包含抗病毒藥組合的穩定的固定劑量的制劑及使用干法制粒制備該制劑的方法

專利名稱：：包含抗病毒藥組合的穩定的固定劑量的制劑及使用干法制粒制備該制劑的方法包含抗病毒藥組合的穩定的固定劑量的制劑及使用干法制粒制備該制劑的方法發明背景本申請涉及治療病毒感染，特別是HIV感染的產品，其中使用了已知的抗病毒化合物依法韋侖(商品名Sustiva，也已知為EFV)、恩曲他濱(商品名Emtriva，也已知為FTC)和替諾福韋DF(二索羅基延胡索酸酯，也已知為TDF)(商品名Viread，與恩曲他濱組合以商品名Truvada出售)。Truvada產品由恩曲他濱和替諾福韋DF經濕法制粒生產(WO04/64845),在此條件下生成化學穩定的劑型。這個產品不包含依法韋侖。使用依法韋倉以及恩曲他濱和替諾福韋DF的HIV療法已經被認為是令人所期望的(此后稱為"三聯，，(triplecombination),參見WO04/64845)。然而，生產商業上可行的三聯產品將要求最終的產品符合嚴苛的FDA要求，即其對于商業產品Viread(替諾福韋二索羅基延胡索酸酯)、Emtriva(恩曲他濱)和Sustiva(依法韋侖)是生物等效的，而且片劑應是易于患者吞咽的適宜大小。最初的努力是使用濕法制粒將這三種藥物(活性藥物中間體，即APIs)組成單一、基本上均勻的組合物，但這沒能生成化學穩定的片劑。這個組合片中的替諾福韋DF高度不穩定而且在穩定性研究中迅速被降解。依法韋侖制劑意外地與替諾福韋DF不相容，目前原因歸咎于在制劑的依法韋侖部分發現的表面活性劑(月桂硫酸鈉)。另一個嘗試是生成三聯物，這次使用三部分組合物進行干法制粒并略去表面活性劑。由此得到的片劑在人體臨床試驗中沒實現與依法韋侖生物等效。血流中依法韋侖的峰濃度和總的藥物暴露(Cmax和AUC),都在商業比較儀測定的Sustiva(依法韋侖)片劑的參數之下。發明人推斷，要實現與Sustiva生物等效，三聯(依法韋侖/恩曲他濱/替諾福韋二索羅基延胡索酸酯)片劑中至少應含有表面活性劑。接下來通過以下方法制備組合片劑，即將依法韋侖組份和表面活性劑以及其它的賦形劑進行濕法制粒，用干法制粒單獨制備Truvada組份，將顆粒混合，把混合物壓成片劑，然后對片劑進行薄膜包衣。令人意外的是，這個方法也沒能在商品Sustiva(依法韋侖)和臨床試驗物質(即提議的商業三聯產品)之間產生預期的生物等效性。需要一種具有新穎性和創造性的步驟以此來克服三聯劑型更直接制法中的缺點。如待決案U.S.S.N.60/771,279(在相同的日期申請，在此通過參考而明確引入)中進一步描述的那樣，三聯片劑的穩定性和生物等效性目標最終在一個示例性實施方案中實現，即將恩曲他濱/替諾福韋二索羅基延胡索酸酯組份進行干法制粒，將依法韋侖組份進行濕法制粒，沒有使用簡單地將顆粒組合的直接方法，取而代之的是將顆粒進行編排以生成多層劑型，一個組分包含恩曲他濱/替諾福韋二索羅基延胡索酸酯成分，另一個包含依法韋侖成分。這使替諾福韋DF與表面活性劑的接觸最小化，卻仍保留了依法韋侖的賦形劑以及對實現生物等效性有貢獻的方法特征。三聯劑型出現的另一個障礙是本申請所要解決的問題。如上所述，將存在于已知商品Truvada和Sustiva片中的賦形劑簡單混合是不好的，因為所得片劑將包含已知片劑中所負載的所有賦形劑，這對于一個片劑來說將很大并會生成難以吞咽的劑型，因此不便于患者使用。由此，目標是制備恩曲他濱和替諾福韋DF的高濃度制劑，其減少了制劑中賦形劑的數量，這將有助于縮小三聯片劑的大小。然而，簡單地減少賦形劑與API的比例以及使用已知的濕法制粒不能有效地生成穩定的組合物。雖然現有技術報道用濕法制粒成功地制備了化學穩定的Truvada制劑(WO04/64845)，但是這些制劑典型地包含了賦形劑對API的相對較低的比例，類似為1:1。制劑的濕法制粒，其中賦形劑的比例已經被降低到三聯片劑易于處理的量，令人意外地得到了化學不穩定的制劑。不囿于任何特定的操作理論，發明人相信，依法韋侖(其比恩曲他濱和替諾福韋DF的溶解度低)濕法制粒中所需的如此多的水將后兩種APIs溶解為低共熔混合物。這些溶解的APIs,當在制粒期間進行千燥時，形成了玻璃狀或無定形的產物，這與晶體API相比是化學不穩定的。在已有的方法中，存在了足量的賦形劑以改善過量水的影響，但當賦形劑與API的比例降低到三聯口服劑型易于處理所需的水平時，這還是不可行的。發明總述根據本發明，通過將含有藥學上可接受的賦形劑、替諾福韋DF以及恩曲他濱的組合物進行干法制粒來提供恩曲他濱/替諾福韋DF的穩定制劑。從制粒過程中略去產生不穩定作用(destabilizing)量的水，消除了形成恩曲他濱/替諾福韋DF低共熔混合物的缺陷并增強了所得藥物產品的穩定性。使用本發明的方法生成了含有干法粒化的恩曲他濱和替諾福韋DF的組合物。發明詳述干法制粒本身是已知的藥物制備方法。通常，API與賦形劑和潤滑劑賦形劑組合，然后壓制形成團塊(mass)。然后典型地將這個團塊粉碎或碾碎，然后過篩得到預期大小的顆粒。將該顆粒物壓成片，裝入膠嚢或以常規方式形成其它的單一劑型。本發明至少部分針對于通過這個方法生成的產品。壓制成團塊可通過常規的設備完成。典型的是，將API和賦形劑通過滾筒壓制機或用于壓制的chilsonator裝置。然而，其它的壓制方法，例如壓成預壓片(slugs)(即"擊壓"(slugging))，也是API/賦形劑混合物所任選使用的。之后依次為粉碎或碾碎，然后任選過篩得到預期大小的顆粒。含有恩曲他濱和替諾福韋DF的干法粒化組合物被定義為是干法制粒的產物。這個組合物基本上保留了晶體APIs并基本上不含有干燥共熔的恩曲他濱/替諾福韋DF。其將典型地包含小于約15%重量，通常小于約10%,—般小于約5%的干燥共熔混合物。干法粒化的組合物包括干法制粒的直接產物，即干燥顆粒本身，以及由這種顆粒制備的產品包括片劑、膠囊、栓劑和其它的藥物劑型。將干燥顆粒制成這種物理形式大體上保留了干燥顆粒原料的特性而且物理形式中呈現的顆粒成分的性質不會產生實質的變化。干法制粒在不存在產生不穩定作用量水的情況下進行，"不穩定作用"是能使替諾福韋DF和/或恩曲他濱降解(在下面定義)的液態水的量。通常，在干法制粒期間根本沒有加入水。不可避免，賦形劑中一般都會有結合、夾帶或吸收的水。這些水對替諾福韋DF的穩定性將不會產生顯著的不利作用，因此并沒有排除在本發明之外。通常，任何來源的液態水(加入的或原位產生的)，例如化學反應，縮聚，夾帶冰等，都被從顆粒中除去了。然而，在制粒期間任選加入較少量的液態水。這一般將小于約5%重量，通常小于約1%重量，然而，這些水是產生或補給的。最終顆粒產物中存在的水高達約10%重量(KarlFischer),但是優選更少，低到0.1%重量。然而，所能容許的水量可以在制粒中隨其它因素變化，例如賦形劑的類型，溫度等等。例如，如果包括了引濕性賦形劑，這會將加入的水轉變為結合形式。必須滿足的是，水將不會降解終產物中的替諾福韋DF。通常，水在預制粒階段(制備在制粒中能直接使用的組合物)和制粒期間本身就被除去了。不存在水或"干燥"不意味著不存在液體。根據本發明，任選用有機溶劑進行制粒，前提是排除了產生不穩定作用量的水。干法制粒生成的產品包含最小量的水。產品顆粒或由此形成的劑型中的水量通過干燥失重(LOD)或KarlFischer法測定。本發明組合物的LOD為約15。/。，約10%，約5%或典型地小于約3%重量。KarlFischer水為約0.1到10%重量，通常小于約5%重量，或小于約2%。與粒化相反，最終制劑中的水量是粒化水以及隨后制備步驟梨醇酯60和聚乙二醇-150和硬脂酸酯-20[polawaxGP200，polawaxNF]，鯨蠟硬脂醇和鯨蠟硬脂基聚葡糖苷[EmulgadePL1618]，鯨蠟硬脂醇和鯨蠟硬脂基聚氧乙烯(20)醚[Emulgade1000NLCosmowax]，鯨蠟硬脂醇和聚氧乙烯(40)蓖麻油[EmulgadeFSpecial],鯨蠟硬脂醇和聚氧乙烯(40)蓖麻油和鯨蠟硬脂基硫酸鈉[EmulgadeF],硬脂醇和硬脂基聚氧乙烯(7)醚和硬脂基聚氧乙烯(10)醚[EmulgatorE2155],鯨蠟硬脂醇和硬脂基聚氧乙烯(7)醚和硬脂基聚氧乙烯(10)醚[EmulsifyingwaxU.S.N.F.]，硬脂酸甘油酯和硬脂酸聚乙二醇(75)酯[Gelot64]，丙二醇鯨蠟基聚氧乙烯(3)醚乙酸酯[HetesterPCS]，丙二醇異鯨蠟基聚氧乙烯(3)醚乙酸酯[HetesterPHA],鯨蠟硬脂醇和鯨蠟基聚氧乙烯(12)醚和油基聚氧乙烯(12)醚[Lanbrito1.WaxN21]，硬脂酸聚乙二醇(6)酯和硬脂酸聚乙二醇(32)S旨[Tefose1500]，硬脂酸聚乙二醇(6)酯和鯨蠟基聚氧乙烯(20)醚和硬脂基聚氧乙烯(20)醚[Tefose2000],硬脂酸聚乙二醇(6)酉旨和鯨蠟基聚氧乙烯(20)醚和硬脂酸甘油酯和硬脂基聚氧乙烯(20)醚[Tefose2561]，硬脂酸甘油酯和鯨蠟硬脂基聚氧乙烯(20)醚[TeginacidH,C，X]。陰離子乳化劑如自乳化型硬脂酸聚乙二醇(2)酯(PEG-2stearateSE),自乳化型硬脂酸甘油酯(glycerylstearateSE)[Monelgine，CutinaKD],丙二醇硬脂酸酯[TeginP],鯨蠟硬脂醇和鯨蠟硬脂基硫酸鈉[LanetteN，CutinaLE，CrodacolGP],鯨蠟硬脂醇和月桂基硫酸鈉[LanetteW]，三(羊毛脂醇聚氧乙烯(4)醚)磷酸鹽和硬脂酸乙二醇酯和硬脂酸聚乙二醇(2)酯[Sedefos75],硬脂酉交甘油酉旨和月才圭基石克酸鈉[TeginacidSpecial]。陽離子酉臾石成(cationicacidbases)如鯨蠟硬脂醇和溴化鯨蠟基三曱銨。乳化劑的用量基于所述組合物的總重量可以例如是1-30重量％，特別是4-20重量％以及優選5-10重量％。當配制成0/W乳液時，上述乳化劑體系的優選用量可以占油相的5%畫20%。助劑和添加劑化妝品/藥物制品，例如霜，凝膠，洗劑，醇和水/醇溶液，乳液，蠟/脂肪組合物，棒狀制劑，粉末或軟膏，可以另外包含溫和表面活性劑、超富脂劑、稠度調節劑、增稠劑、聚合物、穩定劑、生物活性成分、除臭活性成分、抗頭皮屑劑、成膜劑、溶脹劑、紫外線吸收劑、抗氧化劑、水溶助劑(hydrotropicagent)、防腐劑、驅蟲劑、自曬黑劑、增溶劑、芳香油、著"藥學上不可接受的量"被定義為以下量的每種降解產物。降解產物任選以其絕對量或增加量而測定。降解產物的絕對量或總量只是檢品中發現的量。增加量是相對于API原料中存在的降解產物(如果有的話)在產物中出現的額外量。此外，任選在一個或兩個時間點測定降解產物的量。一個是投放市場的時間。另一個是在下述條件下暴露于貯存環境中之后，即如下所述的貯存期。投放時的總量(第一次出售)小于約3%，通常約1.5。/。的單-POCPMPA,小于約1%，通常約0.5°/。的二聚物，小于約0.5%，通常約0.25%的混合二聚物。小于約0.5°/。，通常約0.2。/。的FTU。貯存期的總量(在干燥劑和25。C/60y。RH下貯存24個月)小于約10%，通常約5%的單-POCPMPA，小于約2%，通常約1%的二聚物，小于約2%，通常約1%的混合二聚物。小于約4%，通常約2。/。的FTU。投放時的增加量(第一次出售)小于約2%,通常約0.5。/。的單-POCPMPA，小于約0.6%，通常約0.1%的二聚物，小于約0.3%，通常約0.05%的混合二聚物。小于約0.4%，通常約0.1。/。的FTU。貯存期的增加量(在干燥劑和25°C/60%RH下貯存24個月)小于約9%，通常約4。/。的單-POCPMPA，小于約1.6%，通常約0.6%的二聚物，小于約1.8%，通常約0.8%的混合二聚物。小于約3.9%，通常約1.9。/。的FTU。降解產物的百分比是通過HPLC保留時間的比較確定的降解產物量。在HPLC保留時間比較當中，在已經顯示對依法韋侖、恩曲他濱和替諾福韋DF具有特異性的實驗中，片劑主峰的保留時間必須在包含依法韋侖、恩曲他濱和替諾福韋DF的參照標準制劑主峰保留時間的2%之內。用HPLC實驗測定的每個降解產物的量除以替諾福韋DF和三個降解產物的總量來確定百分比。由此，例如可以想像到，在干法制粒期間可以有少量水存在。這些水可以以液態形式被加入，作為包含在待壓縮的組合物中的賦形劑的附加增溶劑。還可以以結合在引濕性賦形劑中的形式被加入，其中賦形劑包含非常大量的吸收水。如果所得產品在投放時沒有包含超過上述4個實驗范例任意之一所列的對4種污染物中任意一個或多個的具體大致的限定量，那么所述方法將仍然被認為是干法制粒方法。當然，技術人員可以采用更嚴格的標準(即一些污染物的量可以小于上述所列量)，但是這只是個選擇的問題，而且將不對本發明的范圍構成限定。下述制備方法針對本發明的一個實施方案。其它的實施方案也將在技術人員的技能范圍內。這個實施方案給出了包含依法韋侖、恩曲他濱和替諾福韋DF三聯片劑的制備。在這個特定的實施方案中，將最后兩個藥物/賦形劑單獨構成片劑的一部分，其與包含依法韋侖/賦形劑的片劑部分分離但相接觸。然而，我們將能理解，片劑中的恩曲他濱和替諾福韋DF成分，這是本發明的一個實施方案，任選被制成例如獨立產品并不是必須與依法韋侖成分組合。在這種情況下，下述恩曲他濱/替諾福韋DF干法制粒的中間體被任選與其它APIs或賦形劑組合，并壓成片劑或按慣例制成其它的常規單一劑型，例如膠囊、扁嚢劑、栓劑等。三聯片劑的制備方法使用了兩個獨立的制粒步驟。依法韋侖的最終混合物(依法韋侖和賦形劑)通過濕法制粒過程得到，而恩曲他濱、替諾福韋DF和適宜賦形劑則被混合并經過碾壓法被干法粒化。最終的混合物被壓成雙層片，然后被速釋包衣進行薄膜包衣。材料表1、表2和表3分別列出了依法韋侖粉末混合物、FTC/TDF粉末混合物以及薄膜包衣雙層EFV/FTC/TDF片的定量組合物。根據藥物含量因素(DCF)調節依法韋侖、恩曲他濱和替諾福韋DF的量，<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>制備過程中要加入到制劑顆粒內和顆粒外部分中表3薄膜包衣雙層EFV/FTC/TDF片的定量組合物成分占總量的％w/w單位配方(mg/片)依法韋侖粉末混合物57.94898.0FTC/TDF粉末混合物42.06652.0片芯總量100.001550.0歐巴代II粉色(Pink)3.0046.5純水，USP/Epa薄膜包衣片總量1596.5在薄膜包衣期間除去水賦形劑都是省略了級別(compendialgrade)的原料依法韋侖濕法制粒4吏用Niro-FielderPMA-400裝置系列(equipmenttrain)對依法韋侖進行濕法制粒。將依法韋侖、微晶纖維素和月桂硫酸鈉(表l)加入到PMA-400中并混合3分鐘。把交聯羧甲基纖維素鈉和羥丙基纖維素(表l)加入到預混物中并再混合2分鐘。加入純水形成適當的顆粒，隨后在加水后被再次濕法聚合。表4列出了兩個典型批次和子部分的制粒參數信息。所有子部分中水與依法韋侖的比例都為1.30，AB509MixC除外，其中水與依法韋侖的比例為1.25。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>每批的混合物A、B和C都在干燥前混合。通常，濕顆粒要被磨碎，然后干燥到LOD小于或等于1.5%的程度。將千顆粒磨碎并與硬脂酸鎂混合(表l)。依法韋侖制粒中的堆積密度、粒徑和LOD含水量列于表5的前三列(批號B是依法韋侖產品，批號C是恩曲他濱/替諾福韋DF)。粒徑的測定如下使用聲波篩(sonicsifter)(ModelL3P，ATMCorporation,Milwaukee,WI，USA)將10克樣本通過直徑3英寸的濾網篩分。使用下列US標準篩號(開口)弁20(850jim)、#30(600nm)、#40(425nm)、#60(250—、#80(180—和#250(63jim)。攪動和脈沖設定為7，篩分時間為5分鐘。留在篩網和細粉收集器上的粉末量通過計算篩分前后的重量差來測定。幾何平均粒徑通過篩分分布的對數權重來計算。堆積密度的測定如下將樣品裝入lOO-mL量筒中并計算每單位體積空量筒和被裝滿量筒間的重量差。在典型的實施方案中，顆粒的堆積密度為約0.25到0.75g/ml。通過干燥失重(LOD)的含水量測定如下使用加熱燈/平衡裝置(ModelLP16/PM400，Mettler-Toledo，Columbus,OH，USA)在85。C下加熱2.5g樣品15分鐘。粒化過程有相似的堆積密度(0.54到0.56g/mL)和相似的幾何平均粒徑(215到268jim)。最終混合物的LOD值一致為0.98到1.80%。表6列出了依法韋侖制粒中的每個篩分分布。表5依法韋侖粉末混合物和恩曲他濱/替諾福韋DF粉末混合物的物理性質信息<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表6依法韋侖和FTC/TDF粉末混合物的粒徑分布<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>恩曲他濱/替諾福韋DF干法制粒在650L手提箱(totebin)中使用Gallay混合器將恩曲他濱、微晶纖維素、替諾福韋DF和交聯羧曱纖維素(表2)混合10分鐘。加入硬脂酸鎂(表2)并再混合5分鐘。然后把這個預混物轉移到320-LMatcon箱中，該箱與卸料位的錐形閥相適配以便有助于將物料轉移到滾壓進料斗中。使用直徑250mm寬50mm的GerteisMacro-Factor型號250/25/3的光輥對預混物進行滾壓。滾縫厚度(2mm)、軋制速度(10rpm)、壓力(4kN/cm)、振蕩研磨速度(75rpm順時針和逆時針方向)和振蕩細篩開口(1.25mm)在所有的批次中都保持恒定。振蕩研磨旋轉角在所有的批次中也都是相同的，順時針150°逆時針140°。當被加入到滾壓機中時，在所有三個批次中都沒有物料處理問題。整個滾壓過程在進行時，在裝置、形成產品或熔化中都沒有任何明顯的熱積蓄跡象。然后將粒化物與顆粒外的交聯羧甲基纖維素鈉(占總量的34%)和硬脂酸鎂(占總量的47%)混合。恩曲他濱/替諾福韋DF千法粒化物的粒徑、堆積密度和LOD在三個批次中都是相似的并列于表5中(底部的3層格子)。幾何粒徑非常相似，為330到344nm。堆積密度為0.59到0.60g/mL。最終混合物的LOD值恒定在0.91到1.02%。最終粉末混合物的物理性質非常一致。依法韋侖和替諾福韋DF各自粒化物的幾何平均粒徑任選為約100到600nm，堆積密度任選為約0.1到1g/mL，LOD值任選為越0.1到5%重量。最終的混合物依法韋侖粒化物和顆粒外硬脂酸鎂的量根據恩曲他濱/替諾福韋DF干法制粒的產量而進行適當的調節。將依法韋侖粒化物和恩曲他濱/替諾福韋DF干法粒化物在3立方英尺的V型-混合器中混合10分鐘。加入硬脂酸鎂再混合5分鐘。最終粉末混合物的樣品取自混合后的10個不同部分且經混合均勻度分析。依法韋侖和恩曲他濱/替諾福韋DF的最終粉末混合物中所有三個活性成分都顯示了可接受的混合均勻度和同質性，這說明了制劑具有穩固性，不管恩曲他濱/替諾福韋DF干法粒化物和依法韋侖粒化物的粒徑或堆積密度如何。制粒和混合步驟將能夠符合制劑大批生產的要求。片芯的壓制使用配制了上平面/下突"1""、膠嚢型(20.0mmxl0.4mm)沖壓機的StokesGenesisModel757，41定位雙層壓片機(StokesGenesisModel757，41stationbilayertabletpressequippedplain-facedupper/embossed"123"lower,capsule-shaped(20.0mmx10.4mm)punches)將依法韋侖/恩曲他濱/替諾福韋DF的最終粉末混合物壓成片芯。片芯的靶質量是1550mg。片芯的樣本取自壓片期間最少20個相同間隔的位置且分析了含量均勻度。通常，所有在轉盤式壓片機上壓制的粉末混合物都能符合片劑硬度、脆性、片劑厚度、片劑外觀和片重差異的要求。壓片操作在約500片/分鐘或約0.8kg/分鐘(12rpm軋制速度)的速率下進行以得到滿意的片重均勻度。片劑的薄膜包衣適宜的薄膜包衣從可商購制劑中經常規篩選獲得。這個行為完全在普通技術人員的技能范圍內。將各批片芯分成兩個包衣子批次，其在48英寸ThomasEngineeringCOMPU-LAB包衣鍋中用雙-噴嘴噴霧系統進行了薄膜包衣。所有的片芯都用15。/。w/w含水包衣混懸液歐巴代II粉色進行了薄膜包衣，其中混懸液在制備的24小時內都被使用。所有的片芯都使用180g/分鐘的目標噴霧速率進行包衣以達到3.0%的目標增重，這相當于1.5到2.3g/分鐘/kg片劑的標準噴霧速率。降解產物的HPLC測定使用外部參考標準經HPLC測定依法韋侖/恩曲他濱/替諾福韋DF片(EFV/FTC/TDF片)中的EFV、FTC和TDF。EFV、FTC和TDF的降解產物通過使用了相對響應因子的面積標準化而確定，在合適的時侯。EFV、FTC和TDF的鑒定通過比較其保留時間和參比標準的保留時間來確定。標準和樣本溶液的制備標準和樣本溶劑25mM磷酸鹽緩沖液，pH3稱量3.4g無水磷酸氫二鉀一元堿并將其轉移到1L容量瓶中。加入約800mL水并混合至溶解。使用磷酸調節pH到3.0±0.1，然后用水稀釋至刻度(volume)。樣本溶劑W0:30:S02SmM磷酸鹽緩沖液，pH3:乙腈甲醇)將400mL25mM磷酸鹽緩沖液，pH3，300mL乙腈和300mL曱醇組合并混合。平衡至室溫。50:50乙腈曱醇將500mL乙腈和500mL甲醇組合并混合。平衡至室溫。標準溶液精確稱量約60mgEFV參比標準物，20mgFTC參比標準物和30mgTDF參比標準物并轉入到100mL容量瓶中。向瓶中加入約80mL樣本溶劑(40:30:30)并混合或經聲處理至溶解。用樣本溶劑(40:30:30)稀釋至刻度并很好地混合。每種成分的終濃度約為0.6mg/mLEFV、0.2mg/mLFTC和0.3mg/mLTDF。系統適應性測定溶液靈敏度檢查標準精確稱量出約IOmgFTU真實物質放入100mL容量瓶中制備10fig/mLFTU原液。加入樣本溶劑(40:30:30)至約80%容積并混合或經過聲處理至溶解。用樣本溶劑(40:30:30)稀釋至刻度并很好地混合。吸量10mL這個溶液加入到100mL容量瓶中。用樣本溶劑(40:30:30)稀釋至刻度并很好地混合。制備靈敏度檢查標準物，其包含0.2mg/mLFTC和0.2|ig/mLFTU(相對于FTC為0.10%)。精確稱量出20mgFTC加入到100mL容量瓶中。使用A級吸量管將2.0mLFTU原液轉入到相同的瓶中。再向瓶中加入樣本溶劑(40:30:30)并混合或聲處理至溶解。用樣本溶劑(40:30:30)稀釋到刻度并很好地混合。或者是，在稀釋至刻度前可以將2.0mL10jig/mLFTU原液加入到標準溶液中。EFV/FTC/TDF片劑的樣本制備EFV/FTC/TDF片劑的強度和降解產物的含量通過分析由十個片劑制備的混合溶液來確定。樣本溶液中每種成分的終濃度約為0.6mg/mLEFV、0.2mg/mLFTC和0.3mg/mLTDF。a)將十個片劑放入到1L容量瓶中并向容量瓶中加入400mL25mM磷酸鹽緩沖液，pH3。b)強力攪拌混合約75分鐘。c)向瓶中加入50:50的乙腈甲醇至刻度線下約2cm。d)通過混合一小時將溶液平衡至室溫。用50:50的乙腈甲醇稀釋至刻度。通過翻轉瓶身或用磁性攪棒進行很好地混合。e)使用帶有注射器的0.45nm注射器式過濾器過濾約10mL步驟(d)的溶液用于進一步稀釋.棄去頭2mL濾出液.f)使用A級吸量管將5.0mL步驟(e)的濾出液轉入到50mL容量瓶中并用樣本溶劑(40:30:30)稀釋至刻度。很好地混合。色譜1.使用帶有UV檢測器和電子數據獲得系統的HPLC。2.使用HPLC柱子，其內徑為4.6mm，長250mm，填充有C12反相、4pm粒徑、80A孔徑的物質。3.流動相緩沖液制備20mM醋酸銨緩沖液，pH4.6;需要時用醋酸調節pH。4.流動相梯度經67分鐘用99:1到1:99的流動相緩沖液乙腈進行洗脫。5.峰值檢測UV,262nm6.注入體積lOpL。在所述色鐠條件下，FTC、TDF和EFV峰的典型保留時間分別為11、33和50分鐘。注入順序至少注入兩次樣本溶劑作為空白對照以確保柱子被平衡并鑒定任何潛在的人為峰。注入靈敏度檢查標準溶液或包含約0.10%FTU的標準溶液以便進行靈敏度檢測。注入五份相同的標準溶液l(Rl)，然后單次注入標準溶液2(R2)。由標準溶液注射液計算理論塔板數和拖尾因子。為了鑒定、確定強度和降解產物，對樣本溶液進行重復注射。所有的樣本溶液都必須與標準溶液注射液相等。通常，在定標標準注射液中最多推薦十份樣本溶液注射液。系統適宜性理論塔板數和拖尾因子由標準溶液的色i脊計算EFV、FTC和TDF峰的理論塔板數(N)和拖尾因子(T)。N和T的測定公式由目前的美國藥典確定。這些參數值必須符合N^40，000且的標準。靈敏度檢測靈敏度檢測將利用靈敏度檢測標準中的FTU峰，出現在約0.10%處。計算具有適宜RRF的FTU峰的面積百分比(列于表2中)，其中RRF用于使用了每個降解產物百分比計算值的靈敏度檢測標準。將這個結果與用于靈敏度檢測標準的理論FTU百分比進行比較，如下靈敏度-FTU測定值/FTU理論值其中FTU測定值-測定用于靈敏度檢測標準或標準溶液的FTU面積、百分比FTU理論值-用于靈敏度檢測標準或標準溶液的FTU理論面積百分比靈敏度必須在0.70-1.30之間。評價和計算鑒定降解產物使用適宜的檢測參數(例如峰閾、最小峰面積等)測定出現在0.05%或更小時的峰。通過以下方法鑒別出現在樣本溶液注射液色譜中的EFV、FTC和TDF的雜質和降解產物記錄觀察到的第二個峰的相對保留時間(RRT)，扣除與樣本不相關的任何峰。只定量降解產物。計算所有樣本溶液注射液至結果的平均值最接近于0.01%。在一份注射液和/或樣本中檢測不到降解產物或低于積分閾值的情況下，僅使用計算得出的定量結果(即不視為0)。RRT-笫二個峰的保留時間/替諾福韋二索羅基峰的保留時間EFV的潛在雜質和降解產物的RRTs和相對響應因子(RRF)值列于表l中，降解產物以黑體字表示。FTC的雜質和降解產物列于表2中，降解產物以黑體字表示。TDF的雜質和降解產物列于表3中，降解產物以黑體字表示。由于RRT可以變化，因此雜質和降解產物的鑒定可以通過與真實物質(或參比標準中的雜質和降解產物峰)進行比較來確定，如果需要的話。降解產物含量測定FTC降解產物的定量使用以下公式測定樣本溶液注射液色i瞽中觀察到的每個FTC降解產物的水平。降解產物(％)=^"xRRFx100TPA其中I-降解產物峰的面積TPA-總的峰面積(FTC和所有相關降解產物的面積，不包括雜質和人為產物)，由RRF校正RRF=FTC的相對響應因子TDF降解產物的定量使用以下公式測定樣本溶液注射液色i普中觀察到的每個TDF降解產物的水平。降解產物(％)=~^~xRRFxlOOTPA其中1=降解產物峰或未指定峰的面積TPA-總的峰面積(TDF主峰，所有相關降解產物，和所有未指定峰的面積，不包括雜質和人為產物)，由RRF校正RRF-TDF的相對響應因子結果和報告降解產物的含量分別記錄觀察到的每個降解產物結果的平均值至最接近0.01%。分別記錄EFV、FTC和TDF的降解產物總量至最接近的0.1%，作為所觀察到的所有降解產物峰平均水平的總和。對于在低于0.05%水平下發現的降解產物，記錄其痕跡量水平并且在計算總降解產物含量時不包括這些水平。參考美國藥典<621>藥典論壇報26(4)2000表1EFV的相關雜質和降解產物EFV相關化合物大約的RRTaRRP>SD-573C1.460.5SR-695d1.50EFV1.50SP-2341.57SW-9651.60SE-5631.73SM-097c1.830.53大約的RRTs，其值是相對于TDF峰的bEFV相關降解產物的RRFs是相對于EFV的eEFV相關降解產物d在EFV前洗脫SR-695(約0.1分鐘處分離出)降解產物以黑體字標出表2FTC的相關降解產物FTC相關化合物大約的RRTaRRRFTC0.33FTUC0.380.7a大約的RRTs，其值是相對于TDF峰的bFTC相關降解產物的RRFs是相對于FTC的eFTC相關降解產物表3替諾福韋DF的相關降解產物<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>a大約的RRTs，其值是相對于TDF峰的bTDF相關降解產物的RRFs是相對于TDF的eTDF相關降解產物權利要求1、含有干法粒化的恩曲他濱和替諾福韋DF的組合物。2、權利要求l的組合物，其中含水量(KarlFischer)為約0.1到10%重量。3、權利要求1的組合物，其中顆粒的堆積密度為約0.1到1g/mL。4、權利要求l的組合物，其中顆粒的幾何平均直徑為約50到800微米。5、權利要求1的組合物，其進一步包含藥學上可接受的崩解劑。6、權利要求5的組合物，其中崩解劑是交聯羧甲基纖維素鈉或交聚維酮。7、權利要求1的組合物，其進一步包含藥學上可接受的填充劑。8、權利要求1的組合物，其進一步包含藥學上可接受的粘合劑。9、權利要求1的組合物，其進一步包含藥學上可接受的潤滑劑。10、權利要求l的組合物，作為單一劑型。11、權利要求10的組合物，其是片劑。12、權利要求l的組合物，其中恩曲他濱和替諾福韋DF的量大于顆粒重量的約70%。13、權利要求12的組合物，其中恩曲他濱和替諾福韋DF的量大于顆粒重量的約77%。14、權利要求1的組合物，其進一步包含至少一種藥學上可接受的賦形劑。15、權利要求l的組合物，其包含(大約的重量百分比)恩曲他濱30.6、替諾福韋DF46.0、微晶纖維素13.7、交聯羧甲基纖維素鈉7.3和硬脂酸鎂2.2。16、權利要求l的組合物，其中LOD為約10。/。。17、一種方法，其包括將含有恩曲他濱和替諾福韋DF的組合物粒化的過程，而不與具有產生不穩定作用量的液態水的組合物接觸。18、權利要求17的方法，其中液態水在制粒之前或期間不與組合物結合。19、權利要求17的方法，其中組合物進一步包含至少一種藥學上可接受的賦形劑。20、權利要求17的方法，其中制粒過程包括將組合物聚集并粉碎成預期大小。21、權利要求20的方法，其中聚集通過猛擊或壓制完成。22、權利要求20的方法，其中將組合物過篩以回收預期大小的顆粒。23、權利要求22的方法，其中顆粒通過1.25mm的篩子而被保留。24、權利要求19的方法，其中賦形劑是潤滑劑。25、權利要求24的方法，其中潤滑劑是C8-C18脂肪酸的堿金。26、通過將含有恩曲他濱和替諾福韋DF的組合物進行干法制粒過程得到的單一劑型。27、包含大于約75%重量恩曲他濱和替諾福韋DF的組合物。28、一種組合物，其含有包含替諾福韋DF、恩曲他濱和交聯羧甲基纖維素鈉的顆粒以及在顆粒外基質中也含有交聯羧曱基纖維素鈉。29、用于抗病毒治療的方法，其包括給予需要抗病毒治療的患者抗病毒有效量的權利要求1的組合物。30、4又利要求29的方法，其中抗病毒治療是抗HIV治療。全文摘要本發明針對含有經干法粒化的替諾福韋DF和恩曲他濱的組合物及其制備方法。干法制粒被出乎意料地發現對于制備含有替諾福韋DF的組合物是至關重要的，其中該組合物適于包含在含有恩曲他濱、依法韋侖和替諾福韋DF的組合劑型中。文檔編號A61K9/24GK101222914SQ200680026180公開日2008年7月16日申請日期2006年6月13日優先權日2005年6月13日發明者M·M·曼寧,R·奧里亞,T·C·達爾,T·楊申請人:吉里德科學公司