專利名稱：：單劑量cd20特異性結合分子的用途的制作方法單劑量CD20特異性結合分子的用途本發明提供使用單劑量CD20特異性結合分子來治療涉及異常B細胞活性的疾病的材料和方法。發明背景人體免疫系統的通常作用是保護機體免受外來物質和病原體的損害。免疫系統保護機體的一種方式是通過產生稱為B淋巴細胞或B細胞的特化細胞。B細胞產生抗體，抗體與外來物質或病原體結合并在某些情況下介導對外來物質或病原體的破壞。在某些情況下，人體免疫系統、尤其是人體免疫系統B淋巴細胞出錯，就會生病。多種癌癥都涉及不受控制的B細胞增殖。還有多種自身免疫性疾病也涉及B細胞產生的抗體，這些抗體并不是與外來物質和病原體結合，而是與機體部分結合。另外，還有多種自身免疫性和炎性疾病在其病理過程中涉及B細胞，例如通過將不適當的B細胞抗原呈遞給T細胞或通過涉及B細胞的其它途徑。例如，易患自身免疫性疾病的B細胞缺陷型小鼠就不會患上自身免疫性腎病、脈管炎或產生自身抗體。(Shlomchik等，J￡xp.Medl994，180:1295-306)。有趣的是，當進行實驗性誘發時，同樣的易患自身免疫性疾病、但具有B細胞而在產生免疫球蛋白方面有缺陷的小鼠卻會患上自身免疫性疾病(Chan等，JEx;.1999,189:1639-48),這表明B細胞在自身免疫性疾病發生方面扮演的角色整本不可或缺。抗CD20單克隆抗體影響B細胞的活力和生長。(Clark等，/Voc.Wa//.爿c^/.5W.L/"&41986,83:4494-98)。CD20的廣泛交聯可引起B淋巴瘤細胞系的細胞凋亡(Shan等，1998,91:1644-52)，已經報道CD20與細胞表面的交聯可增加信號轉導的數量并增強信號轉導的動力學，正如測定細胞底物的酪氨酸磷酸化所檢測的那樣。(Deans等，J/mw""o/.1993，146:846-53)。因此，除了因補體和ADCC機制所致的細胞耗竭(cellulardepletion)之外，Fc-受體與CD20單克隆抗體在體內結合也可通過CD20交聯而促使惡性B細胞凋亡，這與以下理論是一致的在SCID小鼠模型中對人淋巴瘤的CD20治療有效性取決于Fc-受體與CD20單克隆抗體的結合(Funakoshi等，J!/ww2w"o//zera/^1996,19:93-101)。CD20多肽中多個跨膜結構域的存在(Einfeld等，￡MB(91988,7:711-17;Stamenkovic等，■/她d1988，167:1975-80;Tedder等，/ww"wo/.1988，141:4388-4394)，在抗體結合后阻止CD20內化，這被認為是B細胞惡性肺瘤治療的重要特征，當將鼠CD20單克隆抗體1F5注射到患有B細胞淋巴瘤的患者時，導致惡性細胞的顯著耗竭并導致部分臨床反應(Press等，祝ood1987，69:584-91)。因為正常成熟B細胞也表達CD20，所以正常B細胞因抗CD20抗體治療而耗竭(Reff等，1994,83:435-445)。然而，在治療完成之后，正常B細胞可從CD20陰性B細胞前體中再生；因此，用抗CD20治療的患者不會經受明顯的免疫抑制。CD20由B細胞來源的惡性細胞表達，包括B細胞淋巴瘤和慢性淋巴細胞性白血病(CLL)。前B細胞惡性腫瘤(例如急性成淋巴細胞性白血病)不表達CD20。因此，CD20是治療B細胞淋巴瘤、CLL和病因涉及B細胞的其它疾病的良好靶標。其它B細胞障礙包括自身免疫性疾病，其中自身抗體是在B細胞分化成漿細胞時產生的。各研究小組已經研究了抗CD20抗體治療B細胞相關疾病的用途。一種治療包括用于治療B細胞淋巴瘤的、以放射性核素形式制備的抗CD20抗體(例如1311-標記的抗CD20抗體)，以及用于減輕因前列腺癌和乳癌轉移所致骨痛的"Sr-標記形式的抗CD20抗體(Endo,7b《agaAwi^o/zo1999,26:744-748)。涉及CD20抗體的專利和專利公布說明書包括美國專利號5,776,456、5,736,137、6,399,061和5，843，439，以及美國專利申請號US2002/0197255A1和US2003/0021781A1(Anderson等)；美國專利號6，455,043B1和WO00/09160(Grillo-Lopez,A.);WO00/27428(Grillo-Lopez和White);WO00/27433(Grillo-Lopez和Leonard);WO00/44788(Braslawsky等)；WO01/10462(Rastetter,W.);WO01/10461(Rastetter和White);WO01/10460(White和Grillo-Lopez);美國申請號US2002/0006404和WO02/04021(Hanna和Hariharan);美國申請號US2002/0012665Al和WO01/74388(Hanna，N.);美國申請號US2002/0009444A1和WO01/80884(Grillo-Lopez，A.);WO01/97858(White,C.);美國申請號US2002/0128488A1和WO02/34790(Reff,M.);WO02/060955(Braslawsky等)；WO02/096948(Braslawsky等)；WO02/079255(Reff和Davies);美國專利號6,171,586B1和WO98/56418(Lam等)；WO98/58964(Raju,S.);WO99/22764(Raju,S.);WO99/51642、美國專利號6，194，551B1、美國專利號6,242，195B1、美國專利號6，528,624B1和美國專利號6,538,124(Idusogie等)；WO00/42072(Presta，L,);WO00/67796(Curd等)；WO01/03734(Grillo-Lopez等)；美國申請號US2002/0004587A1和WO01/77342(Miller和Presta);美國申請號US2002/0197256(Grewal，I.);美國專利號6，090,365B1、6,287,537B1、6,015,542、5,843,398和5,595,721(Kaminski等)；美國專利號5，500，362、5，677，180、5，721，108和6,120,767(Robinson等)；美國專利號6,410,391B1(Raubitschek等)；美國專利號6，224,866B1和WO00/20864(Barbera-Guillem,E.);WO01/13945(Barbera-Guillem,E.);WO00/67795(Goldenberg);WO00〃4718(Goldenberg和Hansen);WO00A76542(Golay等)；WO01/72333(Wolin和Rosenblatt);美國專利號6，368，596B1(Ghetie等)；美國申請號US2002/0041847A1,(Goldenberg，D.);美國申請號US2003/0026801A1(Weiner和Hartmann);WO02/102312(Engleman,E.),另見美國專利號5，849，898和EP申請號330,191(Seed等)；美國專利號4,861,579和EP332,865A2(Meyer和Weiss);和WO95/03770(Bhat等)，所述各文獻通過引用結合到本文中。據報道，對CD20具有特異性的嵌合單克隆抗體(由來自小鼠的重鏈可變區和輕鏈可變區與人IgG1重鏈和人K輕鏈恒定區融合而成)保留對CD20的結合力以及介導ADCC和結合補體的能力(Liu等，//mw柳o/.1987，139:3521-26)。而另一嵌合抗CD20抗體由IDEC雜交瘤C2B8制得，稱為利妥昔單抗。認為上述利妥昔單抗的抗腫瘤活性機制由若干活性組成，包括抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)、補體結合和觸發促進惡性B細胞凋亡的信號。ADCC是細胞介導的反應，其中表達Fc受體(FcR)的非特異性細胞毒細胞(例如自然殺傷(NK)細胞、嗜中性粒細胞和巨噬細胞)識別靶細胞上的結合抗體并隨之引起靶細胞溶解。補體結合即補體依賴性細胞毒性(CDC)是在補體存在下的分子溶解靶標的能力。通過補體系統第一成分(Clq)與同相關抗原締合的分子(例如抗體)結合，而啟動補體活化途徑。利妥昔單抗的大尺寸阻止分子向含有惡性B細胞的淋巴組織的最佳擴散，因而限制了這些抗腫瘤活性。抗CD20抗體也已廣泛用于治療與B細胞產生自身抗體相關的自身免疫性疾病患者。例如，在包括RA在內的多發性自身免疫性/炎性疾病患者中，已經證明利妥昔單抗在耗竭CD20+B細胞中的顯著臨床益處(Edwards,iV/MW.2004,350:2546-8;Cambridge等，^W/zn'他A/7ewm.2003，48:2146-54)。RA患者接受連續劑量的曱氨蝶呤(MTX)和2劑量療程的利妥昔單抗輸注(Edwards等，出處同上)。與對照組相比，這些患者表現出美國風濕病學學會(AmericanCollegeofRheumatology，ACR)反應的改善。在系統性紅斑狼瘡(SLE)的治療試驗(Leandro等，爿W/zn'^i/zewm.2002，46:2673-7)中，給患者兩次輸注高劑量利妥昔單抗，表現出B細胞耗竭并改善疾病狀態。在SLE中進行的B細胞耗竭的第二次研究中(L00ney等，JW^/toi/zewm.2004,50:2580-9),給患者單次輸注100mg/m"低劑量)、單次輸注375mg/m2(中等劑量)或4次輸注(間隔1周)375mg/m2(高劑量)。這些患者表現出B細胞耗竭并改善疾病評分，但是治療并未改變自身抗體水平。也已經在瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥(Waldenstrom，smacroglobulinemia)中進行了利妥昔單抗試驗(Treon等，/mm，oAer.2001,24:272-9),其中在4次輸注利妥昔單抗后，患者的血細胞比容(HCT)和血小板(PLT)計數增加。用利妥昔單抗治療多發性硬化(multiplescleorosis，一種影響中樞神經系統的自身免疫性疾病)患者的近期報告表明，利妥昔單抗治療過程耗竭了外周B細胞，但對腦脊液的B細胞卻幾乎沒有影響(Monson等，爿rc/z7Vewra/.2005，62:258-64)。有關利妥昔單抗用途的其它出版物包括Stashi等"Rituximabchimericanti-CD20monoclonalantibodytreatmnetforadultswithchronicidiopathicthrombocytopenicpurpura(利妥昔單4元嵌合4元CD20單抗治療成人慢性特發性血小板減少性紫瘕)"2001,98:952-957;Matthews,R."MedicalHeretics"iVew5We油W(2001年4月7日》Leandro等"Clinicaloutcomein22patientswithrheumatoidarthritistreatedwithBlymphocytedepletion(22例類風濕性關節炎患者用B淋巴細胞耗竭治療的臨床結果)"i/2ewm2002,61:833-888;Leandro等"Lymphocytedepletioninrheumatoidarthritis:earlyevidenceforsafety,efficacyanddoseresponse(類風濕性關節炎中的淋巴細胞耗竭安全性、功效和劑量反應的早期證據).JW/zn'toi/2ewma/^m2001,44:S370;Leandro等"AnopenstudyofBlymphocytedepletioninsystemiclupuserythematosus(系統性紅王汪《良癡中B淋巴細胞耗竭的開方欠性研究)"，JW/zn'fei^ewm.2002，46:2673-2677;Edwards等,"SustainedimprovementinrheumatoidarthritisfollowingaprotocoldesignedtodepleteBlymphocyte(在接受用于耗竭B淋巴細胞的方案后類風濕性關節炎的持續改善)"臉w畫油gy2001，40:205-211;Edwards等"B陽lymphocytedepletion性關節炎和其它自身免疫病中進行B-淋巴細胞耗竭治療)"所oc/ze肌5bc.7>ww.2002,30:824-828;Edwards等"EfficacyandsafetyofRituximab,aB-celltargetedchimericmonoclonalantibody:Arandomized,placebocontrolledtrialinpatientswithrheumatoidarthritis(利妥昔單抗，一種靶向B細胞的嵌合單克隆抗體的功效和安全性對類風濕性關節炎患者的隨^U安慰劑對照試-驗).JW/Wtoi/zewm.2002,46:SI97;Levine等,"IgMantibody-relatedpolyneuropathies:B-celldepletionchemotherapyusingRituximab(IgM抗體相關的多神經病用利妥昔單抗進行B細胞耗竭化學治療)"A^wra/ogy1999，52:1701-1704;DeVita等"EfficacyofselectiveB-cellblockadeinthetreatmentofrheumatoidarthritis(選擇性B細胞阻滯劑對治療類風濕性關節炎的功效)"如/2".船版訓.2002,46:2029-2033;Hidashida等"TreatmentofDMARD-RefractoryrheumatoidarthritiswithRituximab(用利妥昔單抗治療DMARD-難治性類風濕性關節炎)."PresentedattheAnnualScientificMeetingoftheAmericanCollegeofRheumatology;October24-29;NewOrleans,La.2002;Tuscano，J."Successfultreatmentofinfliximab-refractoryrheumatoidarthritiswithRituximab(用利妥昔單抗成功治療英夫利昔單抗難治性類風濕性關節炎)"PresentedattheAnnualScientificMeetingoftheAmericanCollegeofRheumatology;October24-29;NewOrleans,La.2002。最近已構建了較小的免疫球蛋白分子，以克服用完整免疫球蛋白治療的相關問題。單鏈Fv(scFv)包括通過短接頭肽與抗體輕鏈可變區連接的抗體重鏈可變區(Huston等，/Voc.Mrf/.JcadSc/.1988，85:5879-83)。除了可變區之外，各抗體鏈還具有一個或多個恒定區。輕鏈具有單個恒定區結構域。因此，輕鏈具有一個可變區和一個恒定區。重鏈具有幾個恒定區結構域。IgG、IgA和IgD的抗體重鏈具有3個恒定區結構域(稱為CH1、CH2和CH3)，而IgM和IgE的抗體重鏈具有4個恒定區結構域(CH1、CH2、CH3和CH4)。因此，重鏈具有一個可變區和三個或四個恒定區。免疫球蛋白的重鏈也可分為3個功能區Fd區(包含Vh和CHI的片段，即重鏈的2個N-端結構域)、鉸鏈區和Fc區("可結晶片段"區，來自恒定區，在胃蛋白酶消化后形成)。Fd區與輕鏈一起構成Fab("抗原結合片段")。因為抗原與抗原結合區在各Fab的氨基端產生立體化學反應，所以IgG分子是二價的，即可與兩個抗原分子結合。Fc含有與細胞上的免疫球蛋白受體相互作用并且與補體級聯起始元件相互作用的結構域。因此，通常認為Fc片段負責免疫球蛋白的效應子功能，例如補體結合和與Fc受體結合。0021]因為scFv分子體積小，所以它們乂人血漿和組織中清除得非常快，并且比完整免疫球蛋白能更有效地穿透進入到組織中。與相應的嵌合抗體相比，抗腫瘤scFv表現出更快的腫瘤穿透性和更均勻地在瘤體內分布(Yokota等，Ca"ceri仏1992，52:3402-08)。將scFv與其它分子(例如毒素)融合，利用特異性抗原結合活性和scFv的小體積，將毒素遞送到靶組織。(Chaudary等，A^we1989,339:394);Batra等，Mo/.Ce〃.歷o/.1991,11:2200)。盡管scFv分子在血清療法上具有優勢，但是該治療方法也存在若干缺點。盡管scFv的快速清除可減少對正常細胞的毒性效應，但是這樣快速清除也會妨礙將最低有效量遞送到靶組織。制備足夠量的scFv以給予患者，一直都是個挑戰，因為scFv難以表達和分離，對收率有不利影響。在表達期間，scFv分子缺乏穩定性，通常會因不同分子的可變區配對而聚集。此外，在哺乳動物表達系統中scFv分子的產生水平低下，限制了有效制備scFv分子用于治療的潛力(Davis等，Ozem.1990，265:10410-18);Traunecker等，￡MBO/1991,10:3655-59)。一直在研究改進生產的策略，包括給可變區添加糖基化位點(Jost，C.R.美國專利號5，888，773,Jost等，JC/zem.1994,69:26267-73)。采用scFv進行治療的另一缺點是缺乏效應子功能。與免疫球蛋白恒定區締合的、沒有細胞溶解功能、ADCC和補體依賴性細胞毒性(CDC)的scFv對治療疾病而言是無效的。雖然對scFv技術的開發早在12年前就開始進行，但是目前仍然沒有批準scFv產品用于治療。其它的工程融合蛋白，稱為小模塊免疫藥物(small，modularimmunopharmaceutical,SMIPTM)產品，參見共同擁有的美國專利公布說明書2003/133939、2003/0118592和2005/0136049以及共同擁有的國際專利公布說明書WO02/056910、WO2005/037989和WO2005/017148,這些文獻都通過引用結合到本文中。SMIP產品是新型結合結構域-免疫球蛋白融合蛋白，其特征是針對例如以下相關結構的結合結構域抗原、反受體等；野生型IgGl、IgA或IgE鉸鏈區多肽或突變型IgGl鉸鏈區多肽(具有0、l或2個半胱氨酸殘基)；和免疫球蛋白CH2區和CH3區。SMIP產品具有ADCC和/或CDC能力。盡管對基于抗體的療法進行了深入研究，但是在所屬領域仍然需要改進的方法，以治療異常B細胞活性相關疾病。本發明所述和-發明概述—方面，本發明提供用于治療患有或疑似患有異常B細胞活性相關疾病的患者的方法，所述方法包括給予患者單劑量的治療有效量的CD20特異性結合分子。在一個實施方案中，CD20特異性結合分子是CD20特異性小模塊免疫藥物(SMIP)。"異常B細胞活性"是指偏離正常、適當或預期進程的細胞活性。例如，異常細胞活性可包括不適當的細胞增殖，其中DNA或其它細胞組分已經有損傷或者有缺陷。異常B細胞活性可包括細胞增殖，其特征是與以下疾病相關由不適當的高水平細胞分裂、不適當的低水平細胞凋亡或這兩者同時引起的、介導的疾病，或者能導致不適當的高水平細胞分裂、不適當的低水平細胞凋亡或這兩者的疾病。這類疾病的特征是例如通過細胞、細胞群體或組織的單次或多次局部異常增殖，無論是癌性細胞還是非癌性細胞，良性細胞還是惡性細胞，詳見下文。異常B細胞活性也可包括產生異常抗體(例如產生自身抗體)或過量產生通常希望以正常水平產生的抗體。它還包括異常B細胞活性可發生在某些B細胞亞群內而不發生在其它亞群。異常B細胞活性也可包括對T細胞的不適當刺激，例如通過不適當的B細胞抗原呈遞給T細胞或通過涉及B細胞的其它途徑。CD20特異性結合分子的"單劑量"是指在治療開始給予單次連續輸注一個劑量的CD20特異性SMIP，而不是需要每周一次或兩周一次給予CD20特異性結合分子的多劑量治療。在一個實施方案中，單次連續輸注可以是長時間的皮下輸注、靜脈內輸注等。可以在一段時間內給予單次連續輸注，例如從約15分鐘至約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小時、約8小時、約9小時、約10小時、約11小時、約12小時、約24小時，或者一天或多天或一周或多周(例如從植入裝置或凝膠緩釋型制劑中持續釋放)。單劑量可以與其它治療藥或第二藥物聯合用藥，可以在給予本文所述的第二治療藥的同時、之前或之后給予。按照本發明，單次連續輸注可包括視實際情況按需要短時中斷輸注。—方面，與用利妥昔單抗而沒用其它CD20結合分子治療的反應相比，用本發明方法治療的個體表現出對用本文所述CD20結合分子治療的改善反應更好。與用利妥昔單抗而沒用其它CD20結合分子治療相比有所改善的反應，是指這樣的臨床反應其中用本發明方法對患者進行治療導致臨床反應，比接受利妥昔單抗治療(例如利妥昔單抗單用或利妥昔單抗與其它藥物聯用，其中其它藥物不是其它CD20結合分子)的患者的臨床反應更好。通過比較本領域眾所周知的和本文所述的臨床標準來評價改進反應。示例性的標準包括但不限于B細胞耗竭持續時間，B細胞總數減少、生物樣品中B細胞凄史量減少，腫瘤大小縮小，現有腫瘤數量和/或治療后出現的腫瘤的數量減少，以及患者本人和醫生評價的改善的總體反應，例如采用國際預后指數(InternationalPrognosticIndex)。可能在一項或多項臨床標準上發生改善。用本發明方法的改善反應可能因為對先前或目前使用利妥昔單抗的治療的不適當反應，例如因為毒性和/或不適當的利妥昔單抗治療功效。在相關方面，用本發明方法治療的個體也接受利妥昔單抗。在一個實施方案中，可以作為一線治療和持續治療給予利妥昔單抗，當開始用本發明方法進行治療時。在另一個實施方案中，在用本發明方法開始治療后，停止給予利妥昔單抗治療。"患有或疑似患有風濕病的患者"是受累于關節或肌骨骼系統(這類受累區例如關節、軟骨、肌肉、神經和腱等區域)的疾病或障礙的患者或個體。還包括患有或疑似患有風濕病的患者可預先接受針對風濕病的治療。在一個實施方案中，風濕病包括但不限于類風濕性關節炎、關節強硬性脊推炎、皮肌炎、亨諾赫-舍恩萊因紫癜(Henoch-Schonleinpurpura)、青少年類風濕性關節炎、銀屑病性關節炎、雷i若綜合4正(Raynaud，ssyndrome)、賴特綜合4正(Reiter，ssyndrome)、結節病、脊推關節病、進行性系統性硬化病和肌病。"患有或#是似患有中樞神經系統自身免疫性疾病"或"中樞神經系統障礙的患者"是受累于中樞神經系統(包括腦和脊髓，或者視神經等區域)的疾病或障礙的患者或個體。還包括患有或疑似患有中樞神經系統障礙的患者可預先接受針對中樞神經系統障礙的治療。在一個實施方案中，中樞神經系統自身免疫性疾病包括但不限于多發性硬化、變應性腦脊髓炎、視神經脊髓炎、狼瘡性脊髓炎和狼瘡性腦炎。"治療"是指治療性治療或預防性治療。治療性治療可改善接受治療個體的至少一種疾病癥狀或者可延遲個體的進^f亍性疾病的惡化，或預防額外相關疾病的發作。CD20特異性結合分子的"治療有效劑量"或"有效量"是指化合物足以導致所治療疾病的一種或多種癥狀得到改善的量。當用于單一活性成分，單獨給予時，治療有效劑量是指單一成分。當聯合用藥時，治療有效劑量是指導致療效的活性成分的聯合量，無論是連續聯合用藥還是同時聯合用藥。本發明尤其涵蓋按照本發明方法給予一種或多種CD20特異性結合分子，每種都按有效量給予。本發明所涵蓋的方法適用于治療例如以下疾病B細胞癌(例如B細胞淋巴瘤、B細胞白血病、B細胞淋巴瘤)、以產生自身抗體為特征的疾病或者以不適當T細胞刺激(例如通過不適當的B[(KMO]B細胞癌包括B細胞淋巴瘤[例如霍奇金病(Hodgkin'sdisease)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或中樞神經系統淋巴瘤的各種形式]、白血病[例如急性成淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、毛細胞白血病和'f曼性成肌細性白血病(myoblasticleukemia)]和骨髓瘤(例如多發性骨髓瘤)。其它B細胞癌包括小淋巴細胞性淋巴瘤、B細胞前淋巴細胞性白血病、淋巴漿細胞樣淋巴瘤、脾邊緣帶淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、骨孤立性漿細胞瘤、骨外漿細胞瘤、結外粘膜相關淋巴組織邊緣帶B細胞淋巴瘤(MALT)、結節性邊緣帶B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、彌散性大B細胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkittlymphoma)/白血病、不明原因的可能惡化的惡性B細胞增殖、淋巴瘤樣肉芽肺和移植后淋巴增殖障礙。以產生自身抗體為特征的障礙通常稱為自身免疫性疾病。自身免疫性疾病包括但不限于關節炎、類風濕性關節炎、青少年類風濕性關節炎、骨關節炎、多軟骨炎、銀屑病性關節炎、銀屑病、皮炎、多肌炎/皮肌炎、包含體肌病、炎性肌病、中毒性表皮壞死松解、系統性石更皮病和硬化、CREST綜合征、炎性腸病相關反應、克羅恩病(Crohn'sdisease)、潰瘍性結腸炎、呼吸窘迫綜合征、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、腦膜炎、腦炎、葡萄膜炎、結腸炎、腎小球性腎炎、過壽丈性病癥、濕瘆、哞喘、涉及T細^;浸潤和'lt性炎性反應的病癥、動脈粥樣硬化、自身免疫性心肌炎、白細胞粘附缺陷、系統性紅斑狼瘙(SLE)、亞急性皮膚紅斑狼瘡、盤狀狼瘡、狼瘡性脊髓炎、狼瘡性腦炎、青少年起病型糖尿病、多發性硬化、變應性腦脊髓炎、視神經脊髓炎、風濕熱、西登哈姆舞蹈病(Sydenham'schorea)、由細胞因子和T淋巴細胞介導的急性和遲發型超每丈反應相關的免疫應答、結核病、結節病、包括韋格納肉芽月中病(Wegener'sgranulomatosis)和丘-施病(Churg-Straussdisease)在內的肉芽肺病、粒細胞缺乏癥、脈管炎(包括過敏性脈管炎/血管炎、ANCA和類風濕性脈管炎)、再生障礙性貧血、先天性再生不良性貧血、免疫性溶血性貧血(包括自身免疫性溶血性貧血(AIHA))、惡性貧血、純紅細胞發育不良(PRCA)、Vm因子缺乏癥、A型血友病、自身免疫性嗜中性白細胞減少癥、全血細胞減少癥、白細胞減少癥、白細胞滲出相關疾病、中樞神經系統(CNS)炎性障礙、多器官損傷綜合征、重癥肌無力(mysatheniagravis)、抗原-抗體復合物介導的疾病、抗腎小球基底膜抗體病、抗磷脂抗體綜合征、過敏性神經炎、貝赫切特病(Behcetdisease)、Castleman綜合征、古德帕斯徹綜合^正(Goodpasture'ssyndrome)、蘭-l尹(Lambert-Eaton)月幾無力綜合^正、雷諾綜合征(Reynaud'ssyndrome)、斯耶格倫綜合征(Sjorgen'ssyndrome)、史蒂文斯-約翰遜綜合征、實體器官移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、大皰性類天皰瘡、天皰瘡、自身免疫性多內分泌腺病、血清反應陰性的脊推關節病、賴特病(Reiter，sDisease)、僵體綜合征、巨細胞性動脈炎、免疫復合物性腎炎、IgA腎病、IgM多神經病或IgM介導的神經病、特發性血小板減少性紫瘕(ITP)、血栓形成性血小板減少性紫癥(thromboticthrobocytopenicpurpura,TTP)、亨諾赫-舍恩萊因紫癜、自身免疫性血小板減少、睪丸和卵巢的自身免疫性疾病(包括自身免疫性睪丸炎和卵巢炎)、原發性甲狀腺功能減退癥；自身免疫性內分泌病(包括自身免疫性曱狀腺炎、慢性曱狀腺炎(橋本曱狀腺炎(Hashimoto，sthyroiditis))、亞急性甲狀腺炎、原發性曱狀腺功能減退癥)、艾迪生病(Addison'sdisease)、4各雷夫其斤病(Grave，sdisease)、自身免疫性多腺性綜合征(或多腺性內分泌病綜合征)、I型糖尿病(也稱為胰島素依賴性糖尿病(IDDM))和席漢氏綜合征(Sheehan'ssyndrome);自身免疫性肝炎、淋巴細胞性間質性肺炎(HIV)、閉塞性細支氣管炎(非移植)NSIP、急性熱病性多神經炎(Guillain-Barre'Syndrome)、大血管脈管炎(包括風濕性多肌痛和巨細胞性(Takayasu's)動脈炎)、中等血管脈管炎(包括川崎病和結節性多動脈炎)、結節性多動脈炎(PAN)、關節強硬性脊推炎、貝格爾病(Berger'sdisease,IgA腎病)、快速進行性腎小球性腎炎、原發性膽汁性肝硬化、口炎性腹瀉(谷蛋白腸病)、冷球蛋白血癥、肝炎相關的冷球蛋白血癥、肌萎縮性側索硬化(ALS)、冠狀動脈病、家族性地中海熱、微小多脈管炎、科根綜合征(Cogan，ssyndrome)、Whiskott-Aldrich綜合;f正和血^全閉塞性脈管炎。類風濕性關節炎(RA)是以關節炎癥為特征的慢性病，導致腫脹、疼痛和功能喪失。長期患有RA的患者通常表現出進行性的關節破壞、畸形、致殘，甚至過早死亡。多發性硬化(MS)也是自身免疫性疾病，其特征是中樞神經系統炎癥和髓磷脂的破壞，髓磷脂將大腦、脊髓和機體中的神經細胞纖維隔離開。盡管MS的起因尚不知道，但是普遍認為自身免疫T細胞對該病的發病機制起到主要作用。然而，高水平的抗體存在于MS患者的腦脊液中，某些預測B細胞反應導致抗體產生的理論對介導疾病而言是重要的。克羅恩病及其相關疾病潰瘍性結腸炎是都屬于稱為炎性腸病(IBD)的兩大類疾病。克羅恩病是引起消化道或胃腸道炎癥的慢性疾病。盡管該病可涉及胃腸道中從口腔到肛門的任何部位，但是它最主要還是影響小腸和/或結腸。在潰瘍性結腸炎中，所累及的GI限制在結腸中。克羅恩病的特征是針對嗜中性粒細胞抗原的抗體(即"核周抗嗜中性粒細胞抗體"(pANCA))和針對釀酒酵母(5^cc/^ramyc^cen^&e)的抗體(即"抗釀酒酵母抗體"(ASCA))。許多潰瘍性結腸炎患者血液中都具有pANCA抗體，但是沒有ASCA抗體，而許多克羅恩病患者表現出有ASCA抗體，而沒有pANCA抗體。評價克羅恩病的一種方法是使用克羅恩病活性指數(Crohn，sdiseaseActivityIndex,CDAI)，根據醫生所收集的18個預測變量評分。CDAI值在150以下與靜息疾病有關；數值在150以上表明活動性疾病，而數值超過450則患有非常嚴重疾病(Best等，"DevelopmentofaCrohn'sdiseaseactivityindex."Gastroenterology70:439-444,1976。然而，因為先前的研究，某些研究人員使用'主觀值'為200-250作為健康評分。自身免疫性曱狀腺病是因自身抗體的產生而引起的，自身抗體既可刺激曱狀腺而引起曱狀腺功能亢進(格雷夫斯病(Graves'disease))又能破壞曱狀腺而引起曱狀腺功能減退(橋本曱狀腺炎(Hashimoto'sthyroiditis))。通過自身抗體結合并活化促曱狀腺激素(TSH)受體而引起對甲狀腺的刺激。通過自身抗體與其它曱狀腺抗原反應而？1起對曱狀腺的破壞。斯耶格倫綜合征是特征為產生身體水分的腺體受到破壞的自身免疫性疾病。重癥肌無力(MG)是慢性自身免疫性神經肌肉障礙，其特征是自身抗體與神經肌肉接頭上表達的乙酰膽堿受體結合，導致隨意月幾群(voluntarymusclegroup)弱"f匕。多肌炎和皮肌炎是使人衰弱的慢性炎性疾病，累及肌肉和皮膚(后者是在DM的情況下)。這些疾病極其罕見，據報道在美國的年發病率大約為每百萬成年人5-10例，每百萬兒童0.6-3.2例(Targoff,Cwr/VoW￡^mato/.1991,3:131-180)。原發性炎性月幾病與顯著發病率和致死率有關，注意到高達半數的受累成人會經受明顯的病損(Gottdiener等，」w/Carafe/.1978,41:1141-49)。Miller(i/zeww￡feC7/"iVoM/z爿m.1994，20:811-826和爿W/^'to朋dj///e<iCow顛om，第75章，Koopman禾口Moreland編著，LippincottWilliams和Wilkins，2005)提出5組標準，用于診斷IIM,即原發性炎性肌病標準(Idi叩athicInflammatoryMyopathyCriteria,IIMC)評價，包括月幾肉衰弱、肌肉變性的活檢證據、肌肉相關酶血清水平升高，肌病電》茲三聯征(electromagnetictriadofmyopathy)、皮肌炎中皮滲的證據、以及還包括自身抗體證據作為第二標準。IIM相關因子(包括肌肉相關酶)和自身抗體包括但不限于肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶、醛縮酶、C-反應蛋白、天冬氨S交氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和抗核自身抗體(ANA)、肌炎特異性抗體(MSA)以及針對可提取的核抗原的抗體。本發明的"結合分子"可以是例如與靶標結合的蛋白質("蛋白質"可以是多肽或肽)、核酸、碳水化合物、脂質或小分子化合物。本發明所涵蓋的一類蛋白樣結合分子是抗體或保留結合活性的抗體片段。可以按照本領域標準方法修飾結合分子，以改進其結合親和性，減少其免疫原性，改變其效應子功能和/或改進其在個體體內的利用度。這類修飾可包括例如氨基酸序列修飾或表達為融合蛋白。這類融合蛋白也可以是本發明的結合分子。本發明示例性的結合分子是d、才莫塊免疫藥物(SMIPtm)。比起任何其它靶標而言，對某靶標具有"特異性"的結合分子可以較高親和性與該靶標結合。例如，CD20特異性結合分子與CD20結合的親和性大于與其它靶標結合的親和性。本發明的結合分子對其耙標的親和力Ka大于等于約1(/M"，優選大于等于約105M",更優選大于等于約106M"，還更優選大于等于約107M"。甚至還更優選親和力大于約1(^M"，例如親和力大于等于約107M"，約108M"，約109]^1，約i(rivf1。可采用例如以下文獻所述的常規技術，容易地確定本發明結合分子的親和力Scatchard等，Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660(1949)。在一個實施方案中，CD20特異性結合分子對CD20的親和力范圍為lnM-30nM。在額外方面，CD20特異性結合分子的體內半衰期為7-30天。0058]小模塊免疫藥物(SMIP)的制備方法先前已有描述，參見共同擁有的美國申請號10/627,556和美國專利7>布說明書2003/133939、2003/0118592和2005/0136049，這些文獻都通過5l用全部結合到本文中。SMIP是新型結合結構域-免疫球蛋白融合蛋白，其特征是針對例如以下相關結構的結合結構域抗原、反受體等；IgGl、IgA或IgE鉸鏈區多肽或突變型IgGl鉸鏈區多肽(具有0、1或2個半胱氨酸殘基)；和免疫球蛋白CH2區和CH3區。在一個實施方案中，結合結構域分子具有1個或2個半胱氨酸殘基。在一個相關實施方案中，它涵蓋當結合結構域分子包括2個半胱氨酸殘基時，前一個半胱氨酸(通常在重鏈可變區與輕鏈可變區間參與結合)沒有缺失或被另一氨基酸取代。涵蓋這樣的本發明方法所用的分子的結合結構域其具有1個或多個結合區，例如來自一個或多個免疫^求蛋白超家族成員(例如免疫球蛋白)的輕鏈可變區結合區和重鏈可變區結合區。此外，這些區域通常被接頭肽間隔開，接頭肽可以是本領域已知的與結合分子內的結構域或區連接相容的任何接頭肽。示例性接頭是基于Gly4Ser接頭基序的接頭，例如(Gly4Ser)n，其中n=3-5。本發明方法所用的分子也含有來自免疫球蛋白恒定區的足夠的氨基酸序列，以提供效應子功能，優選ADCC和/或CDC。因此，這些分子具有來自免疫球蛋白CH2區或者來自一個或多個免疫球蛋白的CH2區和CH3區的序列。SMIP具有ADCC和/或CDC能力，但是不具備構成二好J建多聚體的能力。示例性CD20特異性SMIP包括來自抗CD20單克隆抗體2H7的SMIP，參見美國專利公布號2003133939和20030118592。SMIP包括2H7scFv-Ig或其衍生物。衍生物包括CytoxB-MHWTGlC，其具有人IgGlFc區和突變型IgGl鉸鏈區；CytoxB-MHMGlC,其包含突變Fc區；MG1H/MG1C,其包含具有突變亮氨酸殘基234的Fc受體；CytoxB-IgAHWTHGlC,其包含人IgA鉸鏈區與人Fc區融合的部分；2H7scFv-llamaIgGl，其包含llamaIgGl鉸鏈區和CH2CH3區；2H7scFv-llamaIgG2，其包含llamaIgG2鉸鏈區和CH2CH3區；2H7scFv-llamaIgG3,其包含llamaIgG3鉸鏈區和CH2CH3區。2H7scFv-Ig衍生物也包括在鉸鏈區具有點突變的2H7scFv突變體。2H7scFvMTH(SSS)WTCH2CH3,其中在連接區即鉸鏈區內的所有3個半胱氨酸殘基都突變為絲氨酸殘基，和野生型CH2區和CH3區；2H7scFvMTH(SSC)，其中前2個半胱氨酸殘基被絲氨酸殘基取代；2H7scFvMTH(SCS),其中第一個和第三個半胱氨酸4皮絲氨酸殘基取代；2H7scFvMTH(CSS)WTCH2CH3，其中半胱氨酸殘基在第二和第三位置上被絲氨酸取代；2H7scFvVH11SERIgGMTH(SSS)WTCH2CH3，其中重鏈可變區11位的亮氨酸凈皮絲氨酸取代；2H7scFvIgA鉸鏈-IgGlCH2-CH3,其包含IgA鉸鏈區和WTIgGl區；2H7scFvIgA鉸鏈-CH2-CH3，其包含IgA鉸鏈，CH2-CH3區；2H7IgAWHIgACH2-T4CH3，其包含IgA鉸鏈、野生型IgACH2和缺乏4個羧基氨基酸GTCY的截短的IgACH3區。在IgGCH3區內具有突變的衍生物包括2H7scFvMTHWTCH2MTCH3Y405，其中405位的苯丙氨酸殘基(4姿照Kabat等(出處同上)的編號)被酪氨酸取代；2H7scFvMTHWTCH2MTCH3A405,其中405位的苯丙氨酸被丙氨酸取代；scFvMTHWTCH2MTCH3A407，其中407位的酪氨酸殘基被丙氨酸取代；scFvMTHWTCH2MTCH3Y405A407，其包含兩個突變；和scFvMTHWTCH2MTCH3A405A407，其包含兩個突變。2H7scFv-Ig衍生物也包括在重鏈可變區具有點突變的2H7scFv突變體。以下構建體都包含突變，其中重鏈可變區ll位的亮氨酸被絲氨酸取代2H7scFvVH11SERIgGMTH(SSS-S)WTCH2CH3，2H7scFvVHL11S(CSS畫S)HWCH2WCH3，其包含以上已提出的突變4交鏈區；2H7scFvVHLllS(CSC-S)HWCH2WCH3，其包含以上已提出的突變鉸鏈區；2H7scFvVHL11SIgAHIgACH2T4CH3,其包含IgA鉸鏈、WTigACH2和截短IgACH3;2H7scFvVHL11SIgECH2CH3CH4，其包含IgECH2-4區；2H7VHL11SscFv(SSS-S)IgECH3CH4，其包含以上已提出的突變鉸鏈區和IgECH3和CH4區；2H7scFvVHLl1SmlgECH2CH3CH4,其包含小鼠IgE區；2H7scFvVHLlISmlgAHWIGACH2T4CH3,其包含上述突變以及由野生型CH2區和突變型CH3區組成的小鼠IgA恒定區；2H7scFvVHL11S(SSS-S)HK322SCH2WCH3，其包含人IgGlCH2區內殘基322的突變，其中賴氨酸變為絲氨酸；2H7scFvVHL11S(CSS-S)HK322SCH2WCH3，其包含如上所述的突變鉸鏈區和如前所示的突變CH2區；2H7scFvVHL11S(SSS-S)HP331SCH2WCH3,其包含如上所述的突變鉸鏈區和突變CH2區，其中殘基331的脯氨酸變為絲氨酸；2H7scFvVHL11S(CSS-S)HP331SCH2WCH3，其包含突變的4交鏈區和CH2區內殘基331由脯氨酸突變為絲氨酸；2H7scFvVHL11S(SSS-S)HT256NCH2WCH3，其包含突變的鉸鏈區和CH2區內殘基256由蘇氨酸突變為天冬酰胺；2H7scFvVHL11S(SSS-S)HRTPE/QNAK(255-258)CH2WCH3,其包含突變的鉸鏈區和一系列突變，其中殘基255-258由精氨酸、蘇氨酸、脯氨酸、谷氨酸分別突變成谷氨酰胺、天冬酰胺、丙氨酸和賴氨酸；2H7scFvVHLllS(SSS-S)HK290QCH2WCH3,其包含突變的鉸鏈區和290位的賴氨酸變為谷氨酰胺；2H7scFvVHLllS(SSS-S)HA339PCH2WCH3,其包含突變的4交鏈區和339位上的丙氨酸變為脯氨酸。SMIP2H7scFv(SSS畫S)HP238SCH2WCH3,其包含突變的4交鏈區和CH2內238位的脯氨酸變為絲氨酸，這與2H7scFvIgGMTH(SSS)MTCH2WTCH3相同。2H7scFvIgAHIGAHCH2Tl8CH3包含野生型IgA鉸鏈區和CH2區以及在羧基端有18個氨基酸截短的CH3區。考慮到本發明的結合分子可包含天然胞外結構域或來自其它蛋白質以改善結合分子活性的工程胞外結構域。在一個實施方案中，胞外結構域選自CD154和CTLA4。在本發明一方面，以藥物組合物形式給予CD20特異性結合分子。為了將CD20特異性結合分子給予人或試驗動物，優選將結合分子配制在含有一種或多種藥學上可接受載體的組合物中。術語"藥學上或藥理學上可接受的"是指當用如下所述的本領域熟知途徑給藥時，不會產生過敏或其它不良反應的分子實體和組合物。"藥學上可接受的載體"包括任何和所有臨床適用的溶劑、分散介質、包衣材料、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。另外，化合物可與水或常規有機溶劑形成溶劑合物。也涵蓋這類溶劑合物。CD20特異性結合分子的組合物可經口服、局部、經皮、胃腸外、吸入噴霧、陰道、直腸或通過顱內注射給予。本文所用的術語胃腸外包括皮下注射、靜脈內、肌內、腦池內注射或輸注技術。也涵蓋經靜脈內、皮內、肌內、乳房內、腹膜內、鞘內、眼球后、肺內注射給藥和或手術植入特定部位。通常，組合物基本上不含熱原以及其它對接受者有害的雜質。優選注射，尤其是經靜脈內注射。藥物組合物的配制可因所選給藥途徑的不同而異(例如溶液劑、乳劑)。可將包含待給予抗體的合適組合物配制在生理上可接受的溶媒或載體中。對于溶液劑或乳劑，合適載體包括例如水性或醇性/水性溶液劑、乳劑或混懸劑，包括鹽水和緩沖介質。胃腸外溶i某可包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸林格氏或不揮發油類。靜脈內溶i某可包括各種添加劑、防腐劑或流體、營養物或電解質補充劑。可將CD20特異性結合分子組合物凍干貯存，在臨用前用合適載體重配。已經知道該技術對常規免疫球蛋白是有效的。任何合適的凍干和重配技術都可采用。本領域技術人員知道，凍干和重配可導致不同程度的抗體活性損失，應當調節使用水平以利于補償。適合通過加水而配制水性混懸劑的分散粉劑和顆粒劑提供與分敎劑或潤濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合在一起的活性化合物。合適的分散劑或潤濕劑和懸浮劑的實例在上文已經提及。CD20特異性結合分子在這些制劑中的濃度可在寬范圍內變化，例如從小于約0.5。/。，通常為或至少約1%至高達15%或20%(重量)，可主要根據流體體積、粘度等并按照所選的特定給藥方式來選擇。因此，供胃腸外注射用的典型藥物組合物可以配制成含有lml無菌緩沖水和50mg抗體。供靜脈內輸注用的典型組合物可配制成含有250ml無菌林格液和150mg抗體。制備胃腸外給藥用組合物的實際方法是本領域技術人員已知的和顯而易見的，詳見例如Remington'sPharmaceuticalScience,第15版，MackPublishingCompany,Easton，Pa.(1980)。每次給藥的有效劑量的抗體范圍為0.01mg至1000mg/kg體重。藥物組合物可呈無菌注射用水性、油性混懸劑、分散體或在臨用時配制無菌注射用溶液劑或分散體的無菌粉針劑的形式。可按已知技術，用上文提及的合適M劑或潤濕劑和懸浮劑來配制混懸劑。無菌注射用制劑也可以是配制在無毒胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射用溶液劑或混懸劑，例如1,3-丁二醇溶液。載體可以是溶劑或分散介質，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)、其合適混合物、植物油、林格液和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌不揮發油類可常規用作溶劑或懸浮介質。為此，任何溫和的不揮發油都可使用，包括合成的甘油單酯和甘油二酯。另夕卜，脂肪酸例如油酸也可用于制備注射用制劑。在所有情況下，其形式必須都是無菌的并且必須具有一定程度的流動性以便注射。可以通過例如使用包衣材料(例如卵磷脂)，在分狀劑情況下通過保持所需粒徑達到合適的流動性，以及通過使用表面活性劑，以保持合適流動性。在制備和貯存條件下它必須穩定，而且必須防止細菌和真菌等孩i生物污染作用。通過各種抗細菌劑和抗真菌劑可達到對微生物活動的預防作用，所述試劑例如對羥基苯曱酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在許多情況下，最好還包括等滲劑，例如糖或氯化鈉。可通過在注射用組合物中4吏用例如單硬脂酸鋁和明膠等延遲吸收劑來達到組合物的延遲吸收。用于給藥的組合物可與攝取或吸收增強劑配制在一起以增加其功效。這類增強劑包括例如水楊酸鹽、甘膽酸鹽/亞油酸鹽、甘膽酸鹽(glycholate)、抑肽酶、桿菌肽、SDS、癸酸鹽等。參見例如Fix(/戶/z聽.Sc/"85:1282-1285，1996)以及Oliyai和Stella(J肌iev.尸/wrmaco/.7b;dco/.,32:521-544,1993)。—方面，本發明的方法包括藥物組合物的給藥步驟。用將治療藥直接或間接？l入哺乳動物患者體內的任何藥學上可接受的方法，實施本發明的方法，包括但不限于注射、口服攝入、鼻內、局部、經皮、胃腸外、吸入噴霧、陰道或直腸給藥。本文所用的術語胃腸外包括皮下、靜脈內、肌內和腦池內注射、以及導管或輸注技術。也涵蓋經皮內、乳房內、腹膜內、鞘內、眼球后、肺內注射給藥和或手術植入特定位點。在一個實施方案中，在需要治療的癌癥部位或受累組織，通過直接向該部位注射或通過可在內部遞送制劑的持續遞送或持續釋放機制，進行給藥。例如，植入腫瘤附近的本發明制劑可包括能夠持續遞送組合物(例如可溶性多肽、抗體或小分子)的生物可降解微球體或膠嚢劑或其它生物可降解聚合物構型。本發明還涵蓋給予結合分子組合物和第二藥物的組合。本發明所涵蓋的第二藥物列于以下段落。第二藥物可以是B細胞相關分子。本發明所涵蓋的其它B細胞相關分子包括與B細胞表面分子結合、而不與CD20結合的結合分子。B細胞相關分子包括但不限于CD19(B-淋巴細胞抗原CD19，也稱為B-淋巴細胞表面抗原B4或Leu-12)、CD21、CD22(B細月包受體CD22,也稱為Leu-14、B-'淋巴細力包細胞粘附分子或BL-CAM)、CD23、CD37、CD40(B-細胞表面抗原CD40,也稱為胂瘤壞死因子受體超家族成員5、CD40L受體或Bp50)、CD80(T淋巴細胞激活抗原CD80、也稱為激活B7-l抗原、B7、B7-l或BB1)、CD86(T^淋巴細胞激活抗原CD86,也稱為激活B7-2抗原、B70、FUN-1或BU63)、CD137(也稱為腫瘤壞死因子受體超家族成員9)、CD152(也稱為細胞毒T-淋巴細胞蛋白4或CTLA-4)、L6(腫瘤相關抗原L6,也稱為跨膜4超家族成員1、膜組分表面標記1或M3S1)、CD30(淋巴細胞激活抗原CD30,也稱為腫瘤壞死因子受體超家族成員8、CD30L受體或Ki-l)、CD50(也稱為胞間粘附分子-3(ICAM3)或ICAM-R)、CD54(也稱為胞間粘附分子-l(ICAM1)或Majorgroup鼻病毒受體)、B7-HI(免疫抑制受體的配體，也稱為PD-L1,該受體是由活化T細胞、B細胞和骨髓細胞表達的；參見Dong等，"B7-H1,athirdmemberoftheB7family,co-stimulatesT-cellproliferationandinterleukin-10secretion,"淑MW.1999,5:1365-1369)、CD134(也稱為腫瘤壞死因子受體超家族成員4、OX40、OX40L受體、ACT35抗原或TAX-轉錄激活糖蛋白1受體)、41BB(4-1BB配體受體、T細胞抗原4-1BB或T細胞抗原ILA)、CD153(也稱為肺瘤壞死因子配體超家族成員8、CD30配體或CD30-L)、CD154(也稱為腫瘤壞死因子配體超家族成員5、TNF相關激活蛋白、TRAP或T細胞抗原Gp39)和Toll受體。以上列出的構建體靶標和/或靶抗原僅是示例性的，并非是窮舉的。本發明所涵蓋的作為第二藥物的細胞因子和生長因子包括但不限于一種或多種下列細胞因子和生長因子TNF、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL誦8、IL-9、IL-IO、IL-ll、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IFN、G-CSF、Meg-CSF、GM-CSF、血小板生成素、干細胞因子和紅細胞生成素。本發明的藥物組合物也可包括其它已知促血管生成素，例如Ang-l、Ang-2、Ang-4、Ang-Y和/或人促血管生成素樣多肽、和/或血管內皮生長因子(VEGF)。本發明藥物組合物中所用的生長因子包括血管生成素、骨形態發生蛋白-1、骨形態發生蛋白-2、骨形態發生蛋白-3、骨形態發生蛋白-4、骨形態發生蛋白-5、骨形態發生蛋白-6、骨形態發生蛋白-7、骨形態發生蛋白-8、骨形態發生蛋白-9、骨形態發生蛋白-10、骨形態發生蛋白-11、骨形態發生蛋白-12、骨形態發生蛋白-13、骨形態發生蛋白-14、骨形態發生蛋白-15、骨形態發生蛋白受體IA、骨形態發生蛋白受體IB、腦衍生神經營養因子、睫狀神經營養因子、睫狀神經營養因子受體a、細胞因子誘導的嗜中性粒細胞趨化因子1、細胞因子誘導的嗜中性粒細胞趨化因子2a、細胞因子誘導的嗜中性粒細胞趨化因子2(3、P內皮細胞生長因子、內皮素1、表皮生長因子、上皮衍生的嗜中性粒細胞引誘劑、成纖維細胞生長因子4、成纖維細胞生長因子5、成纖維細胞生長因子6、成纖維細胞生長因子7、成纖維細胞生長因子8、成纖維細胞生長因子8b、成纖維細胞生長因子8c、成纖維細胞生長因子9、成纖維細胞生長因子IO、酸性成纖維細胞生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、神經膠質細胞系衍生的神經營養因子受體od、神經膠質細胞系衍生的神經營養因子受體oc2、生長相關蛋白、生長相關蛋白a、生長相關蛋白P、生長相關蛋白y、肝素結合表皮生長因子、肝細胞生長因子、肝細胞生長因子受體、胰島素樣生長因子I、胰島素樣生長因子受體、胰島素樣生長因子II、胰島素樣生長因子結合蛋白、角質細胞生長因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受體(X、神經生長因子、神經生長因子受體、神經營養蛋白-3、神經營養蛋白-4、胎盤生長因子、胎盤生長因子2、血小板衍生內皮細胞生長因子、血小板衍生生長因子、血小板衍生生長因子A鏈、血小板衍生生長因子AA、血小板衍生生長因子AB、血小板衍生生長因子B鏈、血小板衍生生長因子BB、血小板衍生生長因子受體a、血小板衍生生長因子受體(3、前B細胞生長刺激因子、干細胞因子、干細胞因子受體、轉化生長因子oc、轉化生長因子p、轉化生長因子(31、轉化生長因子P1.2、轉化生長因子(32、轉化生長因子P3、轉化生長因子(35、潛在轉化生長因子(31、轉化生長因子P結合蛋白I、轉化生長因子P結合蛋白II、轉化生長因子P結合蛋白III、腫瘤壞死因子受體I型、腫瘤壞死因子受體II型、尿激酶型纖溶酶原激活物受體、血管內皮生長因子和嵌合蛋白及其生物活性或免疫活性片段。所涵蓋的作為第二藥物的化療藥的實例包括但不限于烷化劑，例如氮芥類(例如氮芥、環磷酰胺、異環磷酰胺、美法侖和苯丁酸氮芥)；亞硝基脲'(例如卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)和司莫司汀(曱基-CCNU));亞乙基亞胺類和曱基蜜胺(例如曲他胺(TEM)、三亞乙基硫代磷酰胺(塞替派)和六曱基蜜胺(HMM、六曱蜜胺))；磺酸烷基酯類(例如白消安(buslfan));和三嗪類(例如達卡巴嗪(dacabazine，DTIC));抗代謝藥、例如葉酸類似物(例如甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞(多靶向抗葉酸))；嘧啶類似物(例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟脫氧尿苷、吉西他濱、胞嘧啶阿糖苷(AraC、阿糖胞苷)、5-氮雜胞苷和2,2，-二氟脫氧胞苷)；和嘌呤類似物(例如6-巰基嘌呤、6-辟u鳥嘌呤、石克唑噪呤、2，-脫氧考福霉素(噴司他丁)、赤式羥基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine)(EHNA)、磷酸氟達拉濱、2-氯脫氧腺苷(克拉曲濱、2-CdA));I型拓樸異構酶抑制劑，例如喜樹堿(CPT)、托泊替康和伊立替康；某些天然產物，例如表鬼臼毒素(例如依托泊苷和替尼泊芬)；和長春花屬生物堿類(例如長春堿、長春新堿和長春瑞濱)；抗胂瘤抗生素，例如放線菌素D、多柔比星和博來霉素；某些輻射壽丈化劑，例如5-溴脫氧尿苷、5-;典脫氧尿苷和溴脫氧胞苷；鉑配位絡合物，例如順鉑、卡鉑和奧沙利鉑；取代脲，例如羥基脲；和曱基肼衍生物，例如N-曱基肼(MIH)和丙卡巴肼。用于治療自身免疫性疾病的本發明所涵蓋的第二藥物稱為免疫抑制劑，其作用是抑制或掩蔽所治療個體的免疫系統。免疫抑制劑包括例如非甾體抗炎藥(NSAID)、鎮痛藥、糖皮質激素、治療關節炎的調節疾病用抗風濕藥(DMARD)或生物反應調節劑。除了治療RA之外，所述DMARD中的組合物還適用于治療許多其它自身免疫-性疾病。0090]示例性的NSAID選自布洛芬、奈普生、奈普生鈉、Cox-2抑制劑(例如萬絡(Vioxx)和西樂葆(Celebrex)和唾液酸鹽(sialylates)。示例性的鎮痛藥選自對乙酰氨基酚、羥可酮、丙氧芬鹽酸曲馬多。示例性的糖皮質激素選自可的松、地塞米松、氫化可的松、曱潑尼龍、潑尼松龍或潑尼松。示例性的生物反應調節劑包括但不限于針對細胞表面標記(例如CD4、CD5、CTLA4等)的分子、abatacept、細胞因子抑制劑，例如TNF拮抗劑(例如依那西普(Enbrel)、阿達林單抗(adalimumab)(Humira)和英夫利昔單抗(Remicade》、趨化因子抑制劑和粘附分子抑制劑。生物反應調節劑包括單克隆抗體以及重組形式的分子。示例性的DMARD包括但不限于硫唑噪呤、環磷酰胺、環孢菌素、曱氨蝶呤、青霉胺、來氟米特、柳氮磺p比。定、羥氯喹、金[口服(金諾芬)和肌內]和米諾環素。考慮到CD20特異性結合分子組合物和第二藥物可在同一制劑中同時給予。或者，各藥物可在單獨制劑中同時給予，同時是指各藥物在30分鐘內給予。還考慮到當CD20特異性結合分子與第二藥物聯合用藥(其中第二藥物是細胞因子或生長因子，或化療藥)時，給予還可包括使用放療藥和放療。根據治療醫師的判定，按照給予有待治療癌癥的患者的常用劑量，進行放療與抗體組合物的聯用。給定劑量的CD20特異性結合分子組合物的用量因所治療個體的體型、以及所治療疾病的特點而異。在示例性治療中，需要給予約1mg/天、約5mg/天、約10mg/天、約20mg/天、約50mg/天、約75mg/天、約100mg/天、約150mg/天、約200mg/天、約250mg/天、約400mg/天、約500mg/天、約800mg/天、約1000mg/天、約1600mg/天或約2000mg/天。劑量也可根據患者體重來給予，劑量為0.01-50mg/kg。在相關實施方案中，可以給予CD20特異性結合分子的劑量范圍為0.015-30mg/kg。在額外實施方案中，給予CD20特異性結合分子的劑量為約0.015mg/kg、約0.05mg/kg、約0.15mg/kg、約0.5mg/kg、約1.5mg/kg、約5mg/kg、約15mg/kg或約30mg/kg。先在動物模型中、再在臨床試驗中進行的標準劑量反應研究揭示了特定疾病和患者群體的最佳劑量。在給予CD20特異性結合分子組合物的單劑量治療后，B細胞群體增加或減少至少約20%。在一個實施方案中，B細胞群體增加或減少至少約20。/。、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90Q/。或約100%。B細胞耗竭定義為B細胞的絕對計數下降到低于正常范圍的下限。B細胞恢復定義為回到B細胞的絕對計數達到以下任一項1)患者基線值的70%;或2)正常范圍。給予CD20特異性結合分子也會使特定B細胞亞類細胞凋亡增加。細胞凋亡是指誘導細胞程序化死亡，表現為DNA斷裂、細胞皺縮、細胞破裂、形成膜泡嚢或膜脂質組成改變(經膜聯蛋白V染色測定)，并且可根據這些表現來進行評價。此外，給予CD20特異性結合分子對所治療疾病或障礙可產生良好臨床效果。例如，在類風濕性關節炎患者中，給予CD20分子在臨床上可明顯改善患者癥狀[例如達到美國風濕病學學會初步文善檢測(AmericanCollegeofRheumatologyPreliminaryDetectionofImprovement,ACR20)]和/或改善20。/。關節觸痛和腫脹以及在3/5的其余ACR測定中有20。/。改善(Felson等，爿W/zntoA/zewm.1995,38:727-35)。給予CD20特異性結合分子后，對改善RA患者的生物學測定包括測定細胞因子水平的變化，通過蛋白質或RNA水平的測定。目標細胞因子包括但不限于TNF-a、IL-1、干擾素、Blys和APRIL。細胞因子變化是因為B細胞數量減少或活化T細胞減少。在RA患者中，在給予CD20特異性結合分子前后測定骨更新(骨吸收或骨侵蝕)相關標記。相關標記包括但不限于堿性磷酸酶、骨鈣素、膠原蛋白降解片^殳、羥脯氨酸、酒石酸抗性酸性磷酸酶和RANK配體(RANKL)。RA改善的其它相關數據包括測定C反應蛋白(CRP)水平、紅細胞沉降速率(ESR)、類風濕因子、CCP(環狀瓜氨酸化肽)抗體，以及通過流式細胞儀測定全身B細胞水平和淋巴細胞計數。也可測定RA患者滑膜的特定因子，包括測定來自滑膜活檢的滑膜B細胞水平、RANKL水平和其它骨因子和上述細胞因子。在相關方面，按照本領域已知標準，測定給予CD20特異性結合分子對其它疾病的療效。例如，考慮到接受CD20特異性結合分子的克羅恩病患者在克羅恩病活性指標(CDAI)上的改善范圍達到約50至約70單位，其中癥狀緩解150單位(Simonis等，/Go^roe"/.1998,33:283-8)。認為150或200的分值是正常的，而認為450的分值是嚴重疾病分值。還希望給予CD20特異性結合分子使炎性腸病個體的核周抗嗜中性粒細胞抗體(pANCA)和抗釀酒酵母抗體(ASCA)減少。00100還考慮到接受CD20特異性結合分子的成人和青少年肌炎患者在核心系列評價中達到改善，例如在6項核心系列測定中至少有3項達到20%以上的改善，而且不超過2項核心測定惡化25%(參見Rider等，^W/zWtoi/zewm.2004，50:2281-90)。00101]還考慮到接受CD20特異性結合分子的SLE患者在系統性3良療活性測定(SystemicLupusActivityMeasure,SLAM)或SLE疾病活性指數(SLEDiseaseActivityIndex,SLEDAI)得分上至少改善了1個點(Gladman等，《/i/zewwato/1994,21:1468-71)(Tan等，爿W/zn'toi^ew肌1982，25:1271-7)。在臨床上認為SLAM得分>5，或SLEDAI得分>2就是活動性疾病。對治療的反應可定義為在2種疾病活性測定(SLE疾病活性指數[SLEDAI]和系統性狼瘠活性測定)和2種生命質量測定(患者的總體評價和Krupp氏疲勞嚴重程度量表(KruppFatigueSeverityScale))上的改進或穩定化(Petri等，Mnto臉訓.2004，50:2858-68)。最好還將CD20特異性結合分子給予SLE患者，使抗雙鏈DNA抗體減少。或者，可使用不列顛群島狼瘡評價組標準(BritishIslesLupusAssessmentGroupCriteria,BILAG沐測定改善。還考慮到接受CD20特異性結合分子的多發性硬化患者在Kurtzke擴大失能狀態量表(KurtzkeExpandedDisabilitystatusscale,EDSS)(Kurtzke,F.，iVewra/ogy1983，33:1444-52)的臨床得分中至少改善0.5,或在Kurtzke量表的臨床疾病惡化上延遲至少l.O(Rudick等，臉腳/，1997，49:358-63)。還考慮到接受CD20特異性結合分子的IIM患者在特發性炎性肌病標準(IdiopathicinflammatoryMyopathyCriteria,IIMC)評價的5項標準中至少有一項下降(Miller，F.，出處同上)。還考慮到將CD20特異性結合分子給予IIM患者，使選自以下的IIM相關因子下降肌酸激酶(CK)、乳酸脫氬酶、醛縮酶、C-反應蛋白、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和抗核自身抗體(ANA)、肌炎特異性抗體(MSA)和針對可提取的核抗原的抗體。或者，滿足Rider等04w/zn'fei/zeww.2004,50:2281-90)所提出的6項標準中的3項的患者，可以接受本發明的治療，其惡化不超過2項標準。在又一個實施方案中，根據眾所周知的并常用于本領域的下文所述的臨床標準，B細胞癌癥患者接受CD20特異性結合分子，在總體上表現出對CD20特異性結合分子的有益反應，例如腫瘤大小減小，肺瘤數量下降和/或疾病癥狀改善。例如，美國國立癌癥研究院(U.S.NationalCancerInstitute，NCI)已將癌癥劃分為"惰性(Indolent)"'淋巴瘤和"侵襲性(Aggressive)"淋巴瘤的臨床類型。惰性淋巴瘤包括濾泡細胞淋巴瘤(其可按細胞學來"分級，，)、彌散性小淋巴細胞性淋巴瘤/慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、淋巴漿細胞樣/瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥、邊緣帶淋巴瘤和毛細胞白血病。侵襲性淋巴瘤包括彌散性混合型和大細胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/彌散性小無裂細胞淋巴瘤、成淋巴細胞'淋巴瘤、套細胞淋巴瘤和AIDS相關淋巴瘤。在某些情況下，國際預后指數(InternationalPrognosticIndex,IPI)用于4曼襲性'淋巴瘤和濾泡性'淋巴瘤的病例中。IPI中考慮的因子包括年齡(<60歲與>60歲)、血清乳酸脫氫酶(正常水平與升高水平)、表現狀態(0或1與2-4)(參見以下定義)、病期(I或II與III或IV)和結外部位受累(O或1個與2-4個)。具有2個以上危險因子的患者不復發的機會小于50%，總體生存期5年。侵襲性IPI的表現狀態定義如下評分描述0分，活動完全不受限制，能,人事患病前的所有工作；l分，體力活動受到限制，但不用臥床，并能從事較輕松或坐著做的工作，例如輕體力家務活、辦公室工作；2分，不用臥床，生活全部自理，但不能從事任何工作，至多或超過50%左右的時間清醒；3分，生活僅部分自理，超過50%的清醒時間里要臥床或坐輪椅，4分，完全失能，生活完全不能自理，完全臥床或坐輪椅；5分，死亡。(參見TheInternationalNon-Hodgkin，sLymphomaPrognosticFactorsProject.ApredictivemodelforaggressiveNon-Hodgkin，sLymphoma.NEnglJMed.329:987-94，1993)。通常，采用低分淋巴瘤通常表現為結節病且發展緩慢或生長緩慢的標準，對淋巴瘤進行臨床評分。中等分值和高分疾病通常表現出更具侵襲性并具有大的結外實體瘤。ArmArbor分類系統也用于確定肺瘤進程，尤其是非霍奇金氏淋巴瘤的進程。在該系統中，成人NHL的I、II、III和IV期可分為A類和B類，這是才艮據患者具有(B)或沒有(A)已明確定義的全身癥狀。B類是指具有以下癥狀的患者在確診前6個月內不明原因的體重下降超過10%,不明原因發熱，體溫超過38。C，以及盜汗。各期定義如下I期-累及單個淋巴結區或局部累及單個淋巴外器官或部位。II期-累及橫膈膜同側的兩個以上淋巴結區或局部累及單個結區。III期-累及橫膈膜兩側淋巴結區，可能伴有局部累及淋巴外器官或部位，累及脾臟或這兩者。IV期-彌散性(多病灶)累及一個或多個淋巴外部位，同時累及或不累及淋巴結或累及遠端(非區域的)結的單獨的淋巴夕卜器官。有關詳情可參見TheInternationalNon-Hodgkin，sLymphomaPrognosticFactorsProject:ApredictivemodelforaggressiveNon-Hodgkin，sLymphoma,NewEnglandJ.Med.(1993)329:987-994。—方面，CD20特異性結合分子的療效是由反應水平而決定的，例如部分反應定義為腫瘤縮小到不足原體積的一半。完全反應定義為經臨床或輻射學評價證實疾病完全消失。在一個實施方案中，接受單劑量CD20特異性結合分子的個體表現出對治療至少有部分反應。根據與國立癌癥研究院合作開發的用于評價NHL的Cheson標準(Cheson等，JC/z'"(9"co/.1999,17:1244;Grillo-Lopez等，爿朋(9nco/.2000，11:399-408)，當疾病和疾病相關癥狀的所有可4企測的臨床上和輻射影像上的證據完全消失，所有淋巴結恢復到正常大小，脾臟也恢復大小，而且淋巴瘤從骨髓中清除時，即達到完全反應。當患者表現出疾病完全消失，脾臟恢復大小，但淋巴結恢復超過75%,骨髓不確定時，則達到未經證實的完全反應。未經證實的完全反應滿足并超過了部分反應的標準。總體反應定義為總體胂瘤負荷下降至少50%。已經開發出類似標準，用于各種其它形式的癌癥或過度增殖性疾病，這些都是本領域技術人員容易得到的。參見例如Cheson等，C7/"爿dv/7emato/0"co/.2006,4:4-5，其中描述了CLL的評價標準；Cheson等，/C7f"0"co/.2003，21:4642-9,其中描述了AML的標準；Cheson等，萬/ow/2000,96:3671-4，其描述脊髓增生異常綜合征的標準。另一方面，與未接受治療的B細胞癌患者相比，患者對CD20結合分子的治療反應表現為病程發展更為緩慢。可用骨掃描、CT掃描、鎵掃描、淋巴管造影、MRI、PET掃描、超聲波等本領域眾所周知的技術，對放緩的病程或任何以上因子進行測定。在相關方面，為了確定CD20結合分子治療功效，對個體生物樣品中的B細胞數量進行測定。在一個實施方案中，生物樣品選自血液、肺瘤活^企樣品、淋巴結、扁桃體、骨髓、胸腺和其它富含淋巴細胞的組織。富含淋巴細胞的組織是淋巴細胞特別多的組織，包括但不限于淋巴結及相關器官(脾、骨髓、扁桃體、胸腺、粘膜淋巴組織)、肺瘤和炎癥部位。顯而易見的是，如果將傳統治療藥與本發明治療藥寫關合用藥時可以改變劑量。還考慮到用本發明方法治療的個體可以再次接受治療，例如，如果疾病癥狀再次出現或者治療藥藥代動力學和/或藥效學允許采用這樣的再次治療。在一個實施方案中，給予用單劑量CD20結合分子治療的個體另一單劑量CD20特異性結合分子。根據本領域普通技術，臨床醫生將能夠根據例如疾病癥狀的重新出現或個體B細胞恢復到再次治療所需水平等，來鑒別是否要進行再次治療。本文進一步描述了臨床標準的其它測定和標記以及結果。用本發明方法治療的個體可以接受維持治療方案，其中根據CD20特異性結合分子的藥代動力學/藥效學特性，用單劑量CD20特異性結合分子對個體進行再次治療。這樣的維持治療通常在起始單劑量后給予約3個月至約2年時間。示例性的藥效學數據包括但不限于對本文所述疾病的改善進行的生物學測定，例如CD20特異性結合分子的血清水平，疾病評價方面的改善(例如通過ACR、SLAM或IPI)、在細胞因子或表面標記表達上的變化、自身抗體水平，以及肺瘤大小變化。本領域還可理解，對用本發明方法進行治療的個體反應差異使得用單劑量CD20特異性結合分子再次治療的時間上也有差異。作為額外方面，本發明包括這樣的藥盒其中裝有按照便于將其用于本發明實踐方法的方式包裝的一種或多種化合物或組合物。在一個實施方案中，這樣的藥盒包括本文所述的CD20特異性結合分子化合物或組合物(例如單獨含有CD20特異性結合分子的組合物或者含有CD20特異性結合分子與第二藥物聯用的組合物)，將其包裝在密封瓶或管等容器中，在容器上貼有標簽或者在包裝中附有標簽，所述標簽描述化合物或組合物在實施方法中的用途。優選化合物或組合物以單劑型形式包裝。藥盒還可包括適于按照特定給藥途徑給予組合物或用于實施篩選測定的裝置。優選藥盒中帶有描述抗體組合物用途的標簽。本發明也包括制造品(articlesofmanufactured這樣的制造品包括至少一種CD20特異性結合分子，以及任選的藥物載體或稀釋劑，還包括至少一個標簽以描述本發明CD20特異性SMIP的用途的方法。這類制造品也任選包括至少一種第二藥物，用于與CD20特異性SMIP聯合用藥。圖1A表示在非人靈長類接受單劑量CD20特異性結合分子TRU-015的劑量研究中，對B細胞耗竭的評價。圖1B是在更長時間內測定的類似實驗中對B細胞耗竭的進一步分析，以B細胞耗竭的百分率來表示。圖2表示單劑量給予人類患者CD20特異性結合分子TRU-015后，對B細胞耗竭的評價。圖3表示在ADCC和CDC測定中，TRU-015與其它CD20結合分子構建體的比較。圖4顯示在劑量范圍研究中，當對接受TRU-015的RA患者測定CD19+B細胞數量的測定，B細胞庫毛竭持續時間。圖5顯示接受單劑量15mg/kgTRU-015或2X7.5mg/kg劑量TRU-015的RA患者的B細胞耗竭。實施例根據以下實施例，本發明的額外方面和細節將會是顯而易見的，這些實施例是說明性的，而非限制性的。實施例1描述CD20特異性SMIP的重組產生。實施例2描述CD20特異性SMIP體外活性。實施例3描述CD20特異性結合分子在體內對B細胞腫瘤系的效果。實施例4描述將單劑量CD20特異性SMIP給予非人靈長類。實施例5描述將CD20特異性SMIP給予人類患者。實施例6描述給予CD20特異性SMIP以治療原發性炎性肌病。實施例7描述給予CD20特異性SMIP以治療類風濕性關節炎患者。實施例8描述將CD20特異性SMIP給予類風濕性關節炎患者的臨床結果。實施例1CD20特異性結合分子的重組產生在共同擁有的美國專利公布說明書2003/133939、2003/0118592和2005/0136049中描述了CD20特異性SMIP。選擇示例性的SMIP即TRU-015用于進行如下所述的進一步研究。TRU-015是一種能與CD20抗原結合的重組(鼠/人)單鏈蛋白。結合結構域是基于公眾可得的人CD20抗體序列。結合結構域與人IgGl的效應區即CH2區和CH3區通過修飾的CSS鉸鏈區而連接。TRU-015在溶液中以二聚體存在，該二聚體的理論分子量約為106,000道爾頓。TRU-015包含來自SEQIDNO:2氨基酸1-23的2el2前導肽克隆序列；2H7鼠抗人CD20輕鏈可變區，其在可變區殘基ll的賴氨酸被絲氨酸(VHL11S)取代，這反映在SEQIDNO:2的位置34;asp-gly3-ser-(gly4ser)2接頭，在SEQIDNO:2殘基129處開始；2H7鼠抗人CD20重鏈可變區，其在重鏈區末端缺乏絲氨酸殘基，即從VTVSS變為VTVS;人IgGlFc區，包括含有(CSS)序列的修飾鉸鏈區，以及野生型CH2區和CH3區。TRU-015的核芬酸序列和氨基酸序列分別示于SEQIDNO:1和2。用專有的培養基，在生物反應器中培養產生TRU-015的CHO細胞。用一系列色譜和過濾(包括病毒減少濾器)步驟純化TRU-015。再濃縮所得材料，用20mM磷酸鈉和240mM蔗糖配制，所得pH為6.0。將組合物過濾后，加入到玻璃小瓶中，濃度為10mg/mL。每個玻璃瓶都裝5mLTRU-015(50mg/瓶)。劑型和給藥把TRU-015裝入單次使用的玻璃瓶中，其中含有50mgTRU-015(5mL[10mg/mL])的無菌無防腐劑的液體制劑和20mM磷酸鈉和240mM蔗糖，pH6.0。經靜脈內(IV)輸注給予TRU-015。按體重給藥(mg/kg)。TRU-015小瓶在-20。C冷凍保存，直至使用。融化后，立即使用小瓶或貯存于2-8°C。實施例2CD20特異性結合分子體外活性為了評價CD20特異性SMIP在體內的功效，首先測定給藥對細胞特異性活性的體外效應，所述活性例如抗體依賴性細胞毒性(ADCC)活性、#卜體依賴性細胞毒性(CDC)活性和凋亡活性。抗體依賴性細胞毒性(ADCC)活性已經報道補體激活與利妥昔單抗的輸注反應有關(vanderKolk，&.J^a^wto/.2001,115:807-11)。另外，在類風濕性關節炎等慢性炎性疾病中，疾病活性與補體激活相關。因此，降低TRU-015的CDC活性，以解決這些問題。為了評價TRU-015的CDC減毒水平，評價CDC活性并與利妥昔單抗的CDC活性進行比較。當TRU-015與靶抗原CD20結合時，Clq(—種補體級4關的第一成分)與TRU-015CH2區結合而啟動補體依賴性細胞毒性。為了評價CDC活性，在兔補體[DynalBiotech(Invitrogen),BrownDeer,WI]存在下，將TRU-015與WIL2-S細胞一起孵育(Gazzano-Santoro,等，J7mmwwo/.MeA.1997，202:163-71)。也可用人血清和人補體(Clq)(QuidelCorporation,SanDiego,CA)進行該實驗。TRU-015介導的對WIL2-S細胞的劑量依賴性殺傷，在1嗎/ml表現出約30%溶解，在10jig/ml表現出50%溶解，在1ptg/ml表現出約65%溶解，而對照蛋白(人IgG)則不能介導這些細胞的CDC。TRU-015對WTL2-s細胞的細胞毒效應是補體依賴性的，因為在沒有補體(僅有介質)的情況下，TRU-015沒有細胞毒活性。這些結果表明補體募集途徑是另一機制，在該機制中，TRU-015表現出細胞毒性。然而，與利妥昔單抗相比，TRU-015在其通過CDC而相對耗竭CD20+耙細胞的活性上要低10-100倍，這表明TRU-015通過CDC溶解細胞的能力已得到成功的衰減。相反，類似于TRU-015、但在效應區的殘基331上的脯氨酸突變為絲氨酸(P331S)的CD20結合分子卻沒有表現CDC活性，而與TRU-015構建體相比，在殘基238的脯氨酸突變為絲氨酸(P238S)的構建體卻表現出CDC活性(圖3)。這些測定證明SMIP分子效應子功能可因改變分子序列而得以調節，從而改善、保持或缺失某些效應子功能。TRU-015的凋亡活性測定TRU-015和利妥昔單抗在CD20+B細胞淋巴瘤系(RamosB細胞)中誘導細胞凋亡的能力。按照制造商方案，使用流式細胞儀測定，用市售檢測試劑盒(BD/Pharmingen)供應的膜聯蛋白V/碘化丙錠的結合，定量測定細胞凋亡。TRU-015與利妥昔單抗的凋亡活性相似，在10(ig/ml和20嗎/ml都表現出約60%的細胞溶解。結合特異性這些結果表明，與靶向CD20的單克隆抗體即利妥昔單抗相比，TRU-015表現出明顯的體外效應子功能，即至少在通過ADCC誘導CD20+靶細胞溶解的能力上相當。相比之下，與利妥昔單抗相比，TRU-015在其通過CDC而相對耗竭CD20+靶細胞的活性上要低10-100倍。在流式細胞儀測定中，TRU-015與利妥昔單抗的凋亡活性相似。實施例3CD20特異性結合分子在體內對B細胞腫瘤系的效果給雌性無胸&象棵鼠植入表達人CD20的Ramos腫瘤。植入后8天，給小鼠分組(11=6-8只/組)，按照相同腫瘤體積分組，并在0、2、4、6和8天經靜脈內注射人IgG作為對照(IOO嗎)或注射TRU-015或利妥昔單抗(100(ig)。平均組腫瘤體積為370mm3。每周3次測定腫瘤并計算腫瘤體積。與利妥昔單抗和對照治療的動物相比，將tru-015給予已建立Ramos腫瘤異種移植的小鼠，結果腫瘤體積縮小并延長了存活時間。對于接種tru-015的小鼠，50%的腫瘤完全消退，存活時間^90天。在利妥昔單抗組的小鼠的腫瘤都沒有完全消除。tru-015治療動物的中位存活時間為64.5天，相比之下，利妥昔單抗治療的動物和對照治療的動物則分別為11天和8天。用增加數量的試驗動物進行的額外實驗提供了額外的具有統計學意義的結果。每組所用的小鼠總數上升到n=40-44只，計算存活時間的平均值和胂瘤大小的變化。對于tru-015治療動物而言，增加數據的存活率改善為90天，對于利妥昔單抗治療小鼠而言為約50天。平均基線腫瘤大小為231mm3。這些動物中腫瘤存在的分析表明，約50°/。tru-015小鼠將無腫瘤狀態維持90天，而接受利妥昔單抗或對照治療的小鼠則帶有腫瘤。將B細胞系植入小鼠，進行進一步實驗，所述B細胞系已經證明對由利妥昔單抗導致的殺傷具有抗性。給無胸腺棵鼠植入5x106Daudi腫瘤細胞，所述細胞對由利妥昔單抗導致的殺傷具有抗性，讓小鼠的腫瘤生長。植入后7天，將小鼠分組，在第0、2、4、6和8天用tru-015(100(ig)、利妥昔單抗(100嗎)、對照HulgG(100嗎)或PBS進行治療。用30[ig/劑、300iig/劑和1000昭/劑，進行劑量研究。每周3次測定腫瘤并計算腫瘤體積。與利妥昔單抗和對照治療的動物相比，將tru-015給予已建立Daudi腫瘤異種移植的小鼠，結果腫瘤體積縮小并延長了存活時間。接受1000嗎劑量tru-015的小鼠的存活率在植入后30天為約85°/q，在第40天降低為約65%。接受300嗎tru-015/劑的小鼠的存活率在第40天為85%，而接受100嗎tru-015/劑的小鼠的存活率在第25天為約65%,在第40天降低為50%，中位存活時間(mst)為約36天。對于接受1000和300嗎tru-015的小組，無法計算mst，因為超過50%小組成員的存活比測定進行的時間還要長。接受30嗎TRU-015的小鼠在第25天的存活率為約25%，MST為23天。利妥昔單抗治療的動物存活率比接受TRU-015的動物更低。接受1000嗎/劑利妥昔單抗的動物的存活率在第20天為約65%，在第40天下降到25%，MST為24天。接受300嗎利妥昔單抗/劑的小鼠在第20天的存活率為50%,在第40天下降到25%,MST為24天。接受每劑100嗎利妥昔單抗或30嗎利妥昔單抗的小鼠在第20天的存活率都為25%,在第40天的存活率都下降到約10%,中位存活時間分別為17天和16天。[OO"9]因此，TRU-015抗CDMSMIP能有效殺傷B細胞腫瘤(所述腫瘤對由抗CD20嵌合抗體利妥昔單抗引起的殺傷具有抗性)并顯著延長TRU-015治療動物的存活時間。為了測定CD20發揮該效應的機制，對接受Ramos腫瘤移植的小鼠進行天然殺傷(NK)細胞耗竭實驗。如上所述地給小鼠植入Ramos腫瘤系，在第0、4、8和12天給予所有小鼠抗AsialoGM1IV抗體(WAKO，Dallas,TX)以耗竭NK細胞。然后再在第1、3、5、7和9天給予小鼠TRU-015、利妥昔單抗或HuIgGIV。僅給予TRU-015的小鼠在第15天的存活率為50%，在第35天下降到約30%，而接受TRU-015和NK細胞耗竭抗體的小鼠在第15天的存活率為約40%，在第25天下降到約20%。僅接受利妥昔單抗的動物在第15天的存活率為約50%,在第27天下降到10%，而接受利妥昔單抗和NK細胞耗竭抗體的小鼠在第15天的存活率為約30%,在第20天下降到10%。這些結果表明，NK細胞在TRU-015和利妥昔單抗的作用機制中可能起到某些作用，因為NK細胞的耗竭降低了B細胞耗竭治療的功^:。實施例4將單劑量CD20特異性結合分子給予非人靈長類00153上述結果表明，TRU-015在體外能有效耗竭B細胞。為了測定B細胞在體內耗竭的功效，給恒河猴(cynomolgusmonkey)輸注CD20特異性SMIP并測定該藥物的藥代動力學和藥效學。在起始治療方案中，讓恒河猴(i^2只/組)接受單次IV劑量的10mg/kgTRU-015或另外2種臨床前形式的TRU-015。用非優化流式細胞儀方案以跟蹤CD20+細胞和CD40+細胞，測定外周血中B細胞的百分比。所有6只動物都有明顯的外周B細胞耗竭并在第35天基本上恢復。為了測定TRU-015在體內的藥代動力學(PK)和藥效學(PD)，給猴子注射(IV)單劑量10mg/kgTRU-015、另一種臨床前CD20靶向候選藥、利妥昔單抗或PBS(n=3只/組)。外周血記為基線，然后在第l和3天后給藥，每周一次給藥(共12周)，然后每2周一次給藥(再進行12周)，通過流式細胞儀進行分析。在該項研究中，觀察到用TRU-015和利妥昔單抗后，B淋巴細胞亞類從外周血中快速耗竭。通過測定CD40+細胞或CD20+細胞的恢復情況，將使用TRU-015與使用用利妥昔單抗時的B細胞恢復情況進行比較。然而，恢復的細胞較少表達CD20。治療中沒有發生與TRU-015用藥相關的不良安全性事件。然后進行劑量范圍研究，其中給18只恒河猴(11=3只/組)注射(IV)單劑量TRU-015(0.01、0.1、l.O或10mg/kg)或利妥昔單抗(IOmg/kg)或PBS。在不同時間點采集外周血樣，進行流式細胞儀分析。評價標記包括CD19和CD20,以評〗介反應和恢復。單次IV給予后，利妥昔單抗組和高劑量TRU-015組(1.0和10mg/kg)的循環B細月包趨于產生類似的起始反應。一i&而言，在所有3個治療組中，外周血B淋巴細胞亞類CD19+和CD20+都能有效被耗竭。研究結果見圖1A。對B細胞耗竭過程的進一步研究表明，截止到輸注后100天為止，接受TRU-015的患者的B細胞水平為基線水平的約30%。在第200天，耗竭保持為基線水平的約55%,而利妥昔單抗治療組的B細胞耗竭在第200天為基線的約60%(圖1B)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>AUC二濃度-時間曲線下面積，(ug-hr/mL);Cmax^最大濃度；SD二標準差;r/f半衰期因此，該項研究表明TRU-015的效果是劑量依賴性的、可逆的并可重現的。實施例5將TRU-015給予人類患者為了評價TRU-015對人類患者的PK和PD,對40名患有類風濕性關節炎的個體進行單劑量TRU-015治療，范圍為0.015-15mg/kg。在15分鐘至12小時的時間范圍內，按照單次靜脈內給藥，將TRU-015給予患者。患者接受如下劑量隊列1-0.015mg/kg、P人歹寸2—0.05mg/kg、隊列3—0.15mg/kg、隊歹寸4—0.5mg/kg、隊列5—1.5mg/kg、卩人列6—5mg/kg、卩人列7—15mg/kg和卩人列8-5mg/kg。通過流式細胞術，在TRU-015輸注后的不同時間點測定外周血CD19+細胞，測定對循環B細胞的影響。在這些患者中，B淋巴細胞耗竭表現出劑量依賴方式，用B淋巴細胞下降程度和持續時間來表示(圖2)。結果表明，在隊列6和7中分別接受單劑量5mg/kg和15mg/kgTRU-015的患者，在輸注后至多4周表現出幾乎完全的B細胞耗竭。接受1.5mg/kgTRU-015的患者，在4周內表現出小于15%的B細胞恢復，而接受0.5mg/kg的患者則在第4周結束時表現出B細胞為基線的約45%。從這些研究中沒有得到有用的PK數據。這些結果表明，將一定劑量范圍的TRU-015給予人類患者能有效降低需要這類治療的患者的B細胞群體。實施例6用CD20特異性SMIP治療原發性炎性肌病為了測定CD20特異性SMIP對IIM發展的效果，人類患者用示例性SMIP即TRU-015治療，并且跟蹤病程，測定CD20特異性SMIP治療對B細胞耗竭、B細胞恢復的效果和其它效果。第一治療組的患者接受安慰劑或單劑量5mg/kgTRU-015。第二治療組的患者隨枳4妾受兩個劑量的安慰劑或5mg/kgTRU-015，在基線給予第一劑量，在第7天給予第二劑量。第三治療組的患者隨機接受安慰劑或單劑量15mg/kgTRU-015。至少6名活動性多肌炎(PM)或皮肌炎(dermatomysositis,DM)的患者參與到各治療組中。各組都包括約4名活性劑治療患者和2名安慰劑治療患者。對患者至少進行12周的評價。每4周一次對明顯有B細胞耗竭的患者進行評價，監測疾病活性和B細胞恢復。B細胞耗竭定義為絕對B細胞計數下降到低于正常范圍的下限。B細胞恢復定義為絕對B細胞計數恢復到以下任一項l)患者基線值的70%;或2)正常范圍。在給予TRU-015或安慰劑之前，先用曱潑尼龍(例如SOLUMEDROL100mgIV)、對乙酰氨基酚和抗組胺藥(例如苯海4立明、氯雷他定或類似產品)對各患者進行預治療。由醫生評價各患者并確定這些預治療的合適劑量。然后患者通過IV輸注接受合適劑量的TRU-015或安慰劑。將合適量的TRU-015經IV輸注給予患者。TRU-015的劑量按體重計(mg/kg)。然而，體重在110kg以上的任何患者都按體重110kg來計算劑量。在玻璃IV瓶中用稀釋劑(例如0.9。/。氯化鈉，美國藥典)制備TRU-015。化合物的輸注速率開始為25mL/小時。30分鐘后，如果未見毒性的話，速率可增加至50mL/小時。如果能耐受的話，每20-30分鐘可將速率增加25mL/小時(不要超過250mL/小時)。在第1天(給藥后18-24小時)，按照以下程序評價患者同時采用的治療方法、不良事件評價、生命體征(血壓、脈搏、體溫和呼吸率)、定向身體檢查、流式細胞儀測定和研究血清中的藥物濃度。在第7天(l周)，按照以下程序評價患者同時采用的治療方法、不良事件評價、生命體征、定向身體檢查、流式細胞儀測定、血液學特征(CBC分類和血小板計數)、尿液分析、化學特征(電解質、BUN、肌酸酐、堿性磷酸酶、總蛋白和白蛋白)、LFT(AST、ALT、LDH)、肌酶(CPK、醛縮酶)，以及對血清樣品進行藥物濃度研咒。在第14天(2周)、第28天(4周)、第42天(6周)、第56天(8周)、第70天(10周)、第84天(12周)，此后每4周一次，按照以下程序評價患者同時采用的治療方法、不良事件評1介、生命體征、定向身體檢查、手肌試驗、肺活量(僅在第84天)、患者的整體評價/醫生的整體評價、根據HAQ,肌炎疾病活性評價工具而確定的失能指數和定量免疫球蛋白(僅在24周)。以下各項疾病活性測定都將用于評價療效醫生的整體活力評價；患者的整體活力評價；肌肉強度評價15個肌群(頸屈肌、三角肌、二頭肌、腕伸肌、臀大肌、臀中肌、四頭肌、踝屈肌)，各項在Kendall10-點量表上記分；身體機能健康評價問巻調查(HealthAssessmentQuestionnaire,HAQ)失能指數；肌肉相關酶CPK、醛縮酶、AST、ALT、LDH;肌肉外活性評價由來自肌炎疾病活性評價工具的6項目測類似評分組成，評價體質、皮膚、胃腸道、關節、心臟和肺部活性。除了對個體結果的測定外，還評價患者是否達到國際月幾炎疾病i平"f介#口臨床研究(InternationalMyositisAssessmentandClinicalStudies,IMACS)小組所提出的復合反應標準(Rider，Jw/zntoA/zew肌2004，50:2281-90)。這些初步反應標準所界定的反應者是這樣的個體所述個體在6項核心系列測定(以上列出)中至少有3項達到20%以上的改善，而且不超過2項標準惡化25%以上。如果肌肉強度惡化25%以上，就不能認為患者是反應者。初步臨床反應評價臨床反應的初步評價是肌肉酶水平的改善。在12周內比較CPK的改善，以測定初步功效分析，使用基線上的曲線下面積(AUC)分析，比較TRU-015治療患者與接受安慰劑的患者。也評價了平均CPK和醛縮酶水平，CPK和醛縮酶下降的百分率以及達到有意義改善的時間(從基線計下降30%)。第二類評價是基于肌肉強度的改善，是通過上述15個肌肉群的手肌測定而判定的，在12周內使用基線上的AUC分析，比較TRU-015治療患者與接受安慰劑的患者，根據手肌測定評分的改善而測定肌肉強度的改善。另外，也評價了平均肌肉強度、肌肉強度變化百分率和達到有意義改善的時間(從基線計達12%的改善)。也評價了達到15°/。改善的時間。也評價了其它各項個體反應測定。采用醫生和患者的整體評價、HAQ失能指數、肌肉酶(而非CPK和醛縮酶)和肌肉外活性，評價了平均改善、變化百分率和達到有意義改善的時間。實施例7用CD20特異性SMIP治療類風濕性關節炎患者在RA患者中，讓B細胞進行抗原依賴性克隆表達、親和力成熟和并分化為漿細胞，產生類風濕因子，這是一種公知的RA侵襲的預后因子。免疫復合物介導的炎癥和抗原呈遞是B細胞的額外作用，認為在它RA發病機制中起作用。在人RA滑膜-SCID小鼠嵌合物的研究中，已知T細胞激活是B細胞依賴性的(Takemura等，《//www"o/.2001,167:1072-80)。通過補體依賴性細胞毒性(CDC)減少對細胞殺傷，使TRU-015適用于炎性疾病。然而，TRU-015保持了強效ADCC活性，針對TRU-015的反應可能不如對CD16多態性敏感。在單劑量給藥中，患者以劑量逐漸增加的方式、按照以下水平之一來接受單次靜脈內(IV)輸注TRU-015(^4名患者/隊列)0.015mg/kg、0.05mg/kg、0.15mg/kg、0.5mg/kg、1.5mg/kg、5mg/kg、15mg/kg和30mg/kg。不需要活動性RA。如上所述，采用相同制劑和類似的輸注速率，經靜脈內給予該藥物，用于治療IIM。在第1天(給藥后18-24小時)，評價患者的以下指標同時采取的治療方法、不良事件、定向身體檢查、生命體征、流式細胞術、血液學特征、凝血特征(PT/PTT)、尿液分析、化學特征、對血清評價藥物濃度。在第3天(72小時)，評價患者的以下指標同時采取的治療方法、不良事件、定向身體檢查、生命體征、流式細胞術、血液學特征(CBC分類和血小板計數)、對血清評價藥物濃度。在第7天(l周)、14天(2周)、21天(3周)、28天(4周)，對患者完成以下程序同時采取的治療方法、不良事件、定向身體檢查、生命體征、流式細胞術、血液學特征(CBC分類和血小板計數)、凝血特征(PT/PTT)[第7、14和28天]、尿液分析[第7、14和28天]、化學特征[第7、14和28天]、定量免疫^^蛋白[僅在第28天]、類風濕因子/CCP抗體[第14和28天]、對血清樣品評價藥物濃度[并測定針對TRU-015的抗體，在第28天]、血清庫[僅在第28天〗。在第6、8、10和12周，對明顯有B細胞耗竭的患者持續進行如上所述的評價，直到有證據表明B細胞恢復。評價包括以上指標，還包括凝血特征(PT/PTT)[第8和12周]、尿液分沖斤[第8和12周]、化學特征[第8和12周]、定量免疫球蛋白[第8和12周]、類風濕因子/CCP抗體[僅在第8和12周]、對血清樣品評價藥物濃度[僅在第6和8周]并檢測針對TRU-015的抗體[僅在第8周]和血清庫[僅在第12周]。活動性疾病研究:使第一治療組的患者隨機接受安慰劑或單劑量5mg/kgTRU-015。第二治療組的患者隨積4妄受兩個劑量的或者安慰劑或者2.5mg/kgTRU-015，在基線給予第一劑量，在第7天給予第二劑量。第三治療組的患者隨機接受兩個劑量的或者安慰劑或者7.5mg/kgTRU-015，在基線給予第一劑量，在第7天給予第二劑量。第四治療組的患者隨機接受或者安慰劑或者單劑量15mg/kgTRU-015。至少6個活動性PM或DM患者參與到各治療組。各組包括約10個活性劑治療患者和2個安慰劑治療患者。除了進行上述臨床前評價外，對該治療組中患有活動性RA的患者進行以下評價完全關節評價(Completejointassessment)(置換關節不作評價)、患者整體評價/醫生整體評價、患者疼痛評價、通過健康評價問巻調查(HAQ)測定的失能指數、晨僵持續時間、CRP和ESR。按照實施例3所述，各患者先用曱潑尼龍(例如SOLUMEDROL100mgIV)、對乙酰氨基酚和抗組胺藥進行預治療。對患者至少監測4周。此后每2-4周一次對明顯有B細胞耗竭的患者進行評價以監測B細胞恢復。實施例8類風濕性關節炎患者用TRU-015治療后的臨床評價對接受TRU-015的RA患者的B細胞耗竭范圍進行測定，并與治療開始前的患者平均基線水平進行比較。圖4顯示在接受TRU-015的RA患者中B細胞耗竭的持續時間，這是通過測定CD19+B細胞數量而確定的。接受至少0.5mg/kgTRU-015的患者在輸注后1天就表現出B細胞幾乎完全耗竭。接受單劑量15mg/kgTRU-015或2X15mg/kg劑量的患者的B細胞在輸注后第84天完全耗竭，到第168天上升至基線的約10-15%。接受5mg/kg劑量的患者在輸注后第84天顯示出B細胞基線水平的約15-20%,到第168天上升至約35%。接受單劑量1.5mg/kgTRU-015的患者在第84天時B細胞水平水平為基線的約30%,此水平一直保持到第168天。在第二組治療方案中，給予患者5mg/kg的2X2.5mg/kg劑量或15mg/kg的2X7.5mg/kg劑量，在一定時間測定B細胞耗竭。在2X2.5mg/kg劑量下的平均B細胞耗竭反映出接受IX5mg/kg的患者的B細胞耗竭，在第72天下降到基線的約10%，到第172天上升到基線水平的約30%。然而，對接受單劑量15mg/kgTRU-015或2X7.5mg/kg劑量的患者進行比較，顯示出在第84天時兩組B細胞水平都幾乎完全耗竭，而在第168天，接受單劑量的患者的B細胞數量略有增加(至約15%)，而給予兩個劑量的患者的B細胞數量則增加至基線水平的約35-40%(圖5)。評價所有患者是否含有針對TRU-015的中和抗體。經檢測的血清樣品全都是中和抗體陰性。對5mg/kg和15mg/kg組患者的血清樣品進行;險測，都未見中和抗體。然而，在取樣時血清中仍然含有TRU-015。治療期間，也監測患者的類風濕因子(RF)抗體水平，并將其分為RF+患者或RF-患者。治療后第42周時這些組的最大臨床反應見下表4。<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>這些結果表明，TRU-015能有效地治療類風濕性關節炎。TRU-015治療是暴露給這樣的藥物所述藥物的劑量通常是纟姿比例來計，而且其血清半衰期與大蛋白質治療藥類似。觀察用TRU-015治療的劑量反應；其中隨著TRU-015劑量的增加，B細胞耗竭通常在程度和持續時間上也增加，在延長時間周期中表現出100%的細胞壽€竭。此外，迄今為止未檢出針對TRU-015的中和抗體。[00202根據上述說明性實施例提出對本發明的各種修改和變動是本領域技術人員可以預料到的。因此，只有所附權利要求書中出現的這類限制才能用于界定本發明的范圍。權利要求1.一種用于治療患有或疑似患有異常B細胞活性相關疾病的個體的方法，所述方法包括給予所述個體治療有效單劑量的CD20特異性結合分子。2.—種用于治療患有或疑似患有風濕病的個體的方法，所述方法包括給予所述個體治療有效單劑量的CD20特異性結合分子。3.權利要求2的方法，其中所述風濕病選自類風濕性關節炎、關節強硬性脊推炎、皮肌炎、亨諾赫-舍恩萊因紫癜、青少年類風濕性關節炎、銀屑病性關節炎、雷諾綜合征、賴特綜合征、結節病、脊推關節病、進行性系統性硬化病和肌炎。4.權利要求3的方法，其中所述疾病是類風濕性關節炎。5.權利要求4的方法，其中給予CD20特異性結合分子導致ACR評分為20。6.權利要求4的方法，其中所述個體的生物樣品中的B細胞數量下降。7.權利要求4的方法，其中所述個體的生物樣品中的RANK配體表達下降。8.權利要求6或7的方法，其中所述生物樣品是血液、滑液或滑膜活檢樣品。9.一種用于治療患有或疑似患有炎性腸病的個體的方法，所述方法包括給予所述個體治療有效單劑量的CD20特異性結合分子。10.權利要求9的方法，其中所述炎性腸病選自潰癡性結腸炎和克羅恩病。11.權利要求10的方法，其中所述疾病是克羅恩病。12.權利要求11的方法，其中給予CD20特異性結合分子導致克羅恩病活性指標(CDAI)評分的改善范圍為約50單位至約70單位。13.權利要求10的方法，其中給予CD20特異性結合分子導致核周抗嗜中性粒細胞抗體(pANCA)或抗釀酒酵母抗體(ASCA)減少。14.權利要求10的方法，其中所述疾病是潰瘍性結腸炎。15.—種用于治療患有或疑似患有中樞神經系統自身免疫性疾病的個體的方法，所述方法包括給予所述個體治療有效單劑量的CD20特異性結合分子。16.權利要求15的方法，其中所述中樞神經系統自身免疫性疾病選自多發性硬化、變應性腦脊髓炎、視神經脊髓炎、狼瘡性脊髓炎和狼瘡性腦炎。17.權利要求16的方法，其中所述疾病是多發性硬化。18.權利要求17的方法，其中給予CD20特異性結合分子導致擴展失能狀況量表(EDSS)評分至少下降0.5。19.權利要求16的方法，其中所述疾病是變應性腦炎。20.權利要求16的方法，其中所述疾病是視神經脊髓炎。21.—種用于治療患有或疑似患有脈管炎的個體的方法，所述方法包括給予所述個體治療有效單劑量的CD20特異性結合分子。22.權利要求21的方法，其中所述脈管炎選自貝赫切特綜合征、中樞神經系統脈管炎、丘-施綜合征、冷球蛋白血癥、巨細胞性動脈炎、亨諾赫-舍恩萊因紫癜、過敏性脈管炎/血管炎、川崎病、白細胞石皮碎性脈管炎、多脈管炎、結節性多脈管炎、多肌痛、多軟骨炎、類風濕性脈管炎、無脈病、韋格納肉芽腫病、肝炎所致脈管炎、家族性地中海熱、微小多脈管炎、科根綜合征、Whiskott-Aldrich綜合征和血栓閉塞性脈管炎。23.—種用于治療患有或疑似患有原發性炎性肌病的個體的方法，所述方法包括給予所述個體治療有效單劑量的CD20特異性結合分子。24.權利要求23的方法，其中所述炎性肌病選自多肌炎和皮肌炎。25.權利要求24的方法，其中給予CD20特異性結合分子導致原發性炎性肌病標準(IIMC)評價所提出的5項標準中至少一項下降。26.權利要求24的方法，其中給予CD20特異性結合分子導致選自以下的IIM相關因子下降肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶、醛縮酶、C-反應蛋白、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和抗核自身抗體(ANA)、肌炎特異性抗體(MSA)以及針對可提取的核抗原的抗體。27.權利要求24的方法，其中給予CD20特異性結合分子導致肌酸激酶(CK)水平下降。28.權利要求2、9、15、21或23中任一項的方法，其中所述結合分子與第二藥物聯合用藥。29.權利要求26的方法，其中所述第二藥物選自第二B細胞特異性結合分子、細胞因子、趨化因子、生長因子和免疫抑制藥。30.權利要求27的方法，其中所述第二藥物選自非甾體抗炎藥(NSAID)、鎮痛藥、糖皮質激素、治療關節炎的調節疾病用抗風濕藥(DMARD)和生物反應調節劑。31.—種用于治療患有或疑似患有異常B細胞活性相關的癌癥的個體的方法，所述方法包括給予所述個體治療有效單劑量的CD20特異性結合分子。淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、不明原因的可能惡化的B細胞增殖、淋巴瘤樣肉芽肺和移植后淋巴增殖障礙。32.權利要求29的方法，其中所述個體的B細胞數量下降。33.權利要求32的方法，其中所述個體選自以下的生物樣品中的B細胞數量下降血液、腫瘤活檢樣品、唾液、淋巴結、扁桃體、骨髓、胸腺和其它富含淋巴細胞的組織。34.權利要求29的方法，其中所述CD20特異性結合分子與第二藥物聯合用藥。35.權利要求34的方法，其中第二藥物選自第二B細胞特異性結合分子、細胞因子、趨化因子、生長因子、免疫抑制藥、化療藥和放療藥。36.權利要求29的方法，其中所述個體對CD20特異性結合分子的治療至少表現出部分反應。37.權利要求29的方法，其中與用利妥昔單抗而不用其它CD20結合分子治療相比，所述個體對CD20結合分子治療的反應有所改善。38.權利要求37的方法，其中所述個體也接受利妥昔單抗。39.權利要求l、2、9、15、21、22或29中任一項的方法，其中所述CD20特異性結合分子是CD20特異性的小模塊免疫藥物(SMIP)TRU-015。40.權利要求39的方法，其中所述CD20特異性SMIP的給藥劑量范圍為約0.01mg/kg至約50mg/kg。41.權利要求40的方法，其中所述CD20特異性SMIP的給藥劑量范圍為約0.015mg/kg至約30mg/kg。42.權利要求41的方法，其中所述CD20特異性SMIP的給藥劑量范圍為約0.015mg/kg、約0.05mg/kg、約0.15mg/kg、約0.5mg/kg、約1.5mg/kg、約5.0mg/kg、約15mg/kg或約30mg/kg。43.權利要求39的方法，其中所述CD20特異性結合分子對CD20的親和力范圍為約1nM至約30nM。44.權利要求39的方法，其中所述CD20特異性結合分子的體內半衰期為約7天至約30天。45.權利要求l、2、9、15、21、22或29中任一項的方法，其中給予CD20特異性結合分子導致個體的B細胞數量下降至少20%。46.權利要求45的方法，其中給予CD20特異性結合分子的結果是個體的B細胞數量下降至少約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。47.—種制造品，所述制造品包括CD20特異性結合分子和注明權利要求1的方法的標簽。48.—種制造品，所述制造品包括CD20特異性結合分子和注明權利要求2的方法的標簽。49.一種制造品，所述制造品包括CD20特異性結合分子和注明權利要求9的方法的標簽。50.—種制造品，所述制造品包括CD20特異性結合分子和注明權利要求15的方法的標簽。51.—種制造品，所述制造品包括CD20特異性結合分子和注明權利要求21的方法的標簽。52.—種制造品，所述制造品包括CD20特異性結合分子和注明權利要求23的方法的標簽。53.—種制造品，所述制造品包括CD20特異性結合分子和注明權利要求29的方法的標簽。全文摘要本發明提供使用單劑量CD20特異性結合分子來治療涉及異常B細胞活性的疾病的材料和方法。文檔編號A61P19/02GK101267836SQ200680034433公開日2008年9月17日申請日期2006年7月25日優先權日2005年7月25日發明者D·J·伯奇申請人:特魯比昂藥品公司