專利名稱：：用于治療增殖性疾病的Roscovitine和HDAC抑制劑的組合的制作方法用于治療增殖性疾病的Roscovitine和HDAC抑制劑的組合本發明涉及適合用于治療增殖性疾病的藥物組合。特別是本發明涉及用于治療癌癥的組合，優選非d、細胞肺癌(NSCLC)。
背景技術：
：細胞周期蛋白依賴性激酶(CDKs)是絲氨酸/蘇氨酸激酶，在細胞周期中發揮重要的調節作用。CDKs通過對DNA復制和細胞分裂有關的各種蛋白的磷酸化調節細胞周期進程，所述蛋白包括轉錄因子和腫瘤抑制蛋白(Senderowicz，AM.Small-moleculecyclin-dependentkinasemodulators,Oncogene,2003;22:6609-6620)。通過參與RNA多聚酶II(polII)最夫亞基的羧基末端結構域(CTD)的磷酸化，某些CDKs也在RNA合成的調節中發揮作用。因此，CDKs已成為受關注的治療靶點并不令人感到意外。因此，許多通過竟爭ATP結合位點而干擾CDKs活性的新藥物正在進行臨床試驗測試(FischerPMandGianella-BorradoriA,CDKinhibitorsinclinicaldevelopmentforthetreatmentofcancer,ExpertOpinInvestigDrugs.2003;12:955-970)。現有技術描述了幾種化合物，其可通過抑制細胞周期蛋白依賴性激酶而調節細胞周期。這些化合物包括丁內酯、夫拉平度(flavopiridol)和2-(2-羥基乙基氨基)-6-芐基氨基-9-曱基嘌呤(奧羅莫星)。已表明奧羅莫星和相關化合物是cdc2的抑制劑。Cdc2(也稱為cdkl)是細胞周期蛋白依賴性激酶家族的催化亞基，其與細胞周期調節相關。這些激酶包括至少兩個亞基，亦即催化亞基(其中cdc2為原型)和調節亞基(細胞周期蛋白)。Cdks通過與細胞周期蛋白家族成員的短暫締合調節，該細胞周期蛋白家族成員為細胞周期蛋白A(cdc2、CDK2)、細胞周期蛋白Bl-B3(cdc2)、細胞周期蛋白C(CDK8)、細胞周期蛋白Dl-D3(CDK2-CDK4-CDK5-CDK6)、細胞周期蛋白E(CDK2)、細胞周期蛋白H(CDK7)。這些復合物中的每一種均涉及于細胞周期的特定期。CDK活性通過翻譯后修飾、與其他蛋白的短暫締合和它們的細胞內定位的修飾來調節。CDK調節子包括激活蛋白(細胞周期蛋白、CDK7/細胞周期蛋白H、cdc25磷酸酶)、p9.sup.CKS和pl5.sup.CDK-BP亞基，和抑制蛋白(pl6.sup.INK4A、pl5.sup.INK4B、p21.sup.Cipl、pl8.p27.sup.Kipl)。現在，文獻中大量支持CDKs和它們的調節蛋白在人類腫瘤的發展中發揮重要作用的假說。因此，在許多腫瘤中，已經觀察到細胞周期蛋白依賴性激酶的暫時異常表達和蛋白抑制劑的主要異常(突變、缺失)。已經表明Roscovitine是細胞周期蛋白依賴性激酶尤其是對CDK2的強效抑制劑。CDK抑制劑被認為阻斷了細胞周期Gl/S和G2/M期的細胞途徑。最近出現了單純的roscovitine的R-對映異構體，seliciclib(R-Roscovitine;CYC202)，其為多種鐘瘤細胞中有效的凋亡誘導劑(McClueSJ，BlakeD,ClarkeR,等人，W加andv/voantitumorpropertiesofthecyclindependentkinaseinhibitorCYC202(R-Roscovitine),IntJCancer.2002;102:463-468)，并且已經在進行治療乳腺癌和非小細胞肺癌的臨床試驗(FischerPMandGianella-BorradoriA,CDKinhibitorsinclinicaldevelopmentforthetreatmentofcancer,ExpertOpinInvestigDrugs,2003;12:955-970》Roscovitine也表現為成視網膜細胞瘤磷酸化的抑制劑，因此提示對Rb陽性肺瘤作用更強。眾所周知，本領域中經常組合給藥活性藥劑以使治療方案最佳。例如，CDK抑制劑與第二種化療劑組合的用途在WO03/077999、WO03/082337、WO2004/041262、WO2004/041267、WO2004/041268、WO2004/041308、WO2004/110455和WO2005/053699(均屬于CyclacelLimited)中描述。本發明尋求提供已知藥物試劑的新組合，所述組合尤其適用于治療增殖性疾病，特別是癌癥。更具體地說，本發明優選的方面重點是在非小細胞肺癌(NSCLC)治療中有用的組合。
發明內容本發明的第一方面涉及組合，其包含roscovitine或其可藥用鹽，和組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制劑，其中該抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥將酸(suberoylanilidehydroxamicacid，SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(trichostatinA,TSA)。雖然roscovitine和上述HDAC抑制劑在本領域中已經用作單個治療試劑，但并沒有建議本發明中所要求的具體組合會在癌癥治療中有效。而且，本領域中并沒有建議具體要求的組合在治療NSCLC中有用，已知所述NSCLC是特別難治療的。第二方面涉及藥物組合物，其包含本發明的組合和可藥用載體、稀釋劑或賦形劑。第三方面涉及本發明的組合在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途。第四方面涉及藥物制品(pharmaceuticalproduct),其包含roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA),作為在治療中同時、依次或分別使用的組合制劑。第五方面涉及一種治療增殖性疾病的方法，所述方法包含同時、依次或分別給藥roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。第六方面涉及roscovitine或其可藥用鹽在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中所述治療包含同時、依次或分別給藥HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。第七方面涉及HDAC抑制劑在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)，其中所述治療包含同時、依次或分別給藥roscovitine或其可藥用鹽。第八方面涉及(i)roscovitine或其可藥用鹽，和(ii)HDAC抑制劑在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。第九方面涉及HDAC抑制劑，在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肝酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)，其中所述藥物用于與roscovitine或其可藥用鹽的組合治療。第十方面涉及HDAC抑制劑在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥將酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)，其中所述藥物用于以roscovitine或其可藥用鹽的預處理治療中。第十一方面涉及roscovitine或其可藥用鹽在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中所述藥物用于與HDAC抑制劑的組合治療，所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛褲素A(TSA)。第十二方面涉及roscovitine或其可藥用鹽在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中所述藥物用于以HDAC抑制劑的預處理治療中，所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。第十三方面涉及roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑在制備用于治療非小細胞肺癌(NSCLC)的藥物中的用途。發明詳述下面闡述的優選實施方案適用于本發明的所有上述方面。Roscovitine或2-[(l-乙基-2-羥基乙基)氨基]-6-千基氨基-9-異丙基。票呤，也稱為2-(l-D，L-羥基曱基丙基氨基)-6-千基氨基-9-異丙基-噤呤。本文所用的術語"roscovitine"包括拆分的R和S對映異構體，其混合物，和其外消旋體。本文所用的術語"seliciclib，，指roscovitine的R對映異構體，即2-(l-R-羥基甲基丙基氨基)-6-千基氨基-9-異丙基嘌呤，該結構如下所示。對于本發明的所有實施方案，roscovitine優選為R-對映異構體，即2-(l-R-羥基曱基丙基氨基)-6-千基氨基-9-異丙基-嘌呤，下文中稱為"seliciclib，，或"CYC202，，或"R-roscovitine，，。Roscovitine的體夕卜活性如下<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>如上所述，本發明要求的組合包含roscovitine和組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制劑。組蛋白是小的帶正電的蛋白，其富含堿性氨基酸(在生理pH下帶正電)。有五種主要的組蛋白，即Hl、H2A、H2B、H3和H4，它們具有高度的結構相似性。在真細菌(例如，E.coli)沒有發現組蛋白，雖然這些細菌的DNA與其它推測具有組蛋白具有相似功能(在細菌細胞中包裹DNA)的蛋白相關。然而，古細菌含有包裹它們DNA的組蛋白，其結構與真核生物染色體相似(GM.Cooper,"TheCell-AMolecularApproach",2ndEdition,Chapter11)。大多數組蛋白在細胞周期的S期合成，且新合成的組蛋白快速進入核中以與DNA結合。在合成的幾分鐘內，新DNA與核小體結構中的組蛋白結合。組蛋白的氨基-末端區域可以通過翻譯后加入曱基(在賴氨酸和精氨酸基團上)、乙酰基(在賴氨酸基團上)，或磷酸基團(在絲氨酸基團上)而被酶修飾(Spencer等人，Gene,1999,240(1),1)。這導致組蛋白網狀正電結構減少，隨后弱化了組蛋白與DNA的結合。組蛋白脫乙酰基化劑(HDACs)以及抑制HDACs的化合物的研究已經闡明了一些疾病狀態作用的機理。例如，在尋求新的抗癡疾化合物中，天然存在的apicidin通過過乙酰化組蛋白表現出體外抑制惡性疾原蟲(尸/a/c^7nw7)的生長(K.T.Andrewsetal,Int.J.Parasitol,,2000,30(6)，761)。因此，認為HDACs與許多不同的疾病相關，所述疾病包括增殖性疾病，如白血病(Lin等人，Nature,1998,391,811)，黑素瘤/鱗狀細胞癌(Gillenwater等人，Int.J.Cancer,1998,75217;Saunders等人，CancerRes.,1999，59,399)，乳腺癌，前列腺癌，膀胱癌(Gelmetti等人，Mol.CellBiol.,1998，18，7185;Wang等人，PNAS,1998，951，10860)和結腸癌(C.A.Hassig,等人，1997，Chem.Biol"4，783;S.Y.Archer等人，PNAS,1998,95(12)，6791)。US2005/0004007公開了一種促進癌細胞調亡的方法，其包括給藥細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑和誘導細胞分化的試劑。給出了幾種類型的誘導細胞分化的試劑，即組蛋白脫乙酰酶抑制劑、蛋白激酶C、類視黃醇和維生素D3。然而，包含roscovitine和HDAC抑制劑的組合沒有具體公開，且沒有公開該組合在治療實體瘤如NSCLC中的用途。相反，US2005/0004007的實例限制于夫拉平度與所選的HDAC抑制劑的組合對白血病細胞抹的測試。因此，至今，沒有公開本發明申請中要求的具體組合，更不用說這些組合能夠用于治療肺癌如NSCLC的任何建議。本發明的一個優選實施方案中，所述HDAC抑制劑為丁酸鈉。丁酸鈉通過發酵大腸腔中的膳食纖維形成(G.J.Kelloff等人，CancerChemoprevention:Volume1，page665)。已經發現在脊髓性肌萎縮淋巴細胞抹中，丁酸鈉增加含外顯子7的SMN蛋白從SMV2基因的高表達。提出了丁酸鈉通過乙酰化核小體DNA，和控制SMV2基因的外顯子7的其它剪接的其它因素(J,G.Chang等人，PNAS,2001,98(17),9809)起作用。在培養的紅白血病細胞(A.Leder等人，Cell,1975,5(3)，319)和PC12嗜鉻細胞瘤細胞(J.C.Byrdetal,BrainRes"1987,428(1),151)中，丁酸鈉已經表現出誘導分化，同時增加人和其它動物中胎兒血紅蛋白基因的表達(S.P.Perrine等人，Adv.Exp.Med.Biol"1989，271,177和S.P,Perrine等人，PNAS,1988，85(22),8540)。在另一個優選實施方案中，所述HDAC抑制劑為丁酸鈉的前藥。在另一個尤其優選實施方案中，所述前藥為丁酸(新戊酰基氧基曱基)酯。丁酸(新戊酰基氧基曱基)酉旨(？^^^乂@)為丁酸的酰基氧基烷基酯前藥，且表現出誘導在白血病和神經母細胞瘤細胞調亡的固有(instrinsic)途徑(S.Mei等人,InternationalJournalofOncology,2004,25,1509)。在本發明的另一個優選實施方案中，所述HDAC抑制劑為制毛癬素A(TSA)。抗真菌抗生素制毛褲素首先從吸水鏈霉菌(5V;to/^cas/^gr(wcop/cM力菌林的代謝產物中分離(N.Tsuji等人，J.Antibiot.，1976，29,1)。制毛癬素A(TSA)為HDAC的特異性的和可逆的抑制劑。在納摩爾級濃度下，TSA引起體內高度乙酰化的組蛋白的聚集，并在體外強烈抑制部分純化的組蛋白脫乙酰酶的活性(M.Yoshida等人，J.Biol.Chem.,1990，265(28),17174)。在人JerkatT細胞中，TSA在Gl阻止細胞周期的進展，并以70nM的ICs。抑制HD1脫乙酰酶的活性(Y.Hoshikawa等人，Exp.CellRes.,1994，214，189)。TSA也可同時改變基因的表達。Mishra等人證明TSA明顯負調節和/丄-川，并正調節/FiV-y基因在系統性紅斑狼瘡(SLE)T細胞中的表達。SLE為自身免疫性疾病，其特征為抗體產生失調，導致不可逆的免疫復合物介導的終末器官的衰竭(N.Mishra等人，PNAS，2001，98(5),2628)。在本發明的另一個優選實施方案中，所述HDAC抑制劑為N-辛二酰苯胺異羥將酸(suberoylanilidehyroxamicacid,SAHA)。N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)為TSA的合成衍生物，其在微摩爾級濃度抑制HDAC的活性。在美國，SAHA正在進行II期臨床實驗，所述實驗針對其在治療復發性或耐藥性晚期何杰金氏淋巴瘤中的用途。SAHA的抗增殖性作用已有記載。WO2005/097747(AtonPharma)公開了基于異羥肟的前藥的HDAC抑制劑如SAHA在治療腫瘤、硫氧還蛋白(TRX)-介導的疾病，和預防和/或治療CNS疾病中的用途。US2004/4127525(Bacopoulos等人)公開了SAHA在治療淋巴瘤，如彌漫性大B細胞淋巴瘤中的用途。WO2005/039498和WO2005/018578(均屬于AtonPharma)進一步公開了治療腫瘤的方法，其中WO2005/039498涉及白血病，且WO2005/018578涉及間皮瘤或淋巴瘤。本發明的一個優選實施方案中，所述HDAC抑制劑為丙戊酸鈉(或也稱為2-丙基戊酸納)。丙戊酸鈉為丙戊酸的鈉鹽，且為NICE-批準的用于治療癲癇的抗驚厥藥。最近，研究表明丙戊酸鈉用于治療晚期實體瘤惡性肺瘤和癌癥相關的神經痛的用途。已經開始進行涉及丙戊酸和UCN-01的組合研究。在這點上，雖然丙戊酸本身僅具有弱抗癌作用，但是研究表明當用于組合時其具有很高的對抗癌細胞的作用。本發明的另一方面涉及藥物組合物，其包含roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥將酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。另一方面涉及包含本發明組合的藥物制品，其用于治療增殖性疾病，其中所述疾病優選為癌癥，且更優選為NSCLC。本發明的另一方面涉及藥物制品，其包含roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)，作為在治療中同時、依次或分別使用的組合制劑。另一方面涉及治療增殖性疾病的方法，所述方法包含同時、依次或分別給藥本發明的組合。本文所用的"同時"是指兩種藥物同時給藥，而所用的術語"組合"指如果它們不是同時給藥，則在時限內"依次"給藥，從而使得它們均適合于在同一時限內起治療作用。因此，"依次，，給藥可允許在給藥一種藥物后5分鐘內、10分鐘內或大約幾小時后給藥另一種藥物，條件是它們均同時以治療量存在。給藥成分間的延時依成分的確切性質、它們之間的相互作用和它們各自的半衰期而改變。與"組合"或"依次"相比，本文所用的"分別"是指在給藥一種藥物和另一種藥物之間的間隔是明顯的，即當給藥第二種藥物時，第一次給藥的藥物可以不再以治療有效量存在于血流中。在一個優選實施方案中，在給藥roscovitine或其可藥用鹽之前，依次或分別給藥HDAC抑制劑。在另一個優選實施方案中，在給藥HDAC抑制劑之前，依次或分別給藥roscovitine或其可藥用鹽。在另一個優選實施方案中，HDAC抑制劑，和roscovitine或其可藥用鹽為同時給藥。當HDAC抑制劑為丁酸鈉或其前藥或TSA時，可同時或分別或依次給藥HDAC抑制劑和roscovitine，而不考慮給藥順序。當HDAC抑制劑為SAHA時，優選在給藥roscovitine之前，給藥SAHA，即優選患者用SAHA預治療。當HDAC抑制劑為丙戊酸鈉時，優選分別或依次給藥roscovitine和丙戊酸鈉，而不考慮給藥順序。在一個優選實施方案中，roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，對于單個成分各自以治療有效量給藥。在另一個優選實施方案中，roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，對于單個成分各自以亞治療量給藥。術語"亞治療量(sub-therapeuticamount)，，指低于單獨用roscovitine或單獨用HDAC抑制劑治療產生治療效果一般所需的量。另一方面涉及本發明的組合在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途。本文所用的術語"藥物制備"包括一種或多種上述成分直接作為藥物或這類藥物制備的任意階段中的用途。另一方面涉及roscovitine或其可藥用鹽在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中所述治療包含向患者同時、依次或分別給藥HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異輕肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。另一方面涉及HDAC抑制劑在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)，其中所述藥物用于與roscovitine或其可藥用鹽的組合治療。或者，所述治療可以為預處理治療。另一方面涉及roscovitine或其可藥用鹽在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中所述藥物用于與HDAC抑制劑的組合治療，所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。或者，所述治療可以為預處理治療。本文所用的術語"組合治療(combinationtherapy)"是指如果不同時給藥HDAC抑制劑和roscovitine，則在時限內依次給藥，以便在同一時限內它們均可起到治療作用。本文所用的術語"預處理治療(pretreatmenttherapy)"或"預治療"指下述給藥方案，其中給藥一種藥物后分別或依次給藥第二種藥物。優選地，給藥第一種藥物后至少2小時給藥第二種藥物。更優選地，在給藥第一種藥物后至少4小時后給藥第二種藥物，或更優選地至少6或8小時后給藥第二種藥物。甚至更優選地，在給藥第一種藥物后，至少12小時后給藥第二種藥物，或更優選地至少18或24小時后給藥第二種藥物。優選地，roscovitine和HDAC抑制劑以協同方式相互作用。本文所用的術語"協同"是指roscovitine和HDAC抑制劑在組合使用時產生比由兩種組分的單獨效應相加預料到的效應更大的效應。有利地，協同相互作用可允許每種組分以較低劑量給藥于患者，從而降低化療的毒性，同時產生和/或保持相同的療效。因此，在尤其優選的實施方案中，可以亞治療量給藥每種組分。在另一個優選實施方案中，roscovitine和HDAC抑制劑以一種減輕或消除在單獨治療中使用單個成分相關的或在已知組合中使用它們時相關的不良副作用的方式相互作用。對于所用上述實施方案，優選HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥將酸(SAHA)和制毛癬素A(TSA)。增殖性疾病本文所用的術語"增殖性疾病"廣義上包括任何需要控制細胞周期的疾病，例如心血管疾病如再狹窄和心臟病、自身免疫性疾病如腎小球腎炎和類風濕性關節炎、皮膚病如牛皮癬、抗炎性、抗真菌、抗寄生蟲疾病如瘧疾、肺氣腫和脫發病。在這些疾病中，本發明的化合物可按照需要在所需的細胞內誘導凋亡或保持停滯。對于上述所有方面和實施方案，優選所述增殖性疾病位癌癥。非小細胞癌癥在本發明的一個尤其優選的實施方案中，所述增殖性疾病為肺癌，更優選為非小細胞肺癌(NSCLC)。肺癌(支氣管癌)可分為兩種較寬的類別，即小細胞肺癌(SCLC)和非小細胞肺癌(NSCLC)。兩種類型的癌癥之間是根據在顯微鏡下所觀察到的腫瘤細胞的形態來區別的。SCLC占診斷為肺癌的20%,且其特征為大部分被核填充的的小細胞(因此而得名)。有時，也稱為"燕麥細胞(oatcell)"癌。SCLC為最具攻擊性的癌癥，其迅速轉移至身體的其它部分。診斷為SCLC通常發生在癌癥已經遍布全身后。通常，SCLC通常為吸煙產生的。NSCLC可以細分為肺癌相關的組，其包括表皮樣或磷狀細胞癌、腺癌和大細力包癌。磷狀細胞肺癌占大約全部肺癌病例的30%,且從肺和支氣管的內層中的儲備細胞(其替代受損的上皮細胞)發展而來。其結果是，癌癥通常源發于胸的中部。磷狀細胞肺癌通常生長較慢，且從受限腫瘤(confinedtumour)發展成侵入性癌癥(invasivecancer)可能要幾年時間。在10-20%的病例中，癌在肺中形成空腔。轉移時，其通常蔓延至骨、肝、腎上腺、小腸和腦。腺癌為最常見的肺癌，其構成總肺癌病例的30-40%。肺癌在肺的外部發展，且從產生粘液的細胞發展而來。這種癌癥的病程變化較大，但通常進行緩慢，且病人幾乎不出現癥狀或沒有癥狀。然而，在一些病例中，腺癌擴張極快且迅速致死。在50%的病例中，當腺癌轉移時，其僅蔓延至腦。腺癌蔓延的其它位置包括肝、腎上腺和骨。大細胞癌的發病率小于腺癌或磷狀細胞癌，且數量為肺癌病例的10-20%。這種癌癥由大號細胞組成，該細胞自然退行發育且通常在支氣管中出現。大細胞癌在肺的外周發育，且可蔓延至多處(plura)。現在，可以通過手術、；改療或化療治療肺癌。化療可以單獨給藥或與其它治療選擇組合。常用的NSCLC藥物和方案包括鹽酸伊立替康和山梨醇注射劑(camptosar)(伊立替康；CPT-11)、喜樹堿、卡柏(鉑爾定)、順鉑(platinol)、表柔比星、吉西他濱、諾維本(長春瑞濱)、奧沙利鉑、泰素(紫杉醇)和泰索帝(多西他賽)(NSCLCTreatment—Chemotherapy,LungCancerOnline)。然而，化療并不能治愈。這種治療的其它缺點包括毒性、對正常組織的旁路損傷(bystanderdamage)和抗藥性(W.Wang等人，CancerSci.,2005，96(10):706)。而且，研究表明使用一些已知的治療，例如長春瑞濱，幾乎沒有存有的益處(M.A.Socinski等人，Clin.Adv.Hematol.Oncol"2003，1(1),33)。甚至新穎的活性藥物，如曲沙他濱以10mg/n^劑量靜脈給藥(每3周一次，30分鐘)幾乎對NSCLC沒有活性(S.F.Dent等人，Lung,2005，183(4)，265)。在歐洲廣泛使用吉西他濱/順柏的組合治療NSCLC。然而，順鉑被認為具有一定的缺點，即在病人中出現的明顯的非血液毒性(耳毒性和腎毒性)，伴隨由嘔吐(RZatloukal等人，LungCancer,2002,38，S33)。對于診斷為肺癌的患者的結果是較差的-對于所有被治療的病例中存活10年的比例僅為大約8%-因此需要繼續開發有效的治療。藥物組合物在一個尤其優選的實施方案中，本發明的藥物制品為藥物組合物的形式，其包含可藥用載體、稀釋劑或賦形劑。盡管本發明的化合物(包括它們的可藥用鹽、酯和可藥用溶劑合物)可以單獨給藥，但它們通常與藥物載體、賦形劑或稀釋劑混合給藥，尤其是用于人類治療時。藥物組合物可用于人類或動物，在人用藥和獸用藥中使用。這些本文中描述的用于各種不同形式的藥物組合物的適合賦形劑的實例可見于"HandbookofPharmaceuticalExcipients"，第2版，(1994),AWade和PJWeller編。治療用的可接受的載體或稀釋劑是藥學領域公知的，且描述于例如Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCo.(A.R.Gennaro編，1985)。適合的載體的實例包括乳糖、淀粉、葡萄糖、曱基纖維素、硬脂酸鎂、甘露醇、山梨糖醇等。適合的稀釋劑的實例包括乙醇、甘油和水。藥學載體、賦形劑或稀釋劑的選擇可以根據計劃的給藥途徑和標準的藥學應用。所述藥物組合物可包含(除載體、賦形劑或稀釋劑外)任何合適的粘合劑、潤滑劑、助懸劑、包衣劑、助溶劑。適合的粘合劑的實例包括淀粉、明膠、天然糖(如葡萄糖、無水乳糖、自由流動的乳糖、P-乳糖)、玉米增甜劑、天然和合成的膠(如阿拉伯膠、黃蓍膠或海藻酸鈉)、羧曱基纖維素和聚乙二醇。合適的潤滑劑的實例包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯曱酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。藥物組合物中可以提供防腐劑、穩定劑、染料和甚至芳香劑。防腐劑的實例包括苯曱酸鈉、山梨酸和對羥基苯曱酸酯。也可以使用抗氧化劑和助懸劑。鹽/酯本發明的試劑可以為鹽或酯，尤其是可藥用鹽或酯。本發明的試劑的可藥用鹽包括其適合的酸加成鹽或堿加成鹽。適合的藥學鹽的綜述可見于Berge等人，JPharmSci,66,1-19(1977)。鹽為與例如以下酸形成的鹽強無機酸，如礦物酸，如硫酸、磷酸或氫囟酸；強有機羧酸，如未取代或取代(如被卣代)的1至4個碳原子的鏈烷羧酸，例如乙酸；飽和或不飽和的二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二曱酸或四鄰苯二曱酸(tetraphthalic);羥基羧酸，例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯曱酸；或有機磺酸，如未取代或取代(如被卣代)的(d-C4)烷基磺酸或芳基磺酸，如曱磺酸或對曱苯磺酸。取決于被酯化的官能團，使用有機酸或醇/氫氧化物形成酯。有機酸包括羧酸，如未取代或取代(如被卣代)的1至12個碳原子的鏈烷羧酸，例如乙酸；飽和或不飽和的二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二曱酸或四鄰苯二曱酸；羥基羧酸，例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯曱酸；或與有機磺酸，如未取代或取代(如被卣代)的(CrQ)烷基磺酸或芳基磺酸，如曱磺酸或對曱苯磺酸。合適的氫氧化物包括無機氫氧化物，如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鉤、氫氧化鋁。醇包括未取代或取代(如被卣代)的1至12個碳原子的鏈烷醇。對映異構體/互變異構體本發明還適當地包括試劑的全部對映異構體和互變異構體。本領域的技術人員能認識到具有光學性質(一個或多個手性碳原子)或互變異構特征的化合物。可通過本領域中已知的方法分離/制備相應的對映異構體和/或互變異構體。立體和幾何異構體本發明的一些藥劑可以立體異構體和/或幾何異構體的形式存在，例如它們可具有一個或多個不對稱和/或幾何中心，并因此可以兩種或多種立體異構和/或幾何形式存在。本發明包括這些抑制劑試劑所有的單獨立體異構體和幾何異構體及它們的混合物的使用。權利要求中使用的術語包括這些形式，只要所述形式保留適當的功能活性(但不必到相同程度)。本發明還包括所述試劑或其可藥用鹽的所有合適的同位素變體。本發明的試劑或其可藥用鹽的同位素變體定義為其中至少一個原子被具有相同原子序數但原子質量與自然界中通常發現的原子質量不同的原子取代的物質。可被摻入到所述試劑和其可藥用鹽的同位素的例子包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分別如2H、3H、13C、14C、15N、170、l80、31P、32P、35<S、18F和36C1。試劑和其可藥用鹽的一些同位素變體，例如結合放射性同位素如"H或14C的那些化合物，在藥物和/或底物組織分布研究中是有用的。含氚的即31€和碳-14即"C同位素因其容易制備和可檢測性而特別優選。此外，用同位素如氘即2H的取代可因較大的代謝穩定性而提供特定的治療益處，例如體內半衰期增加或劑量要求降低，并因此可優選用于一些情況中。可藥用鹽的同位素變體。溶劑合物本發明也包括本發明試劑的溶劑合物形式。權利要求書中所用的術語包括這些形式。多晶型本發明還涉及各種晶型、多晶型和無水/水合形式的本發明的藥劑。眾所周知，在藥物工業'方法和或分離形式來分離得到化合物的任意這類形式，前藥本發明還包括前體藥物形式的本發明的藥劑。這種前體藥物通常為一個或多個適當基團已被修飾以使在對人或哺乳動物對象給藥后所述的修飾可被逆轉的化合物。雖然為了實現體內逆轉可與這種前體藥物一起給藥第二種藥劑，但通常通過在這類對象中天然存在的酶實現這種逆轉。這類修飾的例子包括酯(例如上述那些中的任一種)，其中可通過酯酶等進行逆轉。其它這類系統為本領域中那些技術人員所熟知。給藥本發明的藥物組合物可適合于口服、直腸、陰道、胃腸外、肌內、腹膜內、動脈內、鞘內、支氣管內、皮下、真皮內、靜脈內、鼻、含服或舌下的途徑給藥。對于口服給藥，尤其可用的是壓縮片劑、丸劑、片劑、凝膠劑(gellules)、滴劑和膠嚢。優選地，每劑量的這些組合物含有1至2000mg，且更優選50-1000mg的活性成分。其它給藥形式包括溶液或乳液，它們可經靜脈內、動脈內、鞘內、皮下、皮內、腹膜內或肌內注射給藥，并由無菌或可滅菌溶液制備。本發明的藥物組合物還可為栓劑、陰道栓劑、混懸劑、乳液、洗液、軟膏、乳膏劑、凝膠、噴霧劑、溶液或樸粉(dustingpoeder)的形式。經皮給藥的替代方式是利用皮膚貼片。例如，可將有效成分摻入到由聚乙二醇含水乳液或液體石蠟組成的乳膏劑內。還可以1-10重量％的濃度將有效成分摻入到由白蠟或白色軟石蠟基質與所需要的穩定劑和防腐劑共同組成的軟膏內。可注射形式每劑可包含10-1000mg,優選10-500mg的活性成分。組合物可被配制成單元劑型，即包含單元劑量或單元劑量的多重單位或亞單位的形式的離散部分。在一尤其優選的實施方案中，靜脈內給藥所述本發明的組合或藥物組合物。劑量本領域的普通技術人員不用額外試驗就可容易地確定對患者給藥的本發明的組合物的適宜劑量。通常，醫師會確定對個體患者最適合的實際劑量，并且根據各種因素進行調整，包括使用的具體化合物的活性、化合物的代謝穩定性和作用長短、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥方式和時間、排泄速度、藥物組合、特定病癥的嚴重程度和個體正接受的治療。本文公開的劑量為一般情況的示例。當然也可有有益的較高或較低劑量范圍個別情況，這都在本發明的范圍內。根據需要，給藥的試劑的劑量可為0.1-30mg/kg體重，如2-20mg/kg，更優選0.1-1mg/kg體重。指導性地，按照醫師指導，HDAC抑制劑通常以描述于上述相關文獻中的劑量給藥。Pivanex通常以每天約2.34g/m2給藥。Pivanex優選靜脈內給藥。N-辛二酰苯胺異羥月虧酸(SAHA)通常以每天約100-600mg給藥。N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)優選口服給藥。HDAC抑制劑的總日劑量可以作為單個劑量給藥，或以分散劑量優選每天給藥2、3或4次給藥。Roscovitine通常以約0.05至約5g/天給藥，優選為約0.4至約3g/天。Roscovitine優選以片劑或膠嚢口服給藥。roscovitine的總日劑量可以作為單個劑量給藥，或以分散劑量優選每天給藥2、3或4次給藥。在一個優選實施方案中，roscovitine口服或靜脈內給藥，劑量為0.4至3g/天，且HDAC抑制劑以最合適的方式以上述適宜劑量給藥。優選地，在給藥roscovitine之前至少2小時，給藥HDAC抑制劑。更優選地，給藥roscovitine之前至少4小時，或更優選至少6或8小時，給藥HDAC抑制劑。甚至更優選，在給藥roscovitine之前至少12小時，或更優選至少18或24小時，給藥HDAC抑制劑。在另一個優選實施方案中，在給藥roscovitine之后至少2小時，給藥HDAC抑制劑。更優選地，在給藥roscovitine之后至少4小時，或更優選至少6或8小時，給藥HDAC抑制劑。甚至更優選，在給藥roscovitine之后至少12小時，或更優選至少18或24小時，給藥HDAC抑制劑。i式劑盒(kitofparts)本發明的另一方面涉及試劑盒，其包含(i)Roscovitine或其可藥用鹽，任選與可藥用稀釋劑、賦形劑或載體混合；和(ii)HDAC抑制劑，其選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥將酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)，任選與可藥用稀釋劑、賦形劑或載體混合。優選地，roscovitine和HDAC抑制劑各自為單位劑量形式。優選地，試劑盒包含許多單位劑量形式的每種成分，即上述成分(i)和(ii)。任選地，試劑盒還可包含適應特定給藥方案的工具，例如說明書，指導何時、如^f可和以多少頻率^f吏用單位劑型的每種成分。通過實施例并結合以下附圖進一步描述本發明，其中圖1表示seliciclib和丁酸鈉的同時處理導致在A549中細胞凋亡的協同增加，其通過處理72小時后亞-Gl期細胞碎片的增加來測定。圖2表示seliciclib和丁酸鈉對H460細胞的同時處理導致處理72小時后凋亡的協同增加，其通過錨定蛋白染色來測定。圖3表示對于seliciclib/丁酸鈉組合，在IC50濃度下凋亡的增加，其通過細胞角蛋白18(M30ELISA)胱冬酶(caspases)酶切和PARP酶切來測定。而且，圖3也表示在Mcll水平下協同的下降，這可能與抗凋亡蛋白的損失有關，從而加速細胞凋亡。圖4更詳細地表示對于seliciclib/丁酸鈉組合的凋亡的分子途徑。Mcll和Bcl2(均為抗凋亡蛋白質)的損失加速細胞的凋亡。XIAP和存活蛋白均為凋亡過程的抑制劑，因此這些蛋白的損失又加速了細胞凋亡。由于XIAP和Mcl1中的下降是協同的，因此這種作用可以解釋如PARP的出現表現出來的凋亡的協同誘導。組蛋白蛋白質印跡表明HDAC抑制劑增加乙酰化組蛋白的量(因為脫乙酰化作用被抑制)。圖5表示對于seliciclib/丁酸鈉組合，在IC50下，細胞事件的時程。在后面的時間點，可以看到胱冬酶3和9的協同作用(表明凋亡被誘導)。圖6表示用DMSO(對照)、丙戊酸鈉、seliciclib和丙戊酸鈉/seliciclib組合處理后細胞周期的分布。用所示藥物處理H460細胞一段時間后，在流式細胞儀上進行PI分析。結果為兩次重復實驗樣品的平均值。實施例方法R-Roscovitine根據EP0874847B(CNRS)公開的方法制備R-Roscovitine。HDAC抑制劑丁酸鈉和丙戊酸鈉來自Sigma;TSA來自AGScientific,Inc.;SAHA來自TorontoResearchChemicals,Inc.。細胞培養實驗在96-孔板中進行，對于A549細胞抹以2000/孔的密度接種，對于H460以3000/孔的密度接種。使用Alamarblue實驗，測定處理24小時和72小時后的IC50值，其中對于丁酸鈉在每個細胞抹中檢測，對于SAHA、丙戊酸鈉和TSA在H460細胞中檢測。然后使用三種不同的處理方案對每種HDAC抑制劑與seliciclib的組合進行檢測，所述三種方案為同時處理，seliciclib預處理然后HDAC抑制劑處理，和HDAC抑制劑預處理然后seliciclib處理。Calcusyn藥物組合方案對于同時處理，在鋪完細胞24小時后，加入1.5-倍連續稀釋的seliciclib、HDAC抑制劑，或同時加入兩種藥物，然后在37。C放置72小時。對所選定的藥物的濃度進行選擇使得其覆蓋(span)所檢測的藥物的IC5Q值。在預處理方案中，在鋪好細胞2小時后加入第一種藥物，然后放置24小時。抽吸培養基，用含有第二種藥物的新鮮培養基替換，然后培養72小時。對于兩個單個依次處理的對照來說，用培養基替換其中一種藥物處理。藥物處理后，通過將細胞在含有10%alamarblue(Roche,Lewes,EastSussex,U.K.)的培養基中培養1小時并在544-595nm處讀取吸光度來估算每孔中的細胞數。使用商業軟件包Calcusyn分析藥物相互作用，所述軟件包基于Chou和Talalay的半數有效(medianeffect)模型(Chou,T.C.&Talalay,P.(1984)Adv.EnzymeRegul.22，27-55.Quantatativeanalysisofdose-effectrelationships:thecombinedeffectsofmultipledrugsorenzymeinhibitors)。組合指數(combinationindex,C丄)為1表示具有相加的藥物相互作用，而C丄大于1表示拮抗作用，且分數小于l表示協同作用。蛋白質印跡分析蛋白裂解物產生于10cm板，該板中在含有10%FCS的培養基中以大約5x105個細胞/孔接種。細胞以所示濃度和時間用HDAC抑制劑和/或seliciclib培養，然后收獲。培養后，移除上清液，并在2000rpm下離心5分鐘以沉淀任何漂浮的細胞。用冰冷卻的緩沖液A(50mMHEPES,pH7.0，含20mMNaCl)洗滌板上的細胞一次，然后將每個板刮入至0.15ml緩沖液A中，所述緩沖液A含有lmM的DTT、蛋白酶抑制劑(以1:1000稀釋至緩沖液A)和磷酸酶抑制劑(10mM焦磷酸鈉，10mM氟化鈉和lmM原釩酸鈉)。將上層細胞沉淀再懸于50lil含有DTT、蛋白酶和磷酸酶抑制劑的緩沖液A中，然后從板中收集合適的樣品。細胞通過超聲處理(用探針超聲破碎儀2x3s突然的聲音)裂解，使用BCA實驗測定每管的蛋白濃度。將溶胞產物(20-30嗎負載的蛋白/孔)溶解在含有12%丙烯酰胺的Bis-Tris凝膠上，然后轉移到硝基纖維素上用于蛋白質印跡分析。在室溫下，將該膜在含有0.02%(v/v)Tween20和5%(w/v)脫脂無水牛奶的PBS中阻斷1小時。在含有0.02%(v/v)Tween20和3%(w/v)無水牛奶的PBS中，在2-8。C下將抗體培養過夜。硝基纖維素膜用下述抗體4企測抗體來源靶蛋白稀釋倍3肌動蛋白(A5441)Sigmap-肌動蛋白1:15000裂解的PARPBDPharmingen裂解的PARP1:500乙酰基-組蛋白H4Upstate乙酰化的組蛋白H41:1000XIAPCellSignallingXIAP1:1000Bcl-2(clone100)UpstateBcl-21:1000Mcl-l(S-19)SantaCruzMcl-l1:1000Bax(06-499)UpstateBax1:1000存活蛋白AbCam存活蛋白1:500裂解的胱冬酶3CellSignalling裂解的胱冬酶31:1000裂解的胱冬酶9CellSignalling裂解的胱冬酶91:1000流式細胞術seliciclib/丁酸鈉組合將H460細胞以大約3x105個細胞/板接種于10cm板上，然后放置過夜。第二天，以所示濃度加入seliciclib、丁酸鈉或兩種藥物。處理24小時或72小時后，通過胰蛋白酶化收獲細胞。通過碘化丙錠(PI)染色分析細胞周期，包括在-20。C將細胞于70%(v/v)乙醇中固定過夜，然后在流式細胞儀上分析。如操作說明對活的沒有固定的細胞進行錨定蛋白染色。流式細胞術seliciclib/丙戊酸鈉組合將H460細胞以大約0.5x106個細胞/板接種到10cm板上，然后放置24小時。用丙戊酸鈉處理細胞24小時，然后用seliciclib再處理24小時。所使用的化合物的濃度等于1xIC5Q。同時也進行單試劑的對照處理。對照包括用丙戊酸鈉處理細胞24小時，然后用不含藥物的培養基再處理24小時，或用不含藥物的培養基處理24小時，然后用seliciclib再處理24小時。在48小時更換培養基前，通過收集培養基收獲所有細胞。通過胰蛋白酶化收獲貼壁細胞，收集為細胞的混懸液，在PBS中洗滌兩次，然后通過再懸于lml水冷卻的70%乙醇固定。在流式細胞儀上通過硤化丙4走染色進行標準細胞周期分析。結果為兩次重復實驗樣品的平均數。時間間隔實驗的M30/TPS分析將A549細胞接種與96孔板中，》文置過夜。細胞以所示濃度的seliciclib、丁酸鈉或組合處理。處理72小時后，收集培養基，放置在-20。C并保存。在M30ELISA中按所述操作說明分析樣品。結果Seliciclib和HDAC抑制劑組合對NSCLC細胞抹的影響使用3種不同的處理方案，檢測Seliciclib與所示HDAC抑制劑的組合對H460和A549細胞株的影響。每種藥物處理的組合指數見ED50、ED75和ED90值(其對應于曲線上當50%、75%和卯％的細胞被殺死時的點)所示。數據為至少3組獨立實驗的平均值(表1)。表1:seliciclib和HDAC抑制劑對細胞抹的作用的數據(A549的數據顯示在括號中)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>這些結果證明seliciclib和丁酸鹽對于H460和A549細胞有協同作用(所有所;險測的3組處理方案)。Seliciclib和制毛褲素A對H460細胞有中等協同作用(所有所檢測的3組處理方案)。Seliciclib和SAHA,當用SAHA預處理然后用seliciclib處理時對H460細胞有中等協同作用，且對于另兩個處理方案為加和作用。對于依次用seliciclib和丙戊酸鈉(給藥順序無關)觀察到協同作用。因此，當使用所有四種所檢測的HDAC抑制劑組合時，如果細胞用HDAC抑制劑預處理，則seliciclib有協同作用，從而證明了seliciclib與HDAC抑制劑組合用于治療NSCLC細胞抹是一個很好的概念。流式細胞術研究Seliciclib和丁酸鹽誘導在亞-Gl期A549細胞的協同增加將A549細胞在IC50的丁酸鹽、0.25-1.5xIC50的seliciclib,或在IC50的丁酸鹽存在0.25陽1.5xIC50的seliciclib中培養72小時。然后收獲細胞，用碘化丙錠染色，通過流式細胞術分析它們的DNA含量。數據表示兩組獨立的實驗(圖1)。單獨使用丁酸鹽導致在亞-Gl期細胞的少量增加(《nDNA)，這些細胞為死細胞或正在經歷細胞凋亡。Seliciclib處理導致亞-Gl期細胞的劑量依賴性增加，通過加入丁酸鹽而^皮協同增加。這些^t據表明seliciclib和butymte導致死亡或正在死亡的細胞的協同增加。Seliciclib和丁酸鹽誘導H460細胞凋亡的協同增力。將H460細胞在0.25-1.5xIC50的丁酸鹽、0.25-1.5xIC50的seliciclib,或0.25-1.5xIC50的seliciclib和丁酸鹽中培養72小時。然后收獲細胞，用錨定蛋白染色，并在流式細胞儀上分析。數據表示兩組獨立的實驗(圖2)。錨定蛋白標記正在經歷凋亡的活細胞。在0.67x和lxIC50的濃度下，丁酸鹽和seliciclib產生比單獨用兩種藥物處理之和大得多的錨定蛋白信號，表明凋亡細胞的協同增力口。最高濃度的丁酸鹽和seliciclib(1.5xIC50)與0.67x或1xIC50相比看起來含有較少的經歷凋亡的細胞，原因現在尚不清楚。Seliciclib和丁酸鹽協同誘導A549細胞凋亡A549細胞用DMSO(對照)或如所示用IC50濃度的seliciclib、丁酸鈉，或seliciclib和丁酸鹽處理72小時。收獲細胞培養上清液，然后用M30apoptosenseELISA法檢測，并且收獲細胞，對于裂解的PARP和Mcl-l通過蛋白質印跡法分析。數據表示兩組獨立的實驗(圖3)。結果表明，seliciclib和丁酸鹽一起組合得到比兩個單個藥物處理之和大的M30信號，表明它們協同增加細胞凋亡。該數據通過下述事實支持，seliciclib和丁酸鹽得到比單獨使用seliciclib或丁酸鹽大的裂解的PARP信號，其表明加和/協同增加細胞凋亡。Seliciclib和丁酸鹽也降低了A549細胞中抗凋亡蛋白Mcl-l的水平，而單個藥物處理對該蛋白沒有明顯作用。這可能在促進所檢測到的細胞凋亡的增加中起重要作用。Seliciclib和丁酸鹽以劑量依賴方式調節幾種凋亡蛋白H460細胞用丁酸鹽、seliciclib，或seliciclib和丁酸鹽，以1x或1.5xIC50的濃度處理24小時。收獲細胞，并通過蛋白質印跡法用所示抗體分析細胞溶胞產物。數據表示兩組獨立的實驗(圖4)。數據表明，通過24小時的處理，seliciclib和丁酸鹽協同降低了抗凋亡蛋白Mcl-l和胱冬酶抑制劑XIAP的蛋白水平。丁酸鹽處理降低了抗凋亡蛋白Bcl-2和胱冬酶抑制劑存活蛋白的水平。這些變化一起會提供很強的凋亡前信號。事實上，雖然以1.5xIC50濃度增加的PARP充其量^f又表現出加和作用，但以1xIC50的濃度協同增加了裂解的PARP，這與圖2中以1.5xIC50濃度產生的錨定蛋白數據一致。Seliciclib和丁酸鹽以時間依賴性調節幾種凋亡蛋白H460細胞用lxIC50的丁酸鹽、seliciclib,或seliciclib和丁酸鹽處理所示時間。收獲細胞，且通過蛋白質印跡用所示抗體分析細胞溶胞產物。數據表示兩組獨立的實驗(圖5)。結果證明了圖4中的結論，丁酸鹽降低了存活蛋白和Bcl-2的水平，且seliciclib和丁酸鹽協同降低了Mel-1和XIAP水平。這些數據也證明藥物組合導致活性形式胱冬酶3和9的協同增加，其與裂解的PARP的增加出現在大致相同的時間。有趣的是，增加的細胞凋亡(通過裂解的PARP的出現檢觀寸)直到Mcl-l、Bcl-2、存活蛋白和XIAP降低后才出現，說明在此種細胞抹中需要任何或所有這些變化以促進凋亡。Seliciclib/丙戊酸鈉組合丙戊酸鈉/seliciclib組合的流式細胞術分析按如上所述進行。選擇丙戊酸鈉預處理方案，使得其為通過Calcusyn為協同的方案。在H460細胞中，用seliciclib處理導致在亞-Gl期的細胞(凋亡細胞)比例的少量增加，但是在所用的濃度下沒有明顯影響到H460細胞的整個細胞周期分布(圖6)。與單個試劑對照組相加比較，丙戊酸鈉與seliciclib的組合導致在亞-Gl期的細胞(凋亡細胞)比例的明顯增加，這與Calcusyn分析得到的數據一致。上述數據提供了證明seliciclib與HDAC抑制劑丙戊酸鈉對H460細胞以時間依賴性有協同作用的證據。在不脫離本發明的范圍和精神的情況下，本發明的各種改變和變化對本領域的那些技術人員來說是顯而易見的。盡管已結合具體的優選實施方案描述了本發明，但應該認識到要求的本發明不應該不適當地限制至這種具體實施方案。事實上，對相關領域那些技術人員明顯的用于實施本發明上述方式的各種改變都被本發明覆蓋。權利要求1.組合，其包含roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。2.根據權利要求1的組合，其中所述HDAC抑制劑為丁酸鈉或其前藥。3.根據權利要求2的組合，其中所述前藥為丁酸(新戊酰基氧基曱基)酯。4.根據權利要求1的組合，其中所述HDAC抑制劑為N-辛二酰苯胺異羥肝酸(SAHA)。5.根據權利要求1的組合，其中所述HDAC抑制劑為制毛褲素A(TSA)。6.根據權利要求1的組合，其中所述HDAC抑制劑為丙戊酸鈉。7.根據上述權利要求中任一項的組合，其中roscovitine為R-roscovkine。8.藥物組合物，其包含上述權利要求中任一項的組合和可藥用栽體、稀釋劑或賦形劑。9.權利要求1-7中任一項的組合在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途。10.藥物制品，其包含roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA),作為在治療中同時、依次或分別使用的組合制劑。11.根據權利要求10的藥物制品，其中所述HDAC抑制劑為丁酸鈉或其前藥。12.根據權利要求11的藥物制品，其中所述前藥為丁酸(新戊酰基氧基曱基)酯。13.根據權利要求10的藥物制品，其中所述HDAC抑制劑為N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)。14.根據權利要求10的藥物制品，其中所述HDAC抑制劑為制毛癬素A(TSA)。15.根據權利IO的藥物制品，其中所述HDAC抑制劑為丙戊酸鈉。16.根據權利要求10-15中任一項的藥物制品，其中所述roscovitine為R-roscovitine。17.根據權利要求10-16中任一項的藥物制品，其為包含可藥用載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物形式。18.根據權利要求10-17中任一項的藥物制品，其用于治療增殖性疾病。19.根據權利要求18的藥物制品，其中所述增殖性疾病為癌癥。20.根據權利要求19的藥物制品，其中所述癌癥為非小細胞肺癌(NSCLC)。21.—種治療增殖性疾病的方法，所述方法包含同時、依次或分別給藥roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。22.根據權利要求21的方法，其中所述roscovitine為R-roscovitine。23.根據權利要求21或權利要求22的方法，其中丁酸鈉的前藥為丁酸(新戊酰基氧基曱基)酯。24.根據權利要求21-23中任一項的方法，其中roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，對于單個成分各自以治療有效量給藥。25.根據權利要求21-23中任一項的方法，其中roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，對于單個成分各自以亞治療量給藥。26.根據權利要求21-25中任一項的方法，其中所述HDAC抑制劑和roscovitine或其可藥用鹽為同時給藥。27.根據權利要求21-25中任一項的方法，其中所述HDAC抑制劑和roscovitine或其可藥用鹽為依次或分別給藥。28.根據權利要求27的方法，其中在給藥roscovitine或其可藥用鹽之前，依次或分別給藥HDAC抑制劑。29.根據權利要求27的方法，其中在給藥HDAC抑制劑之前，依次或分別給藥roscovitine或其可藥用鹽。30.根據權利要求21-29中任一項的方法，其中所述增殖性疾病為癌癥。31.根據權利要求30的方法，其中所述癌癥為非小細胞肺癌(NSCLC)。32.roscovitine或其可藥用鹽在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中所述治療包含向患者同時、依次或分別給藥HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛褲素A(TSA)。33.HDAC抑制劑在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異輕肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛瓣素A(TSA)，其中所述治療包含向患者同時、依次或分別給藥roscovitine或其可藥用鹽。34.roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑在制備用于治療增殖性疾病的藥物中用途，所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。35.HDAC抑制劑在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肝酸(SAHA)和制毛癬素A(TSA)，其中所述藥物用于與roscovitine或其可藥用鹽的組合治療。36.roscovitine或其可藥用鹽在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中所述藥物用于與HDAC抑制劑的組合治療，所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。37.roscovitine或其可藥用鹽在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途，其中所述藥物用于以HDAC抑制劑的預處理治療中，所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。38.才艮據權利要求32-37中任一項的用途，其中所述roscovitine為R-roscovitine。39.根據權利要求32-38中任一項的用途，其中丁酸鈉的前藥為丁酸(新戊酰基氧基曱基)酯。40.根據權利要求32-39中任一項的用途，其中所述增殖性疾病為癌癥。41.根據權利要求40的用途，其中所述癌癥為非小細胞肺癌(NSCLC)。42.roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑在制備用于治療非小細胞肺癌的藥物中的用途。43.roscovitine或其可藥用鹽，和選自下列的HDAC抑制劑在制備用于治療非小細胞肺癌的藥物中的用途丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肝酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛褲素A(TSA)。44.試劑盒，其包含(i)roscovitine或其可藥用鹽，任選與可藥用稀釋劑、賦形劑或載體混合；和(ii)HDAC抑制劑，其選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥將酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA),任選與可藥用稀釋劑、賦形劑或載體混合。45.基本上如本文所述的組合、藥物組合物、藥物制品、方法、用途或試劑盒。全文摘要本發明的第一方面涉及組合，其包含roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。本發明的第二方面涉及藥物制品，其包含roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)，作為在治療中同時、依次或分別使用的組合制劑。本發明的第三方面涉及治療增殖性疾病的方法，所述方法包含同時、依次或分別向患者給藥roscovitine或其可藥用鹽，和HDAC抑制劑，其中所述HDAC抑制劑選自丁酸鈉或其前藥、N-辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、丙戊酸鈉和制毛癬素A(TSA)。文檔編號A61K45/06GK101355948SQ200680050905公開日2009年1月28日申請日期2006年11月13日優先權日2005年11月11日發明者伊恩·弗萊明,希拉格·弗雷姆,西蒙·格林申請人:西克拉塞爾有限公司