含有噻唑衍生物作為活性成分的藥物的制作方法

專利名稱：：含有噻唑衍生物作為活性成分的藥物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及含有下式(1)所表示的1^{2-2-[(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l,3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽作為活性成分的藥物。(1)更詳細地，本發明涉及含有上述化合物(1)或其可藥用鹽作為活性成分的藥物，所述藥物用作鼻竇炎、鼻塞、鼻黏膜充血的預防和/或治療劑。此外，本發明涉及含有以上述化合物(1)或其可藥用鹽作為活性成分的藥物，所述藥物用作哞喘的預防和/或治療劑。
背景技術：
：專利文獻1中，描迷了下式(2)所表示的化合物，但其中并未描述該化合物對沒有有效口服治療藥物的鼻塞有效。并且該文獻中也未描述該化合物對鼻竇炎有效。(2)已知鼻塞癥狀與哮喘相同，為速發型和遲發型反應，但是不同于哮喘，鼻塞屬于鼻粘膜血管的反應，并認為鼻塞由于鼻竇粘膜的浮腫脹而發生.與短暫性速發型鼻塞反應不同，認為慢性鼻塞是以炎癥反應為主的遲發型反應的結果。過敏性鼻炎中的鼻塞癥狀仍然是難治性癥狀，抗組胺藥對該癥狀很難有效。雖然類固醇滴鼻劑對其有效，但缺點是該藥物為局部施用，因此該藥物因鼻腔阻塞而很難到達鼻粘膜區域。另外從副作用的角度出發，很少使用口服類固醇。已知Cys-LT！受體拮抗刑(抗白三烯藥)和TXA2受體拮抗劑(抗凝血噁烷藥)對鼻塞有效，但它們僅控制單一的介體，且其有效性有限。專利文獻1:WO02/0254
發明內容本發明的課題是提供對花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎(eosinophilerhinitis)、鼻竇炎等中的鼻塞、鼻粘膜充血癥狀有效的治療劑。更具體地，本發明的課題是提供對以下疾病有效的治療劑(l)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎等；或(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎等伴有的速發型(immediate)鼻塞癥狀或遲發持續性(delayedpersistent)鼻塞癥狀；(3)諸如慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎(eosinophilesinusitis)或鼻息肉形成等鼻竇炎；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀。此外，本發明的課題是提供安全性高、毒性低的哮喘治療劑。為解決以上課題，本發明人進行潛心研究，以找到通過以下手段解決以上課題的方法。即，發現使用式(1)所表示的N-口-2-[(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-1，3-噻唑-3(211>"基乙基}-1^，-曱基脲或其可藥用鹽作為活性成分，來解決以上課題，完成本發明。本發明涉及下述發明(1)預防或治療與免疫相關的疾病的方法，其包括對患者給予有效量的下式(1)所表示的N-口-l2-l(3-氟苯基)亞氨基l-4-(4-嗎啉4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基}-N，-甲基脲或其可藥用鹽(1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(2)預防和/或治療哞喘癥狀的方法，其包括對患者給予有效量的N-(2-[2-[(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N'-甲基脲或其可藥用鹽，(3)預防或/和治療以下疾病的方法(l)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎；(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、千燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或鼻息肉形成；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀，所迷方法包括對患者給予有效量的N-{2M2-(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基H，3-噻唑-3(2H)-基j乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽。(4)用于孝喘的預防和/或治療劑，其含有N-口-卩-l(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基i乙基卜N，-曱基脲或其可藥用鹽作為活性成分。(5)用于以下疾病的預防和/或治療劑(l)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、千燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎；(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或鼻息肉形成；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀，所述預防和/或治療劑含有N-(2-[2-[(3-氟苯基)亞氨基l-4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基j乙基HV，-曱基脲或其可藥用鹽作為活性成分，(6)用于以下疾病的預防和/或治療劑(l)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎；(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或鼻息肉形成；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀，所述預防和/或治療劑含有與作為合用藥物(coadministereddmg)的抗組胺藥或類固醇組合(incombinationof)的N-(2-2-(3-氟苯基)亞氨基l-4-(4-嗎啉-4-基苯基H，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽，(7)根據以上(6)所述的預防和/或治療劑，其中所述合用藥物為始.紐脈I(8)根據以上(6)所述的預防和/或治療劑，其中所述合用藥物為類固醇。(9)N-口-l2-l(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽在制備預防或治療哮喘的藥物中的用途。(10)N-口-f2-l(3-氟苯基)亞氨基l-4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l,3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽在制備預防或治療以下疾病的藥物中的用途(l)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、千燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎；(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或鼻息肉形成；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀.發明效果通過使用本發明所涉及的N-{2-2-(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基笨基)-l,3-噻唑-3(2H)-基l乙基HV，-甲基脲或其可藥用鹽，使以下疾病的預防和/或治療成為可能(l)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎；(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或鼻息肉形成；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀，另外，通過使用本發明所涉及的N-口-2-[(3-氟苯基)亞氨基-4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基I乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽，使得哞喘的安全預防或/和治療成為可能。附圖簡述圖1示出了藥物對來自鼠骨髄來源的肥大細胞的炎癥介質的產生和釋放的影響。圖2示出了來自鼠骨髓來源的肥大細胞的炎癥介質。圖3示出了藥物對來自豚鼠嗜酸性粒細胞來源的肥大細胞的炎癥介質的產生和釋放的影響。圖4示出了藥物對豚鼠鼻炎模型中鼻氣道阻力變化的影響。圖5示出了藥物對豚鼠鼻炎模型中速發型、遲發型鼻氣道阻力變化的影響。圖6示出了藥物對豚鼠鼻炎模型的鼻腔中的炎癥介質產生和釋放的影響。實施本發明的最佳方式關于本發明所涉及的式U)的rH2-l2-[(3-氟苯基)亞氨基l-4-(4-嗎啉-4-基苯基)-1，3-噻唑-3(211)-基1乙基}-1^，-曱基脲的可藥用鹽，例舉為酸加成鹽和堿加成鹽。就酸加成鹽而言，例舉為例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽等無機酸鹽，以及諸如檸檬酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽等有機酸鹽。就堿加成鹽而言，例舉為諸如鈉鹽、鈣鹽等無機堿式鹽，以及諸如葡甲胺鹽、三羥甲基氨基甲烷鹽等有機堿式鹽.本發明中包括的化合物可具有不對稱碳或具有含不對稱碳的取代基，因而可存在旋光異構體。本發明包括各異構體的混合物或分離的異構體.本發明所涉及的N-(2-f2-(3-氟苯基)亞氨基!-4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽還包括其溶劑合物，例如水合物。本發明所涉及的N-{2-[2-[(3-氟苯基)亞氨基1-4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽有用于藥物，且因所迷化合物抑制嗜酸性粒細胞遷移.浸潤、從嗜酸性粒細胞產生和/或釋放炎癥介質、T細胞遷移.浸潤、從肥大細胞產生和/或釋放炎癥介質、Th2型細胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)的產生和/或釋放、半胱氨酰白三烯類(-白三烯CVD4/E4,下文縮寫為Cys-LT)的產生、腫瘤壞死因子-a(下文縮寫為TNF-a)的產生和/或釋放以及IgE抗體的產生而用作與免疫有關的疾病的預防和/或治療刑，所迷疾病即(l)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎；或(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、千燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或鼻息肉形成；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀。此外，由于抑制Th2型細胞因子的產生或釋放，所述化合物對Th2型細胞因子產生增強引起的疾病治療也有效。由于本發明所涉及的N-{2-[2-(3-氟苯基)亞氨基H-(4-嗎啉-4-基苯基H，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-曱基脲具有不同于已知藥物的機制，因此在用于治療以上疾病的給藥情況下，其可與以往使用的預防或治療刑聯用(coadministered),例如可以與以下藥物聯用抗過敏藥(化學介質釋放抑制劑、抗組胺藥、抗白三烯藥、抗凝血噁烷藥或Th2細胞因子抑制劑)、類固醇(吸入類固醇、鼻用(nasal)類固醇、口服類固醇等)、支氣管或鼻腔擴張藥(P興奮劑、交感神經興奮刑(symphasomimetic)、副交感神經阻滯藥(抗膽堿能藥)等)、用于疫苗療法的藥物、中藥、它們的合用藥物(吸入卩興奮劑與吸入類固醇的合用藥物等)，尤其在與類固醇或含類固醇的聯合藥物聯用的情況中，增強了類固醇或含類固醇的聯合藥物的治療效果，并且有可能減少類固醇或含類固醇的聯合藥物的量或者消除類固醇或含類固醇的聯合藥物。抗膽堿能藥物包括例如異丙托溴銨、氟托溴銨、氧托溴銨等，化學介質釋放抑制劑包括例如色甘酸、色甘酸鈉、曲尼司特等.抗組胺藥包括苯海拉明、氯笨那敏、西替利嗪、氯雷他定、二苯拉林、奧洛他定、貝他斯汀、酮替芬、特非那丁、美喹他嗪、氮簞斯汀、依匹斯汀、奧扎格雷、非索非那定、依巴斯汀、奧沙米特等。抗白三烯藥包括例如普侖司特、孟魯司特等。Th2細胞因子抑制劑包括例如甲磺司特(suplatast)等。吸入P興奮劑包括例如沙美特羅、丙卡特羅、馬布特羅、曲托喹酚、妥洛特羅、茶堿、沙丁胺醇等，優選沙美特羅。類固醇包括例如氟替卡松、倍氯米松、潑尼松龍、地塞米松、倍他米松等，優選氟替卡松。吸入p興奮劑與吸入類固醇的合用藥物包括例如沙美特羅和氟替卡松的合用藥物。本發明所涉及的ISH2-2-(3-氟苯基)亞氨基M-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲、其可藥用鹽以及含有此化合物的藥物，可以口服給予或胃腸外給予。口服給藥的情況中，以通常的形式進行給藥。在胃腸外給藥中，可以局部給予(吸入劑、滴鼻劑、外用制劑)、注射、經皮給予、經鼻給予等形式給藥。口服給予或直腸給予的劑型例舉為膠嚢劑、片劑、丸劑、散刑、扁嚢劑(caches)、栓劑、溶液劑等。注射劑例如例舉為無菌溶液或混懸劑。局部給予的刑型例舉為乳骨劑、軟骨劑、洗劑、透皮劑(貼劑等)等。從活性成分和可藥用的無毒賦形劑等以通常方式制備以上劑型。賦形劑包括例如栽體、粘合劑、香料、緩沖劑、增稠劑、著色劑、穩定劑、乳化劑、分散劑、懸浮劑、防腐劑等，栽體例如例舉為碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、蔗糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點蠟、可可脂等。通過以下方法制備膠嚢劑將N-口-2-l(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-曱基脲或其可藥用鹽與可藥用栽體放入膠嚢，或者將其與可藥用稀釋劑混合，并將混合物放入膠囊，或者不用任何栽體而將其放入膠囊。扁囊劑也以同樣的方法制備。通過將活性成分與可藥用基質混合制備散劑。基質包括滑石粉、乳糖、淀粉等。通過將活性成分與水性或非水性基質以及一種或多種可藥用分散劑、混懸劑、增溶劑等混合制備滴劑.可注射溶液例舉為溶液、混懸刑、乳劑等，例如水溶液、含水丙二醇等。溶液可含有水，也可以聚乙二醇和/或丙二醇溶液的形式制備溶液。適于口服給予的溶液可通過以下方式制備在水中加入ISK2-[2-l(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽，并根據需要向其中加入著色劑、香料、穩定劑、甜味劑、增溶劑、增稠劑等。此外，適合口服給予的溶液可通過如下方式制備將N-(2-[2-l(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽以及分散劑加入水中，以增稠。增稠劑例如包括可藥用的天然或合成樹膠、樹脂、甲基纖維素、羧曱基纖維素鈉或已知的懸浮劑等，局部用制劑包括上述溶液、乳骨劑、氣霧劑、噴霧劑、散劑、洗劑、軟骨劑等。通過將IH2-2-(3-氟苯基)亞氨基l-4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(20-基1乙基卜1^，-甲基脲或其可藥用鹽與通常使用的稀釋劑和栽體混合制備上述局部用制劑。例如通過向水性或油性基質中加入增稠刑和/或膠凝劑來制備乳骨劑和軟骨劑。基質包括例如水、液體石蠟、植物油等。增稠劑包括例如凡士林、硬脂酸鋁、十八醇十六醇混合物、丙二醇、羊毛脂、氬化羊毛脂、蜂蠟等，通過向水性或油性基質中加入至少一種可藥用穩定劑、懸浮劑、乳化刑、分散劑、增稠劑、著色刑、香料等制備洗劑。局部用制劑根據需要可含有諸如羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、氯甲酚、苯扎氯銨等防腐劑或細菌生長抑制劑.可以噴霧溶液、散劑、干粉劑或滴刑的形式經肺、吸入劑或經鼻給予PH2-l2-l(3-氣苯基)亞氨基M-(4-嗎啉-4-基苯基)-l,3-塞唑-3(2H)-基l乙基卜N，-曱基脲或其可藥用鹽，化合物(l)或其可藥用鹽的劑量和給藥間隔根據癥狀、年齡、體重、給藥方式等變化。在口服給藥的情況下，可以單刑量或分次劑量給予通常為約2-500mg/成人/天(優選約5-200mg,特別優選1(M00mg)的化合物。注射情況下，可以單刑量、分次劑量或連續(通過點滴)給予約0.1-300mg(優選約1-200mg)化合物。在經肺、吸入劑或經鼻給藥的情況下，可以單劑量或分次劑量給予約0.1-300mg(優選約1-200mg)化合物，在外部施用(軟骨、乳骨等)的情況下，可以單刑量或分次劑量給予約為0.1-300mg(優選約1-200mg)化合物。作為貼劑情況下，可以單劑量或分次劑量給予約0.1-300mg(優選1-200mg)化合物，通過以下實施例對本發明進行舉例說明，但本發明并不限于此.(試樣)色甘酸二鈉(DSCG，色甘酸鈉吸入劑，FujisawaPharmaceutical)、地塞米松(dex.，NakaraiTesc)、AA-861(WakoPureChemical)以及吲哚美辛(WakoPureChemical)均為市售商品。實施例1N-(2-[2-(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲(有時縮寫為SMP-028)用WO00/18399(專利文獻l)中所描述的方法制備本化合物，(1)向含有2-(氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(L02克)的乙腈(20毫升)溶液中滴入3-氟苯基異疏氰酸酯(752毫克)，在75'C加熱混合物l小時，將混合物真空濃縮，并從正己烷結晶，得到2-{[(3-氟苯胺基)硫羰基(carbotWoyl)1氨基}乙基氨基甲酸叔丁酯(1.81克)。力-NMR(CDCb):<51.35(9H，s)，3.35(2H，m)，3.74(2H，m),4.89(1H，bs)，6.99(3H，m),7.37(1H，m)，7.81(1H，bs)(2)在氮氣氛下，將以上(1)中制備的2-{1(3-氟苯胺基)硫羰基1氨基}乙基氨基甲酸叔丁酯U.81克)、ot-溴-4'-嗎啉基苯乙酮U.56克)和乙醇(20毫升)的混合物于45X:攪拌.l小時后，過濾所得的晶體，得到(2-[2-[(3-氟苯基)亞氨基-4-(4-嗎啉基苯基)噻唑-3(2H)-基l乙基}氨基曱酸叔丁酯(1.76克)。將如此得到的化合物(1.76克)、甲醇(5毫升)和4N-鹽酸二噁烷(50毫升)的混合物于室溫攪拌。3小時后，將反應混合物真空濃縮，濾除不溶性物質，得到N-13-(2-氨基乙基HK4-嗎啉基苯基)噻唑-2(3H)-亞基卜3-氟苯胺(1.57g)。向這樣得到的化合物(1.57g)、2N-氫氧化鈉水溶液(10毫升)和四氬呋喃(20毫升)的混合物中加入N-甲基氨基甲酸苯酯(907毫克)，55t;下攪拌該混合物。3小時后向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取混合物。有機層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥.真空脫除溶劑，殘渣從甲醇中結晶，得到針狀的標題化合物(810毫克)。mp:190-191'CIR(KBr，cm1):3328，2949,2852，1618,1595，1577。H-NMR(CDC13):32.69(3H,d，J=4.8)，3.26(4H，t,J=4.8)，3.45(2H，m)，3.89-3.93(6H，m),5.10-5,60(2H，ra),5.80(1H，s),6.80-6.93(3H，m)，6,97(2H，d，J=8.8)，7.28-54(3H，m)。實施例2藥物對來自鼠肥大細胞的炎癥介質的釋放的影響(1)對來自鼠肥大細胞的炎癥介質的釋放的研究按照與Razin等(J.Immunol.132，1479-1486(1984))的方法幾乎相同的方法，將鼠骨髓細胞分化為肥大細胞.即，收集雌性BALB/c小鼠(購自CharlesRiverJapan)的股骨骨髓細胞，并在含50%WEHI-3細胞培養上清液的RPMI640培養基(Inv"rogen制備，含10y。固定的FBS)中進行培養，培養超過三周并顯微鏡下確認分化為肥大細胞后，對細胞進行以下實驗《(2)組胺釋放實驗將肥大細胞以2xl(^細胞/ml的濃度懸浮，向其中加入0.1jig/ml抗小鼠DNP-IgE抗體(SPE7，Sigma-Aldrich制)，將細胞懸浮液在二氧化碳孵育箱(5MC02，37t:)中醉育過夜，并被動致敏。通過用Tyrone溶液(Sigma-Aldrich制)洗涂超過兩次來除去未與細胞結合的抗體，使肥大細胞以1.25"06細胞/1111的濃度在Tyrone溶液中分散。將此細胞懸浮液(80nl)加入到96孔培養板(Asahi-techno-glassCo.Ltd,)中，然后加入試樣的DMSO溶液或僅加入2.5%DMSO溶液(10p，)。在二氧化碳孵育箱中再保溫10分鐘后，向每孔加入10jil抗原(lpg/ml，DNP-HSA，Sigma-Aldrich制，抗原終濃度為100ng/mi)進行刺激。然后將板在二氧化碳孵育箱中孵育20分鐘。此時向空白組添加Tyrone溶液.通過將板置于水上以終止反應后，測定上清液中的組胺濃度。使用組胺酶免疫分才斤試劑盒(Histamineenzymeimmunoassaykit)(SPIbio)進4亍效'J定。(3)Cyst-LT釋放實驗除了抗原(DNP-HSA)終濃度為10ng/ml以外，采用與組胺釋放實驗幾乎相同的方法實施本實驗。使用半胱氨酰-白三烯EIA試劑盒(Cysteinyl-LeukotHeneEIAKit)(CaymanChemkal)測定上清液中半胱氨酰.白三烯的濃度。(4)細胞因子(TNF-a、IL-13)釋放實驗除了抗原(DNF-HSA)終濃度為3ng/ml以及加入抗原后的反應時間為4小時以外，采用與組胺釋放實驗幾乎相同的方法實施本實驗.使用酶聯免疫分析試劑盒(Enzyme-lmkedimmunoassaykit)(Quantikine(注冊商標)小鼠TNF-a/TNFSFlA和IL-13Immunoassay,R&Dsystems制)測定上清液中TNF-a和IL-13的濃度.結果示于圖1和困2中。圖1顯示了藥物對從鼠骨髄來源的肥大細胞產生及釋放炎癥介質的影響。該圖顯示SMP-028對從鼠骨髄來源的肥大細胞釋放半胱氨酰.白三烯(Cys-LT)(A)或組胺(B)的影響，用5次重復試驗的平均值士標準誤差來表示結果，百分比表示抑制率。**p<0.005，*p<0.025:與對照組比較(使用原始數據進行Williams檢驗，單側檢驗)。§§p<0.01:與對照組比較(使用原始數據進行Welch檢驗，雙側檢驗)。NS:相對于對照組無顯著差異(使用原始數據進行Williams檢驗，單側檢驗)。圖2顯示來自鼠骨號來源的肥大細胞的炎癥介質，該圖顯示SMP-028對從鼠骨髄來源的肥大細胞產生和/或釋放IL-13(A)或TNF-a(B)的影響。用6次重復試驗的平均值士標準差來表示結果。百分比表示抑制率。##p<0，01，§§p<0.01:與對照組比較(雙因素(two-waylayout)方差分析，雙側檢驗)。*p<0.05，**p<0.01:與對照組比較(雙因素Dunnett檢驗，雙側檢驗)。(5)評價如圖1和圖2中清楚顯示，SMP-028抑制源自肥大細胞的組胺、Cys-LT、TNF-a和IL-13的釋放，即，表明，SMP-028抑制來自鼻腔和鼻竇中存在的肥大細胞的炎癥介質的釋放。實施例3藥物對來自豚鼠嗜酸性粒細胞的炎癥介質的釋放的影響按照與Sugasawa等(AgentsandActions37，233-237(1992))的方法幾乎相同的方法，從雄性Hartley豚鼠(購自SLC)的腹部分離提純嗜酸性粒細胞，并用改進的hanks溶液將細胞濃度調節至1.25xl07細胞/ml，將此細胞懸浮液(80)加入到96孔培養板(Asahi-techno-glassCo.Ltd.)中，然后加入試樣的DMSO溶液或僅加入2.5。/oDMSO溶液(10nl)。將板在二氧化碳氣體孵育箱(5%C02，371C)中預孵育10分鐘后，向其中加入血小板活化因子(PAFC-16,CaymanChemical)10pi(PAFC-16的終濃度107M)，在二氧化碳氣體孵育箱中進一步孵育此混合物IO分鐘。通過使用免疫分析試劑盒(凝血噁炕B2EIA試劑盒、前列腺素D2-MOXEIA試劑盒，CaymanChemical)測定上清液中凝血噁烷B2和前列腺素D2的濃度，結果示于圖3中。圖3顯示藥物對來自豚鼠嗜酸性粒細胞的炎癥介質的釋放和產生的影響。該圖顯示SMP-028和吲哚美辛對來自PAF誘導的豚鼠嗜酸性粒細胞的前列腺素D2或凝血噁烷B2的釋放和產生的影響。用6次重復試驗的平均值士標準誤差來表示結果。百分比表示抑制率。##p<0.001，§§p<0.01:與對照組比較(雙因素方差分析，雙側檢驗)，*p<0.05，**p<0.01:與對照組比較(雙因素Dunnett檢驗，雙側檢驗)。NS:相對于對照組無顯著差異(雙因素Dunnett檢驗)，評價如圖3中清楚顯示，SMP-028濃度依賴性地抑制源自嗜酸性粒細胞的前列腺素D2或凝血噁烷B2的釋放，即，表明，SMP-028抑制來自浸潤入棄腔和鼻竇中的嗜酸性粒細胞的炎癥介質的釋放。實施例4藥物對豚鼠鼻炎模型鼻氣道阻力變化的影響(1)對豚鼠鼻炎模型鼻腔阻力變化的評價參照報道(第74屆日本藥理學會(2001)，摘要編號P-258,Establishmentdelayedrhinitismodelbyaguineapigandeffectofpolysulfonicacidifiedhyaluronicacid,MasakiMatsudo，JunichiFuchigami等)進行以下的評價。(2)致敏對雄性Hartley豚鼠(購自KyudoCo.Ud.)從后頸透皮給予1ml含有50mgOVA和lmg氫氧化鋁凝膠(PIERCE)的生理鹽水，以使主動致敏。(3)藥物給予從致敏開始每日1次口服給予SMP-028(5ml/體重(kg))，持續15天。在致敏日或抗體攻擊日l小時前口服給藥.生理鹽水攻擊組(生理鹽水組)和對照組口服0.5%MC。地塞米J^組(dex.組)在抗體攻擊的16小時和2小時前口服給予藥物。(4)抗體滴鼻攻擊(nasalchallenge)致敏后十四天，用微量吸管將5嘰OVA-生理鹽水溶液經鼻給予鼻腔兩側(每側20fU)，以進行抗體滴鼻攻擊，生理鹽水滴鼻組(生理鹽水組)同樣進行濃度致敏，并經鼻給予生理鹽水(溶劑滴鼻攻擊)以代替抗體滴鼻攻擊。(5〉鼻腔阻力的測定通過使用綜合呼吸功能分析系統(PULMOS-I，M丄P.S制)，按照雙流體積描記器(Doubleflowplestymograph)法測定豚鼠在蘇醒狀態下的鼻腔阻力.由于抗體攻擊部位局限于鼻部，因此將通過計算機分析輸出的sRaw(特異性氣道阻力)作為鼻腔阻力的指標，在抗體滴鼻攻擊前、攻擊后10分鐘、2、3、4、5、6和7小時后各自測定一次每只動物的sRaw值，并在各測定時間以IOO次呼吸的平均值作為sRaw值。使用綜合呼吸功能分析系統的分析軟件(WinPUL13ver，1.21)，并通過使用計算式(各測定時間期間的sRaw增加率W-100x(各測定時期的sRaw-攻擊前的sRaw)/攻擊前的sRaw)，從sRaw值計算sRaw的變化率。從各測定時間的sRaw變化率、攻擊后10分鐘的sRaw增加率(速發型反應，IAR，速發型鼻氣道反應)以及由攻擊后3~7小時的sRaw的增加率計算的反應曲線下面積(AUC3.7hr,遲發型反應，LAR，遲發型鼻氣道反應)對化合物進行評價。通過梯形(echelon)法計算AUC3.7hr。此外，從介質對照組和各試驗組的IAR和LAR計算各試驗組相對于介質對照組的抑制率(％)。結果示于圖4和圖5中，圖4顯示藥物對豚鼠鼻炎模型的鼻腔阻力變化的影響。該圖中顯示通過滴鼻對主動致敏的豚鼠進行抗原誘導后，SMP-028和地塞米松對鼻腔阻力(sRaw)隨時間變化的影響，用8只動物的平均值士標準誤差表示結果。百分比表示抑制率。##p<0.01:與對照組比較(學生t檢驗或Aspin-Weich檢驗，雙側檢驗)，*卩<0.05，**p<0.01:與對照組比較(Dunnett檢驗，雙側檢驗)。+p<0.05，++p<0.01:與對照組比較(學生t檢驗，雙側檢驗)。圖5顯示藥物對豚鼠鼻炎模型的速發型和遲發型鼻腔阻力變化的影響。該圖中顯示SMP-028和地塞米松對主動致敏豚鼠模型中抗原誘導的即發型鼻腔阻力反應(IAR)和遲發型鼻腔阻力反應(LAR)中鼻腔阻力(sRaw)隨時間變化的影響。用8只動物的平均值士標準誤差表示結果。百分比表示抑制率。##p<0.01:與對照組比較(學生t檢驗，雙側檢驗)。*p<0.05，**p<0,01:與對照組比較(Dunnett檢驗，雙側檢驗)。+p<0.05:與對照組比較(學生t檢驗，雙側檢驗)。(6)評價如圖4和圖5中清楚顯示，在其中陽性對照(地塞米松)顯示功效的試驗中，SMP-028劑量依賴性地抑制速發型和遲發型鼻塞反應，在30mg/kg下，其顯示與地塞米松相當的功效。(7)鼻腔灌洗液抗原滴鼻攻擊8小時后，通過腹腔內給予戊巴比妥鈉30mg/體重(kg)(Nembutal(注冊商標)，DainipponSumitomoPharma制)進行麻醉，將動物從背部固定。打開支氣管，將插管插入肺部以維持呼吸，并打結固定。阻斷(stopping)口腔和鼻腔的通道后，從一部分打開的支氣管至鼻腔一側插入插管并打結，插管與注射泵連接，在鼻腔中以1ral/分鐘的流速灌流(reflux)生理鹽水溶液10分鐘后，回收灌流液得到鼻腔灌洗液(NCLF),離心NCLF(1710.5xg(3000rpm)，4°C，10分鐘),在-80'C冷凍上清液，用于實施例5中的實驗，實施例5藥物對豚鼠鼻炎模型的鼻腔中炎癥介質的產生的影響(1)鼻腔中炎癥介質的測定將實施例4中得到的NCLF上清液在-80'C冷凍保存。樣品解凍后，通過免疫分析試劑盒(白三烯E4EIA試劑盒，CaymanChemical)測定LTE4的濃度，通過生物分析方法(DavidH.等，J.AllergyClin.Immunol.89，958-967(1992))使用L929細胞(購自DainipponSumitomoPharma)測定TNF的濃度。使用重組人TNF-a(PeproTech)作為標準物，用人TNF-a細胞毒性的效價表示結果。結果示于圖6中，圖6顯示藥物對豚鼠鼻炎模型鼻腔中的炎癥介質的產生的影響。該圖顯示SMP-028和地塞米松在對主動致敏的豚鼠滴鼻進行抗原誘導8小時后抗鼻腔灌洗液(NCLF)中的抗炎癥介質((A)TNF或(B)LTE4)的作用。用8只動物的平均值士標準誤差表示結果。百分比表示抑制率。#p<0.05:與對照組比較(學生t檢驗，雙側檢驗)。**p<0.01:與對照組比較(Dunnett檢驗，雙側檢驗)。NS:相對于對照組無顯著差異(學生t檢驗，雙側檢驗)。(2)評價如圖6中清楚顯示，SMP-028呈現抑制鼻腔內TNF和LTE4產生的傾向或和活性。實施例6對豚鼠遲發型哮喘模型進行化合物評價被評價化合物化合物2:WO02/02542(專利文獻1)實施例350化合物1(SMP-028):實施例1化合物2化合物1(SMP-028)評價方法雄性Hartley豚鼠購自SLC,將其檢疫一周后，在檢疫完畢的那周通過抗原暴露進行初次致敏。通過使用超聲霧化器(OMRONNE-U12，條件:霧化量最大，風量小)霧化2%(w/v)卵白蛋白(OVA，Sigma-Aldrich)的生理鹽水溶液，通過暴露十分鐘，將豚鼠初次致敏。致敏時，將其固定在豚鼠用身體固定夾(bodyholdercartridge)(M丄P.S制)上，并將其設置在用于8只豚鼠的暴露室架臺(disposalchamberholder)上(M.I.P.S.制)。初次致敏7天后以同樣方式進行追加致敏。初次致敏14至16天后，通過吸入抗原誘導哮喘反應。誘導前l小時，腹腔內給予抗組胺藥馬來酸吡拉明(溶于生理鹽水，10mg/2mL/kg),接著口服試樣。用0.5%甲基纖維素(MC)水溶液制備試樣，給予量為5mL/kg。同樣給予疾病誘導組0.5%MC。使用超聲波霧化器將2%OVA溶液(SeikagakuCorp.制造的OVA)霧化，并通過吸入其5分鐘來誘導哮喘反應。通過綜合呼吸功能測定儀(M.I.P.S制)，利用雙流體積描記器方法(PennyA.Hutson等，AmRevRespirDis1988137，548-557)測定呼吸功能。在反應誘導前(前值)、完成反應誘導后5分鐘、1、2、3、4、5、6、7和8小時測定呼吸功能。通過使用參數之一sRaw/TV(特異性氣道阻力/一次呼吸)作為改善呼吸功能的指標，計算每一個體的各測定時間之間的sRaw/TV相對前值的變化率(o/。sRaw/TV)。繪制經時間的%sRaw/TV的圖，計算反應誘導后4至8小時的曲線下面積(AUC4.8br).通過使用AUC4.8hr值來計算對各個體的遲發型哞喘反應的抑制率。以這些值為基礎，獲得表1中所示的EDso(mg/kg)值。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>工業實用性以單劑量或分次劑量對患有以下疾病的患者給予化合物(1)或其可藥用鹽，可實現無副作用的治療(l)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎等；(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、千燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎等伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)諸如慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或鼻息肉形成等鼻竇炎；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀。此外，以單劑量或分次劑量對對患有哞喘癥狀的患者給予該化合物，可實現無副作用的治療，權利要求1.預防或治療與免疫相關的疾病的方法，其包括對患者給予有效量的下式(1)所表示的N-{2-[2-[(3-氟苯基)亞氨基]-4-(4-嗎啉-4-基苯基)-1，3-噻唑-3(2H)-基]乙基}-N’-甲基脲或其可藥用鹽2.預防或治療津喘癥狀的方法，其包括對患者給予有效量的N-(2-2-(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l,3-噻唑-3(2H)-基J乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽。3.預防或/和治療以下疾病的方法(1)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎；(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或鼻息肉形成；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀，所迷方法包括對患者給予有效量的>1-{2-12-1(3-氟笨基)亞氨基j-4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽。4.用于哞喘的預防或治療劑，其含有下式(l)所表示的N-{2-[2-[(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基j乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽作為活性成分<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>5.用于以下疾病的預防或治療劑(1)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎；(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或鼻息肉形成；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性真塞癥狀，所述預防或治療刑含有N-口-l2-[(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽作為活性成分，6.用于以下疾病的預防或治療劑(1)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎；(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性真炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或鼻息肉形成；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀，所述預防或治療劑含有與作為合用藥物的抗組胺藥或類固醇組合的N-口-l2-l(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基j乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽。7.根據權利要求6所迷的預防或治療劑，其中所述合用藥物為抗組胺藥。8.根據權利要求6所迷的預防和/或治療劑，其中所迷合用藥物為類固醇。9.下式(1)所表示的N-口-l2-(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基H，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽在制備預防或治療哮喘的藥物中的用途10.1^{2-[2-〖(3-氟苯基)亞氨基卜4-(4-嗎啉-4-基苯基)-1，3-噻唑-3(211)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可藥用鹽在制備預防或治療以下疾病的藥物中的用途(l)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎；(2)花粉變態反應、嗜酸性粒細胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性弄炎、萎縮性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管運動性鼻炎或壞死性鼻炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀；(3)慢性鼻竇炎、頑固性鼻竇炎、嗜酸性粒細胞增多性鼻竇炎或舁息肉形成；或(4)鼻竇炎伴有的速發型鼻塞癥狀或遲發持續性鼻塞癥狀，全文摘要用于鼻竇炎、鼻塞、鼻黏膜充血的預防和/或治療劑，其含有式(1)所表示的N-{2-[2-[(3-氟苯基)亞氨基]-4-(4-嗎啉-4-基苯基)-1，3-噻唑-3(2H)-基]乙基}-N’-甲基脲或其可藥用鹽作為活性成分。文檔編號A61P37/00GK101505758SQ200680055308公開日2009年8月12日申請日期2006年12月22日優先權日2006年5月11日發明者中島孝,菅澤敏成申請人:大日本住友制藥株式會社