專利名稱：喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，確切地說是提供一種可以廣泛應用于工業生產的喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑及其制備方法。
背景技術：
喜樹堿(camptothecin，CPT)是從我國特有的植物喜樹中提取的一種生物堿類抗腫瘤藥物，具有較強的生物活性，但較大的不良反應，限制了其臨床應用。喜樹堿(CPT)其結構式為 喜樹堿類藥物可從喜樹中直接提取或經過結構修飾，是選擇性DNA拓撲異構酶抑制劑，有廣譜抗腫瘤作用。體外和動物實驗中均顯示10-羥基喜樹堿(10-hydroxyl camptothecin，HCPT)比CPT有更強的抗腫瘤作用和較寬的抗瘤譜，且毒性也相對較低。目前HCPT已作為常用抗腫瘤藥應用于臨床，但是由于HCPT水溶性很差，現有注射液是將其在堿性pH下水解開環制備成鹽，溶于水中注射給藥。HCPT羥基羧酸鹽型與內酯型相比，活性顯著降低，毒性明顯增大。
提高難溶性藥物的溶解度和生物利用度一直是藥劑學研究的一個熱點。常用增加內酯型喜樹堿類藥物溶解度的方法包括pH調節、潛溶劑、環糊精包合物、制成固體分散體和加表面活性劑增溶及其聯合使用，但均存在載藥量低、制備工藝復雜及穩定性較差等問題，而且這些助劑的加入可能會影響溶液劑的吸收、生理活性、毒性、刺激性、穩定性，增加制劑的刺激性或毒性。
隨著新的藥物傳遞系統的不斷發展，通過一些特殊的傳遞方法與策略，可以部分解決藥物存在的一些問題，諸如溶解度差、穩定性不好、毒性和不良反應大等。載體輸送系統亞微粒(如微乳、微球、脂質體、藥質體)的研究已成為藥物新劑型研究中非常活躍的領域。脂質體、微乳、亞微乳、聚合物納米粒等一系列藥物載體被發展起來，并在選擇性吸收和靶向給藥等方面取得了顯著的成就。以上幾種給藥系統已經應用于喜樹堿類藥物，然而，都存在一些不足之處，由于10-羥基喜樹堿的脂溶性也很差，一般的脂質體對其載藥量很低；含藥微乳、亞微乳則由于其物理穩定性、油相對藥物的溶解度等問題限制了其進一步發展，如10-羥基喜樹堿脂肪乳劑的處方(中國新藥雜志2005，14(6)720-723)8mg HCPT、12g注射級大豆油、Pluronic F685g、甘油2.5g及卵磷脂4.5g，大量的輔料造成制備成本的上升，還可能帶來一些副作用；聚合物納米粒在制備過程中可能帶來有潛在毒性的物質，如有機溶劑、殘留單體、聚合反應引發劑等，所用的生物降解性高分子材料在細胞吞噬降解后也常產生細胞毒性。
脂質納米粒(Lipid nanoparticles，LN)系指以天然或合成類脂如三酰甘油等為載體材料，將藥物包裹或內嵌于類脂核中，制成粒徑約為50-1000nm的膠粒給藥系統。LN的最大特點一是采用生理相容性好、毒性低的類脂材料為載體，降低了其對人體的毒副作用；二是可采用已有成熟工藝的高壓均質法進行工業化生產。同時，類脂基質又使它具有聚合物納米粒的優點，如可以控制藥物的釋放、避免藥物的降解以及良好的靶向性等，主要適合于載親脂性藥物，亦可先將親水性藥物通過酯化等方法制成脂溶性較強的前體藥物后，再制備LN。此外，LN的水分散系統可以進行高壓滅菌，具有長期的物理化學穩定性，也可通過凍干或噴霧干燥法制成固體粉末，然后加工成片劑、膠囊劑、丸劑等劑型，以改善患者的順應性。不過，以脂質納米粒作為藥物載體，同樣需要藥物有較好的脂溶性。
20世紀80年代以來，Burke等研究發現，磷脂能通過磷脂雙分子層屏蔽喜樹堿類藥物不穩定的五元內酯環，明顯提高喜樹堿類藥物在溶液中的穩定性(生物化學32，5352-64(1993))。此外，磷脂與喜樹堿類藥物形成的復合物的可直接在水中形成膠態分散體(參見中國專利95195659.0，M.徹里安)。但是，單純的喜樹堿衍生物磷脂復合物水中分散效果并不是十分理想，需要很大比例的磷脂來制備復合物，喜樹堿與磷脂的重量比高達1∶80～93。
綜上所述，可以看出目前還沒有可用于臨床的、保持喜樹堿內酯環型活性結構、載藥量高的藥物制劑。采用現代藥劑學手段，在保持喜樹堿活性結構的前提下，載藥量高、穩定性好、副作用少，且能適于工業化大生產的喜樹堿制劑將為腫瘤的臨床治療提供一個很好的選擇，產生良好的社會和經濟效益。
發明內容
本發明的目的是提供一種克服上述缺點的載藥量高、制備方法簡單、療效好、副作用少的10-羥基喜樹堿或其它喜樹堿衍生物磷脂復合物的脂質納米粒制劑，供臨床上使用。本發明的另一目的是提供新的10-羥基喜樹堿或其它喜樹堿的磷脂復合物。
本發明通過制備10-羥基喜樹堿磷脂復合物，顯著增加藥物的脂溶性，然后再采用類脂為骨架材料溶解喜樹堿磷脂復合物，制備成脂質納米粒，經過或不經過冷凍干燥，將其配制成藥學上可以接受的注射給藥納米粒混懸制劑。
本發明先將10-羥基喜樹堿與磷脂制備成磷脂復合物。10-羥基喜樹堿與磷脂的極性基團部分發生了較強的相互作用，抑制了分子中單鍵的自由轉動，而磷脂的兩個長脂肪酸鏈不參與復合反應，可自由移動，包裹了磷脂的極性部分，形成一個親脂性的表面，使復合物表現出較強的脂溶性，能更好地溶解在類脂成分中，只需較少量的磷脂和類脂材料，即可制備成脂質納米粒制劑，顯著提高了納米粒的載藥量，降低了輔料的用量。另外，10-羥基喜樹堿不穩定的五元內酯環被磷脂雙分子層屏蔽，提高了藥物在溶液中的穩定性。
本發明以脂質納米粒作為10-羥基喜樹堿磷脂復合物的載體。脂質納米粒是近年來發展較快的一種新型給藥載體。本發明提供脂質納米粒的粒徑小于200nm，具有以下優點(1)適用于口服、靜脈注射、局部等多種給藥形式；(2)生理接受性好；(3)對親脂、親水性藥物有很好的載藥能力，不僅提高藥物的生物利用度，防止敏感藥物的水解，而且具有緩控釋和靶向作用；(4)其水分散體系比較穩定，可進行熱壓滅菌或γ輻射滅菌，制成粉末(冷凍干燥或噴霧干燥)可長期保存；(5)脂質納米粒適宜工業化生產。此外，粒子平均粒徑在50～200nm左右的微粒體分散系統，可實現藥物傳遞的靶向性，控制藥物體內釋放，提高患者適應性。
本發明的技術方案提供了一種喜樹堿磷脂復合物脂質納米粒制劑，它包含作為藥用活性成分的喜樹堿衍生物，加上制備磷脂復合物和脂質納米粒載體成分的磷脂，以及藥學上常用的類脂。還可以加上凍干保護劑和其他輔料，冷凍干燥成為粉末。其中，脂質納米粒的粒徑分布范圍在40～500nm，平均粒徑為50～200nm。
本發明所述的脂質納米粒可以用于注射給藥，也可以通過口服、外用等其它形式給藥。
本發明所述作為喜樹堿磷脂復合物和脂質納米粒組成成分的磷脂及其衍生物是平均分子量為700～800的磷脂，包括大豆磷脂、卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺的一種或其混合物。本發明優選的磷脂為大豆磷脂、卵磷脂的一種或其兩種的混合物。
本發明所述的羥基喜樹堿磷脂復合物脂質納米粒含有的類脂是指生理相容好、可生物降解的天然或合成類脂，可以是甘油三酯、甘油酯以及脂肪酸，形態上可以是固體，也可以是液體。固體類脂包括高熔點的三硬脂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、棕櫚酸十六酯、山崳酸甘油酯、硬脂酸等；液體類脂包括大豆油、紅花油、芝麻油、棉子油、魚油、玉米油、中鏈脂肪酸脂等，還可以是上述類脂的一種或其兩種的混合物。
本發明所述的與磷脂形成喜樹堿磷脂復合物的喜樹堿衍生物是指化學結構中具有喜樹堿的特征性稠合五環的五環生物堿，包括喜樹堿，10-甲氧基喜樹堿，10-羥基喜樹堿，20-O-β-吡喃葡萄糖基喜樹堿，9-甲氧基喜樹堿中的一種或多種混合物。其中優選10-羥基喜樹堿。
本發明所述的羥基喜樹堿磷脂復合物脂質納米粒制劑可以包括，也可以不包括冷凍干燥時保護脂質納米粒結構、形態的凍干保護劑，包括葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、甘露糖、海藻糖、甘氨酸、右旋糖酐中的一種或它們的混合物。優選的凍干保護劑包括葡萄糖、蔗糖以及麥芽糖。干燥后的粉末在接觸水性介質時自動分散形成脂質納米粒的混懸液。
按照本發明，喜樹堿衍生物、磷脂、類脂的重量比為1∶1～10∶1～1000，更優選1∶2～4∶1～5。
本發明所述的其他輔料可為等滲調節劑、抗氧化劑、防腐劑、pH調節劑等。
本發明提供的喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒，旨在提高喜樹堿衍生物的載藥量，增加其溶解度，降低毒性，適宜于工業化生產，方便臨床使用，增加療效。其顯著特點是利用了磷脂作為磷脂復合物和脂質納米粒的載體成分，提高載藥量，減少給藥劑量，可以改變藥物的體內分布，具有靶向性，提高療效，降低毒副作用等；此外，采用生物相容性好的磷脂作為載體，可避免用助溶劑增溶難溶藥物所帶來的毒性和副作用等問題。
本發明的10-羥基喜樹堿磷脂復合物脂質納米粒制劑的制備方法，包括下述順序的步驟(1)取10-羥基喜樹堿和磷脂，在40℃～60℃條件下溶于脂溶性溶劑中，攪拌反應1～2小時，形成10-羥基喜樹堿磷脂復合物；(2)類脂加入上述溶液中，溶解，混勻；(3)減壓濃縮除去有機溶劑；(4)加含等滲調節劑的注射用水，劇烈攪拌或超聲，形成脂質的混懸液；(5)將(4)所得混懸液經過高壓乳勻，形成脂質納米粒制劑。
其中，步驟(1)所述脂溶性溶劑是指丙酮、乙醇、氯仿、甲醇，優選乙醇。
其中，步驟(1)所述保溫溫度優選50℃。
其中，步驟(5)所得脂質納米粒混懸液，還可以加入冷凍干燥賦形劑和其他輔料，凍干成為粉末。
下面再以實施例對本發明加以進一步的說明，同時也結合實施例中附圖加以說明，但絕不是對本發明的范圍限制。
附圖1. 10-羥基喜樹堿磷脂復合物脂質納米粒粒徑分布圖附圖2. 10-羥基喜樹堿磷脂復合物和10-羥基喜樹堿與磷脂混合物的DSC掃描圖具體實施方案實施例1取10-羥基喜樹堿10mg，溶于50℃的無水乙醇10ml中，得藍色熒光澄明液體，50℃下保溫，加入相當于羥基喜樹堿2倍摩爾量的大豆卵磷脂(平均分子量780)，攪拌，直至溶液澄明，約10min后，接回流裝置，保持50℃，攪拌反應2h，加注射用大豆油50ul，繼續攪拌5min，拆除回流裝置，減壓蒸干有機溶劑，加入注射用水10ml，攪拌，高壓乳勻7次，即得羥基喜樹堿磷脂復合物脂質納米粒。粒徑為146nm，PDI為0.146，見附圖1。
實施例2取喜樹堿10mg，溶于45℃的丙酮10ml中，得藍色熒光澄明液體，45℃下保溫，加入與喜樹堿等摩爾量的大豆卵磷脂(平均分子量750)，攪拌，直至溶液澄明，約10min后，接回流裝置，保持45℃，攪拌反應1.5h，加中鏈脂肪酸酯100ul，繼續攪拌5min，拆除回流裝置，減壓蒸干有機溶劑，加入注射用水10ml，攪拌，高壓乳勻5次，即得喜樹堿磷脂復合物脂質納米粒。粒徑為155nm，PDI為0.167。
實施例3取10-甲氧基喜樹堿10mg，溶于45℃的丙酮10ml中，得藍色熒光澄明液體，45℃下保溫，加入相當于10-甲氧基喜樹堿3倍摩爾量的蛋黃卵磷脂(平均分子量800)，攪拌，直至溶液澄明，約10min后，接回流裝置，保持45℃，攪拌反應2h，加單硬脂酸甘油酯100mg，繼續攪拌10min，拆除回流裝置，減壓蒸干有機溶劑，加入注射用水10ml，攪拌，高壓乳勻7次，即得10-甲氧基喜樹堿磷脂復合物固體脂質納米粒。粒徑為173nm，PDI為0.228。加入8％的蔗糖，凍干后復溶，粒徑為178nm，PDI為0.242。
實施例4
取9-甲氧基喜樹堿10mg，溶于45℃的丙酮10ml中，得藍色熒光澄明液體，50℃下保溫，加入相當于9-甲氧基喜樹堿2倍摩爾量的大豆卵磷脂(平均分子量750)，攪拌，直至溶液澄明，約10min后，接回流裝置，保持50℃，攪拌反應2h，加三月桂酸甘油酯200mg，繼續攪拌10min，拆除回流裝置，減壓蒸干有機溶劑，加入注射用水10ml，攪拌，高壓乳勻7次，即得9-甲氧基喜樹堿磷脂復合物脂質納米粒。粒徑為165nm，PDI為0.204。加入8％的甘露糖，凍干后復溶，粒徑為163nm，PDI為0.211。
實施例5取10-羥基喜樹堿10mg，溶于50℃的甲醇10ml中，得藍色熒光澄明液體，50℃下保溫，加入相當于10-羥基喜樹堿3倍摩爾量的大豆卵磷脂(平均分子量750)，攪拌，直至溶液澄明，約10min后，接回流裝置，保持50℃，攪拌反應2h，加三硬脂酸甘油酯50mg和三辛酸甘油酯50mg，繼續攪拌10min，拆除回流裝置，減壓蒸干有機溶劑，加入注射用水10ml，攪拌，高壓乳勻6次，即得10-甲氧基喜樹堿磷脂復合物脂質納米粒。粒徑為139nm，PDI為0.185。加入10％的葡萄糖，凍干后復溶，粒徑為151nm，PDI為0.207。
實施例6取10-羥基喜樹堿10mg，溶于50℃的無水乙醇10ml中，得藍色熒光澄明液體，50℃下保溫，加入相當于10-羥基喜樹堿3倍摩爾量的大豆卵磷脂(平均分子量750)，攪拌，直至溶液澄明，約10min后，接回流裝置，保持50℃，攪拌反應2h，加麻油1ml，繼續攪拌10min，拆除回流裝置，減壓蒸干有機溶劑，加入注射用水9ml，攪拌，高壓乳勻6次，即得10-羥基喜樹堿磷脂復合物脂質納米粒。粒徑為145nm，PDI為0.135。
實驗例110-羥基喜樹堿磷脂復合物的DSC鑒定以Al2O3為參比物，升溫速度10℃/min，掃描范圍50～400℃，N2流速為0.2ml/min，分別稱取羥基喜樹堿，大豆卵磷脂，復合物及物理混合物2～20mg進行差熱分析，其中復合物及物理混合物的比較見附圖2。從DSC圖譜可看出，復合物與混合物有明顯的不同復合物在140.8℃有一強的吸熱凹處，而混合物在這里140.6℃卻是一個放熱峰，這說明復合物中羥基喜樹堿與大豆卵磷脂分子之間存在一定的作用力，這樣當外界溫度升高時才會吸取能量來破壞這種作用力。
權利要求
1.一種喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑，其含有磷脂與喜樹堿衍生物形成的復合物與類脂組成的用于臨床的脂質納米粒制劑，所述喜樹堿衍生物與磷脂及類脂的重量比為1∶1～10∶1～1000；優選1∶2～4∶1～5。
2.如權利要求1所述納米粒制劑，其特征在于所述的喜樹堿衍生物為選自喜樹堿，10-甲氧基喜樹堿，10-羥基喜樹堿，20-O-β-吡喃葡萄糖基喜樹堿，9-甲氧基喜樹堿中的一種或多種混合物；優選10-羥基喜樹堿。
3.如權利要求1所述的喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑，其特征在于所用磷脂是平均分子量為700～800的磷脂，包括大豆磷脂、卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化磷脂、合成磷脂的一種或幾種的任意混合物；優選大豆磷脂、卵磷脂。
4.如權利要求1所述的喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑，其特征在于，所述類脂為固體或液體注射用油。
5.如權利要求1和4所述的喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑，其特征在于，所述固體類脂包括高熔點的三硬脂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、棕櫚酸十六酯、山崳酸甘油酯、硬脂酸；液體類脂包括大豆油、紅花油、芝麻油、棉子油、魚油、玉米油、中鏈脂肪酸脂，可以是上述類脂中的一種或其兩種的混合物。
6.如權利要求1所述的喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑，其特征在于，脂質納米粒粒徑分布范圍在40～500nm，平均粒徑為50～200nm。
7.如權利要求1所述的喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑，其特征在于可以用于注射給藥，或通過口服、外用給藥。
8.一種喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑的制備方法，其特征包括下述步驟(1)取喜樹堿衍生物和磷脂，在40℃～60℃條件下溶于脂溶性溶劑中，攪拌反應1～2小時，形成喜樹堿衍生物磷脂復合物；(2)類脂加入上述溶液中，溶解，混勻；(3)減壓濃縮除去有機溶劑；(4)加含等滲調節劑的注射用水，劇烈攪拌或超聲，形成脂質的混懸液；(5)將(4)所得混懸液經過高壓乳勻，形成脂質納米粒制劑。
9.如權利要求8所述喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述脂溶性溶劑是指丙酮、乙醇、氯仿、甲醇，或是其兩種或多種混合溶劑，優選乙醇。
10.如權利要求8所述喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑的制備方法，其特征在于制劑中可加入可藥用的冷凍干燥賦形劑和其它輔料，制成凍干粉末。
全文摘要
本發明提供一種喜樹堿衍生物磷脂復合物的脂質納米粒制劑，并提供喜樹堿衍生物磷脂復合物脂質納米粒制劑的制備方法。本發明以磷脂與10－羥基喜樹堿或其衍生物形成復合物，并與類脂組成脂質納米粒制劑，平均粒徑為50～200nm，具有適宜口服、靜脈注射或局部給藥等多種形式，生理相容性好，載藥量高，提高了藥物的生物利用度，有緩釋和靶向作用，其水分散體系比較穩定，可長期保存，適宜工業化生產等優點。
文檔編號A61P35/00GK101028251SQ20071004848
公開日2007年9月5日 申請日期2007年2月14日 優先權日2007年2月14日
發明者張志榮, 龔濤, 衛薇 申請人:四川大學