專利名稱：一種用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物，尤其涉及一種用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，屬生物技術領域。
背景技術：
畜禽病毒性傳染病是養殖業的最大威脅，給養殖業造成嚴重的經濟損失。對畜禽病毒性傳染病的防治傳統上有以下幾種方式1、免疫接種疫苗許多動物病毒性傳染病是通過疫苗接種而得到很好的防制，但仍存在一些嚴重問題①弱毒疫苗存在潛在安全隱患；②滅活疫苗雖然安全，但免疫效力尤其細胞免疫作用具有局限性；③基因工程亞單位疫苗雖具有應作潛力，但其免疫效果特別是細胞免疫不足；④在肉雞生產中，注射油乳佐劑滅活苗會造成機體殘留，嚴重影響肉的品質。⑤疾病血清型趨于復雜、毒株變異快，常常導致疫苗免疫失敗；⑥新的病毒不斷產生，目前還尚無成功的疫苗可用于預防接種，一時難以控制。2、抗病毒藥物目前在市場上存在許多抗病毒藥物，如病毒唑、金剛烷胺、利巴偉林等，具有一定的抗病毒效果。其對機體細胞有一定毒性，不可長期使用，長期使用又會導致出現耐藥性，影響了抗病毒藥物的臨床使用效果。3、抗病毒中草藥抗病毒中草藥在畜禽病毒性傳染病的治療和預防上發揮了有效的作用，許多養殖戶在動物飼料中或飲水中添加大量抗病毒藥物以預防傳染病，但抗病毒中草藥在飼料和飲水中的使用，導致其機體中有中草藥異味殘留，而嚴重影響我國肉產品的出口。另外中草藥的抗病毒有效成份及其機理尚未研究清楚，是中草藥在畜禽病毒性傳染病預防和治療上的使用未被多數國家認可的技術障礙。
發明內容
本發明在于提供一種用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，以有效預防和治療動物病毒性傳染病。
為了達到上述目的，本發明的技術方案在于采用了一種用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，該藥物含有干擾素和特異性抗體及有效成分提取物。
所述的干擾素和抗體的用量比為100-0.1萬單位1μg。
所述的干擾素為同種屬干擾素。
所述的同種屬干擾素可以為α干擾素、β干擾素和γ干擾素中的任意一種或其任意組合。
所述的特異性抗體可以為血清抗體、母乳抗體、卵黃抗體、基因工程抗體及免疫球蛋白中的任意一種。
所述的有效成分提取物由板藍根、大青葉、金銀花、淡竹葉、連翹、黃苓中的一種或其任意組合制備而成。
所述的藥物可以為任意一種劑型。
本發明的藥物中的該藥物包含有動物干擾素和特異性抗體，其中干擾素是動物細胞受到適宜的刺激時產生的一種具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調節作用的糖蛋白。病毒、細菌及其內、外毒素以及人工合成的物質如聚肌苷酸、聚胞苷酸等均能誘導干擾素的產生。但一般情況下動物體內干擾素基因常處于封閉狀態，只有在病毒等因素誘導下才表達，并且表達量極微。所以，在考慮使用干擾素防治畜禽傳染病時，只有給予大量外源性干擾素才能達到防治效果。我們已成功表達了豬、雞、牛、犬、羊等系列動物的干擾素，經體外實驗證明具有較強的抗病毒生物活性和免疫調節活性。干擾素的抗病毒作用是通過與靶細胞受體結合，使細胞抗病毒蛋白基因去抑制而被激活，轉錄合成特定的mRNA，產生抗病毒蛋白(AVP)而間接發揮抗病毒作用；因此干擾素的抗病毒作用僅限于細胞內的病毒復制，而對于存在于體液中，干擾素不起作用。如果單獨使用干擾素治療病毒病，須長期(不少于三天)大劑量使用才有效果，而干擾素的長時間大劑量使用易產生副作用，甚至誘導機體產生抗干擾素抗體，影響隨后的使用效果。抗體是機體受到病毒、細菌、毒素等抗原刺激后產生的針對該抗原的免疫球蛋白。抗體具有中和病毒的作用，又稱為中和抗體，包括IgG、IgM、IgA等。抗體與病毒表面抗原結合后，使病毒失去與細胞表面受體結合的能力，同時形成復合體后，介導免疫吞噬細胞的吞噬作用和激活補體。抗體中和病毒的機制包括兩個方面，一是使病毒不能吸附在細胞上，其作用過程是病毒表面由許多重復的亞單位組成，當抗體與病毒覆蓋后，形成病毒抗體復合物，由于構型的改變，使其不能吸附在細胞上；二是增強對病毒的分解，由于被抗體處理過的病毒，降低了其對細胞的吸附能力，從而延長了其在細胞外的停留時間，最終必須被吞噬細胞吞噬，在吞噬細胞內通過溶酶體將病毒抗體復合物分解，同時激活補體系統清除病原體。中和抗體不能進入細胞內消滅病毒，而只能存在于細胞外體液中，一旦有病毒從細胞內脫出，中和抗體與病毒表面結合，使其失去與細胞結合的能力，在中和抗體的介導下，由細胞毒淋巴細胞或吞噬細胞清除。中和抗體主要是防止病毒傳入和擴散蔓延的作用。抗體在臨床上治療病毒病已有許多成功的報道，如用雞的粗制卵黃抗體治療雞的傳染性法氏囊病。但是單獨使用抗體，在許多病毒性傳染病的防治上無效果，甚至會導致病情的進一步惡化，如豬的繁殖呼吸綜合癥，豬的圓環病毒病，雞的新城疫等。本發明所述的特異性抗體是通過用相對應的病毒制成滅活疫苗連續免疫同種屬動物，檢測抗體達到要求時，無菌采血分離血清抗體，經純化濃縮精制后制成。禽類則又可采用卵黃抗體。同種屬干擾素和特異性抗體聯合使用，在細胞內抑制病毒復制和在細胞外中和病毒，使病毒喪失與細胞結合的能力并通過形成病毒抗體復合體而介導被免疫細胞吞噬，從二方面達到快速抑制和清除機體內的病毒，克服單獨使用干擾素或者特異性抗體所存在的問題。該發明所提供的藥物防治畜禽病毒性傳染病，具有顯著的進步，一是具有抗病毒作用廣譜，療效快，用藥量少，成本低，減少因注射而多次抓捕動物造成的應激反應等。另一更顯著的進步是該發明提供的藥物可以通過胎盤屏障進入胚胎，抑制胎兒體內的病毒復制。因此可用于懷孕母畜，預防和治療因病毒感染而造成的流產、死胎及繁殖障礙，這一點是本發明顯著的進步，克服了其他抗病毒藥物因不能通過胎盤屏障保護胚胎的缺陷。
本發明的藥物，可以制成液體和粉劑，液體的輔助成分還包括EDTA、巰基乙醇、tris-HCL、MgCL2、KCL和10％-50％的甘油，并調節PH值為7.0-7.4。在-18℃以下低溫條件下保存，并在0-4℃條件下運輸。粉劑的輔助成分還包括脫脂奶粉、葡萄糖、蔗糖、淀粉、聚乳糖、聚乙二醇、羧甲基纖維素。根據方便臨床使用可制成不同的濃度，本發明的藥物可以采取注射、飲水、拌料、滴口、滴鼻、點眼等用藥方式。
本發明提供的藥物可以含有抗病毒中草藥提取液。涉及到的中草藥提取液的使用劑量根據動物的體重和品種以及中草藥提取液的濃度在具體配制上可有適當的使用范圍。
本發明的藥物，可含同種屬畜禽白細胞介素2，白細胞介素2具有免疫增強作用及促進淋巴細胞增殖活性，可促進NK細胞、K細胞、LAK細胞及CTL細胞的殺細胞活性。將已表達成功的豬、雞、牛的白細胞介素2重組蛋白以活性單位與干擾素的活性單位的比例，在1∶1-1000的范圍，臨床上治療病毒性疾病，顯示出明顯的治療效果。
干擾素的用量在1,000μ-100,000μ每公斤體重，抗體用量應根據畜禽品種以中和病毒的有效劑量，大約不低于0.1μg/kg的劑量施用的。動物干擾素是同種屬動物干擾素，既包括天然干擾素又包括基因工程干擾素。特異性抗體包括血清抗體、母乳抗體、卵黃抗體和基因工程抗體，經純化濃縮后，按照優化比例與同種屬干擾素充分混合。
具體實施例方式
實施例1細胞抑制動物病毒實驗用VSV分別在MDBK、PK、雞成纖維細胞上對本發明所提供的藥物進行檢測。多次檢測結果表明，本發明所提供的藥物具有很高的抗病毒活性，比單純干擾素組平均高100-1000倍。
用豬瘟病毒在PK細胞上培養，然后用豬瘟熒光抗體染色，熒光顯微鏡觀察，結果表明本發明所提供的藥物比單純干擾素活性高100倍。
在96孔微量細胞板上用DMEM培養基培養PK細胞和Marc145細胞，待長成細胞單層后，用不同含量的本發明產品進行處理，然后吸棄，再分別接種1000個TCID50豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒、豬細小病毒、豬偽狂犬病毒、豬流感病毒，結果表明本發明所提供的藥物對豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒、豬細小病毒、豬偽狂犬病毒、豬流感病毒感染所引起的細胞病變具有強烈的抑制作用，而未經處理的細胞接種病毒后，均出現細胞變圓、脫落、崩解等細胞病變。
在96孔微量細胞板上用DMEM培養基培養雞胚成纖維細胞(CEF)，待長成細胞單層后，用不同含量的本發明產品進行處理，然后吸棄，再分別接種1000個TCID50的雞新城疫病毒、雞傳染性法氏囊病毒，結果表明本發明所提供的產品對雞新城疫病毒和傳染性法氏囊病毒所引起的細胞病變具有強烈的抑制作用，未處理細胞接種病毒后，均出現細胞病變。
實施例2臨床實驗用本發明的藥物分別在臨床上預防和治療豬瘟、豬流行性腹瀉、豬傳染性胃腸炎、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、豬圓環病毒病、豬口蹄疫、豬細小病毒病、豬乙型腦炎、豬偽狂犬病、豬流感。本發明所提供的藥物的使用方法按每公斤體重0.01ml注射液用適量無菌生理鹽水稀釋后肌肉注射。每毫升注射液含100萬單位的豬干擾素和100ug豬特異性血清抗體。一次注射，在疾病發作期注射二次。用于懷孕母豬可保護胎兒不受病毒感染。
預防和治療雞新城疫、法氏囊、傳染性支氣管炎、傳染性喉氣管炎、腦脊髓炎、馬立克、淋巴白血病、網狀內皮細胞增生癥、傳染性貧血、病毒性關節炎、雞痘、鴨的病毒性肝炎、鴨瘟。本發明所提供的藥物的使用方法按每只成年雞0.01ml注射液用適量無菌生理鹽水稀釋后肌肉注射或飲水。每毫升注射液含100萬單位的雞干擾素和100ug雞特異性卵黃抗體。一次注射，在疾病發作期使用二次。
預防和治療牛的口蹄疫、病毒性腹瀉、水皰性口炎、傳染性鼻氣管炎，細小病毒感染、藍舌病。按每公斤體重0.01ml注射液用適量無菌生理鹽水稀釋后肌肉注射。每毫升注射液含100萬單位的牛干擾素和100μg牛特異性血清抗體。一次注射，在疾病發作期注射二次。用于懷孕母牛可保護胎兒不受病毒感染。
實施例3本發明所提供的藥物根據方便臨床使用可制成液態和粉劑。液體的輔助成分還包括EDTA、巰基乙醇、tris-HCL、MgCL2、KCL和10％-50％的甘油，并調節PH值為7.0-7.4。在-18℃以下低溫條件下保存，并在0-4℃條件下運輸。粉劑的輔助成分還包括脫脂奶粉、葡萄糖、蔗糖、淀粉、聚乳糖、聚乙二醇、羧甲基纖維素。
實施例4本發明提供的藥物可以含有抗病毒中草藥提取液。涉及到的中草藥包括板藍根、大青葉、金銀花、淡竹葉、連翹、黃苓。中草藥提取液的使用劑量根據動物的體重和品種以及中草藥提取液的濃度在具體配制上可有適當的使用范圍。在動物臨床試驗表明具有明顯的治療效果。
實施例5本發明提供的藥物，可含同種屬動物白細胞介素2。白細胞介素2具有免疫增強作用，具有促進淋巴細胞增殖活性，可促進NK細胞、K細胞、LAK細胞及CTL細胞的殺細胞活性。將已表達成功的豬、雞、牛的白細胞介素2重組蛋白以活性單位與干擾素的活性單位的比例，在1∶1-1000的范圍，臨床上治療病毒性疾病，顯示出明顯的治療效果。經試驗以1∶100的使用效果最好。
最后所應說明的是以上實施例僅用以說明而非限制本發明的技術方案，盡管參照上述實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解依然可以對本發明進行修改或者等同替換，而不脫離本發明的精神和范圍的任何修改或局部替換，其均應涵蓋在本發明的權利要求范圍當中。
權利要求
1.一種用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，其特征在于該藥物含有干擾素和特異性抗體及有效成分提取物。
2.根據權利要求1所述的用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，其特征在于所述的干擾素和特異性抗體的用量比為100-0.1萬單位1μg。
3.根據權利要求2所述的用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，其特征在于所述的干擾素為同種屬干擾素。
4.根據權利要求3所述的用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，其特征在于所述的同種屬干擾素可以為α干擾素、β干擾素和γ干擾素中的任意一種或其任意組合。
5.根據權利要求4所述的用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，其特征在于所述的特異性抗體可以為血清抗體、母乳抗體、卵黃抗體、基因工程抗體及免疫球蛋白中的任意一種。
6.根據權利要求1所述的用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，其特征在于所述的有效成分提取物由板藍根、大青葉、金銀花、淡竹葉、連翹、黃苓中的一種或其任意組合制備而成。
7.根據權利要求1-6中的任一條所述用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，其特征在于所述的藥物可以為任意一種劑型。
全文摘要
本發明涉及一種用于防治畜禽病毒性傳染病的藥物，該藥物含有干擾素和特異性抗體及有效成分提取物。本發明所提供的藥物防治畜禽病毒性傳染病，具有顯著的進步，一是具有抗病毒作用廣譜，療效快，用藥量少，成本低，減少因注射而多次抓捕動物造成的應激反應等。另一更顯著的進步是該發明提供的藥物可以通過胎盤屏障進入胚胎，抑制胎兒體內的病毒復制。因此可用于懷孕母畜，預防和治療因病毒感染而造成的流產、死胎及繁殖障礙，這一點是本發明顯著的進步，克服了其他抗病毒藥物因不能通過胎盤屏障保護胚胎的缺陷。
文檔編號A61P31/00GK101057971SQ200710006069
公開日2007年10月24日 申請日期2007年1月26日 優先權日2006年4月20日
發明者王彥彬, 崔保安, 康相濤, 許蘭菊 申請人:河南農業大學