專利名稱：：含多西他賽和降解抑制劑的藥物組合物及其制備方法含多西他賽和降解抑制劑的藥物組合物及其制備方法
技術領域：
：本發明的范圍本發明涉及藥物組合物及其制備方法，該方法特征為釆用降解抑制劑與賦形劑結合，制備含有無水4-乙酰氧基-2-a-苯甲酰氧基-5p-20-環氧-1,7-|5畫10-|5畫三羥基-9國氧代-紫杉(tax)-ll-烯-13a-基(2R，3S)3畫叔-丁氧羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯，無水多西他賽(I)或其三水合物的無菌和穩定的溶液。由此制備的溶液穩定性得到改善，且降低了主要降解產物即4-乙酰氧基-2-a-苯甲酰氧基-5P-20-環氧-1,7-01-10^-三羥基-9-氧代-紫杉-11-烯-1301-基(2R，3S)3-叔-丁氧羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯，7-表-多西他賽(II)的水平。III本發明的第一個實施方案涉及制備在15-30'C,士rc保存時至少30個月保持穩定的高穩定藥物組合物。本發明的第二個實施方案涉及顯著減少在含多西他賽(I)或其三水合物的最終劑型中存在的主要降解產物7-表-多西他賽(II)。顯著降低了7-表-多西他賽(II)的形成。與現有技術中描述的制備相比，采用本發明方法制備的制劑中7-表-多西他賽(II)的含量降低至1-5%。這通過加入降解抑制劑，理想的是pKa為2.5-4.5的有機酸和/或抗氧化劑而得以實現。通過下列步驟制備本發明描述的溶液將活性成分(I)或其三水合物溶于生物兼容的賦形劑，優選經降解抑制劑處理過的聚山梨酯80，然后經孔隙小于或等于0.22nm的膜過濾，然后裝入適當的容器。在本發明的另一個實施方案中，無菌溶液在室溫(本文將其定義為i5-3o°c，士rc的范圍)高度穩定，因為其中加入了至少一種抑制活性成分的降解及7-表-多西他賽(II)的形成的化學物質。現有技術活性化合物4-乙酰氧基-2-a-苯甲酰氧基-5p-20-環氧-l,7-p-10-P-三羥基-9-氧代-紫杉-ll-烯-13a-基(2R，3S)3-叔-丁氧羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯，無水多西他賽，(I)和其三水合物是經化學半合成獲得并呈現出抗癌和抗白血病性質的紫杉烷衍生物。上述化合物對多種腫瘤和贅生物具有藥理活性。美國專利第5,504,102號(Bristol-MyersSquibb02/04/1996)描述了制備低堿度的聚氧乙烯蓖麻油(CremophorELBASF)的方法，改方法將Crem叩horEL與氧化鋁床接觸…或加入酸，特別是，諸如HC1或HN03的無機酸，以及在該溶媒中制備抗腫瘤劑的溶液的方法。在本發明的上下文中，特別地，當意指多西他賽(I)或其三水合物時，采用無機酸是無效的甚至是不利的，無機酸可引起其他不利的降解產物生成。美國專利第5,698,582號(Rhone-Poulenc-Rorer，16/12/1997)描方法制備灌注劑。該專利未考慮使用任何酸。在制備灌注劑前得到的溶液在室溫下在本發明范圍內要求要求保護的存放期內是不穩定的。法國專利第FR9408479號(Rhone-PoulencRorerS.A.)描述了4-乙酰氧基-2-a-苯甲酰氧基-5p-20-環氧-l，7-P-10-p-三羥基-9-氧代-紫杉-11-烯-1301-基(2R，3S)3-叔-丁氧羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯的三水合物的制備方法，其利用"在水和含1-3個碳原子的脂肪醇的混合物中重結晶，然后在確定溫度、壓力和濕度條件下干燥所得產物"。該專利要求保護在結晶多西他賽三水合物步驟過程中加入抗壞血酸。但該參考文獻沒有預見或建議通過加入有機酸使包含無水多西他賽(I)或其三水合物的藥物制劑具有附加的穩定性。未決專利PCT/BR/2004/000242(QuiralQuimicadoBrasil)要求保護使用存在于酸化的聚山梨酯80中的活性成分(I)的方法、產物及該產物在治療虛弱病癥中的用途。盡管上述文獻提及制備生成熱不穩定水合物的化合物，該水合物僅在冷藏情況下穩定，但在現有技術文獻中沒有預見與保存溫度和時間相關的提高的穩定性，特別是在室溫觀察到的提高的穩定性。另夕卜，在本領域中已經描述的藥物制劑中沒有提及顯著降低主要降解產物7-表-多西他賽(II)的形成。發明詳述本發明的方法及通過該方法所得產物與現有技術中所述的方法及產物相比具有優勢，因為它們證實在室溫具有優異的穩定性，并且顯著減少活性成分無水4-乙酰氧基-2-<x-苯甲酰氧基-5(3-20-環氧-1，7-0-10-|5-三羥基-9-氧代-紫杉-11-烯-1301-基(2R，3S)3-叔-丁氧羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯，(I)或其三水合物降解生成其差向異構體(II)。優于類似制劑，所得藥物組合物具有高純度。在過去的25年中，紫杉烷的化學活性和構效關系得到充分研究。綜合性綜述參見Kingston,D.G.I.7>eA5zW"/mo/.1994,"，222.;Kingston,D.G.I.RecentAdvancesintheChemistryandStructure-ActivityRelationshipsofPaclitaxel。Inrfljcur/ie必as/ciSc/e"ce(7w/7WiZ5"似,ws，Goerg,G.I.;Chen,T.T.;Ojima，I.;Vyas，D.M.，Eds.;ACSSymposiumSeries583，AmericanChemicalSociety:Washington,DC，1995，pp.203.andGueritte-Vogelin，F.;Guenard，D;Dubois,J.;Marder，R.;Thoret，S.;andPotier,P.CAe附/s,/jflwdj"/v%rawV/s,AdvancesinNaturalSciences,Vol.2，No.2,2001，pp.81-85。在此通過引用將這些出版物并入本文，因為其包含紫杉烷的化學轉化及其構效關系的相關信息。應當著重指出的是多西他賽(I)和其三水合物，以及其他紫杉烷，在不同情況下可經歷降解，其活性和/或毒性有相應的變化，有時是巨大的變化，例如，溫度、酸性和堿性溶媒、氧化劑和還原劑、光等。現有技術涉及的主要已知途徑如圖1所示。圖1:多西他賽骨架中發生主要化學轉化的位置的編號多西他賽的降解一取決于所使用的條件，在酸性媒質中或在親電試劑存在下，可觀察到D環和B環的開環和/或重排。—在堿性媒質中，可觀察到2，4和/或13位的酯基的裂解。一在堿性，中性或強酸性媒質中觀察到的主要降解途徑之一是7位羥基的差向異構化，其通過逆醛醇反應生成7-表-多西他賽(II)。多西他賽的降解導致產物活性降低或完全沒有活性。其還表現出與活性成分完全不同的藥理和毒理性質。考慮到所述藥物制劑預定用于人類受試者時，上述復雜轉化的重要性有嚴重的后果。作為實例，引用Bornique和Lemari6的文獻，Dr"gMe似6oZ/s/w"m/2)^7os/"Vm,Vol.30,No.11，pp.1149-1152，2002。該研究中，考察了多西他賽(I)和其差向異構體7-表-多西他賽(II)與重組人細胞色素P4501B1(hCYPlBl)的相互作用。多種人腫瘤含這種細胞色素，推測其負責產生腫瘤細胞對化學治療劑包括多西他賽(I)的耐藥性。通過使用7-乙氧(9-羥基-3-異吩噁唑酮)O-脫乙基酶(EROD活性)作為量度，作者觀察到在體外，多西他賽沒有被hCYPlBl代謝。但是，濃度為10pM的7-表-多西他賽(II)使hCYPlBl的活性增加了7倍多，這證實了(II)是這種酶的有力誘導物。基于上述觀察結果，本發明的作者鑒定藥物制劑或由該制劑制成的制備物中出現的7-表-多西他賽(II)是產生腫瘤細胞對活性成分，多西他賽(I)和/或其三水合物的耐藥性的主要因素，因此，減小或消除含有多西他賽(I)和/或其三水合物的藥物制劑中7-表-多西他賽(II)的存在是理想的。通過本發明，實現這一目的。盡管現有技術提及在活性成分多西他賽三水合物的重結晶過程中加入抗壞血酸，但本發明的特別創新方面在于在無水多西他賽(I)或其三水合物的藥物溶液的制備中加入至少一種弱有機酸和/或抗氧化劑是有優勢的。該添加抑制差向異構生成具有前文所述不利作用的7-表-多西他賽(II)。通過實時穩定性檢測發現，加入降解抑制劑能夠增加制成的劑型在室溫(15-30°C)貯存時的存放期，同時抑制(I)和/或其三水合物通過差向異構化生成7-表-多西他賽(II)。上述檢測結果的優點是明顯的除避免了不利的降解產物生成以外，還增加了藥物制劑的保存期并因此增加了其穩定性。研究結果如表1和2所示。采用的降解抑制劑包括但不限于檸檬酸、酒石酸和抗壞血酸或其他pKa為2.5-4.5的有機酸。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注釋1:DCTX-無水多西他賽；DCTX-3H20=;西他賽三水合物；7-表=7-表-多西他賽注釋2:采用事先用對應的酸將聚山梨酯80的pH調為3.5-4.5制備所有的溶液。然后溶解無水多西他賽(I)或其三水合物，使最終濃度為以無水物為基礎的40mg/mL。注釋3:在3o土ix:將樣品保存在干凈的n型硼硅玻璃管中。注釋4:在下列分析條件下采用HPLC測定(I)和(II)的含量柱SpherisorbRP184.6x250mm，粒徑5jim;流動相，釆用溶液A-乙腈H20(2:3v/v)，溶液B乙腈，100%進行梯度洗脫。在70分鐘內梯度開始采用100。/o溶液A，直到10。/。溶液A和90。/o溶液B。流速1.5mL/min;檢測波長227nm;環20^1，；用未校正的面積％表示數據。注釋5:用于定義藥物組合物穩定性的可接受極限是"含有至少90%標簽所示量(40mg/mL)"。根據表1和2的數據明顯看出加入至少一種具有本發明提出的特征的降解抑制劑諸如某些有機酸對所述組合物的穩定性有顯著效果并且抑制7-表-多西他賽(II)的生成。釆用酒石酸、檸檬酸和抗壞血酸得到最好效果，其允許在30士rC的溫度下貯存至少30個月，并且使7-表-多西他賽(II)的水平顯著低于不添加任何降解抑制劑的組合物。采用維他命E的試驗表明，只添加抗氧化劑作為降解抑制劑是不足以得到預期效果的。該事實結合上述觀察結果即不是所有被測試的酸都足以得到比現有技術中所描述的穩定性更好的穩定性，表明為了得到附加穩定性，必需加入具有獨特特征的一種或幾種酸。這是組合物中各成分的復雜相互作用的結果，涉及若干因素，諸如pKa，氧化還原電勢，立體位阻，親核性，溶解性和反應性。實施例1:制備加有作為降解抑制劑的酒石酸的含有在聚山梨酯80中的無水多西他賽的藥物組合物在氮氣保護下向配有螺旋氣動攪拌的燒杯中加入100mL的聚山梨酯80，然后用酒石酸酸化，將pH調為3.9。緩慢加入4.00g無水4畫乙酰氧基-2畫a畫苯甲酰氧基畫5卩-20畫環氧-l，7-卩-10-P-三羥基-9-氧代畫紫杉-ll-烯-13a-基(2R，3S)3-叔-丁氧羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯，維持攪拌直到完全溶解。將所得溶液移入加壓容器，采用0.22jun的滅菌膜在無菌環境下減壓過濾，接著使用常用方法將濾液裝入小瓶。如表1所示，在15-30。C，士1。C保存時在30個月期間，由此所制備的溶液是穩定的。實施例2:制備加有作為降解抑制劑的檸檬酸的含有在聚山梨酯80中的無水多西他賽的藥物組合物通過與實施例l相似的方法，用檸檬酸調節pH至4.1。如表l所示，在15-30。C,士1。C保存時在30個月期間，由此所制備的溶液是穩定的。實施例3:制備加有作為降解抑制劑的抗壞血酸的含有在聚山梨酯80中的無水多西他賽的藥物組合物通過與實施例1相似的方法，用抗壞血酸調節pH至3.8。如表l所示，在15-30。C，士rc保存時在3o個月期間，由此所制備的溶液是穩定的。實施例4:制備加有作為降解抑制劑的酒石酸的含有在聚山梨酯80中的多西他賽三水合物的藥物組合物在氮氣保護下向配有螺旋氣動攪拌的燒杯中加入100mL的聚山梨酯80,然后用酒石酸酸化，將pH調為3.9。緩慢加入4.27g4-乙酰氧基-2-01-苯甲酰氧基-5卩-20-環氧-1，7^-10^-三羥基-9-氧代-紫杉-11-烯-13a-基(2R，3S)3-叔-丁氧羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯三水合物，維持攪拌直到完全溶解。將所得溶液移入加壓容器，采用0.22jun的滅菌膜在無菌環境下減壓過濾，接著使用常用方法將濾液裝入小瓶。如表2所示，在15-30。C，士rC保存時在30個月期間，由此所制備的溶液是穩定的。實施例5:制備加有作為降解抑制劑的檸檬酸的含有在聚山梨酯80中的多西他賽三水合物的藥物組合物通過與實施例4相似的方法，用檸檬酸調節pH至4.1。如表2所示，在15-30'C，士1'C保存時在30個月期間，由此所制備的溶液是穩定的。實施例6:制備加有作為降解抑制劑的抗壞血酸的含有在聚山梨酯80中的多西他賽三水合物的藥物組合物通過與實施例4相似的方法，用抗壞血酸調節pH至3.8。如表2所示，在15-30'C，士rc保存時在3o個月期間，由此所制備的溶液是穩定的。所引用的實施例是為了說明，但不用于限制本發明的范圍。權利要求1.藥物組合物，它含有無水多西他賽(I)或其三水合物、聚山梨酯80和至少一種降解抑制劑，該組合物在15℃和30℃，±1℃之間的溫度下貯存時至少30個月是無菌的和穩定的。2.根據權利要求1的藥物組合物，其中所述的降解抑制劑選自pKa為2.5至4.5的有才幾酸。3.根據權利要求1的藥物組合物，其中所述的降解抑制劑選自酒石酸、檸檬酸和抗壞血酸-或它們的混合物-或也可以是這些酸與其它pKa為2.5至4.5的酸的混合物。4.根據權利要求3的藥物組合物，其中所述混合物的最終pH為3.5至.4.5。5.制備根據權利要求1的藥物組合物的方法，該藥物組合物含有多西他賽(I)或其三水合物、聚山梨酯80和至少一種降解抑制劑，該方法的特征為如下步驟(a)向聚山梨酯80中加入足以將聚山梨酯80的pH調至3.5至4.5范圍內的量的降解抑制劑；(b)加入多西他賽(I)或其三水合物，以達到10至100mg/mL聚山梨酯80(以無水物為基礎計算)的最終濃度；(c)攪拌所得混合物直到多西他賽(I)(或其三水合物)和降解抑制劑完全溶解；(d)通過滅菌膜過濾所得溶液；(e)將所述溶液灌裝到無菌容器中。6.根據權利要求5的方法，其中所述的降解抑制劑選自酒石酸、檸檬酸或抗壞血酸，并且以無水物為基礎多西他賽(I)的濃度是40mg/mL。全文摘要含聚山梨酯80，無水多西他賽(I)或其三水合物和pKa為2.5-4.5作為降解抑制劑的有機酸的藥物組合物。由此獲得的組合物在室溫(對應于15-30℃，±1℃)保存時直到30個月是無菌和穩定的，并且含有低水平的7-表-多西他賽(II)。文檔編號A61K31/337GK101415416SQ200680054069公開日2009年4月22日申請日期2006年2月9日優先權日2006年1月30日發明者A·瑪蘭杜巴,A·瑪查多,E·古爾瑪勒斯,L·瑪查多,M·圣地亞哥朱尼奧,M·賽爾瓦申請人:基拉爾化學巴西私人控股公司;生物有機有限公司