專利名稱：多烯紫杉醇脂質體新劑型及其制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，涉及靶向給藥制劑多烯紫杉醇脂質體新劑型及其制備方法，更具體是指一種半合成紫杉烷類抗癌藥—多烯紫杉醇與適當輔料制成的普通及長循環脂質體，多烯紫杉醇通過制備成普通及長循環脂質體而達到腫瘤靶向的作用。
背景技術：
脂質體是靶向給藥系統的一種新劑型，這種系統是目前藥劑學最新、最有前途的給藥系統。脂質體作為這個系統的一員一直是藥劑學研究的熱點，它可以將藥物選擇性地運送到靶點部位，發揮治療作用，同時又不影響正常細胞、組織或器官的功能，從而達到提高療效、減少毒副作用的目的。
普通脂質體進入體內后很快被體內網狀內皮系統吞噬，而主要靶向在肝、脾、骨髓等網狀內皮系統器官中，對其他部位的靶向性較差，而且其在體內易受蛋白、酶等的作用而發生滲漏，影響療效并使毒性增大。為了解決這個問題，近年來抗癌藥長循環脂質體制劑的開發成為國際、國內研究的熱點，因為該制劑具有高效、長效、靶向、低毒的特點，對提高抗癌藥的療效、減輕毒性具有重要的意義，極大地提高了患者的生活質量。長循環脂質體相對普通脂質體來說，用一定的材料對其表面進行了修飾，增加了脂質體的親水性和空間位阻，可以避免被體內網狀內皮系統吞噬，并且在體內不易滲漏，具有更長的體內循環時間，更高的血藥濃度，使藥物有效的富集在腫瘤部位，因此可以更好的發揮療效，減輕毒性。
多烯紫杉醇(進口品的商品名為泰索帝)是由歐洲漿果紫杉的針葉中提取的無活性化合物，該產品由法國安萬特公司開發的一個半合成紫杉醇衍生物，是微管解聚抑制劑，其作用于微管/微管蛋白系統，通過促進微管雙聚體裝配成微管，且通過防止去多聚化過程而使微管穩定，阻滯細胞于G2和M期，從而抑制癌細胞的有絲分裂和增殖。多烯紫杉醇對晚期乳腺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、頭頸部腫瘤等有效。
多烯紫杉醇難溶于水，即使配制成注射液，在臨床應用中的毒副作用也較大，容易引起較多的并發癥，如過敏反應、骨髓抑制、神經毒性、心血管毒性、脫發等等，同時藥物的體內生物利用度較低，且需長期使用。目前對其結構改造以減少不良反應的嘗試尚無大的進展。
目前多烯紫杉醇主要是以聚氧乙烯氫化蓖麻油和乙醇等配制而成注射液，注射后對人體有毒副作用，特別是在使用多烯紫杉醇注射液前，必須先服用抗過敏藥物或注射抗過敏藥物來幫助緩解由于多烯紫杉醇注射液的使用而產生的嚴重過敏等毒副作用，常常給病人帶來痛苦，直接影響了該藥的使用。
專利CN 1660073A公開了一種多烯紫杉醇納米粒及其制備方法。用生物可降解性材料制備的納米粒靶向性雖然較普通多烯紫杉醇注射液好，但并不是長效靶向制劑。
專利CN 1709236A公開了一種含有多西他賽的脂肪乳劑及其制備方法。該方法制備的脂肪乳劑載藥量較小，最大1.0mg/ml，并且在體內不具有長循環的特性，影響療效的發揮。
以上兩個專利在充分發揮多烯紫杉醇的藥效、降低毒性方面還存在一定的不足。
發明內容
本發明的目的在于提供多烯紫杉醇的普通及長循環脂質體新劑型及制備方法，包括注射劑和冷凍干燥制劑。本發明的特點是將多烯紫杉醇制備成脂質體，同時可以用PEG修飾的磷脂或其他脂質材料來修飾脂質體，本發明中的多烯紫杉醇脂質體是用磷脂，膽固醇并在脂質體中加入長循環脂質材料將多烯紫杉醇載入脂質體，分散相的平均粒徑≤500nm。本發明制備脂質體所用的磷脂可以是大豆磷脂，蛋黃卵磷脂，氫化大豆磷脂，合成磷脂或其任何組合形式。長循環材料可以用PEG修飾的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)，聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰膽堿、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、神經節苷脂、聚丙烯酰胺、殼聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇或其他材料。脂質材料與藥物的重量比為1∶1-100∶1，長循環輔料與普通磷脂的摩爾比為1∶10-1∶200，制劑中多烯紫杉醇的最終濃度為0.1-20mg/ml。膜材中可加入一定量的電荷調節劑或表面活性劑以提高脂質體的穩定性如油酸、十八碳酸、葡萄糖醛酸、磷酸二鯨蠟酯、泊洛沙姆或汴澤。本發明還可以選擇性地含有維生素E、維生素C、反丁烯二酸、蘋果酸、沒食子酸丙酯、亞硫酸氫鈉和偏亞硫酸氫鈉、L-半胱氨酸、L-異亮氨酸或pH緩沖劑磷酸鹽、EDTA中的一種或幾種。
本發明制備的多烯紫杉醇脂質體包封率大于80％。制備方法為用薄膜分散法，有機溶劑注入法制備脂質體，其后可進行超聲，擠出或高壓均質。制備的多烯紫杉醇長循環脂質體可直接以液體形式保存或進行冷凍干燥后制成多烯紫杉醇長循環脂質體凍干粉針。凍干保護劑可為蔗糖，海藻糖，甘露醇，氯化鈉，葡萄糖，乳糖，山梨醇，右旋糖苷，甘油，甘氨酸、賴氨酸或其任何組合形式，凍干保護劑與磷脂的比例是10-20∶0.5-6.0。
所得的多烯紫杉醇脂質體可直接以液體形式保存或加入凍干保護劑進行冷凍干燥后制成多烯紫杉醇脂質體凍干粉針劑。
本發明制備多烯紫杉醇普通及長循環脂質體，其分散介質可以是水、磷酸鹽緩沖液、TriS緩沖液、碳酸鹽緩沖液、5％葡萄糖水溶液，0.9％Nacl等。
本發明的優點是普通脂質體可以避免普通注射液的一些毒副作用，并對腫瘤具有一定的靶向性；長循環脂質體可顯著提高脂質體在體內的循環時間，使藥物更長期有效地靶向于腫瘤部位，可以更好地發揮藥效，降低毒性；本發明采用薄膜分散法或有機溶劑注入法制備脂質體后采用超聲，高壓均質或擠出的方法可使制備的脂質體粒徑較小且分布較均勻。
圖1為實施例15中大鼠血漿藥時曲線
具體實施例方式本發明的具體實施方式
，由以下的實施實例說明，但本發明的保護范圍不局限于此。
實施例1將100mg多烯紫杉醇，1500mg大豆磷脂，150mg膽固醇，100mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)、6.8mg維生素E超聲溶解于10ml無水乙醇中，得溶液A。
將A于50℃水浴中旋轉蒸發成膜，得膜B。
將磷酸鹽緩沖液(pH7.4)5ml與膜B充分混合水化30分鐘，超聲震蕩5分鐘，過0.22μm微孔濾膜，充氮，灌封即得。
實施例2將100mg多烯紫杉醇，1200mg大豆磷脂，300mg氫化飽和磷脂、100mg膽固醇，50mg神經節苷脂(GM)、6.5mg維生素E超聲溶解于50ml無水乙醇中，得溶液A。
將A于50℃水浴中旋轉蒸發成膜，得膜B。
將磷酸鹽緩沖液(pH7.4)50ml與膜B充分混合水化30分鐘，高壓均質機循環均質5～6次，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，充氮，灌封即得。
實施例3將100mg多烯紫杉醇，1000mg大豆磷脂，250mg膽固醇，100mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)、6.5mg維生素E、油酸100mg超聲溶解于50ml無水乙醇中，得溶液A。
將A于60℃水浴中旋轉蒸發成膜，得膜B。
將注射用水50ml與膜B充分混合水化30分鐘，高壓均質機循環均質5～6次，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，充氮，灌封即得。
實施例4將100mg多烯紫杉醇，1000mg大豆磷脂，300mg氫化飽和磷脂、100mg膽固醇，100mg聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰膽堿(PEG-DPPC)、6.5mg維生素E、油酸50mg超聲溶解于50ml無水乙醇中，得溶液A。
將A于40℃水浴中旋轉蒸發成膜，得膜B。
將注射用水50ml與膜B充分混合水化30分鐘，高壓均質機循環均質5～6次，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，充氮，灌封即得。
實施例5將200mg多烯紫杉醇，1500mg大豆磷脂，500mg氫化飽和磷脂、150mg膽固醇，100mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)、7.2mg維生素E、油酸50mg超聲溶解于50ml無水乙醇中，得溶液A。
將A于50℃水浴中旋轉蒸發成膜，得膜B。
將9％蔗糖水溶液50ml與膜B充分混合水化30分鐘，高壓均質機循環均質5～6次，然后121℃滅菌，分裝，冷凍干燥，充氮，灌封即得。
實施例6
將250mg多烯紫杉醇，1500mg大豆磷脂，500mg氫化飽和磷脂、150mg膽固醇，150mg聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DPPE)、7.2mg維生素E、油酸50mg超聲溶解于10ml無水乙醇中，得溶液A。
將A注入40℃水浴加熱的磷酸鹽緩沖液50ml中，真空旋轉蒸發去除乙醇，定容至50ml得溶液B。
將溶液B經高壓均質機循環均質5～6次，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，充氮，灌封即得。
實施例7將250mg多烯紫杉醇，1500mg大豆磷脂，500mg氫化飽和磷脂、150mg膽固醇，150mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)、7.2mg維生素E、油酸50mg超聲溶解于10ml無水乙醇中，得溶液A。
將A注入50℃水浴加熱的磷酸鹽緩沖液50ml中，真空旋轉蒸發去除乙醇，定容至50ml得溶液B。
將溶液B經高壓均質機循環均質5～6次，加入凍干保護劑蔗糖4g、甘露醇1g溶解，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，冷凍干燥即得。
實施例8將200mg多烯紫杉醇，800mg大豆磷脂，400mg氫化飽和磷脂、100mg膽固醇，100mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)、7.2mg維生素E、泊洛沙姆50mg超聲溶解于10ml無水乙醇中，得溶液A。
將A注入60℃水浴加熱的磷酸鹽緩沖液50ml中，真空旋轉蒸發去除乙醇，定容至50ml得溶液B。
將溶液B經高壓均質機循環均質5～6次，加入凍干保護劑海藻糖3g、葡萄糖1.5g、L-半胱氨酸溶解，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，冷凍干燥即得。
實施例9將200mg多烯紫杉醇，800mg大豆磷脂，400mg氫化飽和磷脂、100mg膽固醇，100mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)、5mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、7.2mg維生素E、泊洛沙姆50mg超聲溶解于10ml無水乙醇中，得溶液A。
將A注入50℃水浴加熱的磷酸鹽緩沖液50ml中，真空旋轉蒸發去除乙醇，定容至50ml得溶液B。
將溶液B經高壓均質機循環均質5～6次，加入凍干保護劑蔗糖4g溶解，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，冷凍干燥即得。
實施例10將100mg多烯紫杉醇，3000mg大豆磷脂，700mg膽固醇，6.8mg維生素E超聲溶解于10ml無水乙醇中，得溶液A。
將A于40℃水浴中旋轉蒸發成膜，得膜B。
將磷酸鹽緩沖液(pH7.4)5ml與膜B充分混合水化30分鐘，超聲震蕩5分鐘，過0.22μm微孔濾膜，充氮，灌封即得。
實施例11
將250mg多烯紫杉醇，1500mg大豆磷脂，500mg氫化飽和磷脂、150mg膽固醇，7.2mg維生素E、油酸50mg超聲溶解于10ml無水乙醇中，得溶液A。
將A于50℃水浴中旋轉蒸發成膜，得膜B。
將9％蔗糖水溶液50ml與膜B充分混合水化30分鐘，高壓均質機循環均質5～10次，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，冷凍干燥，充氮，灌封即得。
實施例12將250mg多烯紫杉醇，1500mg大豆磷脂，500mg氫化飽和磷脂、150mg膽固醇，7.2mg維生素E，油酸50mg，泊洛沙姆50mg超聲溶解于10ml無水乙醇中，得溶液A。
將A注入40℃水浴加熱的磷酸鹽緩沖液50ml中，真空旋轉蒸發去除乙醇，定容至50ml得溶液B。
將溶液B經高壓均質機循環均質5～6次，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，充氮，灌封即得。
實施例13將100mg多烯紫杉醇，1200mg大豆磷脂，300mgDPPC、100mg膽固醇，6.5mg維生素E超聲溶解于50ml無水乙醇中，得溶液A。
將A于60℃水浴中旋轉蒸發成膜，得膜B。
將磷酸鹽緩沖液(pH7.4)50ml與膜B充分混合水化30分鐘，高壓均質機循環均質5～6次，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，充氮，灌封即得。
實施例14將100mg多烯紫杉醇，1200mg大豆磷脂，300mgDPPA，100mg膽固醇，6.5mg維生素E超聲溶解于10ml無水乙醇中，得溶液A。
將A注入60℃水浴加熱的磷酸鹽緩沖液50ml中，真空旋轉蒸發去除乙醇，定容至50ml得溶液B。
將溶液B經高壓均質機循環均質5～6次，然后121℃滅菌，分裝，充氮，灌封即得。
實施例15大鼠藥動學研究取15只健康Wistar大鼠，隨機分成3組，每組5只。實驗前禁食一夜，分別股靜脈給予等量多烯紫杉醇的普通注射液，普通脂質體及長循環脂質體，劑量按人的臨床使用量按系數折算為大鼠的劑量。在給藥后0.25、0.5、1、2、4、8、12、14、16、24h從大鼠眼眶取血0.5mL于1.5mL肝素抗凝的干燥離心管中，5000r/min離心5min，取血漿處理通過HPLC法測定血漿中的藥物濃度，繪制藥時曲線。
實施例16小鼠組織分布研究取小鼠18只，隨機分為兩組，分別尾靜脈給予折算劑量的多烯紫杉醇普通脂質體和長循環脂質體，給藥后于3h，8h，12h處死取肝和脾組織，用生理鹽水洗凈，濾紙吸干。精密稱取后經組織勻漿機搗碎后用甲醇處理，用HPLC法測定組織中的藥物濃度。結果表明長循環脂質體被小鼠的肝脾組織攝取較少。
實施例17抗腫瘤作用抗腫瘤作用試驗以colon 26 carcinoma荷瘤BALB/C小鼠為實驗動物，接腫瘤細胞后當腫瘤直徑達到5mm時開始治療，以5mg/kg和15mg/kg靜注，記錄腫瘤生長和生存率。在15mg/kg組，多烯紫杉醇長循環脂質體的抑瘤率較普通脂質體和普通注射液分別提高0.4倍和1.3倍。在15mg/kg組，多烯紫杉醇長循環脂質體的抑瘤率較普通脂質體和普通注射液分別提高1.3倍和2.5倍，生存率較普通脂質體和普通注射液分別提高了2倍和4倍。
權利要求
1.多烯紫杉醇脂質體新劑型，其特征在于以脂質和/或膽固醇為膜材，可用長循環輔料進行表面修飾，制備成多烯紫杉醇的普通或長循環脂質體，脂質與藥物的摩爾比為1∶1-100∶1；長循環輔料與普通磷脂的摩爾比為1∶10-1∶200；制劑中多烯紫杉醇的最終濃度為0.1-20mg/ml，分散相的平均粒徑≤500nm，其包封率大于80％。
2.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體新劑型，其特征在于脂質材料優選磷脂和膽固醇；磷脂可采用天然磷脂、合成磷脂或其混合物；膜材中可加入一定比例的電荷調節劑或表面活性劑，如油酸、十八碳酸、葡萄糖醛酸、磷酸二鯨蠟酯、泊洛沙姆或汴澤。
3.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體新劑型，其特征在于長循環輔料可采用聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰膽堿、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、神經節苷脂、聚丙烯酰胺、殼聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇。
4.根據權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質體新劑型，其特征在于可以選擇性地含有維生素E、維生素C、反丁烯二酸、蘋果酸、沒食子酸丙酯、亞硫酸氫鈉和偏亞硫酸氫鈉、L-半胱氨酸、L-異亮氨酸或pH緩沖劑磷酸鹽、EDTA中的一種或幾種。
5.多烯紫杉醇脂質體新劑型的制備方法，其特征在于將多烯紫杉醇，磷脂，膽固醇，長循環輔料、維生素E超聲溶解于無水乙醇中，得溶液A，其中脂質與藥物的摩爾比為1∶1-100∶1；長循環輔料與普通磷脂的摩爾比為1∶10-1∶200；制劑中多烯紫杉醇的最終濃度為0.1-20mg/ml，將A于50℃水浴中旋轉蒸發成膜，得膜B，將pH7.4磷酸鹽緩沖液與膜B充分混合水化30分鐘，超聲震蕩5分鐘，過0.22μm微孔濾膜，充氮，灌封即得。
6.多烯紫杉醇脂質體新劑型的制備方法，其特征在于將多烯紫杉醇，大豆磷脂，氫化飽和磷脂、膽固醇、長循環輔料、維生素E超聲溶解于無水乙醇中，得溶液A，其中脂質與藥物的摩爾比為1∶1-100∶1；長循環輔料與普通磷脂的摩爾比為1∶10-1∶200；制劑中多烯紫杉醇的最終濃度為0.1-20mg/ml，將A注入60℃水浴加熱的磷酸鹽緩沖液中，真空旋轉蒸發去除乙醇，定容至50ml得溶液B，將溶液B經高壓均質機循環均質5～6次，加入凍干保護劑海藻糖、葡萄糖、L-半胱氨酸溶解，然后過0.22μm微孔濾膜，分裝，冷凍干燥即得。
7.多烯紫杉醇脂質體新劑型的制備方法，其特征在于所得的多烯紫杉醇脂質體可直接以液體形式保存或加入凍干保護劑進行冷凍干燥后制成多烯紫杉醇脂質體凍干粉針劑。
8.根據權利要求8所述的多烯紫杉醇普通及長循環脂質體，其特征在于凍干粉針的凍干保護劑可為蔗糖，海藻糖，甘露醇，氯化鈉，葡萄糖，乳糖，山梨醇，右旋糖苷，甘油或甘氨酸中的一種或幾種，凍干保護劑與磷脂的比例是10-20∶0.5-6.0。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，公開了多烯紫杉醇脂質體新劑型及其制備方法。本發明采用薄膜分散法，有機溶劑注入法制備多烯紫杉醇普通脂質體或用PEG修飾的磷脂或其他脂質材料來修飾脂質體制成長循環脂質體，其后可進行超聲，擠出或高壓均質，制成多烯紫杉醇注射劑和冷凍干燥制劑。本發明所提供的多烯紫杉醇普通脂質體與普通注射液相比可降低藥物的毒副作用，長循環脂質體顯著提高了脂質體在體內的循環時間，使藥物更長期有效地靶向于腫瘤部位，可以更好地發揮藥效，降低毒性。
文檔編號A61K9/19GK101057831SQ20071010153
公開日2007年10月24日 申請日期2007年4月26日 優先權日2006年5月15日
發明者王東凱, 李為理, 張翠霞, 張文濤, 林立峰, 周雪梅 申請人:沈陽藥科大學