專利名稱：一種從丹皮中獲得丹皮酚和芍藥苷的制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥領域，具體而言是涉及從中藥丹皮中經過提取、精制，分步獲得丹皮酚和芍藥苷的制備方法。
背景技術：
目前，在全球范圍內，中草藥都有一定的市場，隨著人們對健康要求認識水平的增高以及人口的老齡化，亞健康狀態化，人們更加渴望回歸自然，利用純天然程度高的藥物治療、預防一些化學合成藥物所不能解決得問題，因此天然植物藥的應用超出它原來民族傳統文化的背景。從天然藥物中尋求副作用小、且物美價廉的藥物成為世界各國醫藥企業所追逐的目標。歐共體對草藥進行了統一立法，加拿大和澳大利亞等國草藥地位已經合法化，美國政府也已起草了植物藥管理辦法，開始接受天然藥物的復方混合制劑作為治療藥，這些為中藥作為治療藥進入國際醫藥市場提供了良好的國際環境。另一方面，隨著全球經濟一體化進程的加快，特別是我國正式加入WTO，中國醫藥市場融入國際醫藥大市場的廣度和深度將進一步加劇。面臨強大跨國醫藥集團的激烈競爭以及日本、韓國、印度、泰國等亞洲國家傳統醫藥產品和德國、法國等歐洲國家植物藥的巨大沖擊，我國傳統中藥產生的眾多產品由于尚不能符合國際醫藥市場的標準和要求而被拒之門外。
丹皮，為毛莨科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮，分布河北、河南、山東、四川、陜西、甘肅等地。全國各地均有栽培，藥材主產安徽、是我國傳統常用中藥材，其性微寒，味辛苦，涼，入心、肝、腎經，具有清熱，涼血，和血，消瘀的功效。丹皮炮制最早見于我國梁代陶宏景所撰《集注》中，認為“皆促破，去心。”《本草綱目》等醫書中記載“丹皮木心不入藥，需去之。”丹皮酚和芍藥苷是丹皮里兩種主要的活性物質。現代醫學研究證明丹皮酚具有抑菌抗炎、鎮痛、解熱、解痙、抗過敏、活血、化淤、增強免疫功能等作用，在醫藥、香料、化學領域具有廣泛的用途，例如牙膏、香皂、浴液、生發液、醫用消毒紙、婦女、嬰兒衛生用品、食品添加劑、飼料添加劑等。芍藥苷具有鎮痛、鎮靜、保肝、抗炎、免疫調節、擴張血管、改善學習記憶行為等活性，可治療類風濕性關節炎、肝炎和老年性相關疾病等。
目前，從丹皮中提取丹皮酚的專利、文獻報道不多，為了提高得率，往往采用超臨界等較為繁瑣的方法，需要一定規模的儀器設備，限制了在工業生產中的應用。且目前沒有方法報道從丹皮中同時獲得丹皮酚和芍藥苷兩種物質，在一定程度上造成了原料的浪費，因此，建立一種能夠從藥材中同時獲取這兩種主要物質的方法尤為重要。
發明內容
本發明的目的在于提供一種從丹皮中獲得丹皮酚和芍藥苷的制備方法。
本發明的丹皮酚和芍藥苷的制備方法，包括用水蒸氣蒸餾法獲得丹皮酚，藥渣加醇水提取，提取液用大孔吸附樹脂柱分離獲得芍藥苷這幾個步驟。
本發明通過以下技術方案實現(1)丹皮飲片用水浸泡去除雜質，烘干，用水蒸氣蒸餾法提取，收集蒸餾液，冷凍后融化即過濾，獲得丹皮酚晶體；(2)藥渣加醇水提取，提取液減壓濃縮富集；(3)濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用水沖洗，再用0％-30％濃度含水乙醇純化，再用20％-70濃度含水乙醇解析液洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮至無醇，冷凍干燥，即得芍藥苷部分。
其中步驟(1)中，飲片浸泡時間為10-48小時，蒸餾液體積為8-15倍量，蒸餾液冷凍時間為4-10小時。優選丹皮飲片浸泡時間為15-36小時，蒸餾液體積為10-12倍量，蒸餾液冷凍時間為6-8小時。最佳為飲片浸泡時間為24小時，蒸餾液體積為12倍量，蒸餾液冷凍時間為8小時。
步驟(2)中，乙醇濃度為30％-95％，溶劑用量8-15倍量，加熱提取1-3次，每次0.5-2小時。優選乙醇濃度為50％-80％，溶劑用量10-12倍量，加熱提取1-2次，每次0.5-1小時。最佳乙醇濃度為70％，溶劑用量10倍量，加熱提取2次，每次0.5小時。
步驟(3)中，純化后洗脫體積為1-4個柱體積(BV)，解析后洗脫體積為3-6 BV。優選純化液乙醇濃度為10％-20％，洗脫體積為2-3 BV，解析液乙醇濃度為30％-50％，洗脫體積為4-5柱體積。最佳為純化液乙醇濃度為20％，洗脫體積為3 BV，解析液乙醇濃度為40％，洗脫體積為4 BV。
依本發明的方法制成的丹皮酚和芍藥苷，可制成任何一種藥劑學上所說的劑型，也可配合其他藥物或組分一起制成制劑使用。
提取獲得的丹皮酚和芍藥苷與制劑允許的藥物賦形劑或載體組合制備成制劑，其形式包括液體制劑、顆粒劑、片劑、氣霧噴劑、凍干粉針劑、滴劑或膠丸。
本發明方法的有益之處為(1)通過本發明所述方法能從丹皮藥材中分步得到丹皮酚和芍藥苷，對藥材進行了最大程度的利用。
(2)本方法能使用較為簡單的方法獲取純度較高的丹皮酚，同時，芍藥苷在純化時選用D201型大孔樹脂，有效地解決了其他樹脂不能將丹皮中的鞣質與芍藥苷分離的問題，大大提高了芍藥苷的純度。首次建立從丹皮中同時獲得丹皮酚和芍藥苷的方法。
(3)本發明所述方法以有效成分得率和浸膏得率為指標進行綜合評價，避免了一味追求有效成分含量高，而造成浸膏得率很低，難以滿足工業化生產的要求。
(4)本發明設計合理，低成本、易操作、穩定性好、適于產業化。
圖1為丹皮酚230nm液相色譜圖。
圖2為芍藥苷230nm液相色譜圖。
具體實施例方式
本發明結合實施例作進一步的說明。下述各實施例僅用于說明本發明而并非對本發明的限制。
實施例一取丹皮飲片500kg，50℃干燥6小時，加水浸泡24小時，回流提取，收集蒸餾液至12倍量(6L)，-4℃冷凍8小時，取出融化后馬上抽濾，不溶物即為丹皮酚。藥渣加10倍量70％乙醇水溶液微沸狀態加熱回流提取2次，每次0.5小時，提取液過濾，合并，減壓濃縮至1g/mL(生藥量)，上D201大孔樹脂(0.2-0.6g生藥材/g濕樹脂)。用4BV去離子水沖洗，棄去，繼續用4BV 20％乙醇水溶液純化，棄去，再用4BV 40％乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至無醇，冷凍干燥，即得芍藥苷部分。經液相測定，丹皮酚的藥材提取率為2.06％，芍藥苷的藥材提取率是0.32％。
實施例二取丹皮飲片500kg，50℃干燥6小時，加水浸泡10小時，回流提取，收集蒸餾液至8倍量(4L)，-4℃冷凍4小時，取出融化后馬上抽濾，不溶物即為丹皮酚。藥渣加10倍量30％乙醇水溶液微沸狀態加熱回流提取1次，每次0.5小時，提取液過濾，合并，減壓濃縮至1g/mL(生藥量)，上D201大孔樹脂(0.2-0.6g生藥材/g濕樹脂)。用2BV去離子水沖洗，棄去，繼續用3BV 10％乙醇水溶液純化，棄去，再用3BV 30％乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至無醇，冷凍干燥，即得芍藥苷部分。經液相測定，丹皮酚的藥材提取率為1.89％，芍藥苷的藥材提取率是0.30％。
實施例三取丹皮飲片500kg，50℃干燥6小時，加水浸泡15小時，回流提取，收集蒸餾液至12倍量(6L)，-4℃冷凍6小時，取出融化后馬上抽濾，不溶物即為丹皮酚。藥渣加8倍量50％乙醇水溶液微沸狀態加熱回流提取2次，每次0.5小時，提取液過濾，合并，減壓濃縮至1g/mL(生藥量)，上D201大孔樹脂(0.2-0.6g生藥材/g濕樹脂)。用3BV去離子水沖洗，棄去，繼續用3BV 20％乙醇水溶液純化，棄去，再用3BV 50％乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至無醇，冷凍干燥，即得芍藥苷部分。經液相測定，丹皮酚的藥材提取率為1.92％，芍藥苷的藥材提取率是0.31％。
實施例四取丹皮飲片500kg，50℃干燥6小時，加水浸泡48小時，回流提取，收集蒸餾液至15倍量(7.5L)，-4℃冷凍10小時，取出融化后馬上抽濾，不溶物即為丹皮酚。藥渣加15倍量95％乙醇水溶液微沸狀態加熱回流提取3次，每次0.5小時，提取液過濾，合并，減壓濃縮至1g/mL(生藥量)，上D201大孔樹脂(0.2-0.6g生藥材/g濕樹脂)。用3BV去離子水沖洗，棄去，繼續用3BV 30％乙醇水溶液純化，棄去，再用4BV 60％乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至無醇，冷凍干燥，即得芍藥苷部分。經液相測定，丹皮酚的藥材提取率為1.98％，芍藥苷的藥材提取率是0.29％。
實施例五 丹皮酚及芍藥苷的含量測定(1)實施例一中丹皮酚的含量測定(高效液相色譜法)色譜條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；采用等度洗脫，流動相A相為水，流動相B相為乙腈；流動相A為55％、流動相B為45％等度洗脫；流速1.0mL·min-1；檢測波長230nm；柱溫30℃；進樣量5μL。
供試品溶液的制備稱取本品，用甲醇溶液溶解在容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定方法精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，結果參見圖2，其中1表示丹皮酚。
(2)實施例一中芍藥苷的含量測定色譜條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；采用等度洗脫，流動相A相為水，流動相B相為乙腈；流動相A為85％、流動相B為15％等度洗脫；流速1.0mL·min-1；檢測波長230nm；柱溫30℃；進樣量5μL。
供試品溶液的制備稱取本品，用甲醇溶液溶解存容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定方法精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，結果參見圖2，其中1表示芍藥苷。
實施例六 滴丸的制備取實施例一的丹皮酚0.5g與10.5g聚乙二醇-6000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸滴灌中，藥液滴至6～8℃液體石蠟中，除油，制得滴丸300粒。
實施例七 凍干粉針劑的制備取降香油1.5g，加入到13ml飽和的羥丙基β-環糊精中，攪拌溶解，濾過，濾液低溫干燥得降香油和羥丙基β-環糊精的包合物粉末。除上述降香油合羥丙基β-環糊精的包合物粉末外，再取實施例一的芍藥苷0.5g、甘露醇5.5g、依地酸鈣鈉0.9g和蒸餾水2ml，上述組分混勻后，冷凍干燥，分裝350支，即得。
實施例八 片劑的制備取實施例一中芍藥苷適量與微晶纖維素混合均勻，加3％聚維酮乙醇溶液制軟材，過18目篩制顆粒，60℃干燥1小時，整粒，加入滑石粉適量，混勻，壓片，即得。
實施例九 膠囊的制備取實施例一中芍藥苷與花生油按2∶18的比例水溶式不銹鋼攪拌灌中，同時加入適量明膠和甘油混合，放出再用膠體磨磨漿，磨出的混合液攪拌，制成藥液；將甘油與蒸餾水在40-50℃溫度下攪拌混溶，再將甘油液溫至80-90℃，取明膠加入其中混合攪拌，直至全部溶化成膠液，然后在60℃溫度下使膠液靜置4小時，用制板機制成膠板供制丸工序使用；將上述制成的藥液和膠板送入壓丸機制丸，然后在22-25℃溫度下吹風4小時作滾筒定型，又在25-30℃溫度下吹風干燥16-20小時，檢選合格膠丸，用95％乙醇清洗，在25-30℃下吹風干燥4小時，即得。
實施例十 注射液的制備取實施例一中芍藥苷適量用40℃注射用水溶解，加入適量藥用載體等滲劑，調節溶液的pH值為7.0-8.0，加注射用水至全量，用超濾器超濾除熱源，測定pH值后，用膜過濾，分裝后，高壓滅菌，檢驗、包裝，即得。
權利要求
1.一種從丹皮中獲得丹皮酚和芍藥苷的制備方法，其特征是通過以下步驟實現(1)丹皮飲片用水浸泡去除雜質，烘干，用水蒸氣蒸餾法提取，收集蒸餾液，冷凍后融化即過濾，獲得丹皮酚晶體；(2)藥渣加醇水提取，提取液減壓濃縮富集；(3)濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用水沖洗，再用0％-30％濃度含水乙醇純化，再用20％-70濃度含水乙醇解析液洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮至無醇，冷凍干燥，即得芍藥苷部分。
2.根據權利要求1所述的從丹皮中獲得丹皮酚和芍藥苷的制備方法，其特征是步驟(1)中丹皮飲片浸泡時間為10-48小時，蒸餾液體積為8-15倍量，蒸餾液冷凍時間為4-10小時。
3.根據權利要求1所述的從丹皮中獲得丹皮酚和芍藥苷的制備方法，其特征是步驟(2)中醇水溶液提取兩次，乙醇濃度為30％-95％，溶劑用量8-15倍量，加熱提取1-3次，每次0.5-2小時。
4.根據權利要求1所述的從丹皮中獲得丹皮酚和芍藥苷的制備方法，其特征是步驟(3)中采用D201型大孔樹脂。
5.根據權利要求1或4所述的從丹皮中獲得丹皮酚和芍藥苷的制備方法，其特征是步驟(3)中純化后洗脫體積為1-4個柱體積，解析后洗脫體積為3-6柱體積。
6.根據權利要求1所述的從丹皮中獲得丹皮酚和芍藥苷的制備方法，其特征是提取獲得的丹皮酚和芍藥苷與制劑允許的藥物賦形劑或載體組合制備成制劑，其形式包括液體制劑、顆粒劑、片劑、氣霧噴劑、凍干粉針劑、滴劑或膠丸。
全文摘要
一種從丹皮中獲得丹皮酚和芍藥苷的制備方法，將丹皮飲片用水浸泡后，蒸餾法提取，獲得丹皮酚晶體；再將藥渣用醇水溶液提取，提取液減壓濃縮富集；用大孔吸附樹脂分離提取液，獲得芍藥苷。本發明從丹皮藥材中分步得到丹皮酚和芍藥苷，對藥材進行了最大程度的利用。用D
文檔編號A61K36/185GK101085728SQ20071006998
公開日2007年12月12日 申請日期2007年7月11日 優先權日2007年7月11日
發明者賀慶, 葛志偉, 程翼宇, 水文波, 竇靜 申請人:浙江大學