具有選擇蛋白配體活性的新型硝基兒茶酚衍生物的制作方法

專利名稱：具有選擇蛋白配體活性的新型硝基兒茶酚衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于調節由細胞粘著分子介導的體外和體內過程的化合物、組合物和方法。本發明公開的小分子化合物是芳香硝基化合物，其有力地調節細胞粘著分子介導的活動。

背景技術：
細胞粘著分子介導的活動屬于引起循環白血球(白細胞)從血流移動進入周圍組織(遷移)的復雜級聯。從生理學上講，白細胞遷移對于生物(包括人)的內環境平衡和免疫監控是至關重要的。例如，淋巴細胞構成性地離開血流進入淋巴組織用于巡查有害抗原。然而，在病理學情況下，例如，局部或系統性炎癥和/或血管系統損傷，這一基本過程受到的調節失調，至少在某種程度上是由于增加的E-和P-選擇蛋白的表面表達。因此，在幾種臨床相關背景中，白細胞過度遷移導致病理性細胞浸潤以及隨后的組織損傷。疾病狀態，如急性肺損傷(ALI)、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、哮喘性支氣管(哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)、牛皮癬、類類風濕性關節炎、和膿毒病，全都與由浸潤到各自組織的病理性活化的白細胞誘導和保持的組織炎癥有關。另外，白細胞浸潤增加對與器官移植、心肺分流術或經皮經腔血管成形術有關的缺血-再灌注損傷(IRI)的發病機理有貢獻。
為了遷移，白細胞必須與血管內皮壁結合，從而擴散通過毛細管的細胞壁進入周圍組織。因此，白細胞不得不卷繞并然后附著于內皮細胞壁(初卷繞或“錨定”)。遷移中的這一初級事件受細胞粘著分子的選擇蛋白家族介導。除了直接與內皮結合之外，白細胞還可以附著于其它的已經附著于內皮的白細胞、白細胞-粒子、血小板、或血小板由來粒子。
粘著分子的選擇蛋白家族由三種結構上相關的鈣依賴性糖結合細胞表面蛋白E-、P-和L-選擇蛋白組成。E-選擇蛋白僅僅在發炎內皮上表達，P-選擇蛋白在發炎內皮以及血小板上表達，L-選擇蛋白在白細胞上表達。選擇蛋白由氨基末端凝集素結構域、表皮生長因子(EGF)樣結構域、數目不定的補體受體相關重復序列、疏水性跨膜結構域和C末端細胞質結構域組成。導致白細胞粘著的結合互相作用被認為是通過選擇蛋白的凝集素結構域和白細胞表面上的各種糖配體接觸介導。
所有三種選擇蛋白可以低親合性結合于唾酸路易斯寡糖-X(sialylLewisx)(sLex)，它們是存在于大多數白細胞表面上的糖基部分。在結構上相關的糖基部分唾酸路易斯寡糖-A(sialyl Lewisa)(sLea)主要被發現存在于癌細胞表面上[K.Okazaki等人，J.Surg.Res.，1998，78(1).78-84；R.P.McEver等人，Glycoconjugate Journal，1997，14(5)，585-591]。在P-選擇蛋白的情況下，已經描述了明顯不同的高親合性糖蛋白配體[R.P.McEver，R.D.Cummings，J.Clin.Invest.，1997，100，485-492]，所謂的P-選擇蛋白糖蛋白配體-1(PSGL-I)，其通過其sLex部分以及部分地通過其肽組分對于高親合性選擇蛋白結合有貢獻，特別是硫酸化的酪氨酸殘基[R.P.McEver，Ernst Schering Res.Found.Workshop，2004，44，137-147]。PSGL-1是一種以最高親合性與P-選擇蛋白結合的最重要的選擇蛋白配體，但是其還與E-和L-選擇蛋白結合[G.Constantin；DrugNews Perspect；2004；17(9)；579-586]，它是主要在白細胞上表達的同型二聚體型唾液酸粘蛋白。
在炎癥性疾病中，遷移的調節失調至少在某種程度上是由E-和P-選擇蛋白的細胞表面表達增加所介導。與E-和P-選擇蛋白表達的低基態表達相反，E-和P-選擇蛋白表達在炎癥期間上調，導致白細胞實質地募集進入發炎組織。雖然需要選擇蛋白介導的細胞粘著來應對感染，但是在許多情況中這些細胞粘著是不希望的或者是過度的，導致嚴重的組織損傷而不是修復。在許多急性以及慢性炎癥性疾病中[例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、牛皮癬等]，已經闡明了活化白細胞浸潤進入組織與同時伴有的相應粘著分子特別是E-和P-選擇蛋白的組織表達顯著提高之間的關系[Muller等人，J.Pathol，2002，198(2)，270-275；DiStefano等人，Am.J.Respir.CHt.Care.Med.，1994，149(3)803-810；Terajima等人，Arch.Dermatol.Res.，1998，290，246-252]。
白細胞浸潤還可在移植和移植排斥期間的炎癥性癥狀中起作用。另外，血液凝固過程進一步受到白細胞-白細胞結合和白細胞-血小板結合的促進，發生這種情況是因為白細胞同時具有L-選擇蛋白及其相應配體PSGL-1，因此可通過PSGL-1與其自身發生相互作用，它們還可與攜帶P-選擇蛋白的血小板結合。
因此，調節選擇蛋白介導的細胞粘著和其它選擇蛋白介導的活動，例如白細胞活化，提供了在較早步驟就干擾和終止炎癥級聯的有前途的可能性。小分子選擇蛋白拮抗劑作為各類選擇蛋白拮抗劑將同時調節所有三種選擇蛋白，從而回避了在選擇蛋白之間可能的冗余[M.Sperandio等人，Vascular Disease Prevention，2004，1，185-195]。
除了sLex/sLea之外，天然的高親和性配體PSGL-1是另一種用于設計小分子選擇蛋白拮抗劑的模板結構。同sLex/sLea相比，PSGL-1對所有三種選擇蛋白都顯示高的親合性。為了找到并檢測與PSGL-1和PSGL-1樣配體競爭性結合選擇蛋白的新型小分子藥物，開發了有希望的策略以找到一類新的有效的各類選擇蛋白拮抗劑用于治療炎癥性疾病。可使用選擇蛋白以及使用配體樣PSGL-1作為模板結構設計選擇蛋白拮抗劑，因為它們試圖調節選擇蛋白和PSGL-1或其它具有類似的結合基元的配體之間的結合。
新型小分子選擇蛋白拮抗劑可以滿足某些類藥性并具有潛在口服生物利用度的要求。術語“類藥性(drug likeness)”在文獻中有記載[Lipinski；Adv.Drug Dev.Rev.，1997，23，3-25]。除了其他的分子性質之外，被動轉運的分子被認為具有低于500的平均相對分子量，從而與藥物類似。依據這種規則，通常將具有低于500或略高于500的相對分子量的化合物定義為是小分子。相對分子量高于500的化合物不可能具有口服生物利用度。另外，高極性糖部分或肽組分的存在不符合類藥性的概念[H.Ulbrich等人，Trends Pharmacol.ScL，2003，24(12)，640-647；D.Slee等人，J.Med.Chem.，2001，44，2094-2107]。抗體基藥物的開發也是這種情況，因為它們是多肽，因此口服給藥成為問題。另外，希望的化合物在通過胃腸道期間必須是穩定的，以便它們可以最后被小腸細胞攝取/吸收。對于大多數配糖分子和肽結構而言情況不是這樣的。
已經開發一些硝基兒茶酚作為特定的兒茶酚-O-甲基轉移酶(COMT)抑制劑用于治療帕金森病(Morbus Parkinson)[J.Axelrod等人，J.Biol.Chem.1958，233(3)，702-705；P.T.

等人，PharmacologicalReviews 1999，51，593-628]，如托卡朋、硝替卡朋、和恩他卡朋[EP00426468]。還描述了硝基兒茶酚具有由鐵螯合引起的心臟保護作用[N.Haramaki等人，Biochemical Pharmacology 1995，50，839-843]或降低血漿同型半胱氨酸水平[E.Nissinen等人，J Neural Transm.2005，112，1213-1221]。硝替卡朋還被報道可作為自由基清除劑[Y.J.Suzuki等人，Free Radical Biology & Medicine，1992，13，517-525；L.Marcocci等人，Biochemistry and Molecular Biology International，1994，34，531-541]。一些觀測顯示恩他卡朋可以保護免受血管緊張素II誘導的腎損害[T.Helkamaa等人，J.Hypertens.，2003，21，2353-2363]。
然而，目前為止，還沒有闡述硝基兒茶酚作為選擇蛋白調節化合物。有幾個調查開發了對選擇蛋白介導的過程具有調節作用的低分子量化合物。這些化合物包括雙水楊酸酯和雙水楊酸酯基C-糖苷[WO99/29706]、芐基氨基磺酸[WO 03/097658]、二糖基化1，2-二醇[WO97/01569]、取代的5元雜環[WO 00/33836]、甘露吡喃基氧基-苯基-苯甲酸[EP0758243 B1]、哌嗪基化合物[US6432957B1]、肽的鞣酸衍生物[WO 2004/018502]、鞣酸[C.C.M.Appeldoorn等人，Circulation 2005，111，106-112；EP 1481669A1]、和奎尼酸衍生物[N.Kaila等人，J.Med.Chem.2005，48，4346-4357]。
然而，目前為止這些選擇蛋白拮抗化合物中沒有一種成功通過臨床試驗[S.J.Romano，Treat.Respir Med 2005，4(2)，85-94；M.P.

，Therapeutics and Clinical Risk Management，2005，1(3)，201-208]。這應歸于許多這些結構基于低效力模板sLex被設計。因此，摹擬sLex的結構可能具有較低效力。其它化合物對選擇蛋白家族的不同成員顯示對抗特異性，但是僅僅拮抗所選的選擇蛋白可被其它選擇蛋白繞過[M.P.Schon，Therapeutics and Clinical Risk Management，2005，1(3)，201-208]。
另外，迄今為止開發的大多數化合物具有高分子量并且通常帶有碳水化物和/或肽，這使得它們具有被肽酶和/或糖苷酶降解和修飾的傾向。帶有碳水化物的結構具有另外的缺陷，如高度手征性、端基異構性(anomericity)和轉運通過脂雙分子層的低概率。已知帶有肽的化合物具有類似缺陷。開發用于拮抗選擇蛋白介導過程的其它化合物含有鄰苯三酚亞結構。這些基元易于氧化[Kumamoto M.等人，Biosci.Biotechnol.Biochem.，2001，65(1)，126-132]，使得將這些化合物開發成藥物具有一定難度。另外，具有鄰苯三酚亞結構的化合物，如鞣酸，已知具有細胞毒性[E.Sergediene等人，FEBS Letters，1999，462，392-396]并誘導細胞凋亡[K.Satoh等人，Anticancer Research，1997，17，2487-2490；N.Sakaguchi等人，Biochemical Pharmacology，1998，55，1973-1981]。
在選擇蛋白拮抗劑領域中的先導化合物是百莫塞爾(bimosiamose)[S.J.Romano，Treat.Respir Med 2005，4(2)，85-94]，目前，百莫塞爾[D.Bock等人，New Drugs，2003，D04，28，p.28；EP 0 840 606B1]在臨床研究中是最先進的化合物。新近的調查支持百莫塞爾可被認為是PSGL-1模擬物的假設[E.Aydt，G.Wolff；Pathobiology；2002-2003；70；297-301]。這使得百莫塞爾與其它選擇蛋白拮抗劑區別開來。然而，其是具有碳水化物結構的大分子化合物。各類選擇蛋白拮抗劑百莫塞爾似乎缺乏口服生物利用度。一些調查指出百莫塞爾對P-選擇蛋白表現良好親合性，但是對E-和L-選擇蛋白具有中等親合性。
在醫學上非常需要新型的具有較高效力的各類選擇蛋白拮抗劑，其調節選擇蛋白介導的活性，如選擇蛋白依賴性細胞粘著，并且需要開發使用這些化合物調節與選擇蛋白配體互相作用有關的病況的方法。大多數可使用的抗炎藥物治療劑(它們可商購獲得)主要包括皮質類固醇或NSAIDs(非甾體抗炎藥物)，它們具有許多缺點/副作用，并且針對炎癥級聯中的不同步驟。與此不同的是，調節選擇蛋白功能是在較早階段介入炎癥級聯的治療概念。迄今為止，幾乎所有的有希望的選擇蛋白拮抗劑不能成為市售藥物，主要是因為低效力和/或高分子量，這些缺陷在所述化合物的吸收-分布-代謝-排泄(ADME)行為中引起各種問題，因此在大多數炎癥性疾病如類類風濕性關節炎、膿毒性休克、動脈粥樣硬化、再灌注損傷和許多其它疾病的治療所需的口服生物利用度中引起問題。
EP-A 1 577 289公開了芳族化合物，其在分子的苯基部分中被羥基化，并且可用于治療炎癥性疾病。
在WO 1997/01335中描述了與碳水化物單元連接的芳族化合物。該文獻公開的化合物是選擇蛋白抑制劑并且可用作治療劑，然而，它們在結構上不同于本發明所述的硝基取代的芳族化合物。
在EP-A 1 481 669中描述了具有P-選擇蛋白調節活性的多羥基酚類化合物。


發明內容
本發明的一個目的是提供新型的小分子，特別是非糖基化/非配糖和非肽類化合物，其能有力地拮抗選擇蛋白介導的過程，并且其在施用期間比現有技術的化合物具有更低的副作用。
與本領域開發的大多數摹擬sLex的化合物不同，本發明的化合物不易受糖苷酶或肽酶影響。迄今為止開發的大多數選擇蛋白拮抗劑在結構上和生物學上基于sLex或sLea的性質。因此，這些得到的化合物同它們的模板結構一樣表現出低的生物活性。然而，本發明提供新型的有效的小分子的類藥性各類選擇蛋白拮抗劑，其基于模擬PSGL-1和PSGL-1樣配體或任何載有sLex或者sLea以及硫酸酪氨酸基元的配體的體外生物學試驗發明得到[N.V.Bovin；Biochem Soc Symp.；2002；(69)143-60.N.V.Bovin；Glycoconj.J；1998；15(5)；431-46.T.V.Pochechueva et al.；Bioorg Med Chem Lett.；2003；13(10)；1709-12.G.Weitz-Schmidt et al.；Anal.Biochem.；1996；238；184-190]。
本發明提供了包括至少一種具有式(Ia)或(Ib)或(Ic)或(Id)或(Ie)或(If)所示通式結構的化合物、或上述式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)或(If)化合物的可藥用鹽、酯或酰胺和前藥以及可用于醫藥的可藥用載體的藥物組合物。

其中各符號和取代基具有以下含義 -X-＝
m＝0、1；n＝1-3的整數，
其中“環”為
R1為H、NO2、CF3、F、Cl、Br、I、CN、CH3、NH2、NH烷基、NH芳基、NH酰基和k＝0、1，
T為O、S或[H，H]；p＝0、1、2，
雙鍵為E-或Z-構型，

-E-為-(CH2-)qNH-且q＝0、1、2、3， -Y＝
s為0或1， R2為CO2H、CO2烷基、CO2芳基、CO2NH2、CO2芳烷基、SO3H、SO2NH2、PO(OH)2、1-H-四唑基-、CHO、COCH3、CH2OH、NH2、NH烷基、N(烷基)烷基’、OCH3、CH2OCH3、SH、F、Cl、Br、I、CH3、CH2CH3、CN、CF3， R3獨立于R2為H、CH3、CH2CH3、CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2，和 R4獨立于R2和R3為H、CH3、CH2CH3、CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、R2， R5為H、NO2、CF3、F、Cl、Br、I、CN、CH3、OCH3、SH、NH2， 和-W-＝-(CH2-)v、順式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-，v為0、1、2； 在-W-為順式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-的情況下，R2一定不是NH2或SH；
R6獨立于R2為H、F、Cl、Me、叔丁基、CN、NH2，

t為0、1、2，
-Z＝
R7獨立于R2為H、NO2、CF3、F、Cl、Br、I、CN、CH3、OCH3、SH、NH2，
R8獨立于R2為H、F、Cl、Me、叔丁基、CN、NH2，
K＝NH、NMe、O、S，
(vii)-W-R2。
在本發明的優選方案中，組合物包括至少一種式(Ib)或(Ic)或(Ie)或(If)化合物、或式(Ib)或(Ic)或(Ie)或(If)化合物的可藥用鹽、酯或酰胺和前藥以及可藥用載體。

其中各符號和取代基具有以下含義 -X-＝
m＝0、1；n＝1-3的整數
其中“環”為
R1為H、NO2、CF3、F、Cl、Br、I、CN、CH3、NH2、NH烷基、NH芳基、NH酰基和k＝0、1，
-Y＝
s為0或1， R2為CO2H、CO2烷基、CO2芳基、CO2NH2、CO2芳烷基、SO3H、SO2NH2、PO(OH)2、1-H-四唑基-、CHO、COCH3、CH2OH、NH2、NH烷基、N(烷基)烷基’、OCH3、CH2OCH3、SH、F、Cl、Br、I、CH3、CH2CH3、CN、CF3， R3獨立于R2為H、CH3、CH2CH3、CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2，和 R4獨立于R2和R3為H、CH3、CH2CH3、CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、R2， R5為H、NO2、CF3、F、Cl、Br、I、CN、CH3、OCH3、SH、NH2， 和-W-＝-(CH2-)v、順式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-，v為0、1、2； 在-W-為順式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-的情況下，R2一定不是NH2或SH；
t為0、1、2，
-Z＝
R7獨立于R2為H、NO2、CF3、F、Cl、Br、I、CN、CH3、OCH3、SH、NH2，
K＝NH、NMe、O、S，
優選的藥物組合物包括式(IIa)或(IIb)或(IIe)或(IId)或(IIe)或(IIf)的化合物。

其中-Y的定義如上所述，并且其中-X’-為上述定義的X(a)、X(b)、X(c)、和X(d)。
在另一實施方案中，本發明涉及包括以下結構所示化合物的組合物
其中-Y的定義如上所述，并且-X’-作為X(a)和X(b)如上述定義。
另外優選的藥物組合物包括式(A1)或(A2)或(A3)或(A4)或(A5)或(A6)或(B1)或(B2)或(B3)或(B4)或(B5)或(B6)的化合物。

其中-X’-和-Y的定義如上所述并且其中-X＂-為
并且其中-Y’為
其中所有標記、符號和取代基的定義如上所述。
在另一方案中，本發明涉及包括下式化合物的藥物組合物
其中-X’-和-Y的定義如上所述并且其中-X”-為
并且其中-Y’為
其中所有標記、符號和取代基的定義如上所述。
特別優選的藥物組合物包括式(C1)或(C2)或(C3)或(C4)或(C5)或(C6)化合物。

其中-X”-和-Y’的定義如上所述。
以下組合物的進一步優選的化合物具有以下結構
其中-X”-和-Y’的定義如上所述。
特別優選的藥物組合物包括式(D1)或(D2)或(D3)或(D4)或(D5)或(D6)化合物。

其中-X”-的定義如上所述并且-Y”為

R9為CO2H、CO2烷基、CO2芳基、CO2NH2、CO2芳烷基、CH2SO3H、CH2SO2NH2、CH2PO(OH)2、1-H-四唑基、CHO、COCH3、CH2OH、CH2NH2、CH2NH烷基、CH2N(烷基)烷基’、CH2OCH3、CH2SH。
還在優選的藥物組合物中，化合物由式(D2)或(D3)或(D5)或(D6)定義。

其中-X”-的定義如上所述并且-Y”為
R9為CO2H、CO2烷基、CO2芳基、CO2NH2、CO2芳烷基、CH2SO3H、CH2SO2NH2、CH2PO(OH)2、1-H-四唑基、CHO、COCH3、CH2OH、CH2NH2、CH2NH烷基、CH2N(烷基)烷基’、CH2OCH3、CH2SH， 其中所有標記、符號和取代基的定義如上所述。
這些化合物(C1)、(C2)、(C3)、(C4)、(C5)、(C6)、(D1)、(D2)、(D3)、(D4)、(D5)、和(D6)自身也是新型化合物。優選具有式(C2)或(C3)或(C5)或(C6)或(D2)或(D3)或(D5)或(D6)所示通式結構的化合物。
上面描述的所有化合物具有調節細胞粘著和調節選擇蛋白以及PSGL-1樣介導的結合的能力。這些化合物能夠調節選擇蛋白與sLex/sLea的互相作用以及調節選擇蛋白和硫酸酪氨酸殘基之間的互相作用。與百莫塞爾相比，先導性的各類選擇蛋白拮抗劑，即，本文所述的化合物具有增加的生物活性。因此，它們可用于治療急性和慢性炎癥性疾病，以及其它的其中選擇蛋白介導的過程發揮作用的醫學病況。
術語“藥物”還包括診斷應用。
術語“藥物”還包括預防性應用從而避免其中選擇蛋白介導的過程發揮作用的醫學病況。
術語“藥物”還包括這樣的應用，其中本發明的化合物可用作診斷學或治療學的靶向給藥用媒介物。
本發明提供包括式(Ia)或(Ib)或(Ic)或(Id)或(Ie)或(If)化合物的藥物組合物，以及在優選變體中，提供包括式(IIa)或(IIb)或(IIe)或(IId)或(IIe)或(IIf)化合物的藥物組合物。
在本發明的另一優選變體中，提供了包括至少一種式(A1)或(A2)或(A3)或(A4)或(A5)或(A6)或(B1)或(B2)或(B3)或(B4)或(B5)或(B6)化合物的藥物組合物。
在本發明的特別優選變體中，提供了包括至少一種式(C1)或(C2)或(C3)或(C4)或(C5)或(C6)化合物的藥物組合物。
在本發明的特別優選變體中，提供了包括至少一種式(D1)或(D2)或(D3)或(D4)或(D5)或(D6)化合物的藥物組合物。
在本發明的另一方案中，在組合物中使用式(A2)、A3、A5、A6、B2、B3、B5、B6、C2、C3、C5、C6、D2、D3、D5或D6化合物。
本發明另外提供調節P-選擇蛋白、L-選擇蛋白或E-選擇蛋白與sLex或sLea以及硫酸酪氨酸殘基結合的方法，包括步驟對患者給用有效量的至少一種具有式(Ia)或(Ib)或(Ic)或(Id)或(Ie)或(If)所示結構的化合物用來調節P-、E-或L-選擇蛋白與sLex或sLea以及硫酸酪氨酸的結合。已經發現上述的式(Ia)或(Ib)或(Ic)或(Id)或(Ie)或(If)的化合物可調節E-、P-或L-選擇蛋白結合。
本文使用的術語“烷基”是指含1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11或12個碳原子的單價直鏈或支鏈基團，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基等。“烷基”彼此獨立地進行選擇并且可不同或相同。. 術語“芳基”是指碳環和雜環芳族基，包括但不限于苯基、1-萘基、2-萘基、芴基、(1，2)-二氫萘基、茚基、2，3-二氫化茚基、噻吩基、苯并噻酚基、噻吩并吡啶基等。
術語“芳烷基”(還稱作芳基烷基)是指與烷基結合的芳基，包括但不限于芐基、1-萘基甲基、2-萘基甲基、氟芐基、氯芐基、溴芐基、碘芐基、烷氧基芐基(其中“烷氧基”是指甲氧基、乙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等)、羥基芐基、氨基芐基、硝基芐基、胍基芐基、芴基甲基、苯基甲基(芐基)、1-苯乙基、2-苯乙基、1-萘乙基等。
術語“酰基”是指-(CHO)或-(C＝O)-烷基或-(C＝O)-芳基或-(C＝O)-芳烷基，包括但不限于甲酰基、乙酰基、正丙酰基、異丙酰基、正丁酰基、異丁酰基、新戊酰基、苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基等。
本文使用的術語“可藥用鹽、酯、酰胺和前藥”是指本發明化合物的羧酸鹽、氨基酸加成鹽、酯、酰胺和前藥，它們處在合理的醫療審判范圍內，適用于接觸患者的組織而無不適當的毒性、刺激性、變態反應等，與合理的效益/風險比相當，可有效用于它們的預定用途，如果可能的話，還包括本發明化合物的兩性離子形式。術語“鹽”是指本發明化合物的相對無毒性的無機酸和有機酸的加成鹽。這些鹽可在最終分離和純化化合物期間原地制備，或者通過分別將游離形式的純化合物與適當的無機酸或有機酸或無機堿或有機堿反應并分離由此形成的鹽制備。本發明化合物的鹽的典型例子包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、戊酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘甲酸鹽(naphthylate)、甲磺酸鹽、葡庚酸鹽、乳糖酸鹽、十二烷基磺酸鹽等。這些可包括基于堿和堿土金屬的陽離子，如鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等，以及無毒的銨、季銨和胺陽離子，包括但不限于銨、四甲銨、四乙銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。
本發明化合物的可藥用的無毒酯的例子包括其中烷基是直鏈或支鏈的C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基酯。還可接受的酯包括C5、C6和C7環烷基酯以及芳基烷基酯，諸如，但不限于芐基酯。優選C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基酯。本發明化合物的酯可根據常規方法制備。
本發明化合物的可藥用的無毒酰胺的例子包括得自氨、C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基伯胺和C1、C2、C3、C4、C5和C6二烷基仲胺(其中烷基是直鏈或支鏈)的酰胺。在仲胺的情況下，胺還可是含有一個氮原子的5或6元雜環。氨由來的酰胺、C1、C2和C3烷基伯酰胺以及C1-C2二烷基仲酰胺是優選的。本發明化合物的酰胺可根據常規方法制備。
術語“前藥”是指一種或多種化合物，它們在體外迅速變形并且在體內從穩定態變為活化態，從而獲得上述式(Ia)或(Ib)或(Ic)或(Id)或(Ie)或(If)的母體化合物，例如通過在血液內水解或通過體內新陳代謝。
本發明還考慮了藥學活性組合物可含有本發明的化合物或其它可調節或與E-選擇蛋白或P-選擇蛋白或L-選擇蛋白競爭性結合的化合物。
本發明的藥學活性組合物包括可藥用載體和式(Ia)或(Ib)或(Ic)或(Id)或(Ie)或(If)化合物，從而可藥用載體還可能是醫藥上適當的納米粒子、樹枝型聚合物、脂質體、微泡或聚乙二醇(PEG)。本發明的藥物組合物可包括一種或多種上述式(Ia)或(Ib)或(Ic)或(Id)或(Ie)或(If)的化合物以及與其配制在一起的一種或多種生理學可接受載體、助劑或媒介物(它們在本文中一起被稱作載體)，用于非腸道注射劑、用于固體或液體形式的口服給藥、用于直腸或局部給藥等。
組合物可對人和動物施用，經口、直腸、非腸道(靜脈內、肌內、皮內、或皮下)、腦池內、陰道內、腹膜內、局部(粉末劑、膏劑或滴劑)，或作為經頰劑或通過吸入(噴霧、或作為鼻噴劑)施用。
適于非腸道注射劑的組合物可包括生理學可接受的無菌的水溶液或非水溶液、穩定劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗壞血酸、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、苯甲醇、EDTA)、分散劑、助懸劑或乳化劑以及用于重新在無菌的可注射溶液或分散液中構建的無菌粉末劑。適當的水性或非水性載體、稀釋劑、溶劑或媒介物的例子包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等等)，其適當的混合物，植物油(如橄欖樹或卡諾拉油)以及可注射有機酯如油酸乙酯。可通過例如使用包衣如卵磷脂、在分散液的情況下通過保持所需粒度并且通過使用表面活性劑保持適當的流動性。
這些組合物還可含有助劑如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。可通過各種抗菌劑和抗真菌劑如對羥基苯甲酸酯類、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等防止微生物起作用。還希望引入等滲劑，例如糖、氯化鈉等。可通過使用吸收延遲劑例如單硬脂酸鋁和明膠延長可注射藥物形式的吸收。
如果需要，并且為了更有效的分布，可將化合物引入到緩慢釋放或定時釋放的或靶向遞送的系統如聚合基質、脂質體和微球體中。它們可通過過濾通過細菌保留過濾器，或通過引入無菌水形式的殺菌劑，或一些其它即將使用前的無菌可注射介質進行滅菌處理。
口服給藥用固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉末劑和粒劑。在這些固體劑型中，將活性化合物或前藥與至少一種惰性的常規賦形劑(或載體)如枸櫞酸鈉或磷酸二鈣或以下物質混合(i)填料或補充劑，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、和硅酸，(ii)粘合劑，如羧甲纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠，(iii)濕潤劑，如甘油，(iv)崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、海藻酸、某些復合硅酸鹽和碳酸鈉，(v)溶液阻滯劑，如石蠟，(vi)吸收加速劑，如季銨化合物，(vii)潤濕劑，如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯，(viii)吸附劑，如高嶺土和膨潤土，以及(ix)潤滑劑，如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉及其混合物。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，劑型還可包括緩沖劑。
還可使用相似類型的固體組合物作為在使用賦形劑如乳糖以及高分子聚乙二醇等的軟和硬填充明膠膠囊中的填料。固體劑型如片劑、糖錠、膠囊、丸劑和粒劑可具有包衣和外殼，如腸溶衣和其它本領域公知的包衣。它們可含有遮光劑，并且還可以使得它們是這樣的組合物，即它們以延遲方式在腸道的某一部分內釋放一種或多種活性化合物。可使用的包埋組分的例子是聚合物和蠟。如果合適的話，還可將活性化合物與一種或多種上述賦形劑制成微囊密封形式。
口服給藥用液體劑型包括可藥用的乳劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑和酏劑。除了活性化合物之外，液體劑型還可包含本領域通常使用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺，油類，如棉子油、花生油、玉米胚芽油、橄欖油、卡諾拉油、蓖麻油和芝麻籽油，甘油，四氫糠醇，聚乙二醇，和脫水山梨醇的脂肪酸酯，或這些物質的混合物等。除這些惰性稀釋劑之外，組合物還可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和助懸劑、甜味劑、調味劑和芳香劑。
除活性化合物之外，懸浮劑可包含助懸劑，例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素。氧(氫氧)化鋁、膨潤土、瓊脂、黃蓍膠，或這些物質的混合物等。
直腸給藥用組合物優選是栓劑，栓劑可通過將本發明的化合物與適當的無刺激性的賦形劑或載體如可可脂、聚乙二醇或栓劑用蠟混合制備，上述賦形劑或載體在通常溫度下是固體但是在體溫下是液體并因此在直腸或陰道腔內溶解并釋放活性成分。本發明化合物的局部給藥用劑型包括膏劑、粉末劑、噴霧劑和吸入劑。
在無菌條件下將活性成分與生理學可接受的載體和任何需要的防腐劑、緩沖液或可能需要的發射劑混合。眼用制劑、眼膏劑、懸浮劑、粉末劑和溶液劑也被考慮在本發明的范圍內。
還可將本發明的化合物結合進入脂質體或與脂質體結合或以脂質體形式給藥。本領域已知的是，脂質體通常得自磷脂或其它脂類物質。脂質體由分散在水介質中的單薄層或多薄層水合液態結晶形成。可使用任何能夠形成脂質體的無毒的生理學可接受的并能被新陳代謝掉的脂類。脂質體形式中存在的組合物除了本發明的選擇蛋白結合拮抗劑之外還含有穩定劑、防腐劑、賦形劑等。優選的脂質是磷脂和磷脂酰膽堿(卵磷脂)，二者可得自天然和合成來源。形成脂質體的方式是本領域公知的。
非腸胃道劑型還可含有生物利用度增強劑(如酶調節劑、抗氧化劑)，適合保護化合物免于降解。本發明組合物中活性成分的真實劑量水平可改變，從而獲得一定量的活性成分，其可有效地獲得對于特定組合物和給藥方法是所希望的治療應答。因此，選擇的劑量水平根據所希望的治療效果、給藥途徑、治療所需時間和其它因素而定。本發明化合物對主體以單一劑量或分開劑量給藥的總的日劑量為每公斤體重50毫克。劑量單位組合物可含有這些數字的整除數，可用于構成日劑量。然而，可以理解的是，對于任何特定患者，無論是人還是動物，其特定的劑量水平將根據各種因素(包括體重、總的健康狀況、性別、飲食、給藥的時間和途徑、吸收和排泄速率、與其它藥物的組合、以及所治療的特定疾病的嚴重程度)而定。
特別地，本發明的化合物可用于治療各種與炎癥及細胞-細胞識別和粘著有關的疾病。例如，本發明的化合物可對患者給用，用于治療慢性阻塞性肺病(COPD)、急性肺損傷(ALI)、心肺分流術、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、克隆病、膿毒性休克、膿毒病、慢性炎癥性疾病如牛皮癬、特應性皮炎和類類風濕性關節炎，以及在心臟病發作、中風、動脈粥樣硬化和器官移植后發生的再灌注損傷、外傷性休克、多器官衰竭、自身免疫疾病如多發性硬化、經皮經腔血管成形術、哮喘和炎癥性腸病。在所有情況下，對需要這種治療的患者可以單獨形式或作為藥學活性組合物的一部分的形式給用有效量的本發明的化合物。還認為對需要這種治療的患者給用化合物的組合。本發明的化合物還可被用來治療其它與細胞-細胞粘著有關的疾病。因為本發明的化合物調節E-選擇蛋白或P-選擇蛋白或L-選擇蛋白的結合，因此通過調節這一結合互相作用很有可能治療任何與這一相互作用有關的疾病。
除了在一些白血球上被發現之外，還在各種癌細胞包括肺癌和結腸癌細胞上發現了sLea。已經暗示牽涉sLea的細胞粘著可參與某些癌癥的轉移，sLea結合拮抗劑可用于治療某些形式的癌癥。
使用本發明的活性成分或使用含有有效量的本發明活性成分的美容學或局部用皮膚學組合物，能夠令人驚訝地有效治療并且還能預防由外因和內因引起的皮膚老化。
本發明特別涉及式(Ia)到(If)化合物特別是式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體用于制備美容學或皮膚學組合物的用途。
活性化合物或其立體異構體的用量與使用美容學或皮膚學組合物獲得希望的結果所要求的量相當。本領域技術人員能夠判斷這種有效量，該有效量根據使用的衍生物、所施用的個體、以及施用時間而定。為了提供一定幅度，在本發明的美容學或皮膚學組合物中，式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體的給用量可為0.001wt％到40wt％，優選0.005wt％到30wt％，更優選0.01wt％到20wt％。
另一方面涵蓋了包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體以及至少一種美容學可接受組分如用于皮膚的美容學可接受組分的美容學組合物。
本發明的美容學組合物的生理介質的各組分的用量是該領域中的通常用量。當美容學組合物是乳劑時，脂相的比例可占美容學組合物總重量的2wt％到80wt％，優選5wt％到50wt％。
因此，美容學組合物將含有可對人皮膚施用的無毒的生理學可接受介質。對于皮膚的局部施用，美容學組合物可為具有一定液體稠度特別是具有液體或半液體稠度的溶液劑、懸浮劑、乳劑或分散劑形式，通過將脂相分散在水相(O/W)，或相反進行(W/O)，或美容學組合物可為凝膠。還可提供包括加壓推進劑的木斯(mousse)形式或噴霧形式或氣霧劑的美容學組合物。另外，組合物可以是用于毛發清洗目的的護發洗液、洗發劑或護發素、液體或固體皂類、治療掩蔽劑、或泡沫膏劑或凝膠劑。它們還可為染毛劑或睫毛油的形式。
本發明的美容學組合物還可包括一種或多種通常用于所述領域內的其它組分，所述組分選自配制添加劑，如水相或油相增稠劑或膠凝劑，可溶于美容學組合物介質中的染料，固體顆粒如微粒或納米粒子形式的礦物質或有機填料或顏料，防腐劑，香料，hydrotopes、電解質，中和劑(酸化劑或堿化劑)，發射劑，陰離子型、陽離子型或兩性表面活性劑，聚合物，特別是水溶性或水可分散性的陰離子性、非離子性、陽離子型或兩性成膜聚合物、礦物質或有機鹽，螯合劑；它們的混合物。
可使用美容學組合物抑制微炎癥循環。因此，本發明還涉及包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體的美容學組合物，該組合物可用于微炎癥狀況的美容學治療或美容學預防目的。
可使用包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體的美容學組合物用于由內因引起的皮膚老化的美容學治療或美容學預防目的也是本發明的主題。引起皮膚老化的內因是遺傳性的已被規劃好的決定因素，包括年齡、激素狀況和心理因素。
除了美容學非活性成分之外，本發明的組合物還包括一種或多種對皮膚發揮有益作用的美容學活性成分。因此，本發明涉及包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)或其立體異構體以及至少一種另外的美容學活性成分如紫外線阻斷劑或蛋白質的美容學組合物。包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體以及至少一種皮膚學可接受組分如用于皮膚的皮膚學可接受組分的皮膚學組合物也是本發明的主題。
可用于本文所述的皮膚學組合物的皮膚學可接受組分與本文定義的美容學可接受組分相同。
本發明的另一實施方案式包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)或其立體異構體的皮膚學組合物，其可用于微炎癥性病況的皮膚學治療、皮膚學診斷或皮膚學預防目的。
特別地，本發明涵蓋了包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體的皮膚學組合物，該組合物可用于癢病和由外因引起的皮膚老化的皮膚學治療、皮膚學診斷或皮膚學預防目的。外因通常包括環境因素；特別是由暴露在太陽，光或任何其它輻射下的光致老化，大氣污染，創傷，感染，外傷，缺氧，香煙煙霧，作為對外界因素應答的激素狀況，神經肽，電磁場，重力，生活方式(例如酒精的過度消耗)，重復的面部表情，就眠位置，和心理學應激物。
除皮膚學非活性成分之外，皮膚學組合物還可包括皮膚學或藥學活性成分。因此，本發明還涉及包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)或其立體異構體以及至少一種另外的皮膚學或藥學活性成分的皮膚學組合物。可用于本文所述的皮膚學組合物的皮膚學或藥學活性成分的定義與上述定義的美容學活性成分相同。皮膚學或藥學活性成分可與本發明定義的美容學活性成分相同。
本發明的另一個主題是包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體以及至少一種另外的皮膚學或藥學活性成分的皮膚學組合物，其特征在于其可用于微炎癥性病況的皮膚學治療、皮膚學診斷、或皮膚學預防。
特別地，本發明涉及包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體以及至少一種另外的皮膚學或藥學活性成分的皮膚學組合物，其特征在于其可用于癢病和由外因引起的皮膚老化的皮膚學治療、皮膚學診斷、或皮膚學預防。
皮膚老化還可由內因和外因的組合引起。因此，本發明涉及包括式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體以及至少一種另外的皮膚學或美容學活性成分的皮膚學組合物，其特征在于其可用于由內因和外因的組合引起的皮膚老化的美容學和皮膚學治療、和美容學和皮膚學預防。
本發明的另一個實施方案是制備美容學組合物的方法，通過將式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體、至少一種美容學可接受組分和最終的其它美容學活性成分混合進行。
特別地，通過將式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體、至少一種美容學可接受組分和最終的另外的美容學活性成分混合制備美容學組合物的方法是本發明的主題，其中組合物包括占組合物總重量的0.01wt％到20wt％的式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體。
另一方面涉及制備皮膚學組合物的方法，通過將式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)化合物或其立體異構體、至少一種皮膚學可接受組分和最終的其它皮膚學活性成分混合進行。
可根據以下一般合成路線合成本發明的許多化合物。
反應路線1 反應路線1
在反應路線1中，在惰性氣氛條件下苯胺(1)與N’-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亞胺(EDC)、三乙胺、4-二甲氨基-吡啶(DMAP)和羧酸(2)在二氯甲烷中反應，得到酰胺(3)。酰胺(3)進一步與三溴化硼在二氯甲烷中在-78℃下反應得到相應的2，4，6-三羥基苯基(4)。反應路線1中所示的生成化合物(4)的合成順序不僅適用于Y-H結構單元(1)，而且可總地適用于所有其它的Y-H型結構單元。
反應路線2
在反應路線2中，酰基氯(5)與通式(6)的苯胺在堿性條件(在二氯甲烷中的吡啶)下反應形成相應的酰苯胺(7)，或者，可使用三乙胺用于該反應步驟。酯(7)在MeCN或THF/MeOH中用LiOH水解獲得羧酸(8)，其進一步與三溴化硼在二氯甲烷中在-78℃下反應，然后通過水后處理，得到相應的二甲基化酸(9)。反應路線2中所示的生成化合物(9)的合成順序不僅適用于Y-H結構單元(6)而且適用于所有其它的Y-H結構單元。
上述反應路線中所示的結構單元(2)或(5)可根據以下反應路線3-9制備。
反路線3
在反應路線3中，愈創木酚(10)用70％的在AcOH中的HNO3進行選擇性硝化得到硝基愈創木酚(11)，其用碘甲烷和K2CO3在丙酮中進一步甲基化得到相應的藜蘆醚(13)。或者，從藜蘆醚(12)通過隨后與N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(TMEDA)在低溫下反應，然后與四氧化二氮(dinitric tetraoxide)反應可獲得(13)，隨后，(13)與BuLi和TMEDA在THF中反應，然后與硼酸三甲酯和鹽酸反應，得到硼酸(14)。硼酸(14)在惰性條件下與通式(15)的溴化芳香酯或雜芳香酯經歷Suzuki型堿性條件(Pd(PPh3)4和碳酸氫鈉水溶液，在乙二醇二甲醚中)，得到二芳基化合物(16)。二芳基化合物(16)進一步用氫氧化鋰水溶液在THF和MeOH或MeCN中水解得到相應的羧酸(17)，其通過與草酰氯在無水二氯甲烷中反應被轉化成結構單元(18)。
反應路線4
在反應路線4中，3-硝基藜蘆醚(13)隨后與BuLi和TMEDA在THF中反應，隨后與溴化銅(I)和溴乙酸乙酯反應，得到取代的苯基乙酸乙酯(19)，其進一步用氫氧化鋰水溶液在THF和MeOH或MeCN中水解得到相應的羧酸(20)。
反應路線5
在反應路線5中，藜蘆醚(12)用70％的在AcOH中的HNO3選擇性硝化得到4-硝基藜蘆醚(21)，隨后，(21)與BuLi和TMEDA在THF中反應，隨后與硼酸三甲酯和鹽酸反應，得到硼酸(22)，硼酸(22)在惰性條件下與溴化芳香酯或雜芳香酯(15)經歷Suzuki堿性條件(Pd(PPh3)4和碳酸氫鈉水溶液，在乙二醇二甲醚中)，得到二芳基化合物(23)。二芳基化合物(23)進一步用氫氧化鋰水溶液在THF和MeOH或MeCN中水解得到相應的羧酸(24)，其通過與草酰氯在無水二氯甲烷中反應轉化成結構單元(25)。
反應路線6
在反應路線6中，描述了酸結構單元(27)的生成。(27)的合成類似于反應路線4中所述。
反應路線7
在反應路線7中，4-溴愈創木酚(28)用70％的在AcOH中的HNO3選擇性硝化得到4-溴-6-硝基愈創木酚(29)，其進一步用碘甲烷和K2CO3在丙酮中碘化得到相應的5-溴-3-硝基藜蘆醚(30)。5-溴-3-硝基藜蘆醚(30)在惰性條件下與硼酸(31)經歷Suzuki堿性條件(Pd(PPh3)4和碳酸氫鈉水溶液，在乙二醇二甲醚中)，得到二芳基化合物(32)。二芳基化合物(32)進一步用氫氧化鋰水溶液在THF和MeOH或MeCN中水解得到相應的羧酸(33)，其通過與草酰氯在無水二氯甲烷中反應轉化成結構單元(34)。
反應路線8
反應路線8中描述的酸結構單元(35)根據反應路線4和6從5-溴-3-硝基藜蘆醚(30)制備。
反應路線9
在反應路線9中，3，4-二甲氧基苯酚(36)用70％的在AcOH中的HNO3選擇性硝化得到4，5-二甲氧基-2-硝基苯酚(37)，其進一步在二氯甲烷中被三氟甲基磺酸酐(Tf2O)和吡啶轉化成相應的三氟甲磺酸酯(38)。三氟甲磺酸酯(38)在惰性條件下與硼酸(31)在Suzuki堿性條件(Pd(PPh3)4和磷酸鉀水溶液，在甲苯中)反應得到二芳基化合物(39)。二芳基化合物(39)進一步用氫氧化鋰水溶液在THF和MeOH或MeCN中水解，得到相應的羧酸(40)，其通過與草酰氯在無水二氯甲烷中反應轉化成結構單元(41)。
實施例A [5-(2-氨基-苯基)-噻吩-2-基]-乙酸甲酯(87)的制備 反應路線11
步驟1(以下反應在無水氮氣氛下進行)將噻吩-2-基-乙酸甲酯(85)(2.0g，12.8mmol)溶于無水氯仿(9.0mL)和冰乙酸(9.0mL)中，分份添加N-溴代琥珀酰亞胺(2.3g，13.0mmol)并在室溫攪拌混合物3天，向反應混合物中添加水，分離各層，水層用二氯甲烷提取，合并的有機層用1M NaOH水溶液和水洗滌若干次，然后用鹽水洗滌一次，用Na2SO4干燥，粗產物通過制備性徑向色譜法純化(CyH/EtOAc 5+1]，得到(5-溴-噻吩-2-基)-乙酸甲酯(86)，為黃色油狀物(2.46g，81％)，其可使用而無需進一步純化。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.71(s，3H)；3.75(s，2H)；6.67(d，1H，J＝3.8Hz)；6.88(d，1H，J＝3.8Hz)。
步驟2(以下反應在無水氮氣氛下進行)將乙醇(3.7mL)、四(三苯基膦)-鈀(0)(289mg，0.25mmol)和Na2CO3十二水合物(4.0g，14.0mmol)溶于水(5.2mL)，隨后添加到2-氨基-苯硼酸鹽酸鹽(910mg，5.25mmol)的甲苯(52mL)溶液中，將反應混合物小心脫氣(5次)并再次用N2吹掃，添加(5-溴-噻吩-2-基)-乙酸甲酯(1.17g，5.0mmol)的甲苯(4.5mL)溶液，再次將混合物脫氣(5次)并在100℃攪拌22小時，將反應溶液在EtOAc和鹽水之間分配，分離的水層用EtOAc洗滌(3次)，合并的有機層用水和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，粗產物通過制備性徑向色譜法純化(CyH/EtOAc 5+1]，得到[5-(2-氨基-苯基)-噻吩-2-基]-乙酸甲酯(87)，為褐色油狀物(634mg，51％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.73(s，3H)；3.83(s，2H)；3.92-4.07(br.s，2H)；6.74(d，1H)；6.76(td，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.3Hz)；6.92(d，1H，J＝3.5Hz)；7.02(d，1H，J＝3.5Hz)；7.11(td，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.5Hz)；7.23(dd，14H，J1＝7.6Hz，J2＝1.5Hz)。
實施例B 5-(2-氨基-苯基)-噻吩-2-羧酸甲酯(90)的制備 反應路線12
步驟1LE23將5-溴-噻吩-2-羧酸(88)(1.50g，7.24mmol)溶于甲醇(10mL)并添加濃硫酸(0.39mL，7.24mmol)。在75℃攪拌反應混合物20小時，將混合物冷卻到室溫，減壓除去溶劑，并將殘余物溶于EtOAc，將該有機層用5％的Na2CO3水溶液洗滌3次，合并的水層用EtOAc提取。合并的有機層用鹽水洗滌并用Na2SO4干燥，減壓除去溶劑，在油泵抽真空下干燥殘余物無需另外純化，得到酯(89)，為白色固體(1.48g，92％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.88(s，3H)；4.00(br.s，2H)；6.73-6.82(m，2H)；7.13-7.21(m，2H)；7.26(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.0Hz)；7.78(d，1H，J-3.8)。
步驟2LE29(以下反應在氮氣氛下進行)將四(三苯基膦)-鈀(0)(510mg，0.45mmol)和酯(89)(1.97g，8.91mmol)溶于DME(16mL)中，將反應混合物小心脫氣(5次)并用N2吹掃。添加2-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼戊烷-2-基)-苯基胺(2.15g，9.80mmol)和1M NaHCO3水溶液(27.0mL，27.0mmol)，再次將反應混合物小心脫氣(5次)并用N2吹掃，在95℃攪拌混合物18小時，將反應混合物在EtOAc和水之間分配，分離的水層用EtOAc提取(3次)，合并的有機層用鹽水洗滌并用Na2SO4干燥，粗產物通過急驟層析法純化(硅膠，CyH/EtOAc 5+1]，得到5-(2-氨基-苯基)-噻吩-2-羧酸甲酯(90)，為黃色固體(1.41g，67％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)3.88(s，3H)；4.00(br.s，2H)；6.73-6.82(m，2H)；7.13-7.21(m，2H)；7.26(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.0Hz)；7.78(d，1H，J＝3.8)。
實施例C 4’，5’-二甲氧基-2’-硝基聯苯基-3-甲酰氯(95)的制備 反應路線13
步驟1DK006(以下反應在氮氣氛下進行)將四(三苯基膦)-鈀(0)(200mg，0.17mmol)和3-溴苯甲酸甲基酯(91)(1.25mg，5.81mmol)溶于DME(12mL)，將反應混合物小心脫氣(5次)并用N2吹掃，添加3，4-二甲氧基苯基硼酸(1.25g，6.85mmol)和1M NaHCO3水溶液(17.7mL，17.7mmol)，再次將反應混合物小心脫氣(5次)并用N2吹掃，在95℃攪拌混合物2小時，反應溶液在EtOAc和水之間分配，分離的水層用EtOAc提取(4次)。合并的有機層用鹽水洗滌并用Na2SO4干燥，粗產物通過急驟層析法純化(硅膠，CyH/EtOAc 5+1]，得到聯苯(92)，為黃色固體(1.27g，80％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.92(s，3H)；3.93(s，3H)；3.95(s，3H)；6.94(d，1H，J＝8.3Hz)；7.11(d，1H，J＝1.8Hz)；7.16(dd，1H，J1＝8.3Hz，J2＝1.8Hz)；7.47(t，1H，J＝7.7Hz)；7.73(dt，1H，J1＝7.6Hz，J2＝0.9Hz)；7.96(d，1H，J＝7.8Hz)；8.22(s，1H)。
步驟2DK010將聯苯(92)(653mg，2.39mmol)溶于冰醋酸(32mL)，添加70％硝酸(1.18mL，26.30mmol)并在室溫攪拌混合物30分鐘，慢慢添加水(12mL)到冷卻的(0℃)反應溶液中，濾出沉淀物并用水小心洗滌濾餅，在油泵抽真空下干燥濾餅而無需另外純化，然后用干燥器干燥，得到硝化聯苯(93)，為黃色固體(644mg，98％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)3.91(s，3H)；3.94(s，3H)；3.90(s，3H)；6.75(s，1H)；7.42-7.51(m，2H)；7.60(s，1H)；7.97(t，IH，J＝1.6Hz)；8.05(dt，1H，J1＝7.1Hz，J2＝1.6Hz)。
步驟3DK011將硝化聯苯(93)(1.28g，4.70mmol)溶于MeCN(46mL)，添加1M LiOH水溶液(23.5mL，23.5mmol)，在室溫攪拌反應混合物20小時，用1M HCl水溶液淬滅反應混合物(冷卻浴)(到pH約3)，用EtOAc提取混合物(3次)，合并的有機層用鹽水洗滌并用Na2SO4干燥，減壓除去溶劑，在油泵抽真空下干燥殘余物無需另外純化，得到羧酸(94)，為黃色固體(1.14g，80％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)3.89(s，3H)；3.90(s，3H)；7.01(s，1H)；7.53-7.59(m，2H)；7.64(s，1H)；7.84(br.s，IH)；7.93-7.98(m，1H)。
步驟4DK012(以下反應在無水氮氣氛下進行)將羧酸(94)(550mg，1.81mmol)溶于無水二氯甲烷(13mL)并添加無水DMF(1mL)，慢慢添加草酰氯(237μL，2.72mmol)，用水浴保持溫度為約20℃，并在室溫另外攪拌3小時，真空除去溶劑并干燥殘余物，得到粗制4’，5’-二甲氧基-2’-硝基聯苯基-3-甲酰氯(95)，為黃色固體。無進一步純化。
實施例D 2’，3’-二甲氧基-5’-硝基聯苯基-3-甲酰氯(99)的制備 反應路線14
步驟1FR631(以下反應在氮氣氛下進行)將四(三苯基膦)-鈀(0)(217mg，0.19mmol)和3-溴苯甲酸甲基酯(91)(1.35mg，6.28mmol)溶于DME(13mL)，將反應混合物小心脫氣(5次)并用N2吹掃，添加2，3-二甲氧基苯基硼酸(1.33g，7.28mmol)和1M NaHCO3水溶液(19mL，19mmol)，再次將反應混合物小心脫氣(5次)并用N2吹掃，在100℃攪拌混合物22小時，反應溶液在EtOAc和水之間分配，分離的水溶液層用EtOAc提取(4次)。合并的有機層用鹽水洗滌并用Na2SO4干燥，粗產物通過制備性徑向色譜法純化(硅膠，CyH/EtOAc 10+1]，得到聯苯(96)，為白色固體(1.50g，87％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.57(s，3H)；3.90(s，3H)；3.91(s，3H)；6.91-6.96(m，2H)；7.11(t，1H，J＝8.0Hz)；7.46(t，1H，J＝7.8Hz)；7.75(dt，1H，J1＝7.8Hz，J2＝1.5Hz)；8.00(dt，1H，J1＝7.8Hz，J2＝1.4Hz)；8.19(t，1H，J＝1.5Hz)。
步驟2FR632將聯苯(96)(1.49g，5.47mmol)溶于冰醋酸(30mL)，添加70％的硝酸(0.76mL，6.04mmol)并在室溫攪拌混合物22小時，將反應溶液傾入到冰水中，濾出沉淀物并用水小心洗滌濾餅，在油泵抽真空下干燥濾餅無需進一步純化，然后用干燥器干燥，得到硝化聯苯(97)，為黃色固體(1.29g，74％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.71(s，3H)；3.93(s，3H)；3.99(s，3H)；7.52(t，1H，J＝7.7Hz)；7.71(d，1H，J＝7.8Hz)；7.80(d，1H，J＝2.3Hz)；7.91(br.d，1H，J＝2.3Hz)；8.07(br.d，1H，J＝7.8Hz)；8.18(br.s，1H)。
步驟3FR634將硝化聯苯(97)(1.29g，4.07mmol)溶于MeCN(100mL)，并添加1M LiOH水溶液(41mL，41mmol)，在室溫攪拌反應混合物22小時，用2M HCl水溶液淬滅反應混合物(冷卻浴)(到pH約3)，濾出沉淀物并用水小心洗滌濾餅，用EtOAc洗滌一次，在油泵抽真空下干燥濾餅無需進一步純化，然后用干燥器干燥，得到羧酸(98)，為米色固體(1.06g，86％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)3.71(s，3H)；3.99(s，3H)；7.61(t，1H，J＝7.7Hz)；7.77(br.d，1H，J＝7.6Hz)；7.83(d，1H，J＝2.8Hz)；7.89(d，1H，J＝2.8Hz)；7.99(br.d，1H，J＝7.6Hz)；8.05(t，1H，J＝1.6Hz)；13.14(br.s，1H)。
步驟4FR637(以下反應在無水氮氣氛下進行)將羧酸(98)(500mg，1.65mmol)溶于無水二氯甲烷(11mL)并添加無水DMF(5mL)，慢慢添加草酰氯(220μL，2.47mmol)，使用水浴保持溫度為約20℃，并在室溫另外攪拌4小時，真空除去溶劑并干燥殘余物，得到粗制2’，3’-二甲氧基-5’-硝基聯苯基-3-甲酰氯(99)，為黃色固體。無需進一步純化。
實施例E 5-(4-氨基-苯基)-2-甲基-呋喃-3-羧酸甲酯(102) 反應路線15
步驟1(以下反應在無光條件下進行)將2-甲基-呋喃-3-羧酸甲酯(100)(3.60mL，28.5mmol)溶于氯仿(20mL)和冰醋酸(20mL)中，并以95分鐘的間隔分份添加NBS(6.90g，38.8mmol)，在室溫另外攪拌反應懸浮液19小時，向反應混合物中添加水，水層用二氯甲烷提取(2次)，合并的有機層用2M NaOH水溶液洗滌、水洗滌(3次)，和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，得到5-溴-2-甲基-呋喃-3-羧酸甲酯(101)(4.90g，78％)，為紅褐色油狀物。無需進一步純化。1H NMR(400MHz，CDCl3)2.54(s，3H)；3.80(s，3H)；6.53(s，1H)。
步驟2(以下反應在氮氣氛下進行)將Pd(PPh3)4(1.26g，1.09mmol)和5-溴-2-甲基-呋喃-3-羧酸甲酯(101)(4.77g，21.77mmol)溶于DME(116mL)并在室溫攪拌15分鐘，添加4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧雜硼戊烷-2-基)-苯基胺(5.25g，23.96mmol)，然后添加1M碳酸氫鈉溶液(65.4mL，65.3mmol)，將反應混合物小心脫氣，用N2吹掃(5次)，在95℃攪拌(回流)4小時，將反應混合物冷卻到室溫，減壓除去有機溶劑，殘余物在水和EtOAc之間分配，水層用EtOAc提取(3次)，合并的有機層用水和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，得到的粗產物通過急驟色譜法純化(硅膠，EtOAc/CyH 1+2)，得到5-(4-氨基-苯基)-2-甲基-呋喃-3-羧酸甲酯(102)(2.35g，46％)，為黃褐色固體。1H NMR(400MHz，CDCl3)2.60(s，3H)；3.74(br.s，2H)；3.82(s，3H)；6.64(s，1H)；6.67(dt，1H，J1＝8.6Hz，J2＝2.3Hz)；7.42(dt，2H，J1＝8.8Hz，J2＝2.3Hz)。
實施例F (3，4-二甲氧基-5-硝基-苯基)-乙酸(107) 反應路線16
步驟1(以下反應在無光條件下進行)將醛(103)(877mg，4.15mmol)溶于MeOH(30mL)，將溶液冷卻到0℃并以40分鐘的間隔分份添加硼氫化鈉(548mg，14.49mmol)，在室溫另外攪拌反應溶液70分鐘，將混合物冷卻到0℃，慢慢添加1M HCl(20mL)以除去溶劑，將殘余物在水和EtOAc之間分配，水層用EtOAc提取(3次)，合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，除去溶劑，得到芐醇(104)(876mg，99％)，為褐色固體。無需進一步純化。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.92(s，3H)；3.95(s，3H)；4.68(s，2H)；7.14(d，1H，J＝1.8Hz)；7.29(d，1H，J＝1.8Hz)。
步驟2(以下反應在配備有回流冷凝器和滴液漏斗的3頸燒瓶中在無水氮氣氛下進行)將三溴化磷(800μL，8.52mmol)溶于無水甲苯(90mL)并將溶液加熱到80℃，慢慢添加芐醇(104)(1.82g，8.52mmol)在無水甲苯(80mL)中的懸浮液并在80℃另外攪拌反應混合物2小時，使用冰浴冷卻混合物，并向反應溶液中慢慢添加冰水，混合物在水和EtOAc之間分配，水層用EtOAc提取(3次)，合并的有機層用水和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，除去溶劑，得到芐基溴(105)(2.23g，95％)，為褐色固體。無需進一步純化。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.92(s，3H)；3.96(s，3H)；4.42(s，2H)；7.10(d，1H，J＝2.0Hz)；7.34(d，1H，J＝2.0Hz)。
步驟3將芐基溴(105)(2.22g，8.06mmol)溶于MeOH(44.0mL)和水(9.0mL)中，添加氰化鉀(787mg，12.09mmol)，在70℃(回流)攪拌反應混合物90分鐘，混合物在水和EtOAc之間分配，水層用EtOAc提取(3次)，合并的有機層用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌(3次)，用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥。粗產物通過制備性徑向色譜法純化(硅膠，CyH/EtOAc2+1]，得到腈(106)，為黃色固體(1.35g，75％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.74(s，2H)；3.94(s，3H)；3.96(s，3H)；7.06(d，1H，J＝2.0Hz)；7.26(d，1H，J＝2.0Hz)。
步驟4將腈(106)(1.35g，6.07mmol)懸浮在冰醋酸(53mL)和水(65mL)中，慢慢添加濃硫酸(22mL)，在回流下另外攪拌反應混合物18小時，冷卻的反應混合物用EtOAc提取(5次)，合并的有機層用水(5次)和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，除去溶劑，得到(3，4-二甲氧基-5-硝基-苯基)-乙酸(107)(1.46g，99％)，為黃色固體。無需進一步純化。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)3.64(s，2H)；3.83(s，3H)；3.87(s，3H)；7.30(s，2H)；12.45(br.s，1H)。
實施例1 (5-{2-[2-(4，5-二羥基-1-硝基-苯基)-乙酰基氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(110) 反應路線17
步驟1(以下反應在無水氮氣氛下進行)將EDC鹽酸鹽(58mg，0.30mmol)懸浮在無水二氯甲烷(1.0mL)中，添加三乙胺(0.042mL，0.30mmol)，在室溫攪拌10分鐘，添加(4，5-二甲氧基-2-硝基-苯基)-乙酸(54mg，0.22mmol)和DMAP(8mg，0.06mmol)并攪拌15分鐘，添加苯胺(87)(50mg，0.20mmol)，在40℃攪拌反應溶液22小時，反應溶液在二氯甲烷和水(1+1)之間分配，分離各層，水層用二氯甲烷提取(3次)，合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，粗產物通過制備性徑向色譜法純化(硅膠60PF，CyH/EtOAc 3+1)，得到產物(108)，為黃-白色固體(28mg，30％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.75(s，3H)；3.82(s，2H)；3.92(s，2H)；3.94(s，3H)；3.96(s，3H)；6.75(d，1H，J＝3.3Hz)；6.80-6.84(m，2H)；7.09(t，1H，J＝7.5Hz)；7.27-7.35(m，2H)；7.63(s，1H)；7.89(s，1H)，8.27(d，1H，J＝7.8Hz)。
步驟2將酯(108)(49mg，0.10mmol)溶于甲醇(1.3mL)和THF(3.8mL)，添加1M LiOH水溶液(0.52mL，0.52mmol)并在40℃攪拌20小時，減壓除去溶劑，將殘余物在EtOAc和1M HCl(1+1)之間分配，分離水溶液層，用EtOAc提取3次，合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓除去溶劑，在油泵抽真空下干燥殘余物而無需進一步純化，得到粗產物(109)，為淺褐色固體(48mg，定量)。1HNMR(400MHz，CDCl3)3.87(s，2H)；3.92(s，2H)；3.94(s，3H)；3.96(s，3H)；6.76(d，1H，J＝3.3Hz)；6.82(s，1H)；6.85(d，1H，J＝3.3Hz)；7.09(t，1H，J＝7.7Hz)；7.26-7.35(m，2H)；7.63(s，1H)；7.88(br.s，1H)，8.28(d，1H，J＝8.1Hz)。
步驟3(以下反應在無水氮氣氛下進行)將羧酸(109)(48mg，0.10mmol)溶于無水二氯甲烷(3.0mL)，冷卻到-78℃(丙酮/干冰)，并慢慢添加1M BBr3的二氯甲烷溶液(0.42mL，0.42mmol)。在-78℃另外攪拌反應混合物30分鐘，除去冷卻浴，在0℃攪拌反應混合物1.5小時，在室溫另外攪拌2小時，將反應混合物冷卻到0℃，在劇烈攪拌下慢慢添加水(1.00mL)，反應混合物在EtOAc和水(1+1)之間分配，分離的水溶液層用EtOAc提取(2次)，合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓除去溶劑，粗產物通過制備性RP HPLC純化(梯度洗脫，水/CH3CN 95:5到5:95)，得到(5-{2-[2-(4，5-二羥基-2-硝基-苯基)-乙酰氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(110)，為黃-褐色固體(10mg，23％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)3.88(s，2H)；3.96(s，2H)；6.83(s，1H)；6.91(d，1H，J＝3.3Hz)；6.93(d，1H，J＝3.5Hz)；7.23(t，1H，J＝7.5Hz)；7.35(t，1H，J＝7.8Hz)；7.45(d，1H，J＝7.8Hz)；7.66(s，1H)；7.85(d，1H，J＝8.1Hz)。
實施例2 2-甲基-5-{4-[(2’-硝基-4’，5’-二羥基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-呋喃-3-羧酸(113) 反應路線18
步驟1(以下反應在無水氮氣氛下進行)將苯胺(102)(25mg，0.11mmol)溶于無水二氯甲烷(700μL)，添加無水吡啶(22μL，0.27mmol)和酰氯(95)(45mg，0.14mmol)，在室溫攪拌反應混合物3.5小時，將反應混合物傾入到用冰冷卻的1M HCl水溶液中，用二氯甲烷提取(3x)，合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，除去溶劑，得到酰胺(111)，為黃色固體(51mg，91％)。無需進一步純化。1H NMR(400MHz，CDCl3)2.64(s，3H)；3.84(s，3H)；3.96(s，3H)；3.99(s，3H)；6.78(s，1H)；6.83(s，1H)；7.44(dt，1H，J1＝8.1Hz，J2＝1.4Hz)；7.53(t，1H，J＝7.7Hz)；7.60-7.69(m，5H)；7.79-7.83(m，2H)；7.85(dt，1H，J1＝7.8Hz，J2＝1.4Hz)。
步驟2將酯(111)(51mg，0.10mmol)溶于THF(2.0mL)和MeOH(0.4mL)，添加1M LiOH水溶液(495μL，0.49mmol)，在40℃攪拌反應混合物40小時，減壓除去溶劑，將殘余物在EtOAc和1M HCl(1+1)之間分配，分離水溶液層，用EtOAc提取3次，合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓除去溶劑，在油泵抽真空下干燥殘余物而無需進一步純化，得到粗產物(112)，為黃色固體(35mg，70％.)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)2.58(s，3H)；3.91(s，3H)；3.92(s，3H)；6.99(br.s，1H)；7.06(s，1H)；7.53(br.d，1H，J＝7.6Hz)；7.59(t，1H，J＝7.7Hz)；7.67(s，1H)；7.68(d，2H，J＝8.6Hz)；7.84(d，2H，J＝8.6Hz)；7.93(br.s，1H，)；7.98(br.d，1H，J＝7.8Hz)；10.38(br.s，1H)。
步驟3(以下反應在無水氮氣氛下進行)將羧酸(112)(35mg，0.07mmol)溶于二氯甲烷(1.3mL)中，將溶液冷卻到-78℃并滴加1M的BBr3的二氯甲烷溶液(280μL，0.28mmol)，在-78℃攪拌反應混合物10分鐘，之后慢慢回溫到室溫約2.5小時，將反應混合物冷卻到0℃，滴加水和二氯甲烷，然后滴加EtOAc，分離水溶液層并用EtOAc提取3次，合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓除去溶劑，粗產物通過制備性RP HPLC純化(梯度洗脫，水/CH3CN 95:5到5:95)，得到2-甲基-5-{4-[(2’-硝基-4’，5’-二羥基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-呋喃-3-羧酸(113)(8mg，24％)，為黃色固體。1H NMR(400MHz，CD3OD)2.65(s，3H)；6.82(s，1H)；6.92(s，1H)；7.48(dt，1H，J1＝7.8Hz，J2＝1.4Hz)；7.57(t，1H，J＝7.7Hz)；7.57(s，1H)；7.69(d，2H，J＝8.8Hz)；7.78(d，2H，J＝8.8Hz)；7.89(t，1H，J＝1.6Hz)；7.97(dt，1H，J1＝8.1Hz，J2＝1.4Hz)。
實施例3 (5-{2-[(2’，3’-二羥基-5’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(116) 反應路線19
步驟1(以下反應在無水氮氣氛下進行)將苯胺(87)(100mg，0.40mmol)溶于無水二氯甲烷(3.0mL)，添加無水吡啶(80μL，1.01mmol)和酰氯(99)(169mg，0.53mmol)，在室溫攪拌反應混合物20小時，將反應混合物傾入到用冰冷卻的1M HCl水溶液中，用二氯甲烷提取(3x)，合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，粗產物通過制備性徑向色譜法純化(硅膠60PF，CyH/EtOAc 3+1)，得到酰胺(114)，為黃色固體(184mg，85％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)3.69(s，3H)；3.71(s，3H)；3.86(s，2H)；4.00(s，3H)；6.98(d，1H，J＝3.3Hz)；7.03(d，1H，J＝3.5Hz)；7.17(td，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.0Hz)；7.38-7，44(m，2H)；7.53(t，1H，J＝7.7Hz)；7.68(dt，1H，J1＝7.8Hz，J2＝1.3Hz)；7.78(dt，1H，J1＝7.8Hz，J2＝1.3Hz)；7.80(d，1H，J＝2.5Hz)；7.88(d，1H，J＝2.5Hz)；7.91(t，1H，J＝3.0Hz)；8.43(br.s，1H)；8.51(d，1H，J＝8.6Hz)。
步驟2將酯(114)(184mg，0.34mmol)溶于MeCN(5.0mL)和MeOH(2.0mL)，添加1M LiOH水溶液(1.7mL，1.7mmol)，在室溫攪拌反應混合物20小時，減壓除去溶劑，將殘余物在EtOAc和1M HCl(1+1)之間分配，分離水溶液層，用EtOAc提取3次，合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓除去溶劑，在油泵抽真空下干燥殘余物而無需純化，得到粗產物(115)，為淺黃色固體(183mg，定量)。1H NMR(400MHz，CD3OD)3.78(s，3H)；3.85(s，2H)；4.07(s，3H)；6.98(d，1H，J＝3.5Hz)；7.19(d，1H，J＝3.5Hz)；7.38(td，1H，J1＝7.5Hz，J2＝1.3Hz)；7.44(td，1H，J1＝7.7Hz，J2＝1.5Hz)；7.61-7.68(m，2H)；7.73(d，1H，J＝8.1Hz)；7.80(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.3Hz)；7.94-8.02(m，3H)；8.10(br.s，1H)。
步驟3(以下反應在無水氮氣氛下進行)將羧酸(115)(70mg，0.14mmol)溶于無水二氯甲烷(1.4mL)，將溶液冷卻到-78℃并滴加1M的BBr3的二氯甲烷溶液(810μL，0.81mmol)，在-78℃攪拌反應混合物10分鐘，然后慢慢在室溫另外回溫2小時，將反應混合物冷卻到0℃，滴加水和二氯甲烷，然后滴加EtOAc，分離水溶液層，用EtOAc提取3次，合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓除去溶劑，粗產物通過制備性RP HPLC純化(梯度洗脫，水/CH3CN 95:5到5:95)，得到(5-{2-[(2’，3’-二羥基-5’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(116)(12mg，18％)，為褐色固體。1H NMR(400MHz，CD3OD)3.84(s，2H)；6.99(d，1H，J＝2.8Hz)；7.19(d，1H，J＝3.5Hz)；7.37(td，1H，J1＝7.8Hz，J2＝1.5Hz)7.44(td，1H，J1＝7.7Hz，J2＝1.5Hz)；7.58-7.65(m，2H)；7.72-7.76(m，2H)；7.86-7.97(m，3H)；8.16(br.s，1H)。
實施例4 4’，5’-二羥基-2’-硝基-聯苯基-3-羧酸苯基酰胺(117) 圖解20
根據實施例3步驟1和3所述步驟，從苯胺和酰氯(95)合成4’，5’-二羥基-2’-硝基-聯苯基-3-羧酸苯基酰胺(117)，得到4’，5’-二羥基-2’-硝基-聯苯基-3-羧酸苯基酰胺(117)(2.4mg，2步驟收率10％)，為褐色固體。1H NMR(400MHz，CD3OD)6.84(s，1H)；7.19(br.t，1H，J＝7.5Hz)；7.39(br.d，1H，J＝8.1Hz)；7.41(br.d，1H；J＝7.6Hz)；7.48(dt，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.3Hz)；7.57(t，1H，J＝7.7Hz)；7.57(s，1H)；7.70-7.75(m，2H)；7.88(t，1H，J＝1.5Hz)；7.97(br.d，1H，J＝7.8Hz)。
實施例5 (5-{2-[(4’，5’-二羥基-2’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(118) 圖解21
根據實施例3步驟1到3所述步驟，從胺(87)和酰氯(95)制備(5-{2-[(4’，5’-二羥基-2’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(118)，得到(5-{2-[(4’，5’-二羥基-2’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(118)(14mg，3步驟收率29％)，為黃色固體。1HNMR(400MHz，CD3OD)3.85(s，2H)；6.83(s，1H)；6.97(d，1H，J＝3.5Hz)；7.17(d，1H，J＝3.5Hz)；7.37(td，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.5Hz)7.43(td，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.8Hz)；7.47(br.d，1H，J＝7.6Hz)；7.55(t，1H，J＝7.6Hz)，7.56(s，1H)，7.64(dd，1H，J1＝7.3Hz，J2＝1.0Hz)；7.69(d，1H，J＝7.6Hz)；7.83(br.s，1H)；7.93(br.d，1H，J＝7.6Hz)。
實施例6 5-{2-[(4’，5’-二羥基-2’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-羧酸(119) 圖解22
根據實施例3步驟1到3所述步驟，從胺(90)和酰氯(95)制備5-{2-[(4’，5’-二羥基-2’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-羧酸(119)，得到5-{2-[(4’，5’-二羥基-2’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-羧酸(119)(6mg，2步驟收率8％)，為黃色固體。1H NMR(400MHz，CD3OD)6.84(s，1H)；7.35(d，1H，J＝3.8Hz)；7.41-7.63(m，6H)；7.71(dd，1H，J1＝7.8Hz，J2＝1.3Hz)；7.75(d，1H，J＝3.8Hz)；7.86(br.s，1H)；7.93(br.d，1H，J＝7.6Hz)。
實施例7 5-{2-[(2’，3’-二羥基-5’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-羧酸(120) 圖解23
根據實施例3步驟1到3所述步驟，從胺(90)和酰氯(99)制備5-{2-[(2’，3’-二羥基-5’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-羧酸(120)，得到5-{2-[(2’-3’-二羥基-5’-硝基-聯苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-羧酸(120)(17mg，3步驟收率15％)，為黃色固體。1H NMR(400MHz，CD3OD)7.36(d，1H，J＝4.0Hz)；7.44(td，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.5Hz)；7.51(td，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.5Hz)；7.59-7.67(m，2H)；7.69-7.75(m，3H)；7.86-7.97(m，3H)；8.21(br.s，1H)。
實施例8 (5-{2-[2-(3，4-二羥基-5-硝基-苯基)-乙酰基氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(121) 圖解24
根據實施例3步驟1到3所述步驟，從胺(87)和酰氯(107)制備(5-{2-[2-(3，4-二羥基-5-硝基-苯基)-乙酰基氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(121)，得到(5-{2-[2-(3，4-二羥基-5-硝基-苯基)-乙酰氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(121)(8mg，3步驟收率10％)，為黃色固體。1H NMR(400MHz，CD3OD)3.65(s，2H)；3.81(s，2H)；6.83-6.89(m，2H)；7.17(br.s，1H)；7.27(td，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.5Hz)；7.36(td，1H，J，＝7.7Hz，J2＝1.5Hz)；7.48(dd，1H，J1＝7.8Hz，J2＝1.5Hz)；7.55(s，1H)；7.69(br.d，1H，J＝8.1Hz)。
E-/P-/L-選擇蛋白的sLexTSA:IC50數據的結果 E-和P-選擇蛋白的流動室試驗數據 給出的數據是化合物的抑制％除以百莫塞爾的抑制％的歸一化比值。
以下反應路線10中的化合物是那些被本文稱為特別優選的化合物。

Sialyl Lewisx硫酸酪氨酸試驗(sLexTSA) 在分子水平檢測本發明的化合物作為PSGL-1取代物抑制P-、L-、或E-選擇蛋白嵌合分子與sLex和硫酸酪氨酸殘基(其與聚合物基質結合)結合的能力。確定了選擇的IC50值。
在含山羊抗人Fc mAB(10μg/ml)的碳酸鹽緩沖液(pH9.6)中將微量滴定板涂層過夜。在試驗緩沖液(25mM 4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)、150mM NaCl、1mM CaCl2，pH7.4)中洗滌，將封閉的(3％牛血清清蛋白(BSA)，在試驗緩沖液中)板在37℃與人P-選擇蛋白-IgG-嵌合體(分別是0.61nM，150ng/mL)或人L-選擇蛋白-IgG-嵌合體(分別是0.61nM，89ng/mL)或人E-選擇蛋白-IgG-嵌合體(分別是0.61nM，131ng/mL)培養2小時。將5μl的載有15％ sLex、10％硫酸酪氨酸、5％生物素的sLex-硫酸酪氨酸聚丙烯酰胺(1mg/ml)與20μl鏈霉抗生物素蛋白-過氧化物酶溶液(1mg/ml)以及無CaCl2的25μl試驗緩沖液復合。為了用于試驗中，將配體復合物以1:10000在試驗緩沖液中稀釋，并進一步用不同量的化合物在含2％ DMSO的試驗緩沖液中以1:1稀釋。將該混合物添加到預涂覆E-或者P-選擇蛋白的孔中。在37℃培養2小時，用含0.005％聚氧乙烯單月桂酸山梨醇酐酯(TWEEN 20)的試驗緩沖液洗滌孔6次，用20μl的3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺(TMB)/H2O2底物溶液顯色10-15分鐘，并用20μl的1M H2SO4終止。通過在Fusion alpha-FP讀數器(由Packard Bioscience，Dreieich，Germany銷售)中測量450nm對620nm的光密度確定結合的sLex-硫酸酪氨酸配體復合物。
流動室試驗/流動條件下的細胞粘著和卷繞 為了測量化合物在與血管內流動相似的動力學條件下抑制細胞粘著的能力，進行了流動室試驗，該試驗解釋/檢測了HL-60細胞/各種細胞系與P-選擇蛋白、L-選擇蛋白和E-選擇蛋白嵌合分子的結合。
使用平行流動室系統測定流動條件下的細胞結合。在室溫下用分別含有2，5μg/ml或者10μg/ml的人E-或者P-選擇蛋白-IgG嵌合體的涂覆緩沖液(50mM三-(羥基甲基)氨基甲烷緩沖液(Tris)、150mMNaCl、2mM CaCl2；pH 7，4)涂覆35mm的聚苯乙烯培養皿1小時。除去涂覆溶液后，在室溫下用1％ BSA在涂覆緩沖液中對非特異性結合部位進行封閉1小時。用試驗緩沖液(＂Roswell Park Memorial Institute1640＂(RPMI 1640)+10mM HEPES)洗滌后，將培養皿放進平行板層流室內(由Glycotech，Rockville，MD小時)并安裝到反轉相差顯微鏡上(由Olympus，Hamburg，Germany銷售)，其裝配有與PC連接的CCD照相機(JVC)。使用蠕動泵(由Ismatec，Wertheim-Mondfeld，Germany銷售)，用含125μM化合物或者媒介物對照物(DMSO)的試驗緩沖液對再循環系統進行平衡處理。將細胞(1百萬/毫升)添加到室中并以高流速分配2分鐘，然后減慢流速得到1達因/cm2的流動剪切計算值。在連續流動5分鐘后用計數法記錄10低倍視野的視頻次序。從每次單獨實驗中在化合物存在或缺乏條件下的每視野內附著于涂層培養皿表面的平均細胞數計算抑制百分數。
權利要求
1.包括至少一種式(Ib)或(Ic)或(Ie)或(If)的化合物、或其可藥用鹽、酯或酰胺和前藥以及可用于醫藥的可藥用載體的藥物組合物，
其中各符號和取代基具有以下含義
-X-＝
m＝0、1；n＝1-3的整數
其中“環”為
R1為H、NO2、CF3、F、Cl、Br、I、CN、CH3、NH2、NH烷基、NH芳基、NH酰基和k＝0、1，
-Y＝
s為0或1，
R2為CO2H、CO2烷基、CO2芳基、CO2NH2、CO2芳烷基、SO3H、SO2NH2、PO(OH)2、1-H-四唑基-、CHO、COCH3、CH2OH、NH2、NH烷基、N(烷基)烷基’、OCH3、CH2OCH3、SH、F、Cl、Br、I、CH3、CH2CH3、CN、CF3，
R3獨立于R2為H、CH3、CH2CH3、CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2，和
R4獨立于R2和R3為H、CH3、CH2CH3、CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、R2，
R5為H、NO2、CF3、F、Cl、Br、I、CN、CH3、OCH3、SH、NH2，
和-W-＝-(CH2-)v、順式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-，v為0、1、2；
在-W-為順式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-的情況下，R2一定不是NH2或SH；
t為0、1、2，
-Z＝
R7獨立于R2為H、NO2、CF3、F、Cl、Br、I、CN、CH3、OCH3、SH、NH2，
K＝NH、NMe、O、S，
2.權利要求1所述的藥物組合物，其中化合物由式(IIb)或(IIc)或(IIe)或(IIf)定義
其中-Y和作為X(a)和X(b)的-X’-如權利要求1的定義。
3.權利要求1的藥物組合物，其中化合物由式(A2)或(A3)或(A5)或(A6)或(B2)或(B3)或(B5)或(B6)定義，
其中-X’-和-Y如權利要求2定義，并且其中-X”-為
并且其中-Y’為
其中所有標記、符號和取代基如權利要求1的定義。
4.權利要求3的藥物組合物，其中化合物由式(C2)或(C3)或(C5)或(C6)定義
其中-X”-和-Y’如權利要求3的定義。
5.權利要求4的藥物組合物，其中化合物由式(D2)或(D3)或(D5)或(D6)定義
其中-X”-如權利要求3的定義并且-Y”為
R9為CO2H、CO2烷基、CO2芳基、CO2NH2、CO2芳烷基、CH2SO3H、CH2SO2NH2、CH2PO(OH)2、1-H-四唑基、CHO、COCH3、CH2OH、CH2NH2、CH2NH烷基、CH2N(烷基)烷基’、CH2OCH3、CH2SH，
其中所有標記、符號和取代基如權利要求1的定義。
6.具有權利要求4或5中定義的式(C2)或(C3)或(C5)或(C6)或(D2)或(D3)或(D5)或(D6)的通式結構的化合物。
7.具有權利要求1中定義的式(Ib)、(Ic)、(Ie)或(If)的結構的化合物用于制備治療以下疾病的藥物的應用慢性阻塞性肺病(COPD)，急性肺損傷(ALI)，心肺分流術，急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，克隆病，膿毒性休克，膿毒病，慢性炎癥性疾病如牛皮癬、特應性皮炎和類風濕性關節炎，在心臟病發作、中風、動脈粥樣硬化和器官移植后發生的再灌注損傷，外傷性休克，多器官衰竭，自身免疫疾病如多發性硬化，經皮經腔血管成形術，哮喘和炎癥性腸病。
8.具有權利要求1中定義的式(Ib)或(Ic)或(Ie)或(If)的結構的化合物用于制備治療、診斷或者預防炎癥性疾病的藥物的應用。
9.具有權利要求1中定義的式(Ib)或(Ic)或(Ie)或(If)的結構的化合物用于制備診斷學或者治療學的靶向給藥用媒介物的應用。
10.具有權利要求1中定義的式(Ib)或(Ic)或(Ie)或(If)的結構的化合物用于制備美容學或者皮膚學組合物的應用。
11.美容學組合物，其包括權利要求1中定義的至少一種式(Ib)或(Ic)或(Ie)或(If)的化合物以及至少一種美容學可接受組分。
12.皮膚學組合物，其包括權利要求1中定義的至少一種式(Ib)或(Ic)或(Ie)或(If)的化合物以及至少一種皮膚學可接受組分。
全文摘要
本發明提供了藥物組合物，該藥物組合物包括至少一種例如式(Ie)的化合物、或其可藥用鹽、酯、或酰胺和前藥以及可用于醫藥的可藥用載體，其中各符號和取代基具有以下含義-X-為例如，并且Y為例如，其可被用于調節由E-、P-或L-選擇蛋白結合介導的體外或體內過程。
文檔編號A61K31/5377GK101374508SQ200680038782
公開日2009年2月25日 申請日期2006年9月20日 優先權日2005年9月20日
發明者埃瓦爾德·艾德特, 雷莫·克拉尼奇 申請人:瑞沃他生物制藥股份公司