專利名稱：蕨麻補血功能有效部位與提取方法
技術領域：
本發明涉及的蕨麻補血有效活性部位以蕨麻干果為原料，其制備方法如下 1.將蕨麻用水反復洗凈，涼干，置于80℃烘箱中干燥后，用粉碎機粉碎，過60-80目篩子備用。
2.將蕨麻粉加入2-5倍體積的乙醇，回流提取3次，每次2-5小時； 3.合并上述提取液； 4.乙醇提取液真空減壓濃縮，得乙醇濃縮浸膏； 5.乙醇濃縮干膏加水溶解，加2-10倍體積的石油醚萃取3次，每次8-16小時； 6.合并石油醚萃取液并真空減壓濃縮，得本發明的蕨麻補血活性成分。
圖1蕨麻補血活性成分對小鼠紅細胞數量的影響 圖2蕨麻補血活性成分對小鼠血紅蛋白含量的影響 圖3GC-MS分析西藏蕨麻補血活性成分SYM-2 圖4GC-MS分析蕨麻補血活性成分SYM-3 圖5GC-MS分析蕨麻有效部位補血活性成分SYM-4
具體實施例方式 下面實施例進一步說明本發明的制備方法，并不是用來限制發明的范圍。
實施例1 1.將蕨麻用水反復洗凈，涼干，置于80℃烘箱中干燥后，用粉碎機粉碎，過80目篩子備用。
2.將1000g蕨麻粉加入3000ml乙醇，回流提取3次，每次2小時； 3.合并上述提取液； 4.乙醇提取液真空減壓濃縮，得乙醇濃縮浸膏； 5.乙醇濃縮干膏加水溶解，加5倍體積的石油醚萃取3次，每次12小時； 6.合并石油醚萃取液并真空減壓濃縮，得本發明的蕨麻補血活性成分。
實施例2 1.將蕨麻用水反復洗凈，涼干，置于80℃烘箱中干燥后，用粉碎機粉碎，過80目篩子備用。
2.將500g蕨麻粉加入1000ml乙醇，回流提取3次，每次2小時； 3.合并上述提取液； 4.乙醇提取液真空減壓濃縮，得乙醇濃縮浸膏； 5.乙醇濃縮干膏加水溶解，加3倍體積的石油醚萃取3次，每次8小時； 6.石油醚萃取液真空減壓濃縮，得本發明的蕨麻補血活性成分。
實施例3 1.將蕨麻用水反復洗凈，涼干，置于80℃烘箱中干燥后，用粉碎機粉碎，過80目篩子備用。
2.將2000g蕨麻粉加入10000ml乙醇，回流提取3次，每次5小時； 3.合并上述提取液； 4.乙醇提取液真空減壓濃縮，得乙醇濃縮浸膏； 5.乙醇濃縮干膏加水溶解，加10倍體積的石油醚萃取3次，每次16小時； 6.石油醚萃取液真空減壓濃縮，得本發明的蕨麻補血活性成分。
蕨麻有效部位補血功能實驗及有效成分的研究 1材料和方法 1.1材料西藏蕨麻，當年6-9月采自西藏那曲地區索縣，經洗凈、烘干、粉碎。取500g蕨麻，加入1000mL 95％的乙醇回流提取2次，每次2小時，得到乙醇提取液，真空減壓濃縮，得乙醇濃縮干膏，加入100mL水溶解，用石油醚萃取，經減壓濃縮回收溶劑，得到供試樣品。實驗動物為昆明種小鼠，雌雄各半，體重(19±1)g，大連醫科大學實驗動物中心提供，清潔級。
1.2方法 1.2.1血常規眼眶取血，加入15μL抗凝劑的抗凝血樣，由大連醫科大學附屬第一醫院化驗科測定。
1.2.2蕨麻有效部位對小鼠補血作用的影響昆明種小鼠30只，分為3組，每組10只，雌雄各半，分別為1-對照組、2-陽性對照組、3-蕨麻有效部位樣品組。以紅桃K生血劑為陽性對照組，湯劑為每天每只小鼠1/15mL，片劑為每天每只小鼠1/150片(按體重比與人的服用劑量換算)，合并并稀釋成0.2mL/d。供試樣品溶于無菌水，制成0.2mL/d的無菌水溶液。對照組灌以無菌水為對照，0.2mL/d。給予小鼠灌胃喂養15d，喂基礎飼料，自由飲水。小鼠末次給樣30min后，眼眶取血，測定血常規。取脾臟，稱重。
1.2.3有效成分的分離及確定的研究 供試樣品進行硅膠柱色譜分離純化，以石油醚、石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，合并同類洗脫產物得SYM-1、SYM-2、SYM-3、SYM-4四部分，分別為石油醚、石油醚-乙酸乙酯(70∶1)、石油醚-乙酸乙酯(30∶1)、石油醚-乙酸乙酯(10∶1)的洗脫產物。昆明種小鼠50只，分為5組，每組10只，雌雄各半，以樣品SYM-1、SYM-2、SYM-3、SYM-4為實驗材料，相當于每日小鼠給藥量為5g生藥/只，對照組以無菌水為對照，給予小鼠灌胃喂養10d。小鼠末次給樣30min后，眼眶取血，測定血常規。1.2.4分析有效成分-GC-MS方法HP5890型氣相色譜儀，HP5色譜柱(柱長30m，內徑0.25mm)，HP5972型質譜儀。升溫程序爐溫180℃，5分鐘，5℃--270℃，30分鐘。進樣口溫度250℃，分流比60∶1，離子源溫度280℃，電離方式EI。
1.2.4數據處理實驗結果用均值±標準差表示，用t檢驗方法比較差異。
2結果與分析 2.1蕨麻有效部位對小鼠補血作用的影響 表1蕨麻有效部位對小鼠補血作用的影響 Tablel Effect of the extraction of Potentilla anserina L.on RBC and HGB in mice(X±S)
a.p＜0.05 compared with control 從表1可以看出，樣品組與對照組相比，樣品組和陽性對照紅桃K生血劑組能提高小鼠血液中的紅細胞數量、血紅蛋白含量，降低脾/體比值，與對照組比較，差異顯著。并且，樣品組與陽性對照紅桃k生血劑相比，補血效果相同。但對于MCHC和MCH沒有明顯的變化。這說明蕨麻主要是通過增加紅細胞數量來提高血紅蛋白含量。因此，提示蕨麻的補血作用可能首先是促進骨髓造血干細胞快速繁殖，然后再促進幼稚紅細胞合成血紅蛋白。2.2蕨麻有效成分的分離及鑒定的研究 表2蕨麻補血有效成分對小鼠的影響 Table2 Effect of the extractions of Potentilla anserina L.on RBC and HGB in mice(X±S)
a.p＜0.05 b.p＜0.01 compared with control 從表2可以看出，SYM-1、SYM-2、SYM-3、SYM-4四種樣品中SYM-1的補血作用最不明顯；而樣品SYM-2、SYM-3和SYM-4與對照組比較，補血效果差異顯著，樣品SYM-2的補血作用最明顯，RBC、HGB、HCT三個指標均有顯著的提高。2.3GC-MS分析蕨麻補血活性有效部位中成分組成 對樣品SYM-2、SYM-3和SYM-4進行GC-MS分析，確定了其中含有12種化合物，它們是棕櫚酸、硬脂酸、油酸、十四烷酸乙酯、十八烷酸乙酯、油酸乙酯、9，12-十八碳烯酸、3-十八碳烯酸、β-谷甾醇、豆甾3，5二烯-7-酮、苯二甲酸二異辛基酯、鄰苯二甲酸-2-乙基己基二酯。
表3GC-MS分析蕨麻補血活性有效部位成分Table 2 The volatile constituents from the root of Potentilla anserina L. Peak NO. RT(min) compound Formula Mr 1 9.24hexadecanoic acid C16H32O2 256 2 9.71 tetradecanoic acid，ethyl ester C10H32O2 256 3 12.50oleic acidC18H34O2 282 4 12.99 octadecanoic acid C18H36O2 284 5 13.12 ethyl oleate C20H38O2 310 6 13.59 octadecanoic acid，ethyl ester C20H40O2 312 7 40.81stigmasta-3，5-dien-7-one C29H46O 410 8 19.84 bis(2-ethylhexyl)phthalate 390 9 11.47 3-octadecene，[E]-252 10 12.52 9，12-octadecanoic acid [E，E]- C18H32O2 280 11 19.74 1，2-benzenedicarboxylic acid，diisooctyl 390 12 36.72 β-sitosterol C29H50O 414 3.結論 通過動物實驗證明本發明的蕨麻提取物可以提高小鼠血液中紅細胞數量、血紅蛋白含量，降低脾/體比值，但對MCHC和MCH沒有明顯的變化，這說明蕨麻主要是通過增加紅細胞數量來提高血紅蛋白含量，因此提示蕨麻的補血作用可能首先是促進骨髓造血干細胞快速繁殖，然后再促進幼稚紅細胞合成血紅蛋白。其制備工藝簡單，產品穩定性好。
權利要求
1.一種以蕨麻為原料制備的具有補血作用的蕨麻有效部位，其特征在于蕨麻有效部位可以作為補血藥物和保健食品。
2.一種權利要求1所述的蕨麻補血有效活性部位的制備方法，其特征是
(1)將蕨麻用水反復洗凈，涼干，置于80℃烘箱中干燥后，用粉碎機粉碎，過60-80目篩子備用。
(2)將蕨麻粉加入2-5倍體積的乙醇，回流提取3次，每次2-5小時；
(3)合并上述提取液；
(4)乙醇提取液真空減壓濃縮，得乙醇濃縮浸膏；
(5)乙醇濃縮干膏加水溶解，加2-10倍體積的石油醚萃取3次，每次8-16小時；
(6)合并石油醚萃取液并真空減壓濃縮，得本發明的蕨麻補血活性成分。
3.如權利要求1所述的蕨麻有效部位能顯著提高機體血液中紅細胞數量和血紅蛋白含量，具有較強的補血作用。
全文摘要
本發明公開了具有補血作用的蕨麻有效部位及其制備方法。它可以用于補血藥物和保健品及其制備領域。本發明涉及的蕨麻補血藥物或保健品以蕨麻干果為原料，用石油醚萃取蕨麻的乙醇提取物，萃取物經真空減壓濃縮后得到具有補血功能的有效部位。動物體內實驗表明，蕨麻有效部位能顯著提高小鼠血液中的紅細胞數量和血紅蛋白含量。本發明為蕨麻在補血藥物或保健品中的應用創造了條件。
文檔編號A61K36/73GK101214294SQ20071001000
公開日2008年7月9日 申請日期2007年1月3日 優先權日2007年1月3日
發明者尚德靜, 李慶偉 申請人:遼寧師范大學