專利名稱：4'－去甲表鬼臼毒素衍生物及制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明屬有機化合物的合成方法，涉及一種4’-去甲表鬼臼毒素衍生物及制備方法，主要涉及4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物及制備方法，以及在制備抗腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
依托泊苷是天然產物鬼臼毒素的半合成衍生物，作為一類高抗腫瘤活性的糖苷化合物，廣泛用于睪丸癌，淋巴癌，白血病，非小細胞肺癌、急性粒細胞白血病等癌癥的臨床治療。
依托泊苷作為Topo II抑制劑發揮抗腫瘤作用。由于Topo II是細胞周期依賴性酶，又是P170糖蛋白的良好底物，所以與Topo I相比，腫瘤細胞對Topo II更易產生耐藥性；此外，癌細胞是從正常細胞轉化而來，兩類細胞的差異并不顯著，依托泊苷在殺死癌細胞的同時，對體內的正常細胞，特別是分裂較快的骨髓和腸黏膜細胞等有損害作用，產生骨髓抑制、中性粒細胞減少、惡心、肺透明膜病及改變正常的呼吸功能等毒副作用，從而抑制了用藥量，阻礙了藥物療效的發揮。所以對依托泊苷進行結構改造，克服耐藥性，降低毒副作用成為該類化合物抗腫瘤化學治療得以繼續的關鍵。
發明內容
本發明的目的是提供一種4’-去甲表鬼臼毒素衍生物，化學名為4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物，具有如下的結構通式 其中R取代基為氨基化合物，a-h為氨基雜環取代基，i-n為鏈狀取代基
R＝a時，目標化合物IIIa為4β-[N-(4H-1，2，4-三唑-4基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝b時，目標化合物IIIb為4β-[N-(6-氨基吡啶-2基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝c時，目標化合物IIIc為4β-[N-(2-氯吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝d時，目標化合物IIId為4β-[N-(5，6-二苯基-1，2，4-三嗪-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝e時，目標化合物IIIe為4β-[N-(1H-吲哚-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝f時，目標化合物IIIf為4β-[N-(咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝g時，目標化合物IIIg為4β-[N-(9H-嘌呤-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝h時，目標化合物IIIh為4β-[N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝i時，目標化合物IIIi為4β-(4-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝j時，目標化合物IIIj為4β-(3-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝k時，目標化合物IIIk為4β-[4-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝1時，目標化合物IIIl為4β-[3-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝m時，目標化合物IIIm為4β-[4-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝n時，目標化合物IIIn為4β-[3-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素。
本發明的另一個目的是提供4’-去甲表鬼臼毒素衍生物的制備方法，通過以下步驟實現將依托泊苷(化合物I)與碘化鈉(NaI)反應發生4位碘代，得到中間體4β-碘代-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物II)，此步反應所用的溶劑為二氯甲烷，催化劑為三甲基氯硅烷(TMSCl)，反應在室溫條件下進行。攪拌約1小時后，加入碳酸鋇(BaCO3)，并以三乙胺(Et3N)調節反應體系至pH 7-8，然后加入R＝a-n的另一個原料氨基化合物(RNH2)，繼續室溫反應8-10小時，得到化合物IIIa-n。所得的產物經制備層析可得純產物。
本發明的合成路線 本發明的又一個目的是提供4’-去甲表鬼臼毒素衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應用。初步的體外篩選發現它們對多種腫瘤細胞株，包括K562、KB、KB-R、A549、U251等均有抑制增殖作用，絕大部分產物顯示出較依托泊苷更強的細胞毒活性，尤其是對依托泊苷的耐藥腫瘤細胞株KB-R，除化合物IIIc外，其他產物的細胞毒活性較依托泊苷有顯著性提高，約提高10-1000倍。
總的來看，鏈狀取代基產物(IIIi-n)較氨基雜環取代基產物(IIIa-h)有更高的細胞毒活性，證實該類基團(i-n)的長度合適，有利于抗腫瘤活性的提高。在氨基雜環取代基產物(IIIa-h)中，雙雜環產物(IIIe-h)的細胞毒活性較單雜環產物(IIIa-d)更強，說明4位大體積取代基有利于抗腫瘤活性的提高。在鏈狀取代基產物(IIIi-n)中，取代基是以雜環通過一個碳原子與苯胺進行取代，對位取代(IIIi，IIIk，IIIm)較間位取代(IIIj，IIIl，IIIn)有更強的細胞毒活性；取代基中的雜環對細胞毒活性的影響為哌啶雜環(IIIm，IIIn)＞吡咯烷雜環(IIIk，IIIl)＞二乙胺(IIIi，IIIj)。
本發明的特點是以依托泊苷為原料，在依托泊苷的4位上進行氨基化合物的取代，合成抗耐藥性的4’-去甲表鬼臼毒素衍生物(IIIa-n)，與鬼臼毒素為原料的方法相比較，避免了4位表異構化和4’位去甲基化。該類化合物經初步的藥理活性篩選試驗表明絕大多數化合物對腫瘤細胞有體外抑制作用，尤其是針對依托泊苷的耐藥株KB-R，細胞毒活性與母體化合物依托泊苷相比有顯著提高，說明這類雜環的引入能克服依托泊苷的耐藥性缺陷是成功的，可降低毒副作用。本方法操作簡便，產率較高。
具體實施例方式
本發明結合實施例和附圖
作進一步的說明。以下的實施例是說明本發明的，而不是以任何方式限制本發明。
實施例14β-[N-(4H-1，2，4-三唑-4基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIa)的制備將依托泊苷88mg(0.15mmol)與碘化鈉90mg(0.6mmol)溶于1.5mL無水乙腈中，室溫攪拌；另將干燥的三甲基氯硅烷76μL溶于1.5mL無水乙腈中，將此溶液緩慢滴加到反應液中，室溫攪拌1小時，得到中間體4β-碘代-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物II)，反應液中加無水碳酸鋇90mg(0.45mmol)，攪拌10分鐘，加入無水三乙胺數滴至反應液呈堿性，加入3-氨基-4H-1，2，4-三唑(0.18mmol)，室溫攪拌8-10小時，抽濾，濾液減壓濃縮，殘留物少量二氯甲烷溶解，制備層析純化，得到黃色固體IIIa 54mg，收率78％。熔點123-127℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.32(s，1H，triazole-H)8.04(brs，2H，4’-OH，4-NH)，6.86(s，1H，H-5)，6.60(s，1H，H-8)，6.24(s，2H，H-2’，H-6’)，5.98(m，2H，OCH2O)，5.67(brs，1H，NH)，5.39(brs，1H，H-4)，4.48(m，1H，H-1)，4.32(m，1H，H-11a)，4.00(m，1H，H-11b)，3.64(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.34(m，1H，H-2)，3.05(m，1H，H-3).
實施例24β-[N-(6-氨基吡啶-2基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIb)的制備操作過程與實施例1同，只是用2，6-二氨基吡啶代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIb 62mg，收率84％。熔點131-135℃。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.27(brs，1H，4’-OH)，7.05(t，J＝8.0Hz，1H，pyridine-H)，6.83(s，1H，H-5)，6.52(s，1H，H-8)，6.45(d，J＝8Hz，1H，4-NH)，6.26(s，2H，H-2’，H-6’)，5.97(d，J＝11.6Hz，2H，OCH2O)，5.69(dd，J＝17.6，8.0Hz，2H，pyridine-H)，5.45(brs，2H，NH2)，5.37(m，1H，H-4)，4.50(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.34(t，J＝7.8Hz，1H，H-11a)，3.74(m，1H，H-11b)，3.64(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.26(dd，J＝14.4，5.2Hz，1H，H-2)，2.91(m，1H，H-3).
實施例34β-[N-(2-氯吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIc)的制備操作過程與實施例1同，只是用2-氯-3-氨基吡啶代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIc 61mg，收率80％。熔點129-134℃。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.84(brs，1H，4’-OH)，7.27(s，1H，pyridine-H)，7.17(m，1H，pyridine-H)，6.84(m，1H，pyridine-H)，6.74(s，1H，H-5)，6.59(s，1H，H-8)，6.34(s，2H，H-2’，H-6’)，5.99(m，2H，OCH2O)，4.69(m，2H，H-4，4-NH)，4.57(m，1H，H-1)，4.36(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.87(m，1H，H-11b)，3.80(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.15(dd，J＝14.4，5.2Hz，1H，H-2)，3.07(m，1H，H-3).
實施例44β-[N-(5，6-二苯基-1，2，4-三嗪-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIId)的制備操作過程與實施例1同，只是用3-氨基-5，6-二苯基-1，2，4-三嗪代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIId 43.5mg，收率46％。熔點135-138℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.32(s，1H，4’-OH)，7.40(m，8H，Ph-H)，7.01(d，J＝7.2Hz，2H，Ph-H)，6.96(s，1H，H-5)6.61(s，1H，H-8)，6.30(m，3H，H-2’，H-6’，4-NH)，6.02(s，2H，OCH2O)，4.64(d，J＝5.2Hz，1H，H-4)，4.50(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，4.26(m，1H，H-1)4.12(m，1H，H-11b)，3.66(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.48(m，2H，H-2，H-3).
實施例54β-[N-(1H-吲哚-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIe)的制備操作過程與實施例1同，只是用6-氨基-1H-吲哚代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIe 36mg，收率46％。熔點136-139℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ12.40(brs，1H，NH)，7.77(s，1H，indole-H)，7.42(d，J＝8.0Hz，1H，indole-H)，6.80(s，1H，H-5)，6.63(dd，J＝8.4，1.6Hz，1H，H-8)，6.57(m，2H，indole-H)，6.30(m，3H，indole-H，H-2’，H-6’)，5.98(d，J＝8.0Hz，2H，OCH2O)，4.93(m，1H，H-4)，4.55(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.35(m，1H，H-11a)，3.75(t，J＝9.2Hz，1H，H-11b)，3.64(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.37(m，1H，H-2)，3.06(m，1H，H-3).
實施例64β-[N-(咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIf)的制備操作過程與實施例1同，只是用8-氨基-咪唑并[1，2-a]吡啶代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIf 35mg，收率45％。熔點132-137℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.30(s，1H，4’-OH)，7.85(m，2H，heterocyclic-H)，7.40(s，1H，4-NH)，6.79(s，1H，H-5)，6.72(t，J＝7.2Hz，1H，heterocyclic-H)，6.56(s，1H，H-8)，6.32(d，J＝7.2Hz，1H，heterocyclic-H)，6.28(s，2H，H-2’，H-6’)，5.97(m，3H，OCH2O，heterocyclic-H)，5.09(m，1H，H-4)，4.51(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.43(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.74(m，1H，H-11b)，3.65(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.57(dd，J＝14.8，5.2Hz，1H，H-2)，3.06(m，1H，H-3).
實施例74β-[N-(9H-嘌呤-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIg)的制備操作過程與實施例1同，只是用6-氨基-9H-嘌呤代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIg 45mg，收率58％。熔點134-138℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ12.15(brs，1H，adenine-NH)，8.54(brs，1H，4’-OH)，7.93(s，1H，adenine-H)，7.52(s，1H，adenine-H)，6.96(s，1H，H-5)，6.86(s，1H，H-8)，6.20(s，2H，H-2’，H-6’)，5.95(s，1H，OCH2O)，5.87(s，1H，OCH2O)，5.42(brs，2H，H-4，4-NH)，5.00(m，H-11a)，4.41(m，2H，H-1，H-11b)，3.78(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.06(m，1H，H-2)，2.98(m，1H，H-3).
實施例84β-[N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIh)的制備操作過程與實施例1同，只是用3-氨基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIh 63mg，收率82％。熔點135-138℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.15(s，0.65H，4’-OH)，8.52(d，J＝4.0Hz，1H，heterocyclic-H)，7.89，(d，J＝4.0Hz，1H，heterocyclic-H)，7.04(m，1H，heterocyclic-H)，6.86(s，1H，H-5)6.57(s，1H，H-8)，6.36(s，2H，H-2’，H-6’)，5.97(d，J＝6.4Hz，2H，OCH2O)，5.25(brs，1H，H-4)，4.63(d，J＝4.8Hz，1H，H-1)，4.47(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，4.31(m，1H，4-NH)，3.96(t，J＝8.0Hz，1H，H-11b)，3.80(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.19(dd，J＝14.0，5.2Hz，1H，H-2)，3.06(m，1H，H-3)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.88，170.39，152.70，149.01，148.32，147.19，146.51，134.71，131.88，131.66，130.38，129.82，113.97，109.53，109.26，108.50，101.18，94.15，72.41，69.85，67.69，56.02，50.35，43.00，41.22，37.84.
實施例94β-(4-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIi)的制備操作過程與實施例1同，只是用4-二乙胺基甲基苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIi 71.4mg，收率85％。熔點101-103℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20(d，J＝8.0Hz，2H，Ph-H)，6.78(s，1H，H-5)，6.52(m，3H，Ph-H，H-8)，6.33(s，2H，H-2’，H-6’)，5.96(d，J＝6.8Hz，2H，OCH2O)，4.67(m，1H，H-4)，4.58(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.38(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.99(t，J＝8.0Hz，1H，H-11b)，3.88(m，1H，4-NH)，3.76(m，6H，3’，5’-OCH3)，3.56(s，2H，N-CH2-Ph)，3.15(m，1H，H-2)，3.00(m，1H，H-3)，2.61(m，4H，CH2CH3)，1.10(t，J＝6.8Hz，6H，CH2CH3).
實施例104β-(3-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIj)的制備操作過程與實施例1同，只是用3-二乙胺基甲基苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIj 70mg，收率84％。熔點99-102℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.19(m，1H，Ph-H)，6.76(m，2H，H-5，Ph-H)，6.61(m，1H，Ph-H)，6.53(s，1H，H-8)，6.47(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H，Ph-H)，6.33(s，2H，H-2’，H-6’)，5.96(d，J＝7.6Hz，2H，OCH2O)，4.65(m，1H，H-4)，4.59(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.37(m，1H，H-11a)，3.96(m，2H，H-11b，4-NH)，3.79(m，6H，3’，5’-OCH3)，3.50(m，2H，N-CH2-Ph)，3.22(m，1H，H-2)，3.01(m，1H，H-3)，2.64(m，4H，CH2CH3)，1.36(m，6H，CH2CH3)實施例114β-[4-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIk)的制備操作過程與實施例1同，只是用4-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIk 53mg，收率63％。熔點95-99℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.27(brs，1H，4’-OH)，7.22(d，J＝8.4Hz，2H，Ph-H)，6.75(s，1H，H-5)，6.69(d，J＝8.4Hz，2H，Ph-H)，6.53(s，1H，H-8)，6.25(s，2H，H-2’，H-6’)，5.97(d，J＝10.8Hz，2H，OCH2O)，4.89(m，1H，H-4)，4.51(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.34(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.98(m，2H，H-11b，4-NH)，3.65(m，8H，3’，5’-OCH3，N-CH2-Ph)，3.13(dd，J＝14.4，4.8Hz，1H，H-2)，3.00(m，1H，H-3)，2.16(m，2H，pyrrolidine-H)，2.03(m，2H，pyrrolidine-H)，1.25(s，4H，pyrrolidine-H).
實施例124β-[3-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIl)的制備操作過程與實施例1同，只是用3-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIl 53mg，收率63％。熔點97-102℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.12(m，2H，Ph-H)，6.78(s，1H，H-5)，6.58(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H，Ph-H)，6.50(s，1H，H-8)，6.45(d，J＝8.0Hz，1H，Ph-H)，6.33(s，2H，H-2’，H-6’)，5.95(d，J＝8.4Hz，2H，OCH2O)，4.74(m，1H，H-4)，4.57(d，J＝4.8Hz，1H，H-1)，4.37(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.95(m，2H，H-11b，4-NH)，3.78(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.58(s，2H，N-CH2-Ph)，3.13(dd，J＝14.0，5.2Hz，1H，H-2)，3.00(m，1H，H-3)，2.17(m，4H，pyrrolidine-H)，1.25(s，4H，pyrrolidine-H)實施例134β-[4-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIm)的制備操作過程與實施例1同，只是用4-(1-哌啶基甲基)-苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIm 66mg，收率77％。熔點94-99℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.21(d，J＝8.8Hz，2H，Ph-H)，6.78(s，1H，H-5)，6.51(m，3H，Ph-H，H-8)，6.33(s，2H，H-2’，H-6’)，5.96(d，J＝7.2Hz，2H，OCH2O)，4.74(m，1H，H-4)，4.58(d，J＝5.6Hz，1H，H-1)，4.37(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.96(m，2H，H-11b，4-NH)，3.78(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.54(m，2H，N-CH2-Ph)，3.15(dd，J＝13.6，5.2Hz，1H，H-2)，3.01(m，1H，H-3)，1.47(m，6H，piperidine-H)，1.25(td，J＝7.2，1.2Hz，2H，piperidine-H)，0.92(td，J＝7.2，3.2Hz，2H，piperidine-H).
實施例144β-[3-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIn)的制備操作過程與實施例1同，只是用3-(1-哌啶基甲基)-苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIn 64mg，收率75％。熔點95-100℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.14(t，J＝8.0Hz，1H，Ph-H)，6.80(s，1H，H-5)，6.70(m，2H，Ph-H)，6.52(s，1H，H-8)，6.46(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H，Ph-H)，6.34(s，2H，H-2’，H-6’)，5.95(d，J＝7.6Hz，2H，OCH2O)，4.74(t，J＝4.8Hz，1H，H-4)，4.58(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.41(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.97(m，2H，H-11b，4-NH)，3.79(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.49(m，2H，N-CH2-Ph)，3.15(dd，J＝14.0，5.0Hz，1H，H-2)，3.24(m，1H，H-3)，1.47(m，8H，piperidine-H)，1.26(t，J＝7.2Hz，1H，piperidine-H)，0.92(td，J＝7.2，1.6Hz，1H，piperidine-H).
實施例154β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物對不同腫瘤細胞的體外抑制作用1.實驗材料細胞株人白血病細胞株K562、人口腔表皮癌細胞株KB及其耐藥株KB-R、人肺癌細胞株A549、人神經膠質瘤U251。
培養基HG-DMEM培養基或RPMI1640培養基，含10％小牛血清或胎牛血清。
藥物及配制藥物為4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物IIIa-n，藥物溶于DMSO，并按一定比例稀釋得到5個濃度。
2.實驗方法將上述處于對數生長期的腫瘤細胞，以2×104個/ml接種于96孔培養板中，每孔加細胞懸液200μl，在培養24h后，分別加入上述配制的藥液1μl，每個濃度設3個復孔。細胞在37℃，5％CO2培養箱中孵育48小時后，加入濃度為2.5mg/ml的MTT溶液20μl，繼續培養4小時。吸去上清液，加入100μlDMSO搖勻，用酶標儀于570nm波長下測定各孔的OD值，細胞抑制率的計算公式為細胞抑制率％＝(對照組OD值-用藥組OD值)/對照細胞OD值×100％用Bliss法求出IC50。
3.實驗結果4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物作用48小時后，分別測定IC50值。結果表明，絕大多數化合物對5種腫瘤細胞有較依托泊苷更強的細胞毒活性，其中IC50值小于10μg/ml有化合物IIIa-h、IIIj-n對人白血病細胞株K562；化合物IIIa、IIIe、IIIg-n對人口腔表皮癌細胞株KB；化合物IIIi、IIIk-n對人肺癌細胞株A549；化合物IIId、IIIf、IIIk-n對人神經膠質瘤U251。針對依托泊苷的耐藥株人口腔表皮癌耐藥細胞株KB-R，化合物IIIa、IIIe-i、IIIk-n的IC50值小于10μg/ml，除化合物IIIc外，其他化合物的細胞毒活性較依托泊苷有顯著性提高(10-1000倍)。它們對腫瘤細胞的體外抑制作用結果參見表1。
綜合測試此類化合物對不同腫瘤細胞的體外抑制作用，化合物IIIk-n對依托泊苷耐藥株KB-R的抑制作用最顯著，細胞毒活性明顯比依托泊苷強，達到了克服依托泊苷耐藥性效果。
表1 4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物作用48小時對腫瘤細胞的體外抑制作用。
權利要求
1.一種4’-去甲表鬼臼毒素衍生物，化學名為4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物，其特征是具有以下結構通式 其中R為氨基化合物，a-h為氨基雜環取代基，i-n為鏈狀取代基
2.根據權利要求1所述的4’-去甲表鬼臼毒素衍生物，其特征是目標化合物IIIa為4β-[N-(4H-1，2，4-三唑-4基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝a；目標化合物IIIb為4β-[N-(6-氨基吡啶-2基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝b；目標化合物IIIc為4β-[N-(2-氯吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝c；目標化合物IIId為4β-[N-(5，6-二苯基-1，2，4-三嗪-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝d；目標化合物IIIe為4β-[N-(1H-吲哚-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝e；目標化合物IIIf為4β-[N-(咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝f；目標化合物IIIg為4β-[N-(9H-嘌呤-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝g；目標化合物IIIh為4β-[N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝h；目標化合物IIIi為4β-(4-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝i；目標化合物IIIj為4β-(3-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝j；目標化合物IIIk為4β-[4-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝k；目標化合物IIIl為4β-[3-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝l；目標化合物IIIm為4β-[4-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝m；目標化合物IIIn為4β-[3-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝n。
3.根據權利要求1所述的4’-去甲表鬼臼毒素衍生物的制備方法，其特征是通過一下步驟實現將依托泊苷與碘化鈉反應發生4位碘代，得到化合物II的中間體4β-碘代-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，此步反應所用的溶劑為二氯甲烷，催化劑為三甲基氯硅烷，反應在室溫條件下進行，攪拌約1小時后，加入碳酸鋇，并以三乙胺調節反應體系至pH 7-8，然后加入R＝a-n的氨基化合物原料，繼續室溫反應8-10小時得到目標化合物IIIa-n。
4.根據權利要求1所述的4’-去甲表鬼臼毒素衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供一類4’－去甲表鬼臼毒素衍生物IIIa－n，是以依托泊苷為原料，將其與碘化鈉反應發生4位碘代，得到中間體II，攪拌后加入碳酸鋇，調節反應體系至pH7－8，然后加入另一個原料氨基化合物，繼續室溫反應8－10小時，得到目標化合物IIIa－n。本發明方法避免了4位表異構化和4’位去甲基化，操作簡便，產率高。本發明提供的化合物IIIa－n對多種腫瘤細胞株有較強的體外抑制作用，其中絕大多數的細胞毒活性大于母體化合物依托泊苷，尤其是針對依托泊苷的耐藥細胞株KB－R，細胞毒活性較依托泊苷有顯著性提高，并降低毒副作用。結構通式為上式。
文檔編號A61K31/403GK101074233SQ200710069640
公開日2007年11月21日 申請日期2007年6月22日 優先權日2007年6月22日
發明者胡永洲, 杜文婷, 何俏軍, 楊波, 楊曉春 申請人:浙江大學