一種氨基酸組合物的制作方法

專利名稱：一種氨基酸組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種氨基酸組合物。
背景技術：
現代科學技術的進步，可以使很多疾病得到滿意的治療，但是臨床病人的營養不良卻依然存在，尚占住院病人的50％左右，而且主要表現為蛋白質能量營養不良。
蛋白質是所有生命細胞和體液的主要成分，是維持機體生長、發育和組織修復、更新的物質基礎。氨基酸是組成蛋白質的基本單位，人體正常組成蛋白質的氨基酸有20種。其中包括8種必需氨基酸和12種非必需氨基酸，前者包括異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸，機體不能合成或者合成速率不能滿足需要，必需由食物供給；后者體內可以自行合成，但在疾病、創傷及感染等應激高分解代謝狀態下，一些非必需氨基酸如精氨酸、谷氨酰胺、牛磺酸等，其需要量大大增加，超過了機體的合成能力，使機體含量降低，導致蛋白質合成減少，影響機體免疫功能，尤其在無法進食的條件下，又必需設法給予補充，因此被稱之為條件必需氨基酸。
病人由于胃腸道疾病引起的消化相吸收障礙而造成蛋白質缺乏；或因手術創傷、燒傷而增強蛋白質消耗；或因某些疾病而引起低蛋白血癥；或因在手術前后營養不良須增加氨基酸的供應使體內達到正氮平衡，促進傷口愈合和體力恢復；或因消耗性疾病或癌癥化療引起的食欲降低，需補充蛋白質攝入，補給復合氨基酸就起到了關鍵作用。
病人嚴重創傷之后，容易出現體重持續降低，出現負氮平衡，血漿總蛋白及白蛋白含量下降，同時伴有血漿氨基酸譜的異常改變，小腸粘膜基本組成物質(腸粘膜蛋白)合成受抑、正常結構受損；免疫功能受抑(脾淋巴細胞轉化率及刺激指數降低、胸腺臟器指數下降)；抗氧化能力降低。
以氨基酸為優質氮源的腸內與腸外營養制劑，已成為臨床營養支持療法的兩大重要支柱。隨著對人和動物代謝研究的不斷深入和了解，氨基酸營養制劑的研究工作也不斷發展和進步。例如氨基酸注射液迄今為止已經經歷了四代產品的更迭，從第一代的蛋白質水解液；到第二代的以必需氨基酸為主的復合結晶氨基酸注射液；并隨著對非必需氨基酸在營養上重要性的認識，開發了含多種非必需氨基酸的第三代氨基酸注射液；近年來，隨著支鏈氨基酸研究的進展，又開發出第四代高支鏈氨基酸注射液。但是，市售可以應用于臨床的氨基酸注射液的組成至今尚未完善，在治療危重患者時效能較差。例如臨床上廣泛應用的復方氨基酸注射液(18AA-II)含有18種氨基酸，缺少條件性必需氨基酸谷氨酰胺和牛磺酸。
中國專利99125545.3闡述了谷氨酰胺的重要生理功能及補充的必要性。提出了含有L-谷氨酰胺或至少一種L-谷氨酰胺的寡聚肽的氨基酸組合物的技術方案，該技術方案中，含有16-20種氨基酸，其中乙酰半胱氨酸∶乙酰酪氨酸∶色氨酸比例限制為0.3-0.8∶0.3-0.8∶0.9-1.6。該技術方案組合物能改善創傷大鼠氮平衡，對創傷大鼠在增強免役功能、促進創傷愈合及腸粘膜細胞增值方面有顯著效果。
在現有氨基酸營養理論中，是否單個氨基酸含量的輕微變動都會產生相應的影響還是一個疑問。然而令人意外的是，發明人通過研究氨基酸的復方組合物發現，乙酰半胱氨酸∶乙酰酪氨酸∶色氨酸比例超出0.3-0.8∶0.3-0.8∶0.9-1.6并結合特定比例的其他氨基酸的新氨基酸組合物，與已有技術方案相比(例如中國專利99125545.3所指出的組合物)具有更好的營養支持效果例如減緩應激高分解代謝狀態下動物體重和血漿前白蛋白的降低及使肝損傷得到恢復的作用方面效果更優，而且對改善氨基酸代謝紊亂，抑制分解代謝方面作用也更好。

發明內容
因此本申請提供了一種復方氨基酸組合物，包括下述重量比例的物質

上述組合物優選的重量比例為


上述組合物更優選的重量比例為門冬氨酸4.00、蘇氨酸4.32、絲氨酸5.00、谷氨酸1.60、脯氨酸5.00、甘氨酸3.20、丙氨酸0.60、N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺18.05、纈氨酸9.50、甲硫氨酸3.20、異亮氨酸7.50、亮氨酸13.00、苯丙氨酸3.75、醋酸賴氨酸7.05、組氨酸2.60、精氨酸8.60、乙酰半胱氨酸1.01、乙酰酪氨酸0.92、色氨酸1.08、牛磺酸1.00。
在該組合物的成分中，門冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、醋酸賴氨酸、組氨酸、精氨酸、色氨酸、牛磺酸、乙酰半胱氨酸等在中華人民共和國藥典2005版二部已有收載。乙酰半胱氨酸也稱為N-乙酰-L-半胱氨酸，乙酰酪氨酸也稱為N-乙酰-L-酪氨酸，N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺也稱為L-丙氨酰-L-谷氨酰胺或丙氨酰谷氨酰胺。
所屬領域技術人員根據本發明提出的理論，可以通過本領域的任何手段在本發明所給出的比例范圍內調節制劑中各成分比例而實現本發明，并且可根據本領域的常識在制劑中添加其它輔料組分，如亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、EDTA、枸櫞酸等等人體可接受的常用輔料，或山梨醇、木糖醇、葡萄糖等等糖源。
本發明中所述各物質的活性成分可以以適當的藥學上可接受的鹽或短肽的形式存在，按有效成分換算計算重量比。例如以鹽酸鹽、醋酸鹽等形式存在。又例如其中的活性成分以甘氨酰-L-谷氨酰胺、L-胱氨酰-L-谷氨酰胺、L-酪氨酰-L-谷氨酰胺、L-亮氨酰-L-谷氨酰胺等短肽的形式存在。
一方面，本發明的組合物應用于營養治療或營養支持，改善病人的營養狀況。例如應用于創傷、燒傷、各種外科手術、嚴重感染、腸道菌群移位及各種原因引起的氨基酸代謝失調和低蛋白血癥，提高肌體免疫功能和腸道功能。
另一方面，本發明的組合物應用于制備用于營養治療或營養支持的產品，包括制備通過腸道內、腸道外攝取的營養產品中。通過腸道內攝取的營養產品包括保健食品(可以以固體、膠體、液體或固液混合物等形式存在)和腸道內給藥的藥品。腸道內給藥的藥品包括散劑、顆粒劑、片劑、膠囊等；腸道外給藥的藥品包括注射劑(例如注射用無菌粉末和注射液等)。注射劑直接接觸藥品的內包裝可以是符合藥用要求的瓶、雙腔袋、多腔袋包裝或多層共擠輸液用膜(袋)等合適的包裝。用雙腔袋、多腔袋包裝或多層共擠輸液用膜(袋)包裝時本發明的組合物的各成分可以置于同一腔(層)，也可以分置于不同腔(層)中；本發明的組合物的各成分可以部分或全部以固體的形式存在，也可以部分或全部溶解于水等適宜的溶劑中。
所屬領域技術人員根據本發明提出的理論，可以通過本領域的任何手段實現本發明。
下面的實施例將更為詳細的說明本發明，但并非對本發明構成限制。
實施例對比實施例1復方氨基酸注射液(18AA-II)每1000ml含組氨酸5.00g，脯氨酸5.00g，精氨酸8.40g，異亮氨酸4.20g，絲氨酸3.40g，門冬氨酸2.50g，亮氨酸5.90g，蘇氨酸4.20g，胱氨酸0.20g，醋酸賴氨酸9.50g，色氨酸1.40g，谷氨酸4.20g，甲硫氨酸4.20g，酪氨酸0.20g，甘氨酸5.90g，苯丙氨酸5.90g，纈氨酸5.50g。
對比實施例2(中國專利99125545.3實施例5配方)氮氣保護下，將門冬氨酸4.0g、蘇氨酸5.4g、絲氨酸5.0g、谷氨酸1.6g、脯氨酸5.0g、甘氨酸1.9g、N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺18.2g、纈氨酸9.5g、甲硫氨酸4.3g、異亮氨酸7.5g、亮氨酸13.0g、苯丙氨酸3.8g、賴氨酸5.0g、組氨酸2.6g、精氨酸8.6g、乙酰半胱氨酸0.8g、乙酰酪氨酸0.8g、色氨酸1.1g、牛磺酸1.0g，亞硫酸氫鈉0.5g于注射用水中溶解并定容至1000ml，過濾，灌裝于250ml的輸液瓶中，加塞加蓋，加熱滅菌，冷卻得注射液。
實施例1氮氣保護下，將門冬氨酸4.00g、蘇氨酸4.32g、絲氨酸5.00g、谷氨酸1.60g、脯氨酸5.00g、甘氨酸3.20g、丙氨酸0.60g、N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺18.05g、纈氨酸9.50g、甲硫氨酸3.20g、異亮氨酸7.50g、亮氨酸13.00g、苯丙氨酸3.75g、醋酸賴氨酸7.05g、組氨酸2.60g、精氨酸8.60g、乙酰半胱氨酸1.01g、乙酰酪氨酸0.92g、色氨酸1.08g、牛磺酸1.00g，亞硫酸氫鈉0.5g于注射用水中溶解并定容至1000ml，過濾，灌裝于250ml的輸液瓶中，加塞加蓋，加熱滅菌，冷卻得注射液。
發明人進行的多種藥效試驗顯示本發明具有良好的營養支持作用，而且多方面優于已有技術方案。在以實施例1及對比實施例1注射液經全靜脈營養給藥對短腸綜合癥大鼠試驗中，在反映機體免疫功能一些的指標(胸腺指數、外周血T淋巴細胞轉化率及刺激指數、CD4+/CD8+比值)上，實施例1給藥組動物與對比實施例1給藥組動物相比均顯著增高(結果見表1)，表明本發明能夠更為明顯的提高機體免疫機能。
表1免疫功能的指標變化

與實施例1相比，★P＜0.05下面通過對嚴重燒傷Beagle犬的藥效試驗詳細說明本發明的營養支持效果。
(一)動物模型制作及分組為英國純種成年Beagle犬，體重8.5-10.5Kg，經單籠、專門配方飼料，適應性飼養半月，經訓練和檢查后分組試驗。
英國純種成年Beagle犬背部以20％硫化鈉脫毛劑脫毛，按cowgiell-Dralking公式計算，確定每只犬的燒傷區及面積。每只動物麻醉后，以3％凝固汽油涂抹在試驗區，周圍以濕棉布覆蓋，點火燃燒50秒鐘，造成全身體表面積30％深III°燒傷。按嚴重燒傷補充營養的途徑趨向于腸內營養為主，腸外營養為輔的綜合治療原則。設計將動物按體重、性別隨機分為3組對比實施例1組(輸與復方氨基酸注射液(18AA-II))，對比實施例2組(輸與對比實施例2注射液)和實施例1組(輸與實施例注射液)。每組均為7只(雌3雄4)，每天每10Kg體重輸入的注射液等能量氮源(217.6KJ)，各組腸內營養為相同配方飼料，每只犬攝入200g/d。
(二)治療及創面處理復蘇各組于燒傷第一個24小時按晶膠體1∶1進行相同靜脈補液；第二個24小時復蘇量為第一個24小時的半量，按各組設置1/2劑量進行輸液，并自由飲水和進食等量1/2常量腸內營養；第三天起恢復等量全量腸內營養飲食，并同時靜脈輸入各設置組營養供給量，直至21天。
燒傷后各組動物創面以2.5％碘酒涂抹，4次/天，創面破潰后，視具體情況，以鹽水清洗后再改涂碘伏4次/天。若有連續2天發熱不退者，肌肉或靜脈輸注慶大霉素。燒傷動物從第七天起每天給予清創，視創面具體情況，到傷后16天全部清除燒傷創面。
(三)數據及統計學處理實驗結果以平均數(x)±標準差(s)表示。計量資料比較采用Student t檢驗及方差分析，P＜0.05具有統計學意義。
(四)營養支持評價結果1、體重的變化從各組體重的變化數據，可見實施例1組對維持燒傷Beagle犬體重效果優于對比實施例1組和對比實施例2組傷后21天各組平均體重顯著降低，但對比實施例1組和對比實施例2組降低程度高于實施例1組。
表2實驗Beagle犬燒傷后體重的變化(x±s)(Kg)

與傷前比較，★★P＜0.012、肝功能表3各組血漿ALT濃度的變化表明燒傷可致Beagle犬肝臟早期有所損傷，實施例1組使肝損傷得到恢復的作用一定程度上比對比實施例1組和對比實施例2組好傷后7天實施例1組與傷前已無顯著差異，而對比實施例1組和對比實施例2組兩組仍較傷前顯著升高(P＜0.05)。
表3實驗Beagle犬燒傷后血漿ALT的變化(x±s)(μ/L)

與傷前比較，★P＜0.05，★★P＜0.013、小腸功能傷后3天血漿D-乳酸濃度于各組均有不同程度的升高，僅對比實施例2組有顯著性差別(P＜0.01)，其余各時相點除在21天時對比實施例1組有顯著升高(P＜0.01)外，對比實施例2和實施例1組均無變化(表4)。表明較長時間采用對比實施例1注射液制劑治療有可能使燒傷Beagle犬的腸道通透性增加，產生腸道菌群移位感染的危險。而對比實施例2組和實施例1組有利于維持燒傷Beagle犬治療過程中腸道的通透性，防止腸道菌群移位感染。
表4實驗Beagle犬燒傷后血漿D-乳酸的變化(x±s)(μg/ml)

與傷前比較，★P＜0.05，★★P＜0.014、營養指標的變化實施例1注射液制劑對抑制燒傷Beagle犬血漿前白蛋白(PreA)的降低作用明顯優于對比實施例1和對比實施例2(P＜0.05)從傷后3天起，各組測試結果雖均較各自傷前值顯著降低(P＜0.05-0.01)，但14天和21天時實施例1組血漿前白蛋白要明顯高于對比實施例1和對比實施例2組(P＜0.05-0.01)。
表5實驗Beagle犬燒傷后血漿前白蛋白(PreA)的變化(x±s)(g/L)

與傷前比較，★P＜0.05，★★P＜0.01。與實施例1比較，*P＜0.05，**P＜0.01傷后各組全血血紅蛋白、血漿總蛋白(TP)與血漿白蛋白(ALB)傷后均呈顯著降低且各組間并無顯著差別。但盡管如此，21天時對比實施例2和實施例1組比對比實施例1組全血血紅蛋白降低幅度少8％(表6)。
表6實驗Beagle犬燒傷后全血血紅蛋白的變化(x±s)(g/L)

與傷前比較，★P＜0.05，★★P＜0.01。
5、血漿的氨基酸變化從以下各組血漿的氨基酸變化，可見實施例1注射液制劑對于糾正燒傷后Beagle犬血漿氨基酸代謝的紊亂，優于對比實施例1和對比實施例2注射液制劑。
對比實施例1組Beagle犬燒傷后21天血漿總氨基酸含量仍顯著降低(P＜0.05-0.01)，共有門冬氨酸、絲氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、賴氨酸、組氨酸、精氨酸和脯氨酸等11種氨基酸出現代謝紊亂(含量降低/升高)。
對比實施例2組血漿總氨基酸含量在傷后21天仍顯著降低(P＜0.05-0.01)，共有10種氨基酸出現代謝紊亂(含量降低/升高)。
實施例1組犬傷后21天總氨基酸含量達到傷前水平；僅有4種氨基酸出現代謝紊亂(含量降低/升高)。
表7對比實施例1組Beagle犬燒傷后血漿氨基酸的變化(x±s)(μmol/L)

與傷前比較，★P＜0.05，★★P＜0.01。
表8對比實施例2組Beagle犬燒傷后血漿氨基酸的變化(x±s)(μmol/L)

與傷前比較，★P＜0.05，★★P＜0.01。
表9實施例1組Beagle犬燒傷后血漿氨基酸的變化(x±s)(μmol/L)

與傷前比較，★P＜0.05，★★P＜0.01。
6、24小時尿尿素氮含量實驗結果說明實施例1注射液制劑對抑制燒傷Beagle犬的分解代謝明顯優于對比實施例1和對比實施例2注射液制劑傷后3天對比實施例1組排出量顯著高于實施例1組(P＜0.05)；傷后14天和21天對比實施例2組排出量較實施例1組顯著升高(P＜0.05)。
表10實驗Beagle犬24小時尿尿素氮含量變化(x±s)(g/L)

與傷前比較，★P＜0.05，★★P＜0.01。與實施例比較，*P＜0.05。
綜上實驗結果所述，與對比實施例2及目前市售被認為具有良好營養支持治療作用的復方氨基酸注射液(18AA-II)相比，本發明的組合物不但在治療中對減緩燒傷犬體重降低和血漿前白蛋白的降低及使肝損傷得到恢復的作用方面效果更優，而且對改善燒傷后的氨基酸代謝紊亂，抑制燒傷后的分解代謝方面作用也更好。此外保護腸屏障功能方面本發明的組合物也優于復方氨基酸注射液(18AA-II)。因而表明本發明的組合物較已有技術方案有著更好的營養支持效果。
權利要求
1.一種氨基酸組合物，其特征在于包括下述重量比例的物質，各物質的活性成分可以以適當的藥學上可接受的鹽或短肽的形式存在
2.根據權利要求1所述的氨基酸組合物，其特征在于包括下述重量比例的物質，各物質的活性成分可以以適當的藥學上可接受的鹽或短肽的形式存在
3.根據權利要求2所述的氨基酸組合物，其特征在于包括下述重量比例的物質，各物質的活性成分可以以適當的藥學上可接受的鹽或短肽的形式存在門冬氨酸4.00、蘇氨酸4.32、絲氨酸5.00、谷氨酸1.60、脯氨酸5.00、甘氨酸3.20、丙氨酸0.60、N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺18.05、纈氨酸9.50、甲硫氨酸3.20、異亮氨酸7.50、亮氨酸13.00、苯丙氨酸3.75、醋酸賴氨酸7.05、組氨酸2.60、精氨酸8.60、乙酰半胱氨酸1.01、乙酰酪氨酸0.92、色氨酸1.08、牛磺酸1.00。
4.權利要求1至3任意一項的組合物在制備用于營養治療或營養支持的產品的應用。
5.根據權利要求4所述的應用，其中所述的產品是藥品。
6.根據權利要求5所述的應用，其中所述的藥品是注射劑。
7.根據權利要求4-6任意一項所述的應用，其中營養治療或營養支持是用于治療和改善氨基酸代謝失調和低蛋白血癥，提高肌體免疫功能和腸道功能。
8.根據權利要求7所述的應用，其中所述的氨基酸代謝失調和低蛋白血癥是由創傷、燒傷、各種外科手術、嚴重感染或腸道菌群移位引起的。
全文摘要
一種氨基酸組合物，其中乙酰半胱氨酸∶乙酰酪氨酸∶色氨酸重量比例為0.81－2∶0.81－2∶0.9－1.6，可提供比較完全的必需和非必需氨基酸，具有良好的營養支持效果。
文檔編號A61P37/04GK101049500SQ200710080248
公開日2007年10月10日 申請日期2007年2月15日 優先權日2007年2月15日
發明者陳定, 劉烽, 林韶輝 申請人:北京蘇里曼醫藥科技有限公司