專利名稱：：抑制血管生成及治療血管生成相關(guān)疾病的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本申請涉及抑制血管生成及治療血管生成相關(guān)疾病的方法。具體而言，本申請涉及通過給予有效量的含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿(thioedehicine)二聚體的組合物而抑制血管生成并治療血管生成相關(guān)疾病的方法。
背景技術(shù)：
：血管生成是高度調(diào)控的生物過程，新的血管通過該過程形成。不受控的血管生成導(dǎo)致多種疾病。一種這樣的疾病是年齡相關(guān)性黃斑變性(age-relatedmaculardegeneration)("AMD"),其特征是新血管入侵進入眼的不同結(jié)構(gòu)如黃斑和視網(wǎng)膜色素上皮細胞中。血管生成影響的另一種疾病是風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，其中關(guān)節(jié)的滑膜襯里(synoviallining)中的血管經(jīng)歷血管生成。除了形成新的血管網(wǎng)絡(luò)，內(nèi)皮細胞釋放導(dǎo)致血管翳(pa皿us)生長和軟骨破壞(cartilagedestruction)的因子和活性氧種類。不受控的血管生成也與諸如糖尿病性視網(wǎng)膜病、銀屑病、心血管再狹窄(restenosis)和新生血管性青光眼的疾病相關(guān)。此外，血管生成也參與腫瘤形成和轉(zhuǎn)移。例如，已經(jīng)顯示，直徑增大到大于約2毫米的腫瘤必須獲得它們自己的血液供應(yīng)，并且通過誘導(dǎo)新毛細血管的生長來完成此。在這些新生血管嵌入腫瘤中之后，它們提供腫瘤生長所必需的營養(yǎng)及生長因子，并促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移。特定耙向血管生成的抗血管生成劑已經(jīng)被開發(fā)用于治療血管生成相關(guān)疾病。參見，例如，美國專利號6,919,309;美國專利申請公布號2006/0009412;和PCT申請公布號WO04/027027和WO05/117876。此外，靶向已形成血管的藥劑(所謂的"血管靶向靴，或VTA)也已經(jīng)被開發(fā)。這些藥劑據(jù)認為這樣發(fā)揮功能選擇性地使內(nèi)皮細胞的微管細胞骨架不穩(wěn)定，引起細胞形狀的重大改變，這最終導(dǎo)致血管堵塞和血流停止。參見，例如，WO2005/113532。硫代秋水仙堿二聚體是疏水性化合物，其在以前已經(jīng)被描述。參見，例如，美國專利號6，627，774。這些化合物具有雙重作用機理，即，所述化合物具有抗微管活性和拓撲異構(gòu)酶I抑制活性。Raspaglio等,Z^oc/zem.尸/zarmaco/.2005,69(1):113-21。納米顆粒白蛋白結(jié)合的硫代秋水仙堿二聚體制劑和已經(jīng)被開發(fā)作為細胞毒性化學(xué)治療劑用于治療癌癥。參見，例如，Bernacki等，Ca"cervol.46,2005#2390和PCT專利申請?zhí)朠CT/US2006/006167。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)以24mg/kg，qdx5靜脈給藥時，A^6-5404能夠誘導(dǎo)A121卵巢腫瘤異體移植物中的腫瘤完全退化和治愈。本文提到的所有出版物、專禾U、專利申請和公布專利申請的公開內(nèi)容在此以其整體引入作為參考。發(fā)明概述本發(fā)明在一方面提供在個體中抑制血管生成的方法，包括給予該個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的組合物，其中所述組合物處于有效抑制血管生成的量，并且其中所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)顯著的細胞毒性。在一些實施方式中，提供一種在個體中抑制血管生成的方法，包括給予該個體有效量的組合物，所述組合物包含秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)，其中所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)在所述組合物中的量(即每次給藥的量)在約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15mg/ii^體表的任一以下。在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予該個體有效量的組合物，所述組合物含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)，其中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)在所述組合物中的量在約0.05、0.08、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5或0.6mg/kg的任一以下。在一些實施方式中，所述組合物如下給藥至少約每-周一次、每兩周一次、每周一次、每周兩次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天一次中的任一種。在一些實施方式中，所述組合物被給藥(中斷或不中斷)至少約l、2、3、4、5、76、7、8、9、10、11、12或更多個月中的任一種。在一些實施方式中，所述組合物通過靜脈內(nèi)、眼內(nèi)、動脈內(nèi)、口服、局部或吸入途徑中任一種給藥。用在本文所述方法中的組合物可進一步包含生物相容性聚合物，例如載體蛋白。例如，在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予所述個體包含載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的組合物，其中所述組合物的量有效抑制血管生成，并且其中所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予該個體有效量的包含載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的組合物，其中所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的量在約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15mg/n^體表的任一以下。在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予該個體有效量的包含載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的組合物，其中所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的量在約0.05、0.08、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5或0.6mg/kg的任一以下。在一些實施方式中，所述含有載體蛋白的組合物基本上不含(如不含)表面活性劑。在一些實施方式中，所述組合物如下給藥至少約每三周一次、每兩周一次、每周一次、每周兩次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天一次中任一種在一些實施方式中，所述組合物被給藥(中斷或不中斷)至少約l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多個月中任一種。在一些實施方式中，所述組合物通過靜脈內(nèi)、眼內(nèi)、動脈內(nèi)、口服、局部或吸入途徑中任一種給藥。用在本文所述方法中的組合物可包含顆粒(如微粒或納米顆粒)，其包含載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體。例如，在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予該個體包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒含有載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404),其中所述組合物處于有效抑制血管生成的量，并且其中所述組合物的量不足以在個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予該個體有效量的包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒含有載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)，其中所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的量在約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15mg/m2體表的任一以下。在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予該個體有效量的包含納米顆粒的組合物，所述納米顆粒含有載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)，其中所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的量在約0.05、0.08、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5或0.6mg/kg的任一以下。在一些實施方式中，所述組合物如下給藥至少約每三周一次、每兩周一次、每周一次、每周兩次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天一次中任一種。在一些實施方式中，所述組合物被給藥(中斷或不中斷)至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多個月中任一種。在一些實施方式中，所述組合物通過靜脈內(nèi)、眼內(nèi)、動脈內(nèi)、口服、局部或吸入途徑中任一種給藥。在一些實施方式中，所述組合物中的顆粒具有不大于約200nm的平均直徑。在一些實施方式中，含有顆粒的組合物基本不含(如不含)表面活性劑。在一些實施方式中，所述組合物中的蛋白(如白蛋白)與秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的重量比為約18:1或更小，如約9:1或更小。在一些實施方式中，秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體用載體蛋白(如白蛋白)包被。在一些實施方式中，所述組合物中的顆粒具有不大于約200nm的平均直徑，并且所述組合物基本不含(如不含)表面活性劑。在一些實施方式中，所述組合物中的顆粒(特別地，納米顆粒)具有不大于約200nm的平均直徑，并且秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體用蛋白(如白蛋白)包被。上述特征的其它組合也考慮在內(nèi)。在一些實施方式中，所述顆粒組合物為A^"6-5404。包含其它秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的顆粒組合物也可以包含一種或多種上述特征。本文所述的秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體包含秋水仙堿、硫代秋水仙堿或其衍生物的兩個(相同或不同)亞單元。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體包含至少一個硫代秋水仙堿亞單元。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體包含9兩個硫代秋水仙堿亞單元。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體是式(I)的化合物(I)其中每個亞單元中的B是甲氧基或甲硫基，R2當(dāng)與R3—起選取時是甲氧基、羥基或亞甲二氧基(methylenedioxy);113當(dāng)與尺2—起選取時是甲氧基、羥基或亞甲二氧基。在一些實施方式中，X含有至少一個碳原子。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或秋水仙堿二聚體是式(II)的化合物(II)其中81是甲氧基或甲硫基，B2是甲氧基或甲硫基，n是從0到8的整數(shù)，Y是CH2基團，或者當(dāng)n為1時，Y也可以是式NH的基團。在一些實施方式中，n是0、1、2、3、4、5、6、7或8中任一種(例如選自它們)。在一些實施方式中，n是1。在一些實施方式中，n是1且Y是NH。在一些實施方式中，n是2。在一些實施方式中，b,和B2都是甲氧基。在一些實施方式屮，b,和B2都是甲硫基。在一些實施方式中，b,是甲氧基且B2是甲硫基。在一些實施方式中，b,是甲硫基且B2是甲氧基。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體是下述任一種(并且在一些實施方式中選自)1DN5404、IDN5676、IDN5800和IDN5801。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體是IDN5404。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體是IDN5676。在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予該個體含有納米顆粒的組合物，所述納米顆粒包含白蛋白和IDN5404、IDN5676、IDN5800禾BIDN5801任一種(以下分別命名為'W"6-5404"、'W"6-5676"、'Wa6-5800"和"A^-580r)。在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予該個體A^6-5404(或AW-5676、A/^-5800禾B7V"6-5801中任一種)，其中所述；V"6-5404(或AWj-5676、A^-5800和A^-5801中任一種)處于有效抑制血管生成的量，并且其中7Va6-5404(或M^-5676、M^-5800和A^-5801中任一種)的量不足以誘導(dǎo)個體中明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予該個體有效量的7Va6-5404(或A^)-5676、M3Z)-5800和A/a6-5801中任一種)，其中A^6-5404(或iVa6-5676、A^-5800和A^6誦5801中任一禾中)的量在約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15mg/n^體表中任一以下。在一些實施方式中，提供抑制個體中血管生成的方法，包括給予該個體有效量的M^>-5404(或AW-5676、A^6-5800和A^>-5801中任一種)，其中A^6-5404(或A^-5676、A^-5800和湯-5801中任一種)的量在約0.05、0.08、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5或0.6mg/kg的任一以下。在一些實施方式中，所述組合物如下給藥至少約每三周一次、每兩周一次、每周一次、每周兩次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天一次中任一種。在一些實施方式中，所述組合物被給藥(中斷或不中斷)至少約l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多個月中任一種。在一些實施方式中，所述組合物通過靜脈內(nèi)、眼內(nèi)、動脈內(nèi)、口服、局部或吸入途徑中任一種給藥。本文所述的方法通常用于血管生成相關(guān)疾病的治療。在一些ii實施方式中，所述血管生成相關(guān)疾病是非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病，包括例如，眼病(如黃斑變性、糖尿病性視網(wǎng)膜病或新生血管性青光眼)、心血管疾病(如再狹窄和動脈粥樣硬化)、皮膚病(如銀屑病)和關(guān)節(jié)炎(如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)。例如，在一些實施方式中，提供治療個體中非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的方法，包括給予該個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效治療非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的量。在一些實施方式中，所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，提供治療個體中非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的方法，包括給予該個體含有載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的組合物，其中所述組合物處于有效治療個體中所述非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的量。在一些實施方式中，所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，提供治療個體中非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的方法，包括給予該個體含有顆粒(如納米顆粒)的組合物，所述顆粒包含載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)，其中所述組合物處于有效治療非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的量。在一些實施方式中，所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，提供治療個體中非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的方法，包括給予該個體A^6-5404(或7Va6-5676、A^j-5800或A^6-5801)，其中A^-5404(或AWj-5676、或A^6-5801)處于有效治療非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的量。在一些實施方式中，所述M^-5404(或M^-5676、A^-5800或iVa6-5801)的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，所述血管生成相關(guān)疾病是腫瘤相關(guān)性疾病，包括例如癌癥和良性腫瘤。能夠通過本文所述方法治療的癌癥包括，但不限于乳腺癌、結(jié)腸直腸癌(colorectalcancer)、直腸癌、非小細胞月市癌(non-smallcelllungcancer)、非何杰金淋巴瘤(non-Hodgkinslymphoma)(NHL)、腎臟細胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、軟組織肉瘤、卡波希肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、良性腫瘤(carcinoidcarcinoma)、頭頸癌(headandneckcancer)、黑素瘤、卵巢癌、間皮瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膠質(zhì)母細胞瘤、成神經(jīng)細胞瘤和多發(fā)性骨髓瘤。在一些實施方式中，所述癌癥為實體腫瘤(solidtumor)(如轉(zhuǎn)移性實體腫瘤)。通過舉例，治療癌癥的方法在下面被進一步描述。例如，在一些實施方式中，提供治療個體中癌癥的方法，包括給予該個體包含秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效治療癌癥的量，并且其中所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，提供治療個體中癌癥的方法，包括給予該個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效治療癌癥的量，并且其中所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的量在秋水仙堿或秋水仙堿二聚體相應(yīng)的最大耐受劑量("MTD")的約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7°/。、8%、9%、11%、12%、13%、14%或15%中任一以下。在一些實施方式中，提供治療個體中癌癥的方法，包括給予該個體含有載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的組合物，其中所述組合物處于有效治療癌癥的量，并且其中所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，提供治療個體中癌癥的方法，包括給予該個體含有載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的組合物，其中所述組合物處于有效治療癌癥的量，并且其中所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的量在秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體相應(yīng)的MTD的約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、11%、12%、13%、14%或15%中任一以下。在一些實施方式中，提供治療個體中癌癥的辦法，包括給予該個體含有顆粒(如納米顆粒)的組合物，所述顆粒包含載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)，其中所述組合物處于有效治療癌癥的量，并且其中所述組合物的量不足以在個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，提供治療個體中癌癥的方法，包括給予該個體含有顆粒(如納米顆粒)的組合物，所述顆粒包含載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)，并且所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404)的量在秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚休相應(yīng)的MTD的約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、11%、12%、13%、14%或15%中任一以下。在一些實施方式中，提供治療個體中癌癥的方法，包括給予該個體M^-5404(或13A^6-5676、A/a6-5800或iVa6-5801)，其中AW-5404(或iVa6-5676、iVa6-5800或M^-5801)處于有效治療癌癥的量，并且其中A^Z)-5404(或A^-5676、M^-5800或AWj-5801)的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，提供治療個體中癌癥的方法，包括給予該個體A^6-5404(或7Va6-5676、A^6-5800或A^6-5801)，其中iVa6-5404(或7VaZ)-5676、A/fl6-5800或M^-5801)處于有效治療癌癥的量，并且其中AW>-5404(或aaw-5676、aw>-5800或a^6-5801)的量在AWj-5404(或aw)-5676、A^6-5800或AW)-5801)相應(yīng)的MTD的約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、11%、12%、13%、14%或15%中任一以下。也提供用于本文所述方法的藥物組合物、單位劑量、試劑盒和制品。應(yīng)該理解，本文所述的各種實施方式的一個、一些或所有性質(zhì)可以被組合，以形成本發(fā)明的其它實施方式。附圖簡述圖1A顯示使用MX-1乳腺癌細胞，Mz6-5404對微管形成的作用。圖1B顯示使用MX-1乳腺癌細胞，Mz6-5676對微管形成的作用。圖2A-2C顯示用對照載體(PBS,2A)、0.6pg/mlAW>-5404(2B)和嗎/mlAW)-5676(2C)處理后，在MX-1細胞中染色微管網(wǎng)絡(luò)的顯微照片。圖3顯示根據(jù)微血管/小管(microvessel/tubule)形成而評估的Mz&5404、A^6-5676和CA4P的抗血管生成活性。細胞在第1天用不同的化合物溫育并在第12天染色。圖3A-3D提供用對照載體(3C)、0.01(ig/ml扁-5404(3A)、0.01ng/ml嵐-5676(3B)和0.01pg/mlCA4P(3D)處理后小管形成的顯微照片。圖4顯示用濃度范圍為0.0到100pg/ml的iV^-5404、和CA4-P處理的細胞的小管長度的比較。圖5顯示根據(jù)微血管/小管形成或破壞(disruption)而評估的A/a6-5404和A/fl6-5676的抗rffl.管生成活性。細胞在第8天用不同的化合物溫育并在第11天染色。圖5A-5C提供用對照載體(5A)、0.01pg/mliVa6-5404(5B)禾卩0.01jag/ml7Va6-5676(5C)處理之后小管形成的顯微照14片。圖5D顯示用濃度范圍為0.0到10pg/ml的A^6-5404和A^6-5676處理的細胞的小管長度的比較。圖6顯示根據(jù)微血管/小管形成或破壞而評估的AW)-5404抗血管生成活性。細胞在第11天用各種濃度的化合物溫育并在第12天染色。圖6A到6F提供用對照載體(6A)、0.001嗎/mlA^6-5404(6B)、0.01pg/mlA^6-5404(6C)、0.1pg/ml7Va6-5404(6D)、1jag/ml7Va6-5404(6E)和10.0嗎/ml旭6-5404(6F)處理后小管形成和破壞的顯微照片。圖7顯示根據(jù)微血管/小管形成或破壞而評估的A^6-5676抗血管生成活性。細胞在第11天用各種濃度的化合物溫育并在第12天染色。圖7A到7F顯示用對照載體(7A)、0.001pg/ml扁-5676(7B)、0.01pg/mlAW畫5676(7c)、0.1pg/mlAWj-5676(7d)、1|ig/ml(7e)和10.0pg/ml7Va6-5676(7F)處理后小管形成和破壞的顯微照片。圖8顯示根據(jù)微血管/小管形成或破壞而評估的ca4p的抗血管生成活性。細胞在第11天用各種濃度的化合物溫育并在第12天染色。圖8A到8C顯示分別用0.01、0.1和1.0pg/ml的CA4P處理后小管形成和破壞的顯微照片。圖9顯示根據(jù)微血管或小管形成或破壞而評估的AW7-5404、Mz6-5676和CA4P的抗血管生成活性的比較。細胞在第11天用化合物溫育并在第12天染色。該圖顯示用濃度范圍在0.0到10pg/ml內(nèi)的每種化合物處理的細胞的小管長度。圖10顯示利用2周期低劑量/高劑量方案，7V"6-5404對異種移植鼠科模型中HT-29腫瘤生長的作用。第一周期劑量為1.7、2.5或3.4mg/kg，0-14天；第二周期劑量為20、30或40mg/kg，15-30天。圖10A顯示從第0天到第40天的平均腫瘤體積(n=10)。圖10B顯示第0天到第40天內(nèi)小鼠體重減輕的平均百分數(shù)。圖ll顯示利用2周期低劑量/高劑量方案，AW)-5676對異種移植鼠科模型中HT-29腫瘤生長的作用。第一周期劑量為1.7、2.5或3.4mg/kg，0-14天；第二周期劑量為20、30或40mg/kg，15-30天。圖11A顯示從第0天到第40天的平均腫瘤體積(n=10)。圖11B顯示第0天到第40天小鼠體重減輕的平均百分數(shù)。圖12顯示CA4P對異種移植鼠科模型中HT-29腫瘤生長的作用。在HT-29腫瘤達到900mn^體積后用100mg/kg處理它們。圖12A顯示從第28天到第41天的平均腫瘤體積(n-10);正方形=載體對照，菱形=CA4P處理。圖12B顯示第28天到第41天內(nèi)小鼠體重減輕的平均百分數(shù)；正方形=載體對照，菱形-CA4P處理。發(fā)明詳述本發(fā)明部分基于我們的觀察含有硫代秋水仙堿二聚體的組合物，特別地，硫代秋水仙堿二聚體的含白蛋白的納米顆粒制劑，更特別地，IDN-5404的含白蛋白的納米顆粒制劑("M^-5404")和IDN-5676的含白蛋白的納米顆粒制齊lJ('WW-5676")在抑制微血管形成和體外破壞已形成的微血管方面有效。Trieu等，97thAACRAnnualMeeting,AbstractNo.3823。這些活性的IC50值顯著低于所述組合物體外細胞毒性活性所要求的值。我們進一步觀察到含有硫代秋水仙堿二聚體的組合物，特別地，硫代秋水仙堿二聚體的含白蛋白的納米顆粒(如他6-5404和齒6-5676)，以顯著低于所述組合物的相應(yīng)最大耐受劑量(MTD)的劑量有效阻止體內(nèi)腫瘤生長。這些觀察表明含有硫代秋水仙堿二聚體或其類似物(如秋水仙堿二聚體)的組合物具有抗血管生成和血管靶向活性，所述活性與它們的細胞毒性作用無關(guān)。當(dāng)以有效且無細胞毒性的量給藥時，所述組合物能夠選擇性地靶向新血管的生長并阻斷血流，而不引起靶組織中明顯的細胞死亡。有效且無細胞毒性量的秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體(即不足以誘導(dǎo)明顯細胞毒性的量)是治療非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病以便最小化所述化合物的細胞毒性作用期望的。有效且無細胞毒性的量對治療癌癥也是有利的。利用細胞毒性藥劑的傳統(tǒng)化學(xué)療法通常以等于或接近藥劑最大耐受劑量的劑量進行，以最大化該藥劑的細胞毒性作用。但是，這種高劑量方案需要延長的無治療期間，以允許正常宿主細胞恢復(fù)。同時，腫瘤細胞也可能在無治療期間恢復(fù)生長。這會增加發(fā)展抗藥物腫瘤細胞的風(fēng)險。無細胞毒性劑量(即數(shù)量)的秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚休允許在治療周期無明顯間斷的治療，因此降低了發(fā)展藥物抗件的風(fēng)險。此外，無細胞毒性的劑量將發(fā)展由藥物引起的明顯全身毒性(如體重減輕)和副作用的可能性減到最小。16因此，本發(fā)明一方面提供抑制個體中血管生成的方法(包括靶向已發(fā)生的血管化作用)，包括給予該個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效抑制血管生成的量，并且其中所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，所述方法包括給予該個體含有載體蛋白(如白蛋白)和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效抑制血管生成的量，并且其中所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在另一方面，本發(fā)明提供治療個體中非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的方法，包括給予所述個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效治療非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的量。在一些實施方式中，所述方法包括給予該個體含有載體蛋白和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效治療非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的方法。另一方面，本發(fā)明提供治療個體中腫瘤相關(guān)疾病的方法，包括給予該個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效治療腫瘤相關(guān)疾病的量，并且其中所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。在一些實施方式中，所述方法包括給予該個體含有載體蛋白和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效治療癌癥的量，并且其中所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。也提供用于本文所述方法的藥物組合物、單位劑量、試劑盒和制品。—般提到的"所述組合物"或"組合物"包括并適用本發(fā)明的組合物。本發(fā)明也提供含有本文所述成分的藥物組合物。術(shù)語"個體"為哺乳動物，包括人類。個體包括但不限于人、牛、豬、貓、狗、鼠或靈長類。在一些實施方式中，所述個體為人。在一些實施方式中，所述個體為用于研究血管生成或血管生成相關(guān)疾病(一種或多種)的實驗動物模型。本公開包括本文提到的化合物的所有立體異構(gòu)體，包括對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體。除非立體化學(xué)在結(jié)構(gòu)上有明確的表示，公開的結(jié)構(gòu)意欲包括所有可能的立體化學(xué)變型。本公開包括所公開的任何手性化合物的所有對映異構(gòu)體，它們或者是基本純的左旋或右旋形式，或在旋光混合物中，或是任意比率的對映異構(gòu)體。本公開包括上式中提到的化合物的任何非對映異構(gòu)體，它們處于基本純的非對映異構(gòu)形式和所有比率的混合物的形式。本公開也包括本文提到的化合物的所有溶劑合物，包括本文提到的化合物的所有水合物。本公開也包括所有多晶型物(polymorph),包括本文提到的化合物的晶體和非晶體形式。本公開也包括本文提到的化合物的所有鹽，特別是藥學(xué)上可接受的鹽。本文公開的化合物的代謝產(chǎn)物和前體藥物也被本公開包含。在本文公開的化合物的所有用途中，本公開也包括所述化合物的任意或全部立體化學(xué)、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、溶劑合物、水合物、多晶型物、晶體、非晶體、鹽、藥學(xué)上可接受的鹽、代謝產(chǎn)物和前體藥物變型的用途。應(yīng)該理解，本文所述的本發(fā)明的方面和實施方式包括由方面和實施方式"組成(consistingof)"和/或"基本組成(consistingessentiallyof)"。抑制血管生成的方法本發(fā)明在一方面提供通過施用含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物(如，含載體蛋白的組合物)抑制個體中血管生成的方法。所述組合物處于有效抑制血管生成的量。但是，所施用的所述組合物的量不足以在該個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。"血管生成"用在這里指的是在組織或器官中產(chǎn)生新血管的過程。血管生成通常開始于由內(nèi)皮細胞和白細胞釋放的酶引起的血管基膜(basementmembrane)的侵蝕。鋪襯血管內(nèi)腔的內(nèi)皮細胞隨后穿過基膜伸出。血管生成刺激物誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞遷移穿過被侵蝕的基膜。遷移的細胞在親代血管外形成"新芽(sprout)"，在那里內(nèi)皮細胞進行有絲分裂和增殖。內(nèi)皮的新芽彼此融合形成毛細血管袢，產(chǎn)生新的血管。"抑制血管生成"指的是減少、阻止或抑制個體中一個或多個組織內(nèi)的血管牛成，包括例如眼組織、心血管組織、皮膚組織、關(guān)節(jié)組織和腫瘤組織。血管生成的抑制可以通過影響血管生成過程的一個或多個步驟來實現(xiàn)，例如，通過減弱被激活的內(nèi)皮細胞的遷移和存活，阻止細胞從親代血管上"生芽"，禾n/或阻止新血管的形成。微血管密度的變化也包含在術(shù)語"抑制血管生成"中。術(shù)語"抑制血管生成"也包括破壞已建立的脈管系統(tǒng)。"破壞已建立的脈管系統(tǒng)"指的是阻塞、溶解或以其它方式影響由血管生成形成的已存在的脈管系統(tǒng)的能力。脈管系統(tǒng)的破壞可以是可逆的或不可逆的、部分的或全部的。因此，本文提供的方法包括一個或多個以下的方面抑制(如，減少、阻止或防止)內(nèi)皮細胞遷移，抑制(如，減少、阻止或防止)內(nèi)皮細胞從親代血管上"生芽"，抑制(如，減少、阻止或防止)新血管的形成，以及靶向(如，阻塞、中斷或破壞)由血管生成形成的已建立脈管系統(tǒng)。在一些實施方式中，提供抑制(如，減少、阻止或防止)個體中血管形成的方法。在一些實施方式中，提供中斷(如，阻塞、溶解或以其它方式影響)已建立的脈管系統(tǒng)的方法。在一些實施方式中，提供降低個體組織中微血管密度的方法。"有效量"指的是單劑量或多劑量給予個體后，在該個體中提供期望效果的組合物的量或劑量。例如，如果組合物的量足以在個體的一個或多個組織中降低、阻止或防止血管生成(如血管生成的一個或多個方面)，所述組合物處于"有效抑制血管生成的量"。用在治療內(nèi)容中的術(shù)語"有效量"指的是足以治療特定病癥、狀況或疾病的化合物或組合物的量，如改善、緩和、減輕和/或延遲其一種或多種癥狀。有效量可以體外和/或體內(nèi)測定。測定用于抑制血管生成的組合物的有效量的方法在本領(lǐng)域內(nèi)已知。在一些實施方式中，所述組合物的量對抑制眼組織中的血管生成有效。在一些實施方式中，所述組合物的量對抑制心血管組織中的血管生成有效。在一些實施方式中，所述組合物的量對抑制皮膚組織中的血管生成有效。在一些實施方式中，所述組合物的量對抑制關(guān)節(jié)組織中的血管生成有效。在一些實施方式中，所述組合物的量對抑制腫瘤組織中的血管生成有效。在一些實施方式中，所述組合物的量對抑制新血管形成有效。在一些實施方式中，所述組合物的量對抑制內(nèi)皮細胞從親代血管"生芽，，有效。在一些實施方式中，所述組合物的量對抑制內(nèi)皮細胞的遷移有效。在一些實施方式中，所述組合物的量對破壞己建立的脈管系統(tǒng)有效。在一些實施方式中，所述組合物的量對抑制至少約5%、1910%、20%、40%、50%或以上的血管生成(如血管生成的任意一個或多個方面)中任一有效。如果組合物的量不足以使秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體引起個體中顯著的細胞死亡，該組合物處于"不足以誘導(dǎo)顯著細胞毒性的量"(也被稱作"無細胞毒性的量")。細胞毒性可以通過一種或多種下述方式測量。例如，無細胞毒性的量可以基于體外細胞存活率試驗測定。無細胞毒性的量可以是不足以在體外細胞存活率試驗中引起約50%或更多細胞死亡的量。在一些實施方式中，所述組合物的量不足以在體外細胞存活率試驗中引起約40%或更多、30%或更多、20%或更多、10%或更多、5%或更多、4%或更多、3%或更多、2%或更多、或1%或更多中任一的細胞死亡。在一些實施方式中，所述組合物的量不足以在體外細胞存活率試驗中引起任何可測量的細胞死亡。用于體外存活率試驗的合適細胞包括但不限于腫瘤細胞(如MX-1乳腺癌細胞系、HepG2肝癌細胞系和HT-29結(jié)腸癌細胞系)和正常細胞(如原代大鼠肝細胞)。無細胞毒性的量也可以基于藥物毒性的體內(nèi)試驗確定。例如，無細胞毒性的量可以是在體內(nèi)細胞毒性試驗中不足以殺死約50%或更多的測試種群的量。在一些實施方式中，秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的量在體內(nèi)細胞毒性試驗中不足以殺死約40%或更多、30%或更多、20%或更多、10%或更多、5%或更多、4%或更多、3%或更多、2%或更多、或1%或更多的測試種群中任一量。在一些實施方式中，所述組合物的量不足以在體內(nèi)藥物毒性試驗中引起測試種群的任何死亡。無細胞毒性的量也可以基于誘導(dǎo)個體中明顯全身毒性(如體重減輕)所需的秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的量確定，也就是說，如果藥物的量不引起任何明顯的全身毒性，則該藥物的量是無細胞毒性的。例如，在一些實施方式中，無細胞毒性的量是引起約15%(包括，例如約10%、8%、5%或更少中任一量)以下體重減輕的量。在一些實施方式中，每次給藥時所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的量在約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14和15mg/mM壬一以下。例如，秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚休的量可以在約0.25mg/m2體表到約15mg/m2、約0.25mg/m2到約10mg/m2、約0.25mg/m2到約8mg/m2、約0.25mg/m2到約4mg/m2以及約0.25mg/m220到約2mg/r^的范圍內(nèi)。在一些實施方式中，每次給藥時所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的量在約0.05、0.08、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5或0.6mg/kg中任一以下。例如，秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的量可以在約0.05mg/kg到約0.5mg/kg、約0.08mg/kg到約0.3mg/kg和約0.1mg/kg到約0.2mg/mg的范圍內(nèi)。在一些實施方式中，秋水仙堿和硫代秋水仙堿二聚體處于在中斷或不中斷的延長給藥期間(如6個月或更長)內(nèi)不引起藥物抗性的量。在一些實施方式中，秋水仙堿和硫代秋水仙堿二聚體處于在個體中不引起明顯副作用(如通常伴隨化學(xué)療法的副作用)的量。通常伴隨化學(xué)療法的副作用包括例如脫水、腹瀉、惡心、嘔吐、失明或視覺障礙及貧血。所述組合物的給藥頻率包括但不限于下述任一至少約每三周一次、每兩周一次、每周一次、每周兩次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天一次。在一些實施方式中，每次給藥之間的間隔在約一周以下，如約6、5、4、3、2或1天中任一以下。在一些實施方式中，每次給藥之間的間隔恒定。例如，給藥可以每天、每兩天、每三天、每四天、每五天或每周進行。在一些實施方式中，給藥可以每天兩次、每天三次或更頻繁地進行。所述組合物的施用可以在延長的時間段內(nèi)延伸，例如從約一個月到約三年。例如，給藥方案可以在約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30和36個月中任一的時間段內(nèi)延長。在一些實施方式中，在給藥方案中無間斷。在一些實施方式中，每次給藥之間的間隔不多于約一周。本文所述的組合物可以通過本領(lǐng)域內(nèi)任意途徑給予個體，所述途徑包括但不限于靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、眼內(nèi)、動脈內(nèi)、肺內(nèi)、口服、囊泡內(nèi)(intmvesicular)、肌內(nèi)、氣管內(nèi)、皮下、眼內(nèi)、鞘內(nèi)、透皮、透胸膜、動脈內(nèi)、局部、吸入(如，作為噴霧的氣霧)、透粘膜(如通過鼻粘膜)、皮下、透皮、胃腸的、關(guān)節(jié)內(nèi)、腦池內(nèi)、心室內(nèi)、直腸的(即通過栓劑)、陰道的(即通過陰道栓(pessaiy))、顱內(nèi)、尿道內(nèi)、肝內(nèi)和腫瘤內(nèi)。在一些實施方式中，所述組合物被全身給藥。在一些實施方式中，所述組合物被局部給藥。在一些實施方式中，所述組合物通過靜脈內(nèi)、服內(nèi)、動脈內(nèi)、口服、局部或吸入途徑中任一種給藥。當(dāng)所述方法涉及抑制眼組織內(nèi)血管生成時，所述組合物可以直接施用到眼部或眼組織。所述組合物可以局部施用到眼部，如在滴眼劑中。所述組合物也可以通過注射到服部或與眼部相關(guān)的組織給藥。所述組合物可以通過服內(nèi)注射、服周注射、視網(wǎng)膜下注射、玻璃體內(nèi)注射、透隔膜(trans-septal)注射、鞏膜下(subscleml)注射、脈絡(luò)膜內(nèi)注射、虹膜內(nèi)(intracameral)注射、結(jié)膜下注射、眼球筋膜下注射(sub-Tenon，sinjection)、眼球后注射、眼球周圍(peribulbar)注射或后近鞏膜輸送(posteriorjuxtascleraldelivery)給藥。所述組合物可被施用到，例如，玻璃體、房水(aqueoushumor)、鞏膜、結(jié)膜、鞏膜和結(jié)膜之間的區(qū)域、視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜組織、黃斑或者個體眼中或眼部附近的其它區(qū)域。對于用于視網(wǎng)膜藥物輸送的示例性眼周途徑的描述，參見Periocularroutesforretinaldrugdelivery,Raghava等(2004)，O//"./>wgZ)e//v.1(1):99-114。所述組合物也可以作為植入物給予個體。優(yōu)選的植入物是生物相容的和/或生物可降解的緩釋制劑，其在一段時間內(nèi)逐漸釋放所述化合物。用于藥物輸送的眼部植入物在本領(lǐng)域內(nèi)是公知的。參見例如，美國專利號5，501，856、5,476,511和6,331,313。所述組合物也可以使用離子電滲療法給予個體，包括，但不限于在美國專利號4,454,151及美國專利申請公布號2003/0181531和2004/0058313中所述的離子運載方法。治療血管生成相關(guān)疾病的方法本文所述的方法通常被用于血管生成相關(guān)疾病的治療。"血管生成相關(guān)疾病"指的是血管生成是所述疾病的一個方面的疾病或病癥。血管生成相關(guān)疾病可由異常的血管生成引起。在一些實施方式中，所述血管生成相關(guān)疾病至少部分由血管生成介導(dǎo)。在一些實施方式中，血管生成對血管生成相關(guān)疾病的發(fā)展是必要的。血管生成相關(guān)疾病在本領(lǐng)域內(nèi)已知，并包括例如非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病如黃斑變性、糖尿病性視網(wǎng)膜病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和本文所述的其它疾病。在一些實施方式中，所述血管生成相關(guān)疾病為腫瘤相關(guān)疾病，如癌癥或良性腫瘤。如本文所用，"治療"是用于獲得有益或期望的臨床結(jié)果的方法。出于本發(fā)明的目的，有益或期望的臨床結(jié)果包括，但不限于下述22任意一種或多種一種或多種癥狀的緩解、疾病程度的減輕、疾病狀態(tài)的穩(wěn)定(即不惡化)、疾病擴散的阻止或延遲、疾病的發(fā)生或復(fù)發(fā)的阻止或延遲、疾病發(fā)展的延遲或減緩、疾病狀態(tài)的緩和及消除(無論是部分還是全部)。也被"治療"包括的是血管生成相關(guān)疾病的病理結(jié)果的減輕。本發(fā)明的方法考慮這些治療方面的任一個或多個。微*散7雄關(guān)疾嫁游歉本文所述的方法用于非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的治療。在一些實施方式中，所述方法用于眼組織中如角膜、視網(wǎng)膜、黃斑和脈絡(luò)膜屮非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的治療。所述方法通常用于防止失明、視力喪失(如視敏度或視野的喪失)和/或由多種眼病導(dǎo)致的其它結(jié)果。在一些實施方式中，提供治療包括年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)在內(nèi)的黃斑變性的方法。AMD的臨床特征是中央視覺的逐步喪失，所述中央視覺的逐步喪失是由于對視網(wǎng)膜區(qū)域中被稱作黃斑的光感受器細胞的損傷的結(jié)果而發(fā)生的。AMD被廣義地分為兩個臨床狀態(tài)濕形式(wetform)和干形式(dryform),其中干形式構(gòu)成全部病例的80-90%。所述干形式臨床上以黃斑視網(wǎng)膜小疣(maculardrusen)的存在為特征，所述視網(wǎng)膜小疣是位于視網(wǎng)膜色素上皮細胞(RPE)和布魯赫氏膜之間的局部沉積，以及以地圖狀萎縮(geographicatrophy)為特征，所述地圖狀萎縮以伴隨上覆的(overlying)光感受器萎縮的RPE細胞死亡為特征。濕AMD，其引發(fā)約90%的嚴重視力喪失，與黃斑區(qū)域中新生血管形成和這些新血管的滲漏相關(guān)。血液和液體的積存可以引起視網(wǎng)膜脫落，接著是迅速的光感受器變性和視力喪失。通常認為濕形式的AMD在干形式之后，并由干形式產(chǎn)生。本文提供的方法特別用于濕形式的黃斑變性的治療或抑制。眼組織中血管生成的抑制也防止或延遲黃斑變性的干形式向黃斑變性的濕形式的轉(zhuǎn)變。本發(fā)明因此也提供黃斑變性干形式的治療方法。本發(fā)明也包括治療或預(yù)防黃斑變性的一個或多個方面或癥狀的方法，所述方面或癥狀包括，但不限于光感受器細胞的喪失、視力(包括例如視敏度和視野)喪失和視網(wǎng)膜脫落。其它相關(guān)方面，如光感受器變性、RPE變性、視網(wǎng)膜變性、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜變性、視錐(cone)變性、視網(wǎng)膜功能障礙、視網(wǎng)膜損傷、布魯赫氏膜損傷、RPE功能喪失、正常黃斑的細胞和/或胞外基質(zhì)的組織結(jié)構(gòu)完整性的喪失、黃斑中細胞功能的喪失和光感受器萎縮也被包括。可以通過本文所述的方法治療的其它非腫瘤性血管生成相關(guān)服病包括但不限于視網(wǎng)膜的新生血管形成、角膜的新生血管形成(如由砂眼、感染、炎癥、移植或外傷引起的新生血管形成)、糖尿病性^l網(wǎng)膜病、糖尿病性視網(wǎng)膜水腫、糖尿病性黃斑水腫、缺血性視網(wǎng)膜病、高血壓視網(wǎng)膜病、閉塞性視網(wǎng)膜病(occlusiveretinopathy)、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病(retinopathyofprematurity)、外傷后的新血管形成、感染后的新生血管形成、移植后的新生血管形成、視網(wǎng)膜脫落或視網(wǎng)膜變性后的新生血管形成、新生血管性青光眼、前房和/或前房角新生血管形成、脈絡(luò)膜新生血管形成(CNV)、視網(wǎng)膜下新生血管形成、晶狀體后纖維組織形成、眼組織胞漿菌病綜合癥(ocularhistoplasmosissyndrome)、近視變性、血管樣紋、眼色素層炎、發(fā)紅、晶狀體后纖維組織形成、眼組織胞漿菌病和原發(fā)性中心性漿液性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變。在一些實施方式中，所述眼病為糖尿病性視網(wǎng)膜病。在一些實施方式中，所述眼病為新生血管性青光眼。在一些實施方式中，提供治療血管疾病的方法，所述血管疾病包括心血管病，如粥樣動脈硬化、再狹窄、動脈粥樣化和血管瘤。粥樣動脈硬化是一種形式的慢性血管損傷，其中動脈壁中一些正常血管平滑肌細胞(VSMC)改變其性質(zhì)并在動脈粥樣硬化斑塊中發(fā)展密集的毛細血管網(wǎng)絡(luò)。這些脆弱的微血管可以引起出血，導(dǎo)致血液凝結(jié)，隨后是到達心肌的血流減少和心臟病發(fā)作。再狹窄通常發(fā)生在冠狀動脈搭橋手術(shù)、動脈內(nèi)膜切除術(shù)和心臟移植之后，并且特別地發(fā)生在心臟球囊血管成形術(shù)、經(jīng)皮腔內(nèi)斑塊旋切術(shù)(atherectomy),激光切除或血管內(nèi)支架置入之后。其涉及微血管的廣泛生長。通過抑制心血管組織中的血管生成，本文提供的方法用于治療這些心血管疾病。在一些實施方式中，所述方法用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療，其中關(guān)節(jié)中的血管經(jīng)歷血管生成，形成廣泛血管化的組^^、，其侵入并破壞軟骨。通過抑制關(guān)節(jié)組織中的血管生成，本文提供的方法用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。也提供治療血友病患者關(guān)節(jié)(hemophiliacjoint)的方法。24在一些實施方式中，所述方法用于治療血管生成相關(guān)的皮膚病，其包括但不限于銀屑病、硬皮病、作為感染結(jié)果的新生血管形成(如貓抓病、細菌潰瘍等)和其它皮膚疾病。在一些實施方式屮，所述方法用于治療銀屑病。銀屑病是一種慢性皮膚病，其發(fā)生在全世界約3%的人口中。包括電子顯微技術(shù)在內(nèi)的組織學(xué)研究已經(jīng)確定皮膚血管形成的改變是銀屑病的顯著特征。皮膚組織中血管生成的抑制因此對治療銀屑病有用?？梢酝ㄟ^本發(fā)明所述方法治療的其它血管生成相關(guān)疾病包括，但不限于奧-韋二氏綜合癥、遺傳性出血性毛細血管出血、斑塊新生血管形成(plaqueneovascularization)、毛細血管擴張、血管纖維瘤、血管瘤、傷口生肉芽(woundgranularization)、子宮內(nèi)膜異位等。此外，本發(fā)明也用于鼻息肉的治療，特別是囊腫性纖維化患者的鼻息肉。除了治療血管生成相關(guān)疾病，本文所述的方法也可以用于調(diào)控或防止與血管生成相關(guān)的正常生理狀況事件。例如，本發(fā)明的方法可以被用于減弱與排卵、胚胎植入、胎盤形成等相關(guān)的新生血管形成，并因此用于生育控制的目的。本文提供治療本文所述多種疾病的方法。在一些實施方式中，提供治療個體中非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的方法，包括給予該個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物(如含有載體蛋白的組合物)，其中所述組合物處于有效治療非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的量。在一些實施方式中，提供治療個體中血管生成相關(guān)眼病(包括例如黃斑變性、糖尿病性視網(wǎng)膜病或新生血管性青光眼)的方法，包括給予該個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物(如含有載體蛋白的組合物)，其中所述組合物處于有效治療所述眼病的量。在一些實施方式中，提供治療心血管疾病(如再狹窄和粥樣動脈硬化)的方法，包括給予該個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物(如含有載體蛋白的組合物)，其中所述組合物處于有效治療所述心血管疾病的量。在一些實施方式中，提供治療血管生成相關(guān)皮膚病(如銀屑病)的方法，包括給予該個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物(如含有載體蛋白的組合物)，其中所述組合物處于有效治療所述皮膚病的量。在一些實施方式中，提供治療關(guān)節(jié)炎(如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的方法，包括給予該個25體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物(如含有載體蛋白的組合物)，其中所述組合物處于有效治療關(guān)節(jié)炎的量。在一些實施方式中，秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體組合物如下任一種給藥至少約每三周一次、每兩周一次、每周一次、每周兩次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天一次。在一些實施方式中，每次給藥之間的間隔在約一周以下，如約6、5、4、3、2或1天中任一以下。在一些實施方式中，每次給藥之間的間隔恒定。例如，給藥可以每天、每兩天、每三天、每四天、每五天或每周進行。在一些實施方式中，給藥可以每天兩次、每天三次或更頻繁地進行。所述組合物的施用可以在延長的時間段內(nèi)延伸(中斷或不中斷)，例如從約一個月到約三年。例如，給藥方案可以在約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30和36個月中任一的時間段內(nèi)延長(中斷或不中斷)。在一些實施方式中，在給藥方案中無間斷。在一些實施方式中，每次給藥之間的間隔不大于約一周。遞娜煮她散成浙微概疾鄉(xiāng)方法本文所述的方法也用于腫瘤組織中血管生成的抑制，以及用于治療腫瘤相關(guān)疾病，如癌癥和良性腫瘤。抑制血管生成(例如通過抑制新血管形成或通過靶向已生成的血管)防止充足的營養(yǎng)和氧氣被供應(yīng)給腫瘤來支持其生長超過特定的尺寸。因為血管生成涉及原發(fā)性腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，本文提供的方法能夠在原發(fā)性位置抑制腫瘤的瘤生長，以及防止腫瘤在繼發(fā)性位置轉(zhuǎn)移。在一些實施方式中，秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體抑制新血管形成。在一些實施方式中，秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體組合物破壞已建立的腫瘤脈管系統(tǒng)。例如，所述組合物可以在可逆或不可逆的、部分或全部地選擇性阻塞、分解或以其它方式影響腫瘤脈管系統(tǒng)(有時是增殖腫瘤脈管系統(tǒng))方面有效。本發(fā)明提供通過給予有效量的含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物治療腫瘤相關(guān)疾病的方法，其中所述組合物的量不足以誘導(dǎo)明顯的細胞毒性(也被稱作"無細胞毒性劑量")。利用細胞毒性藥劑的傳統(tǒng)化學(xué)療法通常在等于或接近該藥劑的最大耐受劑量的劑量下進行，以便最大化該藥劑的細胞毒性作用。但是，這種高劑量方案需要延長的無治療期間，以允許正常宿主細胞恢復(fù)。同吋，腫瘤細胞也可能在無治療期間恢復(fù)生長。這會增加發(fā)展抗藥物腫瘤細胞的風(fēng)險。無細胞毒性劑量的秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體允許在治療周期無明顯間斷的癌癥治療，因此降低了發(fā)展藥物抗性的風(fēng)險。為了提供實例，治療癌癥的方法在此被進一步描述。應(yīng)該理解，本說明書通常適用所有腫瘤相關(guān)性疾病，包括良性腫瘤。在一些實施方式中，提供治療該個體中癌癥的方法，包括給予該個體含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效治療癌癥的量，并且其中每次給藥的所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的量在按照相同或相似給藥方案或傳統(tǒng)給藥方案的相同(或相似)制劑中相同(或相似)秋水仙堿或秋水仙堿二聚體的相應(yīng)MTD的約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、11%、12%、13%、14%或15%中任一以下。在一些實施方式中，每次給藥組合物中的秋水仙堿或硫代秋水仙堿的量在相應(yīng)MTD的約1%到約15%之間，包括例如下述任一量相應(yīng)MTD的約1%到約12%、約1%到約10%、約1%到約8%、約1%到約5%、約1%到約3%。秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的MTD己知或可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地測定。例如，按照每周方案的A^6-5404的MTD約為90-100mg/m2體表。在一些實施方式中，秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體組合物如下任一方式給藥至少約每三周一次、每兩周一次、每周一次、每周兩次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每天一次。在一些實施方式中，每次給藥之間的間隔在約一周以下，如約6、5、4、3、2或1天中任一以下。在一些實施方式中，每次給藥之間的間隔恒定。例如，給藥可以每天、每兩天、每三天、每四天、每五天或每周進行。在一些實施方式中，給藥可以每天兩次、每天三次或更頻繁地進行。所述組合物的施用可以在延長的時間段內(nèi)延伸(中斷或不中斷)，例如從約一個月到約三年。例如，給藥方案可以在約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30和36個月中任一的時間段內(nèi)延長(中斷或不中斷)。在一些實施方式中，在給藥方案中無間斷。在一些實施方式中，每次給藥之間的間隔不大于約一周。27可以通過本發(fā)明的方法治療的癌癥包括，但不限于癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤和白血病。這些腫瘤更具體的實例包括，但不限于鱗狀細胞癌、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺的腺癌和肺的鱗狀細胞癌)、腹膜癌、肝細胞癌、胃(gastric)或胃(stomach)癌(包括胃腸癌)、胰腺癌、膠質(zhì)母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌(heptoma)、乳腺癌、結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜或子宮癌、唾液腺癌、腎臟(kidney)或腎(renal)癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、頭頸癌、B-細胞淋巴瘤(包括低度/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)(lowgrade/follicularnon-Hodgkin，slymphoma)、小淋巴細胞(SL)NHL、中度/濾泡性NHL、中度彌散性NHL、高度免疫母細胞NHL、高度成淋巴細胞NHL、高度小非核裂細胞NHL、巨大腫瘤(bulkydisease)NHL、套細胞淋巴瘤、AIDS-相關(guān)淋巴瘤和沃爾丹斯特倫巨球蛋白血癥)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、急性淋巴細胞白血病(ALL)、毛細胞白血病、慢性成髓細胞白血病和移植后淋巴增生紊亂(PTLD)、以及與瘢痣性錯構(gòu)瘤病、水腫(如與腦瘤相關(guān)的水腫)和麥格氏綜合征(Meigs'syndrome)相關(guān)的異常血管增生。本文所述的方法對治療涉及廣泛血管生成的癌癥如鱗狀細胞癌特別有用。在一些實施方式中，提供治療原發(fā)性腫瘤的方法。在一些實施方式中，提供治療轉(zhuǎn)移性癌癥(即，已經(jīng)從原發(fā)性腫瘤轉(zhuǎn)移的癌癥)的方法。在一些實施方式中，提供治療晚期癌癥的方法。在一些實施方式中，提供治療乳腺癌(其可以是HER2陽性或HER2陰性)的方法，所述乳腺癌包括例如晚期乳腺癌、IV期乳腺癌、局部晚期乳腺癌和轉(zhuǎn)移性乳腺癌。在一些實施方式中，所述癌癥為肺癌，包括例如非小細胞肺癌(NSCLC，如晚期NSCLC)、小細胞肺癌(SCLC，如晚期SCLC)和肺中晚期惡性實體瘤。在一些實施方式中，所述癌癥為卵巢癌、頭頸癌、胃部惡性腫瘤、黑素瘤(包括轉(zhuǎn)移性黑素瘤)、結(jié)腸直腸癌、胰腺癌和實體瘤(如晚期實體瘤)。在一些實施方式中，所述癌癥為下述任一種(并且在一些實施方式中選自下述)乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非何杰金淋巴瘤(NHL)、腎細胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、軟組織肉瘤、卡波希肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、良性腫瘤(carcinoidcarcinoma)、頭頸癌、黑素瘤、卵巢癌、間皮瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膠質(zhì)母細胞瘤、成神經(jīng)細胞瘤和多發(fā)性骨髓瘤。在一些實施方式中，所述癌癥為實體瘤。本文所述的方法可以在輔助設(shè)置(adjuvantsetting)中實施。"輔助設(shè)置"指的是這樣的臨床設(shè)置其中個體有癌癥病史，并且通常(但非必須)已經(jīng)對治療有反應(yīng)，所述治療包括但不限于手術(shù)(如手術(shù)切除)、放射治療和化學(xué)療法。然而，由于他們的癌癥病史，這些個體被認為處于發(fā)展所述疾病的風(fēng)險下。"輔助設(shè)置"中的治療或給藥指的是隨后的治療模式。風(fēng)險程度(即，當(dāng)在輔助設(shè)置中個體被認為"高風(fēng)險"或"低風(fēng)險"時)取決于若干因素，最常見的是第一次治療時的疾病程度。本文提供的方法也可以在新輔助設(shè)置中實施，即所述方法可在主要的/確定的治療之前進行。在一些實施方式中，所述個體以前已經(jīng)被治療。在一些實施方式中，所述個體以前沒有被治療。在一些實施方式中，所述治療為一線治療(首要治療，firstlinetherapy)。本文所述的方法可與癌癥治療的其它方法共同進行(例如，在聯(lián)合治療設(shè)置中)。例如，在一些實施方式中，所述方法包括第一治療和第二治療，所述第一治療包括施用含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物。在一些實施方式中，所述第二療法為化學(xué)療法。在一些實施方式中，所述第二療法為放射療法。在一些實施方式中，所述第二療法為手術(shù)。第一和第二療法可以同時或順序(即，第一療法在第二療法之前或之后進行)進行。在一些實施方式中，所述方法包括向個體共同施用(包括同時或順序)含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物與第二化學(xué)治療劑，其中所述組合物對抑制該個體中的血管生成有效，并且其中所述組合物處于不足以在該個體中誘導(dǎo)細胞毒性的量。在一些實施方式中，所述第二化學(xué)治療劑是細胞毒性劑。含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物財麵或疏/7大必凝=覆沐本文所述的方法包括含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體組合物的施用。"秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體"用在這里指的是含有秋水仙堿、硫代秋水仙堿或其衍生物的兩個(相同或不同)亞單元的化合物。秋水仙堿或硫代秋水仙堿的"衍生物"包括但不限于與秋水仙，或與秋水仙堿和硫代秋水仙堿在相同的總化學(xué)類別中的化合物。一般來說，秋水仙堿或硫代秋水仙堿的衍生物或類似物保持與秋水仙堿或硫代秋水仙堿相似的生物、藥學(xué)、化學(xué)和/或物理性質(zhì)(包括例如官能度)。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體包含至少一個硫代秋水仙堿亞單元。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體包含兩個硫代秋水仙堿亞單元(在下文中稱為"硫代秋水仙堿二聚體")。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體包含兩個秋水仙堿亞單元(在下文中稱為"秋水仙堿二聚體")。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體是式(I)的化合物(I)其中每個亞單元中的B是甲氧基或甲硫基，R2當(dāng)與R3—起選取時是甲氧基、羥基或亞甲二氧基(methylenedioxy);R3當(dāng)與R2—起選取時是甲氧基、羥基或亞甲二氧基，以及X是連接基團。多種交聯(lián)基團可以被用于引入連接基團X。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認識到二聚體的秋水仙堿或硫代秋水仙堿單體組分具有單個反應(yīng)性氨基；如果有任何其它反應(yīng)(親核)基團存在于中間體上，它們可以使用本領(lǐng)域公知的基團被容易地保護。保護基團的實例參見，例如，Greene，T,W,和P.QM.Wuts,ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,3rdedition,Wiiey:NewYork,1999，其內(nèi)容因此整體引入本文作為參考。因此，與胺官能度反應(yīng)的多種交聯(lián)基團可以被采用。在一些實施方式中，連接基團X包含至少一個碳原子。例如，可購買到的(Sigma-Aldrich)試劑丙二酰氯C1-C(0)-CH2-C(0)-C1可用于形成秋水仙堿二聚體，其中X基團為-CH2-。相似地，各種長度的其它二?；瓤梢员挥糜谛纬善谕L度的X基團。例如，在式(II)中，當(dāng)n-8且Y為CH2時，可購買的(Sigma-Aldrich)試劑十二烷二?；菴1-C(0)-(CH2VC(0)-C1可以被用于合成所述二聚體，其中X基團為-(CH2),。-。對于Y為NH且n=1的基團，試劑3-異氰酸根合丙酰氯(Ogaw/c^W/^^,Co〃.吣/.6，p.7/5f7卵狄吣/.外，/."5(797")可以被用于合成連接基團X，此時X為-NH-CH2CH2-。其它熟知的交聯(lián)試劑可以被用于產(chǎn)生X連接體。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員參見Wong,ShanS.，ChemistryofProteinConjugationandCrossLinking,CRCPress:BocaRaton:1991，特別是第33-38頁第2章第IV(B)部分，涉及氨基基團反應(yīng)劑；第75-103頁第4章第II部分，涉及氨基基團反應(yīng)交聯(lián)連接體；和第209-220頁第7章，涉及試劑交聯(lián)反應(yīng)的步驟和分析以及適合交聯(lián)含氨基化合物的步驟。前述Wong的參考文獻的全部內(nèi)容以及特別是所列舉的特定部分，因此被引入本文作為參考。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或秋水仙堿二聚體是式(n)的化合物(II)其中B,是甲氧基或甲硫基，B2是甲氧基或甲硫基，n是從0到8的整數(shù)，Y是CH2基團，或者當(dāng)n為l時，Y也可以是式NH的基團。在一些實施方式中，n是(并且在一些實施方式中選自)O、1、2、3、4、5、6、7或8中任一個。在一些實施方式屮，n是l。在一些實施方式中，n是l且Y是NH。在一些實施方式中，n是2。在一些實施方式中，B,和B2都是甲氧基。在一些實施方式中，B,和B2都是甲硫基。在一些實施方式中，B,是甲氧基且B2是甲硫基。在一些實施方式中，Bi是甲硫基且B2是甲氧基。在一些實施方式中，所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體是下述任一(并且在一些實施方式中選自)IDN5404、IDN5676、IDN5800和IDN5801。在一些實施方式中，所述化合物是硫代秋水仙堿二聚體IDN5404。IDN5404是式(III)的化合物(111)在一些實施方式中，所述化合物是硫代秋水仙堿二聚體IDN5676。IDN5676是式(IV)的化合物(IV)主娜灘齢激微沐激在一些實施方式中，本文所述的秋水仙堿或硫代秋水仙堿二32聚體組合物進一步包括生物相容性聚合物，如載體蛋白。用在這里，術(shù)語"生物相容的"描述了不以任何不利的方式明顯改變或影響引入其中的生物系統(tǒng)的物質(zhì)。生物相容性聚合物包括天然出現(xiàn)或合成的生物相容物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多核苷酸、多糖(如，淀粉、纖維素、葡聚糖、藻酸鹽、殼聚糖、膠質(zhì)、透明質(zhì)酸等)和脂質(zhì)。合適的生物相容性聚合物包括，例如，天然出現(xiàn)或合成的蛋白質(zhì)，如白蛋白、胰島素、血紅蛋白、溶菌酶、免疫球蛋白、a-2-巨球蛋白、纖維粘連蛋白、玻連蛋白、纖維蛋白原、酪蛋白等，以及它們?nèi)我鈨煞N或多種的組合。合成的聚合物包括，例如，聚亞烷基二醇(如線性或支鏈)、聚乙烯醇、聚丙烯酸酯、聚甲基內(nèi)烯酸羥乙酯、聚丙烯酸、聚乙基-惡唑啉(polyethyloxazoline)、聚丙烯酰胺、聚異丙基丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮、聚交酯/乙交酯(polylactide/glycolide)等，和它們的組合。術(shù)語"蛋白質(zhì)"指的是任意長度(包括全長或片段)的氨基酸的多肽或聚合物，其可以是線性或支化的，包括修飾的氨基酸和/或被非氨基酸中斷的氨基酸。該術(shù)語也包括已經(jīng)天然修飾或通過插入修飾的氨基酸聚合物；例如，二硫鍵形成、糖基化、脂化、乙?；?、磷酸化或任何其它操作或修飾。也包括在本術(shù)語內(nèi)的例如是含有一個或多個氨基酸類似物(包括，例如非天然氨基酸等)，以及本領(lǐng)域內(nèi)已知的其它修飾的多肽。本文所述的蛋白質(zhì)可以是天然出現(xiàn)的，即從天然來源(如血液)獲得或衍生的；或合成的(如化學(xué)合成或通過重組DNA技術(shù)合成)。合適的載體蛋白的實例包括通常在血液或血漿中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)，其包括但不限于白蛋白、包括IgA在內(nèi)的免疫球蛋白、脂蛋白、載脂蛋白B、ct-酸糖蛋白、(3-2-巨球蛋白、甲狀腺球蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferin)、纖維粘連蛋白、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X等。在一些實施方式中，所述載體蛋白為非血液蛋白，如酪蛋白、a-乳清蛋白和P-乳球蛋白。所述載體蛋白可以是天然來源或合成制備。在一些實施方式中，所述載體蛋白為白蛋白，如人血清白蛋白。人血清白蛋白(HSA)是N^為65K的高度可溶的球狀蛋白，并且由585個氨基酸組成。HSA是血漿中最多的蛋白，并且構(gòu)成人血漿膠體滲透壓的70-80%。HSA的氨基酸序列含有總共17個二硫鍵、一個游離硫醇(thiol)(Cys34)，和一個色氨酸(Trp214)。HSA溶液的靜脈使用已經(jīng)顯示為預(yù)防和治療低血容量休克(hypovolumicshock)(參見，例如Tullis,^M4，"7，355-360，460-463，(1977)禾卩Houser等,Swge^，G戸co/ogy朋dC^淑n,os，"0,811-816(980))，并且與交換輸血聯(lián)合用于新生兒高膽紅素血癥的治療(參見，例如Finlayson，^w/"ars/"772rawZas^//ewayZas/j,(5，85-120,(1980))。其它白蛋白也被考慮，如牛血清白蛋白。這些非人白蛋白的使用例如在非人哺乳動物中使用這些組合物的情況下可以是合適的，如獸醫(yī)動物(包括家養(yǎng)寵物和農(nóng)業(yè)動物)。人血清白蛋白(HSA)具有多個疏水結(jié)合位置(對脂肪酸的總計為8個，所述脂肪酸為HSA的內(nèi)源配體)并與很多組藥物結(jié)合，特別是中性和帶負電的疏水化合物(Goodman等，7Tze尸/wm/flco/og/ca/o/77^ra;eM"cs，9thed，McGraw-HillNewYork(1996))。在HSA的亞域IIA和IIIA中己經(jīng)提出兩個高親和性結(jié)合位置，它們是高度拉長的疏水袋(hydrophobicpocket)并且在表面附近具有帶電的賴氨酸和精氨酸殘基，所述殘基作為極性配體特征的附著點發(fā)揮作用(參見，例如Fehske等，所octem.P/2(^wco/"30,687-92(1981)，Vorum，D朋.Med5w〃"W，379-99(1999),Kragh-Hansen，Z)朋.Med5m〃.，"4/，131-40(1990)，Curry等，Ato說o/"5，827-35(1998)，Sugio等,/2，439-46(1999),He等,Atowe，35&209-15(1992)和Carter等，爿cv.Prato'w.C/zew"45,153-203(1994))。為了提供實例，載體蛋白在下文被進一步描述。應(yīng)該理解，該描述普遍地適用生物相容性聚合物。所述組合物中的載體蛋白(如白蛋白)通常作為秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的載體，即與不含載體蛋白的組合物相比，所述組合物中的載體蛋白使秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體更容易懸浮在水介質(zhì)中或幫助保持懸浮液。這可以避免使用用于溶解秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的有毒溶劑，并因此可以降低由那些有毒溶劑引起的一種或多種副作用。在一些實施方式中，所述組合物基本不含表面活性劑，即當(dāng)所述組合物被給予個體時，所述組合物中表面活性劑的量不足以在個體中引起一種或多種副作用。在一些實施方式中，所述組合物不含表面活性劑。在一些實施方式中，所述載體蛋白與秋水仙堿或硫代秋水仙堿締合，即所述組合物含有載體蛋白締合的秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體。"締合(Association)"或"締合的(associated)"以通常含義被用在這里，并且指影響水性組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體行為和域性質(zhì)的載體蛋白。例如，與沒有載體蛋白的組合物相比，如果所述載體蛋白使秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體更容易懸浮在水介質(zhì)中，所述載體蛋白和所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體被認為是"締合的"。作為另一實例，如果所述載體蛋白使水懸浮液中的秋水仙堿或硫代秋水仙堿穩(wěn)定，所述載體蛋白與所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體是締合的。例如，所述載體蛋白與所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體可以存在于顆?；蚣{米顆粒中，其在本文被進一步描述。如果秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體長時間保持懸浮在水介質(zhì)中(如沒有可見的析出或沉淀)，如至少約O.l、0.2、0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、48、60或72小時中任一時間，則其在水懸浮液中是"穩(wěn)定"的。所述懸浮液通常但是并非必需適合給予個體(如人)。懸浮液的穩(wěn)定性通常(但并非必需)在儲存溫度(如室溫(如20-25°C)或冷藏狀態(tài)(如4。C))下進行評估。例如，如果在懸浮液制備后大約15分鐘時，用肉眼或在1000倍光學(xué)顯微鏡下觀察時，其沒有顯示出可見的凝絮或顆粒積聚，則該懸浮液在儲存溫度下是穩(wěn)定的。穩(wěn)定性也可以在加快的測試條件下評估，如在高于約4(TC的溫度下評估。所述組合物中的載體蛋白和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體可以以多種形式締合。例如，在一些實施方式中，所述載體蛋白與秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體相混合。在一些實施方式中，所述載體蛋白包封或包載秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體。在一些實施方式中，所述載體蛋白與秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體結(jié)合(如非共價結(jié)合)。在一些實施方式中，所述組合物可以展示一個或多個上述方面。在一些實施方式中，所述組合物包括含有(在多種實施方式中，基本由其組成)秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體和載體蛋白(如白蛋白)的顆粒(如微粒或納米顆粒)u在一些實施方式中，秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體用載體蛋白(如白蛋白)包被。在一些實施方式中，所述組合物包含納米顆粒(即，均值或平均直徑不大于約1000納米(nm)35的顆粒)，如不大于約900、800、700、600、500、400、300、200和100nm中任一。在一些實施方式中，所述組合物中納米顆粒的均值或平均直徑不大于約200nm。在一些實施方式中，所述組合物中納米顆粒的均值或平均直徑在約20到約400nm之間。在一些實施方式中，所述納米顆粒的均值或平均直徑在約40到約200nm之間。在一些實施方式中，所述納米顆粒是可無菌過濾的。本文描述的顆粒(如微?；蚣{米顆粒)可存在于干制劑(如凍干的組合物)中或懸浮在生物相容性介質(zhì)中。合適的生物相容性介質(zhì)包括但不限于水、緩沖水介質(zhì)、鹽水、緩沖鹽水、氨基酸的任選緩沖溶液、蛋白質(zhì)的任選緩沖溶液、糖類的任選緩沖溶液、維生素的任選緩沖溶液、合成聚合物的任選緩沖溶液、含脂質(zhì)的乳液等。本文所述組合物中載體蛋白的量取決于所述組合物中藥物試劑和其它組分而變化。在一些實施方式中，所述組合物含有的載體蛋白的量足以穩(wěn)定水懸浮液中的秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體，例如，處于穩(wěn)定的膠態(tài)懸浮液的形式(如微粒或納米顆粒的穩(wěn)定懸浮液)。在一些實施方式中，所述載體蛋白處于降低水介質(zhì)中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體沉淀率的量。對于含顆粒的組合物，所述載體蛋白的量也取決于秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體顆粒的尺寸和密度。在一些實施方式中，所述載體蛋白以足以將水懸浮液中的秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體穩(wěn)定在特定濃度的量存在。例如，所述組合物中秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的濃度為約O.Ol到約100mg/ml，包括例如下述任一約0.01到約50mg/ml、約0.1到約50mg/ml、約1到約10mg/ml、約2mg/ml到約8mg/ml、約4到約6mg/ml、約5mg/ml。在一些實施方式中，秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的濃度至少約為下述任一0.01mg/ml、0.03mg/ml、0.05mg/ml、0.08mg/ml、0.1mg/ml、0.3mg/ml、0.5mg/ml、0.8mg/ml、1mg/ml、1.3mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、40mg/ml禾口50mg/ml。在些實施方式中，所述載體蛋白以避免使用表面活性劑的量存在，以便所述組合物不含或基本不含表面活性劑。在一些實施方式中，液體形式的組合物包含約0.1%到約50%(w/v)(如約0.5%(w/v)、約5%(w/v)、約10%(w/v)、約15%(w/v)、約20%(w/v)、約30%(w/v)、約40%(w/v)或約50%(w/v))的載體蛋白。在一些實施方式中，液體形式的組合物包含約0.5%到約5。/。(w/V)的載體蛋白。在一些實施方式中，載體蛋白如白蛋白與秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的重量比使得足量的秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體與細胞結(jié)合或被細胞運輸。在一些實施方式中，載體蛋白如白蛋白與秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的重量比(w/w)為約0.01:1到約100:1、約0.02:1到約50:1、約0.05:1到約20:1、約0.1:1到約20:1、約1:1到約18:1、約2:1到約15:1、約3:1到約12:1、約4:1到約10:1、約5:1到約9:1或約9:1。在一些實施方式中，載體蛋白(如白蛋白)與秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的重量比為約任意下述18:1或更小、15:1或更小、14:1或更小、13:1或更小、12:1或更小、11:1或更小、10:1或更小、9:1或更小、8:1或更小、7:1或更小、6:1或更小、5:1或更小、4:1或更小和3:1或更小。在一些實施方式中，所述組合物包含含有(在多種實施方式中，基本由其組成)硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404或IDN5676)和白蛋白的顆粒(如微粒或納米顆粒)。所述顆粒(如微粒或納米顆粒)可以具有不大于約10、9、8、7、6、5、4、3、2或1微米的均值或平均直徑。在一些實施方式中，所述顆粒為納米顆粒，即約1000納米(nm)以下的顆粒。例如，所述納米顆?？梢圆淮笥诩s900、800、700、600、500、400、300、200和100nm中任一。在一些實施方式中，所述納米顆粒的均值或平均直徑不大于約200nm。在一些實施方式中，所述納米顆粒的均值或平均直徑在約20到約400nm之間。在一些實施方式中，所述納米顆粒的均值或平均直徑在約40到約200nm之間。在一些實施方式中，所述顆粒是可無菌過濾的。在一些實施方式中，所述硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404或IDN5676)用白蛋白包被。在一些實施方式中，白蛋白與硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404或IDN5676)的重量比(wZw)為下述任一約0.01:1到約100:1、約0.02:1到約50:1、約0.05:1到約20:1、約0.1:1到約20:1、約1:1到約18:1、約2:1到約15:1、約3:1到約12:1、約4:1到約10:1、約5:1到約9:1和約9:1。在一些實施方式中，白蛋白與硫代秋水仙堿二聚體的重量比在下述任一以下約18:1或更小、15:1或更小、14:1或更小、13:1或更小、12:1或更小、11:1或更小、10:1或更小、9:1或更小、8:1或更小、7:1或更小、6:1或更小、5:1或更小、4:1或更小和3:1或更小。在一些實施方式中，含有硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404或IDN5676)和白蛋白的顆粒(如微?；蚣{米顆粒)被懸浮在水介質(zhì)中(如含有白蛋白的水介質(zhì))。例如，所述組合物可以是含有硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404或IDN5676)顆粒(如微?；蚣{米顆粒)的膠態(tài)懸浮液。在一些實施方式中，所述組合物為千組合物(如凍干組合物)，其可以被重構(gòu)為含硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404或IDN5676)顆粒的水懸浮液。在一些實施方式中，所述組合物中硫代秋水仙堿二聚體(如IDN5404或IDN5676)的濃度在約0.1到約100mg/ml之間，包括例如下述任一約0.1到約50mg/ml、約0.1到約20mg/ml、約1到約10mg/ml、約2mg/ml至U約8mg/ml、約4到約6mg/ml、約5mg/ml。在一些實施方式中，IDN5404或IDN5676的濃度至少約為下述任一1.3mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、40mg/ml和50mg/ml。在一些實施方式中，所述組合物IDN5404或IDN5676的納米顆粒制劑(下文中稱作A^-5404或A^6-5676)。A^6-IDN5404和旭6-5676分別是由人血清白蛋白穩(wěn)定的IDN5404和IDN5676的納米顆粒制劑。這些納米顆粒制劑可以通過美國專利號5，916，596和美國專利申請公布號2005/0004002所述的方法產(chǎn)生。當(dāng)分散在合適的水介質(zhì)，如0.9%氯化鈉注射液或5%葡聚糖注射液中時，iVfl6-5404(或M6-5676)形成硫代秋水仙堿二聚體的穩(wěn)定膠態(tài)懸浮液。所述膠態(tài)懸浮液中顆粒的尺寸(即均值或平均直徑)可在20nm到8微米范圍內(nèi)，優(yōu)選的范圍是約20-400nm。由于HSA自由溶解在水中，AW>-5404(或7Va6-5676)可以以寬范圍的濃度重構(gòu)，從稀釋的(0.1mg/mlIDN5404或IDN5676)到濃縮的(20mg/mlIDN5404或IDN5676)濃度，包括例如約2mg/ml到約8mg/ml，約5mg/ml。在一些實施方式中，IDN5404或IDN5676的濃度約為下述任一381、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19和20mg/ml。藥物組合物、單位劑量和試劑盒本文也提供含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的藥物組合物。所述藥物組合物可適合本文所述的多種給藥方式，包括例如全身或局部給藥。所述藥物組合物可以是滴眼劑、可注射溶液的形式，或適合吸入(通過口或鼻)或口服給藥的形式。本文所述的藥物組合物可以以單個單位劑量或以多劑量形式包裝。在一些實施方式中，所述組合物適合施用于人。在一些實施力'式屮，所述組合物適合施用于哺乳動物，如，在獸醫(yī)的環(huán)境下，家養(yǎng)寵物和農(nóng)業(yè)動物。有多種所述組合物的合適制劑(參見，例如美國專利號5，916，596和6,096,331)。在一些實施方式中，所述藥物組合物包含秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體、載體蛋白和適合眼內(nèi)注射的藥學(xué)上可接受的載體。在一些實施方式中，所述藥物組合物包含秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體、載體蛋白和適合局部施用于眼部的藥學(xué)上可接受的載體。在一些實施方式中，所述藥物組合物包含秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體、載體蛋白和適合動脈內(nèi)注射的藥學(xué)上可接受的載體。所述藥物組合物通常以無菌且基本等滲的組合物配制。對于注射而言，所述藥物組合物可以是液態(tài)溶液的形式，例如，在生理相容的緩沖液如漢克斯液或林格溶液(Ringer'ssolution)中。所述藥物組合物也可以是固體的形式，并且在使用前立即再溶解或再懸浮。也包括凍干組合物。對于口服制劑，所述藥物組合物可以采用例如利用藥學(xué)上可接受的賦形劑通過傳統(tǒng)方法制備的片劑或膠囊的形式，^f述藥學(xué)上可接受的賦形劑如粘合劑(例如，預(yù)膠凝化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；填料(例如，乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、滑石或二氧化硅)；崩解劑(例如，馬鈴薯淀粉或淀粉甘醇酸鈉)；或潤濕劑(例如，十二烷基硫酸鈉)?？诜o藥的液體制劑可以采用例如溶液、舞漿或懸浮液的形式，或它們可以以干產(chǎn)品呈現(xiàn)，用于使用前與水或其它合適載體構(gòu)成。這些液體制劑可以通過傳統(tǒng)的方法利用藥學(xué)上可接受的添加劑制備，所述添加劑如懸浮劑(例如，山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化的可食用脂肪)；乳化劑(例如，卵磷脂或阿拉伯膠)；非水性載體(例如，ationd油、汕性酯類、乙醇或分餾的植物汕)；和防腐劑(例如，對羥基苯甲酸甲酯或丙酯，或山梨酸)。所述制劑也可以視情況含有緩沖鹽、調(diào)味劑、著色劑和甜味劑。本發(fā)明在一些實施方式中提供包含秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體、載體蛋白和適合施用于眼部的藥學(xué)上可接受載體的組合物。這樣的藥物載體可以是無菌液體，如水和油，包括石油、動物、植物或合成來源的那些，如花生油、大豆油、礦物油等。鹽溶液和葡聚糖水溶液、聚乙二醇(PEG)和甘油溶液也可以被用作液體載體，特別用于可注射溶液。合適的藥物賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、甘油、丙烯、水等。所述藥物組合物，如果希望，也可以含有少量的潤濕劑或乳化劑，或pH緩沖試劑。所述組合物的組分可被包在聚合物或纖維蛋白膠中，以提供受控的分子釋放。這些組合物可以采用溶液、懸液、乳劑、軟膏、凝膠或其它固體或半固體組合物等的形式。所述組合物通常具有4.5到8.0范圍內(nèi)的pH。所述組合物也必須被配制成具有與眼和眼組織的水狀體相容的滲透值。這樣的滲透值通常在約200到約400毫滲摩/千克水(mOsm/kg)的范圍內(nèi)，但是優(yōu)選地為約300mOsm/kg。在一些實施方式中，所述組合物按照常規(guī)步驟被配制為適合靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或玻璃體內(nèi)注射的藥物組合物。典型地，注射用組合物為在無菌等滲水緩沖液中的溶液。必要時，所述組合物也可包含增溶劑和局部麻醉劑如利多卡因以減輕注射位置的疼痛。一般來說，所述成分以單位劑型單獨供應(yīng)或混合在一起，例如，在標明活性藥量的氣密密封容器如安瓿或sachette中的干燥凍干粉末或無水濃縮物。在所述組合物要通過輸注施用時，其可以被分散在含有無菌藥物級水或鹽水的輸注瓶中。在所述組合物通過注射給藥時，可以提供注射用無菌水或鹽水的安瓿，以便組分在施用前混合。所述組合物可進一步包含其它組分，例如防腐劑、緩沖劑、張度劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑、非離子潤濕劑或澄清劑、增粘劑等。用在溶液中的合適的防腐劑包括聚季銨鹽-1、苯扎氯銨、乙基汞硫代水楊酸鈉、氯丁醇、羥苯甲酸甲酯、羥苯甲酸丙酯、苯基乙醇、乙二胺四乙酸二鈉、山梨酸、芐索氯銨等。典型地(但非必須地)，這些防腐劑在以按重量計0.001%到1.0%的量被使用。合適的緩沖劑包括硼酸、碳酸氫鈉和碳酸氫鉀、硼酸鈉和硼酸鉀、碳酸鈉和碳酸鉀、醋酸鈉、磷酸二氫鈉等，其量足以維持pH在約pH6和pH8之間，并且優(yōu)選地，在約pH7和pH7.5之間。合適的張度劑是葡聚糖40、葡聚糖70、葡萄糖、甘油、氯化鉀、丙二醇、氯化鈉等，使得眼溶液的氯化鈉等價物在0.9±0.2%的范圍內(nèi)。合適的抗氧化劑和穩(wěn)定劑包括亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代亞硫酸鈉、硫脲等。合適的潤濕劑和澄清劑包括聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、泊洛沙姆282和泰洛沙泊(tyloxapol)。合適的增粘劑包括葡聚糖40、葡聚糖70、明膠、甘油、羥乙基纖維素、羥甲基丙基纖維素、羊毛脂、甲基纖維素、礦油、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素等。使用粘度增強劑以便為局部組合物提供大于單純水溶液粘度的粘度可以是期望的，以增加靶組織對活性化合物的眼部吸收，或增加在眼部的保留時間。這樣的粘度增效劑(viscositybuildingagent)包括例如，聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它物質(zhì)。這些物質(zhì)典型地在以按重量計0.01%到2%的量上被采用。本文所述的組合物也可以包括其它試劑、賦形劑或穩(wěn)定劑，以改善所述組合物的性質(zhì)。例如，要通過提高納米顆粒的負C電勢來增加穩(wěn)定性，某些帶負電荷的組分可被添加。這些帶負電荷的組分包括，但不限于膽酸的膽酸鹽，所述膽酸包含甘氨膽酸、膽酸、鵝去氧膽酸、?；悄懰?、甘氨鵝脫氧膽酸、?；蛆Z去氧膽酸、石膽酸、熊去氧膽酸、脫氫膽酸和其它膽酸；磷脂，包括卵磷脂(蛋黃)基的磷脂，其包括以下磷脂酰膽堿棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿、棕櫚酰亞油酰磷脂酰膽堿、硬酯酰亞油酰磷脂酰膽堿、硬酯酰油酰磷脂酰膽堿、硬酯酰花生酰磷脂酰膽堿(stearoylarachidoylphosphatidylcholine)和二棕櫚酰磷脂酰膽堿。其它磷脂包括L-a-二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)、二硬酯酰磷脂酰膽堿(DSPC)、氫化大豆油磷脂酰膽堿(HSPC)和其它相關(guān)化合物。帶負電荷的表面活性劑或乳化劑也適合作為添加劑，如膽留醇基硫酸鈉等。也提供秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體組合物的單位劑型，例如，含有約O.lmg到約50mg的單位劑量，包括例如約0.2mg到約50mg、約0.5mg到約30mg、約lmg到約20mg或約15mg秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體。術(shù)語"單位劑型"指的是適合作為用于個體的單劑量的物理上分離的單位，每個單位含有與合適的藥物載體、稀釋劑或賦形劑結(jié)合的經(jīng)計算可產(chǎn)生期望治療效果的預(yù)定量的活性物質(zhì)。這些單位劑型可以單個或多個單位劑量儲存在合適的包裝中，并也PJ以被進一步滅菌和密封。在一些實施方式中，提供秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體和載體蛋白的單位劑型，其適合眼內(nèi)注射。在一些實施方式中，提供秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體和載體蛋白的單位劑型，其適合局部應(yīng)用于眼部。在一些實施方式中，提供秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體和載體蛋白的單位劑型，其適合動脈內(nèi)注射。也提供在合適包裝中含有本文所述組合物的制品。用于本文所述組合物(如眼用組合物)的合適包裝在本領(lǐng)域內(nèi)已知，并包括例如小瓶(vial)(如密封的小瓶)、小管(vessel)、安瓿、瓶、罐、軟包裝(如密封的聚酯膜或塑料袋)等。這些制品可被進一步滅菌和/或密封。本發(fā)明也提供含有本文所述組合物(或單位劑型和/或制品)的試劑盒，并且其可進一步包含使用所述組合物的方法說明書，如本文所述的用法。本文所述的試劑盒可進一步包括從商業(yè)和用戶立場上期望的其它材料，包括其它緩沖劑、稀釋劑、過濾器、針頭、注射器和帶有用于實施本文所述任何方法的說明的說明書。例如，在一些實施方式中，所述試劑盒包括秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體、載體蛋白、適合眼內(nèi)注射的藥學(xué)上可接受載體，和一種或多種緩沖劑、稀釋劑、過濾器、針頭、注射器和帶有用于實施眼內(nèi)注射的說明的說明書。在一些實施方式中，所述藥物組合物包含秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體、載體蛋白、適合動脈內(nèi)注射的藥學(xué)上可接受的載體，和一種或多種緩沖劑、稀釋劑、過濾器、針頭、注射器和帶有用于實施動脈內(nèi)注射說明的說明書。盡管上述發(fā)明出于清楚理解的目的，已經(jīng)通過闡述和舉例相42當(dāng)詳細地予以描述，但是對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是明顯的是，一些小的變化和改動可以被實施。因此，所述描述和實例不應(yīng)該被解釋為限制本發(fā)明的范圍。實施例實施例1.M/6-5404和的體外細胞毒性活性飯6-5404和泡6-5676的細胞毒性活性使用MX-1乳腺癌、HepG2肝細胞瘤、HT-29結(jié)腸癌細胞系和正常原代大鼠肝細胞進行體外評估。在37'C使細胞暴露于一系列濃度增加的7Vfl6-5404和7Va6-567672小時。存活率使用CellTiterBlue細胞存活率檢測(cellviabilityassay)(Promega，Madison,WI)分析。使用Prism軟件(GraphPad，SanDiego，CA)利用單相指數(shù)衰減公式計算IC50。顯示出對抗HepG2肝細胞瘤細胞和原代大鼠肝細胞的細胞毒性活性，IC50分別為16和9pg/ml。iV"6-5404和都對MX-1細胞顯示出中等的細胞毒性，IC50分別為43和54pg/ml。A^-5404和A^)-5676對抗HT-29細胞的活性低，IC50分別為110和149jag/ml。在HepG2細胞或原代大鼠肝細胞中顯示出很小或不顯示細胞毒性活性。結(jié)果歸納于表l。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>實施例2.;V"A-5404和；V》-5676的抗微管活性A^-5404和iV。6-5676的微管解聚活性使用MX-l乳腺癌細胞系進行測試。MX-1細胞在蓋玻片上接種并用0.01到100pg/ml濃度范圍的A^)-5404或A^6-5676在37'C處理2小時。溫育后，細胞被固定并對微管蛋白和肌動蛋白染色。微管蛋白用單克隆抗微管蛋白抗體染色而肌動蛋白用熒光素標記的毒傘素(phalloidin)染色。微管網(wǎng)絡(luò)使用ImagePro軟件(MediaCybernetics，Inc.,SilverSpringMD)觀察并分析。7Va6-5404和iVW-5676對微管去穩(wěn)定活性的IC50使用Prism軟件(GraphPad,SanDiego，CA)計算。齒6-5404和齒6-5676都顯示出有效的微管解聚活性，計算的IC50分別為0.06pg/ml和0.12(ig/ml(圖1A和1B)。即使在測試的最低濃度0.6ng/ml，微管網(wǎng)絡(luò)在用m26-5404或iVW-5676溫育2小時后被完全破壞(圖2A-2C)。相反,肌動蛋白束不受任何藥物濃度下的A^>-5404或iVa6-5676的影響。實施例3.iV"6-5404和的抗血管生成活性為研究iVa6-5404和A^-5676對血管生成的作用，所述化合物使用TCSCellWorksAngioKit模型(TCSCellWorksLtd"BotolphClaydon，BuckinghamUK)在微血管形成檢測中進行評估。AngioKit模型使用與其它人源細胞共培養(yǎng)的人內(nèi)皮細胞。內(nèi)皮細胞最初在培養(yǎng)基質(zhì)中形成小島，隨后開始增殖并接著進入遷移期，在遷移期中它們移動穿過基質(zhì)，形成線狀小管結(jié)構(gòu)。這些逐漸連接起來，形成小管網(wǎng)絡(luò)，其與毛細血管床非常相似(在第9-11天)。小管對馮維勒布蘭德因子、CD31(PECAM-1)和ICAM-2染色陽性。除了油6-5404和油6-5676，已知的血管靶向劑考布他汀4-磷酸酯(combretastatin4-phosphate，CA4P)，被測試體外抗血管生成活性。TCSCellWorksAngioKit模型按照制造商的說明被使用。如上文所述，人內(nèi)皮細胞與人纖維母細胞在24孔板中共培養(yǎng)，并暴露于一系列濃度(0.01到100|xg/ml)的AWj-5404、A^6-5676或CA4P。溫育11或12天后，通過固定細胞并使用抗CD31的單克隆抗體、二抗偶聯(lián)物和著色的底物染色來觀察小管。小管的長度使用ImagePn)軟件分析并且每種化合物的IC50使用Prism軟件計算。M^5404和A^>-5676都抑制小管形成并且分解己形成的小管，顯示出抗血管生成活性。在第一個試驗中，細胞在第1天用所述組合物處理，并在第12天染色以分析小管形成的抑制。在第二個試驗中，細胞在第8天處理并在第11天染色，而在第三個試驗中，細胞在第11天處理并在第12天染色，這允許分析已形成小管的分解。齒6-5404和7Va卜5676都能夠抑制新生微血管的形成(圖3和4)。在第二個試驗中，M^-5404和Mz6-5676都能夠抑制小管形成和/或分解已形成的小管(圖5)。在分解已形成的小管方面比A/fl6-5676更有效(圖6、7和9)。A^-5404的IC50計算為0.002ng/ml，其比ic50為0.02ng/ml的A^j-5676效力大10倍。A^-5404在分解已形成的小管方面與CA4P(IC50=0.003pg/ml)—樣有效(圖6、8禾Q9)。實施例4.7Vfl6-5404和iVfl6-5676的抗腫瘤活性地6-5404和AW>-5676的抗腫瘤活性在異種移植小鼠模型中進行評估。在兩個周期內(nèi)針對已生成的HT-29結(jié)腸細胞腫瘤，體內(nèi)測試化合物，第一周期為低劑量方案，接著是第二高劑量方案。伊立替康(Mnotecan)被用作本研究中的陽性對照。小鼠(n=10)被分為8個組，其中iVW-5404和iVfl6-5676小鼠通過靜脈內(nèi)注射接受所述化合物。第一周期包括第0-14天每3天施用iVW-5404或A^-5676，施用4個劑量，接著第二周期，其包括第15-30天每3天施用池6-5404或油6-5676，施用4個劑量。伊立替康每3天以60mg/kg的劑量通過靜脈內(nèi)注射施用，施用4個劑量。各組被顯示于表2中，其中第一周期指的是第0-14天而第二周期指的是第15-30天。表2處理第一周期劑量第一周期方案第二周期劑量第二周期方案對照載體伊立替康60mg/kgq3dx4録-54043.4mg/kgq3dx440mg/kgq3dx4濕-54042.5mg/kgq3dx430mg/kgq3dx4扁-54041,7mg/kgq3dx420mg/kgq3dx4編-56763.4mg/kgq3dx440mg/kgq3dx4扁-56762.5mg/kgq3dx430mg/kgq3dx445<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>如圖10和11所示，在較低的劑量，和M^-5676都顯著地抑制腫瘤生長，其中3.4、2.5和1.7mg/kg的油6-5404的p值為0,02、0.007、0.001，而3.4、2.5和1.7mg/kg的扁-5676的p值為0.04、0.003和0.0004。A^6-5404和A/fl6-5676在低劑量下的抗腫瘤活性表明這些化合物具有抗血管生成活性。在較高的劑量，與iVW-5676相比，用A^p-5404處理后有顯著更大的腫瘤退化。基于體重減輕數(shù)據(jù)，在該模型中，具有顯著腫瘤退化的A^6-5404的MTD為約30mg/kg。在單獨試驗中考布他汀4-磷酸酯(CA4P)也被給予患有HT-29腫瘤的小鼠。在腫瘤達到900mn^日寸，用載體或CA4P以100mg/kg的報告MTD基于每天給藥4劑量處理小鼠(n=10)。發(fā)現(xiàn)CA4P在該腫瘤模型中無活性，與對照載體沒有差別(圖12)。盡管上述發(fā)明出于清楚理解的目的，已經(jīng)通過闡述和舉例相當(dāng)詳細地予以描述，但是對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是明顯的是，一些小的變化和改動可以被實施。因此，所述描述和實例不應(yīng)該被解釋為限制本發(fā)明的范圍。4權(quán)利要求1.抑制個體中血管生成的方法，包括給予所述個體包含載體蛋白和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物處于有效抑制血管生成的量，并且其中所述組合物的量不足以在所述個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。2.治療個體中非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病的方法，包括給予所述個體包含載體蛋白和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物的量有效治療所述非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病。3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病為眼病。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述眼病為年齡相關(guān)性黃斑變性、糖尿病性視網(wǎng)膜病或新生血管性青光眼。5.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病為心血管疾病。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述心血管疾病是再狹窄或動脈粥樣硬化。7.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述非腫瘤性血管生成相關(guān)疾病為風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或銀屑病。8.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述組合物的量不足以在所述個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。9.治療個體中癌癥的方法，包括給予所述個體包含載體蛋白和秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物，其中所述組合物是有效治療癌癥的量，并且其中所述組合物的量不足以在所述個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述組合物中所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的量為所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的相應(yīng)MTD的約15%以下。11.如權(quán)利要求IO所述的方法，其中所述癌癥為實體瘤。12.如權(quán)利要求ll所述的方法，其中所述癌癥為轉(zhuǎn)移性實體瘤。13.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體是式(II)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>B,是甲氧基或甲硫基；B2是甲氧基或甲硫基；n是從0到8的整數(shù)；Y是CH2基團，或當(dāng)n為l時，Y也可以為式NH的基團。14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中Y為CH2。15.如權(quán)利要求13所述的方法，其中n為1且Y為NH。16.如權(quán)利要求13所述的方法，其中B,和B2都是甲硫基。17.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述化合物為IDN5404。18.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述化合物為IDN5676。19.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述組合物中所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的量在約15mg/m2以下。20.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述組合物每周施用一次。21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述組合物被無間斷地施用約3個月以上。22.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述組合物基本不含表面活性劑。23.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述載體蛋白為白蛋白。24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述白蛋白與秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的比率在約18:1以下。25.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述組合物包含含有所述載體蛋白和所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的納米顆粒。26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述載體蛋白為白蛋白。27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中所述白蛋白與所述秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的比率在約18:1以下。28.如權(quán)利耍求25所述的方法，其中所述納米顆粒具有200nm或更29.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述組合物基本不含表面活性劑。30.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述組合物為-5404。31.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述個體為人。全文摘要本發(fā)明提供通過施用含有秋水仙堿或硫代秋水仙堿二聚體的組合物(如，含蛋白的組合物)在個體中抑制血管生成的方法。所述組合物的量有效抑制血管生成，但是在一些實施方式中，其不足以在個體中誘導(dǎo)明顯的細胞毒性。本文所述的方法用于治療血管生成相關(guān)疾病，如年齡相關(guān)性黃斑變性、糖尿病性視網(wǎng)膜病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病和癌癥。文檔編號A61K31/165GK101568332SQ200680056112公開日2009年10月28日申請日期2006年8月31日優(yōu)先權(quán)日2006年8月31日發(fā)明者N·P·德塞,V·特里優(yōu)申請人:阿布拉科斯生物科學(xué)公司