專利名稱：：一種抗炎、止痛、解痙和免疫調節藥物及制備方法
技術領域：
：本發明涉及一種藥物，具體地說是一種用于抗炎、止痛、解痙和免疫調節的組合藥物及制備方法。
背景技術：
：現有的用于抗炎、止痛、解痙和免疫調節的藥物大都是西藥，而且需要不同的藥物來治療，一種藥物無法達到目的，西藥雖有很好的療效，但都不程度給人體帶來副作用。
發明內容本發明的目的就是提供一種用于抗炎、止痛、解痙和免疫調節的藥物。本發明的另一個目的就是提供上述藥物的制備方法。本發明藥物的技術方案是由白芍提取物和甘草提取物按1:1的重量比混合而成。本發明藥物的制備方法如下1、首先制取白芍提取物，取粉碎后的白芍，加入8倍量80%的乙醇，回流提取三次，每次2小時，合并提取液，提取液用石油醚萃取三次后將乙醇層濃縮，噴霧干燥，即得白芍提取物(提取物2)。2、制取甘草提取物，取粉碎后的甘草，加入8倍量0.5%氨水，回流提取三次，每次1小時，合并提取液，將提取液減壓濃縮至生藥量的0,5倍體積，將濃縮液的PH值調至2，靜置24小時，過濾，將濾得的沉淀物水洗至中性，噴霧干燥，得甘草提取物(提取物3)。3、將上述所得的白芍提取物和甘草提取物混合均勻，即得本發明的藥物(提取物4)。另外，本發明的藥物制備方法也可以通過如下工藝進行。按l:1的比例分取粉碎后的白芍和甘草，充分混合后加入8倍量80%的乙醇，回流提取三次，每次2小時，合并提取液，將提取液減壓濃縮至干，得白芍甘草混合提取物(提取物l)。本發明具有用處廣、療效好等特點。本發明療效的實驗過程和結果如下抗炎作用-對CIA動物模型的療效比較1.動物選擇重20g左右的DBA雄性小鼠50只。2.方法50只小鼠隨機分成為5組，每組IO只。(l)正常組普通飼料喂養；(2)造模組采用II型膠原免疫法(Collagan-InducedArhtititis.CIA)制成關節炎模型；(3)提取物l組在造模l周后，按200mg(約含白芍總苷16mg,甘草酸10mg)/kg/d的劑量，持續4周灌胃給服提取物1。(4)提取物2組在造模1周后，按40mg(約含白芍總苷16mg)/kg/d的劑量，持續4周灌胃給服提取物2，(5)提取物4組在造模1周后，按80mg(約含白芍總苷16mg，甘草酸16mg)/kg/d的劑量，持續4周灌胃給服提取物4。上述5組均在造模后第7天起用游標測微尺測量小鼠右踝關節腫脹程度，每周測1次。造模5周(給藥4周)后各組動物均行頸推接脫處死，取膝、踝、肘、腕關節，10%福爾馬林固定，5%硝酸脫鈣、酒精逐級脫水，二甲苯透明，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察其病理學改變。3.結果(l)各組踝關節腫脹程度比較造模前5組踝關節平均值相近，有可比性，造模后(給藥前)，各造模級動物踝關節與正常組相比均有顯著差異，說明造模組動物踝關節均有不同程度腫脹。給藥4周后，提取物1組、提取物2組和提取物4級與給藥前相比，關節腫脹程度均有顯著性的改善，其中提取物4的改善程度最大，其次是提取物1和提取物2(見表1)。表l各組小鼠踝關節腫脹程度比較(X±S)組別鼠數踝關節腫脹(mm)給藥前給藥4周正常102.75±0.202.85±0.22造模104.01±0.424.20±0.18提取物2104.08±0.183.96±0.18*提取物1104.05±0.363.90±0.28*提取物4104.11±0.303.62土0.12**表示與給藥前相比，有顯著差異(P0.05),**表示與給藥前相比，有極顯著差異(PO,Ol)(2)病理學改變造模組動物造模5周后，小鼠關節內均出現明顯滑膜細胞增生，可見大量的淋巴細胞浸潤，關節軟骨組織腫脹，排列不規則，結果表明造模組關節滑膜炎癥、關節軟骨破壞壞死。提取物1組與造模組比較，滑膜細胞增生不明顯，滑膜組織中血管充血、水腫較輕，只見少量的淋巴細胞浸潤，關節軟骨表現為扁平剝脫，呈點狀或小片狀、或淺層之關節軟骨肥大缺損，滑膜與軟骨連接區未見明顯改變，說明該組滑膜炎癥、關節軟骨損傷均較造模組明顯為輕。提取物2組與造模組比較，滑膜細胞增生，滑膜組織中淋巴細胞浸潤程度均較造模組為輕，關節軟骨主要顯示為扁平剝脫，未見明顯關節軟骨缺損。說明滑膜炎癥有所控制，關節軟骨的腡傷輕微。提取物4組與造模組比較，滑膜細胞增生不明顯，滑膜細胞中只有少數散在淋巴細胞、關節軟骨表面光滑，部分動物關節軟骨可見輕度扁平剝脫，未見關節軟骨缺損，說明該組滑膜炎癥輕微，關節軟骨損傷不明顯。以上的實驗結果提示提取物1、提取物2和提取物4方對CIA關節炎模型均有一定的良性影響，均可明顯抑制滑膜細胞的增生。但三者有區別，提取物2和提取物4抑制滑膜細胞增生的效果更為明顯一些。而與提取物2相比，提取物4對軟骨損傷有更好的保護作用。由于滑膜細胞增生和軟骨破壞是類風濕性關節炎的重要表現，上述提取物在抑制滑膜細胞增生和減緩軟骨損傷方面的表現揭示其在治療類風濕性關節炎方面的前景。鎮痛實驗-小鼠扭體法小鼠80只，隨機分為4組，(l)空白對照組；(2)提取物1組；(3)提取物2組；(4)提取物4組。其中提取物l組、提取物2組和提取物4組的給藥方式和給藥劑量同實施例2中所述，在給藥2h后，腹腔注射0.6%醋酸(0.21111只)觀察每只小鼠20min內因疼痛引起的扭體次數。(見表2)結果表明:提取物1、提取物2和提取物4組小鼠扭體次數明顯少于空白對照組，與空白對照組比較有顯著性差異，揭示上述提取物對化學原因引起的疼痛鎮痛作用顯著。(見表2)。表2小鼠醋酸致痛扭體實驗<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*表示與對照組相比，有顯著差異(P0.05)，**表示與對照組相比，有極顯著差異(P〈0.01)鎮痛實驗-熱板法用55±0.5。C熱板儀上，選測出正常痛閾均值在20-30秒之間的80只敏感鼠進行實驗。將80只敏感鼠隨機分為空白對照組、提取物1組、提取物2組和提取物4組。給藥每組20只。其中提取物l組、提取物2組和提取物4組的給藥方式和給藥劑量同實施例2中所述，給藥0,5h后，將小鼠置熱板儀上進行測試觀察其痛閾變化。結果見表3。由表3的數據可見，提取物l、提取物2和提取物4與空白對照組相比，均顯著提高小鼠的反應時間，顯示三個提取物均有明顯的鎮痛效果。其中提取物4其熱反應時間明顯比提取物1和2均要高一些，而提取物l和提取物2之間的差異并不明顯。上述結果表明上述提取物對物理因素引起的疼痛鎮痛作用顯著。表3提取物對小鼠熱反應時間的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*表示與對照組相比，有顯著差異(P0.05)，**表示與對照組相比，有極顯著差異(PO.Ol)解痙作用參照文獻1和文獻2方法制備家兔離體腸段，觀察正常腸肌運動，待舒縮穩定后，描記一段腸肌正常運動曲線。給乙酰膽堿致腸肌痙攣向麥氏洛槽內滴入0.1。/。乙酰膽堿0.2ml，引起腸肌痙攣并描記下其運動曲線。然后換臺氏液沖洗。給藥:各組受試腸段分別給予生理鹽水、10%提取物1，2°/。提取物2和5%的提取物4藥液0.2ml，然后同前給予乙酰膽堿，觀察藥物對腸肌運動的影響并描記其運動曲線。將給藥前后的腸肌運動情況作以對比，并對實驗數據進行統計學處理。結果見表4。表4提取物對乙酰膽堿致家兔離體腸平滑肌痙攣的抑制作用(X土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*表示與對照組相比，有顯著差異(P〈0.05)，**表示與對照組相比，有極顯著差異(PO.Ol)由表4中的數據可見，提取物1、提取物2和提取物4均可顯著抑制乙酰膽堿引起的家兔離體平滑肌痙攣，顯示上述提取物對平滑肌具有良好的解痙作用。所述文獻[l]是2001年人民衛生出版社出版的藥理實驗方法學第3版所述文獻[2]是1993年人民衛生出版社出版的中藥藥理研究方法學免疫調節作用健康成年Wistar大鼠100只，雌雄各半。隨機分為對照組、模型組、提取物l組、提取物2組和提取物4組等5組，每組20個小鼠。后4組每只大鼠分別于右足墊皮內注射弗氏完全佐劑0.05ml造模型，并觀察其炎癥反應；于第15天開始提取物l組、提取物2組和提取物4組的給藥方式和給藥劑量同實施例2中所述，連續給藥兩周，對照組和模型組給予等容積的生理鹽水，觀察提取物對大鼠佐劑性關節炎的影響。大鼠致敏后第14天和第28天根據局部和全身病變及體質量三項指標觀察評價藥物的作用，主要觀察左足爪的腫脹度，全身病變(按0-4五級評分法0分無紅腫、l分小趾關節稍腫，2分趾關節和足趾腫脹明顯，3分踝關節以下的足爪腫脹，4分包括踝關節在內的全部足爪腫脹，最高分為4分。結果見表4。表4提取物對佐劑性關節炎大鼠多發性關節炎的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>a表示與對照組相比有顯著差異(P0.05),b表示與對照組相比有極顯著差異(P〈0.01)，*表示與模型組相比，有顯著差異(P〈0.05)，**表示與模型組相比，有極顯著差異(PO.Ol)由表4可看出，在造模后，大鼠的體質量明顯下降，關節的腫漲極為顯著。而提取物l、提取物2和提取物4均可顯著增加造模大鼠的體重，關節的腫漲與造模組及服用提取物前相比也得到了極為顯著的改善，提示提取物1、提取物2和提取4對于治療佐劑性關節炎，均有顯著療效。其中從表中變可看出，與提取物1和提取物2相比，提取物4在增加造模大鼠質量方面并無明顯優勢，但對大鼠腫脹關節的改善卻更為顯著。于第28天末次給藥后4h后將各組大鼠用3。/。的戊巴比妥0.3ml/kg麻醉，頸總動脈取血，放置20min,以3000r/min離心，取血清放低溫冰箱備用。取白細胞介素l、白細胞介素2、白細胞介素6和腫瘤壞死因子-oc測定試劑盒，按各試劑盒說明精確測定各組大鼠血清中白細胞介素和腫瘤壞死因子的含量。結果見表5。表5提取物對佐劑性關節炎大鼠血清細胞因子含量的影響組別白細胞介素1(mg/L)白細胞介素2()白細胞介素6("g/L)腫瘤壞死因子ot對照組0.36±0.074.90±0.7183.6±4.700.81±0.06模型組0.45±0.025.47±0.31a140.15±13.9a0.92±0.09提取物1組0.25±0.03*4.25±0.37*107.52±6.25*0.71±0.13*提取物2組0.24±0.02*3.81±0.45*96.32±4.4"0.64±0.16*提取物4組0.21±0.03*3.70±0.51*89.06±7.24**0.57±0.06*a表示與對照組相比有顯著差異(P0.05)，b表示與對照組相比有極顯著差異(PO.Ol)，*表示與模型組相比，有顯著差異(P0.05)，**表示與模型組相比，有極顯著差異(PO.Ol)從表5中可見，與造模組相比，提取物l、提取物2和提取物4均顯著降低大鼠血清中白細胞介素l、白細胞介素2、白細胞介素6和腫瘤壞死因子oc的水平。由于上述細胞因子是大鼠免疫水平的重要指標，從上述結果不難得出，提取物l、提取物2和提取物4有顯著的免疫抑制作用。由于類風濕性疾病的主要原因就是免疫紊亂，尤其是部分組織器官免疫的異常亢進，上述結果提示了提取物在治療類風濕性疾病的前景。權利要求1.一種抗炎、止痛、解痙和免疫調節藥物，其特征是由白芍提取物和甘草提取物按1∶1的重量比混合而成。2、一種制備權利要求1所述的藥物的工藝，其特征是首先制取白芍提取物，取粉碎后的白芍，加入8倍量80%的乙醇，回流提取三次，每次2小時，合并提取液，提取液用石油醚萃取三次后將乙醇層濃縮，噴霧干燥，即得白芍提取物；制取甘草提取物，取粉碎后的甘草，加入8倍量0.5%氨水，回流提取三次，每次1小時，合并提取液，將提取液減壓濃縮至生藥量的0.5倍體積，將濃縮液的PH值調至2，靜置24小時，過濾，將濾得的沉淀物水洗至中性，噴霧干燥，得甘草提取物；將上述所得的白芍提取物和甘草提取物混合均勻，即得本發明的藥物。3、一種制備權利要求1所述的藥物的工藝，其特征是按l:l的比例分取粉碎后的白芍和甘草，充分混合后加入8倍量80%的乙醇，回流提取三次，每次2小時，合并提取液，將提取液減壓濃縮至干，得白芍甘草混合提取物。全文摘要本發明提供一種抗炎、止痛、解痙和免疫調節藥物及制備方法，由白芍提取物和甘草提取物按1∶1的重量比混合而成，所述白芍提取物是由乙醇回流提取而得，所述甘草提取物是由氨水回流提取而得，本發明具有用處廣、療效好等特點。文檔編號A61P37/02GK101264142SQ20071007770公開日2008年9月17日申請日期2007年3月15日優先權日2007年3月15日發明者戎周,周海濱,陳旦鳳申請人:寧波立華制藥有限公司