專利名稱：構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)療評價、檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體說它是一種能制造“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”是人類和動物類在正常情況下血清中并不存在的蛋白質(zhì)組，是人類和動物類在疾病發(fā)展過程中才產(chǎn)生的一組蛋白質(zhì)。這種特殊蛋白質(zhì)可加重病情的發(fā)展、導(dǎo)致惡化、引起人和動物的死亡，該蛋白質(zhì)組已于2004年，由申請者在瀕臨死亡患者的血清中被捕捉到，2005年通過山西省組織的專家鑒定(科學(xué)技術(shù)成果鑒定證書 晉科鑒字 第193號；登記號051193；批準(zhǔn)日期2005年11月3日)。
由于對疾病治療無效，導(dǎo)致人的死亡，這是疾病發(fā)展的自然現(xiàn)象。目前人類對疾病引發(fā)死亡的認識，僅限于對它臨床表觀癥狀的觀察，還從未有人能認識到這其中的演變規(guī)律。由于不能做到早期預(yù)警常常因為晚期而無法救治，就限制了疾病治療學(xué)的發(fā)展，這就是目前臨床醫(yī)學(xué)的現(xiàn)狀。
2005年申請者首次報道了導(dǎo)致疾病發(fā)展、惡化和死亡發(fā)生的蛋白質(zhì)組指紋，即“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋------LGT其血清稱為
①中文標(biāo)準(zhǔn)名危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)②英文標(biāo)準(zhǔn)名稱Lost goodwill target(簡寫LGT)English standard nameLost goodwill target(AbbreviationLGT)③學(xué)名危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)Systematic nameLost goodwill target Proteomics(AbbreviationLGT)④其他名稱死亡蛋白、預(yù)警蛋白Other namesDeath protein、Warning protein)(其指紋稱為●“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”(指紋)●“Lost goodwill target”(fingerprint)●“LGT”(fingerprint)●“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)組”(指紋)●“Lost goodwill target Proteomics”(fingerprint)●“死亡蛋白”(指紋)●“Death protein”(fingerprint)●“預(yù)警蛋白”(指紋)●“Warning protein”(fingerprint)在報導(dǎo)中指出人類疾病惡化導(dǎo)致死亡是由蛋白質(zhì)組變異所造成；并且發(fā)現(xiàn)該蛋白質(zhì)組指紋能在疾病惡化與生命機體瀕臨死亡前數(shù)月出現(xiàn)，可以為其起到預(yù)警作用(早期發(fā)現(xiàn)——預(yù)警作用)。這種蛋白質(zhì)是一組在疾病發(fā)展到一定程度(惡化之前)才出現(xiàn)的蛋白質(zhì)組。申請人將此蛋白質(zhì)組命名為“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”組(LGT)。隨后將此項技術(shù)引入臨床工作，用于早期發(fā)現(xiàn)疾病的惡化，從而進行藥物阻斷治療，并獲得了成功。這說明該蛋白質(zhì)組作為危重病人的預(yù)警作用是可行的，可以提示醫(yī)師及時早期發(fā)現(xiàn)病情惡化的跡象，及時給予治療和實施干預(yù)措施，明顯提高所救治病人的生存期和生存質(zhì)量。因此很有必要，進一步了解該蛋白質(zhì)組的結(jié)構(gòu)、功能、以及來源。
由于工作剛剛開始，急需構(gòu)建產(chǎn)生該蛋白質(zhì)組的模型，由此獲得供研究用的含有“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”的血清，以利于今后的進一步的研究；由于用人體構(gòu)建該蛋白質(zhì)組模型是違法的，自然產(chǎn)生該蛋白質(zhì)組血清的病人不能稱為模型；除此之外，人類患病、治療、加重、至死亡的過程極為復(fù)雜，且都有并發(fā)癥，很顯然這些血清蛋白質(zhì)組的構(gòu)成是多樣化的，不利于專項研究；所以應(yīng)該根據(jù)比較醫(yī)學(xué)原理構(gòu)建該蛋白質(zhì)組的動物模型。
人類疾病動物模型為疾病研究提供研究平臺，為探討和明確疾病的發(fā)生與治療規(guī)律提供實驗條件，成為人類與疾病斗爭的有力手段，蛋白質(zhì)組動物模型的構(gòu)建就是其中的一種。目前蛋白質(zhì)組動物建模方法，都集中在已知疾病的方面，獲取已知的蛋白質(zhì)及已知的蛋白質(zhì)組，設(shè)計思路是給予模型動物某些外加因素，使模型動物體內(nèi)增加某種特定蛋白的數(shù)量或比例，達到疾病狀態(tài)，以供研究。如早老型癡呆鼠動物模型，就是為產(chǎn)生達到早老型癡呆蛋白質(zhì)指標(biāo)而進行構(gòu)建的，其專利公開號CN 1558383A。但是對于建立被新發(fā)現(xiàn)、只在人體和動物體內(nèi)，于病情惡化、瀕臨死亡之前出現(xiàn)“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”的相關(guān)動物模型，顯然不是僅用增加原有蛋白質(zhì)的數(shù)量與相對比例就可以解決的簡單問題；目前尚未發(fā)現(xiàn)利用現(xiàn)方法，構(gòu)建含有在病人病情危重、瀕臨死亡的過程中才出現(xiàn)的新型蛋白質(zhì)模型動物的先例。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出可以建立制造“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法，要解決的技術(shù)問題是，提出構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型方法的技術(shù)方案。
本發(fā)明的具體內(nèi)容是，構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法包括選擇能夠構(gòu)建人類疾病動物模型的動物，施用致病因素于該建模動物，使之致病；隨后，再施以使其疾病迅速惡化，達到瀕臨死亡階段的因素；直至建模動物產(chǎn)生“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”；“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋文字描述是，被檢物質(zhì)經(jīng)SELDI(Surface-enhanced laser desorption/ionization)技術(shù)及其他質(zhì)譜技術(shù)檢測，該檢測是經(jīng)過SELDI技術(shù)檢測“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”模型鼠血清得到的；按被檢物質(zhì)的質(zhì)荷比(M/Z)大小，在一平面圖上，順次記錄其含量的大小(即豐度)進行結(jié)果描述所獲得的質(zhì)譜圖(即指紋圖)中，該蛋白質(zhì)的指紋圖是在10800+H至13900+H之間出現(xiàn)三峰或以上的質(zhì)譜峰簇(cluster)，其中一個或多個質(zhì)譜峰豐度≥20％，其余均在5％以上；危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)組的質(zhì)譜峰簇距上游質(zhì)譜峰簇和下游質(zhì)譜峰簇的質(zhì)荷比(M/Z)均大于1000個質(zhì)量單位，它的疑似特征是僅在10800+H至13900+H之間出現(xiàn)單峰且豐度值≥5％的指紋圖譜(LGT)。
“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”的動物血清，能用質(zhì)譜技術(shù)(SELDI技術(shù))捕捉到與人類在病情危重和瀕死狀態(tài)下才出現(xiàn)的“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)指紋”基本相同的指紋圖譜，經(jīng)前述工作方法并達到本結(jié)果的視為建模成功。其中，SELDI技術(shù)即表面增強激光解析離子飛行時間(time of flight)質(zhì)譜技術(shù){SELDI技術(shù)}這樣，建模動物的選擇為動物模型提供了模型動物的生命機體；致病因素的介入，使模型動物致病，是導(dǎo)致疾病狀態(tài)惡化、瀕臨死亡的前提；使患有疾病的模型動物病情迅速惡化，達到瀕臨死亡階段的因素，則是“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”生成的條件；其中，實行人為干預(yù)、使之病情迅速惡化是出于建立模型的需要，便于研究觀察、便于控制、提高了效率。上述方法實現(xiàn)了本發(fā)明的目的，解決了本發(fā)明提出的技術(shù)問題。
本發(fā)明所述使患有疾病的模型動物病情迅速惡化，達到瀕臨死亡階段的因素是，對已經(jīng)患有疾病的建模動物施用相應(yīng)對癥藥物，其建模用藥模式為每天用其標(biāo)準(zhǔn)量的1倍-----20倍，用藥時間是2----21天，其用藥總量是每天標(biāo)準(zhǔn)量的2倍------50倍。
標(biāo)準(zhǔn)劑量的根據(jù)參 苗明三.《實驗動物和動物實驗技術(shù)》.中國中醫(yī)藥出版社.1997.143-145.。
此種用藥模式即可對患有疾病的模型動物，起到促使病情惡化、達到瀕臨死亡狀態(tài)的作用。由于對藥物的作用均有相當(dāng)?shù)难芯颗c實踐基礎(chǔ)，對其使疾病惡化的 作用進程比較清楚，相對于其他因素的作用用藥的影響效果更為簡單直接，易于控制與量化，有利于對實驗結(jié)果的分析與總結(jié)。
制作本發(fā)明以藥物為施加因素方法所建立動物模型“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”標(biāo)本的方法是，在停藥的第2天---第30天內(nèi)取血，制備標(biāo)本。由于“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”本身并不是生命體內(nèi)原生存在的，目前認為其應(yīng)該是只在疾病惡化、生命瀕臨死亡階段，以某種方式生成、并以一過性狀態(tài)存在的一種特殊蛋白質(zhì)，因此過早取血可能因其尚未生成而無法得到，過遲取血，則會由于生命的終結(jié)，同樣無法利用模型動物體內(nèi)的這種特殊蛋白質(zhì)，因此適宜時機的選取是應(yīng)該十分注意的。
本發(fā)明所述以藥物為施加因素構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法是用腫瘤鼠，在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，每天按標(biāo)準(zhǔn)用藥量乘以2的劑量注入接種的腫瘤鼠的腹腔內(nèi)，用藥時間為4天。標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)是指建模鼠在實驗動物室(清潔級)飼養(yǎng)觀察90天，。建模鼠在實驗動物室溫度22～24℃，相對濕度40％～45％，日光燈12h人工照明。
本發(fā)明所述構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法是用特定的腫瘤鼠，在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，每天按標(biāo)準(zhǔn)用藥量乘以2的劑量注入接種的腫瘤鼠的腹腔內(nèi)，用藥時間為8天。
本發(fā)明上述兩種方法所建模型制作標(biāo)本的取血時間，皆為施藥停用后的第4天，然后制作標(biāo)本。
本發(fā)明所述構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法是用特定的腫瘤鼠，在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，每天按標(biāo)準(zhǔn)用藥量乘以4的劑量注入接種的腫瘤鼠的腹腔內(nèi)，用藥時間為2---4天。其制作標(biāo)本的取血時間，是于停藥的第2天開始取血，制備血清標(biāo)本。
本發(fā)明所述構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的構(gòu)建方法是用特定的腫瘤鼠，在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，每天按標(biāo)準(zhǔn)用藥量1倍-----4倍的劑量注入接種的腫瘤鼠的腹腔內(nèi)，用藥時間為8天。其制作標(biāo)本的取血時間，是于停藥的第2-----30內(nèi)天開始取血，制備血清標(biāo)本。
這里，本發(fā)明的主要方法是用藥物構(gòu)建瀕臨死亡的動物模型，使之產(chǎn)生原來沒有的未知的蛋白質(zhì)及蛋白質(zhì)組。這是一種全新的建模思路，其建模方法是目前所有蛋白質(zhì)組動物模型的構(gòu)建中所沒有的，是具有歷史性意義的突破.
這種方法建模的成功率很高，真正能做到建立有預(yù)警作用的“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”的動物模型，形成一個比較理想的“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)。在其模型的血清中能用質(zhì)譜技術(shù)(SELDI技術(shù) )捕捉到與人類在病情危重和瀕死狀態(tài)下才出現(xiàn)的“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)指紋”基本相同的指紋圖譜。
注SELDI表面增強激光解析離子飛行時間(time of flight)質(zhì)譜技術(shù){SELDI(Surface-enhanced laser desorption/ionization)技術(shù)}由于疾病惡化導(dǎo)致死亡的誘發(fā)因素很多。動物模型可以使之單一化，即純化標(biāo)本，更有利于對該蛋白質(zhì)組的研究。為人類最終揭開死亡之迷，控制疾病的惡化提供卓有成效的研究平臺。
圖1是鼠的“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋；圖2是鼠的“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋(多峰變異)；
圖3是鼠的“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋(低豐度變異)；圖4是鼠的“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋(疑似)；圖5是鼠的“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋圖陰性。
圖中箭頭所指為“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”的指紋。(是經(jīng)過SELDI技術(shù)檢測“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”模型鼠血清得到的)具體實施下面結(jié)合附圖與具體實施例，對本發(fā)明作進一步說明。
為簡化說明，僅以不同劑量化療藥物-----PDD對S-180鼠的“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”的構(gòu)建方法為樣例。
實例不同劑量PDD構(gòu)建一種能制造“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”S-180鼠的動物模型。
1.建模鼠選擇4-5周齡昆明種(KM)小鼠，共50只，體重為18-20g，均為雌性，購自于山西省中醫(yī)研究院動物室。
2.瘤源從中國藥品生物制品鑒定所引進S180瘤株3.接種①腫瘤細胞懸液的制備按常規(guī)制備方法無菌取出S-180鼠的腫瘤組織，制成勻漿，放入玻璃勻漿器中，用無菌生理鹽水研磨成懸液。容器置于冰上，計數(shù)單位體積內(nèi)的活細胞密度為2.37*107/ml，胎盤藍染色計數(shù)活細胞數(shù)＞98.9％。
②接種取接種鼠，右腋下洛合碘消毒，用注射器汲取制備好的腫瘤懸液，將0.2ml(含2.37*107/ml活細胞)腫瘤細胞懸液于昆明小鼠右腋下的皮下接種。
③飼養(yǎng)條件小鼠在實驗動物室(清潔級)飼養(yǎng)觀察90天，每籠5只小鼠。小鼠在實驗動物室溫度22～24℃，相對濕度40％～45％，目光燈12h人工照明。
4.實驗①接種腫瘤鼠分組按PDD每天用量分成5組，每組10只。
②實驗操作 取血將小鼠用2％戊巴比妥鈉麻醉后進行摘眼球取血后，血液立即放入4℃冰箱靜置20min。4℃3000r/min離心5min分離血清備用。
實驗儀器ProteinChip BiologySystem(PBS II 2c)質(zhì)譜儀、弱陽離子交換型(Weak Cation Exchangcr，WCX2)蛋白質(zhì)芯片(Ciphergen Biosystems公司產(chǎn)品)。
實驗試劑乙腈、三氟乙酸、尿素、SPA、CHAPS、Tris2HCl等購自Sigma公司。
實驗操作按Ciphergen公司制定標(biāo)準(zhǔn)進行操作，即用表面增強激光解析離子飛行時間(time of flight)質(zhì)譜技術(shù){SELDI(Surface-enhanced laser desorption/ionization)技術(shù)}進行檢測。
結(jié)果鑒定被檢物質(zhì)經(jīng)SELDI技術(shù)及其他質(zhì)譜技術(shù)檢測，按被檢物質(zhì)的質(zhì)荷比(M/Z)大小，在一平面圖上，順次記錄其含量的大小(豐度)進行結(jié)果描述所獲得的質(zhì)譜圖(指紋圖)中，在其特征為在10800+H至13900+H之間出現(xiàn)三峰或以上的質(zhì)譜峰簇(cluster)，其中一個或多個質(zhì)譜峰豐度≥20％，其余均在5％以上；危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)組的質(zhì)譜峰簇距上游質(zhì)譜峰簇和下游質(zhì)譜峰簇的質(zhì)荷比(M/Z)均大于1000個質(zhì)量單位，它的疑似特征是僅在10800+H至13900+H之間出現(xiàn)單峰且豐度值≥5％的指紋圖譜，具有這些特征的圖譜均稱之為“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”組指紋。
指紋圖如圖1-圖5，圖中箭頭所指為“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋依次為“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”模型鼠標(biāo)準(zhǔn)“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)指紋”，“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”模型鼠標(biāo)準(zhǔn)危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)指紋(多峰變異)，“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”模型鼠標(biāo)準(zhǔn)“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋(低豐度變異)，“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”模型鼠標(biāo)準(zhǔn)“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋(疑似)，“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”模型鼠“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋陰性圖譜。
5.結(jié)果評價實驗組1取S-180接種鼠10只，在上述標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，待接種腫瘤長至直徑約1CM后，開始用PDD 1.3mg/kg，腹腔注入，每天1次，共計8天，于停藥后4天開始取血，SELDI技術(shù)檢測，“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋出現(xiàn)率3/10(30％)疑似“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋出現(xiàn)率2/10(20％)共計50％。無自然死亡。本建模方法不好實驗組2取S-180接種鼠10只，在上述標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，待接種腫瘤長至直徑約1CM后，開始用PDD 2.6mg/kg，腹腔注入，每天1次，共計4天，于停藥后4天開始取血，SELDI技術(shù)檢測，“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋出現(xiàn)率5/9(56％)疑似“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋出現(xiàn)率1/10(10％)共計66％。自然死亡1只。本建模方法不理想實驗組3取S-180接種鼠10只，在上述標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，待接種腫瘤長至直徑約1CM后，開始用PDD 2.6mg/kg，腹腔注入，每天1次，共計8天，于停藥后4天開始取血，SELDI技術(shù)檢測，“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋出現(xiàn)率2/9(22.3％)疑似“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋出現(xiàn)率7/9(77.7％)共計100％。1例取血不當(dāng)失敗。本例雖然建模成功率達到100％，但疑似較多，不利于分析研究，不是理想的建模方法。
實驗組4取S-180接種鼠10只，在上述標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，待接種腫瘤長至直徑約1CM后，開始用PDD 5.2mg/kg，腹腔注入，每天1次，共計4天，于停藥后2天開始取血，SELDI技術(shù)檢測，“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋出現(xiàn)率10/10(100％)疑似“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋出現(xiàn)率0(0％)共計100％。無自然死亡。本利為最佳建模方法實驗組5取S-180接種鼠10只，在上述標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，待接種腫瘤長至直徑約1CM后，開始用PDD 10.4mg/kg，腹腔注入，每天1次，共計2天，停藥后第2天全部死亡。
權(quán)利要求
1.構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法包括對可構(gòu)建人類疾病動物模型的動物，施用致病因素，使之致病；隨后，再施以使其疾病迅速惡化，達到瀕臨死亡階段的因素，直至建模動物產(chǎn)生“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”；“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”指紋文字描述是，被檢物質(zhì)經(jīng)SELDI技術(shù)及其他質(zhì)譜技術(shù)檢測，該檢測是經(jīng)過SELDI技術(shù)檢測“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”模型鼠血清得到的；按被檢物質(zhì)的質(zhì)荷比(M/Z)大小，在一平面圖上，順次記錄其含量的大小(即豐度)進行結(jié)果描述所獲得的質(zhì)譜圖(即指紋圖)中，該蛋白質(zhì)的指紋圖是在10800+H至13900+H之間出現(xiàn)三峰或以上的質(zhì)譜峰簇(cluster)，其中一個或多個質(zhì)譜峰豐度≥20％，其余均在5％以上；危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)組的質(zhì)譜峰簇距上游質(zhì)譜峰簇和下游質(zhì)譜峰簇的質(zhì)荷比(M/Z)均大于1000個質(zhì)量單位，它的疑似特征是僅在10800+H至13900+H之間出現(xiàn)單峰且豐度值≥5％的指紋圖譜。
2.如權(quán)利要求1所述構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法，其特征在于所述使患有疾病的模型動物病情迅速惡化，達到瀕臨死亡階段的因素是，對已經(jīng)患疾病的建模動物施用相應(yīng)對癥藥物，其建模用藥模式為每天用其標(biāo)準(zhǔn)量的1倍-----20倍，用藥時間是2----21天，其用藥總量是每天標(biāo)準(zhǔn)量的2倍------50倍。
3.制作如權(quán)利要求2所述動物模型“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”標(biāo)本的方法，其特征在于在所述用藥停用的第2天---第30天內(nèi)取血，制備標(biāo)本。
4.如權(quán)利要求2所述構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法，其特征在于所述構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法是，用腫瘤鼠，在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，每天按標(biāo)準(zhǔn)用藥量乘以2的劑量注入該腫瘤鼠的腹腔內(nèi)，用藥時間為4天。
5.如權(quán)利要求2所述構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法，其特征在于用腫瘤鼠，在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，每天按標(biāo)準(zhǔn)用藥量乘以2的劑量注入該腫瘤鼠的腹腔內(nèi)，用藥時間為8天。
6.制作如權(quán)利要求4或5所述動物模型“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”標(biāo)本的方法，其特征在于在所述用藥停用的第4天開始取血，制備血清標(biāo)本。
7.如權(quán)利要求2所述構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法，其特征在于用腫瘤鼠，在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，每天按標(biāo)準(zhǔn)用藥量乘以4的劑量注入該腫瘤鼠的腹腔內(nèi)，用藥時間為2---4天。
8.制作如權(quán)利要求7所述動物模型“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”標(biāo)本的方法，其特征在于在所述用藥停用的第2天開始取血，制備血清標(biāo)本。
9.如權(quán)利要求2所述構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法，其特征在于用腫瘤鼠，在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下，每天按標(biāo)準(zhǔn)用藥量1倍-----4倍的劑量注入該腫瘤鼠的腹腔內(nèi)，用藥時間為8天。
全文摘要
構(gòu)建“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”動物模型的方法，屬于醫(yī)療評價、檢測技術(shù)領(lǐng)域，是對可構(gòu)建人類疾病動物模型的動物，施以致病因素，使之致??；再施用使其疾病迅速惡化，達到瀕臨死亡階段的因素；直至建模動物產(chǎn)生“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”；使該動物模型建立。其中，可按每天用其標(biāo)準(zhǔn)量的1倍－20倍、施用2－21天、總量是每天標(biāo)準(zhǔn)量2倍－50倍的模式用藥；并在停藥的第2天－第30天內(nèi)取血，制備標(biāo)本；可得單一致病因素產(chǎn)生的純化“危重病人預(yù)警蛋白質(zhì)”的血清標(biāo)本。用此模型可更精確比較研究，人類在疾病發(fā)展及惡化并導(dǎo)致死亡的過程中，蛋白質(zhì)組的結(jié)構(gòu)、功能、來源及其阻斷藥物；探索死亡發(fā)生的可能機制；開發(fā)早期及具有預(yù)警作用的檢測方法和試劑。
文檔編號A61B19/00GK101071128SQ20071008753
公開日2007年11月14日 申請日期2007年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月16日
發(fā)明者裴毅, 王蓉, 王清馨 申請人:裴毅