專利名稱：：一種用于牲畜的益生活菌微膠囊制劑及其制備方法
技術領域：
：本發明屬于微生物制劑
技術領域：
，涉及一種用于牲畜的益生活菌微膠嚢制劑及其制備方法，同時也涉及活菌微膠嚢制劑的制備方法。
背景技術：
：1965年Lilley和Stillwell首先使用益生素(Probiotics)，將其定義為、、由一種微生物分泌，刺激另一種微生物生長的物質"。1974年，Parker認為、、益生素是維持腸道內微生物平衡的微生物物質〃.益生菌克服了非營養性添加劑特別是抗生素帶來的負面效應，它是無污染、無殘留、抗疾病、促進動物生長的天然添加劑，在飼料工業中得到了廣泛的應用。一般認為益生菌就是指能夠在生物體(主要是人和動物)內存活，對宿主的生命健康有益的一類微生物，一般把益生菌活菌制劑或含有微生物培養物的微生物制劑稱作益生素。從上個世紀初人們就開始認識到微生物及其產物能夠對機體產生影響，并且從細菌、真菌、酵母等微生物中篩選得到了許多被認為是益生菌的微生物。益生菌主要用于維持動物體內微生態系統的平衡，即在幼齡家畜尚未建立起良好的腸道微生物區系的情況下，使用益生菌減少動物生產損失；益生菌還能夠部分替代抗菌藥物,通過幫助恢復動物體內微生態系統的平衡，達到治療動物疾病的目的。目前常用的益生菌有乳酸菌、凝結芽孢桿菌等，其有益效果在于1、對動物的營養作用乳酸菌能合成動物體所需的多種維生素，如硫胺素、核黃素、尼克酸、吡哆醇、泛酸、葉酸、維生素B12等。估計，盲腸上的微生物可提供動物維生素需要量的25%~30°/a，可基本滿足機體對維生素的需要。乳酸菌產生的揮發性脂肪酸為大腸粘膜代謝提供了能源，也使腸道pH值和氧化還原電勢降低，有利于礦物質鈣、鐵、鎂、鋅等的吸收。2、抑制病原菌的繁殖乳酸菌產生的乳酸、乙酸等酸性產物可抑制病原菌生長繁殖。乳酸菌能產生類細菌素物質，對病原菌有抑制作用。嗜酸乳桿菌產生的分子量為3500的肽，可以抑制大腸桿菌DM的合成，可抑制一系列革蘭氏陽性和陰性病原體的生長。嗜酸乳桿菌可以產生11202，抑制葡萄球菌等致病菌的生長繁殖，還能產生雙乙酰，這種化合物對許多病原菌有抑制作用。芽孢桿菌在其生長過程中能夠產生乙酸、丙酸、丁酸等揮發性脂肪酸，這些酸類能夠降低動物腸道pH值，可有效抑制病原菌生長。產生少量抗菌物質一桿菌肽，對有害微生物起抑制和殺滅作用。芽孢桿菌可以消耗大量的氧，維持腸道厭氧環境，抑制致病菌生長，平衡穩定乳酸菌的作用，維持腸道正常生態平衡。3、提高動物免疫力用乳酸桿菌發酵產物飼喂斷奶仔豬，仔豬血清中IgG水平明顯升高。4、凝結芽孢桿菌的特點和作用表現在穩定性好。耐酸、耐鹽、耐高溫(10(TC)及耐擠壓，在制粒過程中及通過酸性胃環境均能保持高度穩定性，能產生維生素。芽孢桿菌在生長繁殖過程中能夠產生Bl、B2、B6等B族維生素和維生素C、維生素K,為動物提供維生素。產生多種消化酶凝結芽孢桿菌具有分泌很強的蛋白酶、脂肪酶及淀粉酶活性，從而可補充腸道內源酶的不足。還能產生植酸酶，促進動物對植酸磷的利用和對脂肪的消化吸收。產生的氨基氧化酶及分解硫化氫的酶類，可將巧l哚類氧化成無毒、無害的物質，從而降低畜禽舍內氨氣、硫化氫的濃度和臭味，減少環境污染。關于菌體微膠嚢的研究，是近年來迅速發展的先進技術，它以自己獨特的優點廣泛地應用于許多領域。20世紀80年代就有研究者進行了乳酸菌的微膠嚢化探索，Pranee用海藻酸鈉作為壁材對乳酸菌進行微膠嚢化，所得的微膠嚢用于乳酸的生產，生產性能良好，且這種乳酸菌微膠嚢可以重復使用。目前國外有關實驗室報道可以利用乳酸菌微膠嚢化細胞進行混合益生菌發酵劑，酸奶，胞外多糖，乳酸，細菌素的生產。
發明內容本發明的一個目的在于提供由凝結芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、乳酸乳桿菌、糞鏈球菌和載體按不同配比組合的益生活菌微膠嚢制劑。本發明另一個目的在于，公開了益生活菌微膠嚢制劑的制備方法，采用生物發酵的方法，經微膠囊制備，然后冷凍干燥制成活菌微膠嚢，然后再按照不同動物及不同生長階段配比混合均勻，制成活菌微膠嚢制劑成活菌微膠嚢制劑。本發明再一個目的在于公開了益生活菌微膠嚢制劑在治療動物消化道疾病藥物方面的應用。包括治療幼畜腹瀉、痢疾藥物方面的應用。其中所述的幼畜主要指仔豬、仔雞、幼年奶牛等等，同時也可以是成年豬、成雞、成年奶牛。本發明還一個目的在于公開了益生活菌微膠嚢制劑在作為伺料添加劑預防幼畜腹瀉和增加抵抗力方面的應用。為達到上述目的，本發明所采用的技術方案一種用于牲畜的益生活菌微膠嚢制劑，其特征在于它是由芯材、按各單菌的菌懸液、包埋材料和載體組成；其中菌懸液與芯材的重量份數比為1:2;芯材與菌懸液所形成的混合液與包埋材料的體積比為1:3;各單菌的菌懸液為凝結芽孢桿菌，嗜酸乳桿菌，植物乳桿菌，乳酸乳桿菌和糞鏈球菌；活菌含量分別為嗜酸乳桿菌微膠嚢》1.0xl0'cfu/g;植物乳桿菌微膠嚢>1.0x10'cfu/g;凝結芽孢桿菌微膠嚢》1.0x109cfu/g;乳酸乳桿菌微膠嚢>1.0x10'cfu/g;糞鏈球菌微膠嚢>1.0x10'cfu/g。本發明所述的活菌微膠嚢制劑，其中所述的芯材為1:1的微孔淀粉與乳糖(重量份數比)混合物；包埋材料為3-4%的海藻酸鈉溶液；氯化鈣的濃度為3-4%水溶液；載體為1-1.5份玉米蛋白。本發明所述的活菌微膠嚢制劑，其特征在于所述活菌制劑的活菌總含量為1.0x109cfu/g以上，微膠嚢直徑為1~2mm。本發明所述活菌微膠囊制劑的制備方法，按如下步驟進行(1)斜面菌種培養各菌種使用相應培養基并加入1.5-2.5%瓊脂，在30-40t:條件下靜止培養20-48小時，放入4'C冰箱保存；(2)液體一級種子培養為搖瓶培養，取250ml三角瓶加入種子培養基50-100ml,取斜面種子菌種1環，接入培養基中30-40X:,100-220r/minpm,培養30h;(3)液體二級培養1QL自動種子發酵罐，裝種子培養基5-8L,接重量5-10°/。，30-4(TC，攪拌速度50-100轉/分鐘，培養30h;(4)各發酵罐單菌林純培養條件溫度25-4(TC，通風量9-13m7h，罐壓0.02-0.09MPa，接種量1.5-7.5%,時間19-72小時，發酵液活菌數達到10s-109cfu/ml;各菌種的發酵培養基(g/L):嗜酸乳桿菌胰蛋白胨2.5-7.5g,蛋白胨5-15g，葡萄糖5-15g，，乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉4-10gpH7.0;糞鏈球菌蛋白胨10-30g，牛肉膏10-30g，乳糖10-30g,pH6.8±0.2;凝結芽孢桿菌蛋白胨5-15g,酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g，MgS0r7H200.5-1.5g，K2HP041—3g，M跳50ug，pH7.0;植物乳桿菌蛋白胨5-15g,牛肉膏5-15g，酵母膏3-7g,葡萄糖15-25g，檸檬酸二鈉1.5-3.5g，K2HP0J-3g，醋酸鈉2.5-7.5g，MgS04.7H20l-3g，MnS04.4H200.Olg吐溫10ml,pH6.0-6.5;乳酸乳桿菌胰蛋白胨3.5-6.5g，蛋白胨7.5-12.5g,葡萄糖7.5-12.5g，，乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉5-9g，pH7.0;(5)活菌微膠嚢的制備采用連續高速離心機離心收集上述各菌體，加入無菌水配制成1.0x10"cfu/mL菌懸液，然后加入微孔淀粉與乳糖(1:1W/W)混合物，比例為1:2V/W，均勻攪拌100-200r/min30-60min;最后加入3-4%海藻酸鈉無菌溶液比例為1:3V/V，通過膠嚢自動發生器將微粒滴入3-4%無菌氯化鈣溶液中，固化1-2h，制成活菌微膠嚢；(6)過濾收集活菌微膠嚢，-5(TC預凍2-3h，真空冷凍干燥，制得干燥的活菌微膠嚢；(7)活菌計數測定干燥的活菌微膠嚢活菌含量為1.0xio9cfu/g以上，含水量低于8%;微膠嚢直徑為l-2mm。(8)將制得的活菌微膠嚢加入l-l.5份載體玉米蛋白，然后按不同牲畜需求量配伍配比混合均勻，制成活菌微膠嚢制劑，作為飼料添加劑，或作為治療腹瀉的獸藥。其中的活菌微膠囊由下述重量份數的益生活菌微膠嚢組成凝結芽孢桿菌微膠嚢0.5-1份；嗜酸乳桿菌微膠嚢1~1.8份；植物乳桿菌微膠囊1-1.5份；乳酸乳桿菌微膠囊0.5-1.5份；糞鏈球菌微膠嚢Q.5-1份；其中各組分的活菌含量分別為嗜酸乳桿菌微膠嚢》1.0xio'cfu/g;植物乳桿菌微膠嚢>1.Ox10'cfu/g;凝結芽孢桿菌微膠嚢>1.Ox109cfu/g;乳酸乳桿菌微膠嚢>1.Ox10'cfu/g;糞鏈球菌微膠嚢>1.Oxl0'cfu/g。現有的益生菌活菌制劑，一般來說菌體都沒有經過微膠嚢包埋，只是加入保護劑，凍干成粉，直接包裝為飼料添加劑，或用一般的硬殼膠嚢包裝，沒有經過微膠嚢化的菌粉直接包裝，制作成大膠嚢。這里所用的一般的膠嚢壁材，使得益生菌在腸道內不能迅速釋放，定殖，不利于抑制有害菌的生長，從而不能有效地調節機體腸道菌群的平衡；或者，在胃里釋放，因為菌體未經微膠嚢化，所以很快被胃液中的酸，消化酶，抗生素滅活，不能順利地到達腸道，而微膠嚢化的益生菌可以有效解決胃酸，消化酶和抗生素等對活性菌引起的滅活的問題，使益生菌順利地到達腸道并且立即釋放和定殖。本發明進一步公開了益生活菌微膠囊制劑在作為飼料添加劑預防幼畜腹瀉和增加抵抗力方面的應用。下面是針對不同動物的益生活菌微膠嚢制劑配比(表1)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>成年奶牛1.50.50.實驗結果作為飼料添加劑預防和增加抵抗力用法益生活菌微膠嚢制劑以日糧重量的0.1-0.2%加入到仔雞日糧中，仔雞出殼后第二-三天開始祠喂至第15天停止。益生活菌微膠嚢制劑以日糧重量的0.02-0.04%加入到仔豬日糧中，仔豬出生后第五天開始飼喂，連續飼喂服用20至30天。將益生活菌微膠嚢制劑以日糧中粉狀精飼料重量的0.03-0.06%加入到牛犢曰糧中，從牛犢出生后第七天開始，連續服用30至40天。顯著提高幼畜體質，腹瀉癥狀和白痢等患病率明顯低于對照組。(表2)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本發明進一步公開了益生活菌微膠嚢制劑在治療動物消化道疾病藥物方面的應用。包括治療幼畜腹瀉、痢疾藥物方面的應用。腹瀉治療用量發現黃、白痢疾及腹瀉癥狀后，仔雞按每公斤體重IOOO毫克益生活菌微膠嚢制劑加水溶解灌服，一日兩次，直到病癥消除，然后一日一次再持續服用兩到三天。成雞采用按每公斤體重400-500毫克益生活菌微膠嚢制劑加水溶解灌服，第1-2天日服用兩次，以后每日服用一次直到病癥消除后在持續服用兩到三天。仔豬按每公斤體重100-200毫克益生活菌微膠嚢制劑加水溶解灌服，一日兩次，直到病癥消除，然后一日一次再持續服用兩到三天。成豬按每公斤體重40-50毫克益生活菌微膠囊制劑拌入少量飼料內，直接采食，一日兩次，直到病癥消除，然后一日一次再持續服用兩到三天。牛犢按每公斤體重500毫克益生活菌微膠嚢制劑拌入少量飼料內，直接采食，一日兩次，直到病癥消除，然后一日一次再持續服用兩到三天。加水溶解灌服，一日兩次，直到病癥消除，然后一日一次再持續服用兩到三天。成牛按每公斤體重200毫克益生活菌微膠嚢制劑拌入少量飼料內，直接采食，一日兩次，直到病癥消除，然后一日一次再持續服用兩到三天。本發明與目前現有的各種益生活菌制劑相比，所具有的顯著特點和積極效果在于(1)本發明所制備的益生活菌微膠嚢制劑，其組方合理，制作方法科學，使用范圍廣泛，操作簡單，容易掌握，成本低，可用于各種畜禽作為飼料添加劑以提高飼料添加劑的利用率，同時也可以作為獸藥使用，主要用于治療幼畜腹瀉、痢疾等腸道疾病并具有增強畜禽抗病的作用。(2)微膠嚢化有利于益生菌體菌體生長和代謝產物生產，微膠嚢化的菌體，質粒保持穩定性增強了，而且菌體抵抗抗生素，耐酸，耐膽鹽的能力都有所提高，使益生活菌通過胃屏障，定殖于腸道。(3)經過微膠嚢化的益生菌可以避免由飼料中微量元素，金屬離子，維生素等引起的一系列氧化還原、酸堿反應對益生菌活力的抑制作用。說明書附圖圖1為益生活菌微膠嚢制劑制作工藝流程圖。具體實施例方式為了更充分的解釋本發明，提供下述益生活菌制劑及其制備方法的制備實施實例。這些實施實例僅僅是解釋、而不是限制本發明的范圍。實施例1本發明所用菌種來源和菌種相應使用的斜面培養基見下表(表3)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>一、凝結芽孢桿菌的制備(1)取凝結芽孢桿菌種于已加入1.5%瓊脂，接種量5%的上述斜面培養基中，在25。C條件下靜止培養20小時，放入4'C水箱保存。(2)轉入搖瓶中，溫度25。C，轉速80轉/分鐘，接種量1%，培養19h。(3)液體二級培養的條件轉入種子發酵罐中，裝種子培養基5L，接重量5%，30°C，攪拌速度10轉/分鐘，培養3Qh。(4)發酵罐單菌抹純培養條件凝結芽孢桿菌發酵培養基(g/L):蛋白胨5g，酵母膏5g，葡萄糖3g,MgS04.7Il200.5g,K2HP04lg,MnSOJOug,pH7.0。溫度25"C，通風量9m7h,罐壓0.02MPa，接種量1.5%，時間72小時，發酵液活菌數達到10s-10'cfu/ml;發酵液離心收集菌體。二、嗜酸乳桿菌的制備(1)取嗜酸乳桿菌于已加入1.5%瓊脂，接種量5%的上述斜面培養基中，在25。C條件下靜止培養20小時，放入4'C冰箱保存。(2)轉入搖瓶中，溫度25。C，轉速180轉/分鐘，接種量l，培養19h。(3)液體二級培養的條件轉入種子發酵罐中，裝種子培養基5L,接重量5%,30°C，攪拌速度10轉/分鐘，培養30h。(4)發酵罐單菌林純培養條件嗜酸乳桿菌發酵培養基(g/L):胰蛋白胨2.5g,蛋白胨5g，葡萄糖5g，，乳糖2.5g，酵母浸出粉4g，pH7.0。溫度25X:,通風量9ffl7h，罐壓0.02MPa,接種量1.5%,時間72小時，發酵液活菌數達到108-109cfii/ml;發酵液離心收集菌體。三、植物乳桿菌的制備(1)取植物乳桿菌于已加入1.5%瓊脂，接種量5%的上述斜面培養基中，在35。C條件下靜止培養48小時，放入4"C水箱保存。(2)轉入搖瓶中，溫度25。C，轉速180轉/分鐘，接種量3%，培養19h。(3)液體二級培養的條件轉入種子發酵罐中，裝種子培養基5L，接重量5%，30X:,攪拌速度10轉/分鐘，培養3Qh。(4)發酵罐單菌抹純培養條件植物乳桿菌發酵培養基(g/L):蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母膏3g，葡萄糖15g，檸檬酸二鈉1.5g,K2HP04lg，醋酸鈉2.5g，MgS04'7H20lg，MnSO,4H2O0.Olg吐溫10ml,pH6.0。溫度25°C,通風量9m3/h，罐壓0.02MPa，接種量1.5%，時間72小時，發酵液活菌數達到10s-109cfu/ml;發酵液離心收集菌體。四、乳酸乳桿菌的制備(1)取乳酸乳桿菌于已加入1.5%瓊脂，接種量5%的上述斜面培養基中，在35X:條件下靜止培養48小時，放入4i:冰箱保存。(2)轉入搖瓶中，溫度25。C，轉速180轉/分鐘，接種量3%，培養19h。(3)液體二級培養的條件轉入種子發酵罐中，裝種子培養基5L,接重量5%，3(TC，攪拌速度10轉/分鐘，培養30h。(4)發酵罐單菌抹純培養條件乳酸乳桿菌發酵培養基(g/L):胰蛋白胨3.5g，蛋白胨7.5g，葡萄糖7.5g，乳糖2.5g，酵母浸出粉5g，pH7.0。溫度25。C,通風量9mVh，罐壓0.02MPa，接種量1.5%,時間72小時，發酵液活菌數達到108-109cfu/ml;發酵液離心收集菌體。五、糞鏈球菌的制備(1)取糞鏈球菌菌種于已加入2.5%瓊脂，接種量10%的上述斜面培養基中，在35。C條件下靜止培養20小時，放入4'C水箱保存。(2)轉入搖瓶中，溫度25。C,轉速80轉/分鐘，接種量3%,培養19h。(3)液體二級培養的條件轉入種子發酵罐中，裝種子培養基5L，接重量5%,30°C,攪拌速度10轉/分鐘，培養30h。(4)發酵罐單菌抹純培養條件糞鏈球菌發酵培養基蛋白胨10g，牛肉膏10g，乳糖10g，pH6.8土0.2。溫度25C，通風量9m7h，罐壓0.02MPa，接種量1.5%，時間72小時，發酵液活菌數達到108-10'cfu/ml;發酵液離心收集菌體。實施例2實施例中的斜面菌種培養—液體一級種子(搖瓶)培養-液體二級培養與實施例1相同不再重復。(1)凝結芽孢桿菌的制備發酵罐單菌林純培養條件凝結芽孢桿菌發酵培養基(g/L):蛋白胨15g，酵母膏15g，葡萄糖9g，MgS047H201.5g,K2HP043g，MnSO450yg，pH7.0。溫度40°C，通風量13m3/h，罐壓0.09MPa，接種量7.5%,時間19小時，發酵液活菌數達到108-109cfu/ml;發酵液離心收集菌體。(2)嗜酸乳桿菌的制備發酵罐單菌抹純培養條件嗜酸乳桿菌發酵培養基(g/L):胰蛋白胨7.5g，蛋白胨15g，葡萄糖15g，乳糖7.5g，酵母浸出粉10g，pH7.0。溫度40。C，通風量13mVh，罐壓O.09MPa，接種量7.5%，時間19小時，發酵液活菌數達到108-109cfu/ml;發酵液離心收集菌體。(3)植物乳桿菌的制備發酵罐單菌抹純培養條件植物乳桿菌發酵培養基(g/L):蛋白胨15g,牛肉膏15g,酵母膏7g，葡萄糖25g,檸檬酸二鈉3.5g，K2HP043g，醋酸鈉7.5g，MgSO,7H203g，MnSO,4H200.Olg吐溫10ml，pH6.5。溫度40°C，通風量13m7h，罐壓0.09MPa，接種量7.5%，時間19小時，發酵液活菌數達到108-109cfu/ml;發酵液離心收集菌體。(4)乳酸乳桿菌的制備發酵罐單菌抹純培養條件乳酸乳桿菌發酵培養基(g/L):胰蛋白胨6.5g，蛋白胨12.5g，葡萄糖12.5g，，乳糖7.5g,酵母浸出粉9g，pH7.0。溫度40。C，通風量13m7h，罐壓O.09MPa，接種量7.5%,時間19小時，發酵液活菌數達到108-10'cfu/ml;發酵液離心收集菌體。(5)糞鏈球菌的制備糞鏈球菌發酵培養基蛋白胨30g，牛肉膏30g，乳糖30g，pH6.8±0.2。溫度40。C，通風量13mVh，罐壓0.09MPa,接種量7.5%，時間19小時，發酵液活菌數達到108-109cfu/ml;發酵液離心收集菌體。實施例3活菌微膠嚢的制備(1)將上述實施例l所得到的各個發酵液，采用連續高速離心機離心收集上述各菌體，加入無菌水配制成1.Ox1011cfu/mL菌懸液，然后加入微孔淀粉與乳糖(1:1W/W)混合物，比例為1:2V/W，均勻攪拌100r/min，30min;最后加入3%海藻酸鈉無菌溶液，比例為1:2V/V，通過膠嚢自動發生器將微粒滴入3%無菌氯化鈣溶液中，靜置lh,制成活菌微膠囊；(2)真空冷凍干燥過濾收集活菌微膠囊，-5(TC預凍2h,真空冷凍干燥，制得干燥的活菌微膠嚢；(3)活菌計數活菌計數測定干燥的活菌微膠嚢活菌含量為1.0x109cfu/g以上，加入1.5份玉米蛋白載體混合；(4)將制得的活菌微膠囊按不同牲畜需求量配比混合均勻，制成活菌微膠嚢制劑，微膠嚢直徑為lmm。實施例4將上述實施例1所得到的各個發酵液，采用連續高速離心機離心收集上述各菌體，加入無菌水配制成1.0x10"cfu/mL菌懸液，然后加入微孔淀粉與乳糖(1:1W/W)混合物,比例為1:2V/W，均勻攪拌200r/min，60min;最后加入4%海藻酸鈉無菌溶液，比例為1:2V/V,通過膠嚢自動發生器將微粒滴入4%無菌氯化鈞溶液中，靜置2h，制成活菌微膠嚢；真空冷凍干燥過濾收集活菌微膠嚢，-5(TC預凍3h,真空冷凍干燥，制得干燥的活菌微膠嚢；測定干燥的活菌微膠囊活菌含量為1.Oxio9cfu/g以上，加入l份玉米蛋白載體混合；將制得的活菌微膠嚢按不同牲畜需求量，裝入硬殼膠嚢制成活菌微膠嚢制劑，微膠嚢直徑為lmm。實施例5將上述實施例2所得到的各個超濾濃縮液，采用連續高速離心機離心收集上述各菌體，加入無菌水配制成1.Ox10"c/.丄菌懸液，然后加入微孔淀粉與乳糖(1:1W/W)混合物，比例為1:2V/W，均勻攪拌200r/min，60min;最后加入4%海藻酸鈉無菌溶液，比例為1:2V/V，通過膠嚢自動發生器將微粒滴入4%無菌氯化鈣溶液中，靜置2h，制成活菌微膠嚢；真空冷凍干燥過濾收集活菌微膠囊，-50°(:預凍3h，真空冷凍干燥，制得干燥的活菌微膠嚢；測定干燥的活菌微膠嚢活菌含量為1.Ox1(Tcfu/g以上，加入1.5份玉米蛋白栽體混合；將制得的活菌微膠嚢按不同牲畜需求量，配比混合均勻，制成活菌微膠嚢制劑，微膠嚢直徑為2mm。實施例6按重量份數取嗜酸乳桿菌微膠嚢1.5份，糞鏈球菌微膠嚢1份，植物乳桿菌微膠嚢1份，凝結芽孢桿菌微膠嚢1份，乳酸乳桿菌微膠嚢1.5份，上述各組份與1.5份玉米蛋白載體混合均勻，制成益生活菌微膠嚢制劑，用于仔豬腹瀉的預防和治療。實施例7按重量份數取嗜酸乳桿菌微膠嚢1份，糞鏈球菌微膠嚢1份。植物乳桿菌微膠嚢1.5份，凝結芽孢桿菌微膠嚢0.5份，乳酸乳桿菌微膠嚢0.5份，上述各組份與1份玉米蛋白載體混合均勻，制成益生活菌微膠嚢制劑，用于牛犢腹瀉的預防和治療。實施例8對比實驗情況將活菌微膠嚢制劑仔雞日糧重量的0.2%加入到日糧中攪拌均勻，仔雞為2-3日齡，讓仔雞自由采食觀察生長情況。動物實驗將200只肉雞分A，B兩組，A組為對照組，B組為實驗組，每組各100只，進行肉雞生長速度的對比實驗。B組按重量比0.2%的比例向飼料中拌入活菌微膠嚢制劑，其中活菌微膠嚢和伺料的重量比為2:1000，使每克日糧中的活菌數》2x106個。試驗期為2-17日齡。試驗結果是B組的平均日增重高于A組15.32。/。，P〈0.01。實施例9活菌微膠嚢中活菌的存活情況:將實施例4一7得到的活菌微膠嚢制劑在常溫下貯存60天，測定微膠囊的益生活菌存活情況，結果如下(表4)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>從結果可知，本發明提供的活菌微膠嚢制劑在常溫下非常的穩定，|&存300天后仍可保持益生活菌活性大于80%。以上所述，僅是本發明的較佳實施例而已，并非對本發明作任何形式上的限制，凡是依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發明技術方案的范圍內。權利要求1、一種用于牲畜的益生活菌微膠囊制劑，其特征在于它是由芯材、各單菌的菌懸液、包埋材料和載體組成；其中菌懸液與芯材的重量份數比為1∶2；芯材與菌懸液所形成的混合液與包埋材料的體積比為1∶3；各單菌的菌懸液為凝結芽孢桿菌，嗜酸乳桿菌，植物乳桿菌，乳酸乳桿菌和糞鏈球菌；活菌含量分別為嗜酸乳桿菌微膠囊≥1.0×109cfu/g；植物乳桿菌微膠囊≥1.0×109cfu/g；凝結芽孢桿菌微膠囊≥1.0×109cfu/g；乳酸乳桿菌微膠囊≥1.0×109cfu/g；糞鏈球菌微膠囊≥1.0×109cfu/g。2、如權利要求l所述的活菌微膠嚢制劑，其中所述的芯材為重量份數比為l:l的微孔淀粉與乳糖混合物；包埋材料為3-4%的海藻酸鈉溶液；載體為1-1.5份玉米蛋白。3、如權利要求l所述的活菌微膠嚢制劑，其特征在于所述活菌制劑中活菌總含量為l.OxlO'cfu/g以上；微膠囊直徑為l-2mm。4、權利要求1所述活菌微膠嚢制劑在作為飼料添加劑預防幼畜腹瀉和增加^氏抗力方面的應用。5、權利要求l所述活菌微膠嚢制劑在制備治療幼畜腹瀉方面的應用。6、一種制備權利要求1-5任一項所述活菌微膠嚢制劑的方法，其特征在于按如下步驟進行(1)益生活菌的培養將各菌體使用相應斜面菌種培養，經液體一級種子培養，液體二級培養，發酵罐單菌抹純增殖培養；(2)活菌微膠嚢的制備采用連續高速離心機離心收集上述各菌體，加入無菌水配制成l.OxlO"cfu/mL菌懸液，然后加入^t孔淀粉與乳糖(1:1W/W)混合物，比例為l:2V/W，均勻攪拌100-200r/min30-60min;最后加入3-4%海藻酸鈉無菌溶液比例為1:3V/V，通過膠囊自動發生器將微粒滴入3-4%無菌氯化鉀水溶液中，固化l-2h，制成活菌微膠嚢；(3)過濾收集活菌微膠嚢，-S0。C預凍23h，真空冷凍干燥，制得干燥的活菌微膠嚢；(4)活菌計數測定干燥的活菌微膠嚢活菌含量為l.Oxl(fcfu/g以上，加入l-1.5份玉米蛋白載體混合；(5)將制得的活菌微膠嚢按不同牲畜需求量，配比混合均勻，制成活菌微膠嚢制劑。7、如權利要求6所述的制備方法，其中的活菌微膠嚢由下述重量份數的益生活菌微膠嚢組成凝結芽孢桿菌微膠嚢O.5-l份；嗜酸乳桿菌微膠嚢l~1.8份；植物乳桿菌微膠嚢l~1.5份；乳酸乳桿菌微膠嚢O.5-1.5份；糞鏈球菌微膠嚢O.5-l份；其中各組分的活菌含量分別為嗜酸乳桿菌微膠嚢M.0xl09cfu/g;植物乳桿菌微膠嚢>1.Oxl09cfu/g;凝結芽孢桿菌微膠嚢>1.Oxl09cfu/g;乳酸乳桿菌微膠嚢>1.0xl09cfu/g;糞鏈球菌微膠嚢>1.OxlO'cfu/g。8、如權利要求6所述的制備方法，其中各發酵罐單菌抹純培養條件溫度25-4(TC，通風量9-13m7h，罐壓O.02-0.09MPa,接種量l.5-7.5%,時間19-72小時，發酵液活菌數達到10S-10'cfu/ml;其中益生活菌的發酵培養基(g/L):凝結芽孢桿菌蛋白胨5-15g,酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g,MgS(V7H200.5-1.5g，K2HP04l-3g,MnSO450|jg,pH7.0;植物乳桿菌蛋白胨5-15g，牛肉膏5-15g，酵母膏3-7g，葡萄糖15-25g，檸檬酸二鈉l.5-3.5g,UlP04l-3g，醋酸鈉2.5-7.5g,MgS04.7H20l-3g，MnSO,4H200.Olg吐溫10ml，pH6.0-6.5。全文摘要本發明涉及一種用于牲畜的益生活菌微膠囊制劑及其制備方法。它是由芯材、菌懸液、包埋材料和載體組成；其中菌懸液與芯材的重量份數比為1∶2；芯材與菌懸液所形成的混合液與包埋材料的體積比為1∶3。所述的菌懸液是采用微生物發酵法經離心制備，再由芯材吸附和包埋制成微膠囊，然后冷凍干燥制成活菌微膠囊，再按照不同動物及不同生長階段配制成活菌微膠囊制劑。其主要技術特點是具有使用安全、無殘留、不產生抗藥性，在動物小腸內存活率高，存活時間長的特點，可作為飼料添加劑或治療動物腹瀉的獸藥使用。文檔編號A61P37/04GK101112397SQ20071005862公開日2008年1月30日申請日期2007年8月9日優先權日2007年8月9日發明者丁友昉,周念閩,王德培申請人:天津科技大學;唐山賽納生物技術服務有限公司