜樹堿釋放速率的影響:(1 )喜樹堿微晶體在pH=7.4 的磷酸緩沖溶液(PBS )中，(2泡覆了 5個單層殼聚糖/海藻酸鈉(CHI/ALG) 的喜樹堿微膠囊在pH-7.4的磷酸緩沖溶液(PBS)中，(3)包覆了 ll個單 層殼聚糖/海藻酸鈉(CHI/ALG)的喜樹堿微晶體在pH=7.4的磷酸緩沖溶 液(PBS)中，(4)包覆了 17個單層殼聚糖/海藻酸鈉(Cffl/ALG)的喜 樹堿微晶體在pl^7.4的磷酸緩沖溶液(PBS)中。圖6是包覆5個氯化鐵/硫酸葡聚糖鈉(Fe/DS)雙層的10-羥基喜樹堿 微膠囊的共聚焦顯微鏡照片。圖7是10-羥基喜樹堿微晶體用氯化鐵/硫酸葡聚糖鈉(Fe/DS)包覆5 個雙層后，再用二甲基亞砜(DMSO)溶解釋放出部分10-羥基喜樹堿，所 得的半空心10-羥基喜樹堿微膠囊的共聚焦顯微鏡照片。圖8是10-羥基喜樹堿微晶體用氯化鐵/硫酸葡聚糖鈉(Fe/DS)包覆5 個雙層后，再用二甲基亞砜(DMSO)溶解釋放出全部10-羥基喜樹堿，所 得的高分子微膠囊空殼的共聚焦顯微鏡照片。
具體實施方式
下面對本發明的實施例作進一步的詳細描述，但這些實例并不用來限 制本發明。 實施例1(1) 將喜樹堿微晶體分散于去離子水中，超聲分散50分鐘，得到喜 樹堿微晶體的混懸液，(2) 將喜樹堿微晶體置于50mg/mL的殼聚糖(Cffl )溶液中吸附30 分鐘，離心除去未被吸附的殼聚糖(Cffl),用lmmol/L鹽酸溶液重復洗滌 10次，每次洗滌10分鐘，(3) 將喜樹堿微晶體置于50mg/mL的海藻酸鈉(ALG)溶液中，吸 附30分鐘，離心除去未被吸附的海藻酸鈉(ALG)，用lrnmol/L鹽酸溶液 重復洗滌10次，每次洗滌10分鐘，(4) 依次重復步驟(2)和(3)，直至得到囊壁層數分別為5、 11、 17 的喜樹堿微膠囊，(5 )將包覆5層高分子的喜樹堿微膠囊置于激光共聚焦掃描電鏡下觀 察載有喜樹堿晶體的微膠囊形態，圖像見圖l,圖2,(6) 用二甲基亞砜(DMSO)將喜樹堿溶出，再用激光共聚焦顯微鏡 觀察剩余的微膠囊空殼，圖像見圖3，圖4,(7) 將包覆了不同層數的喜樹堿微膠囊置于pH=7.4的磷酸緩沖溶液 (PBS)中，保持37X:，觀察包覆不同層數的喜樹堿微膠囊的體外釋放特性。體外釋放曲線見圖5。本實施例中，聚陽離子除了可選用殼聚糖(Cffl)夕卜，還可選用魚精蛋 白、聚精氨酸、聚烯丙基銨鹽酸鹽(PAH)、聚二烯丙基二甲季銨鹽、膠原、 多聚賴氨酸、陽離子葡聚糖、氯化鐵、二苯胺-4-重氮樹脂、取代二苯胺重 氮樹脂。本實施例中，聚陰離子除了可選用海藻酸鈉(ALG)夕卜，還可選用硫 酸葡聚糖(DS)、肝素、硫酸肝素、聚谷氨酸、羧甲基纖維素鈉、聚陰離子 纖維素、聚苯乙烯磺酸鈉(PSS)、硫酸軟骨素、聚丙烯酸鈉、透明質酸、 聚甲基丙烯酸。本實施例中，高分子層數可以是l-50層。實施例2(1)將10-羥基喜樹堿微晶體分散于去離子水中，超聲分散50分鐘， 得到10-羥基喜樹堿微晶體的混懸液，(2 )將10-羥基喜樹堿微晶體置于50mg/mL pH = 2的氯化鐵溶液中吸 附30分鐘，離心除去未被吸附的氯化鐵，用lmmol/L鹽酸溶液重復洗滌 10次，每次洗滌10分鐘，(3) 將10-羥基喜樹堿微晶體置于50mg/mL的硫酸葡聚糖(DS)溶液 中，吸附30分鐘；離心除去未被吸附的DS，用lmmol/L鹽酸溶液重復洗滌 10次，每次洗滌10分鐘，(4) 依次重復步驟(2)和(3)，直至得到囊壁層數分別為8、 12、 16 的10-羥基喜樹堿微膠囊，(5)用二甲基亞砜(DMSO)將微膠囊中的10-羥基喜樹堿溶出，用 激光共聚焦顯微微觀察溶出過程及剩余的微膠囊空殼，圖像見圖6， 7, 8。 本實施例中，聚陽離子除了可選用氯化鐵外，還可選用殼聚糖(Cffl)、 魚精蛋白、聚精氨酸、聚烯丙基銨鹽酸鹽(PAH)、聚二烯丙基二甲季銨鹽、 膠原、多聚賴氨酸、陽離子葡聚糖、二苯胺-4-重氣樹脂、取代二苯胺重氮 樹脂。本實施例中，聚陰離子除了可選用硫酸葡聚糖(DS)夕卜，還可選用海 藻酸鈉(ALG)、肝素、硫酸肝素、聚谷氨酸、羧甲基纖維素鈉、聚陰離子 纖維素、聚苯乙烯磺酸鈉(PSS)、硫酸軟骨素、聚丙烯酸鈉、透明質酸、 聚甲基丙烯酸。本實施例中，高分子層數可以是1~50層。實施例3(1)將9-硝基喜樹堿微晶體分散于去離子水中，超聲分散50分鐘； 得到9-硝基喜樹堿微晶體的混懸液，(2 )將9-硝基喜樹堿微晶體置于50mg/mL pH = 2的聚烯丙基銨鹽酸 鹽(PAH)溶液中吸附30分鐘，離心除去未被吸附的PAH,用lmmol/L 鹽酸溶液重復洗滌10次，每次洗滌10分鐘，(3 )將9-硝基喜微晶體置于50mg/mL的聚苯乙烯磺酸鈉(PSS )溶液 中，吸附30分鐘，離心除去未被吸附的PSS,用lmmol/L鹽酸溶液重復洗 滌10次，每次洗滌10分鐘，(4)依次重復步驟(2)和(3)，直至得到囊壁層數分別為3、 5的喜 樹堿微膠囊。本實施例中，聚陽離子除了可選用聚烯丙基銨鹽酸鹽(PAH)夕卜，還 可選用殼聚糖、魚精蛋白、聚精氨酸、聚二烯丙基二甲季銨鹽、膠原、多 聚賴氨酸、陽離子葡聚糖、氯化鐵、二苯胺-4-重氮樹脂、取代二苯胺重氮 樹脂。本實施例中，聚陰離子除了可選用聚苯乙烯磺酸鈉(PSS)外，還可選 用海藻酸鈉、肝素、硫酸肝素、聚谷氨酸、羧甲基纖維素鈉、聚陰離子纖 維素、硫酸葡聚糖(DS)、硫酸軟骨素、聚丙烯酸鈉、透明質酸、聚甲基丙 烯酸。本實施例中，高分子層數可以是1~50層。
權利要求
1.一種喜樹堿類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于(1)將喜樹堿或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿微晶體分散于去離子水中，超聲1～100分鐘以分散喜樹堿或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿微晶體，制成混懸液，(2)將喜樹堿或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿微晶體置于含有0.01～100mg/mL的聚陽離子試劑的0.01～10mol/L pH值為1～6之間的鹽溶液中吸附0.1～100分鐘，離心或過濾除去未被吸附的聚陽離子，用0.01～1mmol/L鹽酸重復洗滌1～10次，每次洗滌0.1～100分鐘，(3)將喜樹堿或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿置于含有0.01～100mg/mL的聚陰離子試劑的0.01～10mol/L pH值為1～6之間鹽溶液中吸附0.1～100分鐘，離心或過濾除去未被吸附的聚陰離子，用0.01～1mmol/L鹽酸重復洗滌1～10次，每次洗滌0.1～100分鐘，(4)依次重復步驟(2)和(3)，得組裝了不同高分子層數的喜樹堿或10-羥基喜樹堿或9-硝基喜樹堿的緩釋微膠囊。
2. 根據權利要求1所述的喜樹堿類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在 于所述聚陽離子試劑為殼聚糖、魚精蛋白、聚精氨酸、聚烯丙基銨鹽酸 鹽、聚二烯丙基二甲季銨鹽、膠原、多聚賴氨酸、陽離子葡聚糖、氯化鐵、 二苯胺-4-重氣樹脂、取代二苯胺重氮樹脂。
3. 根據權利要求1所述的喜樹堿類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在 于所述聚陰離子試劑為海藻素鈉、硫酸葡聚糖、肝素、硫酸肝素、聚谷 氨酸、羧甲基纖維素鈉、聚陰離子纖維素、聚苯乙烯磺酸鈉、硫酸軟骨素、 聚丙烯酸鈉、透明質酸、聚甲基丙烯酸。
4. 根據權利要求1所述的喜樹堿類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在 于所述高分子層數為1~50層。
全文摘要
本發明涉及一種喜樹堿類藥物緩釋微膠囊的制備方法，首先將喜樹堿類藥物微晶體置于去離子水中，超聲分散，第二步將分散后的喜樹堿類藥物微晶體置于聚陽離子溶液中吸附，之后離心、洗滌，第三步再將吸附了聚陽離子的喜樹堿類藥物微晶體置于聚陰離子溶液中吸附，離心、洗滌，然后依次重復第二步和第三步，從而得到具核殼結構的藥物微膠囊。這種微膠囊很穩定，可實現藥物的控制釋放，可以制成微納米藥物口服液或注射液，也可構成藥物膠囊、片劑等。本發明工藝簡單，反應條件溫和，易操作，重現性好，環境友好，為喜樹堿類及其它具有療效高，但毒性大，水溶性差等特點藥物的應用研究提供物質基礎與技術保障，具有良好的應用前景。
文檔編號A61K31/4745GK101156854SQ20071014432
公開日2008年4月9日 申請日期2007年9月19日 優先權日2007年9月19日
發明者岳秀麗, 洋 王, 閻秀峰 申請人:哈爾濱峰源高科技開發有限公司