專利名稱：：一種治療肛瘺的生物填塞引流物的制備及其使用方法
技術領域：
：本發明涉及一種用于治療肛瘺的生物填塞引流物的制備方法及其應用。該生物填塞引流物是應用人或動物的皮膚組織為原料，通過固定、脫細胞、引入抗生素涂層等步驟制備而成，通過肛瘺探針、手術和/或內鏡方式置入肛瘺瘺道中，可以有效地促進肛瘺的愈合，具有愈合率高、復發率低、感染率低等優點。發明背景本說明書所述的肛瘺是肛周皮膚和直腸/肛管相同的一種慢性感染性管道，是肛門周圍膿腫愈合后的必然結果，是一種常見的肛門良性疾病，臨床表現為反復發作的肛周感染、破潰流膿，長期不愈的病人可以發生肛周癌。。臨床上可以分為低位單純性肛瘺、低位復雜性肛瘺、高位單純性肛瘺、高位復雜性肛痿4種類型。本領域技術人員普遍認為，肛痿的發生率為40%-50%。長期以來，治療肛瘺的主要方法是外科手術治療，包括肛痿切除術、掛線療法、瘺道曠置引流術、經肛直腸黏膜瓣內口修補術等手術方式，這些手術治療方式都存在肛門功能障礙和復發的問題。根據文獻報道，術后肛門失禁的發生率在10%-65%之間，術后肛瘺復發率在20%-40%之間。自1999年以來，本領域技術人員開始嘗試應用纖維蛋白膠治療肛瘺，該方法具有無副作用，無痛，操作簡單，無肛門功能障礙等優點，但是根據文獻報道，其復發率在15%-86%之間，特別是對于復雜性肛瘺，治療效果不好。本說明書提供了一種用于治療肛瘺的生物填塞引流物的制備及其使用方法。本發明提供的生物填塞引流物是以人或動物的皮膚組織為原料。與以上所述治療方法不同，本發明所提供的生物填塞引流物治療肛瘺的原理是為肛瘺瘺道愈合提供了生物支架，能夠促進瘺道的愈合，并且，可以發揮引流的作用，另外，本生物填塞引流物具有抗生素涂層，可以防止感染，降低復發率。
發明內容本發明提供了一種治療肛瘺的生物填塞引流物的制備和使用方法，所述生物填塞弓I流物的制備方法包括以下步驟a.從人或動物供體中獲得人或動物的皮膚組織作為原料，b.用固定液對所獲得的皮膚組織進行固定，C.脫細胞處理步驟，所述步驟是應用堿性溶液對固定后的組織進行孵育，d.洗滌并消除殘留的固定液以及調節PH值的步驟，所述步驟是應用中性緩沖液對脫細胞處理后的組織進行洗滌，并且應用氨基酸溶液孵育至PH值為7.357.55，e.引入抗生素涂層的步驟，f.在引入抗生素涂層的步驟之前或者之后的成型步驟，所述步驟是將制備好的組織壓制成具有縱長軸線，帶有凹槽并適合置入瘺管中的圓錐臺型體。所述的動物可以是豬、牛、羊、兔，優選是豬。根據上述制備方法，其中所述圓錐臺型體的縱軸長度為610cm，所述圓錐臺型體的頂面直徑為0.20.4cm，底面直徑為0.50.8cm，其中所述凹槽是位于圓錐臺型體柱面上的均勻分布的三個軸向開放凹槽，其中凹槽的開放夾角是30°，凹槽的橫截面為扇環形，其中所述圓錐臺型體的頂面處凹槽深度為0.05-0.1cm，底面處凹槽深度為0.1-0.2cm。所述的固定劑包括本
技術領域：
常用的各種用來防止組織溶解及腐敗，并使細胞內蛋白質、脂肪、糖、酶等各種成分轉變為不溶性物質，能夠保持組織和細胞與正常生活時的形態和結構相似的物質，可以是任意濃度的甲醛、多聚甲醛、苦味酸溶液、冰醋酸、戊二醛、鋨酸、Bouin氏固定液、Zenker液、Camoy液、改良Bouin氏固定液等，優選是2%甲醛和1.5%戊二醛。所述的堿性溶液是堿金屬氫氧化物溶液，優選是氫氧化鈉溶液和氫氧化鉀溶液。所述的中性緩沖液可以是磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲垸緩沖液(Tris緩沖液)。本發明實施中所用的舉證性緩沖液為磷酸鈉緩沖液。所述的氨基酸緩沖液可以是甘氨酸一HC1緩沖液、甘氨酸^NaOH緩沖液、甘氨酸一Tris緩沖液、組氨酸緩沖液、甘氨酰胺(glycineamide)緩沖液、甘氨酰甘氨酸(glycylglycine)緩沖液。其作用是調整脫細胞處理后的組織的PH值至7.357.55，其選擇根據脫細胞處理后的組織的PH值而定。本發明實施中所用的舉證性氨基酸緩沖液是甘氨酸一HC1緩沖液。所述的抗生素涂層制備方法為通過噴灑、浸泡或滴注的方式，將抗生素的均質水溶液引入到成型后的組織中，經蒸發和/或應用干燥劑基本上去除水后，再通過同樣的方法加入至少一種易溶于水的兩性分子溶液，再經蒸發和/或應用干燥劑干燥后得到抗生素涂層。所述的抗生素可以是氨基糖苷類抗生素、四環素類抗生素、林可酰胺類抗生素、喹諾酮類抗生素、硝基咪唑類抗生素、磺胺類抗生素、甲基呋喃類抗生素、硝基呋喃類抗生素或上述抗生素任意組合的混合物，具體來講可以是慶大霉素、甲硝唑、西梭霉素、乙基西梭霉素、鏈霉素、妥布霉素、大觀霉素、萬古霉素、環丙沙星、莫西沙星、克林達霉素、林可霉素、四環素、梭金霉素、土霉素和羅列四環素或上述抗生素任意組合的混合物。本發明實施中所用的舉證性抗生素為慶大霉素硫酸鹽和甲硝唑的組合物。所述的兩性分子可以是烷基硫酸鹽、垸基磺酸鹽、烷基芳基硫酸鹽、二烷基芳基硫酸鹽、烷基芳基磺酸鹽、二垸基芳基磺酸鹽、環烷基硫酸鹽、環烷基磺酸鹽、垸基環垸基硫酸鹽。本發明實施中所用的舉證性兩性分子為十二垸基硫酸鈉。本發明還提供了一種根據上述任一項制備方法所制備的生物填塞引流物，所述生物填塞引流物是具有縱長軸線，帶有凹槽并適合置入瘺管中的圓錐臺型體，其中所述圓錐臺型體的縱軸長度為6~10cm，所述圓錐臺型體的頂面直徑為0.20.4cm，底面直徑為0.5~0.8cm，其中所述凹槽是位于圓錐臺型體柱面上的均勻分布的三個軸向開放凹槽，其中凹槽的開放夾角是30°，凹槽的橫截面為扇環形，其中所述圓錐臺型體的頂面處凹槽深度為0.05-0.1cm，底面處凹槽深度為0.1-0.2011(圖1、圖2)。本發明還提供了上述生物填塞引流物在制備用于治療肛瘺的藥物以及器械中的應用。所述治療優選是通過手術、探針牽引和/或內鏡的方法，將本發明所制備的生物填塞引流物置入肛瘺瘺管中，頂面朝向外口，底面縫合固定于內口，外口更換敷料直至肛瘺愈合。實施例2提供了本發明所制備的生物填塞引流物的具體使用方法。按照實施例3，本發明人還提供了本發明所制備的生物填塞引流物治療肛痿的有效率(60%~86%)、復發率(040%)和感染率(14%40%)，其治療效果顯著優于手術和纖維蛋白膠療法。本發明所述的肛瘺可以是低位單純性肛痿、低位復雜性肛瘺、高位單純性肛瘺、高位復雜性肛痿。下面結合附圖和實施例詳細描述本發明，所述的實施例是用于描述本發明，而不是限制本發明。圖l:生物填塞引流物的透視圖圖2:生物填塞引流物的橫斷面實施例實施例1:應用新鮮豬真皮組織制備肛瘺生物填塞引流物采集新鮮豬真皮組織，切割成13C1^小塊，立即用2%甲醛溶液固定24小時，用蒸餾水洗滌數次。然后，將組織用1N的氫氧化鈉溶液于20°C恒溫下孵育24小時進行脫細胞處理。然后，應用磷酸鈉緩沖液洗滌組織直至組織呈半透明狀。然后將洗滌后的組織于甘氨酸一HC1緩沖液中孵育以消除殘存的固定液并降低PH值，直至PH值為7.35~7.55。將上述處理后的組織浸泡于混合50mg/ml的硫酸慶大霉素和50mg/ml的甲硝唑均質水溶液中，10分鐘后取出，干燥，然后將組織浸泡于50mg/ml的十二垸基硫酸鈉溶液中，干燥后粉碎，并應用制備好的模具壓制成生物填塞引流物，該生物填塞引流物是具有縱長軸線，帶有凹槽并適合置入瘺管中的圓錐臺型體，其中所述圓錐臺型體的縱軸長度為610cm，所述圓錐臺型體的頂面直徑為0.20.4cm，底面直徑為0.50.8cm，其中所述凹槽是位于圓錐臺型體柱面上的均勻分布的三個軸向開放凹槽，其中凹槽的開放夾角是30°,凹槽的橫截面為扇環形，其中所述圓錐臺型體的頂面處凹槽深度為0.05-0.1cm，底面處凹槽深度為0.1-0.2cm(圖1、圖2)。實施例2:探針結合內鏡方法置入肛痿填塞物1.應用內鏡探查痿道，并尋找內口。然后進行清創，確保清創和止血效果。2.置入肛瘺探針，并牽引實施例1所制備的肛痿填塞物經內口進入瘺道，填塞物尖端經外口引出。3.用可吸收縫線于實施例1所制備的肛瘺填塞物的底端縫合一針并打結。4.將肛瘺填塞物向外牽引，使底端達直腸粘膜下肌層水平。5.經直腸粘膜將肛瘺填塞物底端"8"字縫合固定。6.去除肛瘺填塞物尖端多余部分，使肛瘺填塞物尖端與肛周皮膚平行。7.外口覆蓋無菌敷料并每日換藥直至愈合。實施例3:療效病例選擇選擇2006年6月2007年6月肛瘺患者共30例，其中低位單純性肛瘺15例、低位復雜性肛瘺5例、高位單純性肛瘺5例、高位復雜性肛痿5例。應用實施例1所制備的肛瘺填塞物，采用實施例2提供的方法進行治療。經隨訪，結果如下表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權利要求1.一種用于治療肛瘺的生物填塞引流物的制備方法，所述制備方法包括以下步驟a.從人或動物供體中獲得人或動物的皮膚組織作為原料，b.用固定液對所獲得的皮膚組織進行固定，c.脫細胞處理步驟，所述步驟是應用堿性溶液對固定后的組織進行孵育，d.洗滌并消除殘留的固定液以及調節PH值的步驟，所述步驟是應用中性緩沖液對脫細胞處理后的組織進行洗滌，并且應用氨基酸溶液孵育至PH值為7.35～7.55，e.引入抗生素涂層的步驟，f.在引入抗生素涂層的步驟之前或者之后的成型步驟，所述步驟是將制備好的組織壓制成具有縱長軸線，帶有凹槽并適合置入瘺管中的圓錐臺型體。2.根據權利要求書1的制備方法，其中所述引入抗生素涂層的步驟是通過噴灑、浸泡或滴注的方式，將抗生素的均質水溶液引入到組織中，經蒸發和/或應用干燥劑基本上去除水后，再通過同樣的方法加入至少一種易溶于水的兩性分子溶液，再經蒸發和/或應用干燥劑干燥后得到抗生素涂層。3.根據權利要求書1-2中任一項的制備方法，其中所述圓錐臺型體的縱軸長度為6~10cm，所述圓錐臺型體的頂面直徑為0.2~0.4cm，底面直徑為0.5~0.8cm，其中所述凹槽是位于圓錐臺型體柱面上的均勻分布的三個軸向開放凹槽，其中凹槽的開放夾角是30°，凹槽的橫截面為扇環形，其中所述圓錐臺型體的頂面處凹槽深度為0.05-0.1cm，底面處凹槽深度為0.1-0.2cm。4.根據權利要求書3的制備方法，其中所述的固定液選自適宜濃度的甲醛、多聚甲醛、苦味酸溶液、冰醋酸、戊二醛、鋨酸、Bouin氏固定液、Zenker液、Carnoy液、改良Bouin氏固定液等。5.根據權利要求書3的制備方法，其中所述的堿性溶液是堿金屬氫氧化物溶液。6.根據權利要求書3的制備方法，其中所述的中性緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲垸緩沖液。7.根據權利要求書3的制備方法，其中所述的氨基酸溶液選自甘氨酸-HCl緩沖液、天門冬氨酸緩沖液、甘氨酸-NaOH緩沖液、甘氨酸-Tris緩沖液、組氨酸緩沖液、甘氨酰胺緩沖液、甘氨酰甘氨酸緩沖液。8.根據權利要求書3的制備方法，其中所述的兩性分子選自垸基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、烷基芳基硫酸鹽、二垸基芳基硫酸鹽、烷基芳基磺酸鹽、二烷基芳基磺酸鹽、環烷基硫酸鹽、環垸基磺酸鹽、烷基環烷基硫酸o9.根據權利要求書3的制備方法，其中所述的抗生素鹽選自氨基糖苷類抗生素、四環素類抗生素、林可酰胺類抗生素、喹諾酮類抗生素、硝基咪唑類抗生素、磺胺類抗生素、甲基呋喃類抗生素、硝基呋喃類抗生素或上述抗生素的組合物。10.根據權利要求書9的制備方法，其中所述的抗生素選自慶大霉素、甲硝唑、西梭霉素、乙基西梭霉素、鏈霉素、妥布霉素、大觀霉素、萬古霉素、環丙沙星、莫西沙星、克林達霉素、林可霉素、四環素、梭金霉素、土霉素和羅列四環素或上述抗生素的組合物。11.根據權利要求書10的制備方法，其中所述的抗生素為慶大霉素硫酸鹽和甲硝唑的組合物。12.根據權利要求書1-11任一項的制備方法所制備的生物填塞引流物，其特征在于，所述生物填塞引流物是具有縱長軸線，帶有凹槽并適合置入瘺管中的圓錐臺型體，其中所述圓錐臺型體的縱軸長度為610cm，所述圓錐臺型體的頂面直徑為0.20.4cm，底面直徑為0.5~0.8cm，其中所述凹槽是位于圓錐臺型體柱面上的均勻分布的三個軸向開放凹槽，其中凹槽的開放夾角是30°，凹槽的橫截面為扇環形，其中所述圓錐臺型體的頂面處凹槽深度為0.05-0.1cm，底面處凹槽深度為0.1-0.2cm。13.根據權利要求書12的生物填塞引流物在制備用于治療肛瘺的藥物以及器械中的應用。14.根據權利要求書13的應用，其特征在于，所述治療是通過手術、探針牽引和/或內鏡的方法，將所述生物填塞引流物置入肛瘺瘺管中，頂面朝向外口，底面縫合固定于內口，外口更換敷料直至肛瘺愈合。全文摘要本發明涉及一種用于治療肛瘺的生物填塞引流物的制備方法及其應用。該生物填塞引流物是應用人或動物的皮膚組織為原料，通過固定、脫細胞、引入抗生素涂層等步驟制備而成，通過肛瘺探針、手術和/或內鏡方式置入肛瘺瘺道中，可以有效地促進肛瘺的愈合，具有愈合率高、復發率低、感染率低等優點。文檔編號A61L27/36GK101322856SQ20071011115公開日2008年12月17日申請日期2007年6月15日優先權日2007年6月15日發明者王振軍,清賈,博趙申請人:王振軍