采用cd4結合肽和輻射的療法的制作方法

專利名稱：采用cd4結合肽和輻射的療法的制作方法
技術領域：
本發明涉及采用輻射治療臨床疾病的領域。具體地說，本發明涉 及能夠結合CD4的肽如抗體調節輻射治療的用途。
背景技術：
輻射在誘導皮膚浸潤性T細胞凋亡方面高度有效，并由此在患有 T細胞介導的皮膚病的患者中發揮有益作用。然而，為了足夠的臨床 效力，可增強(惡性)T細胞對輻射的敏感性。在淋巴瘤細胞UV暴露 后，觀察到Gl期細胞累積和凋亡細胞百分率增加，其被采用Gl關卡 抑制劑2-AP的治療增大(Takemura T等，Apoptosis. 4(4)， 245-53 (1999))。該研究還表明，Gl期p53表達水平增加與對UV輻射誘導的 細胞死亡的敏感性增加有關聯。由于Gl期p53表達提升而增加放射 敏感性得到許多其它研究的支持(Cuddihy AR等，Cancer Metastasis Rev. 21(3-4), 237-57 (2004), Mcllwrath AJ等，Cancer Res. M(14)， 3718-3722 (1994), Bohnke A等，Int J Radiat Biol.艇l), 53-63 (2004)， Nagasawa M等，Oncogene.巡(23), 2889-99 (2001》。而且，已表明鱗狀 細胞癌細胞通過由抗EGFR抗體C225誘導的Gl停滯對輻射敏感 (Huang SM等，Clin Cancer Res. g(6), 2166-74 (2000))。還發現Gl樣靜 止期的腫瘤細胞對輻射比增殖細胞更敏感(Ng CE等，Br J Cancer. f^(3), 301-307 (1987》。
業已表明，p53的上調與T細胞中的重要信號途徑磷脂酰肌醇3-激酶(P13K)的抑制相關(Grandage VL等，Leukemia. 1^(4), 586-94 (2005))。因為抑制性銜接分子SHIP-1是P13K抑制劑(Horn S等, Leukemia. 1^(11)， 1839-49 (2004》，所以SHIP-1的活化應因此導致p53 的上調。
Dok-l和SHIP-1是所謂的在造血細胞中表達的"抑制性銜接分 子"，其用于減弱信號轉導，由此防止不適宜的細胞活化(Veillette A等, ^(2), 301-8 (1988》。Dok-l的磷酸化觸發了與SHIP畫1的相互作用， 這導致P13K蛋白激酶B (PKB)/Akt途徑的負調節。業已表明，Dok-l 在B細胞中的過表達引起細胞周期抑制劑p2lW^"ciP1的表達增加、細 胞周期蛋白D2表達降低和抗凋亡蛋白bd-XL表達降低(Yamakawa N 等，E纖O J. 21(7)， 1684-94 (2002》。Gl/S抑制劑p21的增加和Gl細 胞周期蛋白D的降低應暗示在Dok-l活化時Gl期延長或停滯。
通過在內源SfflP-l缺陷型JurkatT細胞中恢復SHIP-1表達而人 工誘導的SHIP-1表達已表明增加通過G1期的轉變時間。Gl期的這 種延伸與細胞周期抑制劑p271^1的穩定性增加相關(Horn, 2004,同 上)。SHIP活化對通過Gl期前進的抑制性影響通過研究更遍在表達 的SHIP-1同源物SfflP-2得到證實，SfflP-2還在T細胞中表達(Bruyns 等，Biol Chem.里(7-8), 969-74 (1999》。SHIP-2在成膠質細胞瘤細胞 中的過表達抑制P13K蛋白激酶B(PKB)途徑，并引起在G1的細胞周 期停滯，這也與細胞周期抑制劑p27Kip的穩定性增加相關(Taylor V等, Mol Cell Biol. ,8), 6860-6871 (2000》。
多種誘導DNA損傷的療法，包括UVB輻射、補骨脂素和UVA (PUVA)療法、電離輻射、電子束和x射線(Kacinski等，AnnNYAcad Sci. Mi, 194-199 (2001))以及光分離置換法(photopheresis)(血液體外循 環，接觸UVA和補骨脂素)(Baron等，Dermatol Ther. 1^(4)， 303-310 (2003)),適用于CTCL。
PUVA對由正常或胂瘤性T淋巴細胞的皮膚浸潤引起的皮膚病是 高度有效的治療。有報道指T淋巴細胞對PUVA的細胞毒性作用的敏感性比其它皮膚居住細胞如角質細胞大50倍以上(Johnson等, Photochem Photobiol. @(5)， 566-571 (1996》。Gl DNA亞峰表明細胞死 亡通過凋亡發生，PUVA治療明顯減慢細胞周期進展，最終產生細胞 周期停滯和凋亡進入(Johnson R等，Photochem Photobiol. @(5), 566-571 (1996))。還已經表明，PUVA在輻射過的皮膚中導致DNA鏈 之間交聯，受損的DNA將活化DNA修復機制，在表皮細胞(Hashimoto Y等，J Dermatol Sci. 1^(1), 16-24 (1995)或成纖維細胞(Ma W等，Exp Dermatol. 12(5), 629-37 (2003)中細胞停滯在細胞周期的G2期。
發明概述
本發明涉及令人驚奇的發現能夠結合CD4的抗體可誘導增加 的p56^磷酸化。另外，抗CD4單克隆抗體扎木單抗(zanolimumab) 對p56^的磷酸化與p56kk酪氨酸激酶的某些底物(例如抑制性銜接分 子Dok-l和/或SHIP-1)的增加的磷酸化有關聯。這些抑制性銜接分子 的活化經常導致細胞周期在Gl期延長或停滯。在Gl期停滯的細胞可 能對輻射治療敏感(Mcllwrath， 1994,出處同上)，因此增強隨后的或 并行的輻射治療的效力。另外，抑制性銜接分子如SHIP-1的活化經 常導致P13k抑制，這經常導致p53上調，并由此可促進放療時的T 細胞凋亡(Okkenhaug K.等，Nature reviews i 317-330 (2003))。
在一個實施方案中，本發明涉及能夠結合CD4的肽，例如抗體， 以及其調節臨床疾病的輻射治療的用途。在本發明背景下，能夠結合 CD4的肽還可被稱為"CD4結合肽"，能夠結合CD4的抗體還可被稱 為"抗-CD4抗體"。在一個實施方案中，按照本發明使用的CD4結合 肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段，能夠實現以下的一項或多項， 例如以下的至少2項，例如以下的至少3項，例如以下的至少4項， 例如以下的至少5項，例如以下的至少6項，例如以下的至少7項， 例如以下的至少8項，例如以下的全部
-通過p56欣誘導a-酪蛋白的磷酸化，-誘導p56kk自體磷酸化，
國誘導抑制性銜接分子Dok-l和/或SHIP-1和/或SfflP-2的磷酸化，
畫誘導p5^、介導的Dok畫l磷酸化，
-PKB/Akt途徑的抑制，
-遠離TCR的CD4隱匿，
國增加和/或上調p53表達，
-誘導細胞周期的Gl期停滯或延長， -增加CD4+細胞、優選CD4+ T細胞對輻射的敏感性。 按照本發明使用的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合 片段，能夠結合CD4，并由此誘導p56^酪蛋白激酶的某些底物的磷 酸化。p56kk酪氨酸激酶的活化一般通過磷酸化導致酪氨酸激酶下游的 抑制性銜接蛋白(Dok-l)(Martelli MP等，J Biol Chem. 276(49), 45654-45661 (2001), Okabe S等，Blood. 105(D, 474-480 (2005))和/或接 觸SH2結構域的5'-肌醇磷酸酶(SfflP-l)的表達增加(Lamkin TD等，J Biol Chem. 222(16), 10396-401 (1997))。 Dok曙l和SHIP國1例如在造血細 胞中表達，在該細胞中它們可用于減弱信號轉導，并由此防止不適宜 的細胞活化(Veillette等，Annu Rev Immunol. 669-707 (2002))。 Dok-l和SHIP-1的磷酸化一般導致ras/ERK和AKT途徑的抑制。 Dok-l的活化可觸發與SHIP-1的相互作用，該相互作用可導致P13K 蛋白激酶B(PKB)/Akt途徑的負調節，由此將細胞周期停滯在G1期。 Dok-l在B細胞中的過表達降低細胞周期蛋白D2表達和/或增加細胞 周期抑制劑p21WAF1/chipl表達(Yamakawa， 2002,出處同上)，這二者 均導致Gl期的延長或停滯。SfflP-l的活化和表達誘導通過Gl期的 轉變時間增加，并增加細胞周期抑制劑p27KiP]的穩定性(Horn， 2004， 出處同上)。SHIP-1同源物SHIP-2遍在表達，SHIP-2的過表達導致 P13K蛋白激酶B (PKB)途徑的抑制，由此將細胞周期停滯在Gl期 (Taylor V， 2000，出處同上)。另外，SHIP-1的表達抑制P13K蛋白激 酶B(Horn， 2004，出處同上)，這可導致p53上調(Grandage， 2005,出處同上)。表達p53的肺瘤細胞停滯在Gl期(Bohnke, 2004，出處 同上)，另夕卜，功能性p53在輻射時促進淋巴細胞的凋亡(Cuddihy, 2004, 出處同上)。
處于Gl期的細胞經常對離子輻射更敏感(Mcllwrath， 1994,出處 同上)，而且，處于Gl-樣靜止期的腫瘤細胞對輻射比增殖細胞更敏感 (Ng， 1987，出處同上)。CD4結合肽如抗CD4抗體或其抗原結合片段 與CD4+ T細胞的結合因此可使細胞對輻射治療敏感，并誘導細胞在 此治療后凋亡。
在一個實施方案中，本發明涉及用于在接受或將接受輻射治療的 個體中治療惡性疾病或炎性皮膚病的CD4結合肽，例如抗CD4抗體 或其抗原結合片段。
在一個實施方案中，本發明涉及用于和輻射治療組合治療惡性疾 病或炎性皮膚病的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段。
在一個實施方案中，本發明涉及用于調節臨床疾病的輻射治療的 CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段。
在一個實施方案中，本發明涉及CD4結合肽(例如抗CD4抗體或 其抗原結合片段)在制備用于在接受或將接受輻射治療的個體中治療 惡性疾病或炎性皮膚病的藥物組合物中的用途。
在一個實施方案中，本發明涉及CD4結合肽(例如抗CD4抗體或 其抗原結合片段)在制備用于和輻射治療組合治療惡性疾病或炎性皮 膚病的藥物組合物中的用途。
在一個實施方案中，本發明涉及能夠結合CD4的CD4結合肽(例 如抗CD4抗體或其抗原結合片段)在制備用于調節臨床疾病的輻射治 療的藥物組合物中的用途。
在一個實施方案中，本發明涉及治療惡性疾病或炎性皮月夫病的方 法，其包括給予其需要的患者治療有效量的CD4結合肽，例如抗CD4 抗體或其抗原結合片段，并對所述患者進行輻射治療。
在一個實施方案中，本發明涉及調節臨床疾病的輻射治療的方法，其包括給予其需要的患者治療有效量的CD4結合肽，例如抗CD4 抗體或其抗原結合片段，并對所述患者進行輻射治療。
在一個實施方案中，本發明涉及含CD4結合肽(例如抗CD4抗體 或其抗原結合片段)和補骨脂素連同一種或多種藥學上可接受的賦形 劑用作藥物的藥盒組件。
在一個實施方案中，本發明涉及含CD4結合肽(例如抗CD4抗體 或其抗原結合片段)和補骨脂素連同藥學上可接受的賦形劑用作治療 惡性疾病或炎性皮膚病的藥物的藥盒組件。
在一個實施方案中，本發明涉及含CD4結合肽(例如抗CD4抗體 或其抗原結合片段)和補骨脂素連同藥學上可接受的賦形劑用作與輻 射治療組合治療惡性疾病或炎性皮膚病的藥物的藥盒組件。
在一個實施方案中，本發明涉及CD4結合肽(例如抗CD4抗體或 其抗原結合片段)和補骨脂素在制備用于治療惡性疾病或炎性皮膚病 的藥盒組件中的用途。所述藥盒組件可包含多劑量形式或單位劑量形 式的CD4結合肽。同樣，所述藥盒組件可包含多劑量形式或單位劑量 形式的補骨脂素。下文描述了適宜的單位劑量。
在一個實施方案中，本發明涉及CD4結合肽(例如抗CD4抗體或 其抗原結合片段)和補骨脂素在制備用于和輻射組合治療惡性疾病或 炎性皮膚病的藥盒組件中的用途。所述藥盒組件可包含多劑量形式或 單位劑量形式的CD4結合肽。同樣，所述藥盒組件可包含多劑量形式 或單位劑量形式的補骨脂素。下文描述了適宜的單位劑量。
附圖簡述


圖1顯示了得自W097/13852的6G5的VH和VL序列。 圖2圖示了由CD4+ T細胞制備的細胞裂解物的蛋白質印跡結果， 所述CD4+ T細胞用CD3單克隆抗體和扎木單抗刺激。使CD4+ T細 胞與HuMax-CD4溫育，然后用固定在乳膠珠上的CD3單克隆抗體 (OKT3)刺激。在雙^f分細胞裂解物樣品中的蛋白通過7-15%梯度凝膠SDS-PAGE分離，并通過電泳轉移到印跡膜上。 一張膜與磷酸酪氨酸 特異性抗體溫育，剝離，然后用TCR;和LAT特異性抗體再探測(圖 2A)。另一張膜與磷酸化形式的特定蛋白的抗體溫育，剝離，然后用 ZAP-70(2B)、 Erkl/2、 p38和AKT抗體再探測(2C)。印跡下的數字表 示相對于在沒有HuMax-CD4時于CD3刺激2分鐘后觀察到的值對加 樣標準化的密度測定值。此處顯示的實驗結果代表4個獨立實驗。
圖3圖解了與扎木單抗或人免疫球蛋白陰性對照溫育的CD4+ T 細胞的結果。細胞裂解物是CD4-沉淀的(A)、 SH2-沉淀的(B、 D)或用 作全裂解物(C)。圖3A:對兩種CD4-沉淀物進行激酶測定(上方的兩 張圖)。印跡用p56kk抗體(頂圖)、p56kk底物ot-酪蛋白(第二張圖)、Y-394 磷酸化p56lck (第三張圖)、p56lck (第四張圖)或CD4 (底圖)探測。印跡 下的數字代表對p56狄加樣標準化的密度測定值。圖3B:將采用SH2-沉淀物的印跡與Dok-l (頂圖)或GST (底圖)的抗體溫育。印跡下的數 字代表對GST加樣標準化的密度測定值。圖3C:通過SDS-PAGE分 離全細胞裂解物中的蛋白，并印跡。將膜與磷酸化SHIP-1(頂圖)或不 考慮磷酸化狀態的SHIP-1 (底圖)的抗體溫育。印跡下的數字代表對 SHIP-1加樣標準化的密度測定值。圖3D:在接觸扎木單抗之前，將 細胞與Src激酶抑制劑PP2或虎刺素(DAM)預溫育。將印跡與Dok-l (頂圖)或GST (底圖)的抗體溫育。印跡下的數字代表對GST加樣標準 化的密度測定值。此處顯示的實驗結果代表4個獨立實驗。
發明詳述
本發明提供CD4結合肽(例如抗CD4抗體或其抗原結合片段)或 含所述CD4結合肽的藥盒組件用于改善惡性疾病或炎性皮膚病的治 療的方法和用途，包括使用與輻射和/或補骨脂素組合的CD4結合肽。
在一個實施方案中，本發明涉及用于在接受或將接受輻射治療的 個體中治療惡性疾病或炎性皮膚病的CD4結合肽，例如抗CD4抗體 或其抗原結合片段。在一個實施方案中，本發明涉及用于和輻射治療組合治療惡性疾
病或炎性皮膚病的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段。 在一個實施方案中，本發明涉及CD4結合肽(例如抗CD4抗體或
其抗原結合片段)在制備用于在接受或將接受輻射治療的個體中治療
惡性疾病或炎性皮膚病的藥物組合物中的用途。
在一個實施方案中，本發明涉及CD4結合肽(例如抗CD4抗體或
其抗原結合片段)在制備用于和輻射治療組合治療惡性疾病或炎性皮
膚病的藥物組合物中的用途。
在一個實施方案中，本發明涉及治療惡性疾病或炎性皮膚病的方
法，其包括給予其需要的患者治療有效量的CD4結合肽，例如抗CD4
抗體或其抗原結合片段，并對所述患者進行輻射治療。
在一個實施方案中，本發明涉及含CD4結合肽(例如抗CD4抗體 或其抗原結合片段)、補骨脂素連同藥學上可接受的賦形劑用作藥物的 藥盒組件。
在一個實施方案中，本發明涉及含CD4結合肽(例如抗CD4抗體 或其抗原結合片段)和補骨脂素連同藥學上可接受的賦形劑用作治療 惡性疾病或炎性皮膚病的藥物的藥盒組件。
在一個實施方案中，本發明涉及含CD4結合肽(例如抗CD4抗體 或其抗原結合片段)和補骨脂素連同藥學上可接受的賦形劑用作和輻 射治療組合治療惡性疾病或炎性皮膚病的藥物的藥盒組件。
在一個實施方案中，本發明涉及CD4結合肽(例如抗CD4抗體或 其抗原結合片段)和補骨脂素在制備用于治療惡性疾病或炎性皮膚病 的藥盒組件中的用途。所述藥盒組件可包含多劑量形式或單位劑量形 式的CD4結合肽。同樣，所述藥盒組件可包含多劑量形式或單位劑量 形式的補骨脂素。下文描述了適宜的單位劑量。
在一個實施方案中，本發明涉及CD4結合肽(例如抗CD4抗體或 其抗原結合片段)和補骨脂素在制備用于和輻射組合治療惡性疾病或 炎性皮月夫病的藥盒組件中的用途。所述藥盒組件可包含多劑量形式或單位劑量形式的CD4結合肽。同樣，所述藥盒組件可包含多劑量形式
或單位劑量形式的補骨脂素。下文描述了適宜的單位劑量。
在一個實施方案中，本發明的化合物用于治療難以治療的疾病。 在一個實施方案中，本發明化合物用于治療癌癥或炎性皮膚病，其中 所述疾病抗另一種治療方法。
關于本文描述的CD4結合肽的術語肽包括能夠結合CD4的任何 適宜的肽，并可與術語多肽和蛋白同義使用，除非案中另有說明或相 抵觸；只要讀者認識到含相應氨基酸聚合物的每種類型的分子均可伴 有顯著差異，并由此構成本發明的單個實施方案(例如，由多條肽鏈組 成的肽，例如抗體，與例如單鏈抗體、肽免疫粘附素或單鏈免疫原性 肽顯著不同)。因此，術語肽在本文一般應理解為指任何適宜大小和組 成(就蛋白分子中氨基酸的數量和相關鏈的數量而言)的任何適宜的 肽。而且，在本文描述的本發明方法和組合物范圍內的肽可包含非天 然的和/或非L型氨基酸殘基，除非案中另有說明或相抵觸。
如在本文中進一步的論述，除非案中另有說明或相抵觸，否則術 語肽(以及如作為術語多肽和/或蛋白的單個實施方案討論)還包括衍化 的肽分子。簡而言之，在本發明背景下，衍生物是這樣的肽其中肽 的一個或多個氨基酸殘基已被化學修飾(例如經由烷基化、酰化、酯形 成或酰胺形成)或與一個或多個非氨基酸有機和/或無機芳香族或分子 取代基(例如聚乙二醇(PEG)基團、親脂取代基(其任選地可通過間隔基 或基團如(3-丙氨酸、，氨基丁酸(GABA)、 L/D-谷氨酸、琥珀酸等連接 至該肽的氨基酸序列)、熒光團、生物素、放射性核素等)結合，并另 外或或者可包含非必需的、非天然的和/或非L型氨基酸殘基，除非案 中另有說明或相抵觸(但是，又應當認識到，這些衍生物本身并自然而 然地可被看作是本發明的獨立特征，將這些分子包含在肽的含義中是 為了便于描述本發明，而不是暗示原初肽和這些衍生物之間的任何程 度的等同)。這些氨基酸殘基的非限制性實例包括例如2-氨基己二酸、 3-氨基己二酸、f3-丙氨酸、P-氨基丙酸、2-氛基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基已酸、2-氨基庚酸、2-氛基異丁酸、3-氨基異丁酸、2-氨基庚二酸、 2,4-二氨基丁酸、鎖鏈素、2,2'-二氨基庚二酸、2,3-二氛基丙酸、N-乙 基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、羥基賴氨酸、別羥基賴氨酸、3-羥基脯 氨酸、4-羥基-脯氨酸、異鎖鏈素、別異亮氨酸、N-甲基甘氨酸、N-曱基異亮氨酸、6-N-甲基賴氨酸、N-甲基纈氨酸、正纈氨酸、正亮氨 酸、鳥氨酸和斯塔提尼卣化氨基酸。
CD4結合肽指在細胞和/或生理條件下特異性結合一部分CD4的 任何肽，結合的時間量足以誘導、促進、增強和/或調節與CD4相關 的生理作用；允許通過ELISA、蛋白質印跡或本文描述的和/或本領域 已知的其它類似的適宜蛋白結合技術檢測；和/或在相關的時間段(例 如至少約15分鐘、至少約30分鐘、至少約45分鐘、至少約1小時、 至少約2小時、至少約4小時、至少約6小時、至少約12小時、約 1-24小時、約1-36小時、約1-48小時、約1-72小時、約1周或更長) 后可檢測地與其結合。
CD4結合肽是特異性結合CD4的肽。按照本發明使用的CD4結 合肽可通過本領域已知的任何肽制備方法制備，例如合成生產或重組 生產。
CD4結合抗體或抗CD4抗體或其功能等同物可為本領域已知的 任何形式的抗體，例如來源于哺乳動物的天然抗體或合成抗體，例如 單鏈抗體、雙功能抗體、單價抗體或含抗體片段的雜種，它們能夠特 異性結合CD4，例如人CD4。而且，所述抗體可為單克隆抗體或人工 多克隆抗體的混合物。
設想用于本發明的抗體因此可為多種形式中的任一種，包括天然 抗體、完整免疫球蛋白、抗體片段(例如Fv、 Fab、 Fab'、 F(ab')2和類 似片段)、包括可變結構域互補決定區(CDR)的單鏈抗體、雙功能抗體 和;波歸入本文使用的廣義術語"抗體，，的所有形式。抗體還可以為在 本文使用的廣義術語"抗體"內的鼠、嵌合、人源化或人抗體。
本文使用的術語"天然抗體"適用于結構類似于天然存在的抗體結構的抗體。按照本發明使用的天然抗體屬于叫做免疫球蛋白的血漿 蛋白家族，其基本結構單元免疫球蛋白折疊或結構域以多種形式用于 免疫系統和其它生物識別系統的眾多分子。典型的免疫球蛋白具有4 條多肽鏈，包含^f皮稱為可變區的抗原結合區以及針對每種抗體(亞)型 的被稱為恒定區的非可變區。
本文使用的天然抗體和免疫球蛋白通常為約150,000道爾頓的異 四聚化糖蛋白，由兩條相同輕(L)鏈和兩條相同重(H)鏈組成。通常， 每條輕鏈都通過一個或多個共價二硫鍵連接至重鏈，而二硫鍵的數量 在不同免疫球蛋白同種型的重鏈之間是可變的。每條重鏈和輕鏈還具 有有規則間隔的鏈內二硫4定。每條重鏈都在一個末端具有可變結構域 (Vh),后接眾多恒定結構域。每條輕鏈都在一個末端具有可變結構域 (Vl)，而在其另一個末端具有恒定結構域。輕鏈的恒定結構域與重鏈 的第一個恒定結構域配對，而輕鏈可變結構域與重鏈的可變結構域配 對。 一般認為特定的氨基酸殘基形成輕鏈和重鏈可變結構域之間的界 面(Novotny J, & Haber E. Proc Natl Acad Sci USA. 82(14):4592-6， 1985)。
根據它們的重鏈恒定結構域的氬基酸序列，可將免疫^求蛋白指定 為不同類型。有至少5種主要的免疫球蛋白類別IgA、 IgD、 IgE、 IgG 和IgM，其中的幾個可再分為亞類(同種型)，例如IgGl、 IgG2、 IgG3 和lgG4; IgAl和IgA2。編碼不同類免疫球蛋白的重鏈恒定基因節段 分別叫做a、 5、 ￡、 y和fi。抗體的輕鏈可基于它們的恒定結構域的氨 基序列而被指定為兩種明顯不同的型之一，叫做k和X。不同類免疫球 蛋白的亞基結構和三維構型是眾所周知的。
在抗體可變結構域范圍內術語"可變的"指可變結構域的某些部 分在抗體之間的序列方面廣泛不同的事實。可變結構域用于結合，并 決定了每個特定抗體對其特定抗原的特異性。然而，可變性不是均勻 地分布在抗體的整個可變結構域中。其集中在3個節段中，這些節段 叫做互補決定區(CDR),也稱為高可變區，兩個在輕鏈可變結構域中，一個在重鏈可變結構域中。
可變結構域的更高度保守的部分叫做構架(FR)。天然重鏈和輕鏈 的可變結構域各包含4個FR區，大部分采用f3-折疊構型，通過3個 CDR連接，它們形成環形連4妻，在某些情況下形成部分的(3-折疊結構。 各條鏈中的CDR通過FR區緊密保持在一起，來自其它鏈的CDR有 助于形成抗體的抗原結合位點。恒定結構域不直接參與抗體與抗原結 合，但表現出多種效應子功能，例如抗體參與抗體依賴性細胞毒性作 用。
術語"抗體片段"指全長抗體的一部分， 一般來說指抗原結合區 或可變區。抗體片段的實例包括Fab、 Fab'、 F(ab')2和Fv片段。抗體 的木瓜蛋白酶消化產生兩個叫做Fab片段的相同抗原結合片段，它們 各自具有單個抗原結合位點，以及通常針對其容易結晶的能力而所說 的"Fc"片段。胃蛋白酶處理產生具有兩個能夠交聯抗原的抗原結合 片段的F(ab')2片段，以及殘余的其它片段(其被稱為pFc')。其余的片 段可包括雙功能抗體、線性抗體、單鏈抗體分子和由抗體片段形成的 多特異性抗體。
術語"抗體片段，，在本文可與術語"抗原結合片段，，互換使用。 抗體片段保留了某些結合其抗原的能力。某些類型的抗體片段如 下定義
(1) Fab是含抗體分子的單價抗原結合片段的片段。Fab片段可 通過用酶木瓜蛋白酶消化完整抗體以產生完整輕鏈和一條 重鏈的一部分而產生。
(2) Fab'是可如下獲得的抗體分子片段用胃蛋白酶處理完整抗 體，接著還原，以產生完整輕鏈和一部分重鏈。每個抗體 分子獲得兩個Fab'片段。Fab'片段與Fab片段的不同之處在 于在重鏈CH1結構域的羧基末端添加了幾個殘基，包括來 自抗體鉸鏈區的 一個或多個半胱氨酸。
(3) (Fab')2是可通過用酶胃蛋白酶處理完整抗體獲得的抗體片段，無需隨后的還原。
(4) F(ab')2是通過兩個二硫鍵保持在一起的兩個Fab'片段的二 聚體。
Fv是包含完整抗原識別和結合位點的'J、抗體片段。該區域由 一條 重鏈和一條輕鏈可變結構域的緊密、非共價結合的二聚體(Vh-V^二聚 體)組成。就是在此構型中每個可變結構域的3個CDR相互作用，限 定了 Vh-Vl二聚體表面上的抗原結合位點。總之，6個CDR賦予了對 抗體的抗原結合特異性。然而，即便是單個可變結構域(或僅含3個對 抗原特異性的CDR的一半Fv)也可具有識別和結合抗原的能力，但親 和力經常比完整結合位點低。即使是單個CDR，特別地是CDR3結構 域，最特別地是重鏈的CDR3結構域，對抗原識別也可能是足夠的(參 見例如Deng和Notkins, 2000, Clin. Exp. Immunol. 119:69-76)。因此， 包含在本發明中的是抗體的抗原結合片段可包含單個可變結構域乃 至單個CDR，例如CDR3，如一個或多個拷貝的重鏈CDR3。
單鏈抗體("SCA")定義為包含通過適宜的多肽接頭連接為遺傳融 合的單鏈分子的輕鏈可變區、重鏈可變區的遺傳工程過的分子。這些 單鏈抗體也被稱為"單鏈Fv"或"sFv，，抗體片段。 一般來說，Fv多肽還 包含VH和VL結構域之間的多肽接頭，該接頭能夠使sFv形成用于 抗原結合的期望結構。關于sFv的綜述，參見Pluckthun，載于"The Pharmacology of Monoclonal Antibodies" 113, 269-315, Rosenburg和 Moore編輯，Springer-Verlag, NY, 1994 。
按照本發明使用的抗體還可為雙功能抗體。"雙功能抗體"指具有 兩個抗原結合位點的小抗體片段，所述片段在同 一多肽鏈(VH-VL)中 包含連接至輕鏈可變結構域(VL)的重鏈可變結構域(VH)。通過使用太 短以至于不允許在相同鏈的兩個結構域之間配對的接頭，迫使結構域 與另一條鏈的互補結構域配對，產生兩個抗原結合位點。雙功能抗體 更全面地描述于例如EP 404097; WO 93/11161,以及Hollinger等，Proc. Natl. Acad Sci. USA巡，6444- 6448 (1993)。本發明設想了抗CD4的多克隆和單克隆抗體這二者及其抗原結 合片段，它們具有以下的至少一項或多項，例如以下的至少2項，例 如以下的至少3項，例如以下的至少4項，例如以下的至少5項，例 如以下的至少6項，例如以下的至少7項，例如以下的至少8項，例 如以下的全部
-通過p56kk誘導ot-酪蛋白的磷酸化，
-誘導p56^自體磷酸化，
-誘導抑制性銜接分子Dok-l和/或SHIP-1和/或SfflP-2的^岸酸化，
-誘導p56^介導的Dok-l磷酸化，
-PKB/Akt途徑的抑制，
-遠離TCR的CD4隱匿，
-增加和/或上調p53表達，
-誘導細胞周期的Gl期停滯或延長，
-增加CD4+細胞、優選CD4+ T細胞對輻射的敏感性。
多克隆抗體的制備在本領域眾所周知。參見例如Green等， "Production of Polyclonal Antisera"， 載于Immunochemical Protocols (Manson編4尋)，1-5頁(Humana Press, 1992); Coligan等，"Production of Polyclonal Antisera in Rabbits, Rats Mice and Hamsters", 載于Current Protocols in Immunology, 2.4.1章，這些文獻在此引入作為參考。
單克隆抗體的制備同樣是常規的。參見例如Kohler & Milstein, Nature 2^,495-497 (1975); Coligan等，出處同上，2.5.1-2.6.7章；和 Harlow等，載于"Antibodies: A Laboratory Manual", 726頁，Cold Spring Harbor Pub. (1988)。單克隆抗體可通過多種已確立的技術由雜交瘤培 養物分離和純化。這些分離技術包括采用A蛋白Sepharose的親和層 析、大小排阻層析和離子交換層析。參見例如Coligan等，出處同上， 2.7.1-2.7.12章和2.9.1-2.9.3章；Barnes等，"Purification of Immunoglobulin G (IgG)"， 載于Methods in Molecular Biology,辺， 79-104, Humana Press, NY (1992)。體外和體內操作單克隆抗體的方法是本領域技術人員眾所周知
的。例如，按照本發明使用的單克隆抗體可通過首先由Kohler & Milstein, Nature 2^, 495-497 (1975)描述的雜交瘤法制備，或者可通過 重組方法制備。用于本發明的單克隆抗體還可以使用描述于Clackson 等，Nature M2, 624-628 (1991)以及Marks等，J Mol Biol 222, 581-597 (1991)的技術由噬菌體抗體文庫分離。另一個方法涉及通過重組方法 人源化單克隆抗體，以產生含人特異性和可識別序列的抗體。關于綜 述參見Holmes等，J Immunol 1^. 2192-2201 (1997)和Vaswani等, Annals Allergy, Asthma & Immunol 105-115 (1998)。
本文使用的術語"單克隆抗體"指得自顯著同源的抗體群的抗體， 即所述群包含的單個抗體是相同的，可少量存在的可能天然突變除 外。單克隆抗體是高度特異性的，抗單個抗原性位點或表位。而且， 與通常包含抗不同決定簇(表位)的不同抗體的常規多克隆抗體制備物 相反，每個單克隆抗體均抗抗原上的單個決定簇。除了它們的特異性 以外，單克隆抗體的有利之處在于它們通過雜交瘤培養物合成，未受 其它免疫球蛋白污染。表示抗體特征的修飾語"單克隆(的)"表明了由 顯著同源的抗體群獲得的抗體的特征，不能被解釋為需要通過任何特 定方法生產抗體。
本文的單克隆抗體包括"嵌合"抗體(免疫球蛋白)，其中一部分重 鏈和/或輕鏈與來源于特定物種或屬于特定抗體類別或亞類的抗體中 的對應序列相同或同源，而鏈的剩余部分與來源于另一個物種或屬于
同或同源，只要它們表現出期望的生物活性(US 4816567); Morrison 等，Proc Natl Acad Sci ￡1, 6851-6855 (1984)。
在一個實施方案中，本文的抗體包括能夠活化抗體依賴性細胞介 導的細胞毒性(ADCC)的抗體。在其它實施方案中，本文的抗體包括能 夠活化天然殺傷(NK)細胞的抗體。在一個實施方案中，本文的抗體包 括能夠與NK細胞上的FcyRIII (CD16)受體相互作用的抗體。在又一個實施方案中，本文的抗體屬于IgGl或IgG3亞類。
制造抗體片段的方法在本領域也是已知的(參見例如Harlow等， 載于"Antibodies: A Laboratory Manual", 726頁，Cold Spring Harbor Pub. (1988)，該文獻在此引入作為參考)。本發明的抗體片段可通過蛋白水 解抗體或通過在大腸桿菌中表達編碼該片段的DNA制備。抗體片段 可通過胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化完整抗體的常規方法制備。例如， 可通過用胃蛋白酶酶切抗體產生抗體片段，以提供稱為F(ab'》的5S 片段。該片段可使用硫醇還原劑和任選地用于由二硫鍵切割產生的巰 基的封閉基團進一步切割，以產生3.5SFab'單價片段。或者，使用胃 蛋白酶酶切直接產生兩個單價Fab'片段和Fc片段。這些方法描述于例 如US 4036945和US 4331647以及其中包含的參考文獻。這些專利整 體在此引入作為參考。抗體片段還可以使用重組技術制備。
還可以使用其它切割抗體的方法，例如分離重鏈以形成單價輕鏈 -重鏈片段，再切割片段，或其它酶促、化學或遺傳技術，只要所述片 段結合由完整抗體識別的抗原。例如，Fv片段包含Vh和VL鏈的結合。 此結合可為非共價的，或者可變鏈可通過分子間二辟u鍵連4^或通過化 學品如戊二醛交聯。Fv片段例如可包含通過肽接頭連接的Vh和Vl 鏈。這些單鏈抗原結合蛋白(sFv)通過構建結構基因制備，所述結構基 因包含的DNA序列編碼通過寡核苷酸連接的Vh和ViJ吉構域。將結 構基因插入到表達載體中，隨后將該表達載體導入到宿主細胞如大腸 桿菌中。重組宿主細胞合成具有橋聯兩個V結構域的連接肽的單一多 肽鏈。生產sFv的方法描述于例如Whitlow等，載于"Methods: A Companion to Methods in Enzymology" ， 2, 97 (1991); Bird等，Science 242, 423-426 (1988), US 4946778;和Pack等，BioTechnology U, 1271-1277 (1993)。
另一種形式的抗體片段是編碼單一互補決定區(CDR)如CDR3的 肽。CDR肽("最小識別單元")經常參與抗原識別和結合。CDR肽可 通過克隆或構建編碼目標抗體的CDR的基因獲得。這樣的基因例如通過使用聚合酶鏈反應制備，以由生產抗體的細胞的RNA合成可變 區。參見i列力口 Larrick等， "Methods: a Companion to Methods in Enzymology",第2巻，106頁(1991)。
本發明還設想使用人或人源化形式的非人(例如小鼠或大鼠)抗 體。此人源化抗體為嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(例如 Fv、 Fab、 Fab'、 F(ab')2或抗體的其它抗原結合子序列)，它們包含來源 于非人免疫球蛋白的最小序列，例如表位識別序列。人源化抗體多半 為人免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自受體的一個或多個互補決定區 (CDR)的殘基被具有預期特異性、親和性和能力的非人物種(供體抗體) 如小鼠、大鼠或兔的一個或多個CDR的殘基置換。
在一個實施方案中，單克隆抗體為"人，，抗體(免疫球蛋白)。人抗 體例如可使用轉基因非人動物制備。這樣的動物用于生產異源抗體， 有用的方法是本領域技術人員眾所周知的。攜帶功能性異源免疫球蛋 白轉基因的轉基因動物的構建是一種通過其可生產與自身抗原反應 的抗體的方法。首先，用作B細胞源的已免疫動物必須產生抗提呈抗 原的免疫應答。為了使動物產生免疫應答，提呈的抗原必須是外源的， 動物必須不耐受該抗原。依照本發明，所述抗原為CD4，例如，人 CD4或其片段或包含至少一個CD4表位的(多)肽。制備人抗體的適宜 方法的實例描述于例如WO 97/13852, 80-98頁"具體的優選實施方案" 之下和其中包含的參考文獻。在一個實施方案中，本發明涉及能夠結 合CD4的單克隆人抗體。
在某些情況下，人免疫球蛋白的Fv構架殘基被對應的非人殘基 置換。而且，人源化抗體可包含既不在受體抗體中存在也不在導入的 CDR或構架序列中存在的殘基。實施這些修飾是為了進一步精制和優 化抗體性能。通常，人源化抗體基本上全部都包含至少一個、通常兩 個可變結構域，其中全部或基本上全部的CDR區都對應于非人免疫 球蛋白的CDR區，全部或基本上全部的FR區都為人免疫球蛋白共有 序列的FR區。人源化抗體最好還包含至少一部分免疫球蛋白恒定區(Fc),通常為人免疫球蛋白的恒定區。關于進一步的細節，參見Jones 等，Nature 121, 522-525 (1986); Reichmann等，Nature巡，323-329 (1988); Presta, Curr Op Struct Biol 2, 593-596 (1992); Holmes等，J Immunol 158,2192-2201 (1997)和Vaswani 1998,出處同上)。
可使用天然或重組人CD4多肽或其片段作為抗原，通過本領域 用于生產多克隆和單克隆抗體的任何標準方法，實現抗體的產生。在 一個實施方案中，所述抗體可使用天然或重組產生的CD4、 CD4片,殳 或包含至少一個天然CD4上存在的表位的(多)肽產生。所述CD4例如 可為人CD4。
在一個實施方案中，本發明涉及能夠抑制與細胞周期調節相關的 CD4生物功能的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段。
在一個實施方案中，本發明涉及能夠如本文所述結合CD4上的 特定表位并由此抑制與細胞周期相關的CD4蛋白功能的CD4結合肽， 例如抗CD4抗體或其抗原結合片段。
所述術語"表位"意指(抗原分子上)特定組的氨基酸，其由針對該 抗原的抗體識別。術語"表位，，與術語"抗原性決定簇"等同。表位可包 含3個或更多個氨基酸殘基，例如4、 5、 6、 7、 8個氨基酸殘基，所 述氛基酸殘基緊鄰定位，'例如在連續的氛基酸序列中，或者位于抗原 的氨基酸序列的遠離部分中，但由于蛋白折疊而彼此接近。
依照本發明使用的抗體能夠結合CD4表位，例如人CD4 (關于人 CD4序列，參見例如(Maddon PJ等，Cell. 42(1), 93-104 (1985))的表位。 在一個實施方案中，所述表位位于CD4的胞外結構域中。在一個實施 方案中，所述表位位于參與TCR結合的CD4結構域中。在一個實施 方案中，所述抗體與Leu3A竟爭結合CD4 (Fishwild等，Nat Biotechnol. 14(7), 845-51 (1996))。非抗體CD4結合肽可能也能夠結合這樣的表位。
本文使用的與CD4特異性結合指CD4結合肽如抗CD4抗體或其 抗原結合片段以至少lxl(T7 M的親和力、例如以至少lxl(T8 M的親 和力、例如1 xl(T9 M、例如1 x 1(T1Q M結合CD4的能力。術語"優先結合CD4"在本文指CD4結合肽如抗CD4抗體或其抗 原結合片段以上述親和力結合CD4的特性，其中對CD4的親和力為 其結合CD4或與CD4密切相關的多肽之外的非特異性抗原(例如 BSA、酪蛋白)的親和力的至少2倍，例如至少5倍以上，例如至少 IO倍以上。
術語"選擇性結合CD4"在本文指CD4結合肽如抗CD4抗體或其 抗原結合片段以上述親和力結合CD4的特性，其中對CD4的親和力 為對任何其它多肽的親和力的至少2倍，例如至少5倍以上，例如至 少IO倍以上。
本發明涉及CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段， 其能夠調節CD4如人CD4的至少一種生物活性，例如與細胞周期調 節相關的活性。在一個實施方案中，CD4結合肽，例如抗CD4抗體 或其抗原結合片段，能夠調節在上文"發明概述"章節中提及的一種或 多種活性。
在本文內容下，所述術語"調節"指能夠增強或減弱人CD4的生物 活性的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段。在一個實 施方案中，本發明的特征在于CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗 原結合片段，其能夠調節CD4的至少一種生物活性，例如誘導細胞在 細胞周期的Gl期延長或停滯。在一個實施方案中，依照本發明使用 的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段，能夠誘導細胞 周期的Gl期的延長或停滯。這可通過包括以下步驟的方法測定
1) 使CD4+細胞群接觸CD4結合肽；
2) 測定Gl期的細胞數目；和
3) 比較所述數目與一直未接觸CD4結合肽的群中處于Gl期的細 胞數目，其中Gl的延長或停滯被定義為與CD4結合肽接觸的 細胞群中處于Gl的細胞數目。
Gl期的細胞數目可通過不同方法測定，例如通過染色DNA，其 中具有2nDNA含量的細胞被說成為處于Gl。還有可能測定Gl的一種或多種標記的存在情況，即主要存在于細胞周期的Gl期的蛋白或 其它化合物。
在一個實施方案中，所述細胞為腫瘤細胞。在一個實施方案中， 所述胂瘤細胞為癌細胞或血液學惡性細胞。所述癌細胞可來自原發性 或轉移性癌癥。具體地說，所述細胞可為下文在"臨床疾病"章節中所 述的任何癌癥。
依照本發明使用的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合 片段，可能能夠通過p56kk誘導為外源性p56kk底物的a-酪蛋白的磷酸 化。a-酪蛋白的磷酸化的誘導例如可通過包括以下步驟的方法測定
1) 使CD4+細胞接觸CD4結合肽；
2) 制備所述細胞的裂解物；
3) 使裂解物與a-酪蛋白接觸，
4) 測定oc-酪蛋白的磷酸化；和
5) 比較所述磷酸化和使用由另一種一直未接觸CD4結合肽得細 胞制備的裂解物獲得的磷酸化，其中磷酸化的誘導被定義為用 與CD4結合肽接觸的細胞的裂解物獲得的較高程度的磷酸化。
所述方法任選地還可包含由裂解物分離CD4以及含CD4的復合 物的步驟。該步驟例如可在步驟2和3之間實施。這例如可通過使用 CD4抗體的常規免疫沉淀技術實現。該步驟可確保僅檢測到與CD4 相關的激酶活性。
磷酸化可通過任何常規方法確定，例如通過使用磷酸化特異性抗 體或通過使用放射性標記的磷酸鹽，例如得自32P"ATP。
一種測定a-酪蛋白磷酸化的方法公開于下文的實施例2 。
依照本發明使用的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合 片段，能夠誘導p56kk自體磷酸化。給定CD4結合肽對p56kk自體磷 酸化的誘導可通過包含以下步驟的方法測定
1) 使CD4+細胞與CD4結合肽接觸；
2) 制備所迷細胞的裂解物；3) 分離包含p56kk的復合物；
4) 測定p56^的磷酸化；和
5) 比較所述^^粦酸化和使用由另一種一直未接觸CD4結合肽的細 胞制備的裂解物獲得的磷酸化，其中磷酸化的誘導被定義為用 與所述抗體接觸的細胞的裂解物獲得的較高程度的磷酸化。
包含p56kk的復合物的分離可通過眾多不同方法獲得，例如通過 使用p56^特異性抗體或已知結合p56lek的蛋白如CD4抗體免疫沉淀。 ^疇酸化可如上測定。 一種測定p56kk自體力癢酸化的方法描述于下文的 實施例2。
依照本發明使用的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合 片段，能夠增加和/或上調p53表達。給定CD4結合肽對p53表達的 增加和/或上調可通過包含以下步驟的方法測定
1) 使CD4+細胞與CD4結合肽接觸；
2) 測定p53表達；和
3) 比較所述表達和另 一種一直未接觸CD4結合肽的細胞中的p53 表達，其中p53表達的增加和/或上調-波定義為與CD4結合肽 接觸的細胞中較高的p53表達水平。
p53表達可通過眾多常規方法測定。這例如可使用p53抗體通過 例如蛋白質印跡實現。
依照本發明使用的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合 片段，能夠誘導Dok-l和/或SHIP-1和/或SHIP-2的磷酸化。給定CD4 結合肽對磷酸化的誘導可通過包含以下步驟的方法測定
1) 使CD4+細胞與CD4結合肽接觸；
2) 制備所述細胞的裂解物；
3) 分離包含Dok-l和/或SHIP-1和/或SHEP-2的復合物；
4) 測定Dok-l和/或SfflP-l和/或SfflP-2的-岸酸化；和
5) 比較所述磷酸化和使用由另一種一直未接觸CD4結合肽的細 胞制備的裂解物獲得的磷酸化，其中磷酸化的誘導被定義為用與CD4結合肽接觸的細胞的裂解物獲得的較高程度的磷酸化。
包含Dok-l和/或SHIP-1和/或SfflP-2的復合物的分離可通過眾 多不同方法獲得，例如通過使用結合Dok-l和/或SHIP-1和/或SHIP-2 的化合物或結合Dok-l和/或SfflP-l和/或SfflP-2的蛋白沉淀。所述 化合物可為抗體。但是，所述化合物還可為SH2。磷酸化可如上所述 測定。 一種測定Dok-l和/或SHIP-1 ^疇酸化的方法描述于下文的實施 例2。
依照本發明使用的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合 片段，能夠增加CD4+細胞、例如CD4+T細胞、例如人CD4+T細胞 對輻射的敏感性。這可通過包含以下步驟的方法測定
1) 使CD4+細胞、例如CD4+ T細胞、例如人CD4+ T細胞與CD4 結合肽接觸；
2) 對細胞進行輻射；
3) 測定細胞死亡，例如細胞凋亡；和
4) 比較所述細胞死亡和在一直未接觸CD4結合肽的細胞中獲得 的細胞死亡，其中敏感性增加被定義為與CD4結合狀接觸的細 胞中較高程度的細胞死亡，例如凋亡。
所述輻射可為任何輻射，例如UV。大量適宜測定凋亡的方法是 技術人員已知的。適宜方法的非限制性實例為膜聯蛋白-V染色法、半 胱天冬酶(caspase)活性測定、對半胱天冬酶切割產物的存在情況的測 定。用碘化3,3'-二己基氧雜羰花青染色或膜完整性測定。測定CD4+ 細胞對輻射敏感性的方法的實例描述于下文的實施例3、 4、 5和6。
依照本發明使用的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合 片段，可在一個實施方案中引起遠離TCR的p56^隱匿。另外，CD4 結合肽可通過p56^直接產生負信號。因此，依照本發明使用的CD4 結合肽經常可通過抑制經由TCR的信號轉導，潛在地通過遠離TCR 的p56^隱匿，還通過直接抑制信號轉導，介導其對T細胞信號轉導 的抑制性作用。在本發明的一個實施方案中，CD4結合肽可引起p5一k激酶活化，該活化又可導致增加的Dok-l和/或SfflP-l磷酸化。
在本發明的一個實施方案中，CD4結合肽是專利申請 W097/13852中公開的任一種抗CD4抗體。例如，所述抗體可為如在 所述申請中所述能夠結合CD4的任何鼠抗體，例如Leu 3a、 RPA-TA、 92-09A-4F7-A5-2 或 92-09A-1D7-1-7-1 、 92國09A畫4f7-A5-2 和 92-09A-1D7-1-7-1,它們已按照布達佩斯/>約分別以保藏號HB 11307 和HB 11308保藏于ATCC專利培養物保藏機構。在一個實施方案中， CD4結合肽是人抗體，例如在所述申請中所述的2Cll-8、 1F2、 1E11、 2E4、 4D1、 6C1、 6G5、 7G2、 10C5、 1G1、 1G2、 2C5.1或4E4.2。在 所述申請中尤其描述了 2C5.1和4E4.2的VDJ接合處的序列。在一個 實施方案中，CD4結合肽是如在所述申請中描述的6G5。 6G5的VH 和Vl序列在困1中給出。
在本發明的一個實施方案中，CD4結合肽選自扎木單抗(GenMab, Denmark,也稱為Humax-CD4和HM6G (Fishwild等，Clin Immunol. 22(2), 138-52 (1999),與在W097/13852中描述的6G5相同)、凱利昔 單抗(也稱為IDEC-CE9.1、 IDEC)、克立昔單抗(也稱為IDEC-151、 IDEC) 、 TNX/355 (也稱為 Hu-5A8， Tanox, Biogen) 、 TRX/1 (TolerRx/Genentech)、 10T4a (也稱為13B8.2, Immunotech)、普立昔單 抗(也稱為cM-T412， Centocor)和4162W94 (Glaxo)。在本發明的某些實 施方案中，CD4結合肽^皮人源化或為人抗體。因此，在這些實施方案 中，抗體可選自扎木單抗、TNX/355、 TRX/1、 10T4a和4162W94。 在本發明的一個實施方案中，CD4結合肽為扎木單抗。
還包含在本發明中的是，CD4結合肽可為包含重鏈和/或輕鏈的 至少VDJ接合處的任何抗體或包含例如選自以下的抗體的重鏈的至 少CDR3或例如至少全部CDR (例如抗體的至少一個可變區，例如兩 個可變區)的抗體:扎木單抗、凱利昔單抗、克立昔單抗、TNX/355、 TRX/1、 10T4a、普立昔單抗和4162W94,或選自在W097/13852中 公開的Leu 3a、 RPA-TA、 92-09A-4F7誦A5-2 、 92-09A-1D7-1誦7國1 、 2C11 -8 、1F2、 1E11、 2E4、 4D1、 6C1、 6G5、 7G2、 10C5、 1G1、 1G2、 2C5.1 和4E4.2。
在一個實施方案中，依照本發明使用的CD4結合肽是能夠特異 性結合由抗體識別的表位或與由抗體識別的表位重疊的CD4結合肽， 例如抗CD4抗體或其抗原結合片段，所述識別抗體選自扎木單抗、凱 利昔單抗、克立昔單抗、TNX/355、 TRX/1、 10T4a、普立昔單抗和 4162W94,或選自在W097/13852中公開的Leu 3a、 RPA-TA、 92-09A畫4F7-A5-2、 92醫09A國1D7-1畫7畫1 、 2Cll-8、 1F2、 1E11、 2E4、 4D1、 6C1、 6G5、 7G2、 10C5、 1G1、 1G2、 2C5.1和4E4.2。
本領域技術人員可用的不同測定可用于測定CD4結合肽，例如 抗CD4抗體或其抗原結合片段，(也稱為測試CD4結合肽)，是否識別 與特定單克隆抗體(也稱為參比抗體)相同或重疊的表位。例如，所述 測定包括以下步驟
-提供包含由參比抗體識別的表位的CD4或其片段 -將測試CD4結合肽和參比抗體加至所述CD4，其中測試CD4 結合肽或參比抗體用可檢測標記來標記。或者，測試CD4結合 肽和參比抗體均可用不同的可4企測標記來標記 -檢測所述可檢測標記在CD4上的存在情況 -由此檢測出測試CD4結合肽能否替代參比抗體。 如果測試CD4結合肽能夠替代參比抗體，則測試CD4結合肽識 別與參比抗體相同或重疊的表位。因此，如果參比抗體用可檢測標記 來標記，那么針對CD4的低的可檢測信號指示參比抗體的替代。如果 測試CD4結合肽用可^r測標記來標記，那么針對CD4的高的可檢測 信號指示參比抗體的替代。CD4片段例如可固定在能夠容易處理的固 體支持體上。可檢測標記可為任何直接或間接可檢測標記，例如酶、 放射性同位素、重金屬、有色化合物或熒光化合物。
依照本發明使用的CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合 片段，可通過藥學領域已知用于遞送蛋白和抗體的任何方法給予患者。諸如抗體的肽尤其適合于胃腸外給予。胃腸外給予例如可經由皮 下、肌內或靜脈內給予，包括灌輸或注射。本發明的藥物組合物還適
于使用替代藥物遞送方法給予(參見例如Langer, Science, 242, 1527-1533 (1990))。
用于胃腸給予的藥物組合物通常包含CD4結合肽(例如CD4結合 肽，例如抗-CD4抗體或其抗原結合片段，例如單克隆抗體)溶解在可 接受載體如水性載體中的溶液。可使用多種水性載體，例如水、緩沖 水、0.4%鹽水、0.3%甘氨酸等。這些溶液是無菌的， 一般沒有顆粒物 質。這些組合物可通過眾所周知的常規除菌技術除菌。這些組合物還 可通過眾所周知的常規技術進行病毒減少或多重病毒減少。組合物可 根據需要包含藥學上可接受的輔助物質，以接近生理條件，例如pH 調節劑和緩沖劑、滲透壓調節劑等，例如乙酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、 乳酸鈉等。CD4結合肽(例如抗CD4抗體或其抗原結合片段)在這些制 劑中的濃度可廣泛變化，例如以重量計由少于約0.5%、通常為或至少 約0.1%至多達1.5%或2.0%乃至更高，并將按照選定的具體給予方式 主要基于液量、粘度等選擇。制備胃腸外施用的組合物的實際方法對 本領域技術人員是已知的或顯而易見的，更詳細地描述于例如 Remington's Pharmaceutical Sciences, 第 17 版，Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania (1985)，該文獻在此引入作為參考。
其它有用的制劑是適合于鼻和肺施用的制劑，例如吸入劑和氣溶膠。
CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段，可配制為中 性或鹽形式。藥學上可接受的鹽包括酸加成鹽(與肽化合物的游離M 形成)，其與無機酸形成，例如鹽酸或磷酸，或與諸如乙酸、草酸、酒 石酸、扁桃酸等的有機酸形成。與游離羧基形成的鹽還可以來自無機 堿，例如氬氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵，諸 如異丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等的有機堿。
注射劑通常^f皮制備為液體溶液或懸浮液、適于在注射前溶解在或懸浮在液體如無菌水中的固體形式。制備物還可以被乳化。活性成分 經常與藥學上可接受的并與活性成分相適的賦形劑混合。適宜的賦形 劑例如為水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等，以及其組合。另外，如 果期望的話，制備物可包含少量輔助物質，例如潤濕劑或乳化劑、鹽、 pH緩沖劑或增強制備物的有效性或轉運的物質。
可施用包^^依照本發明使用的CD4結合肽(例如抗CD4抗體或其 抗原結合片段)或其混合物的組合物，用于治療處置惡性疾病、炎性皮 膚病或用于調節臨床疾病的輻射治療。在治療應用中，組合物以有效 量、必需的劑量和時間段給予患者，以實現預期治療結果。在本發明 背景下，這樣的量被定義為"治療有效量，，。CD4結合肽(例如抗CD4 抗體或其抗原結合片段)的治療有效量可依據諸如個體的病況、年齡、 性別和體重的因素以及CD4結合肽在個體中激發期望的響應的能力 而變化。治療有效量還是其中治療有益作用勝于CD4結合肽(例如抗 CD4抗體或其抗原結合片段)的任何毒性或有害作用的量。
依照本發明使用的治療有效量的CD4結合肽可由臨床醫師確定， 這是本領域技術人員已知的。例如，對于表面或局部應用，CD4結合 肽的量可低于單次系統療法，由此可減少或避免潛在的系統性副作用 (例如CD4+細胞的系統性清除)。劑量例如可在20 mg-2000 mg的范圍 內，例如在20 mg-100 mg (例如為約20 mg、約40 mg、約60 mg、約 80 mg或約100 mg的量)的范圍內，或例如為約150 mg、約200 mg、 約250 mg、約300 mg、約350 mg、約400 mg、約450 mg、約500 mg、 約550 mg、約600 mg、約650 mg、約700 mg、約750 mg、約800 mg、 約850 mg、約900 mg、約950 mg、約1000 mg、約1050 mg、約1100 mg、約1150 mg、約1200 mg、約1250 mg、約1300 mg、約1350 mg、 約1400 mg、約1450mg、約1500 mg、約1550 mg、約1600 mg、約 1650 mg、約1700 mg、約1750 mg、約1800 mg、約1850 mg、約1900 mg、約1950 mg或約2000 mg的量。 一般來說，臨床醫師能夠通過本 領域眾所周知的設計用于確定適合的治療劑量的普通實驗確定適合的劑量。
對于某些實施方案，CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結 合片段，被局部給予，例如通過直接射至疾病部位。在其它實施方案 中，CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段，以系統方式 給予。
用于本發明的某些CD4結合肽有足夠活性，但對于另一些，如 果制備物還包含藥學上接受的添加劑和/或載體，則作用將被增強。這 樣的添加劑和載體在本領域眾所周知。在某些情況下，包括促進活性 物質向其靶遞送的化合物將是有利的。
在本發明的一個實施方案中，在輻射治療之前給予至少一次CD4 結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段，并且抗體每周給予至少 一次。
在本發明的一個實施方案中，在輻射治療之前給予2、 3、 4、 5 乃至更多次CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段，并每 周給予至少一次抗體。
在本發明的一個實施方案中，在開始輻射治療的同時給予CD4 結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片^R。
在本發明的一個實施方案中，在開始輻射治療之后給予1、 2、 3、 4、 5乃至更多次CD4結合肽，例如抗CD4抗體或其抗原結合片段， 并每周給予至少一次抗體。
在本發明的一個實施方案中，在此過程中給予所述CD4結合肽 的時間段將是治療有效的。給予持續時間取決于要治療的患者(包括例 如患者的體重和年齡)、要治療的疾病和疾病階段。CD4結合肽的給 予時間段可在1-48周的范圍內，例如在4-30周的范圍內，或例如在 8-16周的范圍內，例如12周。
在本發明的一個實施方案中，CD4結合肽的給予可以治療有效的 方式重復幾次。兩次連續治療之間的時間可在1-200周的范圍內，例 如在4-104周的范圍內，例如在24周至52周的范圍內。在一個實施方案中，本發明涉及輻射治療組合CD4結合肽(例如 抗CD4抗體或其抗原結合片段)給予治療臨床疾病的用途，例如上文 描述的任一種臨床疾病，包括惡性疾病或炎性皮膚病。可使用眾多輻 射治療，例如補骨脂素和長波紫外線輻射(PUVA)、 UVB、窄譜UVB、 高劑量UVA、光分離置換法、電子束或x射線。在一個實施方案中， 本發明涉及補骨脂素和長波紫外線輻射(PUVA)。
在本發明的一個實施方案中，PUVA用作輻射治療。補骨脂素化 合物如上所述口服或局部給予。所述補骨脂素的口服給予可如上所述 進行，例如在紫外線A(UVA)輻射治療前至少約1小時，并在所述輻 射治療前不超過約3小時。當補骨脂素直接應用于皮膚時，紫外線A (UVA)輻射治療可如上所述進行，例如在l-30分鐘的范圍內，例如在 1-15分鐘內。PUVA治療以每個月l-10次治療給予，例如每個月1-7 次治療，例如每個月l-5次治療，例如每周l-5次治療，例如每周1-3 次治療，例如每周l次治療。在一個實施方案中，輻射治療以和CD4 結合肽的給予相同的治療間隔給予。
將依照本發明實施PUVA輻射治療過程中的光強度，小心控制最 大輻射曝露量，以避免對患者不必要的損傷。技術人員能夠容易地確 定適宜的光強度。計算對紫外光的最大輻射暴露量的方法是本領域已 知的。PUVA輻射治療將^f吏用在例如280-440 nm范圍內、例如在 320-400 nm范圍內的波長的長波紫外光(UVA)進行。
依照本發明的初始UVA輻射治療的持續時間可在10秒至20分 鐘的范圍內，例如在20秒至IO分鐘的范圍內。暴露時間在治療與治 療之間可逐漸增加。 一般來說，對UVA的暴露時間可在l-60分鐘的 范圍內，例如在l-30分鐘的范圍內。
補骨脂素被定義為結合細胞中的DNA并終止它們復制的眾多藥 物和其它物質中的任一種，是增加皮膚對用于治療作用的光的反應的 光敏感化學物質。補骨脂素是包含平面三環結構的化合物，該結構對 核酸具有天然親和性，可插入堿基之間，進入DNA雙螺旋體的兩條鏈之間，典型地在腺噪呤和胸腺嘧咬堿基之間。在用長波紫外光(UV) 輻射時，補骨脂素典型地共價連接至核酸，經常連接至胸腺嘧^，還 連接至尿嘧啶核香和胞嘧啶核苷，有效地將雙螺旋體束縛在一起。然 后補骨脂素分子可抑制需要解開雙螺旋體的過程。補骨脂素優選終止 細^>的活性，而不殺傷細^;。
在一個實施方案中，依照本發明使用的補骨脂素化合物具有以下
通式<formula>formula see original document page 44</formula>其中R!、 R2、 R3、 R4、 RV和Rs獨立地選自氫、鹵素、C(.即烷
基和用卣素、胺或羥基取代的C(wo)-烷基，以及任選地用羥基取代的
Cd—K))醚；或者I^和Rs—起形成吡啶并。
卣素應被用于指囟素基團，其選自氯、氟、溴和碘。 C(wo)-烷基被用于指含1-10個碳原子的烷基。烷基可為直鏈的或
支鏈的。Cd,烷基的實例是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁
基和戊基。
胺應被用于指結構式RaRbN-的基團，其中Ra和Rb獨立地為氫或 C^.K))-烷基。在一個實施方案中，Ra和Rb均是氫。
羥基應被用于指結構式HO-的基團。
Cn.!o)-烷基-O-應被用于指含1-10個碳原子的醚基。醚基可為直鏈的或支鏈的。C(wo)-烷基-O-的實例是曱氧基、乙氧基、丙氧基、異 丙氧基、丁氧基、異丁氧基和戊氧基。
在一個實施方案中，補骨脂素化合物可選自吡啶并-[3,4-C]補骨脂
素、7-曱基吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、5-甲氧基補骨脂素、8-甲氧基補 骨脂素、4,5',8-三曱基補骨脂素、4-曱基補骨脂素、4,4-二曱基補骨脂 素、4-5'-二甲基補骨脂素、4',8-甲氧基補骨脂素、4'-(co-氨基-2-氧雜) 烷基-4，5',8-三曱基補骨脂素、4'-(4-M-2-氧雜)-丁基-4,5',8-三曱基補 骨脂素、4'-氯曱基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-氨基甲基-4,5',8-三甲基 補骨脂素、4'-(2-羥基乙氧基)-甲基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-(6-羥基 己氧基)-曱基-4，5',8-三甲基補骨脂素、4'-羥甲基-4,5',8-三曱基補骨脂 素、5-曱基-白芷素和2H-呋喃并[2,3-h][l]苯并吡喃-2-酮。
在一個實施方案中，補骨脂素可為5-曱氧基補骨脂素或8-甲氧基 補骨脂素。5-甲氧基補骨脂素例如可以商品名Pentaderm獲得，而8-甲氧基補骨脂素例如以商品名Genoxalen獲得。
本發明使用的補骨脂素可通過藥學領域已知用于遞送補骨脂素 的任何方法給予患者。補骨脂素一般適合于口服或局部給予。
包含補骨脂素的制劑可通過常規技術制備，例如描述于 Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, E.W. Martin編 輯，Mack Publishing Company,第19版，Easton, Pa。藥物制劑可具有 本領域技術人員已知的任何形式。例如，藥物制劑可為生物粘附和非 生物粘附的凝膠劑、粉末劑、片劑、錠劑、咀嚼片、香口膠、丸劑、 膠嚢劑、扁嚢劑、栓劑、分散顆粒劑、貼劑、棒糖、軟膏劑、洗劑、 乳劑、泡沫劑、植入劑或香膏的形式。包含補骨脂素的藥物制劑通常 為選自以下的形式片劑、膠嚢劑、乳劑、洗劑、凝膠或軟膏劑。
含補骨脂素的制劑通常包含藥學上可接受的賦形劑。這些藥學上 可接受的賦形劑不必是治療活性成分，而是所述賦形劑可為 一種或多 種可起稀釋劑、調味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、防腐劑、 潤濕劑、片劑崩解劑或嚢化物質作用的物質。這樣的JU武形劑包括但不限于藥用級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維 素、葡萄糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、蔗糖、碳酸鎂、黃芪 膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點蠟、可可脂等。另外，藥 學上可接受的賦形劑可為著色劑、調味劑、穩定劑、纟爰沖劑、人工和 天然甜味劑、分散劑、增稠劑等。
在粉末劑中，賦形劑可為磨碎的固體，其為具有磨碎的活性組分 的混合物。在片劑中，活性組分以適宜的比例和具有必需的結合能力 的賦形劑混合，并壓制成期望的形狀和大小。粉末劑和片劑可包含1% 至約70%的活性化合物。
依照本發明的乳劑、軟膏劑或凝膠劑是用于外部應用的活性成分
的半固體制劑。它們可如下制備將單獨的或在溶液中的或懸浮在水
性或非水性流體中的、為磨碎或粉末化形式的活性成分借助于合適機 器與例如本領域技術人員已知的油脂基劑或非油脂基劑混合。 基劑的實例是可包含一種或多種爛的基劑，例如石更、軟和液體石
蠟、甘油、石蠟油、蜂蠟、金屬皂；膠漿劑；天然來源的油，例如杏 仁、玉米、花生、蓖麻或橄欖油或其衍生物，例如聚氧乙烯蓖麻油； 羊毛脂或其衍生物，或脂肪酸和/或酯，例如硬脂酸或油酸，或豆蔻酸 異丙酯。
而且，基劑可包含醇，例如丙二醇、不同分子量的聚乙二醇(PEG)、 鯨蠟醇、乙醇或大粒凝膠。制劑可摻入任何適宜的表面活性劑或乳化 劑，例如陰離子、陽離子或非離子性表面活性劑，例如山梨糖醇酐酉旨、 聚山梨醇酯、Crem叩horEL、 Tween 20或其聚氧乙烯衍生物。還可包 括懸浮劑，例如天然膠、纖維素衍生物或無機材料，例如硅酸鹽質硅 石(silicaceous silicas)和其它成分， <列長口羊毛月旨。
依照本發明的洗劑包括適用于皮膚或眼睛的那些洗劑。應用于皮 膚的洗劑或擦劑可包括加快干燥和冷卻皮膚的物質，例如酒精或丙 酮，和/或保濕劑，例如甘油或油，例如蓖麻油或花生油。
在本發明的一個實施方案中，單位劑量的補骨脂素可在約1至約1000 mg的范圍內，例如由約2至約500 mg，例如由約5至約100 mg, 例如由約10至約50mg。
當口服給予時，補骨脂素例如可在輻射治療之前至少15分鐘、 例如至少30分鐘、例如至少1小時、例如至少2小時給予。補骨脂 素在輻射治療之前至多2天、例如至多1天、例如至多12小時、例 如至多6小時、例如至多3小時、例如至多2小時給予。在一個實施 方案中，補骨脂素在輻射治療之前約1小時和在輻射治療之前不超過 約3小時給予。當直接給予皮膚時，補骨脂素可在UV輻射治療(例如 紫外線A (UVA)輻射治療)之前1分鐘至2天內、例如1分鐘至1天內、 例如1分鐘至12小時內、例如1分鐘至6小時內、例如1分鐘至3 小時內、例如1分鐘至1小時內、例如1分鐘至30分鐘內應用，例 如在所述輻射治療之前1-15分鐘內應用。
在本發明的一個實施方案中，可給予UVB或UVB窄譜輻射治療。 UVB或UVB窄譜治療以每月1-10次治療、例如每月l-7次治療、例 如每月l-5次治療、例如每周l-5次治療、例如每周l-3次治療、例 如每周1次治療給予。在一個實施方案中，輻射治療以和CD4結合肽 給予相同的治療間隔給予。按照標準方案調整光強度，最通常是基于 最小紅斑劑量(MED)或標準紅斑劑量(SED)。 MED被定義為在施用后 足以產生皮膚紅腫的最小量的x射線或其它輻射形式，被認為是一次 安全給予的劑量。用于UVB或UVB窄譜的波長可在250-400 nm的 范圍內，例如在280-320 nm的范圍內。
術語"電子束輻射治療"在本文可與術語"全皮電子束療法 (TSEBT)"互換使用。
在本發明的一個實施方案中，電子束輻射治療可用作輻射治療。 電子束可應用于局部皮膚或全皮，以1-15 MeV范圍內的能量傳遞， 例如在4-9 MeV的范圍內，以僅治療皮膚。用于全皮電子束療法 (TSEBT)過程中的劑量經常高達36 Gy,其可以一般處于0.1-5 Gy范 圍內的分劑量，例如在1.5-2 Gy的范圍內，以和CD4結合肽的給予相同的治療間隔至多每周3次遞送。
在本發明的一個實施方案中，輻射治療可為光分離置換法。光分
離置換法如下進行白細胞除去法分離單核細胞級分，然后使其接觸 UVA和Genoxalen或如上文描述的任何其它補骨脂素。然后將輻射過 的細胞返回給患者。上述方法對本領域技術人員是眾所周知的。光分 離置換法特別適合于包含循環性惡性細胞的惡性病癥，例如T細胞淋 巴瘤，例如CTCL。光分離置換法起初以至少連續2天進行，例如每 月1次或例如每月2次連續2天，直至已發生最大清除。此后進行至 少3個月、例如6個月的每月治療，然后逐漸減弱到4周間隔，例如 6周間隔，例如8周間隔并停止。但是，本領域技術人員能夠依據患 者、要治療的病癥和自身經驗調整具體的光分離置換法治療。
在本發明的一個實施方案中，X射線可用作輻射治療。X射線可 給予局限于淋巴結、臟器、皮膚病灶的淋巴瘤如腫瘤或廣泛大斑塊疾 病。治療例如可在給予CD4結合肽之后以和CD4結合肽的給予相同 的治療間隔給予。可用于本發明的輻射類型包括但不限于低電壓X射 線。經常執行分劑量。確定在需要該治療的患者中獲得療效所需的x 射線的強度和持續時間的方法是本領域技術人員眾所周知的。
本發明涉及用CD4結合肽(例如抗CD4抗體或其抗原結合片羊殳) 和輻射治療臨床疾病。臨床疾病可為對此治療響應的任何臨床疾病。
在一個實施方案中，臨床疾病是直接或間接涉及表達CD4的細 胞的疾病。因此，臨床疾病可為直接或間接涉及〇04+ T細胞的任何 疾病。因此，臨床疾病可為涉及增加的CD4+ T細^^增殖的疾病，例 如CD4+ T細胞的過度增殖，或者其可包括CD4+ T細胞向疾病部位的 增加的募集，例如不需要的CD4+ T細胞向疾病部位的募集。涉及CD4+ T細胞過度增殖的臨床疾病包括例如某些惡性疾病。
在一個實施方案中，所述臨床疾病可至少部分地響應于輻射治療。
在一個實施方案中，臨床疾病選自惡性疾病和炎性皮膚病。惡性疾病可為任何惡性疾病，例如原發性癌癥或轉移性癌癥。本 文使用的術語"惡性疾病"意指還包括癌前病變。
所述"原發性癌癥"指一群腫瘤細胞，其已獲得至少一種癌癥細 胞的特征，但還沒有侵入鄰近組織，并一起保持局限于最初起源位置 的腫瘤中。所述"轉移性癌癥"指一群腫瘤細胞，其起源于原發性癌 癥細胞，已侵入到所述原發性癌癥周圍的組織，經由機體擴散，附著 在新的遠距離位置，并生長為新胂瘤。
癌前和/或惡性疾病例如可為癌癥或可發展為癌癥的疾病。在本發 明范圍內的術語癌癥包括惡性和良性胂瘤這二者，以及白血病和淋巴 瘤。
癌癥例如可為腺瘤、癌或肉瘤。癌癥例如可選自黑素瘤、腦瘤、 成神經細胞瘤、乳癌、肺癌、前列腺癌、頸癌、子宮癌、卵巢癌、白 血病、結腸癌、直腸癌、睪九癌、腎癌、肝癌、唇癌、舌癌、胃癌、 皮膚癌、肉瘤、間皮瘤、膀胱癌、骨胂瘤、惡性胸腔積液、腹水、腦
膜性癌、頭頸癌以及內分泌器官(例如曱狀腺、垂體和腎上腺)癌。
在一個實施方案中，所述惡性疾病選自成人T細胞白血病或淋巴 瘤和T細胞前淋巴細胞性白血病。
在一個實施方案中，所述惡性疾病選自CD4+皮膚T細胞淋巴瘤， 例如蕈樣肉芽腫病、賽謝綜合征(Sezary syndrome)、淋巴瘤樣丘滲病 或間變性大細胞淋巴瘤。
在一個實施方案中，所述惡性疾病選自CD4+結節性T細胞淋巴 瘤，例如外周T細胞淋巴瘤、血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤或間變. 性大T細胞淋巴瘤。
在一個實施方案中，皮膚的炎性疾病選自銀屑病、皮炎濕滲、特 應性皮炎、硬皮病、扁平苔蘚和斑禿。
以下是本發明實施方案的清單
實施方案1: CD4結合肽在制備用于在接受或將接受輻射治療的 個體中治療臨床疾病的藥物組合物中的用途。實施方案2: CD4結合肽在制備用于和輻射治療組合治療臨床疾 病的藥物組合物中的用途。
實施方案3: CD4結合肽在制備用于調節臨床疾病的輻射治療的 藥物組合物中的用途。
實施方案4: CD4結合肽和補骨脂素化合物在制備用于治療臨床 疾病的藥盒組件中的用途。
實施方案5:按照實施方案4的用途，其中藥盒組件用于調節輻 射治療。
實施方案6:按照實施方案1-5中任一項的用途，其中CD4結合 肽能夠結合人CD4。
實施方案7:按照實施方案1-6中任一項的用途，其中CD4結合 肽使用哺乳動物細胞培養物生產。
實施方案8:按照實施方案1-7中任一項的用途，其中CD4結合 肽能夠活化p56^激酶。
實施方案9:按照實施方案8的用途，其中p56^激酶的活化增 加至少一種抑制性銜接分子Dok-l和/或SHIP-1的磷酸化。
實施方案10:按照實施方案1-9中任一項的用途，其中CD4結 合肽為抗CD4抗體或其CD4結合片段。
實施方案ll:按照實施方案10的用途，其中所述抗體為單克隆抗體。
實施方案12:按照實施方案IO或實施方案11的用途，其中所述 抗體為人源化抗體。
實施方案13:按照實施方案10-11中任一項的用途，其中所述抗 體為人抗體。
實施方案14:按照實施方案10-13中任一項的用途，其中所述抗
體具有K型(K)輕鏈。
實施方案15:按照實施方案10-14中任一項的用途，其中所述抗 體選自扎木單抗、凱利昔單抗、克立昔單抗、TNX/355、 TRX/1、 IQT4a、普立昔單抗和4162W94。
實施方案16:按照實施方案15的用途，其中所述抗體為扎木單抗。
實施方案17:按照實施方案1-16中任一項的用途，其中所述輻 射治療選自補骨脂素化合物與長波紫外線輻射(PUVA)、 UVB、窄譜 UVB、高劑量UVA、電子束和x射線的施用組合。
實施方案18:按照實施方案17的用途，其中所述輻射治療為補 骨脂素化合物與長波紫外線輻射(PUVA)的施用組合。
實施方案19:按照實施方案18的用途，其中所述補骨脂素化合 物具有以下通式
其中R!、 R2、 R3、 R4、 RV和Rs獨立地選自氫、鹵素、Qwo)-烷 基和用卣素、胺或羥基取代的C(wo)-烷基，以及任選地用羥基取代的 C(w。)醚；或者R！和R5 —起形成吡啶并。
實施方案20:按照實施方案1-19中任一項的用途，其中所述補 骨脂素化合物選自吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、7-曱基吡啶并-[3,4-c]補骨 脂素、5-曱氧基補骨脂素、8-甲氧基補骨脂素、4,5',8-三甲基補骨脂素、 4-曱基補骨脂素、4,4-二甲基補骨脂素、4-5'-二曱基補骨脂素、4'，8-甲 氣基補骨脂素、4'-(G)-氨基-2-氧雜)烷基-4，5',8-三甲基補骨脂素、4'-(4-氨基-2-氧雜)-丁基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-氯甲基-4,5',8-三曱基補 骨脂素、4'-氨基-曱基-4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-(2-羥基乙氧基)-甲基 -4,5'，8-三曱基-補骨脂素、4'-(6-羥基己氧基)-甲基-4,5',8-三甲基補骨脂 素、4'-羥甲基-4，5',8-三甲基補骨脂素、5-甲基-白芷素和2H-呋喃并 [2,3-h][l]苯并吡喃-2-酮。
實施方案21:按照實施方案20的用途，其中所述補骨脂素化合 物為5-甲氧基補骨脂素或8-甲氧基補骨脂素。
實施方案22:按照實施方案1-21中任一項的用途，其中所述臨 床疾病為惡性疾病或炎性皮膚病。
實施方案23:按照實施方案22的用途，其中所述臨床疾病為惡 性疾病。
實施方案24:按照實施方案22或實施方案23的用途，其中所述 惡性疾病選自白血病和淋巴瘤。
實施方案25:按照實施方案22-24中任一項的用途，其中所述惡 性疾病為T細胞前淋巴細胞性白血病。
實施方案26:按照實施方案22-24中任一項的用途，其中所述惡 性疾病選自CD4+皮力夫T細胞淋巴瘤。
實施方案27:按照實施方案26的用途，其中所迷惡性疾病選自 蕈樣肉芽腫病、賽謝綜合征、淋巴瘤樣丘滲病和間變性大細胞淋巴瘤。
實施方案28:按照實施方案22-24中任一項的用途，其中所述惡 性疾病選自CD4+結節性T細胞淋巴瘤。
實施方案29:按照實施方案28的用途，其中所述惡性疾病選自 外周T細胞淋巴瘤、血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤和間變性大T細 胞淋巴瘤。
實施方案30:按照實施方案22的用途，其中所述臨床疾病為炎 性皮膚病。
實施方案31:按照實施方案22或實施方案30的用途，其中所述 炎性皮膚病選自銀屑病、皮炎濕滲、特應性皮炎、硬皮病、扁平苔蘚和斑殼。
實施方案32:治療惡性疾病的方法，所述方法包括給予其需要的
患者治療有效量的CD4結合肽，并對所述患者進行輻射治療。
實施方案33:按照實施方案32的方法，其中所述惡性疾病選自 白血病和'淋巴瘤。
實施方案34:按照實施方案32或實施方案33的方法，其中所述 惡性疾病為T細胞前淋巴細胞性白血病。
實施方案35:按照實施方案32或實施方案33的方法，其中所述 惡性疾病選自CD4+皮膚T細胞淋巴瘤。
實施方案36:按照實施方案35的方法，其中所述惡性疾病選自 蕈樣肉芽腫病、賽謝綜合征、淋巴瘤樣丘滲病和間變性大細胞淋巴瘤。
實施方案37:按照實施方案32或實施方案33的方法，其中所述 惡性疾病選自CD4陽性結節性T細胞淋巴瘤。
實施方案38:按照實施方案37的方法，其中所述惡性疾病選自 外周T細胞淋巴瘤、血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤和間變性大T細 胞淋巴瘤。
實施方案39: —種治療炎性皮膚病的方法，所述方法包括給予其 需要的患者治療有效量的CD4結合肽，并對所述患者進行輻射治療。
實施方案40:按照實施方案39的方法，其中所述炎性皮膚病選 自銀屑病、皮炎濕疹、特應性皮炎、硬皮病、扁平苔蘚和斑禿。
實施方案41: 一種調節臨床疾病的輻射治療的方法，所迷方法包 括給予其需要的患者治療有效量的CD4結合肽，并對所述患者進行輻 射治療。
實施方案42:按照實施方案32-41中任一項的方法，其中所述 CD4結合肽能夠結合人CD4。
實施方案43:按照實施方案32-42中任一項的方法，其中所述 CD4結合肽使用哺乳動物細胞培養物生產。
實施方案44:按照實施方案32-43中任一項的方法，其中所述CD4結合肽能夠活化p56^激酶。
實施方案45:按照實施方案44的方法，其中所述p56^激酶的 活化增加至少一種抑制性雀H妾分子Dok-l和/或SfflP-l的石舞酸化。
實施方案46:按照實施方案32-45中任一項的方法，其中CD4 結合肽為抗CD4抗體或其CD4結合片段。
實施方案47:按照實施方案46的方法，其中所述抗體為單克隆抗體。
實施方案48:按照實施方案46或實施方案47的方法，其中所述 抗體為人源化抗體。
實施方案49:按照實施方案46或實施方案47的方法，其中所述 抗體為人抗體。
實施方案50:按照實施方案46-49中任一項的方法，其中所述抗
體具有K型(K)輕鏈。
實施方案51:按照實施方案46-50中任一項的方法，其中所述抗 體選自扎木單抗、凱利昔單抗、克立昔單抗、TNX/355、 TRX/1、 IOT4a、 普立昔單抗和4162W94。
實施方案52:按照實施方案51的方法，其中所述抗體為扎木單抗。
實施方案53:按照實施方案32-52中任一項的方法，其中所述輻 射治療選自補骨脂素與長波紫外線輻射(PUVA)、 UVB、窄譜UVB、 高劑量UVA、電子束和x射線。
實施方案54:按照實施方案53的方法，其中所述輻射治療為補 骨脂素與長波紫外線輻射(PUVA),其中補骨脂素化合物在UVA治療 之前施用。
實施方案55:按照實施方案54的方法，其中所述補骨脂素化合 物具有以下通式或
其中R!、 R2、 R3、 R4、 RV和Rs獨立地選自氫、鹵素、C(wo廣烷 基和用卣素、胺或羥基取代的C(wo)-烷基，以及任選地用羥基取代的 C^。)醚；或者R！和R5 —起形成吡啶并。
實施方案56:按照實施方案32-55中任一項的方法，其中所述補 骨脂素化合物選自吡啶并-[3，4-c]補骨脂素、7-甲基吡啶并-[3,4-c]補骨 脂素、5-曱氧基補骨脂素、8-曱氧基補骨脂素、4,5',8-三曱基補骨脂素、 4-曱基補骨脂素、4,4-二甲基補骨脂素、4-5'-二甲基補骨脂素、4',8-甲 氧基補骨脂素、4'-(co-氛基-2-氧雜)烷基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-(4-氨基-2-氧雜)-丁基-4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-氯甲基-4,5',8-三甲基補 骨脂素、4'-氨基-甲基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-(2-羥基乙氧基)-甲基 -4,5',8-三曱基-補骨脂素、4'-(6-羥基己氧基)-甲基-4,5',8-三甲基補骨脂 素、4'-羥甲基-4,5',8-三甲基補骨脂素、5-甲基-白芷素和2H-呋喃并 [2，3-h][l]苯并吡喃-2-酮。
實施方案57:按照實施方案56的方法，其中所述補骨脂素化合 物為5-甲氧基補骨脂素或8-甲氧基補骨脂素。
實施方案58:按照實施方案54-57中任一項的方法，其中所述補 骨脂素化合物在輻射治療前5-0.5小時的時間段內給予。
實施方案59:按照實施方案58的方法，其中所述補骨脂素化合物在輻射治療前的2-1小時的時間段內給予。
實施方案60:按照實施方案32-59中任一項的方法，其中所述 CD4結合肽通過靜脈內、皮下或肌內注射給予。
實施方案61:按照實施方案32-60中任一項的方法，其中所述 CD4結合肽在輻射治療前給予至少一次。
實施方案62:按照實施方案32-61中任一項的方法，其中所述 CD4結合肽每周給予一次。
實施方案63:按照實施方案32-62中任一項的方法，其中所述患 者以每周l-5次的范圍進行輻射治療。
實施方案64:按照實施方案32-63中任一項的方法，其中至少一 種CD4結合肽治療和至少一種輻射治療在同一周內給予。
實施方案65:按照實施方案32-64中任一項的方法，其中所述 CD4結合肽治療和輻射治療在4-30周的時間段內給予。
實施方案66:按照實施方案65的方法，其中所述CD4結合肽治 療和輻射治療在8 -16周的時間段內給予。
實施方案67:按照實施方案66的方法，其中所述CD4結合肽治 療和輻射治療在12周的時間段內給予。
實施方案68:按照實施方案32-67中任一項的方法，其中所述輻 射治療局部給予或給予至全皮膚。
實施方案69:按照實施方案32-67中任一項的方法，其中所述輻 射治療給予至體外血液。
實施方案70:按照實施方案69的方法，其中所述輻射治療為光 分離置換法。
實施方案71:包含CD4結合肽和補骨脂素化合物連同一種或多 種藥學上可接受的賦形劑的藥盒組件，所述藥盒組件用作藥物。
實施方案72:包含CD4結合肽和補骨脂素化合物連同 一種或多 種藥學上可接受的賦形劑的藥盒組件，所述藥盒組件用作治療惡性疾 病的藥物。實施方案73:包含CD4結合肽和補骨脂素化合物連同 一種或多 種藥學上可接受的賦形劑的藥盒組件，所述藥盒組件與輻射治療組合 用作治療惡性疾病的藥物。
實施方案74:按照實施方案72或73的藥盒組件，其中所述惡性 疾病選自白血病禾口淋巴瘤。
實施方案75:按照實施方案72-74中任一項的用途，其中所述惡 性疾病為T-細月包前淋巴細胞性白血病。
實施方案76:按照實施方案72-74中任一項的用途，其中所述惡 性疾病選自CD4+皮膚T細胞淋巴瘤。
實施方案77:按照實施方案76的用途，其中所述惡性疾病選自 蕈樣肉芽腫病、賽謝綜合征、淋巴瘤樣丘滲病和間變性大細胞淋巴瘤。
實施方案78:按照實施方案72-74中任一項的用途，其中所述惡 性疾病選自CD4+結節性T細胞淋巴瘤。
實施方案79:按照實施方案78的用途，其中所述惡性疾病選自 外周T細胞淋巴瘤、血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤和間變性大T細 胞淋巴瘤。
實施方案80:包含CD4結合肽和補骨脂素化合物連同一種或多 種藥學上可接受的賦形劑的藥盒組件，所述藥盒組件用作治療炎性皮 膚病的藥物。
實施方案81:包含CD4結合肽和補骨脂素化合物連同一種或多 種藥學上可接受的賦形劑的藥盒組件，所述藥盒組件與輻射治療組合 用作治療炎性皮膚病的藥物。
實施方案82:按照實施方案80或實施方案81的用途，其中所述 炎性皮膚病選自銀屑病、皮炎濕滲、特應性皮炎、硬皮病、扁平苔蘚 和斑禿。
實施方案83:包含CD4結合肽和補骨脂素化合物連同一種或多 種藥學上可接受的賦形劑的藥盒組件，所述藥盒組件用作調節輻射治 療的藥物用于治療臨床疾病。實施方案84:按照實施方案71-83中任一項的藥盒組件，其中所 述補骨脂素化合物以治療有效量存在。
實施方案85:按照實施方案71-84中任一項的藥盒組件，其中所 述CD4結合肽以治療有效量存在。
實施方案86:按照實施方案71-85中任一項的藥盒組件，其中所 述CD4結合肽能夠結合人CD4。
實施方案87:按照實施方案71-86中任一項的藥盒組件，其中所 述CD4結合肽使用哺乳動物細胞培養物生產。
實施方案88:按照實施方案71-87中任一項的藥盒組件，其中所 述CD4結合肽能夠活化p56欣激酶。
實施方案89:按照實施方案88的藥盒組件，其中p56^激酶的 活化增加至少一種抑制性銜接分子Dok-l和/或SfflP-l的磷酸化。
實施方案90:按照實施方案71-89中任一項的藥盒組件，其中所 述CD4結合肽為抗CD4抗體或其CD4結合片段。
實施方案91:按照實施方案90的藥盒組件，其中所述抗體為單 克隆抗體。
實施方案92:按照實施方案90或實施方案91的藥盒組件，其中 所述抗體為人源化抗體。
實施方案93:按照實施方案90或實施方案91的藥盒組件，其中 所述抗體為人抗體。
實施方案94:按照實施方案90-93中任一項的藥盒組件，其中所
述抗體具有K型(K)輕鏈。
實施方案95:按照實施方案90-94中任一項的藥盒組件，其中所 述抗體選自扎木單抗、凱利昔單抗、克立昔單抗、TNX/355、 TRX/1、 10T4a、普立昔單抗和4162W94。
實施方案96:按照實施方案95的藥盒組件，其中所述抗體為扎 木單抗。
實施方案97:按照實施方案71-96中任一項的藥盒組件，其中所述補骨脂素化合物具有以下通式<formula>formula see original document page 59</formula>或
<formula>formula see original document page 59</formula>
<formula>formula see original document page 59</formula>
其中R!、 R2、 R3、 R4、 RV和Rs獨立地選自氫、卣素、C(w。;r烷 基和用卣素、胺或羥基取代的C(wo)-烷基，以及任選地用羥基取代的 C(wo)醚；或者和R5 —起形成吡啶并。
實施方案98:按照實施方案71-97中任一項的藥盒組件，其中所 述補骨脂素化合物選自吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、7-甲基吡啶并-[3,4-c〗 補骨脂素、5-甲氧基補骨脂素、8-甲氣基補骨脂素、4,5',8-三甲基補骨 脂素、4-甲基補骨脂素、4,4-二甲基補骨脂素、4-5'-二甲基補骨脂素、 4'，8-曱氧基補骨脂素、4'-(co-氨基-2-氧雜)烷基-4,5',8-三甲基補骨脂素、 4'-(4-氨基-2-氧雜)-丁基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-氯甲基-4，5',8-三甲 基補骨脂素、4'-氨基-甲基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-(2-羥基乙氧基)-曱基-4,5',8-三曱基-補骨脂素、4'-(6-羥基己氧基)-甲基-4,5',8-三曱基補 骨脂素、4'-鞋曱基-4,5',8-三甲基補骨脂素、5-曱基-白芷素和2H-呋喃 并[2,3-h][l]苯并p比喃-2-酮。
實施方案99:按照實施方案98的藥盒組件，其中所述補骨脂素 化合物為5-甲氧基補骨脂素或8-甲氧基補骨脂素。
實施方案100:按照實施方案71-99中任一項的藥盒組件，其中 所述藥盒組件配制為單位劑型，其中每單位劑量的CD4結合肽包含在20 mg至2000 mg范圍內的肽。
實施方案101:按照實施方案71-100中任一項的藥盒組件，其中 所述藥盒組件配制為單位劑型，其中每單位劑量的補骨脂素包含在10 mg至50 mg范圍內的補骨脂素化合物。
實施方案102:按照實施方案71-101中任一項的藥盒組件，其中 所述CD4結合肽處于適合于胃腸外給予的制劑中。
實施方案103:按照實施方案71-102中任一項的藥盒組件，其中 所述CD4結合肽被配制為溶液或適合于制備懸浮液或溶液的粉末。
實施方案104:按照實施方案71-103中任一項的藥盒組件，其中 所述補骨脂素化合物處于適合于口服或局部給予的制劑中。
實施方案105:按照實施方案71-104中任一項的藥盒，其中所述 補骨脂素化合物以選自片劑、膠嚢劑、乳劑、洗劑或軟膏劑的形式配 制。
實施方案106:用于在接受或將接受輻射治療的個體中治療惡性 疾病或炎性皮膚病的CD4結合肽。
實施方案107:用于與輻射治療組合治療惡性疾病或炎性皮膚病 的CD4結合肽。
實施方案108:用于調節臨床疾病的輻射治療的CD4結合肽。
實施方案109:按照實施方案106-108中任一項的CD4結合肽， 其中所述CD4結合肽能夠結合人CD4。
實施方案110:按照實施方案106-109中任一項的CD4結合肽， 其中所述CD4結合肽使用哺乳動物細胞培養物生產。
實施方案111:按照實施方案106-110中任一項的CD4結合肽， 其中所述CD4結合肽能夠活化p56欣激酶。
實施方案112:按照實施方案111的CD4結合肽，其中p56^激 酶的活化增加至少一種抑制性銜接分子Dok-l和/或SfflP-l的磷酸化。
實施方案113:按照實施方案106-112中任一項的CD4結合肽，實施方案114:按照實施方案113的CD4結合肽，其中所述抗體 為單克隆抗體。
實施方案115:按照實施方案113或實施方案114的用途，其中 所述抗體為人源化抗體。
實施方案116:按照實施方案113或實施方案114的CD4結合肽， 其中所述抗體為人抗體。
實施方案117:按照實施方案113-116中任一項的CD4結合肽，
其中所述抗體具有K型(K)輕鏈。
實施方案118:按照實施方案113-117中任一項的CD4結合肽， 其中所述抗體選自扎木單抗、凱利昔單抗、克立昔單抗、TNX/355、 TRX/1、 10T4a、普立昔單抗和4162W94。
實施方案119:按照實施方案118的CD4結合肽，其中所述抗體 為扎木單抗。
實施方案120:按照實施方案106-119中任一項的CD4結合肽， 其中所述輻射治療選自補骨脂素化合物與長波紫外線輻射(PUVA)、 UVB、窄i普UVB、高劑量UVA、電子束和x射線的施用組合。
實施方案121:按照實施方案120的CD4結合肽，其中所述輻射 治療為補骨脂素化合物與長波紫外線輻射(PUVA)的施用組合。
實施方案122:按照實施方案121的CD4結合肽，其中所述補骨 脂素化合物具有以下通式
<formula>formula see original document page 61</formula>其中R!、 R2、 R3、 R4、 RV和Rs獨立地選自氫、卣素、C(wo)-烷 基和用由素、胺或羥基取代的C(wo)-烷基，以及任選地用羥基取代的 C(wo)醚；或者R!和Rs—起形成吡啶并。
實施方案123:按照實施方案106-122中任一項的CD4結合肽， 其中所述補骨脂素化合物選自吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、7-曱基吡啶并 -[3,4<]補骨脂素、5-甲氧基補骨脂素、8-曱llJ^補骨脂素、4,5',8-三甲 基補骨脂素、4-甲基補骨脂素、4,4-二曱基補骨脂素、4-5'-二曱基補骨 脂素、4',8-曱氧基補骨脂素、4'-((D-氨基-2-氧雜)烷基-4,5',8-三甲基補 骨脂素、4'-(4-氨基-2-氧雜)-丁基-4，5',8-三甲基補骨脂素、4'-氯曱基 -4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-氨基-甲基-4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-(2-羥基乙氧基)-曱基-4，5',8-三甲基-補骨脂素、4'-(6-羥基己氧基)-甲基 -4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-羥曱基-4,5',8-三甲基補骨脂素、5-甲基-白 芷素和2H-呋喃并[2,3-h][l]苯并吡喃-2-酮。
實施方案124:按照實施方案123的CD4結合肽，其中所述補骨 脂素化合物為5-甲氧基補骨脂素或8-甲氧基補骨脂素。
本文描述的治療方法還可以與其它治療組合，尤其是與常規用于 治療特定臨床疾病的其它治療組合。例如，在其中所述臨床疾病為惡 性疾病的本發明實施方案中，治療可與化療、手術治療、用免疫刺激 物治療、基因治療、用其它肽如抗體治療和/或使用樹突細胞的治療組 合。
實施例 實施例1
利用扎木單抗抑制活化的T細胞中的T細胞信號轉導該實施例表明了扎木單抗(GenMab, Denmark)經T細胞受體(TCR) 對T細胞活化的抑制性作用。結果示于圖2。
在圖2中呈現的T細胞活化時對T細胞信號轉導分子的作用用分 離自健康供體的外周血的CD4+ T細胞獲得。CD4+ T細胞使用 RosetteSep富集混合物(Stemcell Technologies Inc, Canada)分離，并通 過lymphoprep (Axis Shield, Poc AS, Norway)密度離心分離。CD4+ T細 胞(107個細胞)與扎木單抗溫育，然后用固定在乳膠珠上的CD3單克 隆抗體(OKT3，可得自Orthoclone, Pharmacy, UMC, Utrecht)刺激。細 胞使用裂解緩沖液(1% Nonidet P-40, 20 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 2mM EGTA, 1 mM Na3V04, 10 mM NaF, 10 mM焦石粦酸鈉和蛋 白酶抑制劑(Roche Molecular Biochemicals， Sussex, UK))裂解。在雙份 細胞裂解物樣品中的蛋白通過7-15%梯度凝膠SDS-PAGE分離，并通 過電泳轉移至印跡膜上。膜與特異性酪氨酸磷酸化蛋白的抗體溫育， 剝離，然后用不管特異性蛋白的磷酸化狀態而識別它們的抗體再探 測。蛋白用綴合HRP的二抗檢測，通過ECL顯現，并使用磷成像儀 定量。
圖2中的結果表明，扎木單抗在經由固定化CD3單克隆抗體的 TCR刺激后對胞內蛋白的酪氨酸磷酸化產生普遍抑制(圖2A)。 21kDa 和23kDa蛋白在它們的磷酸化方面被顯著抑制， 一皮鑒別為TCR-;鏈的 p21和p23磷酸化異構體(圖2A)。所觀察到的扎木單抗對下游酪氨酸 激酶《鏈相關蛋白70' (ZAP刁0)的磷酸化的抑制與此一致(圖2B)。以 前，TCR;的活化和隨后的ZAP-70的活化被表明由酪氨酸激酶p56kk 誘導(Chan AC等，Annu Rev Immunol. U, 555-92 (1994)， van Oers NS 等，J Exp Med. 183(3), 1053-1062 (1996), Weiss A等，，),263-74 (1994),其與CD4的胞質尾區有關(Rudd CE，Proc Natl Acad Sci USA. ^1(14), 5190-5194 (1988), Veillette， 1988，出處同上)。其磷酸化也被 扎木單抗抑制的36-38kDa顯性酪氨酸磷酸化蛋白被鑒別為'活化T 細胞的銜接蛋白接頭'(LAT)(圖2A)。另外，扎木單抗抑制在T細胞活化中起關鍵作用的3個下游信號轉導途徑Erkl/2、 p38絲氨酸/蘇 氨酸和AKT/PKB (圖2C)。
總之，扎木單抗抑制非常早期的T細胞活化事件達約50%，其可 能是p56^依賴性的，由此將相當的抑制性作用水平傳輸至多個下游 信號轉導途徑。
實施例2
通過扎木單抗直接抑制T細胞中的信號轉導
該實施例表明扎木單抗在T細胞中直接抑制信號轉導。結果示于圖3。
在圖3中呈現的T細胞中的抑制性銜接分子的活化用如在實施例 1中所述分離的CD4+T細胞獲得。將CD4+T細胞(3xlOE7個細胞)與 扎木單抗溫育，適宜時在接觸扎木單抗前與Src激酶抑制劑PP2或虎 刺素(Merck Biosciences, Nottingham, UK)預溫育。細胞裂解物與CD4 沉淀抗體溫育，抗體結合蛋白用G蛋白sepharose沉淀。對于SH2-結 合蛋白的沉淀，裂解物與偶聯至谷胱甘肽瓊脂糖珠的 SH2C-RasGAP-GST溫育。CD4-沉淀物與含1 mM DTT、 5 ATP 和1 ^Ci 32P"ATP的激酶纟爰沖液(40 mM HEPES pH 7.4, 10 mM MgCl2, 3 mM MnCl2, 200 Na3V04的10%甘油溶液)溫育。反應通過在 Laemmli緩沖液中煮沸終止。蛋白通過7-15%梯度凝膠SDS-PAGE分 離，并通過電泳轉移至印跡膜上。干燥的膜對放射照相敏感性膠片曝 光，然后與特異性蛋白的抗體溫育。用綴合HRP的二抗檢測蛋白，通 過ECL顯現，并使用磷成像儀定量。
圖3中的結果表明，扎木單抗對CD4相關的p56欣酪氨酸激酶活 性、作為外源p56她底物的a-酪蛋白的磷酸化和p56lek自體磷酸化產生 最佳刺激(圖3A)。由扎木單抗誘導的p56^活性增加看起來可能與扎 木單抗溫育時表明T細胞活化受損的數據相矛盾(圖2)。以下概述了 一個可能的解釋，然而本發明不受具體的基礎機制限制。我們假定扎木單抗可引起p56她隱匿，遠離TCR。另外，扎木單抗可通過p56kk
直接產生負信號，因為業已表明p56^在磷酸化中起作用，由此活化
抑制性銜接蛋白'酪氨酸激酶下游，(Dok-l)(Martelli, 2001，出處同 上，Okabe, 2005,出處同上)和'接觸SH2結構域的5'-肌醇磷酸酶， (SHIP-l)(Lamkin, 1997，出處同上)。扎木單抗實際上誘導Dok-l和 SHIP-1的磷酸化(圖3B、 3C)。所觀察到的扎木單抗增加p56kk活化和 Dok-l活化誘導之間的直接關聯經由用Src抑制劑PP2或用更特異性 的p56kk抑制劑虎刺素預處理細胞證實。用這些抑制劑預處理導致沉 淀的Dok-l量減少(圖3D)。總之，扎木單抗的CD4結合引起p56lck 激酶活化，該活化又導致Dok-l和SHIP-1磷酸化增加。
實施例3
扎木單抗與UV處理組合對初始CD4+ T細胞的影響
總CD4+ T細胞或CD45RO+和CD45RA+部分分離自由兩種性別 的健康供體獲得的血庫白細胞去除包(blood bank leukopheresis packs)。 將無菌PBS加入到每個血包中，并通過lymphoprep密度離心(淋巴細 月包分離液；BioWhittaker，經由Cambrex Verviers, Belgium;產品號 17-829E)以800xg 20分鐘(剎車O)分離外周血單核細胞(PBMC)。取出 在梯度界面的PBMC,用PBS清洗3次(400xg， 7分鐘，剎車3),然 后重懸浮在RPMI中。使用Dynal CD4+ T細胞陰性分離試劑盒(Dynal Biotech GmbH, Hamburg, Germany;產品號113.1 l)按照生產商的方案 通過陰性選擇分離CD4+ T細胞。采用Dynal CD4+ T細胞陰性分離 試劑盒(Dynal Biotech GmbH, Hamburg, Germany;產品號113.17)并組 合抗CD45R0+ (Becton Dickinson,目錄號555491))和CD45RA+ (Becton Dickinson,目錄號556625)細胞的小鼠單克隆抗體以及組合抗小鼠磁 珠，由PBMC懸浮液分離CD4+CD45RA+和CD4+CD45R0+ T細胞部分。 通過經由扎木單抗-FITC (Ge腿ab B.V.;批號200302)和抗-CD3-PE (Becton Dickinson ，目錄號556612)染色的流式細胞法，對于CD4+CD45RA+和CD4+CD45R0+ T細胞部分而言用抗-CD45RA-FITC 和CD45RO-PE抗體，檢查CD4+T細胞的百分率，并使用Cell Quest 軟件(Becton Dickinson, Erembodegem-Aalst, Belgium)以FACS Calibur 分析細胞相關熒光。
在分離的CD4+ T細胞和CD4+CD45RA+和CD4+CD45R0+ T細胞 部分細胞在培養基(RPMI 1640,補加10。/。熱失活胎牛血清(Fetal clone II-Hyclone;產品號SH30066.3)、 2 mM L-谷氨酰胺(BioWhittaker，經 由Cambrex;產品號17-605F)和50單位/ml青霉素和50嗎/ml鏈霉素 (BioWhittaker，經由Cambrex;產品號DEI7-603E))中適應1小時之后， 將細胞重懸浮在單獨的培養基中、補加10 pg/ml扎木單抗(Genmab, Denmark)的培養基中以及含10嗎/ml HuMab-KLH (Genmab B.V.;對 照lgGK)的培養基中。這些批次用多種劑量的UV (50-1000 J/n^)和UV 交聯劑(UV Stratalinker 2400, Stmtagene)處理，變成凋亡的細胞量通過 3個獨立測定于0、 4、 8、 24和48小時確定。首先，對于膜聯蛋白V 染色法，使用膜聯蛋白-V-FITC和7-AAD (7-氨基放線菌素D)(BD Biosciences)通過流式細胞法進行分析，膜聯蛋白-V-FITC+/7-AAD^B 胞被視為凋亡的。其次，對于胞內半胱天冬酶-3染色法，CD4+T細胞 用FACS緩沖液(PBS,含有2% HIFCS和0.01%疊氮化物)清洗2次， 之后重懸浮在Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences)中。在于4。C溫育20 分鐘后，細胞用透化/清洗緩沖液(BDBiosciences)清洗2次，然后用活 性半胱天冬酶-3單克隆抗體(BD Biosciences)染色，后^^妄流式細月包術， 半胱天冬酶-3陽性細胞被視為凋亡的。對于用碘化3,3'-二己基氧雜羰 花青(DiOC6)(Aldrich, Poole， Dorset, UK)法分析，細胞用23 ng/ml DiOC6染色，然后進行流式細胞術。表現出FSC和DiOC6強度損失的 細胞被視為凋亡的。
實施例4
扎木單抗與UV治療組合對CD4+ T細胞系的影響將CD4+T細胞系SUP-T1 (ATCC，序號CRL-1942)、 CEM-NKr (NIH AIDS Research and Reference Reagent Program;試劑編號458)在 培養基(RPMI 1640,補加10。/。熱失活胎牛血清(Fetal clone II-Hyclone; 產品號SH30066.3)、 2mML-谷氨酰胺(BioWhittaker，經由Cambrex; 產品號17-605F)以及50單位/ml青霉素和50昭/ml鏈霉素 (BioWhittaker，經由Cambrex;產品號DE17-603E》中在5% C02-95% 空氣中于37。C培養，至3-10xl()S個細胞/ml的最佳細胞密度。
將細胞重懸浮在單獨的培養基中、補加10嗎/ml扎木單抗 (Genmab, Denmark)的培養基中以及含10 |tig/ml HuMab-KLH (Genmab B.V.;對照IgGl， k)的培養基中。這些批次用多種劑量的UV (50-1000 J/m2)和UV交聯劑(UV Stratalinker 2400, Stratagene)處理，變成凋亡的 細胞量通過3個獨立測定于0、 4、 8、 24和48小時確定。首先，對 于膜聯蛋白V染色法，使用膜聯蛋白-V-FITC和7-AAD (7-氨基放線 菌素D)(BD Biosciences)通過流式細胞法進行分析，膜聯蛋白 -V-FITC+/7-AAD+細胞被視為凋亡的。其次，對于胞內半胱天冬酶-3 染色法，CD4+ T細胞用FACS緩沖液(PBS，含有2% HIFCS和0.01% 疊氮化物)清洗2次，之后重懸浮在Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences) 中。在于4。C溫育20分鐘后，細胞用透化/清洗緩沖液(BD Biosciences) 清洗2次，然后用活性半胱天冬酶-3單克隆抗體(BD Biosciences)染色， 后接流式細胞術，半胱天冬酶-3陽性細胞被視為凋亡的。對于用碘化 3,3'-二己基氧雜羰花青(DiOC6)(Aldrich， Poole, Dorset, UK)法分析，細 胞用23 ng/ml DiOC6染色，然后進行流式細胞術。表現出FSC和DiOC6 強度損失的細胞被視為凋亡的。
實施例5
扎木單抗與PUVA治療組合對初級CD4+ T細胞的影響
初級CD4+ T細胞以及CD4+CD45RA+和CD4+CD45R0+ T細胞部 分細胞如在實施例3中所述分離。在分離的細胞于培養基(RPMI 1640，補力。10%熱失活胎牛血清 (Fetal clone II-Hyclone;產品號SH30066.3)、 2 mM L-谷氨酰胺 (BioWhittaker,經由Cambrex;產品號17-605F)以及50單位/ml青霉 素和50昭/ml鏈霉素(BioWhittaker，經由Cambrex;產品號DE17-603E)) 中適應最少1小時后，將細胞重懸浮在單獨的培養基中、補加10|iig/ml 扎木單抗(Genmab, Denmark)的培養基中以及含10昭/ml HuMab-KLH (GenmabB.V.;對照IgGl, k)的培養基中。這些細胞在5% COr95% 空氣中于37。C培養0、 0.3、 1、 2、 4和8小時。在培養后，用無血清 培養基清洗細胞。將細胞分為兩部分 一部分與8-MOP (200 ng/ml 8-甲氧基補骨脂素)在無血清培養基中于室溫溫育5分鐘，另一部分在單 獨的無血清培養基中于室溫溫育5分鐘。然后，細胞接觸多種劑量的 UV (50-1000 J/m2)和UV交聯劑(UV Stratalinker 2400, Stratagene)。在 處理后，細胞在培養基中溫育，變成凋亡的細胞量通過3個獨立測定 于0、 4、 8、 24和48小時確定。首先，對于膜聯蛋白V染色法，使 用膜聯蛋白-V-FITC和7-AAD (7-氨基放線菌素D)(BD Biosciences)通 過流式細胞法進行分析，膜聯蛋白-V-FITC+Z7-AAD+細胞被視為凋亡 的。其次，對于胞內半胱天冬酶-3染色法，CD4+T細胞用FACS緩沖 液(PBS，含有2。/。HIFCS和0.0P/。疊氮化物)清洗2次，之后重懸浮在 Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences)中。在于4。C溫育20分鐘后，用透 化/清洗緩沖液(BD Biosciences)清洗細胞2次，然后用活性半胱天冬酶 -3單克隆抗體(BDBiosciences)染色，后接流式細胞術，半胱天冬酶-3 陽性細胞計數被視為凋亡的。對于用碘化3,3'-二己基氧雜羰花青 (DiOC6)(Aldrich, Poole, Dorset, UK)法分析，細胞用23 ng/ml DiOC6染 色，然后進行流式細胞術。表現出FSC和DiOQ強度損失的細胞凈皮視 為凋亡的。
實施例6
扎木單抗與PUVA治療組合對CD4+ T細胞系的影響
6細胞系SUP-T1和CEM-NKr描述于實施例4。將細胞重懸浮在單 獨的培養基中、補加10 jug/ml扎木單抗(Genmab, Denmark)的培養基中 以及含10昭/ml HuMab-KLH (Genmab B.V.;對照lgGK)的培養基中。 這些細胞在5% 0)2-95%空氣中于37"培養0、 0.3、 1、 2、 4和8小 時。在培養后，用無血清培養基清洗細胞。將細胞分為兩部分 一部 分與8-MOP (200 ng/ml曱氧沙林)在無血清培養基中于室溫溫育5分 鐘，另一部分在單獨的無血清培養基中于室溫溫育5分鐘。然后，細 胞接觸多種劑量的UV (50-1000 J/m"和UV交聯劑(UV Stratalinker 2400, Stratagene)。在處理后，細胞在培養基中溫育，變成凋亡的細胞 量通過3個獨立測定于0、 4、 8、 24和48小時確定。首先，對于膜 聯蛋白V染色法，使用膜聯蛋白-V-FITC和7-AAD (7-氨基放線菌素 D)(BD Biosciences)通過流式細胞法進行分析，膜聯蛋白 -V-FITC+/7-AAD+細胞被視為凋亡的。其次，對于胞內半胱天冬酶-3 染色法，CD4+T細胞用FACS緩沖液(PBS,含有2%fflFCS和0.01% 疊氮化物)清洗2次，之后重懸浮在Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences) 中。在于4。C溫育20分鐘后，細胞用透化/清洗緩沖液(BD Biosciences) 清洗2次，然后用活性半胱天冬酶-3單克隆抗體(BD Biosciences)染色， 后接流式細胞術，半胱天冬酶-3陽性細胞計數祐、視為凋亡的。對于用 碘化3,3'-二己基氧雜羰花青(DiOC6)(Aldrich, Poole, Dorset, UK)法分 析，細胞用23ng/mlDiOC6染色，然后進行流式細胞術。表現出FSC 和DiOC6強度損失的細胞計數被視為凋亡的。
實施例7
OP)UVA-誘導的Gl期T細胞的凋亡
SUP-T1和CEM-NKr細胞系與0.5-50 pg/ml巴菲敵柯林同步5-18 小時，細胞在G1/S交界處累積。細胞周期停滯將如下被解除用PBS 清洗細胞3次，并將它們返回到正常培養基，培養4-6小時。此后， 將諾考達唑(200嗎/ml)加入到培養基中，再培養6小時。通過此方法，幾乎所有的細胞都將同步在M期。通過用PBS洗除諾考達唑3次并 重懸浮在正常培養基中，同步的細胞將在1小時內移至G1期。在10、 20、 30、 40、 50和60分鐘時，細胞用多種劑量的UV (50-1000 J/m2) 和UV交聯劑(UV Stmtalinker 2400, Stratagene)處理，變成凋亡的細胞 量通過3個獨立測定確定。首先，對于膜聯蛋白V染色法，使用膜聯 蛋白-V-FITC和7-AAD (7-氨基放線菌素D)(BD Biosciences)通過流式 細胞法進行分析，膜聯蛋白-V-FITC+/7-AAD+細胞祐:視為凋亡的。其 次，對于胞內半胱天冬酶-3染色法，CD4+T細胞用FACS緩沖液(PBS， 含有2% HIFCS和0.01%疊氮化物)清洗2次，之后重懸浮在 Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences)中。在于4。C溫育20分鐘后，細胞 用透化/清洗緩沖液(BD Biosciences)清洗2次，然后用活性半胱天冬酶 -3單克隆抗體(BDBiosciences)染色，后接流式細胞術，半胱天冬酶-3 陽性細胞計數被視為凋亡的。對于用碘化3,3'-二己基氧雜羰花青 (DiOC6)(Aldrich， Poole, Dorset, UK)法分析，細胞用23 ng/ml DiOC6染 色，然后進行流式細胞術。表現出FSC和DiOC6強度損失的細胞4^f見 為凋亡的。
實施例8
(P)UVA治療，后接NK細胞介導的對初級CD4+ T細胞的ADCC,細 胞裂解的誘導
健康志愿者的外周人血細胞(知會同意后)通過脈穿刺收集，并以 血沉棕黃層的形式提供(Sanquin, Utrecht, The Netherlands)。將無菌 PBS加入人血，外周血單核細胞(PBMC)通過lymphoprep密度離心(淋 巴細胞分離液；BioWhittaker,經由Cambrex Venders, Belgium;產品 號17-829E)以800xg (剎車0) 20分鐘(Heraeus MultifUge 3S-R)分離。由 梯度界面取出PBMC,用PBS清洗3次(400xg, 7分鐘，剎車3)，然 后重懸浮在補加0.1% BSA的PBS中。
按照生產商的方案使用Dynal CD4+ T細胞陰性分離試劑盒(Dynal Biotech GmbH, Hamburg, Germany;產品號113.11 )使用陰性選 擇分離CD4+ T細胞(或CD45RO+和CD45RA+部分)。
使用Dynal 陰性分離試劑盒組合抗CD45R0+ (Becton Dickinson, 目錄號555491》或CD45RA+ (Becton Dickinson,目錄號556625)細胞 的小鼠單克隆抗體以及組合抗小鼠磁珠，由PBMC懸浮液分離CD4+ T 細胞或CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+ T細胞部分。通過經由 HuMax-CD4-FITC (Genmab B.V.;批號200302)和抗-CD3-PE (Becton Dickinson,目錄號556612)染色的流式細胞法，對于CD4+CD45RA+ 和CD4+CD45R0+ T細胞部分而言分別用抗-CD45RA-FITC和 CD45RO-PE抗體，檢查CD4+T細胞的百分率。使用Cell Quest軟件 (Becton Dickinson, Erembodegem-Aalst, Belgium)以FACS Calibur分斗斤 細l包相關熒光。
使用Dynal NK細胞陰性分離試劑盒(Dynal Biotech GmbH, Hamburg, Germany;產品號113.15)按照生產商的方法通過陰性選擇由 外周人血分離NK細胞。NK細胞的百分率通過經由CD56-PE (Becton Dickinson,目錄號555516)和CD16-FITC (Becton Dickinson,目錄號 555406)染色的流式細胞法檢查，使用Cell Quest軟件(Becton Dickinson: Erembodegem-Aalst, Belgium)以FACS Calibur分析細胞相關熒光。
分離的NK細胞在37。C、 5。/。C02下在補加10%熱失活加強型小 牛血清(CCS)、 50 pg/ml鏈霉素和50 U/ml青霉素(Cambrex,目錄號 DE17-603E)、 2 mM L-谷氨酰胺(Cambrex，目錄號BE17-605F)和 200-300 U/ml IL曙2的RPMI 1640 (Cambrex,目錄號BE12國115F)中培 養，直至CD4+T細胞被PUVA處理(2天后)。
分離的CD4+ T細胞或分離的CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+部 分用熒光細胞膜標記PKH26 (FL2)(PKH26紅色熒光細胞連接試劑盒, Sigma-AJdrich Chemie， Zwijndrecht, The Netherlands ; 產品號 PKH26-GL)按照生產商的方法標記。
將PKH26-標記的CD4+T細胞(或分離的部分)以1*105個細胞/孔以100 pi轉移至96孔平底板(包被10嗎/ml OKT3 (Orthoclone,目錄號 01KS34H)。
接著，加入50 CD28 (CLB,目錄號M1650;最終濃度為2 嗎/ml)。最后，加入50nl稀釋的扎木單抗，獲得終體積200 pl/孔。
這些CD4+ T細胞于37°C、 5% C02中溫育2天。在培養后，將 細胞分為兩個相等的部分 一部分與1 pg/ml 8-MOP(補骨脂素；Fluka, 目錄號95560)于室溫溫育30分鐘，另 一部分在沒有8-MOP的情況下 于室溫溫育30分鐘。
接著，以1 J/cm2 UVA于距UVA燈(UVP⑧8W，型號UVLMS-38) 不同的距離輻射細胞不同的時間段。
培養的NK-細胞用PBS清洗3次(400xg, 7分鐘，剎車3),然后 以2.5-5*106個細胞/1111 (取決于培養和清洗后的NK細胞產量)重懸浮 在培養基中。
在輻射后，將PKH26標記和(P)UVA處理的CD4+ T細胞以 2.5-5*104個細胞/孔以100 |Lil (取決于培養和清洗后培養基中的NK-細 胞量)轉移至96孔圓底板。
隨后，以2.5-5*105個細胞/孔(調整每孔的服細胞量，以獲得10:1 效應子/革巴細胞比率)力口入100 pl NK細胞，將細胞離心下來(54xg, 10 秒，剎車3)。沉淀的細胞在5%(302中于37。C溫育0、 4和24小時。 對于自發裂解的檢測，靶細胞與培養基在沒有NK細胞的情況下溫育。
在溫育后，將細胞離心下來(500xg, 5分鐘，剎車3),并將細胞 轉移至具有100 pl FACS緩沖液的Micronic FACS管中。細胞在臨分 析前用TO-PRO -3 (Molecular Probes, Leiden, The Netherlands;產品號 T3605; 1:100,000最終稀釋度)染色。TO-PRO-3碘化物是在通過裂解 的T細胞的透化膜進入后用于核酸的熒光染料，并在FL4中是可檢測 的。使用FACSCaliburTM和采用適宜補償設置的Cell Quest Pro軟件 (Becton Dickinson)通過流式細胞法評價細胞相關熒光。通過將PKH26+ 細胞群中的TO-PRC^-3+細胞數除以PKH26+細胞總數計算細胞裂解百分率。
實施例9
在臨床環境中的應用
在本發明的 一個實施方案中，罹患惡性疾病或炎性皮膚病的患者 在給予CD4結合肽之前接觸PUVA，例如患者可在開始CD4結合肽 給予之前按照說明書接觸PUVA治療1周、2周或2-4周。CD4結合 肽的給予可單獨地繼續，或在用PUVA繼續治療的過程中繼續。在一 個實施方案中，同時開始并進行PUVA治療和CD4結合肽的給予。 在一個實施方案中，CD4結合肽為扎木單抗(Genmab, Denmark)。在一 個實施方案中，CD4結合肽以700 mg的劑量通過靜脈內輸注在2-3 小時內給予。在初始劑量后根據需要每2周1次給予350 mg CD4結 合肽的維持劑量，直至臨床癥狀看起來顯著改善，或者直至癥狀消失。 在一個實施方案中，CD4結合肽的劑量逐漸增加，直至觀察到對癥狀 的作用，或直至出現不可接受的副作用。治療方案根據需要每3-9個 月重復1次或多次。患者可同時用其它已確立的治療方案治療。
在一個實施方案中，補骨脂素在開始PUVA和CD4結合肽治療 之前應用于患者。在一個實施方案中，在開始PUVA和CD4結合肽 治療的同時或之后應用補骨脂素。
權利要求
1.CD4結合肽在制備用于在接受或將接受輻射治療的個體中治療臨床疾病的藥物組合物中的用途。
2. CD4結合肽在制備用于與輻射治療組合治療臨床疾病的藥物 組合物中的用途。
3. CD4結合肽在制備用于調節臨床疾病的輻射治療的藥物組合 物中的用途。
4. CD4結合肽和補骨脂素化合物在制備用于臨床疾病治療的藥 盒組件中的用途。
5. 權利要求4的用途，其中所述藥盒組件用于調節輻射治療。
6. 權利要求1-5中任一項的用途，其中所述CD4結合肽能夠結 合人CD4。
7. 權利要求1-6中任一項的用途，其中所述CD4結合肽使用哺 乳動物細胞培養物生產。
8. 權利要求1-7中任一項的用途，其中所述CD4結合肽能夠活 化p56^激酶。
9. 權利要求8的用途，其中p56欣激酶的活化增加至少一種抑制 性銜接分子Dok-l和/或SHIP-1的磷酸化。
10. 權利要求1-9中任一項的用途，其中用于本發明的CD4結合 肽選自在結合至CD4陽性細胞時能夠活化天然殺傷細胞的CD4結合 肽。
11. 權利要求10的用途，其中用于本發明的CD4結合肽在結合 至CD4陽性細胞時能夠結合天然殺傷細胞上的CD16,并由此活化天 然殺傷細胞。
12. 權利要求1-11中任一項的用途，其中所述CD4結合肽為抗 CD4抗體或其CD4結合片段。
13. 權利要求12的用途，其中所述抗體為單克隆抗體。
14. 權利要求12或權利要求13的用途，其中所述抗體為人源化 抗體。
15. 權利要求12-13中任一項的用途，其中所述抗體為人抗體。
16. 權利要求12-15中任一項的用途，其中所述抗體具有k型(k) 輕鏈。
17. 權利要求12-16中任一項的用途，其中所述抗體選自扎木單 抗、凱利昔單抗、克立昔單抗、TNX/355、 TRX/1、 K)T4a、普立昔單 抗和4162W94。
18. 權利要求17的用途，其中所述抗體為扎木單抗。
19. 權利要求1-18中任一項的用途，其中所述輻射治療選自補骨 脂素化合物與長波紫外線輻射(PUVA)、 UVB、窄譜UVB、高劑量 UVA、電子束和x射線的施用組合。
20. 權利要求19的用途，其中所述輻射治療為補骨脂素化合物與 長波紫外線輻射(PUVA)的施用組合。
21. 權利要求20的用途，其中所述補骨脂素化合物具有以下通式<formula>formula see original document page 3</formula>或<formula>formula see original document page 3</formula>其中Rp R2、 R3、 R4、 RV和Rs獨立地選自氫、鹵素、C(wo)-烷 基和用面素、胺或羥基取代的Cn-io)-烷基，以及任選地用羥基取代的C(1-10)醚；或者R！和R5 —起形成吡咬并。
22. 權利要求1-21中任一項的用途，其中所述補骨脂素化合物選 自吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、7-曱基吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、5-甲氧基 補骨脂素、8-曱氧基補骨脂素、4,5',8-三甲基補骨脂素、4-曱基補骨脂 素、4,4-二甲基補骨脂素、4-5'-二曱基補骨脂素、4',8-甲氧基補骨脂素、 4'-(co-氨基-2-氧雜)烷基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-(4-氨基-2-氧雜)-丁 基-4,5'，8-三甲基補骨脂素、4'-氯曱基-4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-氨基-曱基-4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-(2-羥基乙氧基)-甲基-4,5',8-三甲基-補 骨脂素、4'-(6-羥基己氧基)-曱基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-羥曱基 -4,5',8-三甲基補骨脂素、5-甲基-白芷素和2H-呋喃并[2,3-h][l]苯并吡 喃-2-酮。
23. 權利要求22的用途，其中所述補骨脂素化合物為5-曱氧基 補骨脂素或8-甲氧基補骨脂素。
24. 權利要求1-23中任一項的用途，其中所述臨床疾病為惡性疾 病或炎性皮力夫病。
25. 權利要求24的用途，其中所述臨床疾病為惡性疾病。
26. 權利要求24或權利要求25的用途，其中所述惡性疾病選自 白血病和淋巴瘤。
27. 權利要求24-26中任一項的用途，其中所述惡性疾病為T細 胞前淋巴細胞性白血病。
28. 權利要求24-26中任一項的用途，其中所述惡性疾病選自 CD4+皮膚T細胞淋巴瘤。
29. 權利要求28的用途，其中所述惡性疾病選自蕈樣肉芽腫病、 賽謝綜合征、淋巴瘤樣丘瘆病和間變性大細胞淋巴瘤。
30. 權利要求24-26中任一項的用途，其中所述惡性疾病選自 CD4+結節性T細胞淋巴瘤。
31. 權利要求30的用途，其中所述惡性疾病選自外周T細胞淋 巴瘤、血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤和間變性大T細胞淋巴瘤。
32. 權利要求24-31中任一項的用途，其中所述惡性疾病為至少 一種其它治療方法難以治療的。
33. 權利要求24的用途，其中所述臨床疾病為炎性皮膚病。
34. 權利要求24或權利要求33的用途，其中所述炎性皮膚病選 自銀屑病、皮炎濕滲、特應性皮炎、硬皮病、扁平苔蘚和斑禿。
35. 權利要求24、 33或34中任一項的用途，其中所述炎性皮膚 病為至少一種其它治療方法難以治療的。
36. —種治療惡性疾病的方法，所述方法包括給予其需要的患者 治療有效量的CD4結合肽，并對所述患者進行輻射治療。
37. 權利要求36的方法，其中所述惡性疾病選自白血病和淋巴瘤。
38. 權利要求36或權利要求37的方法，其中所迷惡性疾病為T 細胞前淋巴細胞性白血病。
39. 權利要求36或權利要求37的方法，其中所述惡性疾病選自 CD4+皮月夫T細胞淋巴瘤。
40. 權利要求39的方法，其中所述惡性疾病選自蕈樣肉芽腫病、 賽謝綜合征、淋巴瘤樣丘瘆病和間變性大細胞淋巴瘤。
41. 權利要求36或權利要求37的方法，其中所述惡性疾病選自 CD4陽性結節性T細胞淋巴瘤。
42. 權利要求41的方法，其中所述惡性疾病選自外周T細胞淋 巴瘤、血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤和間變性大T細胞淋巴瘤。
43. 權利要求36-42中任一項的方法，其中所述惡性疾病是至少 一種其它治療方法難以治療的。
44. 一種治療炎性皮膚病的方法，所述方法包括給予其需要的患 者治療有效量的CD4結合肽，并對所述患者進行輻射治療。
45. 權利要求44的方法，其中所述炎性皮膚病選自銀屑病、皮炎 濕滲、特應性皮炎、硬皮病、扁平苔蘚和斑禿。
46. 權利要求44-45中任一項的治療方法，其中所述炎性皮膚病是至少 一 種其它治療方法難以治療的。
47. —種調節臨床疾病的輻射治療的方法，所述方法包括給予其 需要的患者治療有效量的CD4結合肽，并對所述患者進行輻射治療。
48. 權利要求36-47中任一項的方法，其中所述CD4結合肽能夠 結合人CD4。
49. 權利要求36-48中任一項的方法。其中所述CD4結合肽使用 哺乳動物細胞培養物生產。
50. 權利要求36-49中任一項的方法。其中所述CD4結合肽能夠 活化p56^激酶。
51. 權利要求50的方法，其中所述p56^激酶的活化增加至少一 種抑制性銜接分子Dok-l和/或SfflP-l的磷酸化。
52. 權利要求36-51中任一項的方法，其中用于本發明的CD4結 合肽選自在結合至CD4陽性細胞時能夠活化天然殺傷細胞的CD4結 合肽。
53. 權利要求36-52中任一項的方法，其中用于本發明的CD4結 合肽在結合至CD4陽性細胞時還能夠結合天然殺傷細胞上的CD16, 并由此活化天然殺傷細胞。
54. 權利要求36-53中任一項的方法，其中CD4結合肽為抗CD4 抗體或其CD4結合片段。
55. 權利要求54的方法，其中所述抗體為單克隆抗體。
56. 權利要求54或權利要求55的方法，其中所述抗體為人源化 抗體。
57. 權利要求54或權利要求55的方法，其中所述抗體為人抗體。
58. 權利要求54-57中任一項的方法，其中所述抗體具有k型(k)輕鏈。
59. 權利要求54-58中任一項的方法，其中所述抗體選自扎木單 抗、凱利昔單抗、克立昔單抗、TNX/355、 TRX/1、 K)T4a、普立昔單 抗和4162W94。
60. 權利要求59的方法，其中所述抗體為扎木單抗。
61. 權利要求36-60中任一項的方法，其中所述輻射治療選自補 骨脂素與長波紫外線輻射(PUVA)、 UVB、窄譜UVB、高劑量UVA、 電子束和x射線。
62. 權利要求61的方法，其中所述輻射治療為補骨脂素與長波紫 外線輻射(PUVA),其中補骨脂素化合物在UVA治療之前施用。
63. 權利要求62的方法，其中所述補骨脂素化合物具有以下通式<formula>formula see original document page 7</formula>或<formula>formula see original document page 7</formula>其中R、R2、 R3、 R4、 RV和Rs獨立地選自氫、鹵素、C(!-K))-烷 基和用由素、胺或羥基取代的C(wo)-烷基，以及任選地用羥基取代的 C(w。)醚；或者R和R5 —起形成吡啶并。
64.權利要求36-63中任一項的方法，其中所述補骨脂素化合物 選自吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、7-甲基吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、5-甲氧 基補骨脂素、8-曱氧基補骨脂素、4，5',8-三甲基補骨脂素、4-甲基補骨 脂素、4,4-二曱基補骨脂素、4-5'-二曱基補骨脂素、4',8-甲氧基補骨脂 素、4'-(co-M-2-氧雜)烷基-4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-(4-#^-2-氧雜)-丁基-4，5'，8-三曱基補骨脂素、4'-氯甲基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-氨 基-甲基_4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-(2-羥基乙氧基)-曱基-4,5'，8-三曱基-補骨脂素、4'-(6-羥基己氧基)-曱基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-羥曱基 -4，5',8-三甲基補骨脂素、5-甲基-白芷素和2H-呋喃并[2,3-h][l]苯并吡 喃-2誦酮。
65. 權利要求64的方法，其中所述補骨脂素化合物為5-甲氧基 補骨脂素或8-甲氧基補骨脂素。
66. 權利要求62-65中任一項的方法，其中所述補骨脂素化合物 在輻射治療前的5-0.5小時的時間段內給予。
67. 權利要求66的方法，其中所述補骨脂素化合物在輻射治療前 的2-1小時的時間段內給予。
68. 權利要求36-67中任一項的方法，其中所述CD4結合肽通過 靜脈內、皮下或肌內注射給予。
69. 權利要求36-68中任一項的方法，其中所述CD4結合肽在輻 射治療前給予至少一次。
70. 權利要求36-69中任一項的方法，其中所述CD4結合肽每周 給予一次。
71. 權利要求36-70中任一項的方法，其中所述患者以每周1-5 次的范圍進行輻射治療。
72. 權利要求36-71中任一項的方法，其中至少一種CD4結合肽 治療和至少 一種輻射治療在同 一周內給予。
73. 權利要求36-72中任一項的方法，其中所述CD4結合肽治療 和輻射治療在4-30周的時間段內給予。
74. 權利要求73的方法，其中所述CD4結合肽治療和輻射治療 在8-16周的時間段內給予。
75. 權利要求74的方法，其中所述CD4結合肽治療和輻射治療 在12周的時間段內給予。
76. 權利要求36-76中任一項的方法，其中所述輻射治療局部給 予或給予至全皮膚。
77. 權利要求36-76中任一項的方法，其中所述輻射治療給予至體外血液。
78. 權利要求77的方法，其中所述輻射治療為光分離置換法。
79. —種藥盒組件，所述藥盒組件包含CD4結合肽和補骨脂素化 合物連同一種或多種藥學上可接受的賦形劑，所述藥盒組件用作藥 物。
80. —種藥盒組件，所述藥盒組件包含CD4結合肽和補骨脂素化 合物連同一種或多種藥學上可接受的賦形劑，所述藥盒組件用作治療 惡性疾病的藥物。
81. —種藥盒組件，所述藥盒組件包含能夠結合CD4的CD4結 合肽和補骨脂素化合物連同一種或多種藥學上可接受的賦形劑，所述 藥盒組件用作與輻射治療組合治療惡性疾病的藥物。
82. 權利要求80或81的藥盒組件，其中所述惡性疾病選自白血 病和'淋巴瘤。
83. 權利要求80-82中任一項的用途，其中所述惡性疾病為T-細 胞前'淋巴細胞性白血病。
84. 權利要求80-82中任一項的用途，其中所述惡性疾病選自 CD4+皮膚T細胞淋巴瘤。
85. 權利要求84的用途，其中所述惡性疾病選自蕈樣肉芽腫病、 賽謝綜合征、淋巴瘤樣丘滲病和間變性大細胞淋巴瘤。
86. 權利要求80-82中任一項的用途，其中所述惡性疾病選自 CD4+結節性T細胞淋巴瘤。
87. 權利要求86的用途，其中所述惡性疾病選自外周T細胞淋 巴瘤、血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤和間變性大T細胞淋巴瘤。
88. 權利要求80-87中任一項的用途，其中所述惡性疾病是至少 一種其它治療方法難以治療的。
89. —種藥盒組件，所述藥盒組件包含CD4結合肽和補骨脂素化 合物連同 一種或多種藥學上可接受的賦形劑，所述藥盒組件用作治療 炎性皮月夫病的藥物。
90. —種藥盒組件，所述藥盒組件包含CD4結合肽和補骨脂素化 合物連同一種或多種藥學上可接受的賦形劑，所述藥盒組件用作與輻 射治療組合治療炎性皮膚病的藥物。
91. 權利要求89或權利要求90的用途，其中所述炎性皮膚病選 自銀屑病、皮炎濕滲、特應性皮炎、硬皮病、扁平苔蘚和斑殼。
92. 權利要求89-91中任一項的用途，其中所述炎性皮膚病是至 少 一 種其它治療方法難以治療的。
93. —種藥盒組件，所述藥盒組件包含CD4結合肽和補骨脂素化 合物連同一種或多種藥學上可接受的賦形劑，所述藥盒組件用作調節 輻射治療的藥物以治療臨床疾病。
94. 權利要求79-93中任一項的藥盒組件，其中所述補骨脂素化 合物以治療有效量存在。
95. 權利要求79-94中任一項的藥盒組件，其中所述CD4結合肽 以治療有效量存在。
96. 權利要求79-95中任一項的藥盒組件，其中所述CD4結合肽 能夠結合人CD4。
97. 權利要求79-96中任一項的藥盒組件，其中所述CD4結合肽 使用哺乳動物細胞培養物生產。
98. 權利要求79-97中任一項的藥盒組件，其中所述CD4結合肽 能夠活化p56^激酶。
99. 權利要求98的藥盒組件，其中p56^激酶的活化增加至少一 種抑制性銜接分子Dok-l和/或SfflP-l的磷酸化。
100. 權利要求79-99中任一項的藥盒組件，其中所述CD4結合 肽選自在結合至CD4陽性細胞時能夠活化天然殺傷細胞的CD4結合 肽。
101. 權利要求100的藥盒組件，其中所述藥盒中的CD4結合肽 在結合至CD4陽性細胞時能夠結合天然殺傷細胞上的CD16,由此活 化天然殺傷細胞。
102. 權利要求79-101中任一項的藥盒組件，其中所述CD4結合 肽為抗CD4抗體或其CD4結合片段。
103. 權利要求102的藥盒組件，其中所述抗體為單克隆抗體。
104. 權利要求102或權利要求103的藥盒組件，其中所述抗體為 人源化抗體。
105. 權利要求102或權利要求103的藥盒組件，其中所述抗體為 人抗體。
106. 權利要求102-105中任一項的藥盒組件，其中所述抗體具有 K型0c)輕鏈。
107. 權利要求102-106中任一項的藥盒組件，其中所述抗體選自 扎木單抗、凱利昔單抗、克立昔單抗、TNX/355、 TRX/1、 10T4a、普 立昔單抗和4162W94。
108. 權利要求106的藥盒組件，其中所述抗體為扎木單抗。
109. 權利要求79-108中任一項的藥盒組件，其中所述補骨脂素 化合物具有以下通式其中Ri、 R2、 R3、 R4、 RV和R5獨立地選自氫、鹵素、C(wo)-烷 基和用卣素、胺或羥基取代的C(wo)-烷基，以及任選地用羥基取代的 Cn—iQ)醚；或者R！和R5 —起形成吡咬并。
110. 權利要求79-109中任一項的藥盒組件，其中所述補骨脂素 化合物選自吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、7-甲基吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、 5-曱氧基補骨脂素、8-甲l^補骨脂素、4,5',8-三甲基補骨脂素、4-甲 基補骨脂素、4,4-二甲基補骨脂素、4-5'-二曱基補骨脂素、4',8-甲氧基 補骨脂素、4'-((D-氨基-2-氧雜)烷基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-(4-M -2-氧雜)-丁基-4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-氯曱基-4,5',8-三曱基補骨脂 素、4'-氨基-甲基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-(2-羥基乙氧基)-甲基-4,5',8-三甲基-補骨脂素、4'-(6-羥基己氧基)-曱基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-羥甲基-4，5'，8-三甲基補骨脂素、5-甲基-白芷素和2H-呋喃并[2,3-h][1] 苯并吡喃-2-酮。
111. 權利要求110的藥盒組件，其中所述補骨脂素化合物為5-甲氧基補骨脂素或8-甲氧基補骨脂素。
112. 權利要求79-111中任一項的藥盒組件，其中所述藥盒組件 配制為單位劑型，其中每單位劑量的CD4結合肽為在20 mg至2000 mg范圍內的肽。
113. 權利要求79-112中任一項的藥盒組件，其中所述藥盒組件 配制為單位劑型，其中每單位劑量的補骨脂素為在10mg至50mg范 圍內的補骨脂素化合物。
114. 權利要求79-113中任一項的藥盒組件，其中所述CD4結合 肽處于適合于胃腸外給予的制劑中。
115. 權利要求79-114中任一項的藥盒組件，其中所述CD4結合 肽坤皮配制為溶液或適合于制備懸浮液或溶液的粉末。
116. 權利要求79-115中任一項的藥盒組件，其中所述補骨脂素 化合物處于適合于口服或局部給予的制劑中。
117. 權利要求79-116中任一項的藥盒，其中所述補骨脂素化合 物被配制為選自片劑、膠嚢劑、乳劑、洗劑或軟膏劑的形式。
118. —種CD4結合肽，所述CD4結合肽用于在接受或將接受輻 射治療的個體中治療惡性疾病或炎性皮膚病。
119. 一種CD4結合肽，所述CD4結合肽與輻射治療組合用于治 療惡性疾病或炎性皮膚病。
120. —種CD4結合肽，所述CD4結合肽用于調節臨床疾病的輻 射治療。
121. 權利要求118-120中任一項的CD4結合肽，其中所述CD4 結合肽能夠結合人CD4。
122. 權利要求118-121中任一項的CD4結合肽，其中所述CD4 結合肽使用哺乳動物細胞培養物生產。
123. 權利要求118-122中任一項的CD4結合肽，其中所述CD4 結合肽能夠活化p56欣激酶。
124. 權利要求123的CD4結合肽，其中p56kk激酶的活化增加 至少一種抑制性銜4妻分子Dok-l和/或SHIP-1的磷酸化。
125. 權利要求118-123中任一項的CD4結合肽，其中所述CD4 結合肽選自在結合至CD4陽性細胞時能夠活化天然殺傷細胞的CD4 結合肽。
126. 權利要求125的用途，其中所述CD4結合肽在結合至CD4 陽性細胞時能夠結合天然殺傷細胞上的CD16,并由此活化天然殺傷 細胞。
127. 權利要求118-126中任一項的CD4結合肽，其中所述CD4 結合肽為抗CD4抗體或其CD4結合片段。
128. 權利要求127的CD4結合肽，其中所述抗體為單克隆抗體。
129. 權利要求127或權利要求128的用途，其中所述抗體為人源 化抗體。
130. 權利要求127或權利要求128的CD4結合肽，其中所述抗 體為人抗體。
131. 權利要求127-130中任一項的CD4結合肽，其中所述抗體具有K型(K)輕鏈。
132. 權利要求127-131中任一項的CD4結合肽，其中所述抗體選自扎木單抗、凱利昔單抗、克立昔單抗、TNX/355、 TRX/1、 10T4a、 普立昔單抗和4162W94。
133. 權利要求132的CD4結合肽，其中所迷抗體為扎木單抗。
134. 權利要求127-133中任一項的CD4結合肽，其中所述輻射 治療選自補骨脂素化合物與長波紫外線輻射(PUVA)、 UVB、窄譜 UVB、高劑量UVA、電子束和x射線的施用組合。
135. 權利要求134的CD4結合肽，其中所述輻射治療為補骨脂 素化合物與長波紫外線輻射(PUVA)的施用組合。
136. 權利要求135的CD4結合肽，其中所迷補骨脂素化合物具 有以下通式其中Rh R2、 R3、 R4、 RV和Rs獨立地選自氫、鹵素、C(wo)-烷 基和用囟素、胺或羥基取代的C(wo)-烷基，以及任選地用羥基取代的 C(wo)醚；或者R！和R5 —起形成吡啶并。
137.權利要求127-136中任一項的CD4結合肽，其中所述補骨 脂素化合物選自吡啶并-[3,4-c]補骨脂素、7-甲基吡啶并-[3,4-c]補骨脂 素、5-曱氧基補骨脂素、8-甲氧基補骨脂素、4,5',8-三曱基補骨脂素、 4-甲基補骨脂素、4,4-二甲基補骨脂素、4-5'-二曱基補骨脂素、4',8-曱 氧基補骨脂素、4'-((D-氨基-2-氧雜)烷基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-(4-氨基-2-氧雜)-丁基-4,5',8-三甲基補骨脂素、4'-氯甲基-4,5',8-三曱基補 骨脂素、4'-M-甲基-4,5',8-三曱基補骨脂素、4'-(2-羥基乙氧基)-曱基 國4,5'，8-三曱基-補骨脂素、4'-(6-羥基己氧基)-甲基-4，5',8-三甲基補骨脂 素、4'-羥甲基-4,5',8-三甲基補骨脂素、5-甲基-白芷素和2H-呋喃并 [2,3-h][l]苯并吡喃-2-酮。
138.權利要求137的CD4結合肽，其中所述補骨脂素化合物為 5-甲氧基補骨脂素或8-曱氧基補骨脂素。
全文摘要
本發明涉及能夠結合CD4的肽，例如抗體，及其調節臨床疾病的輻射治療的用途。輻射治療例如可通過用PUVA治療。
文檔編號A61P17/00GK101287493SQ200680038287
公開日2008年10月15日 申請日期2006年8月18日 優先權日2005年8月18日
發明者D·亞歷山大, O·巴德斯加德, P·帕倫 申請人:根馬布股份公司