提高癌癥早期mri檢測的腫瘤靶向納米傳送系統的制作方法

專利名稱：：提高癌癥早期mri檢測的腫瘤靶向納米傳送系統的制作方法
技術領域：
：本發明屬于藥物傳送，癌癥治療和診斷以及藥物領域。本發明提供了制備抗體或抗體片段耙向免疫脂質體的方法，該免疫脂質體用于全身傳送治療疾病和使疾病成像的分子，疾病包括癌性腫瘤。本發明還提供了免疫脂質體和組合物，以及使各種組織成像的方法。脂質體復合物用于成像劑的包裹，例如，用于磁共振成像。傳送系統的特異性源自耙向抗體或抗體片段。
背景技術：
：對于結束由疾病引起的疼痛和苦難的目標而言，在早期檢測原發性和轉移性癌癥的能力將是主要的步驟。用于基因治療的腫瘤靶向傳送系統的研發已經展現了比目前可用的方法更有效地傳送成像劑的可能。磁共振成像(MRI)可以獲取器官的3-維解剖圖像。將這些結合順磁性圖像導致腫瘤的精確定位以及肺瘤生長和血管生成的縱向和定量的監控(Gillies,R.J.等，2:139-451(2000);Degani，H.等,7Tro/z76os/s》^3e/z70"a"、89:25-33))。癌癥診斷中最常用的順》茲性成像劑之一是Magnevist(4L噴葡胺)(Mag)(BerlexImaging,Montville，NJ)。釓是稀有土族元素。由于其離子(Gd++)具有七個未配對的電子，其顯示出順磁性的特征。MRI掃描中觀察到的造影增強主要是由于Gd"對氫質子自旋點陣張弛時間的強烈影響而引起的。盡管游離的釓是高度毒性的，并因此不適于臨床使用，但與二乙撐三胺五乙酸(DTPA)的螯合產生了良好耐受性的，穩定的，強烈順磁性的復合物。這種金屬螯合物在代謝上是惰性的。然而，靜脈注射釓噴葡胺后，葡甲胺離子與疏水性釓噴酸鹽(gadopentetate)分離，其只分布在胞外水中。它不能夠穿過完整的血腦屏障，并因此不在正常的腦組織，包嚢，術后傷疤等中累積，并在尿液中快速排出。它具有約1.6小時的平均半衰期。大約80°/。的劑量在6小時內在尿液中排出。然而，使用現有的造影劑存在顯著的局限性，包括它們主要是基于灌注和擴散標記以及葡萄糖攝入。使用這些游離的(非復合的)試劑，在肺瘤，炎癥疾病中看到變化，甚至具有激素影響(在乳腺中)(例如，最常見的基于釓和基于碘的造影劑證明了灌注并擴散至胞間隙中，PDG-PET證明了葡萄糖攝入)。因此，這些造影劑沒有特異性地靶向腫瘤。此外，活動的良性過程通常不能與惡性的區分開來，例如，乳腺MRI上的良性增強區域，慢性胰腺炎對胰腺癌。還存在小腫瘤不能充分攝入這些試劑，并因此靈敏度差和缺乏早期檢測，這在如肺癌這樣的疾病中是特別關鍵的。它還不可能檢測出孤立性肺結節或胸膜結節。因此，需要用于將這樣的試劑傳送至體內的特定組織，例如，傳送至腫瘤組織和轉移瘤的機制。發明簡述在一個實施方案中，本發明提供了制備抗體或抗體片段靶向陽離子免疫脂質體復合物的方法，其包括制備抗體或抗體片段，將抗體或抗體片段與陽離子脂質體混合來形成陽離子免疫脂質體，其中抗體或抗體片段沒有在化學上綴合陽離子脂質體，并將陽離子免疫脂質體與成像劑混合來形成抗體或抗體片段耙向陽離子免疫脂質體復合物。用于本發明實踐中的示例抗體片段包括單鏈Fv片段，如抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv)和抗HER-2抗體或抗體片段。在其他的實施方案中，該方法進一步包括將陽離子免疫脂質體與包括K[K(H)KKK]5-K(H)KKC(HoKC)(SEQIDNO:1)肽的肽混合。合適地，以約1:20至約1:40(w:w)的比例將抗體或抗體片段與所述陽離子脂質體混合。合適地，陽離子脂質體包括二油酰三曱磷酸銨與二油酰磷脂酰乙醇胺和/或膽固醇的混合物；或二曱基二(十八烷基)溴化銨與二油酰磷脂酰乙醇胺和/或膽固醇的混合物。在其他的實施方案中，以約0.1:10至約0.l:35的比例(mg成像劑Mg脂質體)，合適地約1:14至約l:28(mg成像劑jag脂質體)，或約1:21(mg成像劑ng脂質體)將陽離子免疫脂質體與成像劑混合。用于本發明實踐中的示例成像劑包括，但不限于，磁共振成像(MRI)劑，如釓，釓噴葡胺，碘帕醇和氧化鐵。此外，還可以使用用于CT的鋇，碘和鹽水成像劑，用于PET的"F-2-脫氧-2-氟代-D-葡萄糖(FDG)和其他成像劑。本發明還提供了通過本發明的方法制得的陽離子免疫脂質體復合物以及包括陽離子脂質體，抗體或抗體片段和成像劑的抗體或抗體片段靶向陽離子免疫脂質體復合物，其中抗體或抗體片段沒有在化學上與所述陽離子脂質體綴合。在進一步的實施方案中，本發明提供了使器官或組織成像的方法，并且還用于區分患者的良性組織/疾病和癌性組織/疾病，包括在進行成像之前將本發明的陽離子免疫脂質體復合物給藥于患者。可以通過任何途徑來進行給藥，例如，靜脈內給藥，肌內給藥，皮內給藥，眼內給藥，腹膜內給藥，腫瘤內給藥，鼻內給藥，腦內給藥或皮下給藥。合適地，使用本發明的方法和復合物成像的組織是癌性組織，包括癌性轉移瘤。本發明還提供了使患有癌癥的患者的腫瘤組織成像和治療患有癌癥的患者的腫瘤組織的方法，包括將本發明的陽離子免疫脂質體復合物給藥于患者來使腫瘤組織成像并將抗癌劑給藥于患者來治療腫瘤組織。示例抗癌劑包括核酸，基因，蛋白質，肽，小分子，化療劑，如多西紫杉醇，米托蒽醌和吉西他濱，以及反義寡核苷酸或siRNA。本發明的其他實施方案是本領域普通技術人員熟知的。附圖簡述圖1A和1B顯示了TfRscFv-脂質體-DNA納米復合物的CaPan-l原位轉移模型的腫瘤特異性靶向。1A中箭頭所示的肝臟中相同的腫瘤結節呈現出IB中強烈的&-半乳糖苷酶表達。1A-尸檢；lA-p-半乳糖苷酶染色后的組織。圖2A-2C顯示了用TfRscFv-Lip-Mag納米復合物轉染后，K564細胞的體外MRI成像。lA-時間依賴性轉染。給出的值是相對強度。1B=顯示出相對強度隨復合物中包括的Magnevist⑧含量(以m1計)的變化。lC-TfRscFv-Lip-Mag納米復合物對游離Magnevist⑧的相對強度的比較。所有圖像中的小圓是樣本定位的標記。圖3A-I顯示了兩個不同癌癥模型中使用配體-脂質體-Mag納米復合物提高的MR成像。3A,D和G顯示了大的胰腺原位腫瘤(箭頭)(外科植入腫瘤后4個月)中靜脈注射給藥游離的造影劑和TfRscFv-Lip-Mag復合物之間的MRI信號差異。3B，E和H顯示了帶有皮下胰腺腫瘤和更小的腹部胰腺腫瘤(箭頭)的第二只小鼠中的相似效果。3C，F和I是帶有皮下前列腺胂瘤(箭頭)的第三只動物的圖像，其中相同的效果是明顯的。圖4A-C顯示了不含Magnevist⑧的脂質體的SPM相位圖像。各自在1.68V,1.45V和1.35V的給定值獲得了4A，4B和4C中顯示的圖4象。不順從底物和機械上順從脂質體之間的相應相差為-3.5、+8()和+40()。隨著設定值的降低，SPM尖端和脂質體的相互作用從吸引改變至排斥。圖5A-C顯示了脂質體包裹的Magnevist(Lip+Mag)的SPM和SEM圖像。5A是脂質體包裹的Magnevist⑧顆粒的原子力顯樣支鏡地形圖。SPM相位圖像(設定值=1.6)(5B)和15keVSEM(TE)[傳輸模式電子檢測儀]圖像(5C)具有相似的反差，盡管是通過完全不同的互補物理原理產生的。圖6A和6B顯示了TfRscFv+Lip+Mag納米復合物的SPM地形和相位成像。6A是整個納米復合物的15keVSEM(TE)[傳輸模式電子檢測儀]圖像。6B-場的低功耗圖像。框起來的區域是6A中的圖像。圖7A和7B顯示了使用25-nm高度位移的升高模式中SPM地形和磁性相位圖像的截面比較。7A是整個TfRscFv-Lip-Mag納米復合物的SPM地形/磁性相位圖像。7B中由吸引和排斥面內磁性相互作用構成的雙偶極子樣信號的出現表明了這種相互作用的誘因是NDS內的Magnevist的不均勻環形分布，與SEM和非磁性SPM相位圖像相一致。圖8A-8H顯示了兩種不同癌癥模型中使用配體-HK-脂質體-Mag納米復合物提高的MR成像。人乳癌MDA-MB-435(圖8E-8H)和人前列腺癌細胞系(DU145)(圖8A-8D)。圖9A-C顯示了TfRscFV-HK-脂質體-Mag納米復合物的CaPan-l皮下腫瘤和原位轉移模型的腫瘤特異性靶向。圖IO顯示了動態MRI，該MRI顯示了胰腺癌模型中使用由本發明的復合物傳送的Mag提高的強度，與游離Mag相比較。圖11A-llC顯示了通過本發明的含Mag復合物的胰腺癌轉移的MR成像。圖12A-12E顯示了肺轉移MR成像中通過本發明的含Mag復合物的更大的增強。圖13A-13D顯示了腎細胞癌肺轉移的MR成像中通過本發明的含Mag復合物的更大的增強。圖14A-14D顯示了通過小腎細胞癌肺轉移的MR成像更高的檢測靈敏度，利用本發明的含Mag復合物。圖15A-15B顯示了通過本發明的含Mag復合物的非常小轉移瘤的MR成像，證明了本發明的復合物的靈敏度。圖16顯示了轉移組織的切片，證實了使用本發明的含Mag復合物通過MRI看到的檢測/成像。圖17顯示了圖16更高倍數的放大。圖18A-18F顯示了通過本發明的含Mag復合物的肺胸膜下轉移的MR成像。圖19A-19B顯示了通過本發明的含Mag復合物的B"/F!。黑素瘤肺轉移的檢測。發明詳述本發明通過提供用于將成像劑全身傳送至靶向組織如腫瘤的納米復合物滿足了一個重要的需求，即，用于腫瘤對良性組織的早期檢測和鑒別診斷的提高的靈敏度和腫瘤細胞特異性，成像劑如磁共振成像(MRI)齊ij，如釓，禮噴葡胺(Magnevist)，和碘帕醇，氧化鐵；用于CT的鋇，多典和鹽水成像劑；和用于PET的"F-2-脫氧-2-氟代-D-葡萄糖(FDG)和其他成像劑。掃描電子顯微術(SEM)和掃描探針顯微術(SPM)(Wolfert,M.A.等，〃畫"e/e7"力er驛7:2123-2133(1996);Dunlap,D.D.等，腸7e/c爿c2V"esearc力25:3095-3101(1997);Kawaura，C.等,尸愿丄e〃er"21:69-72(1998);Choi，Y,H.等，^ms/Ce"er力era;/10:2657-2665(1999);Diebel，C.E.等，^""wre406:299-302(2000);Rasa,M.等,/.Co7厶//^er/ace250:303-315(2002))已經用于觀察這些帶有成像劑的納米復合物的物理結構和尺寸。在釓的情況中，釓是一種具有大磁矩的高原子數元素，可以以各種途徑開發這些特征來提高SEM和SPM中的反差。在此呈現的發現證明了本發明的脂質體納米復合物真正地包裹了成像劑，如Magnevist⑧，并且這些復合物的靜脈內給藥形成提高的腫瘤成像。本發明提供了出乎意料且令人驚訝的非常小的轉移瘤的檢測結果，包括肺中的胸膜轉移，以及鑒別良性和癌性組織的能力。在一個實施方案中，本發明提供了腫瘤靶向傳送系統，包括造影劑，例如磁共振成像(MRI)造影劑。U.S.公開專利申請包裹不同試劑的納米尺寸的陽離子脂質;。修飾這些脂質體表面的是乾向分子，其可以是配體，如葉酸鹽或轉鐵蛋白，或針對細胞表面受體的抗體或抗體片段。脂質體上的配體/抗體的存在有助于復合物進入細胞中，通過受體結合靶向分子，接著結合的復合物通過受體介導的胞吞作用內在化，胞吞作用是一種高效的內在化途徑(Cristiano,R.J.和Curiel，D.T.，Cs/7cerfe/7e77ei\2/7/3:49—57(1996);Cheng,P.W.，^y邁a"Ce"e7力era/77:275-282(1996))。脂質體的這種修飾導致它們不僅能夠選擇性地將它們的有效負荷傳送至腫瘤細胞，而且提高了脂質體的轉染效率。轉鐵蛋白受體(TfR)水平在各種癌組織得到升高，包括口腔，前列腺，乳腺和胰腺(Keer，H.N.等，/owr/a/143:381-385(1990);Rossi,M.C.和Zetter，B.R.，Va〃.Jcad.Sc/.f^S^O89:6197-6201(1992);Elliott,R.L.等，J//.尺Jca《5c/.698:159—166(1993);Thorstensen，L和Romslo,I.，S譜A/.67/".M/"re"/《.(增補)215:113-120(1993);Miyamoto,T.等，/.0ra/他u'"o/ac/a75W^.23:430-433(1994);Ponka，P.和Lok,C.疋，/"r7./."/oc力e瓜Ce77A/oA37:1111-1137(1999))。此外，TfR在快速發展細胞如癌細胞中的內在化過程中再循環(Ponka，P.和Lok,C.N.，//r入/.腸c力e/z/.5/o人31:1111-1137(1999))，因此有助于這些轉鐵蛋白靶向的納米復合物的攝入，甚至在其中TfR水平沒有升高的癌細胞中。在合適的實施方案中，在此所述的納米復合物使用抗轉鐵蛋白受體單鏈抗體片段(TfRscFv)作為靶向部分(Hanynes，B.F.等，/.//zM/u/70人127:347-351(1981);Batra，J.K.等，M7ec"/ar《Ce/7w7arS/o7og/11:2200-2205(1991))。TfRscFv含有完整的抗體結合位點，用于單克隆抗體5E9識別TfR的抗原決定部位(Batra，J.K.等，Ce"w/sr"/o7o^r11:2200-2205(1991))。在將脂質體靶向具有升高TfR水平的癌細胞中，TfRscFv具有優于Tf分子自身或完整Mab的優勢1)scFv(28kDa)的尺寸比Tf分子(80kDa)或親本Mab(155kDa)小的多。scFv-脂質體-DNA復合物因此呈現出更好地滲入實體腫瘤特征性的小毛細管中。2)較小的scFV對于臨床試驗需要的大規模生產具有實踐優勢。3)scFV是重組分子并且不是和Tf一樣的血液制品，并因此不具有由血液帶有的病原體引起的潛在污染的危險。4)沒有Mab的;Fc片段，消除了通過Fc受體的非抗原特異性結合的結果(Jain，R.K.和Baxter,L.T.，48:7022-7032(1988))。這樣的抗-TfR單鏈抗體分子可以優先將靜脈內給藥的陽離子脂質體-DNA納米復合物靶向腫瘤(參見，U.S.公開專利申請No.2003/0044407;Xu，L.等，M/ecw/sr#ed/c//7e7:723-734(2001);XuL等，船/歸/arC娜er7力era拜〃"1:337-346(2002))。將Magnevist⑧(Mag)包裹于這樣的腫瘤靶向納米復合物內給予了提高的靈敏度以及檢測腫瘤轉移和診斷癌癥的優勢。禮，釓噴葡胺(Magnevist)，碘帕醇，氧化鐵；用于CT的鋇，碘和鹽水成像劑；用于PET的SF-2-脫氧-2-氟代-D-葡萄糖(FDG)和其他成像劑，以及本領域普通技術人員已知的任何其他常用造影劑，以及將來有待研發的任何造影劑或成像劑(例如，用于MRI，CT，PET，SPECT等)也可以包裹于本發明的免疫脂康體內。通過簡單而有效的非化學綴合方法制得根據本發明的抗體或抗體片段靶向的陽離子脂質體復合物，在該方法中將所需的復合物成分以限定的比例和限定的次序混在一起(參見，U.S.公開專利申請No.2003/0044407)。所得到的復合物與其中抗體或抗體片段與脂質體或聚合物化學綴合的相似復合物一樣有效，或更有效。術語"免疫復合物"，"免疫脂質體"，"復合物"，"納米復合物"，"免疫納米復合物"，"脂質體復合物"可互換使用，全部用來表示本發明的陽離子脂質體。完整的抗體或抗體片段都可以用來制備本發明的復合物。在合適的實施方案中，使用抗體片段。優選，抗體片段是抗體的單鏈Fv片段。一種優選的抗體是抗TfR單克隆抗體，而優選的抗體片段是基于抗TfR單克隆抗體的scFv。合適的抗TfR單克隆抗體是5E9(參見，例如，Hayes,B.F.等,"CharacterizationofaMonoclonalAntibody(5E9)thatDefinesaHumanCellSurfaceAntigenofCellActivation"(限定細胞激活的人細胞表面抗原的單克隆抗體(5E9)的表征)，/./卿腳7."7:341-352(1981);Batra，J.K.等，"Single-chainImmunotoxinsDirectedattheHumanTransferringReceptorContainingPseudomonasExotoxinAorDiphtheriaToxin:Anti-TFR(Fv)-PE40andDT388-Anti-TFR(Fv)，，(針對含有假單胞菌外毒素A或白喉毒素的人轉移受體的單鏈免疫毒素抗-TFR(Fv)-PE40和DT388-抗一TFR(Fv)),Ce/入":2200—2205(1991);將其公開內容引入作為參考)。基于5E9抗體的scFv含有完整的抗體結合位點，用于該Mab識別的TfR的抗原決定部位，作為大約分子量26，000的單多肽鏈。通過連接各自來自重鏈和輕鏈的成分VH和VL可變結構域形成scFv，使用適當設計的連接肽，其橋接了第一個可變區的C-端和第二個可變區的N-端，次序為VH-連接物-VL和VL-連接物-VH。另一個優選的抗體是抗-HER-2單克隆抗體，而另一個優選的抗體片段是基于抗-HER-2單克隆抗體的scFv。在合適的實施方案中，將半胱氨酸部分添加至scFv的C-端。盡管不希望受到理論的束縳，但認為提供了游離巰基的半胱氨酸可以提高抗體和脂質體之間的復合物的形成，例如，通過電荷-電荷相互作用。使用或不用半胱氨酸，可以在大腸桿菌包含體中表達蛋白質，然后重折疊來產生活性形式的抗體片段。如果不希望在復合物的形成中使用空間上穩定的免疫脂質體，制備復合物的笫一個步驟包括將陽離子脂質體或脂質體或小聚合物的組專利申請No.2003/0044407)。多種陽離子脂質體可用于本發明復合物的制備中。公開的PCT申請WO99/25320描述了幾種陽離子脂質體的制備。理想的脂質體的實例包括含有二油酰三曱磷酸銨(DOTAP)與二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和/或膽固醇(chol)的混合物；或二甲基二(十八烷基)溴化銨(DDAB)與D0PE和/或chol的混合物的那些。對于特定的目標細胞類型，可以改變脂質的比例來最佳化治療分子的攝入效率。脂質體可以包括一種或多種陽離子脂質和一種或多種中性或輔助脂質的混合物。陽離子脂質與中性或輔助脂質的理想比例為約1:(0.5-3)，優選l:(1-2)(摩爾比)。本發明還提供了用于傳送成像劑的靶向陽離子聚合物。合適的聚合物是能夠介導DM收縮并且還可以介導核內體釋放的DM結合陽離子聚合物。優選的聚合物是聚乙烯亞胺。其他有用的聚合物包括聚賴氨酸，魚精蛋白和聚酰胺胺樹狀聚合物。抗體或抗體片段是結合靶細胞表面的抗體或抗體片段，并優選結合在靶細胞上差異表達的受體。將抗體或抗體片段在室溫與陽離子脂質體或聚合物混合，并且蛋白質脂質的比例為約1:20至約1:40(w:w)，或蛋白質聚合物的比例為約0.1:1至10:1(摩爾比)。使抗體或抗體片段和脂質體或聚合物在室溫孵育一小段時間，通常約10-15分鐘，然后將混合物與選擇的治療劑或診斷劑混合。可以與抗體和脂質體復合的治一分子或治療劑的實例包括基因，高分子量DNA(基因組DNA)，質粒DNA，反義寡核苷酸，肽，核酶，核酸(包括siRNA和反義)，病毒顆粒，免疫調節劑，蛋白質，小分子和化學試劑。優選的治療分子包括編碼p53，Rb94和Apoptin的基因。RB94是視網膜母細胞瘤抑制基因的變體。Apoptin是只誘導胂瘤細胞凋亡的基因。在另一個優選的實施方案中，試劑是反義寡核苷酸或siRNA分子，如HER-2反義或siRNA分子。第三種優選的試劑是診斷成像劑，如MRI成像劑，如Gd-DTPA劑。其他成像劑包括，但不限于，禮，禮噴葡胺(Magnevist)，碘帕醇，氧化鐵；用于CT的鋇，碘和鹽水成像劑；和用于PET的18F-2-脫氧-2-氟代-D-葡萄糖(FDG)和其他成像劑。如果試劑是DNA，如p53的編碼片段，可以將其置于強組成型啟動子，如RSV或CMV啟動子的控制下。將抗體或抗體片段和脂質體組合物以約1:10至1:20(mg試劑nmol總脂質)或1:10至1:40(ug試劑nmol總聚合物)的比例與治療劑或診斷劑混合，然后在室溫孵育一小段時間，通常約10至15分鐘。脂質體復合物的尺寸通常在約50-400nm的范圍內，如使用MalvernZetasizer3000通過動態光散射所測量的。在本發明的一個實施方案中，用于形成復合物的脂質體是空間上穩定的脂質體。空間上穩定的脂質體是其中已經結合了親水性聚合物如PEG,聚(2-乙基丙烯酸)或聚(n-異丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)的脂質體。當與治療劑或診斷劑復合時，這樣修飾過的脂質體特別有用，因為它們通常沒有象未經這樣修飾過的相當脂質體那樣快地通過網狀內皮組織系統從血流中清除出來。為了制備本發明的空間上穩定的脂質體復合物，混合抗體或抗體片段，脂質體和治療劑或診斷劑的次序與上述的次序相反。在第一個步驟中，首先將陽離子脂質體以約1:10至1:20(jig試劑nmol脂質)的比例與上述的治療劑或診斷劑混合。將生理學上可接受緩沖液中的PEG聚合物溶液加入該lipoplex中，并將所得到的溶液在室溫孵育足以使聚合物結合脂質體復合物的時間。然后將抗體或抗體片段與穩定的脂質體聚合物在室溫混合，并且蛋白質脂質的比例為約1:5至約1:30(w:w)。根據本發明制得的脂質體或聚合物復合物可以配制成用于體內給藥的藥物學上可接受的制劑。可以將復合物結合藥物學上相容的介質或載體。可以配制組合物，例如，用于靜脈內給藥于人患者，該患者得益于復合物的治療或診斷分子的給藥。復合物的尺寸是合適的，使得在靜脈注射給藥后可以全身分布。或者，可以通過其他給藥途徑來傳送復合物，如腫瘤內(IT),病損內(IL)，氣溶膠，經皮，內窺鏡，局部，肌內(IM)，皮內(ID)，眼內(10)，腹膜內(IP)，鼻內(IN)，腦內(IC)或皮下給藥。用于通過這樣的方法傳送的制劑的制備和使用這樣的方法的傳送是本領域公知的。在一個實施方案中，給藥包括抗體或抗體片段靶向的脂質體(或聚合物)和治療劑復合物的組合物，以實現人的基因治療。復合物的治療劑成分包括合適調控序列控制下的治療基因。通過全身傳送含有編碼wtp53或RB94的核^的抗體或抗體片段乾向脂質體或聚合物復合物來實現用于各種形式的人癌癥的基因治療。復合物可以特異性地耙向并敏化原發性和轉移性腫瘤的肺瘤細胞，以在體外和體內照射和/或化療。可以針對靼細胞類型通過脂質的選擇和比例，抗體或抗體片段與脂質體的比例，抗體或抗體片段和脂質體與治療劑或診斷劑的比例，以及抗體或抗體片段和治療劑或診斷劑的選擇來最佳化復合物。在一個實施方案中，靶細胞是癌細胞。盡管任何具有惡性細胞生長的組織可以是目標，但頭頸，乳腺，前列腺，胰腺，大腦，包括成膠質細胞瘤，子宮頸，肺，肝，脂肪肉瘤，橫紋肌肉瘤，絨毛膜癌，黑素瘤，視網膜母細胞瘤，子宮，泌尿生殖器，胃和結直腸的癌是合適的目標。通過本發明的方法制得的復合物還可以用于靶向非腫瘤細胞，用于傳送治療分子或任何核酸。盡管任何正常細胞可以是目標物，但優選的細胞是樹突細胞，血管的內皮細胞，肺細胞，乳腺細胞，骨髄細胞，胸腺細胞和肝細胞。可以耙向不利的但是良性的細胞，如良性前列腺增生細胞，過于活躍的曱狀腺細胞，脂肪瘤細胞和自體免疫疾病相關的細胞，如產生涉及關節炎，狼瘡，重癥肌無力，鱗狀上皮化生，黃斑變性，心血管疾病，神經病，如阿爾茨海默病，發育異常等的抗體的B細胞。可以結合另一種治療性處理來給藥復合物，如放療或化療劑。可以在復合物的給藥之前或之后來給予治療性處理，或治療性處理的組合，例如在約12小時至約7天內。化療劑包括，例如，阿霉素，5-氟尿嘧啶(5FU),順鉑(CDDP),,多西紫杉醇(TAX0TERE),吉西他濱(GEMZAR)，紫杉醇，長春花堿，足葉乙戒(VP-16)，喜樹堿，放線菌素-D，米托蒽醌和絲裂霉素C。放射治療/處理包括Y放射(137Cs),X-射線，UV照射，微波，電子發射等。其他的治療劑包括小分子，肽，蛋白質等。還可以通過脂質體或聚合物復合物將診斷劑或成像劑傳送至乾向細胞。術語"診斷劑"和"成像劑，，可互換使用，全部用來表示在給藥后可以在體內得到檢測，目測，成像或觀察的試劑。用于檢測，目測，成像或觀察診斷劑和成像劑的實例方法是本領域公知的，并包括，例如，光學成像，如熒光成像(熒光計)或生物發光成像，正電子發射斷層(PET)掃描，單光子發射計算機化斷層(SPECT)掃描，磁共振成像(MRI)，x-射線，，放射性核苷酸成像(例如，Y照相機，計算機斷層掃描(CT)，定量自動射線照相術等)等。示例診斷劑包括電子密度材料，鐵，磁共振成像劑和放射性藥物。成像有用的放射性核素包括銅，鎵，銦，錸和锝的放射性同位素，包括同位素"Cu，"Cu，mIn，99mTc，"Ga或"Ga。MRI劑如Gd-DTPA劑，釓或Magnevist(釓噴葡胺)(Mag)(BerlexImaging,Montville，NJ)。Low等在U.S.專利5，688，488中公開的成像劑可用于本發明中，在此將其引入作為參考。其他成像劑包括，但不限于，碘帕醇(例如，ISOVUE,RegionalHealthLimited,Aukland，AU)，氧化鐵；用于CT的鋇，碘和鹽水成像劑；和用于PET的"F-2-脫氧-2-氟代-D-葡萄糖(FDG)和其他成像劑。可以以試劑盒的形式來提供根據本發明的方法制得的復合物，該試劑盒用于通過復合物全身傳送治療分子或診斷分子。合適的試劑盒可以分開地包括合適的容器(或在單個的容器中)，脂質體，抗體或抗體片段和治療劑或診斷劑。可以在無菌條件下以合適的次序混合組分并在制備后的合理時間段內給藥于患者，通常約30分鐘至約24小時。優選作為溶液或作為干粉來提供試劑盒組分。優選將溶液形式提供的組分配制于無菌注射用水中，和合適的緩沖液，摩爾滲透壓濃度控制劑等一起。成殺浙W逸產和傳送在特定的實施方案中，本發明提供了陽離子脂質體復合物，其中將一種或多種成像劑包裹在脂質體內部中，包含在雙層的烴鏈片段內，與內側和/或外側單層復合/相連(例如，通過靜電相互作用或化學/共價相互作用)，或這些可能性中的任一種或全部的組合。合適地，將成像劑包裹在脂質體的內部中和/或與內側和/或外側單層相連。如在此所用的，術語"診斷劑"和"成像劑"指的是給藥后可以在體內得到檢測，目測，^M象或觀察的試劑。示例成像劑包括電子密度材料，鐵，磁共振成像劑和放射性藥物。成像有用的放射性核素包括銅，鎵，銦，錸和锝的放射性同位素，包括同位素"Cu,"Cu,mIn，99mTc，"Ga或"Ga。MRI劑如釓，Gd-DTPA劑或Magnevist(釓噴葡胺)(Mag)(BerlexImaging,Montville，NJ)。Low等在U.S.專利5,688,488中公開的成像劑也可用于本發明中，在此將其引入作為參考。其他成像劑包括，但不限于，碘帕醇(例如，ISOVUE,RegionalHealthLimited,Aukland,AU)，氧化鐵；用于CT的鋇，碘和鹽水成像劑；和用于PET的，-2-脫氧-2-氟代-D-葡萄糖(FDG)和其他成像劑。如在此所述的，可以在加工過程中通過簡單地混合一種或多種成像劑和脂質體將成像劑合適地與本發明的脂質體復合物包裹，包含或復合/相連。通過本領域技術人員可容易地測定成像劑脂質體復合物的合適比例。例如，成像劑與脂質體復合物的比例合適地為約0.1:10至約0.1:35(mg成像劑Mg脂質體)，更合適地約1:14至約1:28(mg成像劑jLig脂質體)，或約1:21(mg成像劑mg脂質體)。如全文中所述的，用于傳送/包括成像劑的理想陽離子脂質體的實例包括含有二油酰三甲磷酸銨(D0TAP)與二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和/或膽固醇(cho1)的混合物；或二甲基二(十八烷基)溴化銨(DDAB)與D0PE和/或chol的混合物的那些。可以改變脂質的比例來最佳化成像劑的攝入效率。脂質體可以包括一種或多種陽離子脂質和一種或多種中性或輔助脂質的混合物。陽離子脂質與中性或輔助脂質的理想比例為約1:(0.5-3),優選約1:(1-2)(摩爾比)。本發明實踐中有用的各種脂質比例的實例包括，但不限于LipAD0TAP/D0PEl:l摩爾比LipBDDAB/D0PEl:l摩爾比LipCDDAB/D0PEl:2摩爾比LipDD0TAP/Cho11:1摩爾比LipEDDAB/Chol1:1摩爾比LipGD0TAP/D0PE/Cho12:1:1摩爾比LipHDDAB/D0PE/Cho12:1:1摩爾比(DOTAP-二油酰三甲磷酸銨，DDAB-二甲基二(十八烷基)溴化銨；D0PE-二油酰磷脂酰乙醇胺；chol-膽固醇)。在一個實施方案中，本發明提供了制備含成像劑的抗體或抗體片段乾向陽離子免疫脂質體復合物的方法，包括制備抗體或抗體片段；將抗體或抗體片段與陽離子脂質體混合來形成陽離子免疫脂質體，其中抗體或抗體片段沒有在化學上與陽離子脂質體綴合；并將陽離子免疫脂質體與一種或多種成像劑混合來形成抗體或抗體片段靶向陽離子免疫脂質體復合物。在合適的實施方案中，抗體片段是單鏈Fv片段，例如，抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv)和抗HER-2抗體或抗體片段。在此描述了用于制備含成像劑的陽離子免疫脂質體的合適脂質的實例，并包括，二油酰三曱磷酸銨與二油酰磷脂酰乙醇胺和/或膽固醇的混合物；或二曱基二(十八烷基)溴化銨與二油酰磷脂酰乙醇胺和/或膽固醇的混合物。合適地，以約1:20至約1:40(w:w)的比例將抗體或抗體片段與陽離子脂質體混合來形成陽離子克疫脂質體。合適地，以約0.1:10至約0.1:35的比例(mg成像劑mg脂質體)，更合適地約1:14至約1:28(mg成像劑jag脂質體)，或約1:21(mg成像劑yg脂質體)將陽離子免疫脂質體與成像劑混合。實例成像劑包括在此所述的以及本領域已知的那些。合適地，成像劑是MRI成像劑，如釓，釓噴葡胺，碘帕醇(例如，ISOVUE,RegionalHealthLimited,Aukland，AU),或氧化鐵；用于CT的鋇，碘和鹽成像劑；和用于PET的18F-2-脫氧-2-氟代-D-葡萄糖(FDG)和其他成像劑。在其他實施方案中，本發明的方法和免疫脂質體復合物進一步包括將陽離子脂質體與包括K[K(H)KKK]5-K(H)KKC(HoKC或HK)(SEQIDNO:1)肽的肽混合。HoKC肽攜帶末端半胱氨酸以允許綴合馬來酰亞胺基團。因此，使用HoKC肽時，脂質體制劑還合適地包括總脂質的0.1至50摩爾百分比的N-馬來酰亞胺-苯基丁酸鹽-DOPE(MPB-D0PE),更優選總脂質的l-10摩爾百分比，最優選總脂質的5摩爾百分比。按照之前所述的制備HoKC脂質體(Yu，W等，Enhancedtransfectionefficiencyofasystemicallydeliveredtumor-targetingimmunolipoplexbyinclusionofapH-sensitivehistidylatedoligolysinepeptide(通過包括pH-敏感性組氨酰鹽化寡賴氨酸肽提高全身傳送的腫瘤耙向免疫lipoplex的轉染效率)，NucleicAcidsResearch32，e48(2004))。在進一步的實施方案中，本發明提供了抗體或抗體片段把向陽離子免疫脂質體復合物，其包括陽離子脂質體，抗體或抗體片段，和一種或多種成像劑，其中抗體或抗體片段沒有在化學上與陽離子脂質體綴合。將抗體或抗體片段通過抗體或抗體片段與脂質體之間的相互作用(例如，靜電，范德華氏力或其他非化學上綴合的相互作用)與脂質體合適地相連，合適地通過抗體或抗體片段上的半胱氨酸殘基和脂質體表面之間的相互作用。通常，連接物或間隔物分子(例如，聚合物或其他分子)不是用來連接抗體和脂質體。可以將成像劑包裹在陽離子脂質體內，包含在陽挺子脂質體的烴鏈片段內，與陽離子脂質體，或其任何組合的內側或外側單層相連。合適地，本發明的陽離子免疫脂質體是單層脂質體(即，單個雙層)，盡管也可以使用包括幾個同心雙層的多層脂質體。本發明的單個雙層陽離子免疫脂質體包括內部含水容積，其中可以包裹試劑(例如，成像劑)。它們還可以包括單個雙層，其具有烴鏈片段(即，脂質的脂鏈片段)，其中可以含有試劑(例如，成像劑)。此外，試劑(例如，成像劑)可以與脂質體膜(即，脂質的頭部基團部分)的內側單層和/或外側單層的任一或兩者復合或相連，例如，通過負電荷成像劑和正電荷陽離子脂質體之間的電荷-電荷相互作用完成。在進一步的實施方案中，可以將試劑(例如，成像劑)包裹/相連/復合于本發明的陽離子免疫脂質體復合物的這些區域中的任一或全部中。在進一步的實施方案中，本發明提供了使患者的器官或組織成像的方法，包括在進行成像之前將本發明的含成像劑的陽離子免疫脂質體復合物給藥于患者。可以通過任何所需的途徑來給藥免疫脂質體復合物，包括，但不限于，靜脈內(IV),口服，局部，通過吸入，肌內(IM)注射，肺瘤內(IT)注射，皮內(ID)注射，腹膜內(IP)注射，鼻內(IN)注射，眼內(10)注射，盧貞內(IC)注射或其他途徑。如在此所用的，術語患者包括動物患者(例如，非人哺乳動物，如狗，貓，豬，綿羊等)以及人。用于患者組織成像的方法是本領域公知的并包括，但不限于，PET掃描，SPECT掃描，MRI成像等。可以使用本發明的方法和復合物使患者的任何組織或器官成像。通過簡單地修飾脂質體上的靶向配體，可以靶向任何超表達的蛋白或分子。合適地，本發明的方法用來使患有或易于患有癌癥的患者的癌性組織成像。可以使用本發明的方法成像的癌性組織包括實體瘤，以及轉移灶。本發明的方法還可以區別癌性組織和非癌性(良性)組織。在進一步的實施方案中，本發明提供了使患有或易患癌癥的患者的腫瘤組織成像并進行治療的方法，包括給藥本發明的含成像劑的免疫脂質體復合物使腫瘤組織成像，并將抗癌劑給藥于患者來治療腫瘤組織o可以給藥的抗癌劑實例包括，但不限于，小分子，蛋白質，肽和化療劑，如在此所述的那些，基因，反義寡核苷酸和siRNA。實例化療劑包括，但不限于，阿霉素，5-氟尿嘧啶(5FU)，順柏(CDDP)，多西紫杉醇(TAX0TERE)，吉西他濱(GEMZAR)，紫杉醇，長春花堿，足葉乙甙(VP-16),喜樹堿，放線菌素-D，米托蒽醌和絲裂霉素C，和抗體治療，如單克隆抗體，例如，HERCEPTIN(Ge讓tech，SanFranciscoCA)。用于本發明實踐中的反義寡核苷酸和siRNA分子的實例包括，但不限于，U.S.公開專利申請No.2003/0044407和2006年9月14日申請的U.S.專利申請No.11/520，796中公開的那些，在此將每篇的公開內容以其整體引入作為參考。其他抗癌劑包括肽，蛋白質和小分子(參見，例如，2006年5月15日申請的U.S.臨時專利申請No.60/800,163和2006年9月14日申請的60/844,352,在此將每篇的公開內容以其整體引入作為參考)。可以將抗癌劑(例如，化療劑，小分子，基因或反義或siRNA等)與還包括成像劑的陽離子免疫脂質體相連，或將其在根據本發明的不同免疫脂質體中，或通過另一個載體或傳送系統(例如，按照正常臨床標準的化療劑IV注射)來分開傳送。在合適的實施方案中，本發明的方法包括在不同的時間給藥包括成像劑(例如，MRI成像劑，如釓噴葡胺)的免疫脂質體復合物和抗癌劑(即，可以同時或在不同的時間給予復合物和試劑)。合適地，在包括成像劑的免疫脂質體復合物之前或之后給藥抗癌劑，(例如，給藥陽離子免疫脂質體復合物至少1小時之前或之后，至少6小時之前或之后，至少12小時之前或之后，至少24小時之前或之后，至少48小時之前或之后等)。在進一步的實施方案中，使癌癥患者的腫瘤組織成像并治療癌癥組織的方法進一步包括給患者給予放療。根據本發明中所含的以及本領域容易獲得的信息，本領域技術人員可以容易地確定人體中合適的抗癌劑(例如，化療劑，基因，小分子，蛋白質，肽，反義寡核苷酸或siRNA等)劑量和給藥時間。此外，通過對動物例如小鼠，大鼠，狗進行的實驗或其他研究的推斷來估算這樣的含量。使用本發明的納米免疫脂質體復合物(scL和scL-HoKC)來包裹和傳送成像劑的示例益處包括由于復合物的腫瘤靶向性質在癌組織中引起的較高濃度。由于復合物在癌細胞中累積，因此從癌特異性成像存在血管流動并擴散至胞間隙的差異(如使用目前臨床中使用的非復合游離成像劑所看到的)。還存在癌對良性過程的差異增強。較長的血管和組織半衰期允許使用本發明復合物的延遲成像。復合物和方法可以用來使不同深度的目標組織成像。因此，本發明的方法和復合物不僅導致腫瘤中提高的信號，而且導致肺瘤內部結構更高的清晰度。更具體地，可以檢測較小的腫瘤，使得能更早得到檢測并因此提高應答/存活。這些復合物還可以用來區分良性和惡性結節。這幫助促進決定什么時候開始治療。目前，由于不確定是惡性的或不是惡性的，通常延遲確定結節是否增大。然而，由于本發明的復合物優選并特異性地轉染腫瘤細胞，這還可以作為惡性腫瘤的證實，例如，在肺CT上看到的小結節是否是小的惡性肺瘤。這最后兩點在肺癌和胰腺癌中是特別重要的。通過使用本發明的含成像劑的復合物可以解決成像問題的癌癥類型實例包括，胰腺癌，早期檢測并與慢性胰腺炎區分開來；早期檢測肺部的轉移性疾病；孤立性肺部結節區分為良性或惡性；乳腺中提高的MR增強的小焦點區域區分為良性或惡性。本發明的復合物還可以用來證實使用該傳送系統，治療劑將更可能進入患者特定的癌細胞。即，舍成像劑的復合物能夠進入細胞的事實，提供了與本發明的復合物相連的治療劑或其他試劑的傳送也將進入這些特定癌細胞的跡象。本領域技術人員將容易地得知可以形成在此所述的方法和應用的其他合適的修飾和改進，而沒有脫離本發明的范圍或其任何的實施方案。已經詳細地描述了本發明，通過參照以下的實施例將更清楚地理解，在此包括這些實施例只是用于說明的目的，并不是用來限制本發明。具體實施方案實施例1逸括船^eWW的名^^^沐復合參材料和方法細胞系從LombardiComprehensiveCancerTissueCulture核心機構獲得人淋巴細胞性白血病細胞系K562。將這些懸浮細胞維持于補充10%熱滅活FBS加2mML-谷氨酰胺，青霉素，鏈霉素和新霉素各50yg/ml的RPMI164G中。從胰腺的轉移性腺癌產生人胰腺癌細胞系CaPan-1(從ATCCManassas,VA獲得)。將其維持于含有4mML-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，補充20%非熱滅活的FBS，2mML-谷氨酰胺和青霉素，鏈霉素和新霉素各50pg/ml的Iscov，sModifiedDulbecco，sMedium中。最初從廣泛轉移性前列腺癌患者的腦損傷中產生人前列腺癌細胞系DU145(ATCC，Manassas,VA)。將其維持于補充10%熱滅活的FBS加L-谷氨酰胺和如上所述的抗體的含有Earle，s鹽的最小必需培養基(EMEM)。納米復合物形成按照之前所述的乙醇注射方法制備陽離子脂質體(DOTAP:DOPE)(參見U.S.公開專利申請系列No.2003/0044407;XuL等，#o/ecw7"Ca/cerr/era;eu〃"1:337-346(2002),將每篇的公開內容引入作為參考)。傳送質粒DNA時，以之前所述的相同方式形成完整的復合物(參見U.S.公開專利申請系列No.2003/0044407)。為了包裹用于體外使用的成像劑，將,TfRscFv以特定的比例與脂質體混合，并在室溫孵育10分鐘。將Magnevist⑧加入該溶液中，混合并再次在室溫孵育IO分鐘。存儲在2-8'C時，復合物至少穩定8天，如使用MalvernZetasizer3000H通過尺寸測量所確定的。隨著該時間框架測量的累積量(Z平均)平均是112.3土4.67(S.E.)，而多分散性(表示重復掃描過程中的值的再現性)是0.445土0.03。納米復合物的可接受尺寸范圍是約20至1000nm，合適地為約50至700nm，更合適地約100至500nm。對于體外轉染，在轉染之前，將2ml無血清培養基加入復合物中。對于體內使用，使用上述方法以lmg成像劑比0.33-1.17ngTfRscFv比10-35yg脂質體的比例形成復合物(合適地lmg成像劑比0.5至L0jLigTfRscFv比14-28jug脂質體，最合適地lmg成《象劑比0.71|agTfRscFv比21jug脂質體)。用于體內使用而制備時，加入葡萄糖至5°/。的終濃度。體外轉染為了轉染懸浮細胞K562，將使用除了血清的所有補充物的4.Oml總體積培養基中的15xl(f細胞置于100mni2組織培養皿中。將2ml含有不同含量的Magnevist的上述轉染溶液加入細胞懸浮液中。將平板在37'C孵育，輕柔搖晃，持續結果部分中給出的時間長度(高達90分鐘)，此后將細胞在4。C在0.5ml微量離心管中溫和沉淀(600xg7分鐘)，并用10ml無血清培養基洗滌三次來除去任何過量的轉染溶液并置于濕冰上直至成像。體內腫瘤耙向為了測定TfRscFv-Lip納米復合物對原發性和轉移性腫瘤的腫瘤選擇性靶向，使用了原位轉移模型，該模型使用了人胰腺癌細胞系CaPan-l。通過注射懸浮于Matrigel膠原基底膜基質(BDBiosciences)中的1xl07CaPan-l細胞誘導雌性無胸腺小鼠中的CaPan-l的皮下異種移植腫瘤。大約八周后，收集腫瘤并制備腫瘤的單細胞懸浮液。將同樣懸浮于MatrigerM中的1.2-1.5x107細胞注射至雌性無胸腺小鼠外科手術暴露的胰腺中。手術后五周，將攜帶LacZ基因的復合物在24hr內靜脈注射3X(40ygDNA/注射)。60小時后，將動物處死并使用之前所述的方法檢查轉移的存在和對于P-半乳糖苷酶表達染色的器官(Xu,L等，A/則"Ce/7e7Tera/7/10:2941-2952(1999))。MRI成像對于體外MRI成像，將微量離心管中的細胞沉淀置于磁鐵的中心。在霍華德大學使用4.7T水平孔NMR機器(VarianInc，PaloAlto,CA)進行MR成像。成像實驗方案包括多薄片Tl-加權自旋回聲成像序列和飽和回收序列。對于Tl-加權成像技術，重復時間(TR)為1000ms,回聲時間(TE)為13ms。應用Tl-加權自旋回聲成像技術來證實正向成像增強。將使用不同回聲時間的飽和-回收MR次序用于Tl測量。圖像的切片厚度為0.5腿。所用的RF巻是30mm單環巻。RF巻用作RF發射器和接受器。RF脈沖是選擇性的5mssinc脈沖。相編碼步驟的數量是256。視場是15腿x15mm。研究中選擇的影像區位于RF巻的中心，用于RF均勻性。在微量離心管的截面方向獲取MR圖像。細胞沉淀的高度是12mm。多切片圖像的范圍覆蓋整個沉淀物。將中心切片的圖像用于研究，該圖像沒有受到由于從空氣-沉淀邊界的靈敏度影響《1起的圖像變形的影響。使用Varian圖像預覽軟件測量圖像強度。從目標區域獲取信號，其足夠大來覆蓋取自每個微量離心管的三分之二圖像。將來自這些管的沉淀的相對圖像強度用于反差增強評價和Tl測量。對于體內研究，使用帶有CaPan-l原位肺瘤或DU145皮下異種移植肺瘤的小鼠。如上所述誘導CaPan-1肺瘤。通過皮下接種Matrigel中的7x106細胞來誘導DU145腫瘤。在喬治敦大學進行這些研究。麻醉待成像的動物并置于專有的室內設計的動物管理系統。該系統引入溫水加熱系統，將溫度維持于37C,以及四通道熱光學監控系統，用來監控動物的皮膚溫度，環境溫度和裝置的壁溫。為了成像，使用4%異氟烷誘導麻醉，剩余的氣體由66%氧和30%—氧化二氮混合構成。使用1.5%異氟烷在所述的相似氧和一氧化二氮的氣體條件下獲得麻醉的維持。將麻醉的動物置于圓柱狀可變放射頻率共振天線內部(鳥籠共振器體積型線圏)并調諧至大約300MHz的中心頻率(水分子接受7特斯拉場強時的共振頻率)。所用的成像實驗方案是在7TBrukerBioSpin(Germany/USA)成像控制臺上進行的Tl加權TurboRARE(快速獲取快速增強)三維成像序列。所用的成像參數是Tl加權Turbo-RARE3D(3-維)，TE13.3ms,TR229.5，Flipbackon，具有8.0/3.5/3.5cm的視場和256x256x256矩陣的4個回聲波。獲取基線圖像后，將動物保持固定于動物支架中并使用27G針通過靜脈內注射至動物的尾靜脈中來全身給藥Magnevist(用lx磷酸鹽緩沖的鹽水pH=7.4稀釋至400m1)或含有Magnevist⑧的免疫脂質體復合物(TfRscFv-Lip-Mag)(總體積400jnl)并立即開始3-D成像序列。在連續天數進行使用兩種溶液的成像。掃描電子顯微鏡術(SEM)在GUMC制備脂質體包裹的Magnevist⑧造影劑的樣本溶液，和由覆蓋脂質體包裹的復合物的腫瘤靶向單鏈轉鐵蛋白受體蛋白構成的完整納米復合物，TfRscFv-Lip-Mag，傳送至NIST并在黑暗冷藏下存儲。對于每個成像部分，用去離子水制備1:3體積的新鮮稀釋液并將5jaL小滴微量注射至由30-60nm聚醋酸甲基乙烯脂和15-20nm碳構成的標準200-目TEM網格上。在裝載于顯微鏡的真空室之前使小滴在網格上空氣干燥5分鐘。在NIST使用HitachiS-4800場發射顯微鏡進行成像。特別有興趣的是SEM應用于NDA成像是上側和下側二次電子檢測儀[SE(U)和SE(L)]—使用常規模式的SEM--與添加發射電子(TE)檢測儀的比較，將設備轉化成低電壓STEM。掃描探針顯微鏡術(SPM)在GUMC制備脂質體包裹的Magnevist⑧造影劑的樣本溶液，和完整納米復合物，傳送至NIST并在黑暗冷藏下存儲。對于每個成像部分，用去離子水制備l:3體積的新鮮稀釋液并將5nl小滴微量注射至超聲波清洗的硅基質上，使用天然氧化物或聚L賴氨酸涂布該基質。使用具有NanoscopeIV控制儀的VeecoMultiMode顯微鏡獲得SPM成像。以生活模式進行通過帶有Z控制的敲擊模式(VeecoRTESP懸臂，~320-360kHz和k~20-60N/m)的地形學、相成像和使用磁覆蓋的尖端的磁力顯微鏡(VeecoMESP68kHz)。隨著溶液蒸發來暴露分離的納米顆粒和聚集物的去濕和表面能量"相分離"的動態成像用來理解溶劑干燥對顆粒穩定性的結果及其對使用SPM系統可獲得的各種SPM造影機理的影響。結果通過攜帶報告基因的配體-脂質體納米復合物的腫瘤特異性靼向為了評估TfRscFv-L〖pA納米復合物對原發性腫瘤和轉移瘤的選擇性靶向，使用原位轉移模型，臨床情況的接近近似法，使用人PanCa細胞系CaPan-1。將CaPan-1異種移植腫瘤部分外科原位植入棵鼠中已經顯示出在56天內在肝臟和脾臟中產生了轉移(Alisauskus，R.等，Ca/7cerWe"arc力55:5743a-5748s(1995))。按照方法中所述的在雌性無胸腺棵鼠中誘導CaPan-1的原位腫瘤。大約5周后，使動物安樂死并尸檢來尋找胰腺和其他器官中的腫瘤。如圖1A中所示的，在整個胰腺中廣泛的胂瘤生長是明顯的。1A中剪頭所示的肝臟中的相同腫瘤結節呈現出1B中強烈的P-半乳糖苷酶表達。1A-尸檢；1A=P-半乳糖苷酶染色后的組織。五只小鼠中的四只的各種器官中存在轉移瘤，包括脾臟，肝臟，肺，腎上腺，甚至在隔膜內。重復該實驗，獲得相似的結果。為了建立選擇性靶向腫瘤和轉移瘤，在處死小鼠之前，將攜帶用于P-半乳糖苷酶表達的pSVb(LacZ)質粒DNA的TfRscFv-LipA復合物靜脈注射至小鼠中，在24小時內三次(每次注射40jug質粒DNA)。注射后60小時將全部五只小鼠處死并收集各種器官，包括肝臟，肺，脾臟和隔膜，檢測轉移瘤和腫瘤特異性染色的存在。用X-gal將切成lmm厚度的新鮮樣本染色以在表達基因的地方產生藍色。通過該動物各種器官中的報告基因的存在證明了復合物的腫瘤靶向能力和高轉染效率(圖1B)。在肝臟，肺，腎上腺和隔膜中，清楚地顯示了報告基因只在轉移瘤中高度表達，盡管在鄰近正常組織中沒有明顯的藍色。圖1A肝臟中可見的轉移瘤(箭頭)是圖1B中強烈表達p-半乳糖苷酶的相同腫瘤結節(箭頭)，證實了該納米復合物的肺瘤特異性性質。在一些小鼠中，胰腺中腫瘤的生長還導致了用于植入的整個最初切口部分的腫瘤突出。在圖1B中，還顯示了由正常非染色皮膚圍繞的該強烈藍色染色的皮下腫瘤，再次顯示了肺瘤細胞特異性。在剩余的小鼠和重復的實驗中觀察到相似的結果，因此，這全身給藥的納米復合物將靶向原發性和轉移性的腫瘤細胞，不管它們是在體內何處產生，都能有效地傳送質粒DNA。我們希望擴展該傳送系統的潛能來包括造影劑。這種能力將導致提高的成像和癌癥檢測。使用TfRscFv-Lip復合物傳送Magnevist⑧的體外研究因為Magnevist⑧是臨床中最常用的造影劑之一，因此選擇用于這些研究中。在這些最初的實驗中，檢測復合物是否能用Magnevist制備以及這樣做是否可以提高MRI信號。因為胰蛋白酶處理將導致膜損壞和造影劑從細胞中漏出，因此在這些研究中沒有使用附著細胞。替代的是，使用了人淋巴細胞性白血病細胞系，K562，其作為懸浮培養物生長。此外，在成像之前細胞的柔和沉淀和洗滌將除去任何過量的Magnevist⑧或復合物，使得只檢測與細胞相關的信號。1.通過TfRscFv-Lip-Mag納米復合物的時間依賴性成像提高檢測了TfRscFv-Lip-Magnevist⑧納米復合物轉染的最佳時間。建議的Magnevist⑧臨床劑量為0.lmMole/kg。在這些最初的研究中，使用了每250n1轉染溶液0.3mMole/kg的復合物劑量(對小鼠對人的較小體重和血液體積校正)。將K562細胞轉染20至90分鐘的時間。基于成像強度，二十分鐘顯示了非常低的轉染活性。然而，如圖2A中所示的，六十分鐘時，用復合物轉染的細胞顯示出強度的大量提高，與未處理的細胞相比較。未處理細胞的強度(202±48)與空標記管(194士43)的沒有顯著差異，表明細胞自身沒有引起檢測到的信號。更重要地，在大約60分鐘時轉染效率出現了平穩狀態，因為細胞轉染60和90分鐘的相對強度是相同的(各自為317±46和317±47)。2.Magnevist⑧劑量依賴性成像提高使用60分鐘作為轉染時間，然后測定了遞增含量的Magnevist對TfRscFv-Lip-Mag復合物成像提高的影響。測試的劑量為0.05，0.3和0.9mMole/kg。對小鼠的大小和血液體積進行校正，每250)al轉染溶液的復合物中使用的Magnevist⑧體積為0.25ja1,1.5m1和4.5jj1。如圖2B和表1中所示的，作為復合物中包括的造影劑含量的函數，圖像強度提高且T1張弛時間縮短。表l:作為免疫脂質體復合物中Magnevist⑧函數的相對強度和Tl張弛時間<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>3.與游離Magnevist⑧相比較TfRscFv-Lip-Mag的成4象提高基于上述實驗，顯示了TfRscFv-脂質體可以與Magnevist⑧復合并將其傳送至細胞用于圖像增強。為了測定復合的造影劑與單獨試劑相比較的增強水平和證明所獲得的信號不是由于未引入的Magnevist⑧的存在所引起的，用游離Magnevist⑧或TfRscFv-Lip-Mag納米復合物處理K562細胞。對于兩種溶液，使用相同含量的造影劑(0.3MM/kg或1.5Ml/250Ml轉染體積)和轉染時間(60分鐘)。盡管如所預期的，游離的Magnevist⑧相對于未處理的細胞顯示出提高的反差，用TfRscFv-Lip-Mag復合物處理的細胞證明了與未處理的和游離Magnevist⑧處理的細胞相比較圖像強度更大的提高并縮短了Ti張弛時間(圖2C，表2)。這些結果不僅證明了通過靶向納米復合物提高的造影劑攝入效率，而且表明所觀察到的信號很可能不是由未復合的Magnevist⑧引起的。表2:游離和免疫脂質體復合的Magnevist⑧之間的相對強度和Tl張弛時間的比較<table>complextableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>使用TfRscFv-Lip-Mag的體內圖像增強以上的研究確定了納米復合物體外成像腫瘤細胞比Magnevist單獨更有效。然而，為了具有臨床使用的可能，復合物必須在體內呈現出相似的效果。將相同的人胰腺癌原位小鼠模型(CaPan-l)用于這些研究，和以上的一樣來證明攜帶報告基因的復合物的腫瘤特異性靶向。此外，還使用了第二種腫瘤模型，皮下前列腺異種移植小鼠模型(DU145)。按照"方法"部分所述在7TBrukerNMR上使帶有CaPan-l或DU145腫瘤的小鼠成像。一旦置于線圏中，使用Tl加權TurboRARE(快速獲取快速增強)三維成像序列獲得基線圖像。為了促進圖像比對，基線獲取后，將動物維持于動物支架中，同時通過靜脈內注射給藥成像溶液。在注射三分鐘內開始信號獲取。給藥于小鼠的游離(和臨床中進行的一樣)或包括于復合物中的Magnevist⑧含量為10|liL。該含量等于0.2mM/kg或人體中所用的兩倍。選擇該含量是因為標準的0.lmM/KgMagnevist⑧單獨人劑量在小鼠中獲得了非常差的信號。在連續的兩天進行游離Magnevist⑧和TfRscFv-Lip-Mag復合物的成4象。還在給藥納米復合物之前進行了基線掃描來證實前一天的所有Magnevist⑧已經排出。兩組圖像之間的MR4支術和窗口是一致的，調節窗口以對于掃描儀的自動化窗口特征來校正。圖3A-1中顯示了三個獨立小鼠中Magnevist⑧和納米復合物-Mag的圖像。圖3A，3D和3G中，外科植入CaPan-l腫瘤細胞后四個月，動物攜帶大的原位胂瘤。與單獨造影劑相比較，提高的分辨率和信號強度非常明顯。在帶有CaPan-1腫瘤的第二種小鼠中觀察到相似的結果，顯示于圖3B,3E和3H中。手術后只有兩個月的該動物在整個切口部位具有明顯的皮下肺瘤生長。通過觸診還檢查到小的異常腫塊。不僅是給藥復合的Magnevist⑧后皮下腫瘤的信號更強，而且在該掃描中，顯示出小的原位腫瘤(箭頭)是明顯的，而接受Magnevist⑧的動物中卻不是這樣。相似地，與游離Magnevist⑧相比較，注射TfRscFv-Lip-Mag復合物后，皮下DU145腫瘤中提高的清晰度和反差是明顯的(圖3C，3F和31)。在表示兩個不同腫瘤模型胰腺癌(CaPan-l)和前列腺癌(DU145)的圖3B，3E和3H以及3C，3F和31中的圖像上進行重建和定量。在兩種情況中，如所預期的，游離Magnevist⑧存在超過基線增加的強度(像素)。然而，成像劑通過腫瘤靶向納米復合物的傳送導致這兩個腫瘤模型中信號強度幾乎再三倍的增強。因此這些研究證明了將Magnevist⑧摻入TfRscFv-脂質體復合物中時，在體內情況中存在提高的腫瘤可視性，它們表明進一步研發這種腫瘤檢測方法用于臨床使用的潛在用處。物理表征研究盡管體外研究給予了將復合Magnevist⑧包裹于脂質體內的證據，而復雜的顯微鏡技術(SEM和SPM)已經證實了TfRscFv-Lip-Mag的這一和更多的特征(例如，復合物尺寸)。1.沒有Magnevist⑧的脂質體的成像高分辨率成像意味著窄的景深，并因此需要相對薄而平的樣本。薄的程度根據技術而改變，但是表面和基底效應一表面能量和對稱降低--通常主導了生物材料典型的結構力。這在脂質體的情況下尤其如此，給予了它們的纖細特性(Foo，J.J等，j/maho/A/o/z/^/2'ca/'"ee"./^31:1279-1286(2003))。因此理解用于制備和表征分離脂質體的二維和機械穩定性的可靠方法是一個必需的步驟。該表征的目的是進行納米顆粒的機械硬度和磁性特征的直接檢測，以確定造影劑是否真正地包含于納米顆粒內而并不是與脂質體簡單地在外部相連。通過以敲擊模式振動尖端和與其連接的懸臂的SPM圖像表面地形與懸臂共振頻率接近。反饋回路以恒定的振幅維持懸臂的振動。以設定值給出該恒定的振幅，其稍小于自由擺動的懸臂。因為SPM尖端通過各種小力與表面相互作用，在懸臂激發和表面上給定點的應答之間存在相移。對于不均勻的表面，尖端-表面相互作用將根據例如表面電荷，陡峭地形變化和機械硬度變化而改變。通過改變設定值和觀察特定的特征怎樣應答更柔軟或更堅硬的敲擊，我們可以將這與對特定結構如脂質體預期的應答相關聯。(自由的振幅信號大約為1.78V)。圖4A-C中示出了的一對沒有有效載荷的分離脂質體的SPM相圖的序列。圖4A是在1.68V的設定值成像的并且基質和脂質體之間的相應負相差異表示尖端-樣本相互作用對于脂質體吸引，以-3.5度的相值給出。在吸引相互作用和負相的情況中，脂質體的相圖顯示出暗色的，除了在脂質體邊緣的地形上關鍵的環。圖4B證明了將設定值降至1.45V的效果脂質體現在顯示出是亮色的，因為尖端-樣本相互作用變成排斥了，并且在該情況中，脂質體和基質之間的相差是+8度。最后，圖4C顯示出在1.35V的設定值記錄的相差進一步提高，變成+35度。2.脂質體包裹的Magnevist⑧的成4象圖5A-C表示分離的脂質體包裹的Magnevist(Lip+Mag)納米顆粒的SPM和SEM圖像。單個Lip+Mag顆粒的尺寸分布是100-200nm直徑并且根據光學測定的分綵表明包泉有效栽荷的脂質體大約比球狀的單獨脂質體大5G%。圖5A中顯示的SPM地形表明含有Magnevist⑧的脂質體在干燥后具有雙峰表面形狀，比不含有有效載荷的脂質體的簡單橢圓表面的(未顯示)更復雜。SPM相行為與無有效載荷的脂質體顯著不同，外環相對于中心是排斥的，圖5B中顯示了相應的SPM相圖。吸引和排斥的尖端-樣本相互作用的部分在中等設定值出現。1.6設定值處獲得的SPM相圖和TE模式中的SEM圖之間的相關性在圖5B和5C中是明顯的。SEM圖中脂質體在整個顆粒顯示出均勻的亮度(未顯示)，與我們通過SPM獲得的均勻相圖相似。尖端和懸臂隨時間和用途改變。此外，重要的是證實產生的圖像沒有受到由于尖端上的外源材料引起的尖端不穩定性的影響。因此，將它們頻繁改變。由于每個懸臂對于其共振特性稍有不同，因此圖4和5中所用的設定值不同。3.TfRscFv-Lip-Mag納米復合物的成像按照方法中所述的制備完整的TfRscFv-Lip-Mag納米復合物并通過SEM和SPM成像。圖6A和6B中所示的結果表明溶劑膜經受了相分離；然而，可以在干燥的膜上容易地觀察到分離NDS的實例。注意到SEM束清楚地引起膜的一些損壞，但是可以在束損壞變得明顯之前將顆粒重復掃描幾次。完整復合物的外觀不同于只有(Lip+Mag)的情況。形狀不太規則，并且干燥后脂質體表面顯著的組織化與蛋白質變性相一致。此外，SEMTE圖像表明脂質體的外環與中心之間清晰的界限，而(Lip+Mag)顆粒看到的;不太明顯，并且形狀變化更大。這與脂質體內蛋白質的存在改變了膜干燥過程中穿過脂質體的滲透外流物的觀點相一致。使用SPM(MFM)的磁力顯微成像能力可以獲得關于這些NDS顆粒的其他信息。因為含釓Magnevist⑧的磁矩非常大，應當可以使用磁化的SPM尖端來與脂質體內濃縮的定向Magnevist⑧相互作用。對于幾個大約10-200mn直徑納米顆粒的MFM，顯示于圖7A和7B中。使用SPM的上升模式能力，確定了產生的圖像在本質上確實是磁性的。在該模式中，獲得了正常敲擊模式條件下的地形圖。然后使用參照表面信息將尖端偏移遠離表面的特定高度，然后在該提高的高度掃描表面。這除去了地形對信號的影響。通過磁相圖像給出了離開表面15nm或更高高度處以升高模式獲得的MFM圖像。信號的出現證實了復合物內包裹的釓的存在。圖7A是完整的TfRscFv-Lip-Mag納米復合物的SPM地形/磁相圖像。圖7B中由吸引和排斥平面磁相互作用構成的雙偶極子樣信號的出現表明該相互作用的誘因是NDS內Magnevist⑧的不均勻環形分布，與SEM和非磁SPM相圖相一致。討論在此所述的結果證明了我們可以包裹常用的MR成像劑Magnevist⑧并將其在體外或在原位動物模型中傳送至腫瘤細胞，并且這樣做產生了比用未復合的Magnevist⑧看到的更清晰而強烈的圖像。如圖1中所示，本發明的納氷復合物可以靶向轉移性疾病，因此提高轉移瘤的檢測靈敏度。使用SEM和SPM,證明了TfRscFv-脂質體復合物在包裹Magnevist⑧時維持了納米尺寸(圖6和7中顯示了大約100-200nm的顆粒)。已經證明了含有有效載荷的脂質體的結構和機械特征顯著不同于不含的那些，因此證實了脂質體確實包裹了Magnevist⑧。通過復合物的MFM成像進一步證實了這一點。不希望受到以下理論的束縛，(Lip+Mag)內部結構的嘗試性解釋是SPM地形圖中的微小突出部分表示脂質體限定的相位分離，即，圍繞顆粒外周密集的Magnevist⑧-脂質環形分布的形成，在顆粒中心的水相優先。這種應答可能是由于幾個重要的因素引起的首先，根據制造商，Magnevist⑧溶液的特征是pH~6.5-8，1,960的摩爾滲透壓濃度和20。C時4.9的粘度。Magnevist⑧數據單中標注的該溶液分離的似是而非的化學基礎葡曱胺鹽完全從復合物中分離出來，因此改變了局部滲透條件。外加與釓復合物和陽離子脂質體的電荷相互作用，這些相互作用可以提供強烈的驅動力，使脂質體內的高滲相分離。在穩定脂質體和提供溶液中的結構支持時，陽離子脂質體和Magnevist溶液之間的電荷分布是有效的，并且在血流中是明顯的。這種提高的結構支持對于這些研究有重要的益處，因為這允許大部分顆粒在膜干燥過程中保持完整，與使用只有脂質體的溶液觀察到的大范圍的分解相反。之前的實施例證明了本發明的免疫脂質體復合物中MR造影劑的成功包裹。通過復合物證明的超過常規傳送的Magnevist⑧的圖^f象增強表明該系統提高了通過MRI的癌癥早期檢測的能力。實施例2不/^7細y敏^哞的成豫化較圖8A-8H顯示了兩個不同癌癥模型中使用配體-HK-脂質體-Mag納米復合物的提高MR成像。使用實施例1中所示的相同比例和方法制備該實施例中所用的納米顆粒。在雌性無胸腺小鼠的下背部皮下注射人乳癌MDA-MB-435(圖8E-8H)或人前列腺癌細胞系(DU145)(圖8A-8D)。將游離的Magnevist,或TfRscFv-脂質體納米復合物(scLip-Mag)，或包含HoKc肽和相同劑量Magnevist⑧的TfRscFv-HK-脂質體納米復合物(scLip-HK-Mag)連續分別三天靜脈注射(通過尾靜脈)注射至三只小鼠中。Magnevist⑧的該含量是等于給藥于人患者劑量的兩倍。所有情況中給藥的溶液總體積是400ia1。就在給藥兩種納米復合物之前進行基線掃描來證實來自前一天的所有Magnevist⑧已經排出。四組圖像之間的MR技術和窗口是不變的，調節窗口以對掃描儀的自動化窗口特征進行校正。圖顯示出帶有皮下腫瘤的小鼠中MRI信號的差異，其中在前列腺腫瘤(DU145)(圖8A-8D)和乳腺腫瘤(435)(圖8E-8H)中注射scLip-Mag后提高的清晰度和反差是明顯的，注射scLip-HK-Mag后甚至更明顯。圖9A-9C顯示了CaPan-l皮下腫瘤和原位轉移瘤模型通過TfRscFv-HK-脂質體-Mag納米復合物的肺瘤特異性靶向。按照實施例1的方法中所述的在雌性無胸腺小鼠中誘導皮下CaPan-l異種移植胂瘤。收集腫瘤并將MATRIGEL⑧中的單個細胞懸浮液注射至外科手術暴露的胰腺中。注射后八周，將攜帶Magnevist⑧的含有或不含HoKC(HK)肽的TfRscFv-脂質體復合物連續兩天注射至小鼠中。在所有情況中給藥溶液的總體積為400m1。就在給藥納米復合物之前進行基線掃描來證實來自前一天的所有Magnevist⑧已經排出。三組圖^象之間的MR4支術和窗口是不變的，調節窗口以對掃描儀的自動化窗口特征進行校正。與圖8A-8H相似，觀察到皮下腫瘤(白色箭頭)和轉移性損害提高的成像分辨率，如表3中所示的。表3:游離和復合的Magnevist⑧超出基線的強度增加<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>實施例3全jS射游庠廣^茇合時,減7YXSW^-"p-#a^2eW"^犮T進行以下實驗來比較全身傳送后胂瘤中游離(未復合的)和TfRscFv-Lip-Mag之間的攝入和排出的速率和水平。通過注射懸浮于MatrigerM膠原基底膜基質(BDBiosciences)中的2x107PANC-1細胞在雌性無胸腺小鼠中誘導PANC-1的皮下異種移植胂瘤。大約2.5-3周后，將動物用于成像。按照之前所述的通過乙醇注射方法制備陽離子脂質體(D0TAP:DOPE)(參見U.S.公開專利申請No.2003/0044407;XuL等，Ca刀cer7Terflpe"〃"1:337-346(2002)，將其公開內容在此引入作為參考)。這些研究中所用的靶向部分是抗轉鐵蛋白受體單鏈抗體片段(TfRscFv)。為了包裹成像劑，將TfRscFv與脂質體以一定的比例混合并在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-20分鐘，最合適10-12分鐘。將Magnevist⑧加入該溶液中，混合并再次在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-20分鐘，更合適地10-12分鐘。當制備用于體內使用時，加入蔗糖或葡萄糖至0.5-50%的終濃度，合適地1-20%，最合適地對于蔗糖為10%,對于葡萄糖為5%，并在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-25分鐘，最合適15-20分鐘。使用上述的方法以lmg成像劑比0.33-1.17|agTfRscFv比10-35pg脂質體的比例(合適地lmg成像劑比0.5-1.OpgTfRscFv比14-28mg脂質體，最合適lmg成像劑比0.71jugTfRscFv比21yg脂質體)形成復合物。可接受的復合物尺寸范圍為約20至IOOO認，合適地約50至700nm，最合適約100至500nm。在此使用4.7mgMagnevist，99pg脂質體和3.3|agTfRscFv,使用終濃度為5%的葡萄糖形成復合物。將如上所誘導的帶有PANC-1皮下腫瘤的小鼠麻醉并置于動物支架系統中。使用4%異氟烷誘導麻醉，剩余氣體包括66%氧和30%—氧化二氮混合物。在所述相似的氧和一氧化二氮的氣體條件下使用1.0至2.0%(優選1.5%)異氟烷獲得麻醉的維持。將麻醉的動物置于圓柱狀可變放射頻率共振天線內部(鳥籠共振器體積型線圏)并調諧至大約300MHz的中心頻率(水分子接受7特斯拉場強時的共振頻率)。所用的成像實驗方案是在7TBrukerBioSpin(Germany/USA)成像控制臺上進行的Tl加權TurboRARE(快速獲取快速增強)二維成像序列。所用的成像參數是T1加權2D(2-維)，TE10.21ms，TR420.3，Flipbackoff,具有5.12/5.12cm視場的8個回聲波。獲取基線圖像后，將動物保持固定于動物支架中并使用27G針通過靜脈內注射至動物的尾靜脈中來全身給藥游離(未復合的)Magnevist(Mag,或在此的gad-d)或含有相同含量Mag的TfRscFv-Lip-Mag(總體積50-1000p1，合適地IOO-500pl,最合適200-400m1)并立即開始成像序列。在兩小時內周期性地重復掃描(平均值2，1.3分鐘)，并測量和繪制^f象素強度。相同的小鼠用于游離和復合物的成像。在連續的天數里進行成像，首先使用游離的Mag。如圖10中所示的，與游離的成像劑相比較，靜脈內注射復合物后，腫瘤中存在顯著較高水平的信號。更重要地，在實驗的時間過程中保持了該較高的水平。實施例4if^7yV^c/V-Z2';-^Ar-他^eF2'W檢承yCaa/-JW^f掙移進行以下實驗來評估本發明的TfRscFv-Lip-HoKC-Mag復合物檢測和提高轉移性腫瘤的成像的能力。例如，檢測了來自胰腺癌的轉移瘤，然而，使用本發明的復合物和方法可以獲得來自任何類型的癌癥的轉移瘤的成像(例如，前列腺，黑素瘤，腎，乳腺，胃，肝，卵巢，膀胱，頭頸，腦，骨頭和任何其他類型的實體腫瘤)。通過注射懸浮于MatrigerM膠原基底膜基質(BDBiosciences)中的0.5至1xio7CaPan-1細胞在雌性無胸腺小鼠中誘導CaPan-l的皮下異種移植肺瘤。大約八周后，收集腫瘤并制備腫瘤的單細胞懸浮液。按照之前所述的將同樣懸浮于MatrigerM中的1.2-1.5x107細胞注射至雌性無胸腺小鼠外科手術暴露的胰腺中(Alisauskus，R.，G.Y.，和Gold,D.V.，InitialstudiesofmonoclonalantibodyPAM4targetingtoxnograftedorthotopicpancreaticcancer(耙向異種移植的原位胰腺癌的單克隆抗體PAM4的初步研究)，"/cerA"earc力55，5743s-5748s(1995))。通過之前所述的乙醇注射方法制備陽離子脂質體(DOTAP:DOPE)(參見U.S.公開專利申請No.2003/0044407;XuL等，#o7ec"/arCa/cerr力era/7ew〃"1:337-346(2002)，將其7>開內容引入作為參考)。HoKC肽{K[K(H)KKK]5-K00KKC}(SEQIDNO:1)帶有末端半胱氨酸以允許綴合馬來酰亞胺基團。因此，使用HoKC肽時，脂質體制劑還包括總脂質的0.1至50摩爾百分比，更優選總脂質的1-10摩爾百分比，最優選總脂質的5摩爾百分比的N-馬來酰亞胺-苯基丁酸鹽-DOPE(MPB-DOPE)。如前所述地制備HoKC脂質體(Yu，W等，Enhancedtransfectionefficiencyofasystemicallydeliveredtumor—targetingimmunolipoplexbyinclusionofapH-sensitivehistidylatedoligolysinepeptide(通過包括pH敏感性組酰氨鹽寡賴氨酸肽提高的全身傳送的腫瘤靶向免疫lipoplex的轉染率)，#wc/eycv4c/&32，e48(2004))。這些研究中所用的耙向部分是抗轉鐵蛋白受體單鏈抗體片段(TfRscFv)。為了包裹成像劑，將TfRscFv與脂質體以特定的比例混合并在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-20分鐘，最合適地10-12分鐘。將Magnevist⑧加入該溶液中，混合并再次在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-20分鐘，最合適10-12分鐘。當制備用于體內使用時，加入蔗糖或葡萄糖至0.5-50%的終濃度，合適地1-20%,最合適地對于蔗糖為10%,對于葡萄糖為5%,并在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-25分鐘，最合適地15-20分鐘。使用上述的方法以lmg成像劑比0.33-1.17jugTfRscFv比10-35|ag脂質體-HoKC的比例(合適地lmg成像劑比0.5-1.0ugTfRscFv比14「28ng脂質體-HoKC，最合適lmg成像劑比0.71mgTfRscFv比21mg脂質體-HoKC)形成復合物。可接受的復合物尺寸范圍為約20至1000nm,合適地約50至700nm,最合適約100至500nm。在此使用4.7mgMagnevist，99|ag脂質體和3.3jngTfRscFv,使用終濃度為5%的葡萄糖形成復合物。將帶有以上誘導的CaPan-l原位腫瘤的小鼠(大約外科手術植入腫瘤細胞后12周)麻醉并置于動物支架系統中。使用4%異氟烷誘導麻醉，剩余氣體包括66%氧和30%—氧化二氮混合物。在所述相似的氧和一氧化二氮的氣體條件下使用1.0至2.0%(優選1.5%)異氟烷獲得麻醉的維持。將麻醉的動物置于圓柱狀可變放射頻率共振天線內部(鳥籠共振器體積型線圏)并調諧至大約300MHz的中心頻率(水分子接受7特斯拉場強時的共振頻斧)。所用的成像實驗方案是在7TBrukerBioSpin(Germany/USA)成4象控制臺上進行的Tl加權TurboRARE(快速獲取快速增強)三維成像序列。所用的成像參數是Tl加權Turbo-RARE3D(3-維)，TE13.3ms，TR229.5ms，Flipbackon,具有8.0/3.5/3.5cm視場和256x256x256矩陣的4個回聲波。獲取基線圖像后，將動物保持固定于動物支架中并使用27G針通過靜脈內注射至動物的尾靜脈中來全身給藥TfRscFv-Lip-HoKC-Mag(總體積50-1000|il，合適地100-500|al,最合適200-400m1)并立即開始3D成像序列。成像后，將動物安樂死并目測轉移瘤的存在。使用本領域普通技術人員公知的方法取出肝臟，固定于福爾馬林中，石蠟包埋，切片并使用H&E染色。通過顯微鏡檢查切片并拍攝觀察到的轉移瘤。圖11A-11A:圖11A:造影前。圖11B:TfRcFv-Lip-HoKC-Mag注射，圖11C:組織學。原位胰腺癌顯示了使用TfRcFv-Lip-HoKC-Mag的提高(短的白色箭頭)。連接在較后面切片上的用短的白色箭頭表示的兩個區域并表示最初原位的腫瘤。以與原發性腫瘤中看到的相同的模式觀察到小的轉移瘤(粗的白色箭頭)提高。肝臟的薄擴展(長的細箭頭)位于轉移瘤的附近。尸檢(未顯示)和組織學(右側圖像)證實了轉移瘤的存在(黑色箭頭)，轉移瘤直接鄰接肝臟的長薄擴展。注意到轉移性腫瘤薄片之一的形狀與MRI上的外觀的相似性。實施例5遞過7yXsc尸"Z/;7-艙^7eW"^炎庫^萃辟移膚發^y進行以下實驗來證明與沒有使用復合物給藥成像劑時相比較，靜脈內給藥(或通過任何其他合適的途徑，例如，但不限于，IT,ID，IM，IP)本發明攜帶成像劑的復合物時可以增強轉移瘤的檢測。通過靜脈內注射1至10x104RenCa細胞在雌性Ba1b/C小鼠中誘導肺腫瘤。該方法導致幾乎專門停留于動物肺部中的轉移瘤，并因此作為任何將導致作為原發性疾病或作為轉移瘤的肺腫瘤的癌癥的動物模型系統。大約2-4周后，將動物用于成像。按照之前所述的通過乙醇注射方法制備陽離子脂質體(D0TAP:D0PE)(參見U.S.公開專利申請No.2003/0044407;XuL等，#o/eci//arCa/cer7力era;ei/〃"1:337-346(2002)，將其公開內容在此引入作為參考)。這些研究中所用的靶向部分是抗轉鐵蛋白受體單鏈抗體片段(TfRscFv)。為了包裹成像劑，將TfRscFv與脂質體以特定的比例混合并在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-20分鐘，最合適地10-12分鐘。將Magnevist⑧加入該溶液中，混合并再次在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-20分鐘，最合適10-12分鐘。當制備用于體內使用時，加入蔗糖或葡萄糖至0.5-50%的終濃度，合適地1-20%,最合適地對于蔗糖為10%，對于葡萄糖為5%，并在室溫孵育l-30分鐘，合適地5-25分鐘，最合適地15-20分鐘。使用上述的方法以lmg成像劑比0.33-1.17jngTfRscFv比10-35jag脂質體的比例(合適地lmg成像劑比0.5至1.0MgTfRscFv比14-28jag脂質體，最合適lmg成像劑比0.71|igTfRscFv比21|ag脂質體)形成復合物。可接受的復合物尺寸范圍為約20至1000nm，合適地約50至700nm，最合適約100至500nm。在jJ:匕4吏用4.7mgMagnevist，99mg月旨質體和3.3ygTfRscFv,4吏用終濃度為5%的葡萄糖形成復合物。將帶有以上誘導的腫瘤的小鼠麻醉并置于動物支架系統中。使用4%異氟烷誘導麻醉，剩余氣體包括66%氧和30%—氧化二氮混合物。在所述相似的氧和一氧化二氮的氣體條件下使用1.0至2.0%(優選1.5%)異氟烷獲得麻醉的維持。將麻醉的動物置于圓柱狀可變放射頻率共振天線內部(鳥籠共振器體積型線圏)并調諧至大約300MHz的中心頻率(水分子接受7特斯拉場強時的共振頻率)。所用的成像實驗方案是在7TBrukerBioSpin(Ge函ny/USA)成像控制臺上進行的Tl加權二維TurboMultislice-Multiecho成像序列。所用的成像參數是T1加權2D(2-維)，TE10.21ms，TR400ms，Flipbackoff，具有3.84x3.84cm視場和256x256矩陣的8個平均值。獲取基線圖像后，將動物保持固定于動物支架中并使用27G針通過靜脈內注射至動物的尾靜脈中來全身給藥游離(未復合的)Magnevist(gad-d)或含有相同含量Mag的TfRscFv-Lip-Mag(總體積50-1000jal，合適地100-500pl，最合適200-400|i1)并立即開始成像序列。測量和繪制圖像的像素強度。相同的小鼠用于游離和復合物的成像。在連續的天數里進行成像。如圖12A-12E中所示的，與游離成像劑相比較，靜脈內注射復合物后，腫瘤中存在顯著較高水平的信號。因此，與常用的給藥游離成像劑的方法相比較，本發明的復合物還提高了肺部中相對大的轉移瘤的檢測。實施例6遽《7y7","Z/p-#a^7er/W炎葛的小的雄卑轉移膚的發浙進行以下的實驗來證明靜脈內給藥(或通過任何其他合適的途徑，例如，但不限于，IT,ID,IM,IP)本發明帶有成像劑的復合物時可以檢測給藥沒有使用復合物的成像劑時不能檢測到的非常小的轉移瘤。通過靜脈內注射1至10x104RenCa細胞在雌性Balb/C小鼠中i秀導肺腫瘤。該方法導致幾乎專門停留于動物肺部中的轉移瘤，并因此作為任何將導致作為原發性疾病或作為轉移瘤的肺腫瘤的癌癥的動物模型系統。大約7-9天后，將動物用于成像。按照之前所述的通過乙醇注射方法制備陽離子脂質體(DOTAP:DOPE)(參見U.S.公開專利申請No.2003/0044407;XuL等，淑,7盯C歸er7^era卿〃"1:337-346(2002),將其公開內容在此引入作為參考)。這些研究中所用的靶向部分是抗轉鐵蛋白受體單鏈抗體片段(TfRscFv)。為了包裹成像劑，將TfRscFv與脂質體以特定的比例混合并在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-20分鐘，最合適地10-12分鐘。將Magnevist⑧加入該溶液中，混合并再次在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-20分鐘，最合適10-12分鐘。當制備用于體內使用時，加入蔗糖或葡萄糖至0.5-50%的終濃度，合適地1-20%，最合適地對于蔗糖為10%，對于葡萄糖為5%,并在室溫孵育l-30分鐘，合適地5-25分鐘，最合適地15-20分鐘。使用上述的方法以lmg成像劑比0.33-1.17jagTfRscFv比10-35jlig脂質體的比例(合適地lmg成像劑比0.5至1.0jagTfRscFv比14-28pg脂質體，最合適lmg成像劑比0.71jagTfRscFv比21pg脂質體)形成復合物。可接受的復合物尺寸范圍為約20至1000nm，合適地約50至700mn，最合適約100至500nm。在此使用4.7mgMagnevist，99pg脂質體和3.3ygTfRscFv，使用終濃度為5%的葡萄糖形成復合物。將帶有以上誘導的腫瘤的小鼠麻醉并置于動物支架系統中。使用4%異氟烷誘導麻醉，剩余氣體包括66%氧和30%—氧化二氮混合物。在所迷相似的氧和一氧化二氮的氣體條件下使用1.0至2.0%(優選1.5%)異氟烷獲得麻醉的維持。將麻醉的動物置于圓柱狀可變放射頻率共振天線內部(鳥籠共振器體積型線圏)并調諧至大約300MHz的中心頻率(水分子接受7特斯拉場強時的共振頻率)。所用的成像實驗方案是在7TBrukerBioSpin(Germany/USA)成像控制臺上進行的Tl加權二維TurboMulUslice-Multiecho成像序列。所用的成像參數是Tl加權2D(2-維)成像序列,TE10.21ms，TR572.99ms，Flipbackoff，具有2.56x2.56cra視場和256x256矩陣的8個平均值。獲取基線圖像后，將動物保持固定于動物支架中并使用27G針通過靜脈內注射至動物的尾靜脈中來全身給藥游離(未復合的)Magnevist(gad-d)或含有相同含量Mag的TfRscFv-Lip-Mag復合物(總體積50-1000)J1，合適地100-500jli1，最合適200-400y1)并立即開始成像序列。測量和繪制圖像的像素強度。相同的小鼠用于游離和復合物的成像。在連續的天數里進行成像。在該視場下，5個像素等于通過CT檢測的大約3mm的人腫瘤。如圖13A-13D中所示的，注射復合物后但不是游離gad-d后可以檢測4個像素的轉移瘤(下面的箭頭)(對應于大約直徑0.4mm的轉移瘤)。此外，與游離gad-d相比較，在第二個略微大點的轉移瘤(上面的箭頭)中信號顯著提高。因此，與常用的給藥游離成像劑的方法相比較，本發明的復合物還提高了肺部中小轉移瘤的檢測。使用本發明的復合物還檢測到大約3個像素的更小的轉移瘤(等于大約直徑0.3mm的腫瘤)，但是使用游離gad-d沒有檢測到(圖14A-14D)。使用和上面相同的肺瘤模型系統，靜脈內注射本發明的復合物后，可以檢測甚至更小尺寸的腫瘤。在此使用的成像參數也是Tl-加權2D(2-維)Mutltislice-Mumecho成像序列，TE10.21ms，TR-630.8ms，Flipbackoff,2.56x2.56cm視場和256x256矩陣的8個平均值。如圖15A-15B中所示的，通過復合物可以檢測1-2個像素的結節。在MRI掃描時觀察到結節Nl和N2。因為它們非常小(1-2個像素)以致不能確定它們是否實際上給出超過背景的信號，使用ImageJ軟件測量強度，并測定兩個結節的最小，最大，平均值和標準偏差(SD)。在統計學上，如果結節的最大值大于基礎的最大值+基礎的2SD，存在95%置信度結節不是噪音而是真實的。結節2明顯在該95%置信度內，而結節1就在極限，因此通過復合物的增強很可能也是真實的肺瘤塊。成像后，使用本領域普通技術人員公知的標準程序取出該動物的肺，固定于福爾馬林，石蠟包埋，切片并使用H&E染色。通過顯微鏡檢查切片，并拍攝觀察到的轉移瘤。如圖16(小功率，2X)和圖17(大功率，IOX)所示的，如基于MRI所預期的，在相同的肺葉和大概的位置發現大約0.l腿尺寸的兩個轉移瘤。在MRI圖像上測量兩個結節之間的距離并發現等于(~60dnm)基于組織學所測量的。因此，這些非常小的組織學測定的腫瘤塊實際上表示使用本發明的復合物根據MRI檢測到的結節。在此發現對于肺轉移瘤檢測的靈敏度水平高于通常用CT看到的，CT是檢測肺原發性肺瘤和源自其他癌癥類型的肺轉移瘤的常用方法。顯然這表示了出乎意料和令人驚訝的結果。實施例7遞d7T^sc/V-Z/;)-胞^e^/W趁^6^處T^單脊移膚使用以上實施例6中對圖13和14所述的相同腫瘤模型系統和成像參數，還可以檢測圖18A-18F中所示的肺胸膜下的轉移瘤。這是出乎意料的和令人驚訝的，因為使用目前實際上不能進入細胞的非復合試劑的MRI成像試劑不能檢測該位置的轉移瘤。這給早期檢測和治療肺癌和其他類型的癌癥提供了重要的優勢。實施例8遽過7Y7sc/^-丄2》-胸卵eW"炎葛的^#4雄轉移的檢源關于胸膜轉移瘤的檢測/治療，臨床控制非常難以實現，而且有益性的測量也是困難的。在此實施例中呈現的結果表明本發明的復合物可以到達并轉染胸膜轉移瘤并因此也可以用來治療它們。此外，本發明的復合物可以是用來測量這種或任何其他治療的有效性的成像工具。進行以下的實驗來證明靜脈內(或通過任何其他合適的途徑，例如但不限于IT,ID,IM，IP)給藥本發明帶有成像劑的復合物時可以檢測不限于來自腎細胞癌的那些轉移瘤。通過靜脈內注射0.1至5x105B16/F10小鼠黑素瘤細胞在雌性C57/B16小鼠中誘導肺肺瘤。該方法導致幾乎專門停留于動物肺部中的轉移瘤，并因此作為任何將導致作為原發性疾病或作為轉移瘤的肺腫瘤的癌癥的動物模型系統。大約2-4周后，將動物用于成像。按照之前所述的通過乙醇注射方法制備陽離子脂質體(D0TAP:D0PE)(參見U.S.公開專利申請No.2003/0044407;XuL等,淑ec^arC露er7T/era拜〃cs1:337-346(2002),將其公開內容在此引入作為參考)。這些研究中所用的靶向部分是抗轉鐵蛋白受體單鏈抗體部分(TfRscFy)。為了包裹成像劑，將TfRscFv與脂質體以特定的比例混合并在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-20分鐘，最合適地10-12分鐘。將Magnevist⑧加入該溶液中，混合并再次在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-20分鐘，最合適10-12分鐘。當制備用于體內使用時，加入蔗糖或葡萄糖至Q.5-50%的終濃度，合適地1-20%,最合適地對于蔗糖為10°/，對于葡萄糖為5%，并在室溫孵育1-30分鐘，合適地5-25分鐘，最合適地15-20分鐘。使用上述方法以lmg成像劑比0.33-1.17ygTfRscFv比10-35mg脂質體的比例(合適地lmg成像劑比0.5至1.0TfRscFv比14-28Vg脂質體，最合適lmg成像劑比0.71ygTfRscFv比21jLig脂質體)形成復合物。可接受的復合物尺寸范圍為約20至1000nm，合適地約50至700nm，最合適約100至500nm。在此使用4.7mgMagnevist，99yg脂質體和3.3jngTfRscFv,使用終濃度為5%的葡萄糖形成復合物。將帶有以上誘導的肺瘤的小鼠麻醉并置于動物支架系統中。使用4%異氟烷誘導麻醉，剩余氣體包括66%氧和30。/。一氧化二氮混合物。在所述相似的氧和一氧化二氮的氣體條件下使用1.0至2.0%(優選1.5%)異氟烷獲得麻醉的維持。將麻醉的動物置于圓柱狀可變放射頻率共振天線內部(鳥籠共振器體積型線圏)并調諧至大約300MHz的中心頻率(水分子接受7特斯拉場強時的共振頻率)。所用的成像實驗方案是在7TBrukerBioSpin(Ge醒ny/USA)成像控制臺上進行的Tl加權二維TurboMultislice-Multiecho成像序列。所用的成像參數是Tl加權Turbo-RARE2D(2-維)成像序列，TE10.21ms,TR1418.13ms，Flipbackoff,具有3.84x3.84cm視場和256x256矩陣的8個平均值。獲取基線圖像后，將動物保持固定于動物支架中并使用27G針通過靜脈內注射至動物的尾靜脈中來全身給藥游離(未復合的)Magnevist(gad-d)或含有相同含量Mag的TfRscFv-Lip-Mag復合物(總體積50-lOOOu1，合適地100-500m1，最合適200-400y1)并立即開始成像序列。測量圖像的像素強度。將相同的小鼠用于游離和復合物的成像。在連續的天數里進行成像。如圖19A-19B所示的，注射復合的Magnevist⑧后在肺中檢測到兩個小的轉移瘤(箭頭)。圖像表示通過肺的兩個不同切片。使用和以上一樣的腫瘤模型系統(B16/F10黑素瘤)和成像參數，使用ImageJ軟件中的動力曲線測量另一個動物中基線后，游離Magnevist⑧后和TfRscFv-Lip-Mag后的轉移瘤像素強度，并將數值進行比較。如以下的表4所示的，復合物顯示出超過基線值的最大增強。標準偏差顯示出復合物與基線值之間的差異是顯著的，而游離Magnevist⑧和基線之間的則不是。表4:B16/F10肺轉移瘤中的信號強度的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>37:1111-1137(1999)17.Haynes，B.F.，等，J.Immunol727:347-351(1981)18.Batra，J丄，等，Molecular&CellularBiology77:2200-2205(1991)19.Jain,R.K.和Baxter,L.T.，CancerRes.48:7022-1032(1988)20.Wolfert，M.A.,等,HumanGeneTherapy7:2123-2133(1996)21.Dunlap，D.D.，等，NucleicAcidsResearch25:3095-3101(1997)22.Kawaura，C，等，FEBSLetters421:69-72(1998)23.Choi,Y.H.，等，HumanGeneTherapy10:2657-2665(1999)24.Diebel，C.E.，等，Nature406:299-302(2000)25.Rasa,M.，等，J.Coll.InterfaceSci250:303-315(2002)26.Yu，W.，等，NucleicAcidsResearch,32(5):e48(2004)27.Alisauskus，R.，等，CancerResearch55:5743s-5748s(1995)28.Foo,J.J.，等，AnnalsofBiomedicalEngineering31:1279-1286(2003)29.Xu，L，等，HumanGeneTherapy73:469-481(2002)30.Freedman，M.，等，SPIEMedicalImaging:PhysiologyandFunctionfromMultidimensionalImages4321:163-167(2001)31.Wisner，E.R.，等，InvestigativeRadiology37:232-239(2002)32.Winter,P.M.，等，Circulation108:2270-2274(2003)33.Morawski,A.M.，等,MagneticResonanceinMedicine51:480~楊(2004)本說明書中提及的所有出版物，專利和專利申請在此引入作為參考，至如同每個單獨的出版物，專利或專利申請特意并單獨表示引入參考的程度。權利要求1.制備抗體或抗體片段靶向陽離子免疫脂質體復合物的方法，包括(a)制備抗體或抗體片段；(b)將所述抗體或抗體片段與陽離子脂質體混合來形成陽離子免疫脂質體，其中所述抗體或抗體片段沒有在化學上與所述陽離子脂質體綴合；和(c)將所述陽離子免疫脂質體與成像劑混合來形成所述抗體或抗體片段靶向陽離子免疫脂質體復合物。2.權利要求l的方法，其中將抗體與所述陽離子脂質體混合。3.權利要求l的方法，其中將抗體片段與所述陽離子脂質體混合。4.權利要求3的方法，其中所述抗體片段是單鏈Fv片段。5.權利要求4的方法，其中所述抗體片段是抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv片段(TfRscFv)。6.權利要求l的方法，其中所述抗體或抗體片段是抗-HER-2抗體或抗體片段。7.權利要求1的方法，其中所述抗體片段在與所述陽離子脂質體混合之前在羧基端包括半胱氨酸部分。8.權利要求1的方法，進一步包括將所述陽離子免疫脂質體與包括K[K(H)KKK]5-K(H)KKC(HoKC)(SEQIDNO:1)肽的肽混合。9.權利要求1的方法，其中所述陽離子脂質體包括一種或多種脂質和一種或多種中性或輔助脂質的混合物。10.權利要求l的方法，其中將所述抗體或抗體片段與所述陽離子脂質體以約1:20至約1:40(w:w)的比例混合。11.權利要求l的方法，其中所述陽離子脂質體包括二油酰三曱磷酸銨與二油酰磷脂酰乙醇胺和/或膽固醇的混合物；或二甲基二(十八烷基)溴化銨與二油酰磷脂酰乙醇胺和/或膽固醇的混合物。12.權利要求l的方法，其中將所述陽離子免疫脂質體與所述成像劑以約0.1:10至約0.1:35的比例(mg成像劑mg月旨質體)混合。13.權利要求l的方法，其中將所述陽離子免疫脂質體與所述成像劑以約1:14至約1:28的tb例(mg成像劑mg脂質體)混合。14.權利要求l的方法，其中將所述陽離子免疫脂質體與所述成像劑以約1:21的摩爾比(mg成像劑jng脂質體)混合。15.權利要求1的方法，其中所述成像劑是磁共振成像(MRI)劑，計算機斷層掃描(CT)成像劑或正電子發射斷層掃描(PET)成像劑。16.權利要求15的方法，其中所述MRI劑是釓噴葡胺，氧化鐵或碘帕醇，所述CT成像劑是鋇，碘或鹽水，或所述PET成像劑是"F-2-脫氧-2-氟代-D-葡萄糖(FDG)。17.通過權利要求1的方法制得的陽離子免疫脂質體復合物。18.抗體或抗體片段靶向陽離子免疫脂質體復合物，其包括陽離子脂質體，抗體或抗體片段和成像劑，其中所述抗體或抗體片段沒有在化學上與所述陽離子脂質體緣合。19.權利要求18的陽離子免疫脂質體，其中所述成像劑包裹于所述陽離子脂質體內。20.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述成像劑與所述陽離子脂質體的內側或外側單層相連。21.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述抗體片段是單鏈Fv片段。22.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述抗體片段是抗轉鐵蛋白受體單鏈Fv(TfRscFv)。23.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述抗體或抗體片段是抗HER-2抗體或抗體片段。24.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述陽離子脂質體包括一種或多種陽離子脂質體和一種或多種中性或輔助脂質的混合物。25.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述抗體或抗體片段與所述陽離子脂質體以約l:20至約1:40(w:w)的比例存在。26.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述陽離子脂質體包括二油酰三曱磷酸銨與二油酰磷脂酰乙醇胺和/或膽固醇的混合物；或二甲基二(十八烷基)溴化銨與二油酰磷脂酰乙醇胺和/或膽固醇的混合物。27.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述成像劑與所述陽離子免疫脂質體以約0.1:10至約0.l:35的比例(mg成像劑jug脂質體)存在。28.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述成像劑與所述陽離子免疫脂質體以約1:14至約l:28的摩爾比(mg成像劑|jg脂質體)存在。29.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述成像劑與所述陽離子免疫脂質體以約1:21的摩爾比(rag成像劑ug脂質體)存在。30.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述成像劑是磁共振成像(MRI)劑，計算機斷層掃描(CT)成像劑或正電子發射斷層掃描(PET)成像劑。31.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，其中所述MRI劑是釓噴葡胺，氧化鐵或殃帕醇，所述CT成像劑是鋇，碘或鹽水，或所述PET成像劑是，-2-脫氧-2-氟代-D-葡萄糖(FDG)。32.權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物，進一步包括與所述復合物相連的K[K(H)KKK]5-K(H)KKC(HoKC)(SEQIDNO:1)肽。33.使患者器官或組織成像的方法，包括在進行所述成像之前將權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物給藥于患者。34.權利要求33的方法，其中所述給藥包括靜脈內給藥，肌內給藥，皮內給藥，目艮內給藥，腹膜內給藥，胂瘤內給藥，鼻內給藥，腦內給藥或皮下給藥。35.使患者癌組織成像的方法，包括在進行所述成像之前將權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物給藥于患者。36.使患者癌轉移瘤成像的方法，包括在進行所述成像之前將權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物給藥于患者。37.權利要求35的方法，其中所述給藥包括靜脈內給藥，肌內給藥，皮內給藥，目艮內給藥，腹膜內給藥，腫瘤內給藥，鼻內給藥，腦內給藥或皮下給藥。38.權利要求36的方法，其中所述給藥包括靜脈內給藥，肌內給藥，皮內給藥，目艮內給藥，腹膜內給藥，腫瘤內給藥，鼻內給藥，腦內給藥或皮下給藥。39.患有癌癥的患者的腫瘤組織的成像和治療方法，包括將權利要求18的陽離子免疫脂質體復合物給藥于患者來成像腫瘤組織并將抗癌劑給藥于患者來治療腫瘤組織。40.權利要求39的方法，其中所述給藥包括靜脈內給藥，肌內給藥，皮內給藥，目艮內給藥，腹膜內給藥，腫瘤內給藥，鼻內給藥，腦內給藥或皮下給藥。41.權利要求39的方法，其中所述抗癌劑是化療劑，基因或小分子。42.權利要求41的方法，其中所述化療劑選自阿霉素，米托蒽醌和吉西他濱。43.權利要求41的方法，其中所述抗癌劑與所述陽離子免疫脂質體相連。44.權利要求36的方法，其中所述抗癌劑是反義寡核苷酸或siRNA。45.權利要求44的方法，其中所述反義寡核苷酸或所述siRNA與所述陽離子免疫脂質體相連。46.權利要求39的方法，其中在陽離子免疫脂質體復合物之前或之后傳送所述抗癌劑。47.權利要求46的方法，其中在陽離子免疫脂質體復合物之前或之后至少12小時傳送所述抗癌劑。48.權利要求39的方法，進一步包括給予患者放療。全文摘要本發明是藥物傳送，癌癥治療和診斷以及藥物領域。本發明提供了制備抗體或抗體片段靶向免疫脂質體的方法，該脂質體用于全身傳送分子來治療和成像疾病，包括癌腫瘤。本發明還提供了免疫脂質體和組合物，以及使各種組織成像的方法。脂質體復合物用于成像劑的包裹，例如，用于磁共振成像。傳送系統的特異性源自靶向抗體或抗體片段。文檔編號A61K39/395GK101351225SQ200680046573公開日2009年1月21日申請日期2006年10月20日優先權日2005年10月20日發明者E·H·常,K·F·皮洛羅申請人:喬治敦大學