專利名稱：：中藥有效部位復方處方組成、制備工藝及其抗糖尿病用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種由黃連總生物堿、黃芪總皂苷和金銀花總糖醇組成的中藥復方有效部位，黃連總生物堿、黃芪總皂苷、金銀花總糖醇的制備方法，含有這種中藥復方有效部位的藥物組合物，以及中藥復方有效部位在制備改善胰島素抵抗和抗糖尿病藥物中的應用，屬于中藥
技術領域：
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背景技術：
：近年來，抗糖尿病的西藥研究有了長足的進展，打破了多年來磺酰脲和雙胍類兩大類口服降血糖藥的格局，先后有oc葡萄糖苷酶抑制劑、噻唑垸二酮類胰島素增敏劑、非磺酰脲類促胰島素分泌劑上巿，為糖尿病的治療立下汗馬功勞。同時也存在一些與其作用機理相關的副作用和原因不明的潛在不利影響。針對這些問題，國內外研究人員除研發作用于新靶點的新型抗糖尿病藥物外，也采用類似我國中藥復方多成分多靶點的理念，以現有作用于不同環節的抗糖尿病藥物組成新的抗糖尿病復方新藥，如二甲雙胍與優降糖復方、二甲雙胍與羅格列酮復方等。祖國醫藥學在診治糖尿病方面有著完整的理論體系和豐富的實踐經驗，歷代醫書中均有記載。千金黃連丸原載于唐朝孫思邈的"千金方"中，備受古今名醫的推崇，如冉雪峰、郭士魁等老中醫都以此方為主辨證施治。中國醫學科學院藥物所藥理學家謝明智教授運用現代醫藥學關于糖尿病的知識和方法技術，結合中醫藥對消渴病的理論和治則，經過篩選和綜合比較評價，以千金黃連丸為基礎，組成中藥復方-金芪降糖片(已申請專利，申請號為200410018739)。經中法國際合作項目的200例雙盲臨床研究試驗及十多年的臨床應用，表明金芪降糖片抗糖尿病療效確切，未見毒副作用發生。在此工作基礎上，經多學科密切合作，去粗取精，確定了三味中藥的增敏降糖有效部位，通過藥效學正交試驗和驗證，確定了由有效部位組成新復方的合適配比，發現該藥具有類似噻唑烷二酮類胰島素增敏劑的作用特點和二甲雙胍對糖代謝的外周作用，但未見瘞唑烷二酮類增加體重等副作用。可用于2型糖尿病和代謝綜合癥的治療。該有效部位新復方的處方組成、改善胰島素抵抗和治療2型糖尿病的藥理作用未見報道。本發明將為廣大2型糖尿病患者帶來福音，對我國抗糖尿病中醫藥與現代醫藥學的接軌具有重要意義。
發明內容處方組成本發明的中藥復方的有效部位來自3味中藥黃連、黃芪和金銀花。有效部位分別為黃連總生物堿、黃芪總皂苷、金銀花總糖醇。各自有效組分含量均超過50%。復方中各有效部位的用量為(重量份)黃連總生物堿5~10份，黃芪總皂苷2~10份，金銀花總糖醇5~15份。所述的有效部位的優選組成和比例黃連總生物堿5~6重量份，黃芪總皂苷3.5~5.5重量份，金銀花總糖醇6~8重量份。所述的有效部位的更優選的組成和比例黃連總生物堿5重量份，黃芪總皂苷4.5重量份，金銀花總糖醇7重量份。制備工藝1.黃連總生物鹼中藥黃連粗粉加10~20倍量50~80%乙醇回流l小時，共提取2次，合并提取液，6(TC下濃縮至干，濃縮物用26L水溶解，水溶液加入0.10.5。/。(v/v)濃鹽酸，搖勻，放置過夜；過濾，濾得固體粉末用兩倍量水洗滌兩次，抽干；固體物608(TC干燥35小時，既得黃連總生物鹼(總鹼含量70%以上)，收率為6~10%。2.黃喪總皂苷中藥黃芪粗粉加5~15倍量50~80%乙醇回流2小時，共提取3次，合并提取液，60'C下濃縮至稠膏，加510倍量水溶解，過濾，濾液通過一預先備用的大孔吸附樹脂柱，水洗至無色后，用乙醇洗脫，直至洗脫液無皂苷反應為止，洗脫液合并，60'C下濃縮至小體積后；冷凍干燥成粉，既為黃芪總皂苷(總皂苷含量50~60%)，收率為1~3%。3.金銀花總糖(醇)中藥金銀花粗粉加15~30倍量水煎煮0.5~1小時，共提3次，合并提取液，60'C下濃縮至原體積1/5~1/10，攪拌下加入1~2倍量95%乙醇，放置過夜；過濾，沉淀用稀醇洗滌，洗液與濾液合并，60'C下濃縮至無乙醇味后，通過一預先備用的大孔吸附樹脂柱，水洗至洗脫液蒸干無殘渣為止，洗脫液合并，60'C下濃縮至小體積；然后冷凍干燥成粉，既為總糖醇；總糖醇含量50-65%,收率為15-20%。圖1~3為上述3個有效部位高壓液相分析圖譜。圖4.復方對四氧嘧啶高血糖小鼠血糖下降百分率的影響。以各時間點對照組血糖為參照，計算不同劑量給藥組血糖下降百分率，Met為二甲雙胍，FF為復方。圖5.復方對NISG小鼠胰島素耐量的影響。n=9，Nor為正常小鼠，Con為MSG模型對照組，Ros為陽性對照藥為羅格列酮。圖6.復方對NISG小鼠胰島素敏感指數的影響。Nor為正常小鼠，Con為MSG模型對照組，Ros為陽性對照藥為羅格列酮，FF為復方，ISI為胰島素敏感指數；Vs.Con,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。圖7.復方對MSG小鼠口服葡萄糖耐量的影響。Nor為正常小鼠，Con為MSG模型對照組，Ros為陽性對照藥為羅格列酮，FF為復方。圖8.復方對MSG小鼠葡萄糖異生的影響Nor為正常小鼠，Con為MSG模型對照組，Ros為陽性對照藥為羅格列酮，FF為復方；丙氨酸2.0g/kg(ip);vs.Con,*P<0.05,**P<0.01,***P<0,001。圖9.復方對肥胖性胰島素抵抗MSG小鼠體重變化的影響。圖10.復方對NISG模型小鼠胰腺病理形態(胰島)的影響。胰島素特異性免疫組化染色，x400。具體實施例方式實施例1.黃連總生物鹼黃連粗粉1.25kg，加20L70。/。乙醇回流1小時，共提取2次，合并提取液，60'C下濃縮至濃縮至干，濃縮物用3L水溶解，水溶液滴加濃鹽酸至無沉淀產生為止(約需濃鹽酸65ml),搖勻，放置過夜；過濾，濾得固體粉末用兩倍量水洗滌兩次，抽干；得固體粉末于60'C下干燥5小時，既得黃連總生物鹼98g,收率為7.84%。黃連總生物鹼為亮黃色結晶性粉末，具有典型的生物堿顯色反應，薄層層析法檢查發現，除鹽酸小檗鹼外，還含有多種生物鹼；高壓液相色譜法測定其鹽酸小檗鹼含量為65.89%,紫外分光光度法測定總生物鹼含量為77.59%。實施例2.黃芪總皂苷黃芪粗粉3.0kg，加30L70。/。乙醇回流2小時，共提取3次，合并提取液，60'C下濃縮至稠膏，加5倍量水溶解，過濾，濾液通過一預先備用的D4020型大孔吸附樹脂柱，水洗至無色后，用80%乙醇洗脫，直至洗脫液無皂苷反應為止，洗脫液合并，于6(TC下濃縮至小體積后；冷凍干燥成粉，既得黃芪總皂苷43.5g，收率為1.45%。黃芪總皂苷為黃色固體粉末，除有典型的皂苷顯色反應外，薄層層析法檢查發現，除黃芪甲苷(AstragalosideIV)還含有多種成分；高壓液相色譜法測定黃芪甲苷含量為2.08%，紫外分光光度法測定其總皂苷含量為53.30°/。。實施例3.金銀花總糖(醇)金銀花粗粉1.5kg,加30L水煎煮0.5小時，共提取2次，合并提取液，60'C下濃縮至原體積1/7,攪拌下加入等體積95%乙醇，放置過夜；過濾，沉淀用稀醇洗滌，洗液與濾液合并，60'C下濃縮至無乙醇味后，通過一預先備用的AB-8型大孔吸附樹脂柱，水洗至洗脫液蒸干無殘渣為止，洗脫液合并，60'C下濃縮成浸膏；然后冷凍干燥成粉，既得總糖醇372.3g;收率為24.82%。金銀花總糖醇為淡黃色固體粉末，除有典型的糖醇顯色反應外，薄層層析法檢查發現，除肌醇(meso-Inositol)外還含有多種成分；高壓液相色譜法測定肌醇含量為12.09%,紫外分光光度法測定其總糖醇含量為54.14°/。。圖1-3為上述3個有效部位高壓液相分析圖譜。制劑1.丸劑將以上制備的有效部位按處方量加入適量的黏合劑或其他輔料制成丸形或類丸形制劑，包括蜜丸、水蜜丸、水丸、糊丸、蠟丸、濃縮丸等類型。2.顆粒劑將以上制備的有效部位按處方量加入適量的輔料制成具有一定粒度的顆粒狀制劑。3.片劑將以上制備的有效部位按處方量加入適量輔料混勻壓制成圓片狀或異性片狀的制劑，包括素片、糖衣片、薄膜衣片等。4.糖漿劑將以上制備的有效部位按處方量加入適量濃蔗糖水溶液制成的制劑。5.合劑將以上制備的有效部位按處方量加入溶劑制成口服液體制劑。6.滴丸劑將以上制備的有效部位按處方量與適宜的基質加熱熔融混勻后，滴入不相混溶的冷凝液中，收縮冷凝而制成的球形或類球形制劑。7.膠囊劑將以上制備的有效部位按處方量加入適宜輔料填充于空心膠囊或密封于軟質囊材中的制劑，可分為硬膠囊、軟膠囊或腸溶膠囊。8.耵劑將以上制備的有效部位按處方量溶解而制成的澄清液體制劑。9.茶劑將以上制備的有效部位按處方量加入茶葉或其他輔料混合制成的內服制劑。10.注射劑將以上制備的有效部位按處方量純化后制成供注入人體內的溶液、乳狀液即供臨用前配制成溶液的粉末或溶液的無菌制劑。藥理實驗中藥復方(比例是5:4.5:7)改善胰島素抵抗及抗糖尿病的藥理作用1.中藥復方對四氧嘧啶高血糖小鼠血糖的影響四氧嘧啶糖尿病小鼠按血糖分為5組(n=10)，一組灌胃等體積水作為對照組，一組灌胃鹽酸二甲雙胍(200mg/kg)作為陽性對照藥組，其余三組分別灌胃不同劑量的中藥復方作為給藥組。每天一次，連續給藥30天，于不同時間用葡萄糖氧化酶法動態檢測空腹血糖水平變化。結果(表1、圖4)表明，該復方在100-450mg/kg劑量范圍內，能使四氧嘧^^糖尿病小鼠血糖明顯降低，且呈一定量效關系。表l.復方對四氧嘧啶高血糖小鼠的降血糖作用及量效關系<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>數據以平均值土標準差表示，n=10。*PS0.05，**P<0.01，***P<0.0012.中藥復方對肥胖性MSG小鼠胰島素抗性的改善作用肥胖性胰島素抵抗MSG小鼠，根據空腹血糖、對胰島素的敏感性、血脂及體重分組，共5組，給藥前所有指標間無統計學差異。一組灌胃等體積水作為對照組，一組灌胃馬來酸鹽羅格列酮(rosiglitazone，2.5mg/kg)水溶液作為陽性對照藥組，剩余三組分別灌胃不同劑量的中藥復方作為給藥組。同時設一組正常小鼠作為正常對照。每天一次，連續給藥，于給藥2周進行胰島素耐量測定，并測定空腹血糖及血胰島素水平，計算血糖曲線下面積和胰島素敏感指數。以評價對胰島素抗性的改善作用。結果(圖5、6,表2)表明，與模型對照組比較，該復方能使胰島素耐量血糖曲線下面積減少，胰島素敏感指數升高。說明該復方能明顯改善該動物模型的胰島素抵抗狀態，提高機體對胰島素的敏感性。表2.復方對MSG小鼠胰島素耐量血糖曲線下面積影響的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與對照組比較，**P<0.01，***P<0.001;AUC為血糖曲線下面積；AUC變化百分數以對照組為參照；Ros為陽性對照藥為羅格列酮。3.中藥復方對MSG小鼠葡萄糖耐量、糖異生及體重的影響動物分組及實驗設計同(二)。在給藥兩周后，分別進行口服葡萄糖耐量實驗、糖異生實驗。實驗結東時記錄動物體重。結果(圖7-9、表3)表明，該復方能明顯改善肥胖性胰島素抵抗MSG小鼠的葡萄糖耐量異常，使血糖曲線下面積明顯減少，并呈一定量效關系；也能明顯抑制機體葡萄糖自丙氨酸的異生能力；與陽性對照藥羅格列酮比較，對體重沒有增加作用，反而具有一定減少體重的作用。表3.復方對MSG小鼠葡萄糖耐量血糖曲線下面積(AUC)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>__360.4±83.5***_丄45.3與對照組比較，**P<0.01，***P<0.001;AUC變化百分數以對照繼為參照4.復方對自發性2型糖尿病KKAy小鼠胰島素抗性、血糖及血脂的影響自發性2型糖尿病KKAy小鼠根據血糖、胰島素耐量預測結果、血脂及體重分組，共3組，給藥前組間所有指標無統計學差異。一組作為模型對照以等體積水灌胃，一組作為陽性對照藥組以羅格列酮(5mg/kg)灌胃，一組作為給藥組以該復方(200mg/kg)灌胃。同時設一組正常動物組(KM小鼠)。每天一次，連續3周。動態觀察空腹血糖和對胰島素的反應性，并測定血脂水平。表5~7結果表明，該復方能明顯降低自發性2型糖尿病KKAy小鼠空腹血糖水平，使胰島素血糖曲線下面積明顯減少，血甘油三酯水平降低，但對血膽固醇水平無影響。表4.復方對自發性2型糖尿病KKAy小鼠血糖的影響組別/」f、_血糖(mg/dl)_(mg/kg)-^^正常-146.5±10.8***145.0±17.3*對照組-307.1±103.5250.6±106.9復方200218.6±103.9(29%)148.8±57.6*(40.6%)Ros_^_168.3±32.9**(45%)_134.4±32.9**(46.4%)Vs.對照組apO.05,"PO.01^"PO.001;()內數值為血糖降低百分數(以對照組為參照)表5.復方對自發性2型糖尿病KKAy小鼠胰島<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表6.復方對自發性2型糖尿病KKAy小鼠血脂的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>5.復方對肥胖性胰島素抵抗MSG小鼠胰島P細胞的保護作用動物分組及實驗設計同(二)。連續給藥4周后，斷頭處死動物，取胰腺組織進行病理形態檢測(給藥組為450mg/kg劑量組)。結果表明，復方使MSG小鼠胰島增生、肥大及脂肪沉積的病理改變基本恢復正常，提示復方對胰島e細胞有一定保護作用(圖IO)。綜上所述，由有效部位黃連總生物堿、黃芪總皂苷和金銀花總糖醇組成的新型中藥復方，不僅能使四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖明顯降低，也能使肥胖性胰島素抵抗MSG小鼠異常的胰島素耐量和葡萄糖耐量改善，其血糖曲線下面積明顯減少，胰島素敏感指數升髙，葡萄糖異生明顯抑制，胰島增生、肥大及脂肪沉積的病理改變基本恢復正常，且無噻唑烷二酮類胰島素增敏劑使體重增加的副作用；能使自發性2型糖尿病KKAy小鼠血糖降低，胰島素耐量曲線下面積明顯減少、也使甘油三酯水平下降。可用于臨床2型糖尿病、胰島素抵抗和代謝綜合征的治療。其用量200500mg/次，一曰三次，口服。權利要求1、一種中藥復方有效部位，其特征在于，所述的有效部位的組成和比例黃連總生物堿5～10重量份，黃芪總皂苷2～10重量份，金銀花總糖醇5～15重量份，并且黃連總生物堿、黃芪總皂苷、金銀花總糖醇的各自有效組分含量均超過50％。2、根據權利要求l的中藥復方有效部位，其特征在于，所述的有效部位的組成和比例黃連總生物堿5-6重量份，黃芪總皂苷3.5~5.5重量份，金銀花總糖醇6~8重量份。3、根據權利要求2的中藥復方有效部位，其特征在于，所述的有效部位的組成和比例黃連總生物堿5重量份，黃芪總皂苷4.5重量份，金銀花總糖醇7重量份。4、制備權利1-3中所述黃連總生物堿的方法，其特征在于，包括如下步驟中藥黃連粗粉加10~20倍量50~80%乙醇回流1小時，共提取2次，合并提取液，60'C下濃縮至干，濃縮物用26L水溶解，水溶液加入0.10.5。/。(v/v)濃鹽酸，搖勾，放置過夜；過濾，濾得固體粉末用兩倍量水洗滌兩次，抽干；固體物6080'C干燥35小時，既得黃連總生物堿(總堿含量70%以上)，收率為6~10%。5、制備權利1-3中所述黃芪總皂苷的方法，其特征在于，包括如下步驟中藥黃芪粗粉加5~15倍量50~80%乙醇回流2小時，共提取3次，合并提取液，60'C下濃縮至稠膏，加510倍量水溶解，過濾，濾液通過一預先備用的大孔吸附樹脂柱，水洗至無色后，用乙醇洗脫，直至洗脫液無皂苷反應為止，洗脫液合并，60'C下濃縮至小體積后；冷凍干燥成粉，既為黃芪總皂苷(總皂苷含量5060%)，收率為1~3%。6、制備權利1-3中所述金銀花總糖醇的方法，其特征在于，包括如下步驟中藥金銀花粗粉加15~30倍量水煎煮0.5~1小時，共提3次，合并提取液，60'C下濃縮至原體積1/5~1/10，攪拌下加入1~2倍量95%乙醇，放置過夜；過濾，沉淀用稀醇洗滌，洗液與濾液合并，6(TC下濃縮至無乙醇味后，通過一預先備用的大孔吸附樹脂柱，水洗至洗脫液蒸干無殘渣為止，洗脫液合并，60'C下濃縮至小體積；然后冷凍干燥成粉，既為總糖醇；總糖醇含量50~65%，收率為15.~20%。7、一種藥物組合物，含有權利要求l-3中任一中藥復方有效部位和藥效學上可接受的載體。8、根據權利要求7的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物是丸劑、顆粒劑、片劑、糖漿劑、合劑、滴丸劑、膠囊劑、酊劑、茶劑、注射劑。9、權利要求1-3的中藥復方有效部位在制備改善胰島素抵抗藥物中的應用。10、權利要求1-3的中藥復方有效部位在制備抗糖尿病藥物中的應用。全文摘要本發明公開了一種中藥復方有效部位，其組成和比例黃連總生物堿5～10重量份，黃芪總皂苷2～10重量份，金銀花總糖醇5～15重量份，黃連總生物堿、黃芪總皂苷、金銀花總糖醇的制備方法，含有這種中藥復方有效部位的藥物組合物，以及中藥復方有效部位在制備改善胰島素抵抗和抗糖尿病藥物中的應用。文檔編號A61P3/10GK101390966SQ20071012203公開日2009年3月25日申請日期2007年9月20日優先權日2007年9月20日發明者馮孝章,偉劉,泉劉,劉文偉,孫素娟,尹寶蓮,欣王,王愛國,申竹芳,蘇亞倫,謝明智,陳躍騰申請人:中國醫學科學院藥物研究所;天津中新藥業集團股份有限公司隆順榕制藥廠