專利名稱：：一種骨肽注射液制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：骨肽注射液是新鮮或冷凍的豬或胎牛的四肢骨經(jīng)提取制成的無(wú)菌水溶液。其主要成份為有機(jī)鈣、磷、無(wú)機(jī)鈣、無(wú)機(jī)鹽、微量無(wú)素、氨基酸等。本工藝過(guò)程尚無(wú)公開(kāi)報(bào)道，簡(jiǎn)便、實(shí)用、穩(wěn)定，適合于大工業(yè)生產(chǎn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的過(guò)程是a、提取、去脂取健康新鮮豬或胎牛四肢骨，洗凈、打碎、稱重，加水，熱壓，用紗布過(guò)濾，骨渣再加水，同上法操作。過(guò)濾，合并兩次濾液，立即置于夾層鍋中通冷卻水，冷至室溫，放置于冷庫(kù)中，待冷卻至0-5'C轉(zhuǎn)入冷室中靜置，撇去上層脂肪，加溫使凍狀物融成液體，濃縮，得濃縮液。b、水解將濃縮液用鹽酸調(diào)pH3左右，按1—3%加入胃蛋白酶,水解2_4小時(shí)。c、酸沉、堿沉將上述液體于pH加熱至10(TC，持續(xù)30分鐘，冷卻，吸上清，再用NaOH調(diào)pH至8.5左右，加熱至10(TC，持續(xù)30分鐘，冷卻，吸上清。d、過(guò)濾及超濾將上述清液過(guò)濾至清，再過(guò)一萬(wàn)分子量超濾柱三次，即得骨肽溶液。e、制劑將骨肽原液按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定多肽含量，加水調(diào)至每毫升大于5mg，調(diào)pH至5.5—7.5，除菌、過(guò)濾、灌封、滅菌即得。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)1、整個(gè)工藝過(guò)程中無(wú)任何防腐劑，從而使制劑更安全。2、最大程度保留了骨膠原蛋白成份，有利于骨的營(yíng)養(yǎng)和有效成份的提供。3、除去了大分子物質(zhì)，使整體制劑成分分子量均小于1萬(wàn)，保證了制劑不過(guò)敏。4、整個(gè)工藝簡(jiǎn)單，易行，穩(wěn)定可靠，尤其適用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的詳細(xì)工藝過(guò)程1、提取、去脂、濃縮取健康新鮮豬四肢骨，洗凈，打碎稱重。每75kg原料加水75kg，于1.2kg/cr^熱壓2小時(shí)，用雙層紗布過(guò)濾，骨渣再加水75kg，同上操作熱壓1小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次濾液。于夾層鍋內(nèi)冷卻至室溫，放置于-20至-3(TC冷庫(kù)中，待冷卻至0-5"C轉(zhuǎn)入冷室中靜置12—24小時(shí)，撇去上層脂肪，加溫使凍狀物融成液體。2、水解將上述提取物調(diào)pH3左右，按1—3%加入胃蛋白酶，水解4小時(shí)。3、酸沉將上述液于10(TC加熱30分鐘，繼續(xù)酸水解，冷卻吸出上清。4、堿沉上述上清調(diào)pH8.5左右，加熱至沸騰，持續(xù)30分鐘,繼續(xù)堿水解冷卻，吸上清。5、超濾上述上清液調(diào)pH至7.4，過(guò)濾至清，過(guò)一萬(wàn)分子量超濾三次，即得骨肽原液，得原液180000毫升。6、制劑將骨肽原液按雙縮脲法測(cè)定多肽含量，加水調(diào)至5.0-6.0mg/ml，PH5.5—7.5，除菌過(guò)濾，灌封，105i:滅菌40分鐘即得。實(shí)驗(yàn)1、收率實(shí)驗(yàn)精密量取本品2ml，置試管中，精密加入雙縮脲試液(取硫酸銅1.50g和灑石酸鉀鈉5.0g，加水500ml使溶解，邊攪邊加入l(B氫氧化鈉溶液300ml，用水稀釋至1000ml，混勻)4ml，混勻，室溫放置30分鐘，照分光光度法，在540nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，另精密稱取酪蛋白對(duì)照品適量，加0.05mol/L氫氧化鈉試液制成每lml中約含7mg的溶液，精密量取2ml，自置試管中……起，同法操作，測(cè)定吸收度，計(jì)算。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:酪蛋白骨肽溶液骨肽溶液骨肽溶液(7.01mg/ml)(060201)(060202)(060203)吸收度0.4650.5100.5130.521濃度(mg/ml)---7.717.737.854<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2、過(guò)敏實(shí)驗(yàn)，熱源實(shí)驗(yàn)，異常毒性，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS1^XG—035—-2000檢驗(yàn)均符合規(guī)定。3、其它各項(xiàng)指標(biāo)均符合注射劑通則及WS1—XG—035…2000骨肽注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。權(quán)利要求1.一種骨肽注射液制備方法，其過(guò)程是(1)、提取、去脂取健康新鮮豬或胎牛四肢骨，洗凈、打碎、稱重，加水，熱壓，用紗布過(guò)濾，濾液冷至室溫，放于冷庫(kù)中，待冷卻后轉(zhuǎn)入冷室中靜置，撇去上層脂肪，即得除脂提取液。(2)、將上述提取物調(diào)PH3左右，按體積重1-3％加入胃蛋白酶，于37℃-42℃水解2-4小時(shí)。(3)、酸性沉淀、堿性沉淀上述水解液在攪拌下加入酸調(diào)pH至4.0左右，于100℃加熱，冷卻沉淀，吸上清，再用NaOH調(diào)pH8.5左右，于100℃加熱，冷卻沉淀吸上清。(4)、將上述上清過(guò)濾澄清，再過(guò)一萬(wàn)分子量的超濾柱，即得骨肽中間體。(5)、測(cè)定多肽含量，并調(diào)至所需濃度，灌封，滅菌即得。其特征是(1)、采用了胃蛋白酶水解、酸水解、堿水解及熱變性，使制劑澄清，澄明度良好，也使注射劑制備成為可能。(2)、最大程度保留了骨營(yíng)養(yǎng)成份，使大于一萬(wàn)分子量的多肽完全除掉，同時(shí)又不損失小于一萬(wàn)分子量的多肽及其它諸如無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)成份，同時(shí)保證了注射劑的熱原合格，過(guò)敏性合格。全文摘要骨肽注射液是一種由豬或胎牛四肢骨提取制成的注射液，用于促進(jìn)骨折愈合。本發(fā)明專利介紹了一種制造方法，其過(guò)程為熱提取，酶解、酸水解沉淀，堿水解沉淀，超濾，除菌過(guò)濾，灌封滅菌。過(guò)程簡(jiǎn)便實(shí)用，保留了骨營(yíng)養(yǎng)成份，收率高。文檔編號(hào)A61K35/32GK101259142SQ20071005538公開(kāi)日2008年9月10日申請(qǐng)日期2007年3月8日優(yōu)先權(quán)日2007年3月8日發(fā)明者英韓申請(qǐng)人:英韓