專利名稱：復方型雙重雙聯定位式胞內疫苗的制作方法
集方型雙重雙K定位式鵬內疫苗本發明涉及一類應用最先進的基因蛋白工程技術的"精確定向制導型藥物"的發明，屬于"仿生學"的方法發明。它是對于本發明人于2002年所提出的方法發明專利《雙扭雙重 定位式應內疫苗》的進一步的改進與擴展。本發明人最早于2002年向中國國家專利局提出 《雙聯雙重定位式胞內疫苗》專利申請，并獲得了 "專利申請受理通知書"，申請號為 02100099.9,于2003年在第19巻第32期中國發明專利公報上予以發布。雙聯雙重定位式胞內疫苗，不屬于常規型疫苗。因為常規型疫苗屬于細臃外疫苗，是一種作用人體細胞外 的，對抗原應激反應而產生的蛋白抗體。它只錄在細胞外發生作用，而《雙聯雙重定位式胞 內疫苗》則屬于細胞內疫苗。它可使蛋白抗體定向地進入到人體或動物體內的細胞內，來殺 死病毒或作用于細胞DNA上。它可稱為"雙聯雙重定向蛋白類藥物"。雙聯雙重定向蛋白類藥物，是特指應用具有細胞定向功能的蛋白或多肽，與抗體蛋白或限制性內切酶相結合，成 為"融合蛋白"，以使抗體蛋白，進入到人體或動物體內的細胞內，作用于細胞質，或是作用 于細胞核染色體DNA,來阻遏病毒DNA;或是應用限制性內切瞎，來破壞致癌基因或糾正 基因缺陷。為了不發生混淆，故可稱它為"定向蛋白類生物導彈"，簡稱"蛋白生物導彈"。 經計INl檢索，在2002年向中國國家專利局提出《雙聯雙重定位式胞內疫苗》專利申請時， 還未發現國內外發明這一定向類融合蛋白藥物。本方法發明專利和《雙聯雙重定位式胞內疫 苗》方法發明專利，都是首創以定向類融合蛋白的"定向蛋白"，來作為定向類藥物的"精確 定向制導裝i"的，因此應受到專利法的保護。這一發明涉及一類"融合蛋白"或"雜交蛋 白"，其中"定向蛋白"被稱為"制導裝量"，而與"定向蛋白"相融合的"抗體蛋白"或限制性內切酶，可稱為"殺傷裝置"或"^a裝i"。這種定向類融合蛋白，可由兩個區段或三個區段的蛋白質或是多肽短片構成，其中A區段是由可與某一類特定人體細胞，例如肝細 胞的表面受體，或是人類細胞的"廣譜受體"，例如血球凝集索(hemgg Iutinin),高度專 一互補的多肽或是質白質，來作為"制導裝置"，負責將具有"殺傷裝置"功能的B區段的 蛋白藥物，例如，將具有阻遏細胞質內的病毒遺傳物質,比如，可阻遏愛滋病毒的逆轉錄酶 的抗體蛋白，還有各種具有阻遏已整合到人體細胞DNA的病毒DNA的ffiit物蛋白質，以及 可,細胞染色體中的致痛基因的阻通物蛋白質，送入到人體細胞內。這種《雙聯雙重定位 式胞內疫苗》，可稱為"蛋白生物導彈"。本專利疫苗所設涉及的"抗體蛋白"，現在已成為很成熟的技術了，因此，是具有可行性的。在80靴初，抗體基因結構和功能的研究成果與重組DNA技術相結合，產生了基因 工程抗體技術。基因工程抗體即將抗體的基因按不同雷要進行加工、改造和重新裝配，然后 導入適當的受體細胞中進行表達的抗體分子。自從1984年第一個基因工程抗體人一鼠嵌合 抗體誕生以來，新型基因工程抗體不斷出現，如人源化抗體、單價小分子抗體(Fab、單鏈抗體、單域抗體、超變區多肽等)、多價小分子抗體(雙鏈抗體，三鏈抗體，微型抗體)、某些特殊類型抗體(雙特異抗體、抗原化抗體、細胞內抗體、催化抗體、免疫脂質體)及抗體 融合蛋白(免疫毒衆、免疫粘連素)等。用于構建基因工程抗體的抗體基因最初來源于雜交癬細胞，因此同樣必須經過動物免疫，細勝融合及克隆镩選這樣一個長期、復雜的工藝流程; 仍然不能制備針對稀有抗原的抗體和人濂性抗體，無法改善抗體的親和力。這些缺點限制了 基因工程抗體更為廣泛的應用。組合化學方法應用到抗體工程領域產生的抗體庫技術使人們 找到了解決這些問趣的有效途徑。喵菌體抗體庫是應用最為#31的抗體庫技術。釆用噬菌體 抗體庫技術篩選抗體不必進行動物免疫，易于制備稀有抗原的抗體、篩選全人源性抗體和高 親和力抗體。嗷菌體抗體庫技術是生命科學研究的突破性進展之一，同時也將抗體工程的研 究推想了一個新的離潮。在噬菌體抗體庫，上，近幾年又發展了核糖體展示抗體庫技術。 利用核糖體展示技術篩選抗體的整個過程均在體外進行,不經過大腸桿菌轉化的步驟，因此 可以構建商容量、髙質量的抗體庫，更易于攤選離親和力抗體和采用體外進化的方法對抗體 性質進行改造。核糖體展示抗體庫技術代表了抗體工程的未來發展趨在《雙聯雙重定位式胞內疫苗》專利申請中，定向類融合蛋白的"殺傷裝置"不只限于 "抗體蛋白"或是限制性內切雜，這是同厲于蛋白類藥物的兩個亞種，也包括核苷酸或是非 核苷醆及其化合物，例如AZT、齊多夫定，伹重點強調的是由蛋白類抗體蛋白所構成的定向 類"融合蛋白"。而在"復方型雙聯雙重定位式胞內疫苗"中，則同時強調核苷酸或是其他化 學合成藥物與蛋白類藥物具有同等地位，從而將"復方型雙聯雙重定位式胞內疫苗"的"殺 傷裝置"，則擴展到所有具有能殺傷病毐遺傳物質，或是能破壞致痛基因與糾正基因缺陷的藥 物，其中，既包括抗體蛋白或是限制性內切酶，也包能破壞致癌基因或糾正基因缺陷的核苷 酸，以及其它化學合成藥物，例如，AZT (疊無胸腺瞎啶核苷)，齊多夫定(Zidovudine), 以及其他抗逆轉錄蛋白接等等，因此，稱這類雙聯雙重定向類藥物，為"復方型雙聯雙重定 位式胞內疫苗"。"復方型雙聯雙重定位式胞內疫苗"共包括三種疫苗"蛋白類疫苗"和"粘 合類疫苗"，以及"偶聯類疫苗"，其中，"蛋白類疫苗"就是前述的《雙聯雙重定位式胞內疫 苗》。"粘合類疫苗"的基本特點，就是應用一種被稱為"粘合蛋白"的蛋白質或是多肽(一 般為抗體蛋白)， 一對一地首先與某一種"定向類蛋白"，共同結合成為"粘合型觸合蛋白 然后，再使這種"粘合型融合蛋白"，來與核苷酸或是其它化學合成藥物，同樣也是一對一地 自然粘合在一起，從而得到一種新型的"粘合型定位式胞內疫苗"。在這里，首先慊要先篩 選出一種具有能粘合某一種核苷酸或是其它化學合成藥物的抗體蛋白。抗體與化療藥物分子 的結合的方法一般采用偶聯法。偶聯法是利用僞聯試劑與化療藥物分子及抗體之間的化學作 用而進行交聯。最常用的方法有6種重氰化法，Mannich編合法，NHS豳法，NHS Ester-Maleimide法、戊二醛法、碳二亞胺法。"粘合翠融合蛋白"或"粘合型定位式胞內 疫苗"的作用，也同樣是使具有"殺傷裝置"功能的不皿入細胞核的核苷酸或是其它化學 合成藥物，進入到人體或動物體內的細胞內，以作用于細胞內的病毒遺傳物質，或是應用可 進入細胞核的核苷酸或是其它化學合成藥物，作用于細胞核內染色體DNA基因來破壞致癌基因或糾正基因缺陷。這些偶聯物對結腸痛、肝癌、胃痛、黑色索癇、腎癌、卵巢癌、宮頸 痛、乳癌、肺痛、骨肉癬等有一定的抗痛效應，是很有潛力的免疫治療方法。使用"粘合蛋白"的原因是無法應用基因蛋白工MC接將"制導裝置"的"定向蛋白"與核苷醆或是其它化學合成藥物相融合，因此就只能先讓"定向蛋白"與"粘合蛋白"共同構成"粘合型融合 蛋白"，然后再應用蛋白與化療藥物分子的偶聯方法，使"粘合型融合蛋白"與核苷酸或是其 它化學合成藥物偶聯在一起，因此"粘合蛋白"不應用于抗體蛋白或是限制性內切睞這兩個 品種。它主要應用于核苷酸或是其它化學合成藥物。它只適用于不能與蛋白類藥物分子直接 偶聯，或是蛋白類藥物偶聯后，會破壞原有的融合蛋白或是抗體蛋白性能的情況，如果不存 在這種情況，那么就可以直接應用化學偶聯法，將定向類蛋白，直接與核苷酸或是其他化學 合成分子偶聯在一起，共同構成"偶聯類疫苗"。這種"粘合型定位式胞內疫苗"或是"偶聯 類定位式腌內疫苗"，可稱為"非蛋白生物導彈"。它與"蛋白生物導彈"統稱為"復方型生 物導彈"或"復方型雙聯雙重定位式胞內疫苗"。經計皿檢索，還未發現國內外發明這一定 向類融合蛋白藥物，因此，這一方法發明，屬于首創。由于本方法發明可廣泛應用于抗病毒, 抗癌癥，以及抗基因缺陷病癥，因此，不伹具有實用性，而且還具有廣大的醫藥市場。這種復方型生物導彈又可分為a, P和粘合型，以及偶聯型，共四種類型，其中a型生物 導彈，也稱A型疫苗的"融合蛋白"由A、 B兩個區段構成，其中A區段的"制導裝置"多 肽或蛋白抗體，負責將B區段的蛋白藥物送入到葡細腌的細胞上，通過與靶細胞的表面受體 蛋白相互補結合，而將B區段的"殺傷裝Jt"或"阻通裝登"蛋白藥物，送入到細胞質內， 從而達到殺傷靶細胞或是阻遏靶細胞質內病毒遺傳物質的目的。P型生物導彈，也稱B型疫 苗的融合蛋白，則由三區段構成，其中A、 B兩區段的蛋白或多肽與a型生物導彈的功能完全 相同，而C區段則是由所謂的"核定位順序"構成，此順序含有5個連續帶正電荷線基一 —脯——賴——賴——^~~賴——^SS。這一短肽順序(氨基酸)的指令可使B區段的殺傷 裝置或^ 裝置的蛋白藥物(分子量髙于15kd)進入細胞核的核膜內，從而阻遏或是修飾 已整合到細胞DNA中的病毒DNA,或是致痛基因，或是有缺陷基因。這是因為，真核細胞的核是由核被膜包圍著的，核被腆則由兩層膜——內核膜和外核膜 一組成，期間為核周空間所隔開。外核膜與粗內質網是連續的，而核周空間則與ER的空 腔是連續的。細胞核中的所有蛋白質都是在細鷹液中由游離的核糖體合成的。DNA聚合酶類、 RNA聚合酶類、組蛋白類和核中的其它蛋白質是怎樣越過核被胰的呢？這種有選擇性的降礙 上有開口，稱為核孔，其直徑約70A。小的蛋白質(~15kd)如組蛋白可迅速進入，而大的 蛋白質(>~90kd)則被排斥在外，除非它們有特殊的信號。這種信號也能加速小蛋白質進 入。原來這種大蛋白質之轉運入細胞核決定于一種核定位顯序的存在，此顧序含有五個連續 的帶正電荷的殘^~~脯~~賴——賴~~ —賴一纈。將這種多肽顧序連結到一種通 常定位于細胞液中的蛋白質上，能使它進入細腌核嗎？曾以丙酮酸激酶作過試驗，這是由 58kd的亞基組成的四榮體，通常定位于細勝槳中。通過重組DNA技術，將編碼到位順序的 cDNA與編碼激醣的cDNA接在一起。然后用顯微注射法將含有此嵌合cDNA的質粒注入哺乳動物的細胞中。含有這種sv40核定位JII序的丙,酸激瞎幾乎僅僅存在于細胞核中。與此 相反，帶有被改變的核定位廂序(在鄉128上蘇氛黢取代了賴氮酸)的丙翻酸激肆則停留 在細胞液中。這就證明了核定位顯序的存在(《生物化學》 [美1LVBERSTRYER北京大學出 版社1992年P871頁)本發明之所以提到核定位順序，就在于耍特別明確地指出第二重"制導裝置"，即核定位 順序的作用的意義，而不管它是自然生成的，還是人工制造的。由于P型生物導彈具有A、 C 兩重"制導裝置"，因此，稱為"雙重生物導彈"或"雙重胞內式疫苗"。又由于在醫治病毒、 癌癥或基因缺陷疾病時，為了達到徹底治癌的療效，往往雷耍同時運用a與P兩種型號的生物 導彈聯合使用，因此又稱它們為"雙聯雙重雎內糖確制導型蛋白類藥物"，或是"雙聯雙重生 物導彈"。粘合型生物導彈的"粘合型融合蛋白"的A型與B型疫酋由A、 B和C這三個區段構成， 與a型生物導彈或A型疫苗的"融合蛋白"不同的是，它的A區段的"制導裝置"多肽或蛋 白抗體和B區段的"粘合蛋白"，負責將C區段的細臃核的核苷酸或是其它化學合成藥物，送入到人體靶細胞膜的受體上，或是某一特定病毒外殼或細菌膜受體上，使它們被靶細胞所 "胞吞"，進入細胞質內。它的B區段，則為一種"粘合蛋白"。B區段的功能，是先與A區 段的"制導裝置"多肽或蛋白抗體粘合在一起，然后再與C區段的核苷酸或是其它化學合成 藥物偶聯，從而得到一種新型的"粘合型雙重定位式胞內疫苗"。偶聯型生物導彈的A型與B型疫苗，也與a和P型生物導彈相似，不同的是耆耍將偶聯型 生物導彈的A型與B型疫苗的B區的蛋白藥物，更換為核苷酸或其它化學合成分子藥物。由前述可知，本方法發明屬于"仿生學"發明。它模仿的是白喉桿菌所表達的白喉 毒素，以及愛滋病毒或人體鐵傳遞蛋白。眾所周知，白喉毒索由A、 B兩個區段構成， 其中A區段為一個21kdal片段，負責起催化"移位鵜"進行ADP—一核糖化作用，從 而破壞細胞正常復制。這是"殺傷裝置"。B區段為一個40kdal片段，它可與細胞質膜 上的神經節脂G^相結合，而使A催化區段進入細胞。這是"制導裝置"。愛滋病毒外 殼上gpl20蛋白，是"制導裝《",可以和T4細胞膜上的受體輔助分子CD4相結合， 將愛滋病毒的遺傳物質送入到T4細胞內,來殺死T4細胞。病毒的遺傳物質則為"殺傷裝置"。HIV的病毒粒子與禽的肉癇病毒類似，直徑約IOOOA。它由一脂類雙分子層的外膜包被 著，膜中有兩種糖蛋白gp41是跨腹的，并以二巰鍵與gpl20相連；gpl20則在外表面上。 此病毐的核心含有2個拷貝的RNA基因組和相聯的各種子tRNA,以及幾個分子的反轉錄酶。 這些又被稱為p18和p24的2種蛋白質的許多個拷貝所包圍。由于病毒被膜中的gpl20與 質膜中叫做CD4的受體相互作用，HIV進入T4淋巴細胞。這兩種膜融合在一起，病毐的核 心則直接被釋放到細胞液中。以上是關于HIV病審感染T4淋巴細胞方式的介紹(《生物化學〉〉 虔1LVBER STRYER北京大學出版社1992年P901頁)作為本方法發明專利的一個應用亊例，可應用抗愛滋病生物導彈的方法設計，來說明如 何具體實施本方法發明專利的一般方法。抗愛滋病導物導彈也分為a型與P型，因此屬于雙聯雙重胞內式精確定向型蛋白類藥物。使用抗愛滋病型生物導彈的目的，是為了克脤目前治療 愛滋病的兩大基本方法的重大缺陷。這兩大基本方法， 一是藥物療法，例如"雞尾酒療法"，二是常規疫苗方法，但它們只能作用于被感染的T4細胞外部的愛滋病毐，因此無法徹底消 滅愛滋病毒。而抗愛滋病型生物導彈因可將"殺傷裝紫"抗體蛋白藥物，送入細胞內，而徹 底消滅T4細胞內的病毒，因此可以徹底治療愛滋病。這也是促使本專利發明的初始原因。為了克服上述兩類治療愛滋病方法的缺陷，本方法發明專利獨創性地設計了一種抗愛滋 病的"雙聯雙重胞內式疫苗"或"蛋白生物導彈"。它不僅可以將抗愛滋病的藥物，例如， 可阻通病毐逆轉錄瞎的抗體，可稱為抗體I號，專一地、定向地作用于T4細胞的細胞質內 的病毒的逆轉錄躥(其中包括未感染的T4細胞，從而起到預防感染的作用)，而且還可以將 它們定向地作用于T4細胞核內的，已被1^在宿主DNA上的愛滋病毒DNA中的可轉錄病 毒逆轉錄籌的基因，例如,能夠腿可產生病毒RnashH,辦部分逆轉酶的基因的抗體蛋白， 可稱為抗體n號，使其永久不能再轉錄復制這種逆轉錄肇，從而達到徹底殺死愛滋病毒的目 的。其它的抗體蛋白藥物，例如可自tat的基因，使其失去生產病毒mRNA產生的功能， 它們屬于抗體I號的分類型或亞類型，也同樣具有這樣的效應。由普遍的生物化學原理可知如果某一種"舳合蛋白"的"供體"蛋白，例如，病毒外 殼上的"供體"蛋白——愛滋病毒外殼上gpl20蛋白，能夠特異地、專一地與真核細胞表面 的某一特定"受體"蛋白的結構互補，那么，細胞就會在這一對"供體"蛋白與"受體"蛋 白相互結合后，產生"胞吞"作用，而將整個"供體"蛋白的"殺傷裝置"亞基，或是病毒 外殼內的病毒遺傳物質，送入到細胞里。例如，可通過愛滋病毒外殼上gpl20蛋白，將愛滋 病毒外殼內的病毒遺傳物質送入細胞中。這就是細胞胞吞作用的原理。細胞的胞吞作用的過程是這樣的。對胞吞現象起媒介作用的大多數位于細胞表面的受體 部都是跨簾的糖蛋白。它們有一個大的胞外的結構域， 一個或兩個跨膜的螺旋和一小部分在 細胞液的區域。鐵織蛋白的受體就是如此。許多這類受體位于質腹的稱為有殼小孔(Coated pit)的特化區域。對于已發生胞吞作用的所有蛋白質，其共同途徑都是從有殼小孔到有殼囊泡，再到內小 體。進入細胞的蛋白質和受體然后就分道揚鑣。這是它們的分揀和到位的前奏。鐵傳遞蛋白 及其受體所采取的途徑就是如此。鐵傳遞蛋白把鐵從吸收和貯藏部位轉運到利用部位。第一 77kd蛋白質結合2個Fe3+ ，此蛋白質有2個類似的結構域。沒有鐵的蛋白稱為鐵傳遞蛋白 本體溫表(apotransferrin〉。 Fe"與鐵皿蛋白本體的結合涉及HC05和陰離子形式的酪 氨酸擁鏈。鐵傳遞蛋白而不是鐵傳遞蛋白本體，能與有殼小孔中的二聚體受體結合。在到達 內小體時，鐵從鐵傳遞蛋白上解離下來，因為內小體已被酸化到pH5至6。這種酸性使得鐵 傳遞蛋白對Fe"的親和力降低了一百倍還多。醵化使重碳酸根、酚羥基O-和其它對結合作 用有貢獻的基團質子化，從而導致Fe"的釋放。不過，鐵傳遞蛋白本體仍結合在受體上。然 后內小體與一管狀囊泡融合。此管狀襄泡名為CURL (憲為受體和配體解聯的部分，compartment of uncoupling of receptor and ligand),分揀在其中進行含有結合在受 體上的鐵傳遞蛋白的那一部分囊泡掉下來，并被指令到達質膜，而留下的Fe"則貯存在細胞 液中的鐵蛋白中。當掉下來的囊泡與質腆融合時，鐵傳遞蛋白本體就從受體上釋放出來。以 上就JiXt細胞胞吞作用的原理的簡要說明(《生物化學》美jLVBERSTRYER北京大學出版 社1992年P873頁)因此，當生物導彈的"融合蛋白"的A區段的"制導裝置"多肽或蛋白抗體， 一旦與人 體細胞表面受體蛋白相互結合后，就必然會將"融合蛋白"的B區段蛋白亞基"殺傷裝登" 或"阻通裝i"抗體蛋白藥物，送入細胞里。生物導彈就是基于這一普遍的生物化學原理而 設計的，因此是可行的。九十年代所發展起來的"靶細胞治痛藥物"就充分證明了這一點。 例如，單克隆抗體的"導彈藥物"，在體內易被網狀內皮系統(RES)吞食而非選擇性消除， 且成本昂貴不易推廣應用。由于本專利是方法發明專利，因此，只能對生物導彈將"殺傷裝 置"或"^S裝S"的抗體蛋白藥物，送入到細胞里的"胞吞"的過程所涉及的普遍的生物 化學原理，作出一般化地說明，而無須象產品發明專利那樣，去詳細的講解具體的生化反應 過程。這種新型生物導彈的基本特征在于它是由兩種生物導彈混合而成的， 一種是負責將抗 愛滋病毒的抗體蛋白藥物，例如抗體I號，轉運至T4細胞的細胞質之中的生物導彈，可稱 為a型生物導彈；另一種是將能ffia愛滋病毒DNA轉錄復制逆轉錄酶的基因的抗體蛋白，例 如抗體n號，轉運到T4細胞核內的生物導彈，可稱為p型生物導彈。因此，稱它們為"混合 型雙重雙聯生物導彈"。其中，由于P型生物導彈必須將抗體蛋白，例如抗體n號轉運至T4 細胞核內，因此稱它為"雙重生物導彈"。這就是本方法發明專利稱它為抗愛滋病生物導彈"雙 聯雙重胞內式生物導彈"的根本原因。a型生物導彈采用gpl20蛋白作為一種針對T細胞的制導蛋白，實質上是一種"以其人 之道，還治其人之身"的辦法，或者說"以毒玫毐"的辦法，即利用gpl20蛋白可攜帶病毒 的其它蛋白籌和RNA進入T4細胞的細應廣內的特性,而將抗愛滋病毒逆轉錄,的抗體蛋白， 也同樣應用gpl20轉運到T4細胞質內。當然，其間可能還糖要一種變構酶或輔酶的幫助， 才得使它們相結合，但這從技術上來說，這并不是特別困難的問題。因此，這種a型生物導彈實質上是一種兩區性分子，可被裂為二個區段 一個區段是 gpl20蛋白，可與T細胞的表面受體相結合，而將第二區段的抗病毒逆錄酶的抗體蛋白，定 向地轉運到T4細胞質內。這種兩區性分子與白喉毒索很相似。實際上也是受白喉毐索蛋白 構成的啟發而設計的。由于愛滋病毒的逆轉錄瞎是稱定的，不象gpl20蛋白那樣迅速多變， 因此，皿轉錄瞎蛋白藥物一旦進入T4細胞質內(可以是一種，也可以是多種藥物的聯合)， 它就能立即消滅存在于T4細胞質內的全部愛滋病毒的逆轉錄驊及其輔酵。與此同時，這種 藥物也可以提前進入未受感染的T4細胞內，從而達到預防感染的目的。伹是,為了更徹底地消滅已1^到T4細雎DNA上的愛滋病毐,使其沒有機會再度復制, 因此，還必須使用另一種抗愛滋病毒生物導彈，P型生物導彈。P型生物導彈實質上是一種三區性分子。它的第一區段仍然是gpl20蛋白，它的第二區 段則是可阻通病毒DNA逆轉錄基因的抗體蛋白，例如抗體n號。它的第三區段分子，則是一個與抗體n號相連接的核定位廂序。這一短肽順序的指令，可使抗體蛋白n號進入到T4細胞核內，因而能與已經整合在宿主細胞DNA中的，可轉錄病毒逆轉錄酶的基因相結合， 以制止愛滋病毒再次進行自我復制。由以上述兩種生物導彈，即a型生物導彈與P型生物導彈 聯合作用，就可以全面消滅患者體內的愛滋病審，從而達到徹底治療愛滋病的目的。雷耍說明的是，本專利所需要的融合蛋白，完全可以應用基因蛋白工程技術制造出來。 眾所周知，基因蛋白工程起源于70年代，而在20世紀90年掀起一個生產商潮。據統 計，僅在1993—2003年這十年間，中美日三國，就開發了近300種基因蛋白生產的蛋白 類藥物，在21世紀初，基因蛋白工程則進入了一個發展的黃金時代，基因蛋白工程藥物已 日益成為當今醫用藥物的主流。目前各國所批準的新藥品，幾乎都是采用基因蛋白工程生產 的藥物。這就是本專利所開發的融合蛋白疫苗所具有的實現基礎。既然它具有可實現的必然性。生物導彈由于是一種融合蛋白或雜交蛋白，因此它的基本生產方法就是基因重組蛋白工程方法。基因蛋白工程技術主要分為兩方面內容， 一是基因蛋白工程產品的表達生產，二是融合 蛋白技術。離科技的基因工程，共采用兩種技術方法來制作基因工程制藥 一種是發酵工程的融合 蛋白技術生物技術方法，另一種是轉基因喃乳動物生物反應器。發酵工程的生物技術方法， 一般是指利用微生物的特定性狀，通過現代化工程技術， 在生物的反應器中生產有用物質的一種技術系統。目前醫用抗生索、農用抗生索等已有近200 個品種，絕大部分都是發酵的產品。除抗生索外，發酵工程產品還包括氨基醆、工業用酶等。 由于哺乳動物生物反應器生產的生物制品的活性很髙，因此，現在生物制藥的發展趨勢都是 使用晡乳動物生物反應器的生物制藥方法。本專利疫苗也同樣采用喃乳動物生物反應器的生 物制藥方法。基因工程技術主要內容或步猓可分為目的基因制備和分離，構建DNA重組體;DNA重組 體擴增和表達，重組體篩選和鑒定;外源基因表達，產物分離純化和鑒定，以及將目的基因克 隆到表達戟體上，導入宿主細胞，以讓外源遺傳基因在其中"安家落戶"，進行正常的復制表 達，得到新細胞，的苗種.受體細胞也可以按雷耍選擇適合藥物生產的某種動物或植物來生 產人體內的激素，抗體以及各類有生理活性多肽蛋白，例如動物中牛、羊的乳房和植物中香 菊、番琉等水果中果實。根據襞新資料，2006年6月2日，世界上第一個利用轉基因動物乳腺生物反應器生產 的基因工程蛋白藥物——重組人抗凝血,ffl (商品名ATryn )的上市許ATryn是由全球最著名的動物乳腺生物反應器研發企業美國Genzyme轉基因公司研 制成功的，該藥物的特別之處在于，重組人抗凝血瞎邁不是從天然物質中提取，也不是通過 微生物發酵或晡乳動物細胞培養基因工程制藥體系生產，而是從轉基因山羊奶液中生產出來 的，即利用一種新的基因工程制藥技術——轉基因動物乳腺生物反應器制藥技術生產的。與一般可以重復生產的化學合成藥物不同，生技藥品是細菌、家畜以及其他生物個體的 產物(業內人士稱為生物制劑)。典型的生物制劑通常是大分子，如激索、抗體或細胞素。它們 大都由蛋白質構成，要從頭合成這樣的蛋白質，實在是太復雜。為了獲得正確的功能，必須 把蛋白質以特定的方式折疊起來，而且必須在這個大分子上的特定位《添加糖類或其他類型 的化學物質。生物技術公司耍耗費數年的時間，來找出適當的變異宿主生物與反應環境組合，才能得 到安全有效的蛋白質藥物。這種過程與其說是化學反應，不如說跟酸酒更接近。盡管有心要 了解影響生物反應器當中大分子純度與療效的毎一個因素，但生物技術公司其實無法完全了 解和控制它們。他們所能做的，就是找出一個有效的基本制造方法程式，然后就不再改動了。 前述的轉基因動物乳腺生物反應器的生產制藥技術，也是如此。由于本專利屬于方法發明專利，而不是產品發明專利，因此，本專利只能介紹生物導彈 的生產的一般基因工程技術基本方法，而不可能詳細介紹某一種特定的蛋白生物導彈產品的 具體的制造技術。對于"融合蛋白"的基因工程技術也同樣如此由于本專利屬于方法發明專利，而不是 產品發明專利，因此，本專利只能介紹"融合蛋白"的基因工程技術的一般制作方法。融合蛋白技術(Fusion Protein Approach)。此方法系將攜帶蛋白(Carrier)或是制導蛋白的基因與標的蛋白的基因，以基因重組技術結合為一，表達出「攜帶蛋白+標的蛋白J (或是制導蛋白+殺傷蛋白])前后接合的臟合蛋白。同一攜帶蛋白可攜帶不同的標的D4的 VI, V2結構域蛋白，目前有十幾種不同的攜帶蛋白可供選擇，因此對同一標的蛋白而言， 比較保險的辦法就是多試幾個不同的攜帶蛋白。耍做到這點很容易，只需將標的蛋白基因， 利用重組基因方法，分別置入含有不同攜帶蛋白的載體即可。可是當實際要同步選擇載體時, 經常先要花一番功夫選擇適當的限制酶，去切割不同載體與標的蛋白的DNA,然后才能進行 基因重組工作。于是，為了制造本專利疫苗所需耍的融合蛋白，就必須應用構建融合蛋白所 必雷的基因工程了。基因工程誕生于70年代。自1977年成功地用大腸桿菌生產生長激素 釋放抑制因子以來，人胰島素、人生長激索、胸腺索、千擾索、尿激酶、肝火病毒疫菌、口 蹄疫疫菌、腹瀉疫菌和腫癇壞死因子等數十種基因工程產品相繼問世；1982年開始進入商 品市場，在醫療保健和家畜疾病防治中獲得廣泛應用，并已取得或正在取得巨大的效果和收基因工程一般包括四個步猓 一是取得符合人們要求的DNA片段，這種DNA片段被稱 為"目的基因"；二是將目的基因與質粒或病毒DNA連接成重組DNA;三是把重組DNA 引入某種細胞；四是把目的基因能表達的受體細胞挑選出來。要把目的基因從供體DNA長鏈中準確地剪切下來，需要應用限制性內切糖，它能夠在 DNA上尋找特定的"切點"，認準后將DNA分子的雙鏈交鐠地切斷。人們把這種限制性內 切酶稱為"分子剪刀"。這種"分子剪刀"可以完整地切下個別基因。自70年代以來，人 們已經分離提取了 400多種"分子剪刀"。DNA的分子鏈被切開后，還得縫接起來以完成基因的拼接。這種酶叫作DNA連接酶。 從此，DNA連接,就成了名符其實的"縫合"基因的"分子針線"。只要在用同一種"分子 剪刀"剪切的兩種DNA碎片中加上"分子針線"，就會把兩種DNA片段重新連接起來。把"拼接"好的DNA分子運送到受體細胞中去，必須尋找裝載了外來的DNA片段后仍 能照樣復制的運載體。理想的運戟體是質粒，因為質粒能自由進出細菌細胞，應當用"分子 剪刀"把它切開，再給它安裝上一段外來的DNA片段后，它依然能自我復制。有了限制性 內切麻、連接薅及運載體，進行基因工程就可以如思以償了。運裁體將目的基因運到受體細胞是基因工程的最后一步，目的基因的導入過程是肉眼看 不到的。因此，要知道導入是否成功，事先應找到特定的標志。例如我們用一種經過改造的 抗四環索質粒PSC100作載體，將一種基因移入自身無抗性的大腸桿菌時，如果基因移入后 大腸桿菌不能被四環索殺死，就說明轉入獲得成功了。由此可見，基因蛋白工程，早已成為 常規技術了，因此，沒有必要再在本專利的說明中重復了。重要的是，它表明了應用基因工 程來制造融合蛋白藥物，其中包括，本專利疫苗所涉及一項融合蛋白藥物是完全可以作到的， 是現實可行的，因為它已屬于一項成熟的生物技術了。由此可見，只要本領域技術人員將基因蛋白工程的技術應用到本專利疫苗中，就自然而 然地將gpl20蛋白與抗體連接起來了。它說明本專利疫苗完全能夠，并且事實上已被基于基 因蛋白工程技術而已開發出來的許多種融合蛋白的實現，證明實現本專利疫苗所需要的融合 蛋白技術的是有充分的科學依據的，所以說，本方法發明專利是完全可行的，最近剛剛研制 出來的免疫球蛋白(Ig)融合蛋白，就最充分地證實了這一點。免疫球蛋白(Ig)融合蛋白是指在基因水平將目的蛋白基因同Ig部分片段基因相連，并 在真核或原核細胞中表達出的具有上述兩部分結構域的童組蛋白，其中，免疫球蛋白(Ig) 就是標的蛋白或是殺傷蛋白，而Chamow等制備了CD4/IgG,包括CD4的V1， V2結構 域之中的D4的V1， V2結構域，就是攜帶蛋白或是制導蛋白(材料來源晶美公司網頁)。由于目的蛋白同免疫球蛋白部分結構,融合，使重組蛋白獲得了新的特性Fc段具有 穿過胎盤、結合補體并介導補體依賴的細鷹毒作用，介導ADCC效應等，這一特性被應用于 某些疾病的靶向性治療。人類免疫缺陷病毒HIV能通過CD4分子胞腆外區第一個V樣區進行病毒感染過程，并 最終導致獲得性免疫缺陷綜合征AIDS。因此，封閉CD4有可能達到抑制病毒感染的目的。 為了將CD4用于HIV治療，Chamow等制備了 CD4/IgG,包括CD4的VI, V2結構域、 人Ig重鏈絞鏈區及Fc段。CD4/IgG在體外實驗中能與HIV的gpl20蛋白結合，阻斷HIV 的感染過程。此融合蛋白半衰期較長，ffiit過Fc活化補體，介導抗體依賴細胞介導的細胞毒作用，并能有效穿過胎盤對胎兒起到防護作用。CD4/Ig治療AIDS已進入臨床驗。特別需耍說明的是，將上述免疫球蛋白(Ig)融合蛋白的制造方法，與2002年本發明 人向中國圉家專利局提出《雙聯雙重定位式胞內疫苗》專利申請的有關說明，來加以對照比 較一下，就可以看出，上述免疫球蛋白(Ig)融合蛋白的制造方法完全是對該方法發明專利 方法的仿制使用。只不過，這種免疫球蛋白(Ig)融合蛋白是作用于愛滋病毒，而不是T4 淋巴細胞，但方法都是一樣的！這一點，是很明顯的在《雙聯雙重定位式胞內疫苗》的專 利說明中，都曾提到T4淋巴細胞表面受體CD4分子和愛滋病毒的表面蛋白gpl20，是在所制作的該專利的抗愛滋病疫苗中的最主耍的相互作用成分。本專利疫苗中，制導蛋白是 gpl20蛋白(甲)，它作用于T4淋巴細胞表面受體蛋白CD4分子的V1, V2結構域(乙)。而免疫球蛋白(Ig)融合蛋白的使用者所應用的制導蛋白是CD4分子的VI, V2結構域(乙)， 它作用的也是愛滋病毐的gpl20蛋白(甲)。從相互作用的對象的模式來看，"甲——乙" 模式與"乙——甲"模式是完全等同的(甲——乙)=(乙——甲)。這正是該專利疫苗所 設計的作用模式。這是因為，該專利疫苗中的制導蛋白gpl20蛋白(甲)，正是作用于T4淋巴細胞的表 面蛋白的受體CD4分子，使T4淋巴細胞產生"臃吞"作用，而將殺傷蛋白或是抗體蛋白送 入細胞中的。與此同時，該專利疫苗和免疫球蛋白(Ig)融合蛋白，這兩種融合蛋白所使用 的殺傷蛋白都是免疫球蛋白(Ig)或稱抗體蛋白。由此可見，免疫球蛋白(Ig)融合蛋白與 該專利所提出的融合蛋白疫苗，應用的都同樣是"愛滋病抗原gpl20~~受體CD4", 或是"受體CD4——愛滋病抗原gp120蛋白"的相互作用模式，因此，該使用者所應用的 免疫球蛋白(Ig)的融合蛋白的制造方法，仍舊處于該專利方法的保護范圍之內！這一事例 不但最充分地說明了本專利疫苗是完全具有現實可能性的，而且還最充分地證明了該專利方 法發明已經被仿制了！因為，經計算機檢索，該專利申棟時，還沒有上述免疫球蛋白(Ig) 融合蛋白產品出現，因此，使用者所應用的免疫球蛋白(Ig)的觸合蛋白的制造方法，也應 仍舊處于《雙聯雙重定位式胞內疫苗》方法發明專利和本方法發明專利的保護范圍之內。與 此同時，由前述有關基因工程和抗體蛋白技術可知，在該方法發明專利申請時，以當時的基 因工程和抗體蛋白技術的發展水平，《雙聯雙重定位式胞內疫苗》完全可以制造出來。由于本方法發明專利的生物導彈專一性強，只針對祀細胞，例如，T4細胞，并可采用小 劑量針劑注射的方式，來對患者進行治療。不僅具有用藥量小，沒有毒性副作用的特點，而 且價格更便宜，可為廣大患者所使用。因此，它必然具有極為廣闊的商業應用價值，因而具 有極大的市場。特別雷要聲明的是,，如果攜帶抗痛藥物及其它抗病毒的藥物，《復方型雙重雙聯定位式 胞內疫苗>〉，也可以用于痛癥及其它種病毒引發的人類疾病的治療，其中無論是a型生物導彈 或者P型雙重生物導彈，以及粘合型生物導彈，都可以攜帶能ffit缺陷基因或激活抗病毒與抗 癌基因的藥物，因此，本專利持有者保留為治療上述疾病，而使用類似的"復方型生物導彈" 的一切專利所屬權。還糖耍說明的是，無論是a型生物導彈，或者是P型生物導彈和粘合型生物導彈，其中每 種生物導彈都是由多種同類生物導彈混合而成的，所以，a型生物導彈之中包含有al型生物 導彈，a2型生物導彈。這是因為，在混合式的a型生物導彈中，每一種生物導彈都只能由一 個gpl20制導蛋白攜帶一個抗愛滋病毒的一種抗體蛋白。同樣如此，在多種混合式的P型生 物導彈中，其中每一種P型生物導彈也只能由一個gpl20制導蛋白和一個核定位顧序短肽指令，共同攜帶一種抗體蛋白，例如抗體n號.但為了徹底消滅愛滋病毐，就必須在每種生物導彈中，都聯合使用多種藥物，以便達到百分之百地消滅愛滋病毒的最佳效果，因此，每種生 物導彈都必須將各自攜帶一種藥物的多種型號的同種生物導彈混合使用。蛋白抗體目前多為鼠源抗體，由于它們注入人體后會產生抗體(抗抗體)反應，或是激發免 疫反應，因此，可采取噬菌體抗體技術，嵌合抗體技術、基因工程抗體技術，以解決人源化 抗體技術問趙。與此同時，蛋白抗體與化學藥物偶聯的技術也比較成熟了。例如，國內上海 已將臃痛單抗與蒐麻毒素，以及絲裂每索、ft甲喋呤等偶聯成功(《單克隆抗體的研究進展》 <上>張我束梅英。材料來源中國醫藥報網頁)。
權利要求
1. 一種應用基因蛋白工程和抗體蛋白工程的最新型的“定向精確制導型藥物”的“定向類融合蛋白”與“偶聯類疫苗”的技術方法，創造性地設計了最新型的具有“定向精確制導型藥物”功能的抗愛滋病(AIDS)、癌癥及其基因缺陷病癥，以及其它病毒的“復方型雙聯雙重定位式胞內疫苗”的方法發明，其特征為它將連結著可阻遏愛滋病毒(HIV)，癌癥及其基因缺陷病癥，以及被其它病毒的的藥物，例如，抗體蛋白I號、抗體蛋白II號，抗逆轉錄酶的AZT(疊氮胸腺嘧啶核苷)，齊多夫定(Zidovudine)，以及其他抗逆轉錄蛋白酶等等，蛋白質與多肽、核苷與非核苷類似物的的藥物的兩種疫苗蛋白類疫苗和偶聯類疫苗，又可稱為“蛋白類”生物導彈，以及“偶聯類”生物導彈，通過它們所連結的特殊的“定向蛋白”也稱為“制導裝置”，分別將這些被稱為“殺傷裝置”或“標的裝置”的藥物，轉運至靶細胞，例如癌細胞或是淋巴細胞T4細胞的細胞質與細胲核內，其中，蛋白類疫苗中的A型疫苗所攜帶的蛋白類藥物，例如抗體蛋白I號，可被轉運至靶細胞的細胞質內，直接消滅已感染病毒，例如，愛滋病毒的T4細胞的細胞質內的病毒逆轉錄酶及其輔酶，使病毒不能生長；而蛋白類疫苗中的B型疫苗所攜帶的蛋白類藥物，例如抗體蛋白II號，則被運轉至靶細胞的細胞核內，可直接阻遏已整合到宿主T4細胞DNA中的愛滋病毒的tat基因等等，或是其它可轉錄部分病毒逆轉酶RNaseH基因，使它們失去轉錄病毒的逆轉錄酶的功能，永久性地阻止病毒的再復制，或是直接阻遏致癌基因，從而達到徹底根治愛滋病或是癌癥的目的偶聯類疫苗，也同樣擁有A型疫苗和B型疫苗；又由于需要同時使用蛋白類疫苗和偶聯類疫苗，所以稱它們為“復方型雙聯疫苗”；再由于這兩類疫苗中所使用的B型疫苗需要兩種定向蛋白，才能將其所攜帶的藥物轉運至靶細胞的細胞核內，所以稱B型疫苗為“雙重疫苗”；而因為上述“復方型雙聯雙重疫苗”可專一性地定位作用于靶細胞的細胞質與細胲核內，因此又總稱它們為“復方型雙聯雙重定位式胞內疫苗”，其中胞內所指的是細胞質和細胞核內，蛋白類疫苗和偶聯類疫苗的區別就在于，蛋白類疫苗所使用的殺傷裝置”或“標的裝置”的藥物為蛋白類藥物，例如，抗體蛋白或限制性內切酶，而偶聯類疫苗所使用的殺傷裝置”或“標的裝置”的藥物，則擴展到除蛋白類藥物以外的所有的具有能殺傷病毒遺傳物質，或是能破壞致癌基因與糾正基因缺陷的藥物，其中包括能破壞致癌基因或糾正基因缺陷的核苷酸，以及其它化學合成藥物，例如，AZT(疊氮胸腺嘧啶核苷)等等。
2、 根據權利l所述，本專利創造性地設計了蛋白類A型抗愛滋病毒疫苗，其特征為它 是根據愛滋病毒外殼的gpl20蛋白可與T4細胞的表面受體CD4分子相結合,而將病毒的 RNA,逆轉錄酶及其輔酶，專一地針對T4細胞，定位式地定向轉運至T4細胞內的原理， 根據"以毒攻毒"的原則而設計的，它也同樣利用gpl20蛋白將抗體蛋白I號直接定向轉運至T4細胞的細胞內的，而不象口服的抗逆轉錄酶藥物那樣，廣泛作用于全身細胞， 同時口服藥物自身也會因在T4細胞外與其它人體代謝物發生反應而受到損失，因此，蛋 白類A型抗愛滋病毒疫苗，既有高效消滅病毒逆錄酶的作用，又有因其有專一針對T4 細胞的特性而具有用量小的特點；A型疫苗是一種兩區性分子或是"融合蛋白"，可被 裂解為二個區段 一個是"制導裝置"gpl20蛋白，可與T4細胞表面的受體CD4分子結 合，并將第二區段所攜帶的"殺傷裝置"或"標的裝置"藥物轉運至T4細胞質內。
3、 根據權利所述，本專利創造性地設計了蛋白類B型抗愛滋病毒疫苗，其特征為它是 一種三區段分子或是"融合蛋白"第一區段為gpl20蛋白，第二區段為阻遏T4細胞核 內的、已整合到宿主DNA上的病毒DNA有關可轉錄病毒逆轉酶的基因，例如tat基因， 或是可轉錄部發逆轉錄酶RN aseH基因的藥物，例如抗體II號，第三區段則為一個"核定位順序"，它結合在抗愛滋病毒的藥物，例如抗體n號上，此順序含有5個連續的帶正 電荷的殘基 一脯一賴一賴一賴一精一賴一纈，這一短肽順序的指令可使抗體蛋白n號進入T4細胞核內，其中第一區段的gphol20蛋白的作用，是將第二和第三區段的分子轉 運至T4細胞的細胞質內，蛋白類B型疫苗和蛋白類A型疫苗，可統稱為"蛋白型生物導 彈"。
4、 根據權利1所述，本專利創造性地設計了偶聯型疫苗，其特征為偶聯型疫苗中的"殺 傷裝置"，則擴展到除蛋白類藥物以外的所有的具有能殺傷病毒遺傳物質，或是能破壞致 癌基因與糾正基因缺陷的藥物，其中包括能破壞致癌基因或糾正基因缺陷的、可進入到 細胞核內的核苷酸，以及其它化學合成藥物，例如，AZT (疊氣胸腺嘧啶核苷)等等,因 此，稱這類雙聯雙重定向類藥物，為"偶聯型雙聯雙重定位式胞內疫苗"，也稱"非蛋白 型生物導彈"。"偶聯型疫苗"的作用，也同樣是使具有"殺傷裝置"功能的核苷酸或是 其它化學合成藥物,進入人體或動物體內的細胞質或細胞核內，以作用于細胞核內的DNA 或細胞質內的病毒遺^f質，來阻遏病毒DNA或病毒遺傳物質，或是破壞致癌基因或糾 正基因缺陷。偶聯型疫苗的定向蛋白，例如，抗體蛋白與化療藥物分子的結合的方法一 般采用化學偶聯法。化學偶聯法是利用偶聯試劑與化療藥物分子及抗體之間的化學作用 而進行交聯。最常用的方法有6種重氮化法，Mannich縮合法，NHS酯法，NHS Ester"Maleimide法、戊二醛法、碳二亞胺法。偶聯型疫苗對結腸癌、肝癌、胃癌、黑 色素瘤、腎癌、卵巢癌、宮頸癌、乳癌、肺癌、骨肉瘤等有一定的抗癌效應，是很有潛 力的免疫治療方法，偶聯型疫苗稱為"非蛋白型生物導彈"，"非蛋白型生物導彈"和"蛋 白型生物導彈"統稱為"復方型生物導彈"，在"非蛋白型生物導彈"與"蛋白型生物 導彈"的聯合作用下，就可徹底消滅存在于一切病毒，包括愛滋病病毒，以及徹底治愈 癌癥或基因缺陷病癥，
5、 根據權利1所述，本專利創造性地設計了混合式的A型疫苗與混合式的B型疫苗。其 特征為由于無論A型或B型疫苗的每一種定向蛋白，例如A型疫苗的gpl20或是B型 疫苗核定位順序短肽指令，一輔一賴一賴一賴一精一賴一纈與gP120的組合，在每次使 用時，都只能攜帶一種藥物，例如，蛋白類B型疫苗的一組gpl20蛋白與核定位順序短 肽的組合，只可攜帶一個抗體II號分子，可稱為B1型疫苗。如果需要多種B型疫苗所攜 帶的藥物，例如抗體OI號……等等，同時進入T4細胞的核內，以加強阻遏病毒DNA基因的作用，就得將分別攜帶著抗體n號、m號……的多種B型疫苗混合起來使用，其中多種B型疫苗各自攜帶一種藥物，例如，Bi型疫苗攜帶抗體n號、Bn型疫苗攜帶抗體m號……等等；對于蛋白類A型疫苗也是如此每種A型疫苗分別只能攜帶一種藥物，并 為此可將它們分為稱Al型疫苗，A2型疫苗……等等。同時也將它們混合使用，并與已 混合在一起的Bl型疫苗、B2型疫苗……的混使式B型疫苗聯合起來，或是粘合類疫苗 的A型疫苗或B型疫苗共同應用。
6、 根據權利1所述，本專利創造性地設計了偶聯類疫苗的A型偶聯生物導彈和B型偶聯 生物導彈，其特征為在保證不破壞"定向類蛋白"的定向功能的條件下，可使用抗體 與化療分子偶聯的化學方法，直接使抗體蛋白與化療藥物分子偶聯在一起，屆時，可將 前述權利2與權利3中的蛋白類A型與B型疫苗的B區段分子的蛋白類藥物，更換為核 苷酸或是其它化學分子類型藥物即可，其中B型偶聯生物導彈適用于不能直接進入細胞 核內的核苷酸或是其它化學分子藥物，而A型偶聯生物導彈，則適用于具有能夠直接進 入細胞核內能力的核苷酸或是其它化學分子藥物。
7、 根據權利l所述，本專利創造性設計了抗愛滋病的注射式針劑"雙聯雙重定位式胞內 疫苗"，其特征為將"蛋白型生物導彈"或"蛋白類疫苗""雙聯雙重定位式胞內疫苗" 作為液體型的針劑，封于玻璃管內，并保存在能使疫苗存活在溫度的冰箱中，由于本疫 苗如權利2所述，具有專一性強，只定位作用的優點，因此具有極強的療效，又由于它 只針對愛滋病毒的逆轉錄酶及其輔酶在T4細胞中發生阻遏反應，所以當它進入未感染的 T4細胞內，不但不會對T4細胞起破壞作用，因為健康的T4細胞中不含有逆轉錄酶及其 輔酶，而且還可以起到使健康的T4細胞能夠預防感染愛滋病毒的作用，因而具有極強的 實用性。
8、 根據權利1所述，本專利所創造設計的復方型雙聯雙重定位式胞內疫苗，還可以用于 治療癌癥及其它患基因缺陷癥的患者，以及被其它病毒所感染的患者的疾病，除了人類 疾病外，它還可以用于動物疾病的治療，因為本疫苗并非僅僅只是針對愛滋病毒而創造 設計的，正如本專利說明書的標速所表明的樣，它實糜上涉及到一種新型生化藥物"復 方型雙聯雙重定位式胞內疫苗"的方法發明的"定向類融合蛋白"和"偶聯類疫苗"的制造技術方法，可用于抗癌癥及抗基因缺陷病癥的其特征藥物的制造，其特征為該"定 向類融合蛋白"藥物分為兩部分， 一部分是起"精確制導"的作用，可專一地結合特定 細胞受體的蛋白質或多肽，例如，某一種癌細胞的受體，稱為"制導裝置"；另一部分是能殺傷病毒或癌細胞或是可修飾有缺陷基因的"殺傷裝置"的藥物，因而使這種藥物成 為既具有定向制導，能專一結合并進入靶細胞能力，又具有定點清除患病靶細胞的致病因子能力的"定向精確制導型"藥物，而偶聯類疫苗的A型偶聯生物導彈和B型偶聯生 物導彈，在保證不破壞"定向類蛋白"，例如，某種抗體蛋白的定向功能的條件下，可使 用抗體與化療分子偶聯的化學方法，直接使抗體蛋白與化療藥物分子偶聯，其制造方法 為只需將蛋白類疫苗所屬的"殺傷裝置"或"標的裝置"A型疫苗或B型疫苗所攜帶的蛋白質或非蛋白質藥物，更換為可阻遏癌癥患者的原癌基因，或可激活癌癥患者的抗癌基因藥物，或是可阻遏被病毒感染的患者細胞的宿主DNA中所整合的病毒基因，及其 細胞質中病毒的致病因子，例如病毒逆轉錄酶等等，還有可阻遏基因病癥患者有缺陷基 因的核苷酸或是其它化學分子藥物，就可以治療這些病癥，并且可專一生地，定位式地 作用于這些患病的人體耙細胞，因此，本專利持有者保留一切使用按本專利方法發明所 設計的"復方型雙聯雙重定位式胞內疫苗"的制造方法，以及將上述各種藥物用于治療 上述人體各類特定細胞疾病的專利所有權，而這種"定向精確制導型"藥物中的蛋白類 疫苗的制造方式，由說明書可知，它是一種因模仿白喉桿菌的白喉毒素結構與功能，或 是人體鐵傳遞蛋白的蛋白亞基的結構與功能而設計的，因此也應按照人類運用"彷生學" 原理制造新產品的一般方法那樣，照貓畫虎，應用基因蛋白工程和抗體工程技術，利用 無害的細菌來作為"工程菌"，例如"酵母工程菌"(也有不同種類)，或是轉基因動物的 "工程細胞"，然后再運用基因工程技術，將所需"定向類融合蛋白"的目的基因，嵌入 到"工程菌"或是轉基因動物的"工程細胞"的染色體中，使它們能表達生產這些"定 向精確制導型"融合蛋白類生化藥物，這已在"專利說明書"中進行了詳細的介紹，它 說明本專利疫苗完全能夠，并且事實上已被基于基因蛋白工程技術而已開發出來的許多 種融合蛋白的實現,證明實現本專利疫苗所霈要的融合蛋白技術的是有充分的科學依據， 而制造偶聯型疫苗的化學偶聯法，也同樣屬于普通的常規化工技術了，所以說，本方法 發明專利是完全可行的。這是它們的一般制作方法，是屬于不同于機械化生產的個體生 命的生產方法，作為一種方法發明，而不是產品發明，就只能介紹它們的一般制作方法。
全文摘要
本發明涉及一類應用最先進的基因蛋白工程技術和抗體工程技術的“精確定向制導型藥物”的方法發明，是對原方法發明專利“雙聯雙重定位式胞內疫苗”的進一步改進。“復方型雙聯雙重定位式胞內疫苗”是一類“定向類融合蛋白”和“偶聯型疫苗”類藥物，由“定向裝置”和“殺傷裝置”兩部分組成。它的“定向裝置”由“定向類蛋白”，例如“定向類抗體蛋白”構成。它的“殺傷裝置”，既包括抗體蛋白或是限制性內切酶，也包能破壞致癌基因或糾正基因缺陷的核苷酸，以及其它化學合成藥物，例如，AZT(疊氮胸腺嘧啶核苷)，齊多夫定(Zidovudine)，以及其他抗逆轉錄蛋白酶等等。
文檔編號A61P31/00GK101259267SQ200710086430
公開日2008年9月10日 申請日期2007年3月9日 優先權日2007年3月9日
發明者濤 白 申請人:濤 白