專利名稱：一種牡荊素衍生物分離方法
技術領域：
本發明涉及由普通硅膠柱層析分離一種牡荊素衍生物牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的方法，本發明特別涉及的是采用硅膠柱色譜(所用的填料為薄層層析硅膠)，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水為洗脫劑，從山里紅葉或山楂葉提取物中直接分離得牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的方法。
背景技術：
山楂葉為薔薇科植物山里紅(Crataegus pinnatifida Bge.var major N.E.Br.)、山楂(C.pinnatifida Bge.)的干燥葉，收載于《中華人民共和國藥典》2005版，22頁。具有活血化瘀，理氣通脈，用于氣滯血瘀，胸悶憋氣，心悸見忘，眩暈耳鳴。研究結果表明牡荊素衍生物牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷是已經被證實治療心血管疾病，并有很強的抑制人類的乳癌細胞DNA的合成及抗氧化作用。硅膠色譜適合分離黃酮類成分，因此本發明將硅膠柱色譜技術并結合薄層層析填料，成功用于分離牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷，兩種化合物可作為治療相關疾病藥物的原料。
目前牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的分離方法主要采用醇提、溶劑萃取同時結合硅膠柱層析的方法。文獻報道特點是成本高，周期長，收率低。[劉榮華等山里紅葉化學成分研究中藥材，2006，29(11)；丁杏苞等山楂葉化學成分的研究中國中藥雜志，1990；15(5)]發明內容本發明提供了簡便、環保、快速，純度高，產率高的一種牡荊素衍生物牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的分離方法。
本發明的目的是這樣實現的一種分離牡荊素衍生物牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的方法，是取山里紅葉或山楂葉藥材，粉碎成粗粉，用含水醇回流提取，提取液過濾，合并濾液，減壓濃縮至浸膏無醇味，經AB-8(D101)大孔吸附樹脂除雜，以30-80％乙醇洗脫至不再檢出黃酮止，以石油醚脫色素后，再用正丁醇萃取至洗脫液無色，減壓回收正丁醇至干，所得干燥物經硅膠柱層析(其中硅膠以200-260目)分離，用氯仿-甲醇洗脫，將氯仿、甲醇(4-3∶1)部位所有流分(1-2個柱體積)洗脫液減壓濃縮至干，干燥物再經薄層層析硅膠柱層析，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水(4-3∶3∶1∶1)洗脫至兩個可見主要色帶流出，在0-15℃溫度下直接析出結晶，純度為90-99％。
山里紅葉或山楂葉粗粉，根據實際生產，可采用乙醇提取為宜，用量為藥材的8-16倍，可采用冷浸、超聲及回流提取等方式，其中加熱回流的方式為優選方案。
含水醇的回流提取操作中，含水醇的濃度為30-80％，用量為藥材的8-16倍，回流提取2-3次，每次1-3小時，醇可選用甲醇或乙醇，根據實際生產及毒性，選用乙醇最為合適。
醇提液過濾，減壓濃縮至無醇味，經AB-8(D101)大孔吸附樹脂除雜，以30-80％乙醇洗脫，以石油醚脫色素后，再用正丁醇萃取，減壓回收正丁醇，所得提取物經硅膠柱層析(其中硅膠以200-260目)分離。
硅膠柱用氯仿-甲醇洗脫，氯仿-甲醇(4-3∶1)部位所有流分(1-2個柱體積)洗脫物減壓濃縮，干燥物再經硅膠柱層析分離，其中填料為薄層層析硅膠，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水洗脫至兩個主要可見色帶流出，在0-15℃溫度下直接析出牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷結晶。酮可選用丁酮或丙酮，采用乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水(4-3∶3∶1∶1)。
本方法所制得的牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的提取收率為0.015-0.05％，牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的含量為90-99％(采用高效液相色譜，歸一化法測定)。本提取物可以單獨或聯合作為原料藥應用于各種相關疾病的治療藥劑中。
本發明與現有文獻不同的是采用單一的硅膠柱層析分即可分離山里紅葉或山楂葉中的牡荊素衍生物牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷，避免了操作困難、成本高的缺點。應用本法所分離的牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷收率高、純度高、毒性小、環保。本方法簡便、快速、實用性強，適合工業化生產。
具體實施例方式
實施例一山里紅葉粉碎成粗粉，用10倍量70％乙醇回流提取3次，每次分別為2、1、1小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味。所得浸膏經AB-8大孔吸附樹脂除雜至糖不再檢出，再用50％乙醇洗脫至不再檢出黃酮止，醇洗脫液減壓濃縮至無醇味，以石油醚脫色素后，正丁醇萃取至洗脫液無色，減壓回收正丁醇至干，所得干燥物經硅膠柱層析(其中硅膠以200-260目)分離，用氯仿-甲醇洗脫，將氯仿、甲醇(4-3∶1)部位所有流分(1-2個柱體積)洗脫物減壓濃縮，干燥物經薄層層析硅膠柱，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4∶3∶1∶1)洗脫至兩個主要可見色帶流出，在0-15℃溫度下直接析出牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷結晶，純度均大于90％(經高效液相色譜，歸一化法測定)。
實施例二山楂葉粉碎成粗粉，用10倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味。所得浸膏經D101大孔吸附樹脂除雜至糖不再檢出，再用60％乙醇洗脫至不再檢出黃酮止，醇洗脫液減壓濃縮至無醇味，以石油醚脫色素后，正丁醇萃取至洗脫液無色，減壓回收正丁醇，干燥，所得干燥物經硅膠柱層析(其中硅膠以200-260目)分離，用氯仿-甲醇洗脫，將氯仿、甲醇(4-3∶1)部位所有流分(1-2個柱體積)洗脫物減壓濃縮，干燥物經薄層層析硅膠柱，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(3∶3∶1∶1)洗脫至兩個主要可見色帶流出，在0-15℃溫度下直接析出牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷結晶，純度為99％(經高效液相色譜，歸一化法測定)。
實施例三山里紅葉粉碎成粗粉，用16倍量60％乙醇回流提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味。所得浸膏經AB-8大孔吸附樹脂除雜至糖不再檢出，再用70％乙醇洗脫至不再檢出黃酮止，醇洗脫液減壓濃縮至無醇味，以石油醚脫色素后，正丁醇萃取至洗脫液無色，減壓回收正丁醇，干燥，所得干燥物經硅膠柱層析(其中硅膠以200-260目)分離，用氯仿-甲醇洗脫，將氯仿、甲醇(4-3∶1)部位所有流分(1-2個柱體積)洗脫物減壓濃縮，干燥物經薄層層析硅膠柱，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4∶3∶1∶1)洗脫至兩個主要可見色帶流出，在0-15℃溫度下直接析出牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷結晶，純度均大于95％(經高效液相色譜，歸一化法測定)。
權利要求
1.一種分離牡荊素衍生物牡荊素牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的方法，其特征在于取山里紅葉及山楂葉藥材，粉碎成粗粉，用含水醇濃度為30-80％，水醇回流提取2-3次，每次1-3小時，用量為藥材的8-16倍量，提取液過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，經AB-8或D101大孔吸附樹脂除雜，以30-80％乙醇洗脫至不再檢出黃酮止，醇洗脫液減壓濃縮至無醇味，以石油醚脫色素后，再用正丁醇萃取至洗脫液無色，減壓回收正丁醇至干，所得干燥物經200-260目硅膠柱層析分離，用氯仿-甲醇洗脫，氯仿、甲醇配料比為4-3∶1，用量為柱體積的1-2倍，將洗脫液減壓濃縮至干，所得干燥物經硅膠柱層析，填料為薄層層析硅膠，再以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水洗脫或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水洗脫至兩個主要可見色帶流出，在0-15℃溫度下直接析出牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-葡萄糖苷結晶。
2.根據權利書要求1所述的一種分離牡荊素衍生物牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的方法，其特征在于所述的含水醇為乙醇溶液。
3.根據權利書要求1所述的一種分離牡荊素衍生物牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的方法，其特征是乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水的配料比為4-3∶3∶1∶1。
4.根據權利要求1所述的一種分離牡荊素衍生物牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷的方法，其特征是所得牡荊素-4′-O-葡萄糖苷及牡荊素-2″-O-鼠李糖苷純度經高效液相色譜，歸一法測定均為90-99％。
全文摘要
一種分離牡荊素衍生物牡荊素牡荊素－4′－O－葡萄糖苷及牡荊素－2″－O－鼠李糖苷的方法，其特征在于取山里紅葉及山楂葉藥材，粉碎成粗粉，用含水醇回流提取，提取液過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，經AB－8或D101大孔吸附樹脂除雜，以30－80％乙醇洗脫，減壓濃縮至無醇味，以石油醚脫色素后，再用正丁醇萃取，減壓回收正丁醇，所得提取物經硅膠柱層析分離，依次用氯仿－甲醇梯度洗脫，氯仿、甲醇配料比為4－3∶1，洗脫部分將其減壓濃縮，經硅膠柱層析，填料為薄層層析硅膠，再以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水洗脫或乙酸乙酯－丙酮－甲酸－水洗脫，在溫度0－15℃放置下直接得牡荊素－4′－O－葡萄糖苷及牡荊素－2″－O－葡萄糖苷。應用本發明的方法所分離的牡荊素－4′－O－葡萄糖苷及牡荊素－2″－O－鼠李糖苷的收率高、純度高，方法簡便實用，低毒、環保，適合工業化生產。
文檔編號A61K127/00GK101050226SQ20071001124
公開日2007年10月10日 申請日期2007年5月10日 優先權日2007年5月10日
發明者英錫相, 張文潔, 郭繼紅 申請人:遼寧中醫藥大學