專利名稱：：用于調控tweak和fn14活性的方法和組合物的制作方法
技術領域：
：本發明提供了調控TWEAK和TWEAK受體活性的激動劑和拮抗劑。更具體的說，本發明提供了可用于調控TWEAK和/或TWEAK受體對免疫細胞的活性及用于治療諸如癌癥和免疫相關疾病等病癥的方法、組合物和試劑谷JUL。
背景技術：
：本領域已經鑒定了屬于腫瘤壞死因子(TNF)超家族的多種配體和受體。在這些配體中包括腫瘤壞死因子-a("TNF-a")、腫瘤壞死因子-p("TNF-P"或"淋巴毒素-a")、淋巴毒素-(3("LT-(3")、CD30配體、CD27配體、CD40配體、OX-40配體、4-1BB配體、LIGHT、Apo-1配體(也稱作Fas配體或CD95配體)、Apo-2配體(也稱作Apo2L或TRAIL)、TWEAK(也稱作Apo-3配體)、APRIL、OPG配體(也稱作RANK配體、ODF或TRANCE)和TALL-1(也稱作BlyS、BAFF或THANK)(參見例如Ashkenazi,Wev/ew2:420-430(2002);AshkenaziandDixit,S"曙e"ce281:1305-1308(1998);AshkenaziandDixit,CwwC^.".Ce//B/o/.11:255-260(2000);Golstein,Cwn:腸/.7:750-753(1997);Wallach，Cytoh'weWe/e簡ce,AcademicPress,2000,pp.377-411;Locksley"a/.,CW/104:487-501(2001);GmssandDower,85:3378-3404(1995);Schmidda/.,Prac.Ato/.爿cac/.83:1881(1986);Dealtry&a/.，J!/mmwm/.17:689(1987);Pitti"a/.,J.Sz'o/.C/zew.271:12687-12690(1996);Wiley"/.,/扁廳.(y3:673-682(1995);Browningda/.,Ce〃72:847-856(1993);Armitageaa/.,A^ww357:80-82(1992);WO97/01633,公布于1997年1月16日；WO97/25428,公布于1997年7月17日；Marsters"a/.,Cz#rB/o/.8:525-528(1998);Chicheportiche"fl/.，5/o/,CTjem.272:32401-32410(1997);Hahne"a/"乂五xpMec/.188:1185-1190(1998);WO98/28426,公布于1998年7月2日；WO98/46751,公布于1998年10月22日；WO98/18921,公布于1998年5月7日；Moore"。/.，S"'e"ce285:260-263(1999);Shua/.,J.丄ewA;oc,腺65:680(1999);Schneider"/Med189:1747-1756(1999);Mukhopadhyay"/歷o/.Ozem.274:15978-15981(1999))。由此類TNF家族配體介導的多種細胞應答的誘發通常是通過它們與特定細胞受體結合而啟動的。在迄今為止已經鑒定的TNF受體超家族成員中包括TNFR1、TNFR2、TACI、GITR、CD27、OX-40、CD30、CD40、HVEM、Fas(也稱作Apo-1或CD95)、DR4(也稱作TRAIL-Rl)、DR5(也稱作Apo-2或TRAIL-R2)、DcRl、DcR2、護骨蛋白(OPG)、RANK和Apo-3(也稱作DR3或TRAMP)(參見例如Ashkenazi,Atowre尺ev/ews2:420-430(2002);AshkenaziandDixit,281:1305-1308(1998);AshkenaziandDixit,C臟.(9—.Ce〃脂.11:255-260(2000);Golstein,C歐歷。/.7:750-753(1997);Wallach,C_yto/a.eie/e簡ce,AcademicPress,2000,pp.377-411;Locksleye1a/.:Ce〃104:487-501(2001);GmssandDower,B/ood85:3378-3404(1995);Hohman&a/.,J.腸/.C/謂.264:14927-14934(1989);Brockhausa/.，尸rac.麵.Sc/.87:3127-3131(1990);EP417,563,公布于1991年3月20日；Loetscher"a/.,Ce〃61:351(1990);Schall"a/.,Ce〃61:361(1990);Smith"a/.，Sc,e騰248:1019-1023(1990);Lewisa/.，尸rac.淑/.爿cadto..88:2830-2834(1991);GoodwinWa/.,Mo/.Ce〃.所o/.11:3020-3026(1991);Stamenkovicda/.，J.8:1403-1410(l卿)；MallettdJ.9:1063-1068(1990);Anderson"。/.,淑匿390:175-179(1997);Chicheportiche"a/.,J肌o/.C&w.272:32401-32410(1997);Pan"a/.，Sc/e"ce276:111-113(1997);Pana/.，5We臟277:815-818(1997);Sheridan&Scz'e"ce277:818-821(1997);Degli-Espostida/.,J.￡平她d186:1165-1170(1997);Marsters"a/.，C臟脂.7:1003-1006(1997);Tsuda"S朋C234:137-142(1997);Nocentini&a/.，尸rac.胸/.Jcad94:6216-6221(1997);vonBulowWa/.,Sc/認e278:138-141(1997》。大多數這些TNF受體家族成員共享細胞表面受體的典型結構，包括胞外區、跨膜區和胞內區，而其它成員則天然發現是缺少跨膜和胞內結構域的可溶性蛋白質。典型TNFR的胞外部分包含從NHr末端起始的多個富含半胱氨酸結構域(CRD)的重復氨基酸序列樣式。有些TNF配體家族成員與其各自受體的相互作用能影響免疫系統內的多種功能。此類配體/受體相互作用的例子包括CD40配體結合CD40受體，/人而例如4足進B纟田月包分化成抗體生成細月包(Grewal"a/.,/mww"o/.16:59-70(1997));淋巴毒素-|3配體結合淋巴毒素-P受體，從而例如通過調節濾泡樹突細胞(folliculardendriticcell)的分化狀態來影響體液免疫應答(MackayandBrowning,A^we395:26-27(1998));及OX40配體結合OX40受體，從而例如調節B細胞對T細胞信號的應答(Flynn"a/.,JExp.M^.188:297-304(1998))。已經報道在免疫系統中發揮作用的其它配體/受體對包括TNP-a/TNFR-1和Fas配體/Fas。稱為"TWEAK"或"Apo-3配體'，的TNF家族配體文獻中已有記載(參見例如WO98/05783;WO98/35061;WO99/19490;US2002/0015703)。TWEAK配體在文獻中報道為轉化細胞系中相對較弱的凋亡誘導物(ChicheporticheWo/.，乂肌o/.C7犯m.272:32401-32410(1997);Marstersa/.,Cwn:肌o/.8:525-528(1998))。純化的可溶性TWEAK蛋白質用于誘導有些腫瘤細胞系的分化和/或死亡，包括HT29腺癌細胞、HeLa宮頸癌細胞和A375黑素瘤細胞。TWEAK還誘導HT29和A375細胞系分泌趨化因子IL-8且對成纖維細月包細胞系WI-38具有相同效果(Chicheporticheda/.,■/說o/.C/zem.272:32401-32410(1997))。另外，通過誘導多種正常內皮細胞系增殖和大鼠角膜血管發生，TWEAK已經與血管發生調節關聯起來(Lynch"a/.，J./"fer/e謂C，Aiwe18:A-46(1998》；Jakubowski<a/.，J!Ce〃.Sc/.115:267-274(2002);Lynch"a/.，■/脂.C/z綴274:8455-8459(1999》。小鼠和人組織諸如心、腦、肺、肝及其它組織和次級淋巴器官諸如脾和淋巴結中TWEAKmRNA的表達已有記載。TWEAK還在人外周血單個核細胞上表達，而且它的表達增強隨后的IFN-y刺激(Nakayama"a/.,J.￡罕.Tkfed.192:1373-1380(2000))。TWEAK的推定受體先前在文獻中有記載(Marsters"a/.,Cw/r歷o/.8:525-528(1998))。此受體，稱為TRAMP、Apo-3、WSL-1、DR3或LARD,是TNFR家族的成員。TRAMP的活化據報道通過發動胱天蛋白酶依賴性細胞死亡信號傳導途徑或經由NF-kB信號傳導途徑的細胞活化而誘導凋亡(AshkenaziandDixit,5We"ce281:1305-1308(1998》。目前，認為TRAMP/Apo-3/DR3可能確實不是TWEAK的生理學的、高親和力受體。已經鑒定了結合TWEAK的另一種受體，稱為Fn-14。Fn-14是成纖維細胞生長因子可誘導的14kDa蛋白質(Wiley"a/.,/mwwmXy15:837-846(2001)),而且是較遠相關的TNFR家族成員，其在胞外結構域中只包含一個富含半胱氨酸結構域及胞內結構域中的TRAF結合基序。經由此受體發揮作用的TWEAK誘導NF-KB2p100加工和持久的NF-KB活化(Saitoh""/.,JC7;em.278:36005-36012(2003))。發明概述認為TNF配體家族成員，TWEAK，充當促炎性細胞因子。如下文實施性免疫的轉換中發揮重要作用。因此，通過以激動性或拮抗性方式調控此類活性，可治療多種病癥，諸如癌癥或免疫相關疾患。本發明提供了結合TWEAK和/或TWEAK受體并以激動劑或拮抗劑方式調控TWEAK和/或TWEAK受體活性的組合物。例如，可采用TWEAK或TWEAK受體拮抗劑來阻斷或中和TWEAK和/或TWEAK受體的活性。可采用此類組合物及使用所述組合物的方法來治療多種病癥，包括癌癥和自身免疫性病癥。舉例而言，結合TWEAK并中和或阻斷TWEAK對免疫細胞的活性的拮抗性抗體可用于增強/增加哺乳動物中天然殺傷(NK)細胞的作用和數目，從而抑制與過度的先天性和/或適應性免疫系統病癥有關的病理狀況。本發明的組合物包括結合TWEAK和/或TWEAK受體的單克隆抗體、可溶性TWEAK受體-Ig融合蛋白、或能拮抗TWEAK和/或TWEAK受體活性的其它分子。本發明提供了用于治療諸如癌癥或感染等病癥的方法，包括施用含有治療有效量的TWEAK拮抗劑和可接受載體的組合物。所述TWEAK拮抗劑可以是針對TWEAK配體的抗體；針對TWEAK受體的抗體；調節TWEAK配體與TWEAK受體結合的藥劑；和能截斷TWEAK受體的胞內信號傳導的藥劑。在一個優選的實施方案中，所述抗體是單克隆抗體。在一個更優選的實施方案中，所述單克隆抗體是針對TWEAK配體的抗體。TWEAK拮抗劑可以是具有能選擇性結合TWEAK配體的配體結合結構域的可溶性TWEAK受體。在一個實施方案中，可溶性TWEAK受體可以包含人免疫球蛋白IgG結構域。本發明還包括用于增強哺乳動物中先天性THl應答或活性的方法，包括施用含有有效量的TWEAK拮抗劑和任選的制藥學有效載體的組合物。本發明還包括用于增強哺乳動物中NK細胞活性的方法，包括施用含有有效量的TWEAK拮抗劑和任選的制藥學有效載體的組合物。在其它實施方案中，例如，可采用TWEAK或TWEAK受體激動劑來激發或增強TWEAK和/或TWEAK受體的活性。本發明提供了結合TWEAK和/或TWEAK受體并激發或增強TWEAK和/或TWEAK受體活性的組合物。可采用此類組合物及使用所述組合物的方法來治療多種病癥，包括免疫相關疾病，諸如自身免疫病。舉例而言，結合TWEAK受體并激發或增強TWEAK受體活性的激動性抗體可用于改善TH1驅動的自身免疫病，諸如克羅恩氏(Crohn)病、炎性腸病、多發性硬化和關節炎。本發明提供了用于治療免疫相關疾患的方法，包括施用含有治療有效量的TWEAK或TWEAK受體激動劑和可接受載體的組合物。所述TWEAK激動劑可以是針對TWEAK受體的抗體。在一個優選的實施方案中，所述抗體是單克隆抗體。在一個更優選的實施方案中，所述單克隆抗體是針對TWEAK受體的抗體。如下例示性權利要求例示了更多實施方案，但不限于此1.治療癌癥的方法，包括使哺乳動物癌細胞暴露于有效量的拮抗劑分子，其中所述拮抗劑選自(1)抗TWEAK抗體；(2)抗TWEAK受體抗體；(3)TWEAK受體免疫粘附素；和(4)阻斷或截斷TWEAK受體的胞內信號傳導的藥劑或分子。2.權利要求1的方法，其中所述TWEAK受體免疫粘附素包含與免疫球蛋白Fc區融合的TWEAK受體序列。3.權利要求2的方法，其中所述TWEAK受體序列包含FN14受體的胞外結構域序列。4.權利要求1的方法，其中所述抗TWEAK抗體結合包含圖11(SEQIDNO:l)氨基酸94-249的人TWEAK多肽。5.權利要求4的方法，其中所述抗TWEAK抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。6.權利要求l的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體結合包含圖12(SEQIDNO:2)氨基酸序列的人FN14受體多肽。7.權利要求6的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。8.權利要求l的方法，其中還使所述哺乳動物癌細胞暴露于化療、輻射、前體藥物、細胞毒劑或生長抑制劑。9.增強哺乳動物中NK細胞活性的方法，包括對所述哺乳動物施用有效量的拮抗劑分子，其中所述拮抗劑選自(1)抗TWEAK抗體；(2)抗TWEAK受體抗體；(3)TWEAK受體免疫粘附素；和(4)阻斷或截斷TWEAK受體的胞內信號傳導的藥劑或分子。10.權利要求9的方法，其中所述TWEAK受體免疫粘附素包含與免疫球蛋白Fc區融合的TWEAK受體序列。11.權利要求10的方法，其中所述TWEAK受體序列包含FN14受體的胞外結構域序列。12.權利要求9的方法，其中所述抗TWEAK抗體結合包含圖11(SEQIDNO:l)氨基酸94-249的人TWEAK多肽。13.權利要求12的方法，其中所述抗TWEAK抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。14.權利要求9的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體結合包含圖12(SEQIDNO:2)氨基酸序列的人FN14受體多肽。15.權利要求14的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。16.增強哺乳動物中先天性THl應答或活性的方法，包括對所述哺乳動物施用有效量的拮抗劑分子，其中所述拮抗劑選自(1)抗TWEAK抗體；(2)抗TWEAK受體抗體；(3)TWEAK受體免疫粘附素；和(4)阻斷或截斷TWEAK受體的胞內信號傳導的藥劑或分子。17.權利要求16的方法，其中所述TWEAK受體免疫粘附素包含與免疫球蛋白Fc區融合的TWEAK受體序列。18.權利要求17的方法，其中所述TWEAK受體序列包含FN14受體的胞外結構域序列。19.權利要求16的方法，其中所述抗TWEAK抗體結合包含圖11(SEQIDNO:l)氨基酸94-249的人TWEAK多肽。20.權利要求19的方法，其中所述抗TWEAK抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。21.權利要求16的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體結合包含圖12(SEQIDNO:2)氨基酸序列的人FN14受體多肽。22.權利要求21的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。23.治療哺乳動物中TH2介導的病癥的方法，包括對所述哺乳動物施用有效量的拮抗劑分子，其中所述拮抗劑選自(1)抗TWEAK抗體；(2)抗TWEAK受體抗體；(3)TWEAK受體免疫粘附素；和(4)阻斷或截斷TWEAK受體的胞內信號傳導的藥劑或分子。24.權利要求23的方法，其中所述TWEAK受體免疫粘附素包含與免疫球蛋白Fc區融合的TWEAK受體序列。25.權利要求24的方法，其中所述TWEAK受體序列包含FN14受體的胞外結構域序列。26.權利要求23的方法，其中所述抗TWEAK抗體結合包含圖11(SEQIDNO:l)氨基酸94-249的人TWEAK多肽。27.權利要求26的方法，其中所述抗TWEAK抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。28.權利要求23的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體結合包含圖12(SEQIDNO:2)氨基酸序列的人FN14受體多肽。29.權利要求28的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。30.權利要求23的方法，其中所述TH2介導的病癥是變態反應或哮喘。31.治療免疫相關病癥的方法，包括對哺乳動物施用有效量的激動劑分子，其中所述激動劑選自(1)抗TWEAK受體抗體；(2)TWEAK多肽；和(3)TWEAK多肽變體。32.權利要求31的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體結合包含圖12(SEQIDNO:2)氨基酸序列的人FN14受體多肽。33.權利要求32的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。34.權利要求31的方法，其中所述免疫相關病癥是自身免疫病。35.權利要求34的方法，其中所述自身免疫病是克羅恩氏病、炎性腸病、多發性硬化或關節炎。附圖簡述圖1A-1B。TWEAK及其受體FN14在先天免疫系統的細胞上表達。(1A)人PBMC,靜息的("未刺激的")及用IFN，或PMA刺激了12小時的，用針對淋巴細胞譜系標志的抗體進行表面染色，透化，用TWEAK抗體進行染色，并通過FACS進行分析。(巨噬細胞("mac"),樹突細胞("DC")，NK細胞和NKT細胞)。(IB)靜息的及經過刺激的人PBMC,對TWEAK受體FN14進行表面染色。圖2A-2D。TWEAK敲除型(KO)小鼠在次級造血組織(secondaryhematopoietictissue)中具有更大NK細胞數。(2A，2B)自兩月齡r『E^T^小鼠(黑色柱)或7Tf￡^^、鼠(白色柱)(n=6只/組)分離脾、外周血、派伊爾氏斑(Peyer，spatch)和淋巴結，分離細胞，通過FACS分析對NK細胞(a)或NKT細胞(b)定量。(頂圖雄性；底圖雌性)。(2C)自7WE4A^+小鼠(黑色柱)或7￥^4f、鼠(白色柱Xn=6只/組)的右股骨吸取骨髓(0.5mL)(左圖雄性；右圖雌性)，對NK細胞定量。(2D)自全血分離人PBMC，通過在存在各種濃度的FN14Fc(實心方形)、抗TWEAKmAb(空心方形)、EDARFc(實心圓形)或抗CD4mAb(空心圓形)時用TNTF-a、LPS或IFN-y進行刺激來進行活化誘導的細胞死亡。然后分離NK細胞，對其sub-Gl含量進行染色。圖3A-3C。TWEAK消除或抑制提升對內毒素的先天炎性應答。(3A)給T7f五^rz+及r『五vl^-小鼠(n=10只/組)腹膜內注射指定劑量的LPS，持續5天監測存活力。(3B)用LPS(30mg/kg)體內攻擊后24小時自7TT5^S^+及7tt^z—小鼠的外周血和脾分離NK細胞和巨噬細胞，對IFN-y、IL-12和IL-10的胞內水平進行染色。(3C)來自4名人類供體的PBMC用LPS刺激24小時。隨后，分別對NK細胞或巨噬細胞(通過譜系標志來鑒定)的IFN-y和IL-12胞內水平進行染色。圖4A-4C。TWEAK涉及STAT-1和NF-kB1調控。(4A)對STAT-1活化的分析。人NK細胞和巨噬細胞在體外用LPS(l嗎/mL)剌激12小時，對譜系標志進行表面染色，透化，對磷酸化STAT-1的胞內水平進行染色。頂圖描繪了NK細胞，底圖描繪了巨噬細胞(FACS柱狀圖總結成右邊的條形圖)。(4B)對NF-KB1磷酸化的分析。人脾NK細胞和巨噬細胞用TWEAK或TNF-a(100ng/mL)刺激達24小時。在指定時間點制備細胞溶解物，通過免疫印跡對磷酸化p65NF-kB1進行分析。(4C)對NF-kB1相互作用的分析。自TWEAK或TNF-a刺激過的細胞的細胞溶解物經p65免疫沉淀NF-kB1，通過免疫印跡對免疫沉淀物分析p300和HDAC-1的存在情況。圖5A-5E。年老r『五^A^小鼠具有更大的脾及擴大的記憶和TH1細胞隔室(compartment)。7Tf^4^^+及7TF五j7T"雄性小鼠同胞仔飼養至3月齡、6月齡或12月齡，檢查它們的脾和淋巴結。(5A)來自7W&4^^+小鼠和T『^4X^小鼠的脾的代表性圖像。(5B)平均脾重作為年齡的函數(n-6只/組)。(5C)來自12月齡7WK4^^+及Hf^4ir,小鼠的脾切片用CD3抗體染色的代表性圖像。(5D,5E)通過FACS對來自12月齡野生型小鼠和TWEAK敲除型同胞仔的脾細胞進行分析以測定CD3+、CD4+和CD8+T細胞(5D)及記憶和TH1T細胞(5E)的數目。圖6A-6C。TWEAK刪除抑制B16.F10黑素瘤的形成和生長，促進適應性CD8+T細胞的擴增。給Hf^4i^+及7W^、鼠皮下注射IOO，OOO個B16.F10細胞，監測肺瘤生長(A)或發生(B)達6周(6A，6B)。在研究結束時，自接受注射的'J、鼠收集脾，對指定的淋巴細胞子集進行分析(6C)。圖7A-7E。TWEAK刪除抑制B16.BL6腫瘤生長，促進先天性至適應性抗腫瘤免疫應答的激發。給rW^4i^z+及2WE^一小鼠皮下注射500,000個B16.BL6纟田月包，在一個月時監測肺瘤重量(7A)或脾重量(7B)。(7C)來自攜瘤小鼠的脾細胞對各種譜系群進行染色，通過FACS進行分析。(7D)通過胞內染色和FACS對分離自攜瘤小鼠的NK細胞和巨噬細胞分析細胞因子的生成。(7E)對來自攜瘤小鼠的CD4+和CD8+T細胞類似分析IFN-y生成。(*)表示基礎細胞因子統計學顯著性(pO.01);(**)表示腫瘤誘導的細胞因子統計學顯著性(pO.Ol)。圖8A-8G。7Tf五J7T,小鼠的表征。(8A)小鼠TWEAK基因座的結構。各盒對應于包含TWEAK(白色條形)、APRIL(黑色條形)和SMT3IP1(灰色條形)基因的基因座區域。這三個基因的取向以箭頭標示。(8B)設計用來以neo盒替換TWEAK基因外顯子6和7編碼序列的尋靶構建物的示意圖。(8C)TWEAK基因中的突變區域的結構。用于ES細胞Southern印跡分析的5，和3'外部探針的位置以條形標示。用于小鼠尾部DNA基因型分析的引物組的位置以黑色(外部)和灰色(內部)箭頭標示。(8D)TWEAK基因的重組的Southern印跡分析。對衍生自數個ES細胞克隆的、經Bsml(DI)和Narl(DII)消化的DNA的分析。將DNA消化，在0.7%瓊脂糖凝膠上分級分離，印到尼龍膜上，與5'(DI)和3，(DII)探針進行雜交。(8E)通過PCR對7WE^^小鼠的基因分型。尾部衍生基因組DNA用嵌套外部和內部引物組進行PCR擴增，野生型或刪除突變型TWEAK基因分別顯現為4.3kB或5.3kB片段。(8F)使用抗小鼠TWEAK單克隆抗體(黑色)或同種型對照(灰色線和填充區)通過FACS測定的TWEAK在衍生自71^^4《+/+及H^^T7—小鼠的總脾細胞中的表達。(8G)對7WEA^/+、7W^4A^-及7TTK4i^小鼠脾中TWEAK(白色條)、APRIL(黑色條)和SMT3IP1(灰色條)mRNA表達的定量實時PCR分析。所有數值對RPL19RNA內部對照進行標準化。標準偏差來自一式三份反應的計算。圖9。7TT五ArA小鼠具有更大的腫瘤淋巴細胞浸潤。在1個月時自7T^yK"+及7W五A^7—小鼠收集B16.BL6腫瘤，解離，溶解RBC。封閉Fc后，將解離的腫瘤細胞針對淋巴細胞譜系標志進行染色，通過FACS進行分析。黑色條代表77^^^/+小鼠的指定腫瘤淋巴細胞浸潤；白色條代表r,￡^7rA小鼠的指定腫瘤淋巴細胞浸潤。圖10。顯示2月齡r『五AT"及r,五yl、鼠的體重/器官重量(gm)的表。圖11。人TWEAK配體的氨基酸序列(SEQIDNO:l)。圖12。人FN14受體的氨基酸序列(SEQIDNO:2)。發明詳述本文中描述或提到的技術和流程普遍得到本領域技術人員的充分理解，而且通常利用常規方法得以采用，諸如例如廣泛應用的分子克隆方法，記載于SambrookWa/.,M/ecw/"/'C7ow'"gvJLa6orator_yAfo艦a/,第2版，1989ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y。適當日于，涉及使用商品化試劑盒和試劑的流程通常依照制造商規定的方案和/或參數進行，除非另有說明。在描述本發明的方法和測定法之前，應當理解本發明不限于所述具體的方法、方案、細胞系、動物種或屬、構建物和試劑，因為它們當然可以有所變化。還應當理解本文中所使用的術語只是為了描述具體實施方案，并非意圖限制本發明的范圍，只有所附權利要求才對本發明范圍進行了限制。必須注意的是，在用于本文及所附權利要求時，單數形式"一個"、"一種"和"所述"包括復數所指物，除非另有明確規定。如此，例如，提到"一處遺傳改變"包括多處此類改變，提到"一種探針"包括一種或多種探針及其本領域技術人員知道的等效物，諸如此類。在此收入本文中提到的所有出版物作為參考，以披露和描述與所引用出版物有關的方法和/或材料。引用本文中所引用的出版物是由于它們是在本申請的提交日之前公開的。憑借更早的優先權日或在先發明日，本文中的任何文字都不應解釋為承認本發明的發明人沒有資格早于所述出版物。此外，實際發表日可能與所顯示的有所不同，需要獨立查證。I.定義術語"TWEAK"或"TWEAK配體"在用于本文時指包含圖11第1-249位、第47-249位或第94-249位氨基酸殘基(含兩端點)的多肽序列，以及上述序列的生物學活性片段、刪除、插入或替代變體。在一個實施方案中，所述多肽序列包含圖11第47-249位殘基，任選由圖11第94-249位殘基組成。在其它實施方案中，所述片段或變體具有生物學活性，與任一上文所述序列具有至少約80%的氨基酸序列同一性，更優選至少約90%的序列同一性，甚至更優選至少95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。任選的核苷酸序列編碼。此定義還涵蓋自TWEAK來源分離的或者通過重組或合成方法制備的天然序列TWEAK。TWEAK序列中提到的所有氨基酸殘基編號使用依照圖11的編號方式，除非另有明確說明。術語"胞外結構域"或"ECD"指蛋白質諸如TWEAK基本上不含跨膜結構域和胞質結構域的形式。ECD通常將具有少于1%的所述跨膜結構域和/或胞質結構域，優選將具有少于0.5%的所述結構域。可以理解，為本發明多肽鑒定的任何跨膜結構域是依照本領域常規用于鑒定該種類型疏水結構域的標準而鑒定的。跨膜結構域的精確邊界可以變化，但最有可能的是最初鑒定的結構域任一末端不超過約5個氨基酸。在優選的實施方案中，ECD將由多肽不含跨膜結構域和胞質或胞內結構域的(而且不是膜結合的)可溶性胞外結構域序列組成。具體的TWEAK胞外結構域序列記載于MarsterseC廠.歷o/.8:525-528(1998);Chicheporticheefa/"J5C272:32401-32410(1997)。術語"TWEAK配體"或"TWEAK"指任何TWEAK單體、多聚體或異聚體復合物或其衍生物。"TWEAK受體"指能夠結合上文所述TWEAK配體的一種或多種受體。"TWEAK受體"在本文中包括本領域稱為"Fn-14"或"FN14"的受體及其包含圖12所示第1-129位氨基酸的多肽序列。Fn14受體還記載于Wiley"a/.,//wm/m'z);15:837-846(2001)。術語"TWEAK受體，，在用于本文時涵蓋天然序列受體和受體變體。這些術語涵蓋在多種哺乳動物包括人中表達的TWEAK受體。TWEAK受體可以是內源表達的，如在多種人組織譜系中天然發生的，或者可以是通過重組或合成方法表達的。"天然序列TWEAK受體"包括與衍生自自然界的TWEAK受體具有相同氨基酸序列的多肽。如此，天然序列TWEAK受體可以具有來自任何哺乳動物的天然存在TWEAK受體的氨基酸序列。此類天然序列TWEAK受體可以從自然界分離，或者可以通過重組或合成手段生產。術語"天然序列TWEAK受體"明確涵蓋天然存在的截短或分泌形式的受體(例如含有例如胞外結構域序列的可溶形式)、天然存在的變體形式(例如可變剪接形式)和天然存在的等位基因變體。受體變體可包括天然序列TWEAK受體的片段或缺失突變體。術語"抗TWEAK抗體"指結合TWEAK配體的至少一種表位的任何抗體。任選的是，TWEAK抗體與異源序列或分子融合或連接。優選的是，異源序列允許或幫助抗體形成更高等級或寡聚復合物。任選的是，TWEAK抗體結合TWEAK但不與任何其它TNF家族配體(例如Fas酉己體、Apo2L/TRAIL、TNF-a等)結合或發生交叉反應。任選的是，所述抗體是TWEAK和/或TWEAK受體活性的激動劑或拮抗劑。任選的是，根據BIAcore結合測定法的測量，本發明的TWEAK抗體在約O.lnM到約20mM的濃度范圍內結合TWEAK配體。任選的是，根據BIAcore結合測定法的測量，本發明的TWEAK抗體呈現出約0.6nM到約18mM的Ic50值。術語"抗TWEAK受體抗體"指結合TWEAK受體的至少一種表位的任何抗體。任選的是，TWEAK受體抗體與異源序列或分子融合或連接。優選的是，異源序列允許或幫助抗體形成更高等級或寡聚復合物。任選的是，TWEAK受體抗體結合TWEAK受體但不與任何其它TNF家族受體(例如FAS、DR4、DR5、TNFRI、TNFRII等)結合或發生交叉反應。4壬選的是，所述抗體是TWEAK受體活性的激動劑或拮抗劑。任選的是，根據BIAcore結合測定法的測量，本發明的TWEAK受體抗體在約O.lnM到約20mM的濃度范圍內結合TWEAK受體。任選的是，根據BIAcore結合測定法的測量，本發明的TWEAK受體抗體呈現出約0.6nM到約18mM的Ic50值。術語"拮抗劑"以最廣義使用，包括在體外、原位或在體內部分或完全阻斷、抑制或中和TWEAK或TWEAK受體的一種或多種生物學活性的任何分子。TWEAK或TWEAK受體的所述生物學活性的例子包括結合TWEAK或TWEAK受體、活化NF-kB磷酸化或抑制STAT-1磷酸化、IL-8生成、抑制IFN-y和IL-12分泌、促進NK細胞AICD、促進血管發生或促進腫瘤生長。拮抗劑可以以直接或間接方式發揮功能。例如，拮抗劑可以在體外、原位或在體內由于TWEAK直接結合TWEAK受體的結果發揮功能而部分或完全阻斷、抑制或中和TWEAK或TWEAK受體的一種或多種生物學活性。拮抗劑還可以在體外、原位或在體內由于例如阻斷或抑制另一種效應器分子的結果間接發揮功能而部分或完全阻斷、抑制或中和TWEAK或TWEAK受體的一種或多種生物學活性。拮抗劑分子可包括"雙重"拮抗劑活性，其中該分子能夠部分或完全阻斷、抑制或中和TWEAK和TWEAK受體二者的生物學活性。術語"TWEAK拮抗劑"指部分或完全阻斷、抑制或中和TWEAK和TWEAK受體其中之一或二者的生物學活性的任何分子，包括但不限于可溶形式的TWEAK受體諸如TWEAK受體的胞外結構域序列、TWEAK受體免疫粘附素、TWEAK受體融合蛋白，共價修飾形式的TWEAK受體、TWEAK受體抗體和TWEAK抗體。為了測定某種TWEAK拮抗劑分子是否部分或完全阻斷、抑制或中和TWEAK或TWEAK受體的生物學活性，可進行測定法來評估拮抗劑分子對例如TWEAK與TWEAK受體的結合、對NF-kB磷酸化的活化或對STAT-1磷酸化的抑制、對IFN-y和IL-12生成的抑制、或對細胞死亡的活化的影響。此類測定法可以以已知的體外或體內測定法方式進行，例如在NK細胞、巨噬細胞和樹突細胞中進行。在一個實施方案中，TWEAK拮抗劑將包括單克隆抗體或可溶性TWEAK受體ECD-Fc融合蛋白。術語"激動劑"以最廣義使用，包括在體外、原位或在體內部分或完全刺激、增強或誘導TWEAK或TWEAK受體的一種或多種生物學活性的任何分子。TWEAK或TWEAK受體的所述生物學活性的例子包括結合TWEAK或TWEAK受體、活化NF-kB磷酸化或抑制STAT-1磷酸化、抑制IFN-y或IL-12生成、或活化細胞死亡。激動劑可以以直接或間接方式發揮功能。激動劑分子可包括"雙重"激動劑活性，其中該分子能夠部分或完全剌激、增強或誘導TWEAK和TWEAK受體二者的生物學活性。術語"TWEAK激動劑"指部分或完全刺激、增強或誘導TWEAK和TWEAK受體其中之一或二者的生物學活性的任何分子，包括但不限于TWEAK多肽及其變體、和TWEAK受體抗體。為了測定某種TWEAK激動劑分子是否部分或完全刺激、增強或誘導TWEAK或TWEAK受體的生物學活性，可進行測定法來評估激動劑分子對例如IL-8生成、NF-kB磷酸化、或對IFN-y或IL-12生成的抑制的影響。此類測定法可以以已知的體外或體內測定法方式進行，例如ELISA、胞內細胞因子生成或受體測定法。在一個實施方案中，TWEAK激動劑將包括重組蛋白。術語"哺乳動物"在用于本文時指歸入哺乳類的任何哺乳動物，包括人、牛、馬、犬和貓。在本發明的一個優選實施方案中，哺乳動物指人。"核酸"意圖包括任何DNA或RNA,例如組織樣品中存在的染色體、線粒體、病毒和/或細菌核酸。術語"核酸"涵蓋雙鏈核酸分子的兩條鏈或其中之一，包括完整核酸分子的任何片段或部分。"基因"意指在編碼或轉錄蛋白質或調控其它基因表達方面具有功能性作用的任何核酸序列或其部分。所述基因可以完全由負責編碼功能性蛋白質的核酸組成，或者只有部分核酸負責編碼或表達蛋白質。核酸序列可以在基因的外顯子、內含子、起始或終止區、啟動子序列、其它調控序列或獨特鄰近區中包含遺傳異常。術語"標記物"在用于本文時指與試劑諸如核酸探針或抗體直接或間接偶聯或融合，以便于檢測它所偶聯或融合的試劑的化合物或組合物。標記物可以是自身可檢測的(例如放射性同位素標記物或熒光標記物)，或者在酶術語"抗體"在本文中以最廣義使用，明確覆蓋完整的單克隆抗體、多克隆抗體、由至少兩種完整抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、及抗體片段，只要它們展現出期望的生物學活性。"抗體片段"包含完整抗體的一部分，優選包含抗體的抗原結合區或可變區。抗體片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。"天然抗體"指通常由兩條相同的輕鏈(L)和兩條相同的重鏈(H)構成的約150,000道爾頓的異四聚體糖蛋白。每條輕鏈通過一個共價二硫鍵與重鏈連接，而二硫鍵的數目在不同免疫球蛋白同種型的重鏈間有變化。每條重鏈和輕鏈還具有間隔規律的鏈內二硫鍵。每條重鏈在一端具有一個可變域(VH),接著是多個恒定域。每條輕鏈在一端具有一個可變域(VO,而另一端是一個恒定域。輕鏈的恒定域與重鏈的第一恒定域排列在一起，而輕鏈的可變域與重鏈的可變域排列在一起。認為特定的氨基酸殘基在輕鏈和重鏈可變區之間形成界面。術語"可變的"指可變域中的某些部分在抗體序列間差異廣泛且用于每種特定抗體對其特定抗原的結合和特異性的實情。然而，變異性并非均勻分布于抗體的整個可變域。它集中于輕鏈和重鏈可變域中稱作高變區或互補決定區的三個區段。可變域中更加高度保守的部分稱作框架區(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變域各自包含四個FR,它們大多采取f3-折疊片構象，通過形成環狀連接且在有些情況中形成(3-折疊片結構一部分的三個高變區連接。每條鏈中的高變區通過FR非常接近的保持在一起，并與另一條鏈的高變區一起4足成抗體的4元原結合4立點的形成(參見Kabate/1a/.,5^《m"cmo/Prafe/ra/附www/ogr,ca/7wte/^y,第5片反,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991))。恒定域不直接參與抗體與抗原的結合，但展現出多種效應器功能，諸如抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)中抗體的參與。用木瓜蛋白酶消化抗體產生兩個相同的抗原結合片段，稱作"Fab"片段，各自具有一個抗原結合位點，和一個殘余"Fc"片段，其名稱反映了它易于結晶的能力。胃蛋白酶處理產生一個F(ab')2片段，它具有兩個抗原結合位點且仍能夠交聯抗原。"Fv"是包含完整抗原識別和抗原結合位點的最小抗體片段。此區由緊密、非共價結合的一個重鏈可變域和一個輕鏈可變域的二聚體組成。正是在這種構造中，各可變域的三個高變區相互作用而在V『VL二聚體表面上確定了抗原結合位點。六個高變區共同賦予抗體以抗原結合特異性。然而，即使是單個可變域(或是只包含對抗原特異的三個高變區的半個Fv)也具有識別和結合抗原的能力，只是親和力低于完整結合位點。Fab片段還包含輕鏈的恒定域和重鏈的第一恒定域(CH1)。Fab'片段與Fab片段的不同之處在于重鏈CH1結構域的羧基末端增加了少數殘基，包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個半胱氨酸。Fab'-SH是本文中對其中恒定域半胱氨酸殘基攜帶至少一個游離硫醇基的Fab'的稱謂。F(ab')2抗體片段最初是作為在Fab'片段之間有鉸鏈半胱氨酸的成對Fab'片段生成的。還知道抗體片段的其它化學偶聯。根據其恒定域氨基酸序列，來自任何脊推動物物種的抗體(免疫球蛋白)"輕鏈"可歸入兩種截然不同類型中的一種，稱作卡帕(k)和拉姆達(x)。根據其重鏈恒定域氨基酸序列，抗體可歸入不同的類。完整抗體分成五大類IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有些可進一步分為亞類(同種型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。將與抗體的不同類對應的重鏈恒定域分別稱作a、s、s、y和一。不同類的免疫球蛋白的亞基結構和三維構造是眾所周知的。"單鏈Fv"或"scFv"抗體片段包含抗體的Vh和VL結構域，其中這些結構域存在于一條多肽鏈上。優選的是，Fv多肽在Vh和Vt結構域之間還包含多肽接頭，使得scFv能夠形成結合抗原的期望結構。關于scFv的綜述參見Pltickthun,in:772e尸/zormaco/ogyo/Afowoc/owa/JwfAoc^es1,vol.113，RosenburgandMoore編,Springer-Verlag,NewYork,pp.269-315(1994)。術語"雙抗體"指具有兩個抗原結合位點的小型抗體片段，該片段在同一條多肽鏈(VH-VL)中包含相連的重鏈可變域(VH)和輕鏈可變域(VO。通過使用過短的接頭使得同一條鏈上的兩個結構域之間不能配對，迫使各結構域與另一條鏈的互補結構域配對，產生兩個抗原結合位點。雙抗體更完整的記載于例如EP404,097;WO93/11161;Hollingerda/"Prac.iVa".Jcad90:6444-6448(1993)。術語"單克隆抗體"在用于本文時指從一群基本上同質的抗體獲得的抗體，即構成群體的各個抗體相同，除了可能以極小量存在的可能的天然存在突變外。單克隆抗體是高度特異性的，針對單一抗原性位點。此外，與典型的包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的常規(多克隆)抗體制備物不同，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。在它們的特異性以外，單克隆抗體的優勢在于它們是由雜交瘤培養物合成的，未受到其它免疫球蛋白的污染。修飾語"單克隆"指示抗體從基本上同質的抗體群獲得的特征，不應解釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如，將依照本發明使用的單克隆抗體可通過最初由Kohlera/.,Wam"256:495(1975)記載的雜交瘤方法來制備，或者可通過重組DNA方法來制備(參見例如美國專利No.4，816，567)。"單克隆抗體，，還可使用例如Clackson"a/.，7Va&rc352:624-628(1991)和Marks"a/.,J.Afo/.傷o/.222:581-597(1991)中記載的技術從噬菌體抗體庫分離。單克隆抗體在本文中明確包括"嵌合"抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或屬于特定抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或屬于另一抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現出期望的生物學活性(美國專利No.4,816,567;MorrisonWa/.，Prac.Ato/.jca^.Sc;'.a"81:6851-6855(1984))。本文中感興趣的嵌合抗體包括包含衍生自非人靈長類(例如舊大陸猴類(OldWorldMonkey),諸如狒狒、恒河猴或獼猴)的可變域抗原結合序列和人恒定區序列的"靈長類化"抗體(美國專利No.5,693,780)。非人(例如鼠)抗體的"人源化"形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的高變區殘基用具有期望特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類的高變區殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區(FR)殘基用相應的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有發現的殘基。進行這些修飾是為了進一步改進抗體的性能。一般而言，人源化抗體將包含至少一個、通常兩個基本上整個如下可變域，其中整個或基本上整個高變環對應于非人免疫球蛋白的高變環，且整個或基本上整個FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恒定區(Fc),通常是人免疫球蛋白的恒定區。更多細節參見JonesWg/.,Atowe321:522-525(1986);Riechmann"a/.,A^rt^e332:323-329(1988);Presta,Cwr(9p.5Vrwcf.Sfo/.2:593-596(1992)。術語"高變區"在用于本文時指抗體中負責抗原結合的氨基酸殘基。高變區包含來自"互補決定區"或"CDR"的氨基酸殘基(例如輕鏈可變域中的殘基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97(L3)及重鏈可變域中的殘基31-35(Hl)、50-65(H2)和95-102(H3);Kabatda/.,S^f認"ces/Vote/rao//mm頭o/og7.ca//她7-&^,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991))和/或那些來自"高變環，，的殘基(例如輕鏈可變域中的殘基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)及重鏈可變域中的殘基26-32(Hl)、53-55(H2)和96-101(H3);ChothiaandLesk,Mo/.歷o/.196:901-917(1987))。"框架區"或"FR"殘基指可變域中除本文中所定義的高變區殘基外的那些殘基。在用于本文時，術語"免疫粘附素"指將異源蛋白質("粘附素")的結合特異性與免疫球蛋白恒定域的效應器功能聯合起來的抗體樣分子。在結構上，免疫粘附素包括不同于抗體的抗原識別和結合位點(即是"異源"的)、具有期望結合特異性的氨基酸序列與免疫球蛋白恒定域序列的融合物。免疫粘附素分子的粘附素部分通常是至少包含受體或配體的結合位點的連續氨基酸序列。免疫粘附素中的免疫球蛋白恒定域序列可從任何免疫球蛋白獲得，諸如IgG-1、IgG-2、IgG-3或IgG-4亞型、IgA(包括IgA-1和IgA-2)、IgE、IgD或IgM。術語抗體的"Fc結構域"指分子中包含鉸鏈、CH2和CH3結構域但缺乏抗原結合位點的部分。該術語還意圖包括IgM或其它抗體同種型的等效區。"結合"目的抗原的抗體指能夠以足夠親和力和/或親合力結合該抗原，使得該抗體可作為治療劑或診斷劑用于靶向表達該抗原的細胞的抗體。為了本文目的，"免疫療法"指用抗體治療哺乳動物(優選人類患者)的方法，其中抗體可以是未偶聯的或"棵露的，，抗體，或者抗體可以偶聯或融合有異源分子或試劑，諸如一種或多種細胞毒劑，由此產生"免疫偶聯物"。"分離的"抗體指已經鑒定且與/由其天然環境的一種成分分開和/或回收的抗體。其天然環境的污染性成分指會干擾該抗體的診斷或治療用途的物質，可包括酶、激素、和其它蛋白質性質或非蛋白質性質的溶質。在優選的實施方案中，將抗體純化至(1)根據Lowry法的測定，抗體重量超過95%，最優選重量超過99°/。，(2)足以通過使用轉杯式測序儀獲得至少15個殘基的N-末端或內部氨基酸序列的程度，或(3)根據使用考馬斯藍或優選銀染色的還原性或非還原性條件下的SDS-PAGE，達到同質。既然抗體天然環境的至少一種成分不會存在，那么分離的抗體包括重組細胞內的原位抗體。然而，分離的抗體通常將通過至少一個純化步驟來制備。表述"有效量，，指藥劑(例如TWEAK抗體等)有效預防、改善或治療所討^r疾病或疾患的量。術語"處理"、"治療"和"療法"在用于本文時指治療性處理、預防性處理、和防范性處理。連續治療或施用指以至少每天一次為基礎、期間沒有中斷一天或多天的處理。間歇治療或施用或者間歇方式的治療或施用指本質上并非連續而是循環的處理。術語"細胞因子"是由一種細胞群釋放，作為細胞間介質作用于另一細胞的蛋白質的通稱。此類細胞因子的例子有淋巴因子、單核因子和傳統的多肽激素。細胞因子中包括生長激素，諸如人生長激素、N-甲硫氨酰人生長激素和牛生長激素；甲狀旁腺素；曱狀腺素；胰島素；胰島素原；松馳素；松馳素原；糖蛋白激素類，諸如促卵泡激素(FSH)、促曱狀腺激素(TSH)和促黃體激素(LH);肝生長因子；成纖維細胞生長因子；促乳素；胎盤催乳激素；腫瘤壞死因子-a和-(3;穆勒氏(Mullerian)抑制性物質；小鼠促性腺激素相關肽；抑制素；激活素；血管內皮生長因子；整聯蛋白；血小板生成素(TPO);神經生長因子；血小板衍生生長因子；轉化生長因子(TGF)，諸如TGF-a和TGF-(3;胰島素樣生長因子-I和-II;紅細胞生成素(EPO);骨誘導因子；干擾素，諸如干擾素-a、-p和-r,集落刺激因子(CSF)，諸如巨噬細胞CSF(M-CSF)、粒細胞-巨噬細胞CSF(GM-CSF)和粒細胞CSF(G-CSF);白介素(IL)，諸如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL陽ll、IL-12、IL-13、IL-17;及其它多肽因子，包括LIF和kit配體(KL)。在用于本文時，術語細胞因子包括來自天然來源或來自重組細胞培養物的蛋白質及天然序列細胞因子的生物學活性等效物。術語"細胞毒劑"在用于本文時指抑制或阻止細胞的功能和/或引起細胞破壞的物質。該術語意圖包括放射性同位素(例如I131、I125、Y^和Re186)、化療劑、和毒素諸如細菌、真菌、植物或動物起源的酶活毒素或其片段。"化療劑"指可用于治療癌癥的化學化合物。化療劑的例子包括烷化劑類(alkylatingagents),i者長。塞替〉泉(thiotepa)禾口J不石粦酰胺(cyclophosphamide)(CYTOXAN);磺酸烷基酯類(alkylsulfonates),諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和旅泊舒凡(piposulfan);氮丙口定類(aziridines),諸如苯佐替〉派(benzodepa)、卡；皮酉昆(carboquone)、美妥替〉泉(meturedepa)牙口烏5離替〉泉(uredepa);乙撐亞胺類(ethylenimines)和曱基蜜胺類(methylamelamines),包括六曱蜜胺(altretamine)、三乙撐蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撐磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撐疏代石夕,酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三輕甲蜜胺(trimethylolomelamine);番篇枝內酉旨類(acetogenins)(尤其是布43M也辛(bullatacin)禾口布4i4也辛酉同(bullatacinone));喜4對石威(camptothecin)(包4舌合成類似物托泊替康(topotecan));苔蘚抑素(bryostatin);callystatin;CC-1065(包4舌其阿多來新(adozelesin)、卡4斤來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成類似物);隱藻素類(cryptophycins)(特別是隱藻素1和隱藻素8);多拉司他汀(dolastatin);duocarmycin(包括合成類似物，KW-2189和CBI-TMI);艾一留塞;各素(eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;〉每纟帛4中.素(spongistatin);氛芥類(nitrogenmustards),"i者長。苯丁酉交氣芥(chlorambucil)、蔡氣芥(chlornaphazine)、月旦磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司'汀(estramustine)、異環磷酰胺(ifosfamide)、雙氯乙基曱胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮齊(novembichin)、苯芥月旦甾酉孚(phenesterine)、；發尼莫司'汀(prednimustine)、曲石舞胺(trofosfamide)、尿嗜口定氮芥(uracilmustard);亞確脲類(nitrosoureas),i者如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、〉各莫司'汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)禾口雷莫司汀(ranimustine);4元生素類,諸如烯二炔類抗生素(enediyne)(例如加利車霉素(calicheamicin)，尤其是加利車霉素和加利車霉素OIl，參見例如Agnew,C/zem./"f/.￡d33:183-186(1994);dynemicin包括dynemicinA;二膦酸鹽類(bisphosphonates)，諸如氯膦酸鹽(clodronate);埃斯波霉素(esperamicin);以及新制癌素(neocarzinostatin)發色團和相關色蛋白烯二炔類抗生素發色團)、阿克拉霉素(acladnomycin)、放線菌素(actinomycin)、氛茴霉素(anthramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來霉素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、柔紅霉素(daunombicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)(Adriamycin)(包括嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脫氧多柔比星)、表柔比星(epimbicin)、依索比星(esombicin)、伊達比星(idambicin)、麻西羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素類(mitomycins)諸如絲裂霉素C、霉酚酸(mycophenolicacid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、potfiromycin、口票呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)和佐柔比星(zorubicin);抗代i射物，-睹如曱氨p某p令(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物，諸如二曱葉酸(denopterin)、曱氨喋呤(methotrexate)、蟲萊羅呤(pteropterin)和三曱曲沙(trimetrexate);噪呤類似物，i者如氟達4立濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤(mercaptopurine)、石克口米嘌呤(thiamiprine)和石克鳥嘌呤(thioguanine);嘧咬類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿4L月包脊(azacitidine)、6—氮尿香(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苦(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)和氟尿脊(floxuridine);雄激素類，諸如卡魯睪酮(calusterone)、丙酉交屈4也i^酉同(dromostanolonepropionate)、表石克名#酉孚(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)和睪內酉旨(testolactone);抗腎上腺類，諸如氨魯米特(aminoglutethimide)、米4乇坦(mitotane)和曲洛司坦(trilostane);葉酸補充劑，諸如亞葉酸(folinicacid);醋葡醛內酯(aceglatone);趁磷酰胺糖香(aldophosphamideglycoside);氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid);恩尿口密口定(eniluracil);安p丫口定(amsacrine);bestrabucil;t匕生群(bisantrene);依達曲沙、(edatraxate);地磷酰胺(defosfamide);地美可辛(demecolcine);地吖醌(diaziquone);elfomithine;依利醋4妄(elliptiniumacetate);^矣;皮審素(epothilone);依托格魯(etoglucid);硝酸鎵；羥脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼達明(lonidamine);美登木素生4勿石威類(maytansinoids)，il^口美登素(maytansine)和安絲菌素(ansamitocin);米4乇胍月宗(mitoguazone);米^6蒽醌(mitoxantrone);莫口底達醇(mopidamol);二胺硝吖咬(nitracrine);噴司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet);。比柔比星(pirambicin);洛索蒽酉昆(losoxantrone);鬼臼酸(podophyllinicacid);2-乙基酰肼(ethylhydrazide);丙卡巴肼(procarbazine);PSK;雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西佐喃(sizofiran);螺旋鍺(spirogermanium);纟田交《連孑包菌酉同酉臾(tenuazonicacid);三亞胺酉昆(triaziquone);2,2'，2"-三氯三乙胺；單端孢菌素類(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疣孢菌素(vermcarin)A、桿孢菌素(roridin)A和蟲它行菌素(anguidin));烏^立坦(urethan);長春地辛(vindesine);達卡巴。秦(dacarbazine);甘露莫司汀(mannomusthie);二溴甘露醇(mitobronitol);二澳衛矛醇(mitolactol);口底泊澳烷(pipobroman);gacytosine;阿糖胞苷(arabinoside)("Ara-C，，)；環磷酰胺(cyclophosphamide);塞替派(thiotepa);類紫杉醇類(taxoids)，例如紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL,Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,N丄)和多西他塞(docetaxel)(TAXOTERE,Rh6ne-PouiencRorer,Antony,France);苯丁酸氮芥(chlorambucil);吉西他濱(gemcitabine)(GemzarTM);6-硫鳥。票呤(thioguanine);3危基噪p令(mercaptopurine);曱氨口巣p令(methotrexate);4白類似物，i者i口》l頁4自(cisplatin)牙口卡4自(carboplatin);長春石威(vinblastine);4白(platinum);依托泊普(etoposide)(VP-16);異環磷酰胺(ifosfamide);米托蒽醌(mitoxantrone);長春新械(vincristine);長春瑞濱(vinorelbine)(NavelbineTM);能滅瘤(novantrone);替尼泊苦(teniposide);依達曲沙(edatrexate);道i若霉素(daimomycin);氨基蝶呤(aminopterin);希羅達(xeloda);伊本膦酸鹽(ibandronate);CPT-11;拓樸異構酶抑制劑RFS2000;二氟曱基鳥氨酸(difluoromethylornithine)(DMFO);類^L黃酉交(retinoid)，T者長。一見黃酸(retinoicacid);卡培他濱(capecitabine);及任何上述物質的藥劑學可接受鹽、酸或衍生物。該定義還包括作用為調節或抑制激素對腫瘤作用的抗激素劑，諸如抗雌激素類和選擇性雌激素受體調節劑類(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括Nolvadex)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)(Fareston);抑制在腎上腺中調節雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如例如4(5)-咪哇、氨魯米特(aminoglutethimide)、醋酸曱地孕酮(megestrolacetate)(MegaceTM)、依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔哇(fadrozole)、伏氯哇(vorozole)(RivisorTM)、來曲口坐(letrozole)(FemaraTM)禾口阿那曲口坐(anastrozole)(Arimidex);抗雄激素類，諸如氟他米特(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin);及任何上述物質的藥劑學可接受鹽、酸或衍生物。"生長抑制劑"在用于本文時指在體外或在體內抑制細胞，尤其是過表達本文中所鑒定的任何基因的癌細胞生長的化合物或組合物。如此，生長抑制劑是顯著降低處于S期的過表達所述基因的細胞百分比的藥劑。生長抑制劑的例子包括阻斷細胞周期行進(處于S期以外的位置)的藥劑，諸如誘導Gl停滯和M期停滯的藥劑。經典的M期阻斷劑包括長春藥類(vincas)(長春新石咸(vincristine)和長春/5成(vinblastine))、泰素(taxol)、和拓樸異構酶II抑制劑i者^口多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epimbicin)、柔纟工審素(daunorubicin)、依托泊苷(et叩oside)和博來霉素(bleomycin)。那些阻滯G1的藥劑也溢出進入S期停滯，例如DNA烷化劑類諸如他莫昔芬(tamoxifen)、潑尼松(prednisone)、達卡巴口秦(dacarbazine)、雙氯乙基曱胺(mechlorethamine)、順柏(cisplatin)、曱氨喋呤(methotrexate)、5-氟尿嘧口定(5-fluorouracil)和ara-C。更多信息可參見T7eAfo/ecw/arias7Jo/Ca"ce。MendelsohnandIsrael編,第1章,題為"Cellcycleregulation,oncogenes,andantineoplasticdrugs",Murakamie/1a/.,WBSaunders,Philadelphia(1995),尤其是第13頁。術語"凋亡"和"凋亡活性"以廣義使用，指哺乳動物中有序或受控形式的細胞死亡，通常伴隨著一種或多種特征性細胞變化，包括細胞質濃縮、質膜微絨毛喪失、細胞核節段化、染色體DNA降解或線粒體功能喪失。例如可以通過本領i或已知的細"包存活力測定法(例如Alamar藍測定法或MTT測定法)、FACS分析、胱天蛋白酶活化、DNA片段化(參見例如NicolettiWa/.，/mmw"o/.MeAoA139:271-279(1991))、及多聚ADP核糖聚合酶、"PARP"、切割測定法來測定和測量這種活性。在用于本文時，術語"病癥，，一般指將會從使用本文中所描述的組合物進行的處理中獲益的任何疾患。這包括慢性和急性病癥，以及那些使哺乳動物趨向于所討論病癥的病理狀況。待治療病癥的非限制性例子包括良性和惡性癌癥；炎性、傳染性、血管發生性和免疫學病癥、自身免疫性病癥、關節炎(包括類風濕性關節炎)、多發性硬化及HIV/AIDS。術語"癌癥"、"癌性"或"惡性肺瘤"指向或描述哺乳動物中特征通常為細胞生長不受調控的生理疾患。癌癥的例子包括但不限于癌、淋巴瘤、白血病、母細胞瘤和肉瘤。此類癌癥的更具體例子包括鱗狀細胞癌、骨髓瘤、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膠質瘤、胃腸(道)癌、腎的癌(renalcancer)、卵巢癌、肝癌、成淋巴細胞性白血病、淋巴細胞性白血病、結腸直腸癌、子宮內膜癌、腎癌(kidneycancer)、前列腺癌、曱狀腺癌、成神經細胞瘤、胰腺癌、多形成膠質細胞瘤(glioblastomamultiforme)、宮頸癌、月鹵癌、胃癌、膀胱癌、肝瘤(hepatoma)、乳^^癌、結腸癌、及頭和頸癌。術語"體液應答"和"細胞應答"在用于本文時指哺乳動物對抗原的免答，或者二者。Thl類T輔助細胞在產生細胞應答方面發揮作用，Th2類T輔助細胞在有效生成高親和力抗體方面發4軍作用。術語"T輔助(Th)細胞，，在用于本文時指T細胞中幫助生成細胞毒性T細胞及配合B細胞刺激抗體生成的功能性亞類。輔助T細胞識別與II型MHC分子相關的抗原，為效應細胞提供依賴和不依賴(細胞因子和趨化因子)接觸的信號。術語"Thl"指T輔助細胞中生成TNF、IFN-y和IL-2(及其它細胞因子)及引發與針對攻擊的細胞即非免疫球蛋白應答有關的炎性反應的亞類。術語"Th2"指T輔助細胞中生成IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和其它細胞因子及與針對免疫攻擊的免疫球蛋白(體液)應答有關的的亞類。術語"免疫相關疾病"指哺乳動物中由哺乳動物免疫系統成分引起、介導、或以其它方式促成發病的疾病。還包括刺激或干預免疫應答對疾病發展具有改善作用的疾病。該術語包括自身免疫病、免疫介導的炎性疾病、非免疫介導的炎性疾病、傳染病、和免疫缺陷病。可依照本發明治療的免疫相關和炎性疾病的例子，其中有些是免疫或T細胞介導的，包括系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、幼年型慢性關節炎、脊推關節病、系統性硬化(硬皮病)、特發性炎性肌病(皮肌炎、多肌炎)、斯耶格倫氏(Sjogren)綜合征、系統性血管炎、結節病、自身免疫性溶血性貧血(免疫性全血細胞減少癥、陣發性夜間血紅蛋白尿)、自身免疫性血小板減少癥(特發性血小板減少性紫癜、免疫介導的血小板減少癥)、曱狀腺炎(格雷夫斯氏(Graves)病、橋本氏(Hashimoto)甲狀腺炎、幼年型淋巴細胞性曱狀腺炎、萎縮性曱狀腺炎)、糖尿病、免疫介導的腎病(腎小球腎炎、腎小管間質性腎炎)、中樞和周圍神經系統的脫髓鞘病諸如多發性硬化、特發性脫髓鞘多神經病或格-巴二氏(Guillain-Bar^)綜合征、和慢性炎性脫髓鞘多神經病、肝膽病諸如傳染性肝炎(曱型、乙型、丙型、丁型、戊型和其它非嗜肝病毒肝炎)、自身免疫性慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎、和硬化性膽管炎、炎性和纖維化肺病諸如炎性腸病(潰癡性結腸炎、克羅恩氏(Crohn)病)、麩膠敏感性腸病、和惠普爾氏(Whipple)病、自身免疫或免疫介導的皮膚病包括大皰性皮膚病、多形紅斑和接觸性皮炎、4艮屑病、變應性疾病諸如哮喘、變應性鼻炎、特應性皮炎、食物超敏反應和蕁麻疹、肺的免疫學疾病諸如嗜曙紅細胞性肺炎、特發性肺纖維化和超敏反應性肺炎、移植相關疾病包括移植物排斥和移植物抗宿主病。傳染病包括AIDS(HIV感染)、曱型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎、細菌感染、真菌感染、原蟲感染和寄生蟲感染。"自身免疫病"在本文中以廣義、一般意義使用，指哺乳動物中因哺乳動物個體對其自身組織組分的體液或細胞免疫應答而破壞正常或健康組織的病癥或疾患。例子包括但不限于紅斑狼瘡、曱狀腺炎、類風濕性關節炎、銀屑病、多發性硬化、自身免疫性糖尿病和炎性腸病(IBD)。術語"標記的"在用于本文時指包含抗體或多肽且其與"標簽多肽"融合的嵌合分子。標簽多肽具有足夠殘基以提供表位而可制備針對其的抗體或者提供一些其它功能諸如寡聚的能力(例如具有亮氨酸拉鏈結構域的肽所發生的)，但又足夠短使得其不干擾所述抗體或多肽的活性。標簽多肽優選還適的標簽多肽通常具有至少6個氨基酸殘基，通常約8個到約50個氨基酸殘基之間(優選約10個到約20個殘基之間)。"分離的"，在用于描述本文中所公開的各種肽或蛋白質時，意指已經鑒定且與/由其天然環境的一種成分分開和/或回收的肽或蛋白質。肽或蛋白質的天然環境的污染性成分指通常會干擾其診斷或治療用途的物質，可包括酶、激素、和其它蛋白質性質或非蛋白質性質的溶質。在優選的實施方案中，將肽或蛋白質純化至(1)足以通過使用轉杯式測序儀獲得至少15個殘基的N-末端或內部氨基酸序列的程度，或(2)根據使用考馬斯藍或優選銀染色的非還原性或還原性條件下的SDS-PAGE,達到同質，或(3)根據質譜或肽作圖技術，達到同質。既然肽或蛋白質的天然環境的至少一種成分不會存在，那么分離的物質包括重組細胞內的原位肽或蛋白質。然而，分離的肽或蛋白質通常通過至少一個純化步驟來制備。關于本文中所鑒定的序列的"百分比(％)氨基酸序列同一性"定義為對比序列并在必要時引入缺口以獲取最大百分比序列同一性后，且不將任何保守替代視為序列同一性的一部分，候選序列中與參考序列中的氨基酸殘基相同的氨基酸殘基的百分率。可以以本領域技術范圍內的多種方式進行序列對比以測定百分比氨基酸序列同一性。本領域技術人員可決定測量序列對比的適宜參數，包括指派對所比較的全長序列獲得最大對比所需的算法。為了本發明，可使用序列比較計算機程序ALIGN-2來獲得百分比氨基酸序列同一性值，ALIGN-2程序由Genentech公司編寫，其源代碼已經連同用戶文檔一起提交給美國版權局(USCopyrightO伍ce,Washington,DC,20559)，并以美國版權注冊號TXU510087注冊。公眾可通過Genentech公司(SouthSanFrancisco,California)得到ALIGN-2程序。所有序列比較參數由ALIGN-2程序設定且不變。雜交反應的"嚴格性'，可以由本領域普通技術人員容易的確定，而且通常根據探針長度、洗滌溫度和鹽濃度憑經驗計算。一般而言，較長的探針要求較高的溫度以正確退火，而較短的探針需要較低的溫度。雜交通常依賴于針和可雜交序列之間的期望同一性程度越高，可使用的相對溫度也越高。結果是，推斷出較高相對溫度將趨向于使反應條件更為嚴格，而較低溫度也就較不嚴格。關于雜交反應嚴格性的其它細節和解釋，參見Ausubel"a/.,Cwrre"7V。toco/s/"Mo/ecw/ar所o/c^y,WileyIntersciencePublishers(1995)。"高嚴格性條件"，如本文中所定義的，通過如下各項定義(1)采用低離子強度和高溫進行清洗；0.015M氯化鈉/0.0015M檸檬酸鈉/0.1%十二烷基石克酸鈉，于50°C;(2)在雜交過程中采用變性劑；50%(v/v)曱酰胺及0.1%牛血清清蛋白/0.1%Ficoll/0.1%聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸鈉緩沖液pH6.5及750mM氯化鈉，75mM檸檬酸鈉，于42。C;或(3)采用50%曱酰胺，5xSSC(0.75MNaCl,0.075M檸檬酸鈉)，50mM磷酸鈉(pH6.8)，0.1%焦磷酸鈉，5xDenhardt氏溶液，超聲處理的鮭魚精DNA(50(ig/ml)，0.1%SDS,和10%硫酸右旋糖苦，于42°C,及于42。C在0.2xSSC(氯化鈉/^f寧檬酸鈉)和50%甲酰胺中清洗，接著于55。C在含EDTA的O.lxSSC中進行高嚴格性清洗。"中等嚴才各條件，，可以如Sambrook"<a/.，M9/ecw/arC7owVgv丄a6oratorj;Ma做a/,NewYork,ColdSpringHarborPress(1989)中所述鑒定，包括于37。C在含20%甲酰胺，5xSSC(150mMNaCl，15mM檸檬酸三鈉),50mM磷酸鈉(pH7.6)，5xDenhardt氏溶液，10%石危酸右旋糖苦，和20mg/ml變性剪切的鮭魚精DNA的溶液中溫育過夜，接著于約37-50。C在lxSSC中清洗濾膜。技術人員將認識到如何在必要時調整溫度、離子強度等以適應諸如探針長度等因素。術語"引物"指與互補RNA或DNA靶多核苦酸雜交并充當通過核苷酸轉移酶的作用從單核苷酸逐步合成多核苷酸的起點(如例如聚合酶鏈反應中所發生的)的寡核苷酸序列。術語"調控序列"指在特定宿主生物體中表達可操作連接的編碼序列所必需的DNA序列。例如，適于原核生物的控制序列包括啟動子、任選的操縱基因序列、和核糖體結合位點。已知真核細胞利用啟動子、多腺苷酸化信號、和增強子。若一段核酸與另一段核酸序列處于功能性相互關系中，則它是"可操作連4妄"的。例如，若前序列(presequence)或分泌前導(secretoryleader)的DNA表達成參與多肽分泌的前蛋白質(preprotein)，則它與多肽的DNA可操作連接；若啟動子或增強子影響編碼序列的轉錄，則它與該序列可操作連接；或者，若核糖體結合位點的位置促進翻譯，則它與編碼序列可操作連接。通常，"可操作連接"意味著相連的DNA序列是相鄰的，而且在分泌前導的情況中意味著相鄰且處于閱讀狀態。然而，增強子不必相鄰。連接可以通過在方便的限制性位點處的連接反應來實現。如果沒有此類位點，那么依照常規實踐使用合成的寡核苷酸銜接頭或接頭。"抗體依賴性細胞介導的細胞毒性"和"ADCC"指由細胞介導的反應，其中表達Fc受體(FcR)的非特異性細胞毒性細胞(例如天然殺傷(NK)細胞、嗜中性粒細胞和巨噬細胞)識別靶細胞上結合的抗體，隨后引起靶細胞溶解。介導ADCC的主要細胞，nk細胞，只表達FcyRIII，而單核細胞表達FcyRI、FcyRII和FcyRIII。RavetchandKinet,/wmimo/.9:457-92(1991)第464頁表3總結了造血細胞上的FcR表達。為了評估目的分子的ADCC活性，可進4亍體外ADCC測定法，諸如美國專利No.5,500,362或5,821，337中所記載的。可用于此類測定法的效應細胞包括外周血單個核細胞(PBMC)和天然殺傷(NK)細胞。或者/另外，可在體內評估目的分子的ADCC活性，例如在動物模型中，諸如Clynesrfa/.,/WAS*(T75^95:652-656(1998)中所披露的。"人效應細胞"指表達一種或多種FcR并行使效應器功能的白細胞。優選的是，該細胞至少表達FcYRIII并執行ADCC效應器功能。介導ADCC的人白細胞的例子包括外周血單個核細胞(PBMC)、天然殺傷(NK)細胞、單核細胞、細胞毒性T細胞和嗜中性粒細胞，優選PBMC和NK細胞。術語"Fc受體"或"FcR"用于描述結合抗體Fc區的受體。優選的FcR是天然序列人FcR。此外，優選的FcR是結合IgG抗體的FcR(y受體)，包括FqRJ、FcyRII和FqRin亞類的受體，包括這些受體的等位變體和可變剪接形式。FqRII受體包括FcyRIIA("活化受體")和FcyRIIB("抑制受體")，它們具有相似的氨基酸序列，區別主要在于其胞質結構域。活化受體FcyRIIA在其胞質結構域中包含免疫受體基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受體FqRIIB在其胞質結構域中包含免疫受體基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(參見Dagron,Jmw.Tev./附附ww/.15:203-234(1997))。FcR的綜述參見RavetchandKinet，j朋w.iev./mw朋o/.9:457-492(1991);Capelea/.,/m附冊owef/20(iy4:25-34(1994);deHaase,a/.,C"".Med126:330-341(1995)。術語"FcR"在本文中涵蓋其它FcR,包括未來將會鑒定的FcR。該術語還包括新生兒受體，FcRn,它負責將母體的IgG轉移給胎兒(Guyer"J./wmw"o/.117:587(1976)和Kimefa/.,J.Immunol.24:249(1994))。FcR在本文中包括多態性，諸如編碼FcyRIIIa的基因中導致位于受體結合IgGl的區域中第158位氨基酸或為笨丙氨酸(F)或為纈氨酸(V)的遺傳二態性。純合纈氨酸FqRina(Fcyina-158V)已經在體外顯示出相對于純合苯丙氨酸FcyRIIIa(FqRnia-158F)或雜合(FcYina-158F/V)受體具有更高的對人IgGl的親和力且介導提高的ADCC。"補體依賴性細胞毒性"或"CDC"指在存在補體時分子溶解靶物的能力。補體激活途徑是由補體系統第一組分(Clq)結合與關聯抗原復合的分子(例如抗體)起始的。為了評估補體激活，可進行CDC測定法，例如如Gazzano-Santoroa/.,J./mwwwo/.Me^zcxis1202:163(1996)中所i己載的。ii.本發明的各種方法和材料功能。先天性免疫系統包括NK細胞、樹突細胞、巨噬細胞和中性粒細胞，不僅在對感染的早期應答中，而且還在指導向基于T和B細胞的適應性免疫的轉變中發揮重大作用(DiefenbachandRaulet,Immunol.Rev"188:9-21(2002))。先天性免疫細胞介導受感染細胞的直接殺傷和消除；隨后，它們通過與樹突細胞的物理相互作用及后續特定細胞因子的分泌而積極支持適應性功能的形成(DiefenbachandRaulet，Immunol.Rev.,181:170-184(2001);Fernandezetal,,Eur.CytokineNetw.,13:17-27(2002);Ikedaetal.,CytokineGrowthFactorRev.,13:95-109(2002))。INF-y和IL-12使輔助CD4+T纟田胞的發育偏向THl亞型，它激活CD8+效應T細胞應答，而IL-4誘導丁H2類，它刺激B細月包介導的抗體應答(DiefenbachandRaulet,2002,supra;Fernandezetal.,2002，supra;Ikedaetal.，2002,supra)。先天性免疫不僅作為針對感染的一線防御的是重要的，而且對于在形成適應性免疫所需時間段里保護宿主也是重要的。另外，先天性應答極大(critically)影響應答感染性攻擊而形成的適應性對幾制的本質(Castriconietal.，CRBiol"327:533-537(2004);Loetal"Immunol.Rev"169:225-239(1999);PaluckaandBanchereau,J.Clin.Immunol"19:12-25(1999);PaluckaandBanchereau,Nat.Med.,5:868-870(1999))。NK細胞與巨噬細胞和樹突細胞的相互作用刺激支持特定T和/或B細胞應答形成的特定細胞因子的分泌(PaluckaandBanchereau,J.Clin.Immunol"19:12-25(1999);PaluckaandBanchereau,NatMed.,5:868-870(1999);Trinchieri,Semin.Immunol.,7:83-88(1995))。NK細胞的IFN-y分泌及巨噬細胞和樹突細胞的IL-12生成促進適應性TH1應答的形成，導致細胞毒性T細胞效應器功能(Coudertetal.,J.Immunol.,169:2979-2987(2002);Fujiietal.，J.Exp.Med"198:267-279(2003);Gerosaetal.,J.Exp.Med.,195:327-333(2002);Panetal"Immunol.Letters,94:141-151(2004);Varmaetal"Clin.Diag.LabImmunol.,9:530-543(2002》。相反，NKT細胞的IL-4生成促進適應性TH2分化和B細胞活化(Araujoetal.,Int.Immunol.,12:1613-1622(2000);Kanekoetal"J.Exp.Med.,191:105-114(2000);Leite-De-Moraesetal"J.Immunol.,166:945-951(2001))。本申請中公開的實驗表明，TWEAK是先天性系統及其與適應性免疫的介面的重要調控物。先天性免疫細胞，即NK細胞、巨噬細胞和樹突細胞，表達TWEAK及其受體FN14，并在受到刺激時上調這兩種分子。相反，適應性系統的細胞，包括T和B細胞，不表達顯著水平的TWEAK或FN14。這種表達;M式說明，先天性免疫細胞中的TWEAK信號傳導可能調控先天性免疫功能，而且可能通過其對先天性活性的調控而間接影響適應性免疫應答。如下文實施例部分所述，所生成的TWEAK敲除小鼠是存活且健康的，證明TWEAK對于正常發育不是至關重要的。然而，TWEAK;小鼠顯示出與年齡相仿的野生型同胞相比NK細胞的顯著積累，暗示TWEAK對NK細胞生成和/或死亡的調控。消除TWEAK基因不改變骨髓中NK細胞的量，說明TWEAK缺失時NK細胞形成不消除。相反，中和TWEAK保護人NK細胞免于TNF-a、LPS或IFN-y的凋亡誘導。這些發現說明，AICD削弱而非生成增加引起TWEAK一小鼠中NK細胞積累。如此，TWEAK的一項免疫調控作用可能是通過在免疫學消除(immunologicalresolution)時支持激活的NK細胞的消減來幫助預防過度先天性應答的潛在損害而進行的。在申請人的實驗中，小鼠的TWEAK缺陷實質性提高小鼠對系統性LPS注射的敏感性，進一步暗示TWEAK對先天性應答的約束。考慮到NK細胞活性是對LPS的全身性炎癥反應的重要成分(Emotoetal.,J.Immunol.,169:1426-1432(2002);Heremansetal.,Eur.J.Immunol"24:1155-1160(1994))，對TWEAK—、鼠的超敏反應的一種解釋可能是它們升高的NK細胞數。然而，申請人另外發現，在體內在暴露于LPS后，TWEAK缺陷的NK細胞生成更多的IFN-而TWEAK,巨噬細胞生成更多的IL-12和更少的IL-10。另外，TWEAK中和增強LPS刺激的NK細胞和巨噬細胞的IFN-y和IL-12生成。這些結果說明，TWEAK一小鼠對LPS的提高的敏感性不僅源自它們升高的NK細胞數，而且還由于先天性免疫細胞更多生成IFN-y和IL-12。如此，在支持NKAICD以外，TWEAK可能通過抑制關鍵的促炎性細胞因子的分泌而削弱先天性應答。在這點上，TWEAK顯著不同于其親戚TNF-a,后者刺激IL-12和IFN，的分泌，由此提升先天性炎癥應答(D'Andreaetal.,丄Exp.Med"178:1041-1048(1993》Oswaldetal.,Eur.CytokineNetw.，10:533-540(1999);Wilhelmetal.，J.Immunol.,166:4012-4019(2001);ZhanandCheers，J.Immunol.,161:1447-1453(1998))。事實上，與TWEAK敲除對LPS的超敏感性相反，TNF-ot或TNFR1敲除小鼠對LPS誘導的致死性有抵抗力(Pasparakisetal"J.Exp.Med.,184:1397-1411(1996);Rotheetal"Circ.Shock，44:51-56(1994))。STAT-1是涉及應答感染而生成IFN-y和IL-12的關鍵信號轉導物(Dupuisetal"Immunol.Rev.,178:129-137(2000);Feinbergetal"Eur.J.Immunol"34:3276-3284(2004))。比較來自TWEAK一與野生型小鼠的NK細胞和巨噬細胞中的磷酸-STAT-1，揭示了基礎活性的提升及應答LPS的刺激增強。這一結果說明TWEAK抑制STAT-1活性，與TNF-a相反，后者增強這種功能(Chenetal.，Immunology,107:199-208(2002))。如此，可能有助于TWEAK抑制IFN-y和IL-12生成的一種機制是抑制STAT-1。與STAT-1—樣，MF-kBI在調控細胞因子基因轉錄中也發揮重要作用(Feinbergetal.，Eur.J.Immunol.,34:3276-3284(2004);ZhanandCheers,J.Immunol"161:1447-1453(1998》。在人NK細胞和巨噬細胞中，TWEAK刺激延長的NF-kB1磷酸化，誘導該因子與轉錄阻抑蛋白HDAC-1的結合。相反，TNF-a誘導短暫的NF-kB1磷酸化及與轉錄共激活蛋白p300的結合。如此，有助于TWEAK抑制IFN-y和IL-12合成的第二種機制可能是誘導NP-kB1與HDAC-1之間的結合。TWEAK與TNF-a在調控NF-kB1方面的差異可能是由于NF-kB1磷酸化的動力學，它影響該因子與其它轉錄調控物的結合，使得瞬時磷酸化有利于與p300的相互作用，而持續的修飾促進與HDAC-1的結合。這一觀察結果與TNF-a對c-JunN-末端激酶(JNK)途徑的調控之間似乎存在平行關系，其中瞬時與持續JNK磷酸化之間，與促進細胞存活與細胞死亡之間，相互關聯(VarfolomeevandAshkenazi,Mol.CellBiol"24:997-1006(2004))。申請人的發現說明，通過促進NKAICD及通過抑制NK細胞和巨噬細胞的IFN-y和IL-12生成，NK細胞和巨噬細胞應答感染的TWEAK表達有助于削弱先天性炎癥應答。IFN-y和IL-12不僅增強先天性炎癥應答，而且還促進向適應性免疫的轉變，有利于細胞THl型應答。申請人的觀察結果，即在缺乏TWEAK時，年老小鼠形成增大的脾，且不僅NK細胞(占脾細胞的很小部分)還有TH1表型的T細胞數目都有增加。更多實驗證據支持TWEAK對適應性轉變的調控。在小鼠B16黑素瘤模型中，TWEAK;、鼠抵制中等攻擊性B16.F10亞克隆的生長，而野生型同胞未能抗擊肺瘤生長。雖然TWEAK;小鼠中NK細胞數增加能夠解釋它們抵制肺瘤的能力，但是這些小鼠中的抗腫瘤應答還與CD8+T細胞擴增有關，與TH1應答提升一致。TWEAK-、鼠還對更具攻擊性的B16.BL6亞克隆的生長有抵抗力，比野生型對照表現更好，而且在回體用腫瘤細胞再次攻擊時，與相應的對照相比，它們的CD8+t細胞和NK細胞生成顯著更多的IFN-y,而它們的巨噬細胞生成更多的IL-12。因此，這些發現說明tweak通過抑制IFN-y和IL-12生成并由此保持檢查后續TH1介導的細胞應答的形成而調控先天性免疫至適應性免疫的接合(interface)。申請人已經發現了TWEAK在免疫調控中的重要作用，它顯著不同于其結構相關物TNF-a的功能。TNF-a通過促進先天性細胞刺激和促炎性細胞因子分泌而在支持先天性炎癥應答中發揮重要作用。相反，TWEAK似乎對于通過介導NKAICD以及抑制NK細胞和巨喧細胞的IFN-y和IL-12生成而削弱先天性應答是至關重要的。盡管TNF-a通過促進STAT-1活化和NF-kB1結合p300而激活免疫調控基因的轉錄，但是TWEAK抑制STAT-1活性并誘導NF-kB1結合HDAC-1,它抑制基因轉錄。重要的是，TWEAK還在削弱先天性向適應性TH1免疫應答的轉變中具有至關重要的作用。如此，TWEAK的功能可能有助于約束宿主哺乳動物的先天性和適應性應答，確保免于過度炎癥和自身免疫的形成。這一發現說明TWEAK抑制可能在臨床上可用于提升抗感染和抗腫瘤免疫力，而TWEAK受體活化可能可用于控制急性和慢性自身免疫病。依照本發明的方法，包含一種或多種調控TWEAK或TWEAK受體活性的分子的組合物可用于治療多種病癥。例如，TWEAK拮抗劑可用于治療癌癥。此類TWEAK拮抗劑包括TWEAK抗體、TWEAK變體、TWEAK受體免疫粘附素、和TWEAK受體抗體。TWEAK拮抗劑可在體內以及回體(exvivo)使用。任選的是，以藥用組合物的形式使用TWEAK拮抗劑，下文有更為詳細的描述。在其它實施方案中，可以采用TWEAK激動劑來治療各種免疫相關疾患。此類TWEAK激動劑包括TWEAK受體抗體和TWEAK多肽。TWEAK激動劑可在體內以及回體(exvivo)使用。任選的是，以藥用組合物的形式使用TWEAK激動劑，下文有更為詳細的描述。在下文描述中，描述了多種方法和技術。設想了這些方法和技術可類似地用于制備多種TWEAK激動劑和拮抗劑。例如，設想了可制備TWEAK多肽和TWEAK多肽變體。TWEAK多肽變體可通過將適宜的核苷酸改變引入編碼DNA和/或通過合成期望多肽來制備。本領域技術人員將領會，氨基酸改變可改變TWEAK多肽的翻譯后加工，諸如改變糖基化位點的數目或位置或者改變膜錨定特征。可在本文所述TWEAK多肽中進行變異，例如使用例如美國專利5,364,934所述的保守和非保守突變的任何技術和指導方針。變異可以是編碼多肽的一個或多個密碼子的替代、刪除或插入，其導致氨基酸序列相對于天然序列多肽的改變。任選的是，變異是通過TWEAK多肽的一個或多個結構域中至少一個氨基酸為任何其它氨基酸所替代而進行。通過比較TWEAK多肽的序列與同源已知蛋白質分子的序列，并將高同源區中進行的氨基酸序列改變的數目最小化，可發現確定哪些氨基酸殘基可插入、替代或刪除而不會對期望活性有不利影響的方針。氨基酸替代可以是將一種氨基酸用具有相似結構和/或化學特性的另一種氨基酸替代的結果，諸如用絲氨酸替代亮氨酸，即保守氨基酸替代。插入或刪除可任選在約1個至5個氨基酸的范圍內。可通過在序列中系統進行氨基酸插入、替代或刪除，并對所得變體測試由全長本文提供了TWEAK多肽的片段。例如，在與全長天然蛋白質比較時，此類片段可在N-末端或C-末端截短，或者可缺少內部殘基。某些片段缺少對于TWEAK多肽的期望生物學活性不是至關重要的氨基酸殘基。TWEAK多肽片段可通過多種常規技術中的任一種來制備。期望肽片段可化學合成。一種備選方法涉及通過酶促消化產生多肽片段，例如通過用已知在由特定氨基酸殘基限定的位點處切割蛋白質的酶處理蛋白質，或者通過用合適的限制酶消化DNA,并分離期望片段。還有一種合適的技術涉及分離并通過聚合酶鏈式反應(PCR)擴增編碼期望多肽片段的DNA片段。限定DNA片段期望末端的寡核苷酸在PCR中用作5'和3'引物。在具體實施方案中，感興趣的保守替代見下表標題"優選替代"下所示。如果此類替代導致生物學活性的改變，那么可引入下表中稱為"例示替代"的更實質性改變，或者如下文關于氨基酸類別進一步所述的，并篩選產物。表<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>Leu對TWEAK多肽功能或免疫學身份的實質性修飾通過選擇在保持以下方面的效果上顯著不同的替代來完成(a)替代區域的多肽主鏈的結構，例如作為折疊片或螺旋構象，(b)靶位點處分子的電荷或疏水性，或(c)側鏈的體積。基于共同的側鏈特性，將天然存在殘基如下分組(1)疏水性的正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、lie;(2)中性、親水性的Cys、Ser、Thr;(3)酸性的Asp、Glu;(4)石咸性的Asn、Gln、His、Lys、Arg;(5)影響鏈耳又向的殘基Gly、Pro;及(6)芳香力矣的Trp、Tyr、Phe。非保守替代將需要用這些類別之一的一個成員替換另一個類別的。還可以將此類替代殘基引入保守替代位點，或者更優選的是，引入剩余的(非保守)位點。變異可使用本領域已知的方法來進行，諸如寡核苦酸介導的(定點)誘變、丙氨酸掃描、及PCR誘變。可對克隆的DNA進行定點誘變(Carteretal.，Nucl.AcidsRes.13:4331(1986);Zolleretal.，Nucl.AcidsRes.10:6487(1987))、盒式誘變(Wellsetal"Gene34:315(1985))、限制性選擇誘變(restrictionselectionmutagenesis)(Wellsetal"Philos.Trans.R.Soc.LondonSerA317:415(1986))或其它已知4支術以產生TWEAK多肽變體DNA。可采用掃描氨基酸分析沿著連續的序列鑒定一個或多個氨基酸。優選的用于掃描的氨基酸是相對較小的中性氨基酸。此類氨基酸包括丙氨酸、甘氨酸、絲氨酸和半胱氨酸。丙氨酸通常是這一類中的優選的用于掃描的氨基酸，因為它消除了f3-碳以外的側鏈且不大可能改變變體的主鏈構象(CunninghamandWells,Science,244:1081(1989))。丙氨酸通常還因為它是最常見的氨基酸而成為優選的。此外，在隱藏的和暴露的位置都經常可以找到它(Creighton，《TheProteins》，W.H.Freeman&Co.，NY;Chothia,J.Mol.Biol"150:1(1976))。如果丙氨酸替代不產生足夠量的變體，那么可以使用等構(isoteric)氨基酸。任何不涉及保持TWEAK多肽正確構象的半胱氨酸殘基也可替代，通常用絲氨酸，以改進分子的氧化穩定性和防止異常交聯。相反，可向TWEAK多肽中添加半胱氨酸鍵以改善其穩定性。下面的描述主要涉及通過培養用包含TWEAK多肽編碼核酸的載體轉化或轉染的細胞來生成TWEAK多肽。當然設想了可采用本領域公知的備選方法來制備本文中所設想的各種TWEAK激動劑和TWEAK拮抗劑。例如，可使用固相技術通過直接肽合成來生成適宜的氨基酸序列或其部分(參見例如Stewartetal"Solid-PhasePeptideSynthesis,W.H.FreemanCo.,SanFrancisco,CA,1969;Merrifield,J.Am.Chem.Soc.85:2149-2154(1963))。體外蛋白質合成可使用手工技術或通過自動化來進行。自動化合成可例如使用AppliedBiosystemsPeptideSynthesizer(FosterCity,CA)依月褒制造商的i兌明書來完成。TWEAK多肽的各個部分可分開化學合成，并使用化學或酶促方法組合以生成期望的TWEAK多肽。所述方法和技術類似地適用于生成TWEAK變體、經修飾形式的TWEAK和TWEAK抗體。1.編碼TWEAK多肽的DNA的分離編碼TWEAK多肽的DNA可以從cDNA文庫獲得，所述cDNA文庫從認為具有所述TWEAK多肽mRNA且以可檢測水平表達它的組織制備。因此，人的TWEAK多肽DNA可以方便的從以人組織制備的cDNA文庫獲得。TWEAK多肽編碼基因也可從基因組文庫或通過已知的合成流程(例如自動化核酸合成)獲得。可以用設計用于鑒定目的基因或由其編碼的蛋白質的探針(諸如至少約20-80個石咸基的寡核苷酸)篩選文庫。用選定4笨針篩選cDNA或基因組文庫可4吏用才示準;危禾呈進4亍，il"長口Sambrooketal.，MolecularCloning:ALaboratoryManual,NewYork,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989所述。分離編石馬TWEAK多肽的基因的一種備選方法是使用PCR方法學(Sambrooketal.,見上文；Dieffenbachetal.,PCRPrimer:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1995)。用于篩選cDNA文庫的技術是本領域眾所周知的。選作探針的寡核苷酸序列應該足夠長且足夠明確(unambiguous),使得假陽性降到最低。寡核苷酸優選是標記的，使得它在與所篩選文庫中的DNA雜交時可檢測出。標記方法是本領域公知的，包括使用放射標記物，像"P-標記的ATP、生物素化或酶標記。雜交條件，包括中等嚴格性和高度嚴格性，見Sambrooketal,見上文。在此類文庫篩選方法中鑒定的序列可以與保藏的和公共數據庫諸如GenBank或其它私有序列數據庫中可得到的其它已知序列比較和對比。分子限定區域內的或跨越全長序列的序列同一性(或是在氨基酸水平上或是在核苷酸水平上)可使用本領域知道的和本文描述的方法來測定。序列篩選選定的cDNA或基因組文庫來獲得，并且必要時，使用Sambrooketal.,見上文所述常規引物延伸流程來檢測可能不會逆轉錄為cDNA的mRNA的前體和力。工的中間產物。2.宿主細胞的選一奪和轉化將宿主細胞用本文所述用于TWEAK多肽生成的表達或克隆載體轉染或轉化，并在為了誘導啟動子、選擇轉化子、或擴增編碼期望序列的基因而作了恰當調整的常規營養培養基中培養。培養條件，諸如培養基、溫度、pH等等，可以由熟練技術人員無需過多實驗即可選擇。通常，用于使細胞培養物產量最大化的原理、方案和實用4支術可參見MammalianCellBiotechnology:aPracticalApproach,M.Butler,ed.,IRLPress,1991和Sambrooketal"見上文。真核細胞轉染和原核細胞轉化的方法是普通技術人員所知道的，例如CaCl2、CaP04、脂質體介導和電穿孔。根據所用宿主細胞，轉化使用對此類細胞適宜的標準技術進行。采用氯化鈣的鈣處理，如Sambrooketal.,見上文所述，或電穿孔通常用于原核細胞。用根瘤土^R桿菌(^grato"en'wm加we/ac/e"力的感染用于某些植物細胞的轉化，如Shawetal.,Gene23:315(1983)和1989年6月29日公開的WO89/05859所述。對于沒有此類細胞壁的哺乳動物細胞，可采用GrahamandvanderEb,Virology52:456-457(1978)的磷酸鈣沉淀法。哺乳動物細胞宿主系統轉染的一般情況參見美國專牙'J4,399,216。進入酵母的轉化通常依照VanSolingenetal.，J.Bact.130:946(1977)和Hsiaoetal"Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)76:3829(1979)的方法來進行。然而，也可使用用于將DNA導入細胞的其它方法，諸如核顯微注射、電穿孔、細菌原生質體與完整細胞的融合、或聚陽離子例如polybrene、聚鳥氨酸。關于用于轉化哺乳動物細胞的多種技術見Keownetal.,MethodsinEnzymology185:527-537(1990)和Mansouretal"Nature336:348-352(1988)。適于克隆或表達本文載體中的DNA的宿主細胞包括原核生物、酵母、或高等真核細胞。合適的原核生物包括但不限于真細菌，諸如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如腸桿菌科，諸如大腸桿菌。多種大腸桿菌菌抹是公眾可獲得的，諸如大腸桿菌K12菌林MM294(ATCC31,446);大腸桿菌XI776(ATCC31,537);大腸桿菌菌抹W3110(ATCC27,325)和K5772(ATCC53,635)。其它合適的原核生物宿主細胞包括腸桿菌科，諸如埃希氏菌屬(^&c/7er/c/7/a)例如大腸埃希氏菌(￡.co/z')、腸桿菌屬(五wfera6acter)、歐文氏菌屬(￡rw/"/a)、克雷伯氏菌屬(A7efo/e〃a)、變形菌屬(Prated)、沙門氏菌屬(iSa/mcwe〃fl)侈')戈口鼠傷寒沙、門氏菌(&7/mowe〃a(yp/z/mwn'wm)、沙'雷氏菌屬(Serraria)例》口粘質沙雷氏菌(Serra"amarcascara)、和志賀氏菌屬(幼z'ge〃a)，以及芽孢桿菌屬Uacz.〃n諸如枯草芽孢桿菌(5.ra磁s)和地衣芽孢桿菌(/z'c/2em/,&X例如1989年4月12日出版的DD266,710中公開的地衣芽孢桿菌41P)、假單胞菌屬(尸wMAmonw)諸如銅綠假單胞菌(Paerwg/"osa)、和《連霉菌屬(S&eptowyces)。這些例子是例示性的而非限制性的。菌抹W3110是一個特別優選的宿主或親本宿主，因為它是用于重組DNA產物發酵的常用宿主菌抹。優選的是，宿主細胞分泌最小量的蛋白水解酶。例如，菌4朱W3110可以^^飾，在編碼對宿主而言內源的蛋白質的基因中產生遺傳突變，此類宿主的例子包括大腸桿菌W3110菌抹1A2,其具有完整基因型大腸桿菌W3110菌抹9E4，其具有完整基因型toW/^3;大腸桿菌W3110菌抹27C7(ATCC55,244),其具有完整基因型to"^p&3//7oJ￡75「argF-/ac」769^g戶ow/rfew'';大腸桿菌W3110菌柹、37D6,其具有完整基因型to"^;fr3p/za4￡75/ac」769c/eg尸omp7V&7//vGAzw/;大腸桿菌W3110菌抹40B4,它是具有非卡那霉素抗性刪除突變的菌抹37D6;及具有1990年8月7日授權的美國專利4,946,783中公開的突變型周質蛋白酶的大腸桿菌菌抹。或者，體外克隆方法，例如PCR或其它核酸聚合酶反應也是合適的。除了原核生物以外，真核微生物，諸如絲狀真菌或酵母也是TWEAK多肽編碼載體的合適克隆或表達宿主。釀酒糖酵母(&cc/zaramyc^ce"WWae)是常用的低等真核宿主微生物。其它的包括粟酒裂殖糖酵母(5"c/h'zas"acc/7aramycas/90mZ)e)(BeachandNurse,lslature290:140(1981);EP139,383,1985年5月2日公開)；克魯維酵母屬(幻MyveramycM)宿主(美國專利4,943,529;Fleeretal.,Bio/Technology9:968-975(1991))諸如例如乳酸克魯維酵母(〖(MW98-8C,CBS683，CBS4574;Louvencourtetal.,LBacteriol.154(2):737-742(1983))、脆壁克魯維酵母(i:./rag/fe)(ATCC12,424)、保加利亞克魯維酵母W,/，)(ATCC16,045)、威克克魯維酵母(K>Wcyferam")(ATCC24,178)、Iwa/W(ATCC56,500)、果蠅克魯維酵母(A".(imy(9;M(3r聽)(ATCC36,906;VandenBergetal"Bio/Technology8:135(1990))、耐熱克魯維酵母(KAe，oto/erara)、和馬克思克魯維酵母(《.marx/a廂s);亞羅酵母屬(j^row/a)(EP402,226);巴斯德畢赤酵母(尸/c/z〖a)(EP183,070;Sreekrishnaetal"J.BasicMicrobiol.28:265-278(1988));假絲酵母屬();瑞氏木霉(7Hc/k^ctt^wew》)(EP244,234);4且并造月永孑包菌(Mwra印oracraM。)(Caseetal"Proc.Natl.Acad.Sci.USA76:5259-5263(1979));許旺酵母屬(Sc/zw朋m'o附yces)諸如許旺酵母(M觸扁'om戸soc".cfe齒fc)(EP394,538，1990年10月31曰公開)；和絲狀真菌諸如例如脈孢菌屬(A^wms;ora)、青霉屬Oe"/"7//wm)、彎頸霉屬(ro/，oc/a&wm)(WO91/00357,1991年1月10日公開)、和曲霉屬dperg7'〃ws)宿主諸如構巢曲霉(爿."油/(ms)(Balanceetal.,Biochem.Biophys.Res.Commun.112:284-289(1983);Tilb畫etal.,Gene26:205-221(1983);Yeltonetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:1470-1474(1984))和黑曲霉(Am'ger)(KellyandHynes，EMBOJ.4:475-479(1985))。曱基營養型酵母(Methylotropicyeast)適于本發明，包括但不限于能夠在曱醇上生長的、選自以下屬的酵母漢遜氏酵母屬(Z/"浴e朋/")、假絲酵母屬(C"w&fo)、克勒克氏酵母屬(A7oecfera)、畢赤氏酵母屬(尸/c/7&)、糖酵母屬(&cc/7"ram少ce力、球擬酵母屬(7bra/o戸/力、和紅酵母屬(W/70^ton^)。作為這類酵母的例子的具體物種列表可參見C.Anthony,TheBiochemistryofMethylotrophs,269(1982)。適用于表達糖基化TWEAK多肽的宿主細胞衍生自多細胞生物體。無脊推動物細胞的例子包括昆蟲細胞諸如果蠅S2和夜蛾Sf9,以及植物細胞，諸如棉、玉米、馬鈴薯、大豆、矮牽牛、番茄、和煙草的細胞培養物。已經鑒定了許多桿狀病毒株和變體及相應的允許昆蟲宿主細胞，它們來自諸如草地夜蛾S/。(i。/7fera如g—油(毛蟲)、埃及伊蟲丈Je<iesaegyW(蟲丈子)、白紋伊蟲丈^eiieya/6o//crwi"(蟲丈子)、黑月復果蟲黽Drorap1/^/"we/awogos/^r(果蟲黽)禾口家蠶So/7^yxwor/等宿主。公眾可獲得多種病毒抹用于轉染，例如苜蓿尺蠖Jwtogra/^aca/z/orm'caNPV的L-l變體和家蠶NPV的Bm-5抹，而且此類病毒可依照本發明用作本文的病毒，特別是用于轉染草地夜蛾細胞。然而，最受關注的是脊推動物細胞，而且培養(組織培養)中脊推動物細胞的繁殖已經成為常規流程。有用哺乳動物宿主細胞系的例子是用SV40轉化的猴腎CV1系(COS-7，ATCCCRL1651);人胚腎系(293或為了在懸浮培養中生長而亞克隆的293細胞，Grahametal.，J.GenVirol.36:59(1977));幼倉鼠腎細胞(BHK,ATCCCOL10);中國倉鼠卯巢細胞ADHFR(CHO，Urlaubetal.,Proc,Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980));小鼠塞托利(sertoli)細胞(TM4,Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980));猴腎細胞(CV1,ATCCCCL70);非洲綠猴腎細胞(VERO-76,ATCCCRL-1587);人宮頸癌細胞(HELA，ATCCCCL2);犬腎細胞(MDCK,ATCCCCL34);牛鼠(buffalorat)肝細胞(BRL3A，ATCCCRL1442);人肺細胞(W138，ATCCCCL75);人肝細胞(HepG2,HB8065);小鼠乳腺腫瘤(MMT060562,ATCCCCL51);TRI細胞(Matheretal.,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982));MRC5細胞；FS4纟田月包；和人肝瘤系(HepG2)。將宿主細胞用上述用于TWEAK多肽生成的表達或克隆載體轉化，并在為了誘導啟動子、選4奪轉化子、或擴增編碼期望序列的基因而恰當改良的常規營養培養基中培養。3.復制型載體的選擇和使用可以將編碼TWEAK多肽的核酸(例如cDNA或基因組DNA)插入復制型載體用于克隆(DNA擴增)或表達。多種載體是公眾可得到的。載體可以是例如質粒、粘粒、病毒顆粒或噬菌體的形式。可以通過多種方法將適宜的核酸序列插入載體。通常，使用本領域已知的技術將DNA插入適宜的限制性內切酶位點。載體構件通常包括但不限于下列一種或多種信號序列、復制起點、一種或多種標記基因、增強子元件、啟動子、和轉錄終止序列。包含一種或多種這些構件的合適載體的構建采用技術人員已知的標準連接技術。TWEAK多肽不僅可以直接重組生產，而且可以作為與異源多肽的融合多肽來生產，所述異源多肽可以是在成熟蛋白質或多肽的N-末端具有特定切割位點的信號序列或其它多肽。通常，信號序列可以是載體的構件，或者它可以是插入載體的TWEAK多肽編碼DNA的一部分。信號序列可以是原核信號序列，選自例如堿性磷酸酶、青霉素酶、lpp、或熱穩定的腸毒素II前導序列。為了酵母分泌，信號序列可以是例如酵母轉化酶前導序列、a因子前導序列(包括糖酵母和克魯維酵母的a-因子前導序列，后者見美國專利5,010,182)、或酸性磷酸酶前導序列、白色假絲酵母葡糖淀粉酶前導序列(1990年4月4日公開的EP362,179)、或1990年11月15日公開的WO90/13646中描述的信號。在哺乳動物細胞表達中，可以使用哺乳動物信號序列來指導蛋白質的分泌，諸如來自相同或相關物種的分泌型多肽的信號序列，以及病毒分泌前導序列。表達和克隆載體都包含能夠使載體在一種或多種選擇的宿主細胞中復制的核酸序列。眾所周知多種細菌、酵母、和病毒的此類序列。來自質粒pBR322的復制起點適合于大多數革蘭氏陰性細菌，2一質粒起點適合于酵母，而各種病毒起點(SV40、多瘤病毒、腺病毒、VSV、或BPV)可用于哺乳動物細胞中的克隆載體。表達和克隆載體通常將包含選擇基因，也稱為選擇標志。典型的選擇基因編碼如下蛋白質(a)賦予抗生素或其它毒素抗性，例如氨千青霉素、新霉素、曱氨蝶呤、或四環素；(b)補足營養缺陷；或(c)提供不能由復合培養基獲得的關鍵營養物，例如編碼芽孢桿菌D-丙氨酸消旋酶的基因。適于哺乳動物細胞的選擇標志的例子是能夠鑒定有能力攝取TWEAK多肽編碼核酸的細胞的選#^標志，諸如DHFR或胸苷激酶。在采用野生型DHFR時，適宜的宿主細胞是DHFR活性缺陷的CHO細胞系，其制備和擴增如Urlaubetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980)所述。適用于酵母的選擇基因為存在于酵母質粒YRp7中的基因(Stinchcombetal.,1979,Nature282:39;Kingsmanetal"1979,Gene7:141;Tschemperetal"1980,Gene10:157)。基因為缺乏在色氨酸中生長能力的酵母突變抹，例如ATCCNo.44076或PEP4-1提供了選擇標志(Jones,1977,Genetics85:12)。表達和克隆載體通常包含與TWEAK多肽編碼核酸序列可操作連接的啟動子以指導mRNA合成。受到多種潛在宿主細胞識別的啟動子是眾所周知的。適用于原核宿主的啟動子包括P-內酰胺酶和乳糖啟動子系統(Changetal.,Nature275:615(1978);Goeddeletal"Nature281:544(1979))、石咸性石粦酸酶、色氨酸(trp)啟動子系統(Goeddel,NucleicacidsRes.8:4057(1980);EP36,776)、和雜合啟動子諸如tac啟動子(deBoeretal"Proc.Natl.Acad.Sci.USA80:21-25(1983))。用于細菌系統的啟動子還將包含與編碼TWEAK多肽的DNA可操作連接的Shine-Dalgarno(S.D.)序列。適用于酵母宿主的啟動子序列的例子包括3-磷酸甘油酸激酶(Hitzemanetal.,J.Biol.Chem.255:2073(1980))或其它糖酵解酶(Hessetal.,J.Adv.EnzymeReg.7:149(1968);Holland,Biochemistry17:4900(1978))的啟動子，諸如烯醇酶、甘油醛-3-磷酸脫氬酶、己糖激酶、丙酮酸脫羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸異構酶、3-磷酸甘油酸變位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖異構酶、磷酸葡萄糖異構酶、和葡糖激酶。作為具有由生長條件控制轉錄的額外優點的誘導型啟動子的其它酵母啟動子是醇脫氫酶2、異細胞色素C、酸性磷酸酶、與氮代謝有關的降解酶、金屬硫蛋白、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、及負責麥芽糖和半乳糖利用的酶的啟動子區。適用于酵母表達的載體和啟動子進一步描述于EP73,657。在哺乳動物宿主細胞中由載體轉錄TWEAK多肽受到例如由病毒諸如多瘤病毒(polyomavirus)、禽痘病毒(fowlpoxvirus)(1989年7月5日/>開的UK2,211,504)、腺病毒(諸如腺病毒2)、牛乳頭瘤病毒、禽類肉瘤病毒(aviansarcomavirus)、巨細胞病毒、逆轉錄病毒、乙肝病毒和猿猴病毒40(SV40)基因組、由異源哺乳動物啟動子例如肌動蛋白啟動子或免疫球蛋白啟動子、及由熱休克啟動子獲得的啟動子的控制，倘若此類啟動子與宿主細胞系統相容的話。可通過在載體中插入增強子序列來提高高等真核細胞對編碼TWEAK多肽的DNA的轉錄。增強子是DNA的順式作用元件，通常大約10至300bp,作用于啟動子以增加轉錄。現在知道來自哺乳動物基因(球蛋白、彈性蛋白酶、清蛋白、a-胎蛋白和胰島素)的許多增強子序列。然而，通常使用來自真核細胞病毒的增強子。例子包括SV40復制起點晚期一側(lateside)的增強子(bp100-270)、巨細胞病毒早期啟動子增強子、多瘤病毒復制起點晚期一側的增強子、和腺病毒增強子。增強子可以剪接到載體中，位于TWEAK多肽編碼序列的5'或3'位置，但是優選位于啟動子的5'位點。用于真核宿主細胞(酵母、真菌、昆蟲、植物、動物、人、或來自其它多細胞生物體的有核細胞)的表達載體還將包含終止轉錄和穩定mRNA所必需的序列。此類序列通常可以由真核或病毒DNA或cDNA非翻i奪區的5'端和偶爾的3'端獲得。這些區域包含在編碼TWEAK多肽的mRNA的非翻譯部分中轉錄成聚腺苷酸化片段的核苦酸區段。適合在改動后在重組脊推動物細胞培養物中合成TWEAK多肽的其它方法、載體和宿主細月包見Gethingetal.,Nature293:620-625(1981);Manteietal.,Nature281:40-46(979);EP117,060;和EP117,058。4.培養宿主細胞可以在多種培養基中培養用于生成本發明TWEAK多肽的宿主細胞。商品化培養基諸如Ham氏F10(Sigma)、極限必需培養基(MEM，Sigma)、RPMI-1640(Sigma)、和Dulbecco氏改良的Eagle氏培養基(DMEM，Sigma)適于培養宿主細胞。另外，可以使用下列文獻中描述的任何培養基作為宿主細月包的i魯養基Hametal"1979,Meth.Enz.58:44;Barnesetal.,1980,Anal.Biochem.102:255;美國專利4,767,704;4,657,866;4,927,762;4,560,655;或5,122,469;WO90/03430;WO87/00195;或美國再版專利30,985。任何這些培養基可以根據需要補充激素和/或其它生長因子(諸如胰島素、運鐵蛋白、或表皮生長因子)、鹽(諸如氯化鈉、4丐、鎂、和磷酸鹽)、緩沖劑(諸如HEPES)、核苷酸(諸如腺苷和胸普)、抗生素(諸如GENTAMYCINTM藥物)、痕量元素(定義為通常以微摩爾范圍的終濃度存在的無機化合物)、和葡萄糖或等效能源。還可以以適當濃度包含本領域技術人員知道的任何其它必需補充物。培養條件諸如溫度、pH等即先前為表達而選擇用于宿主細胞的，這對于普通技術人員而言是顯然的。5.檢測基因擴增/表達基因的擴增和/或表達可以在樣品中直接測量，例如根據本文提供的序列，使用適宜的標記探針，通過常規的Southern印跡、對mRNA轉錄定量的Northern印跡(Thomas,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:5201-5205(1980》、點印跡(DNA分析)、半定量PCR、DNA陣列基因表達分析或原位雜交。或者，可采用能識別特定雙鏈體的抗體，所述雙鏈體包括DNA雙鏈體、RNA雙鏈體、及DNA-RNA雜合雙鏈體或DNA-蛋白質雙鏈體。繼而可標記抗體，并可進行測定法，其中所述雙鏈體結合到表面上，從而在雙鏈體在表面上形成時，可檢測與雙鏈體結合的抗體的存在。或者，為了直接對基因產物的表達定量，可通過免疫學方法測量基因表達，諸如細月包或組織切片的免疫組化染色和細胞培養物或體液的測定法。可用于免疫組化染色和/或樣品液體測定法的抗體可以是單克隆的或多克隆的，而且可以在任何哺乳動物中制備。方便的是，可針對天然序列TWEAK多肽或針對基于本文提供的DNA序列的合成肽或針對與TWEAKDNA融合且編碼特定抗體表位的外源序列來制備抗體。6.TWEAK多肽的純化可以從培養液或從宿主細胞裂解物中回收各種形式的TWEAK多肽。如果是膜結合的，那么可使用合適的去污劑溶液(例如Triton-X100)或通過酶促裂解使其從膜釋放。TWEAK多肽表達中所采用的細胞可通過多種物理或化學手段破裂，諸如凍融循環、超聲處理、機械破裂、或細胞溶解劑。可能期望從重組細胞蛋白質或多肽純化TWEAK多肽。下面的流程是合適純化流程的例示在離子交換柱上的分級分離；乙醇沉淀；反相HPLC;在硅土或陽離子交換樹脂諸如DEAE上的層析；層析聚焦；SDS-PAGE;硫酸銨沉淀；使用例如SephadexG-75的凝膠過濾；蛋白ASepharose柱以除去污染物諸如IgG;及結合TWEAK多肽的表位標記形式的金屬螯合柱。可采用多種蛋白質純化方法，此類方法是本領域已知的，并描述于例如Deutscher,MethodsinEnzymology,182(1990);Scopes,ProteinPurification:PrinciplesandPractice,Springer-Verlag,NewYork(1982)。純化步驟的選擇將取決于例如所用制備方法的性質和所制備的具體TWEAK多肽。本發明的方法中可以采用可溶形式的TWEAK。此類可溶形式的TWEAK可以包含修飾，如下文所述(諸如通過與免疫球蛋白、標簽標簽或TWEAK受體免疫粘附素可包含各種形式的TWEAK受體，諸如全長肽以及可溶形式的TWEAK受體或其片段。在具體的實施方案中，所述分子可包含TWEAK受體多肽與免疫球蛋白或其特定區域的融合物。對于二價形式的免疫粘附素，此類融合物可以是與IgG分子Fc區的融合物。Ig融合物優選包含用可溶(跨膜結構域刪除或滅活的)形式的多肽代替Ig分子內至少一個可變區的替代。在一個特別優選的實施方案中，免疫球蛋白融合物包含IgGl分子的鉸鏈、CH2和CH3，或者鉸鏈、CH1、CH2和CH3區。關于免疫球蛋白融合物的生成還可參見美國專利第5,428,130號，1995年6月27日公告及Chamowetal.,TIBTECH,14:52-60(1996)。最簡單且最直接的免疫粘附素設計將粘附素(例如TWEAK或TWEAK受體)的結合結構域與免疫球蛋白重鏈的Fc區進行組合。通常，在制備本發明的免疫粘附素時，將編碼粘附素結合結構域的核酸融合到編碼免疫球蛋白恒定區序列N-末端的核酸的C-末端，然而N-末端的融合物也是可能的。通常，在此類融合物中，所編碼的嵌合多肽將至少保留有功能活性的免疫球蛋白重鏈恒定區鉸鏈、CH2和CH3結構域。還可以對恒定區Fc部分的C-末端進行融合，或者緊挨著重鏈CHI或輕鏈對應區的N-末端進行。進行融合的精確位點不是至關重要的；具體位點是眾所周知的，而且可以進行選擇以優化免疫粘附素的生物學活性、分泌或結合特征。在一個優選的實施方案中，將粘附素序列融合在免疫球蛋白Gl(IgGl)Fc區的N-末端。有可能將整個重鏈恒定區與粘附素序列融合。然而，更優選的是，在融合中使用在鉸鏈區中緊挨著在化學上定義IgGFc的木瓜蛋白酶切割位點(即殘基216,以重鏈恒定區的第一個殘基為114)或其它免疫球蛋白的類似位點上游開始的序列。在一個特別優選的實施方案中，將粘附素氨基酸序列與IgG重鏈的(a)鉸鏈區、CH2和CH3，或者(b)CHl、鉸鏈、CH2和CH3結構域融合。對于雙特異性免疫粘附素，將免疫粘附素裝配成多聚體，特別是異二聚體或異四聚體。通常，這些裝配好的免疫球蛋白將具有已知的單元結構。基本的四鏈結構單元就是IgG、IgD和IgE存在的形式。四鏈單元在更高分子量的免疫球蛋白中重復；IgM通常作為通過二硫鍵保持在一起的四鏈基本單元的五聚體存在。IgA球蛋白及偶爾的IgG球蛋白也可以以多聚體的形式存在于血清中。在多聚體的情況中，各個四鏈單元可以是相同的或不同的。下面示意性的列舉了在本文范圍內的各種例示性的裝配好的免疫粘附素(a)ACL-ACL;(b)ACH-(ACH,ACl-ACh，ACl-VhCh,或VLCL-ACH);(c)ACL-ACH-(ACL-ACH,ACL-VHCH，VlCl-ACh,或VLCL-VHCH)(d)ACL-VHCH-(ACH,ACl-VhCh,或VLCL-ACH);(e)VLCL-ACH-(ACL-VHCH,或VLCL-ACH);及(f)(A-Y)n-(VLCL-VHCH)2，其中各個A代表相同或不同的粘附素氨基酸序列；VL是免疫球蛋白輕鏈可變區；VH是免疫球蛋白重鏈可變區；CL是免疫球蛋白輕鏈恒定區；CH是免疫球蛋白重鏈恒定區；n是大于1的整數；Y代表共價交聯劑的殘基。為簡短起見，上述結構只顯示了關鍵特征；它們沒有標明免疫球蛋白的連接(J)或其它結構域，也沒有顯示二硫鍵。然而，若結合活性需要此類結構域，則構建時它們應當存在于它們在免疫球蛋白分子中所占據的通常位置。或者，可以將粘附素序列插入免疫球蛋白重鏈與輕鏈序列之間，從而得到包含嵌合重鏈的免疫球蛋白。在這個實施方案中，將粘附素序列融合在免疫球蛋白每個臂中的免疫球蛋白重鏈的3，端，或是在鉸鏈與CH2結構域之間，或是在CH2與CH3結構域之間。類似的構建物已報道于Hoogenboometal.,Mol.Immunol"28:1027-1037(1991)。盡管本發明的免疫粘附素中不需要存在免疫球蛋白輕鏈，然而也可以存在免疫球蛋白輕鏈，或是與粘附素-免疫球蛋白重鏈融合多肽共價結合，或是直接與粘附素融合。在前一種情況中，通常將編碼免疫球蛋白輕鏈的DNA與編碼粘附素-免疫球蛋白重鏈融合蛋白的DNA共表達。在分泌后，雜合重鏈與輕鏈將共價結合以提供包含二個二硫鍵相連的免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的免疫球蛋白樣結構。適于制備此類結構的方法披露于例如美國專利4,816,567，公告于1989年3月28日。最方便的是通過將編碼粘附素部分的cDNA序列與免疫球蛋白cDNA序列以符合讀碼框的形式融合來構建免疫粘附素。然而，也可以使用與基因組免疫球蛋白片段的融合(參見例如Amffoetal.,Cell,61:1303-1313(1990);Stamenkovicetal.,Cell,66:1133-1144(1991))。后一種類型的融合要求存在Ig調控序列以供表達。編碼IgG重鏈恒定區的cDNA可以根據已發表的序列自衍生自脾或外周血淋巴細胞的cDNA文庫分離，通過雜交或者通過聚合酶鏈式反應(PCR)技術。將編碼免疫粘附素的"粘附素"和免疫球蛋白部分的cDNA串聯插入在所選宿主細胞中指導高效表達的質粒載體中。在其它實施方案中，TWEAK激動劑或TWEAK拮抗劑可以通過以美國專利Nos.4,640,835;4,496,689;4,301,144;4,670,417;4,791,192或4，179，337中所列方式將該分子與多種非蛋白聚合物之一，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯，或者其它類似分子諸如聚谷氨酸酯/鹽連接而共價修飾。此類PEG化形式可使用本領域已知技術來制備。本發明還設想了亮氨酸拉鏈形式的這些分子。"亮氨酸拉鏈"是本領域中用于指增強、促進或驅動其融合配偶體(例如亮氨酸拉鏈與之融合或連接的序列或分子)二聚化或三聚化的富含亮氨酸的序列的術語。本領域已經記載了多種亮氨酸拉鏈多肽。參見例如Landschulzetal.,Science,240:1759(1988);美國專利5,716，805;WO94/10308;Hoppeetal.,FEBSLetters,344:1991(1994);Maniatisetal"Nature,341:24(1989)。本領域技術人員將領會，亮氨酸拉鏈序列可以融合在分子的5'或3'端。本發明的TWEAK激動劑和TWEAK拮抗劑還可以以如下方式修飾，即通過將多肽與另一種異源多肽或氨基酸序列融合而形成嵌合分子。優選的是，所述異源多肽或氨基酸序列的作用是使嵌合分子寡聚化。在一個實施方案中，此類嵌合分子包括具有標簽的多肽的融合物，所述標簽提供了抗標簽抗體可選擇性結合的表位。通常將表位標簽置于多肽的氨基或羧基末端。此類表位標記形式的多肽的存在情況可使用針對標簽多肽的抗體來檢測。還有，表位標簽的提供使得多肽易于使用抗標簽抗體或結合表位標簽的其它類型親和基質通過親和純化進行純化。多種標簽多肽及其相應的抗體是本領域眾所周知的。例子包括聚組氨酸(poly-his)或聚組氨酸-甘氨酸(poly-his-gly)標簽；流感HA標簽多肽及其抗體12CA5(Fieldetal"Mol.Cell,Biol"8:2159-2165(1988》；c-myc標簽及其抗體8F9、3C7、6E10、G4、B7和9E10(Evanetal.,MolecularandCellularBiology,5:3610-3616(1985));及單純皰滲病毒糖蛋白D(gD)標簽及其抗體(Paborskyetal.，ProteinEngineering,3(6):547-553(1990))。其它標簽多肽包括Flag肽(Hoppetal.,BioTechnology，6:1204-1210(1988》;KT3表位肽(Martinetal.,Science,255:192-194(1992));a-微管蛋白表位肽(Skinneretal.,J.Biol.Chem.,266:15163-15166(1991));及T7基因10蛋白肽標簽(Lutz-Freyermuthetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:6393-6397(1990))。設想了抗TWEAK或抗TWEAK受體抗體也可用于當前公開的方法。這些抗體可以是單克隆抗體。本領域技術人員可利用本領域已知及本文中描述的方法來鑒定起TWEAK或TWEAK受體活性的激動劑或拮抗劑作用的TWEAK抗體或TWEAK受體抗體。單克隆抗體可使用雜交瘤法制備，諸如KohlerandMilstein,Nature"6:495(1975)所述。在雜交瘤法中，小鼠、倉鼠或其它適宜的宿主動物通常用免疫劑免疫以引發生成或能夠生成將特異性結合免疫劑的抗體的淋巴細胞。或者，可以在體外免疫淋巴細胞。免疫劑將通常包括TWEAK多肽或TWEAK受體或其融合蛋白，諸如TWEAK-IgG融合蛋白。通常，或是使用外周血淋巴細胞("PBL"),若希望人起源的細胞，或是使用脾細胞或淋巴節細胞，若希望非人哺乳動物來源。然后，使用合適的融合劑，諸如聚乙二醇，將淋巴細胞與永生化細胞系融合以開j成雜交瘤纟田月包(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,AcademicPress(1986),pp.59-103)。永生化細胞系通常是轉化的哺乳動物細胞，特別是嚙齒類、牛和人起源的骨髓瘤細胞。通常，采用大鼠或小鼠骨髓瘤細胞系。雜交瘤細胞可在合適的培養基中培養，所述培養基優選含有抑制未融合的永生化細胞生長或存活的一種或多種物質。例如，如果親本細胞缺乏酶次黃嘌呤鳥噤呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT或HPRT),那么用于雜交瘤的培養基通常將含有次黃噪呤、氨基喋呤和胸苷("HAT培養基")，這些物質阻止HGPRT缺陷細胞生長。優選的永生化細胞系是那些高效融合、支持選定的抗體生成細胞穩定的高水平的表達抗體、并對諸如HAT培養基等培養基敏感的細胞系。更優選的永生化細胞系是鼠源骨髓瘤系，可從例如索爾克研究所細胞分配中心(SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiege，California,USA)和美國典型i告養物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,Virginia,USA)獲得。用于生成人單克隆抗體的人骨髓瘤和小鼠-人異源骨髓瘤細胞系也已有描述(Kozbor,J.Immunol.133:3001(1984);Brodeuretal"MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,MarcelDekker,Inc.,NewYork(1987)pp.51-63)。然后可對雜交瘤細胞在其中培養的培養基測定針對TWEAK或TWEAK受體的單克隆抗體的存在。任選的是，通過免疫沉淀或通過體外結合測定法，諸如放射免疫測定法(RIA)或酶聯免疫吸附測定法(ELISA)，優選通過BIAcore測定法，測定由雜交瘤細胞生成的單克隆抗體的結合特異性。此類技術和測定法是本領域已知的。單克隆抗體的結合親和力可通過例如MunsonandPollard，Anal.Biochem.107:220(1980)的Scatchard分析來測定。在鑒定得到期望的雜交瘤細胞后，該克隆可通過有限稀釋流程進行亞克隆，并通過標準方法進行培養(Goding,見上文)。適于這一目的的培養基包括例如Dulbecco氏改良的Eagle氏培養基或RPMI-1640培養基。或者，雜交瘤細胞可在哺乳動物中作為腹水進行體內培養。可通過常規免疫球蛋白純化流程，諸如例如蛋白A-Sepharose、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析，將亞克隆分泌的單克隆抗體與培養基或腹水分開或純化。單克隆抗體還可通過重組DNA技術來生成，諸如美國專利4,816，567中所述。編碼單克隆抗體的DNA易于使用常規流程分離和測序(例如使用能夠特異性結合編碼單克隆抗體重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸探針)。雜交瘤細胞是此類DNA的優選來源。一旦分離，可將DNA置于表達載體中，然后將該表達載體轉染到不另外產生免疫球蛋白蛋白質的宿主細胞中，諸如大腸桿菌細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞，以在重組宿主細胞中獲得單克隆抗體的合成。還可以修飾DNA,例如通過替代，即用人重鏈和輕鏈恒定區的編碼序列代替同源鼠源序列(Morrisonetal.,Proc.Nat.Acad.Sci.81:6851(1984))，或者通過共價接合免疫球蛋白編碼序列和非免疫球蛋白多肽的整個或部分編碼序列。通常用此類非免疫球蛋白多肽替代本發明抗體的恒定區，或者用它們替代本發明抗體的一個抗原結合位點的可變區以產生嵌合二價抗體，其包含對TWEAK或TWEAK受體具有特異性的一個抗原結合位點和對不同抗原具有特異性的另一抗原結合位點。嵌合或雜合抗體也可在體外使用合成蛋白質化學的已知方法來制備，包括那些涉及交聯劑的方法。例如，可使用二硫鍵交換反應或通過形成硫醚鍵來構建免疫毒素。適于此目的的試劑的例子包括亞氨基硫醇酯/鹽(iminothiolate)和4-5克基丁酰亞胺酸曱酉旨(methyl陽4-mercaptobutyrimidate)。也可以生成單鏈Fv片段，諸如Iliadesetal.,FEBSLetters,409:437-441(1997)中所述。此類單鏈片段使用各種接頭的偶聯記載于Korttetal.，ProteinEngineering,10:423-433(199"。本領域知道用于重組生產和才喿作抗體的多種技術。下文更為詳細地描述了熟練技術人員通常使用的此類技術的例示性例子。^乂源必我舉通常，人源化抗體中引入了一個或多個來自非人來源的氨基酸殘基。這些非人氨基酸殘基常常稱作"輸入，，殘基，它們通常取自"輸入"可變區。人源化可基本上遵循Winter及其同事的方法進行(Jonesetal.，Nature321:522-525(1986);Riechmannetal.,Nature332:323-327(1988);Verhoeyenetal.,Science239:1534-1536(1988))，即用嚙齒類CDR或CDR序列替代人抗體的相應序列。因此，此類"人源化"抗體是嵌合抗體，其中基本上少于整個人可變區用來自非人物種的相應序列替代。在實踐中，人源化抗體通常是其中一些CDR殘基和可能的一些FR殘基用來自嚙齒類抗體中類似位點的殘基替代的人抗體。重要的是，抗體在人源化后保持對抗原的高親和力及其它有利的生物學特性。為了實現這一目標，依照一種優選的方法，通過使用親本和人源化序列的三維模型分析親本序列和各種概念性人源化產物的方法來制備人源化抗體。三維免疫球蛋白模型通常是可獲得的，且為本領域技術人員所熟悉。可獲得圖解和顯示所選候選免疫球蛋白序列的可能三維構象結構的計算機程序。檢查這些顯示圖像容許分析殘基在候選免疫球蛋白序列行使功能中的可能作用，即分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原的能力的殘基。這樣，可從共有和輸入序列中選出FR殘基并進行組合，從而獲得期望抗體特征，諸如對靶抗原的親和力提高。一般而言，CDR殘基直接且最實質的涉及對抗原結合的影響。問乂在#人單克隆抗體可通過雜交瘤方法生成。用于生成人單克隆抗體的人骨髓瘤和小鼠-人異源骨髓瘤細胞系已有描述，例如Kozbor，J.Immunol.133:3001(1984);Brodeuretal.,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63,MarcelDekker,Inc.,NewYork(1987)。現在有可能生成在缺乏內源免疫球蛋白生成的情況下能夠在免疫時生成人抗體完整全集的轉基因動物(例如小鼠)。例如，已經記載了嵌合和種系突變小鼠中抗體重鏈連接區(Jh)基因的純合刪除導致內源抗體生成的完全抑制。在此類種系突變小鼠中轉移大量人種系免疫球蛋白基因將導致在抗原工爻擊日于生成人4元《本。參見例^口JakobovitsWa/"尸rac.iVa".Jcac/.Sc/.^X490:2551-255(1993);Jakobovits"a/.，胸,362:255-258(1993)。Mendez等人(NatureGenetics15:146-156(1997))進一步改進了技術，生成了稱為"XenomouseII"(異種移植小鼠)的轉基因小鼠品系，它在受到抗原攻擊時生成高親和力的完全人的抗體。這是如上所述通過將數百萬堿基的人重鏈和輕鏈基因座種系整合到內源JH區段有刪除的小鼠中而實現的。XenomouseII攜帶1,020kb人重鏈基因座，包含大約66種VH基因、完整的Dh和Jh區、及三種不同的恒定區(p、5和x),還攜帶800kb人k基因座，包含32種vk基因、Jk區段和Ck基因。這些小鼠中生成的抗體在所有方面與在人體中看到的極其相似，包括基因重排、裝配和全集(所有成員)。由于內源JH區段的刪除防止了鼠基因座的基因重排，因此人抗體較之內源抗體優先表達。或者，噬菌體展示技術(McCafferty"。/.,淑臟348:552-553(1990))可用于在體外從來自未免疫供體的免疫球蛋白可變區(V)基因全集生成人抗體和抗體片段。依照這種技術，將抗體V結構域基因以符合讀碼框的方式克隆到絲狀噬菌體諸如M13或fd的主要或次要外殼蛋白基因中，并在噬菌體顆粒表面上展示為功能性抗體片段。因為絲狀噬菌體顆粒包含噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，以抗體的功能特性為基礎進行的選擇也導致編碼展示那些特性的抗體的基因的選擇。如此，噬菌體模擬B細胞的一些特性。噬菌體展示可以多種形式進行；有關綜述參見例如Johnson,KevinS.andChiswell,DavidJ.，C^re"/Op/m'ow/"及n^c/wra/B/o/o"3:564-571(1993)。V基因區l爻的數種來源可用于噬菌體展示。Clackson"a/.,Atowre352:624-628(1991)從衍生自經免疫小鼠脾的小型V基因隨機組合文庫中分離得到大量不同的抗口惡口坐酮抗體。可本質上遵循Marksa/.,JMo/.S/o/.222:581-597(1991)或Griffith"a/.,￡MS(9J.12:725-734(1993)所述技術，由未免疫人供體構建V基因全集和分離針對大量不同抗原(包括自身抗原)的抗體。在天然免疫應答中，抗體基因以高比率積累突變(體細胞高變)。導入的有些變化將賦予更高親和力，展示高親和力表面免疫球蛋白的B細胞在隨后的抗原攻擊過程中優先復制和分化。這種天然過程可通過采用稱為"鏈改組"的技術來模擬(Marksetal.,Bio/Technol.10:779-783(1992))。在這種方法中，通過噬菌體展示得到的"初始"人抗體的親和力可通過用從未免疫供體得到的V結構域基因天然存在變體(全集)的全集相繼替換重鏈和輕鏈V區基因而提高。此技術得以生成親和力在nM范圍中的抗體和抗體片段。Waterhouseetal.，Nucl.AcidsRes.21:2265-2266(1993)記載了用于構建非常大的噬菌體全集(也稱為"所有文庫的母庫"(themother-of-alllibraries))的策略。基因改組也可用于從嚙齒類抗體衍生人抗體，其中人抗體具有與起始嚙齒類抗體相似的親和力和特異性。依照此方法，它也稱為"表位印記"(epitopeimprinting),通過噬菌體展示技術得到的嚙齒類抗體的重鏈或輕鏈V結構域基因用人V結構域基因全集替換，產生嚙齒類-人嵌合物。在抗原上進行的選擇導致能夠恢復功能性抗原結合位點的人可變區的分離，即表位決定(印跡(imprints))配偶體的選擇。在重復該過程以替換剩余嚙齒類V結構域時，得到人抗體(參見PCT專利申請WO93/06213,公開于1993年4月1日)。與傳統的通過CDR移植進行的嚙齒類抗體的人源化不同，此技術提供完全人的抗體，它們不含嚙齒類起源的框架或CDR殘基。正如下文所討論的，本發明的抗體可任選包括抗體單體、抗體二聚體、以及抗體的多價形式。本領域技術人員可通過本領域已知技術來構建此類二聚體或多價形式。用于制備單價抗體的方法也是本領域眾所周知的。例如，一種方法涉及免疫球蛋白輕鏈和經修飾重鏈的重組表達。重鏈通常在Fc區中的任意點截短以防止重鏈交聯。或者，相關半胱氨酸殘基用另一種氨基酸殘基替代或刪除以防止交聯。陶雙特異性抗體指對至少兩種不同抗原具有結合特異性的單克隆，優選人或人源化抗體。在本案中，一種結合特異性是針對TWEAK或TWEAK受體。用于生成雙特異性抗體的方法是本領域已知的。傳統上，雙特異性抗體的重組生成基于兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的共表達，其中兩種重鏈具有不同的特異性(MillsteinandCuello，Nature305:537-539(1983))。由于免疫球蛋白重鏈和輕鏈的隨機分配，這些雜交瘤(四源雜交瘤(quadroma))生成十種不同抗體分子的潛在混合物，其中只有一種具有正確的雙特異性結構。通常通過親和層析步驟進行的正確分子的純化相當麻煩且產物產率低。1993年5月13日公開的WO93/08829及Trauneckeretal.,EMBO10:3655-3659(1991)中4皮露了類似的流程。依照一種不同的且更優選的方法，將具有期望結合特異性(抗體-抗原結合位點)的抗體可變區與免疫球蛋白恒定區序列融合。融合優選使用包含至少部分鉸鏈、CH2和CH3區的免疫球蛋白重鏈恒定區。優選在至少一種融合物中存在包含輕鏈結合所必需的位點的第一重鏈恒定區(CH1)。將編碼免疫球蛋白重鏈融合物及，如果需要，免疫球蛋白輕鏈的DNA插入分開的表達載體，并共轉染到合適的宿主生物體中。在用于構建的三種多肽鏈比例不等時提供最佳產量的實施方案中，這為調整三種多肽片段的相互比例提供了極大的靈活性。然而，在至少兩種多肽鏈以相同比率表達導致高產量時或在該比率沒有特別意義時，有可能將兩種或所有三種多肽鏈的編碼序列插入同一個表達載體。在該方法的一個優選實施方案中，雙特異性抗體由一個臂上具有第一結合特異性的雜合免疫球蛋白重鏈，和另一個臂上的雜合免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(提供第二結合特異性)構成。由于免疫球蛋白輕鏈僅在半個雙特異性分子中的存在提供了分離的便利途徑，因此發現這種不對稱結構便于將期望的雙特異性復合物與不想要的免疫球蛋白鏈的組合分開。該方法披露于1994年3月3日公開的PCR申請WO94/04690。關于生成雙特異性抗體的進一步詳情參見例如Suresha/.，Afe/Zzo^z'"fe戸。/，121:210(1986)。;^源/萄聯在#異源偶聯抗體也在本發明的范圍之內。異源偶聯抗體由兩種共價連接的抗體構成。此類抗體建議例如用于將免疫系統細胞靶向不想要的細胞(美國專利4,676,980)及用于治療HIV感染(PCT申請WO91/00360和WO92/200373;EP03089)。異源偶聯抗體可使用任何方便的交聯方法來生成。合適的交聯劑是本領域眾所周知的，連同許多交聯技術一起披露于美國專利4,676,980。fv)絲Z度在某些實施方案中，抗TWEAK或抗TWEAK受體抗體(包括鼠的、人的和人源化的抗體，及抗體變體)是抗體片段。已經開發了用于生成抗體片段的多種技術。傳統上，通過蛋白水解消化完整抗體來衍生這些片段(參見例^口Morimoto"a/.,J！5z'oc/7e肌B/o;/z;^.MeAotfe24:107—117(1992);Brennan"a/.,5Wewce229:81(1985))。然而，現在可直接由重組宿主細胞生成這些片段。例如，可直接從大腸桿菌回收Fab'-SH片段并化學偶聯以形成F(ab')2片段(Carter"a/.，所o/Tec/zw/ogy10:163-167(1992))。在另一個實施方案中，F(ab')2片段是使用亮氨酸拉鏈GCN4形成的，以促進F(ab')2分子的裝配。依照另一種方法，可直接從重組宿主細胞培養物分離Fv、Fab或F(ab')2片段。用于生成抗體片段的多種技術對熟練從業人員將是顯而易見的。例如，可使用木瓜蛋白酶進行消化。木瓜蛋白酶消化的例子記載于94年12月22日公開的WO94/29348和美國專利4,342,566。用木瓜蛋白酶消化抗體產生兩個相同的抗原結合片段，稱作Fab片段，各自具有一個抗原結合位點，及一個殘余Fc片段。胃蛋白酶處理產生一個F(ab'》片段，它具有兩個抗原結合位點且仍能夠交聯抗原。抗體消化中產生的Fab片段還包含輕鏈的恒定區和重鏈的第一恒定區(CHO。Fab'片段與Fab片段的不同之處在于重鏈CHi結構域的羧基末端增加了少數殘基，包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個半胱氨酸。Fab'-SH是本文中對其中恒定區半胱氨酸殘基攜帶游離硫醇基的Fab'的稱謂。F(ab')2抗體片段最初是作為在Fab'片段之間有鉸鏈半胱氨酸的成對Fab'片段生成的。還知道抗體片段的其它化學偶聯。抗體在其恒定區中的保守位置發生糖基化(JefferisandLund,Chem.Immunol.65:111-128(1997);WrightandMorrison,TibTECH15:26-32(1997))。免疫球蛋白的寡糖側鏈影響蛋白質的功能(Boydetal.,Mol.Immunol.32:1311-1318(1996);WittweandHoward,Biochem.29:4175-4180(19卯))，及糖蛋白各部分間的分子內相互作用，它可影響糖蛋白的構象和所呈王見的三維表面(HefferisandLund,supra;WyssandWagner,CurrentOpin.Biotech.7:409-416(1996))。寡4唐還可用來使給定糖蛋白靶向基于特定識別結構的某些分子。例如，已有報道，在半乳糖基化IgG中，寡糖模塊從CH2間空間伸出，末端N-乙酰葡糖胺殘基得以結合甘露糖結合蛋白(Malhotraetal.,NatureMed.1:237-243(1995))。用糖肽酶除去中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中所生成的CAMPATH-1H(—種識別人淋巴細胞CDw52抗原的重組人源化鼠單克隆IgGl抗體)上的寡糖導致補體介導的裂解作用(CMCL)完全降低(Boydetal.,Mol.Immunol.32:1311-1318(1996))，而用神經氨酸酶選擇性消除唾液酸殘基不導致DMCL的喪失。還有報道，抗體的糖基化影響抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)。具體而言，有報道說，其中卩(l，4)-N-乙酰葡糖胺轉移酶III(GnTm)(催化等分GlcNAc形成的糖基轉移酶)的表達受四環素調控的CHO細胞具有改良的ADCC活性(Umanaetal.,MatureBiotech.17:176-180(1999))。抗體的糖基化變體指其中抗體的糖基化樣式發生改變的變體。改變意味著刪除抗體中發現的一個或多個碳水化合物模塊，向抗體中添加一個或多個碳水化合物模塊，改變糖基化(糖基化樣式)的組成、糖基化的程度、等。糖基化變體可以通過例如在編碼抗體的核酸序列中消除、改變和/或添加一個或多個糖基化位點來制備。抗體的糖基化典型的或是N-連接的或是O-連接的。N-連接指碳水化合物模塊附著于天冬酰胺殘基的側鏈。三肽序列天冬酰胺-X-絲氨酸和天冬酰胺-X-蘇氨酸(其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸)是將碳水化合物模塊酶促附著于天冬酰胺側鏈的識別序列。如此，多肽中這兩種三肽序列任一的存在產生了潛在的糖基化位點。O-連接的糖基化指將糖類N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附著于羥基氨基酸，最常見的是絲氨酸或蘇氨酸，但也可使用5-羥脯氨酸或5-羥賴氨酸。向抗體中添加糖基化位點可通過改變氨基酸序列使其包含一個或多個上述三肽序列而便利的完成(用于N-連接的糖基化位點)。所述改變還可通過向初始抗體的序列中添加或替代一個或多個絲氨酸或蘇氨酸殘基來進行(用于O-連接的糖基化位點)。還可以在不改變潛在核苷酸序列的前提下改變抗體的糖基化(包括糖基化樣式)。糖基化很大程度上取決于用于表達抗體的宿主細胞。由于用于表達作為潛在治療劑的重組糖蛋白例如抗體的細胞類型很少是天然細胞，因此可預期抗體的糖基化樣式將有顯著變異(參見例如Hseetal.,J.Biol.Chem.272:9062-9070(1997))。在宿主細胞的選擇之外，在抗體的重組生成過程中影響糖基化的因素包括生長模式、培養基配方、培養密度、氧合作用(oxygenation)、pH、純化方案、諸如此類。已經提出多種方法用于改變在特定宿主生物體中實現的糖基化樣式，包括導入或過表達涉及寡糖生成的某些酶(美國專利5,047,335;5,510,261和5,278，299)。糖基化或某些類型的糖基化可從糖蛋白中酶^1清除，例如使用內切糖苷酶H(EndoH)。另外，可對重組宿主細胞進行遺傳工程改組，例如使其在加工某些類型的多糖方面缺陷。這些和類似的技術是本領域眾所周知的。抗體的糖基化結構可通過碳水化合物分析的常規技術容易的分析，包括凝集素層析、NMR、質i普、HPLC、GPC、單糖成分分析、序貫酶促消化和HPAEC-PAD，它利用高pH陰離子交換層析根據電荷來分離寡糖。為分析目的釋放寡糖的方法也是知道的，包括但不限于酶促處理(常常使用肽-N-糖苦酶F/內切-f3-半乳糖芬酶進行)、使用強堿環境的消除以釋放主要是0-連接結構、及使用無水肼的化學方法以釋放N-和O-連接寡糖二者。三鏈抗體(triabody)也在本發明的范圍內。此類抗體記載于例如Iliadesetal.，supra和Korttetal.,supra。可以通過將抗體與細胞毒劑(像毒素分子)或前體藥物活化酶偶聯來修飾本發明的抗體，所述前體藥物活化酶將前體藥物(例如肽基化療劑，參見WO81/01145)轉變為活性抗癌藥。參見例如WO88/07378和美國專利第4,975,278號。這種技術也稱為"抗體依賴性酶介導的前體藥物療法"(AntibodyDependentEnzymeMediatedProdrugTherapy,ADEPT)。可用于ADEPT的免疫偶聯物的酶組分包括能夠以這樣一種方式作用于前體藥物從而將其轉變為更有活性的細胞毒性形式的任何酶。可用于本發明方法的酶包括但不限于可將含磷酸鹽/酯的前體藥物轉變為游離藥物的堿性磷酸酶；可將含硫酸鹽/酯的前體藥物轉變為游離藥物的芳基硫酸酯酶；可將無毒5-氟胞嘧啶轉變為抗癌藥5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脫氨酶；可將含肽的前體藥物轉變為游離藥物的蛋白酶，諸如沙雷氏菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、羧肽酶和組織蛋白酶(諸如組織蛋白酶B和L);胱天蛋白酶，諸如胱天蛋白酶3;可轉化含D-氨基酸替代的前體藥物的D-丙氨酰羧肽酶；可將糖基化前體藥物轉變為游離藥物的碳水化合物切割酶，諸如(3-半乳糖苷酶和神經氨酸酶；可將用P-內酰胺衍生的藥物轉變為游離藥物的p-內酰胺酶；及可將在其氨基氮處分別用苯氧乙酰基或苯乙酰基衍生的藥物轉變成游離藥物的青霉素酰胺酶，諸如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶。或者，可使用具有酶活性的抗體，本領域也稱作"抗體酶"，將本發明的前體藥物轉變為游離活性藥物(參見例如Massey,Nature328:457-458(1987))。可如本文所述制備抗體-抗體酶偶聯物，用于將抗體酶投遞至腫瘤細胞群。可通過本領域眾所周知的技術將酶與抗體共價結合，諸如使用異雙功能交聯劑。或者，可使用本領域眾所周知的重組DNA技術構建包含與本發明酶的至少功能活性部分連接的本發明抗體的至少抗原結合區的融合蛋白(參見例如Neubergeretal"Nature312:604-608(1984))。還設想了其它抗體修飾。例如，可將抗體與多種非蛋白質性質聚合物中的一種連4妄，例如聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧化烯、或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物、或其它分子諸如聚谷氨酸酯/鹽。還可將抗體包載于例如通過凝聚技術或通過界面聚合制備的微膠嚢中(例如分別是羥曱基纖維素或明膠微膠嚢和聚(曱基丙烯酸甲酯)微膠囊)、在膠狀藥物傳遞系統中(例如脂質體、清蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米膠嚢)、或在粗滴乳狀液中。此類技術公開于《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol,A.編，1980。為了延長抗體的血清半衰期，可如例如美國專利第5，739,277號中所述將補救受體結合表位摻入抗體(尤其是抗體片段)。在用于本文時，術語"補救受體結合表位"指IgG分子(例如IgG,、IgG2、IgG3或IgG4)的Fc區中負責延長IgG分子體內血清半衰期的表位。或者/另外，可以通過改變抗體Fc區的氨基酸序列以生成具有改變的FcRn結合的變體，從而延長或縮短血清半衰期。具有改變的FcRn結合和/或血清半衰期的抗體記載于WO00/42072(Presta,L.)。本發明的抗體可以通過聚合來穩定。這可以通過用多功能交聯劑使單體鏈交聯來實現，或是直接的或是間接的，通過多功能聚合物。通常，兩個基本上相同的多肽使用雙功能交聯劑在其C-或N-末端交聯。使用試劑來交聯末端氨基和/或羧基。通常，將兩個末端羧基或兩個末端氨基彼此交聯，盡管通過選擇適宜的交聯劑，將一個多肽的a氨基與另一多肽的末端羧基交聯。優選的是，用半胱氨酸替代多肽的c-末端。在本領域眾所周知的條件下，可以在末端半胱氨酸之間形成二硫鍵，由此將多肽鏈交聯。例如，通過金屬催化的游離半胱氨酸的氧化或通過適當修飾的半胱氨酸殘基的親核替代可方便的形成二硫橋。交聯劑的選擇將取決于多肽中存在的氨基酸反應性側鏈的身份。例如，如果半胱氨酸存在于多肽中C-末端以外的其它位置，那么二硫鍵交聯將不是優選的。用亞曱基橋交聯的肽也在本發明的范圍內。抗體上N-末端氨基和C-末端羧基以外的合適交聯位點包括賴氨酸殘基上的s氨基，以及位于肽的內部殘基或引入側翼序列的殘基的側鏈上的氨基、亞氨基、羧基、巰基和羥基。經由外部添加交聯劑的交聯可例如適當使用本領域技術人員熟悉的多種試劑來實現，例如經由多肽的碳二亞胺處理。合適的多功能(通常是雙功能)交聯劑的其它例子可以在文獻中找到。在制備本文中的典型配制劑時，注意到所采用成分的推薦品質或"等級"將取決于配制劑的最終用途。對于治療用途，各種成分優選是容許作為藥用產品添加劑的等級的(諸如"GRAS'，)。在某些實施方案中，提供了包含拮抗劑或激動劑及一種或多種賦形劑的組合物，所述賦形劑提供足夠離子強度以提高溶解性和/或穩定性，其中該組合物的pH為6(或大約6)至9(或大約9)。拮抗劑或激動劑可以通過任何合適方法來制備以實現期望的純度，例如依照上文方法。在某些實施方案中，拮抗劑或激動劑在宿主細胞中重組表達或通過化學合成來制備。拮抗劑或激動劑在配制劑中的濃度可以根據例如配制劑的計劃用途而變化。本領域技術人員無需過多實驗就可以決定拮抗劑或激動劑的期望濃度。配制劑中提供足夠離子強度以提高拮抗劑或激動劑的溶解性和/或穩定性的一種或多種賦形劑任選是聚離子(polyionic)有機或無機酸、天冬氨酸(鹽)/(酯)、硫酸鈉、琥珀酸鈉、醋酸鈉、氯化鈉、CaptisolTM、Tris、精氨酸鹽或其它氨基酸、糖和多元醇諸如海藻糖和蔗糖。優選的是，配制劑中提供足夠離子強度的一種或多種賦形劑是鹽。可采用的鹽包括但不限于鈉鹽和精氨酸鹽。所采用鹽的類型和鹽的濃度優選使得配制劑具有相對較高的離子強度，使得配制劑中的拮抗劑或激動劑是穩定的。任選的是，鹽在配制劑中存在的濃度為約20mM至約0.5M。組合物的pH優選為6(或大約6)至9(或大約9)，更優選大約6.5至大約8.5,甚至更優選大約7至大約7.5。在此實施方案的一個優選方面，組合物還將包含緩沖劑以至少維持組合物的pH為大約6至大約8。可采用的緩沖劑的例子包括但不限于Tris、HEPES和組氨酸。在采用Tris時，任選將pH調至大約7至8.5。在采用Hepes或組氨酸時，任選將pH調至大約6.5至7。任選的是，緩沖劑在配制劑中的使用濃度為大約5mM至大約50mM。特別是對于液體配制劑(或重建的凍干配制劑)，可能希望在組合物中包含一種或多種表面活性劑。此類表面活性劑可以包括例如非離子表面活性劑，像TWEENtm或PLURONICS(例如聚山梨醇酯或poloxamer)。優選的是，表面活性劑包括聚山梨醇酯20("TWEEN20，')。表面活性劑的使用濃度任選為大約0.005%至大約0.2%。本發明的配制劑可以在拮抗劑或激動劑及上文所述那些成分之外進一步包含各種其它賦形劑或成分。任選的是，供腸胃外施用的配制劑可以包含藥劑學或腸胃外可接受的載體，即在所采用的劑量和濃度對接受者無毒且與配制劑的其它組分相容的載體。任選的是，載體是腸胃外載體，諸如與接受者的血液等滲的溶液。此類載體媒介的例子包括水、鹽水或緩沖液，諸如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、林格氏(Ringer)溶液和右旋糖溶液。各種任選的藥劑學可接受的載體、賦形劑或穩定劑進一步記載于7em/"gto"'s戶/wrmacew"ca/5Wewces，16thedition,Osol,A.ed.1980。本文中的配制劑還可含有一種或多種防腐劑。例子包括氯化十八烷基二曱基千基銨、氯化己烷雙胺、苯扎氯銨(氯化烷千基二甲基銨的混合物，其中烷基為長鏈化合物)和笨索氯銨。其它類型的防腐劑包括芳香醇、對羥基苯曱酸烷基酯諸如對羥基笨曱酸甲酯或丙酯、和間曱酚。抗氧化劑包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二曱基,基銨；氯化己烷雙胺；苯扎氯銨、苯索氯銨；丁醇；對羥基苯曱酸烷基酯，諸如對羥基苯曱酸曱酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和間甲酚)；低分子量(少于約IO個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；糖類，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；或聚乙二醇(PEG)。此類載體的其它例子包括卵磷脂、血清蛋白質諸如人血清清蛋白、緩沖物質諸如甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質諸如硫酸魚精蛋白、氯化鈉、聚乙烯吡咯烷酮和基于纖維素的物質。基于凝膠形式的載體包括多糖，諸如羧曱基纖維素或曱基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和木蠟醇(woodwaxalcohol)。常規的存儲(depot)形式包括例如微膠嚢、納米膠嚢、脂質體、硬膏劑、吸入形式、鼻噴霧和持續釋放制劑。本發明的組合物可包4舌液體配制劑(液體;容液或液體懸浮液)和凍干配制劑，以及其中TWEAK拮抗劑或TWEAK激動劑為晶體或無定形沉淀物形式的懸浮液配制劑。如果是液體，最終配制劑優選冷凍貯存于520。C。或者，可凍干該配制劑并作為與注射用水重建的粉劑提供，該粉劑任選可貯存于2-30。C。用于治療性施用的配制劑必須是無菌的。通過無菌濾膜(例如0.2微米濾膜)過濾可輕易實現滅菌。通常將治療用組合物置于具有滅菌存取口的容器中，例如具有可用皮下注射針頭刺穿的塞子的靜脈內溶液袋或藥瓶。作為水溶液或用于重建的凍干配制劑，通常將組合物存儲在單個單位或多劑量容器中，例如密封的安瓿或藥瓶。該容器可以是本領域可獲得的任何容器，并用常規方法填充。任選的是，該配制劑可裝入注射筆裝置(或裝入筆裝置的藥筒)，諸如那些本領域可獲得的裝置(參見例如美國專利5,370,629),它們適合配制劑的治療性投遞。例如，可使用注射用水重建凍干的拮抗劑或激動劑配制劑來制備注射液。本文中所描述調控TWEAK或TWEAK受體活性的組合物可用于多種治療應用。TWEAK拮抗劑可用于例如治療癌癥的方法，而TWEAK激動劑可用于治療多種免疫相關疾患的方法。在用于治療此類病癥的本發明方法中，可通過任何合適技術，包括輸注或注射，將拮抗劑或激動劑配制劑直接施用于哺乳動物。具體的施用路徑將取決于例如患者的病史，包括任何使用拮抗劑或激動劑察覺的或預料的副作用以及待矯正的具體病癥。腸胃外施用的例子包括皮下、肌肉內、靜脈內、動脈內和腹膜內施用組合物。配制劑優選作為重復的靜脈內(i.v.)、皮下(s.c.)、肌肉內(i.m.)注射或輸注、顱內輸注，或者作為適于鼻內或肺內投遞的氣霧劑配制劑施用(關于肺內投遞參見例如EP257,956)。應當注意，在皮下和肌肉內注射中，注射劑的滲透壓可能是重要的。當注射溶液為^[氐滲或高滲時，在灌注時會使患者感覺到疼痛。通常，對于本文的治療用可注射配制劑而言，優選注射液的相對滲透壓為約300mosm到約600mosm。還可以口服或持續釋放制劑的形式來施用配制劑。持續釋放制劑的合適例子包括含有蛋白質的固體疏水性聚合物半透性基質，該基質以定型產品的形式存在，例如薄膜或微膠嚢。持續釋放基質的例子包括纖維素衍生物(例如羧甲基纖維素)、溶于非水性介質中的蔗糖-醋酸異丁酸酯(SABERTM)、聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-曱基丙烯酸酯)(Langeretal.,J.Biomed.Mater.Res.1981，15:167-277;Langer,Chem.Tech.1982,12:98-105)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利3,773,919、EP58,481)、L-谷氨酸和L-谷氨酸？乙酯的共聚物(Sidmanetal.,Biopolymers1983,22:547-556)、不可降解的乙烯-乙酸乙烯(Langeretal.，supra)、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物諸如LupronDepot(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球體)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸(EP133,988)。用于投遞全身起作用的藥物的一種可選方法包括通過連續灌注(采用例如緩慢釋放裝置或微型泵諸如滲透泵或皮膚貼片)或者通過注射(采用例如靜脈內或皮下方式，包括單次推注(single-bolus)施用)進行施用。將以與良好醫療實踐一致的方式，考慮個體患者的臨床狀況、投遞組合物的部位、施用的方法、施藥的時程表和醫務人員所知道的其它因素，配制和施用將用于治療中的組合物。設想了在該方法中還可以采用其它別的療法。一種或多種其它療法可包括但不限于施用放療、細胞因子、生長抑制劑、化療劑、細胞毒劑、酪氨酸激酶抑制劑、ras法尼基轉移酶抑制劑、血管發生抑制劑、細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑、和染色質重建劑諸如組蛋白乙酰基轉移酶抑制劑和/或曱基化抑制劑，這些都是本領域已知的且進一步定義的特性如上，它們可以與TWEAK拮抗劑或TWEAK激動劑耳關合施用(例如同時的或序貫地施用)。另外，療法基于靶向腫瘤或其它細胞抗原的治療用抗體諸如CD20抗體(包括Rituxan)或Her受體抗體(包括Herceptin)以及抗血管發生抗體諸如抗VEGF或靶向其它受體諸如EGFR的抗體(諸如Tarceva),或者與腫瘤疫苗聯合使用。在治療諸如癌癥等疾患的方法中，可按照制造商的說明書或由熟練技術人員憑經驗確定化療劑的制劑和服藥時程安排。此類化療的制劑和服藥時程安才非還i己載于C72emoAera/_ySerWce,Ed.，M.C.Perry，Williams&Wilkins，Baltimore,MD，1992。在有些情形中，在施用例如TWEAK拮抗劑之前，使細胞暴露于一種或多種化療劑可能是有益的。可能期望還施用針對其它抗原的抗體，諸如結合CD20、CDlla、CD18、CD40、ErbB2、EGFR、ErbB3、ErbB4、血管內皮因子(VEGF)或其它TNFR家族成員(諸如OPG、DR4、TNFR1、TNFR2)的抗體。或者/另外，可將者。有時，還對患者施用一種或多種細胞因子可能是有益的。在本申請描述的任何治療方法中，拮抗劑或激動劑配制劑可例如同時或序貫與例如本申請上文定義部分明確提供的其它藥劑、細胞因子、化療劑、抗體等3f關合施用。例如，TWEAK拮抗劑配制劑可作為預處理施用(在施用任何這類其它藥劑之前)，諸如預處理在其它情況下對其它化療劑的凋亡作用可能有抗性的細胞。如上指出，本發明的拮抗劑和激動劑具有多種用途。例如，TWEAK拮抗劑可用于治療哺乳動物中諸如腫瘤等病理疾患的方法。TWEAK激動劑可用于治療哺乳動物中免疫相關疾病的方法。熟練技術人員可以在哺乳動物中診斷在此描述的各種病理疾患。診斷技術在本領域是可獲得的，這使得可以例如在哺乳動物中診斷或檢測癌癥或免疫相關疾病。例如，可通過多種4支術鑒定癌癥，包括但不限于觸診、血液分析、x-射線、NMR等等。免疫相關疾病也能容易的鑒定。在系統性紅斑狼瘡中，疾病的主要介質是生成對自身蛋白質/組織的自身反應性抗體及隨后生成免疫介導的炎癥。多個器官和系統在臨床上受到影響，包括腎、肺、肌肉骨骼系統、粘膜皮膚、目艮、中樞神經系統、心血管系統、胃腸道、骨髓和血液。醫學從業人員熟悉其中干預免疫和/或炎性應答有好處的許多疾病。例如，類風濕性關節炎(RA)是一種慢性系統性自身免疫性炎性疾病，主要涉及多個關節的滑膜，由此導致對關節軟骨的損傷。發病機制依賴T淋巴細胞，而且與類風濕因子，針對自身IgG的自身抗體的生成有關，由此導致免疫復合物的形成，它在關節液和血液中達到高水平。關節中的這些復合物可誘發顯著的淋巴細胞和單核細胞浸潤到滑膜中及隨后顯著的滑膜變化；關節腔/液受到類似細胞的浸潤及許多嗜中性粒細胞的加入。受影響的組織主要是關節，常常是對稱形式。然而，關節外疾病也存在兩種主要形式。一種形式是形成關節外損傷，伴有正在進行的漸進性關節病和肺纖維化、血管炎和皮膚潰瘍的典型損傷。關節外疾病的第二種形式是所謂的費爾提氏(Fdty)綜合征，它發生在RA病程晚期，有時在關節病已經沉寂后，且涉及出現嗜中性粒細胞減少癥、血小板減少癥和脾腫大。這可伴隨著多個器官中的血管炎及梗塞、皮膚潰瘍和壞疽的形成。患者還常常在受影響關節上面的皮下組織中形成類風濕性結節；晚期的結節具有由混合的炎性細胞浸潤物包圍的壞死中心。可在RA中出現的其它表現包括心包炎、胸膜炎、冠狀動脈炎、伴有肺纖維化的間質性肺炎、干燥性角膜結膜炎和類風濕性結節。幼發型慢性關節炎是一種慢性特發性炎性疾病，常常開始于16歲之前。其表型與RA有些相似；類風濕因子陽性的一些患者歸入幼發型類風濕性關節炎。疾病細分為三種主要類別少數關節的、多關節的和系統性的。關節炎可以是嚴重的，通常是破壞性的，并導致關節僵硬和生長遲緩。其它表現可包括慢性前葡萄膜炎和系統性淀粉樣變。脊推關節病是具有一些普遍臨床特征且普遍與HLA-B27基因產物表達有關的一組紊亂。這些紊亂包括強直性脊柱炎、萊特爾氏(Reiter)綜合征(反應性關節炎)、與炎性腸病有關的關節炎、與銀屑病相關的脊椎炎、幼發型脊推關節病及無差別(undifferentiated)脊推關節病。區別性特征包括具有或沒有脊推炎的骶髂關節炎；炎性不對稱關節炎；與HLA-B27有關(血清學上定義的MHCI型HLA-B基因座的等位基因)；眼炎癥；及與其它類風濕性疾病有關的自身抗體的缺乏。對于誘發疾病來說關鍵的最相關細胞是CD8+T淋巴細胞，靶向由MHCI型分子呈遞的所在抗原的細胞。CD8+T纟田月包可與MHCI型等位基因HLA-B27反應，就像它是由MHCI型分子表達的外源肽。已有假設，HLA-B27的表位可能模擬細菌或其它微生物的抗原性表位，因此誘導CD8+T細胞應答。系統性硬化(硬皮病)的病因學未知。疾病的特點是皮膚硬化；這可能是由活動性炎性過程誘導的。硬皮病可以是局部的或系統性的；血管損傷是普遍的，而且微血管系統中的內皮細胞損傷是系統性硬化發展中的早期且重要的事件；血管損傷可能由免疫介導。皮膚損傷中存在單核細胞浸潤物及在許多患者中存在抗核抗體暗示免疫學基礎。ICAM-1常常在皮膚損傷中成纖維細胞的細胞表面上調，說明T細胞與這些細胞相互作用可能在疾病的發病機理中起作用。涉及的其它器官包括胃腸道平滑肌萎縮和纖維化，導致異常蠕動/運動；腎同中心內皮下內膜增生，影響小弓形和葉間動脈，從而降低腎皮質血流，導致蛋白尿、氮血癥和高血壓；骨骼肌萎縮、間質性纖維化、炎癥；肺間質性肺炎和間質性纖維化；及心收縮帶壞死、疤痕化/纖維化。特發性炎性肌病，包括皮肌炎、多肌炎和其它，是導致肌肉軟弱的未知病因的慢性肌肉炎性紊亂。肌肉損傷/發炎常常是對稱的和漸進的。自身抗體與大多數形式有關。這些肌炎特異性自身抗體針對并抑制涉及蛋白質合成的成分、蛋白質和RNA的功能。斯耶格倫氏(Sj6gren)綜合征是由免疫介導的炎癥及隨后淚腺和唾液腺功能破壞引起的。該病可能與炎性結締組織疾病有關或伴隨著炎性結締組織疾病。該病與針對Ro和La抗原的自身抗體生成有關，這兩種抗原都是小RNA-蛋白質復合物。損害導致干燥性角膜結膜炎、口干燥(xerostomia)、及其它表現或關聯，包括膽汁性肝硬化、外周或感覺神經病、和可觸知的紫癜。系統性血管炎是這樣的疾病，其中原發性損傷是炎癥，后續對血管的損傷導致由受影響血管供應的組織缺血/壞死/變性，且在有些情況中最終導致終端器官功能障礙。血管炎病還可作為其它免疫-炎癥介導疾病諸如類風濕性關節炎、系統性硬化等的繼發損傷或后遺癥發生，特別是在還與免疫復合物形成有關的疾病中。原發性系統性血管炎組中的疾病包括系統性壞死性血管炎結節性多動脈炎、過^:性血管炎和肉芽腫病、多脈管炎；韋才各納氏(Wegener)肉芽腫病；淋巴瘤樣肉芽胂病；和巨細胞性動脈炎。各種各樣的血管炎病包括粘膜與皮膚淋巴結綜合征(MLNS或川畸氏(Kawasaki)病)、分離的CNS血管炎、貝切特氏(Behet)病、血栓閉塞性血管炎(伯格氏(Buerger)病)和皮膚壞死性小靜脈炎。所列大多數類型的血管炎的發病機理認為主要是由于免疫球蛋白復合物在血管壁中沉積及隨后經ADCC、補體活化或者兩者誘導的炎性應答。結節病是病因學未知，特征在于幾乎機體任何組織中都存在上皮樣肉芽月中的狀況；最常見的是累及肺。發病機理涉及患病部位持續存在活化的巨噬細胞和淋巴樣細胞及隨后由這些細胞類型釋放局部和系統性活性產物而導致的慢性后遺癥。自身免疫性溶血性貧血，包括自身免疫性溶血性貧血、免疫性全血細胞減少癥和陣發性夜間血紅蛋白尿，是由于生成與紅細胞(和在有些情況中以及其它血細胞，包括血小板)表面表達的抗原反應的抗體的結果，是經補體介導的溶解和/或ADCC/Fc受體介導的機制去除那些抗體包被細胞的反映。在自身免疫性血小板減少癥，包括血小板減少性紫癜，和其它臨床背景中免疫介導的血小板減少癥中，由于抗體或補體附著于血小板及隨后經補體溶解、ADCC或Fc受體介導的機制去除而發生血小板破壞/去除。曱狀腺炎，包括格雷夫斯氏(Graves)病、橋本氏(Hashimoto)曱狀腺炎、幼發型淋巴細胞性曱狀腺炎和萎縮性甲狀腺炎，是由于針對曱狀腺抗原的自抗體。現有的實驗模型包括自發性模型大鼠(BUTF和BB大鼠)和雞(肥胖雞品系)；可誘導模型用曱狀腺球蛋白、曱狀腺微粒體抗原(曱狀腺過氧化物酶)免疫動物。I型糖尿病或胰島素依賴性糖尿病是胰島p細胞的自身免疫性破壞；該破壞由自身抗體和自身反應性T細胞介導。胰島素或胰島素受體的抗體也可產生胰島素不響應的表型。免疫介導的腎病，包括腎小球腎炎和腎小管間質性腎炎，是由于抗體或T淋巴細胞介導的對腎組織的損傷，或是直接由于生成針對腎抗原的自身反應性抗體或T細胞，或是間接由于針對其它非腎抗原有反應性的抗體和/或免疫復合物在腎中沉積。因此，導致免疫復合物形成的其它免疫介導的疾病也可作為間接后遺癥誘導免疫介導的腎病。直接和間接的免疫機制都導致炎性應答，它在腎組織中產生/誘導損傷形成，導致器官功能受損，在有些情況中發展成腎衰竭。體液和細胞兩種免疫機制都可涉及損傷的發病機理。中樞和周圍神經系統的脫髓鞘病，包括多發性硬化；特發性脫髓鞘多神經病或格-巴二氏(Guillain-Barr6)綜合征；和慢性炎性脫髓鞘多神經病，認為具有自身免疫基礎，而且由于對少突膠質細胞或對髓鱗脂直接造成損害而導致神經脫髓鞘。在MS中，有證據表明該病的誘導和發展依賴T淋巴細胞。多發性硬化是依賴T淋巴細胞的脫髓鞘病，而且具有復發-緩和過程或漫長的漸進過程。病因未知；然而，病毒感染、遺傳惡病質、環境和自身免疫性都會起作用。損傷含有主要由T淋巴細胞介導的浸潤物、小膠質細胞和浸潤的巨噬細胞；CD4+T淋巴細胞是損傷處的主要細胞類型。少突膠質細胞死亡和隨后脫髓鞘的機理未知，但是可能是由T淋巴細胞驅動的。炎性和纖維化肺病，包括嗜曙紅細胞性肺炎；特發性肺纖維化和超敏性肺炎，可能涉及不受調控的免疫-炎癥應答。抑制該應答將具有治療益處。自身免疫或免疫介導的皮膚病，包括大皰性皮膚病、多形性紅斑和接觸性皮炎，由自身抗體介導，其發生依賴T淋巴細胞。銀屑病是T淋巴細胞介導的炎性疾病。損傷含有T淋巴細胞、巨噬細胞和抗原加工細胞，及一些嗜中性粒細胞的浸潤物。變應性疾病，包括哞喘；變應性鼻炎；特應性皮炎；食物過敏；和蕁麻滲，它們是T淋巴細胞依賴的。這些疾病主要由T淋巴細胞誘導的炎癥、IgE介導的炎癥或二者組合介導。移植相關疾病，包括移植排斥和移植物抗宿主病(GVHD),依賴T淋巴細月包；抑制T淋巴細胞功能具有改善作用。其中干預免疫和/或炎性應答有益的其它疾病有感染性疾病，包括但不限于病毒感染(包括但不限于AIDS、曱型、乙型、丙型、丁型、戊型肝炎)、細菌感染、真菌感染、及原蟲和寄生蟲感染(刺激MLR的分子(或衍生物/激動劑)可在治療上用于增強對感染因子的免疫應答)；免疫缺陷病(刺激MLR的分子沐于生物/激動劑可在治療上用于增強對遺傳性、獲得性、感染誘發的(如在HIV感染中)或醫源性(即如源自化療)免疫缺陷的狀況的免疫應答)；和瘤形成。本發明還提供了包含本文所述拮抗劑或激動劑的試劑盒。典型的試劑盒將包括用于盛放如上所述一種或多種賦形劑中的拮抗劑或激動劑的容器，優選小管，及指導用戶如何使用所述拮抗劑或激動劑配制劑的說明書，諸如產品插頁或標簽。這將優選提供藥學配制劑。優選的是，所述藥學配制劑用于治療癌癥或免疫相關疾患。合適的容器包括例如瓶子、小管、注射器和試管。容器可以由多種材料制成，諸如玻璃或塑料。容器中裝有有效診斷或治療病癥的拮抗劑或激動劑配制劑，而且可具有無菌存取口(例如容器可以是具有皮下注射針頭可刺穿的塞子的靜脈內溶液袋或小管)。容器上或與容器相連的標簽指明該配制劑用于診斷或治療所選4奪的病癥。該制品還可包括第二容器，其中裝有注射用水、藥學可接受的溶液、鹽水、林格氏(Ringer)溶液、或右旋糖溶液。該制品還可包括商業和使用者立場上所需的其它物質，包括其它緩沖劑、稀釋劑、濾器、針頭、注射器、和附有使用說明書的包裝插頁。將本申請中所引用的所有專利、專利申請、出版物、產品描述、和方案的公開內容完整收入本文作為參考。本文所用各章節標題僅用于組織目的，不應解釋為限制所描述的主題。實施例通過下面的實施例來進一步描述和闡述本發明的各個方面，它們并非意圖限制本發明的范圍。除非另有說明，實施例中提及的商品化試劑依照制造商的說明書使用。下文實施例和整篇說明書中以ATCC編號所鑒別的那些細胞的來源是美國典型培養物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,VA)。除非另有說明，本發明使用重組DNA技術的標準流程，諸如上文及以下教科書中所"i己載的那些Sambrooka/.,Afo/ecw/arC7oz>2gvJ丄a6orato^y7Wa"wa/,ColdSpringHarborPress,N.Y.,1989;Ausubela/.,Cre/W/Votoco/sMo/ecw/ari/o/o肌GreenPublishingAssociatesandWileyInterscience,N.Y"1989;Iimisa/.，戶C7/Vofoco/s.'^Gw/<ieMef/zoc&on<ij/p//caZ7.o^y,AcademicPress,Inc.,N.Y"1990;HarlowWa/.，」油'Z70血s..」/^oratoryMiOTi/o/,ColdSpringHarborPress,ColdSpringHarbor,1988;Gait,M丄,Wgcwwc/eWiieSv"Ae^,IRLPress,Oxford,1984;Freshney,R.I,,爿m'麵/Ce〃Cw〃Mre，1987;Coligane"/.,Cm't^w/1/Votoco/j/m7麗w0/0gy,1991。材料和技術TWEAK和Fnl4在人PBMC中的表達分析。用淋巴細胞分離介質(ICN)依照制造商的說明書自50ml人供體外周血分離人外周血單個核細胞(PBMC)。將細胞在含布雷菲德菌素(Brefeldin)A(5嗎/mL)的完全Iscoves氏培養基中重懸浮24小時，其中存在和不存在炎癥刺激物。刺激后，用2pg/mLFc封閉劑(MiltenyiBiotec,Auburn,CA)將Fc受體于室溫封閉20分鐘。然后將細胞用偶聯有萸光的針對CD3、CD4、CD8、CDllb、CDllc、CD14、CD20、CD45、CD56、HLA-DR、LinlFITC(BDBiosciences,SanJose，CA)和FN14(e-Biosciences)的單克隆抗體于室溫表面染色30分鐘，再然后用BDFACS溶胞液依照制造商的說明書進行處理，并于-70。C保存過夜。將細胞透化(permeabilized)，然后對TWEAK(e-Biosciences)于室溫染色30分鐘。清洗后，在FACSCalibur(BDBiosciences)上分析細胞。TWEAK缺陷小鼠的生成。在載體(Gerberetal.,Development,126:1149-1159(1999》的基礎上構建TWEAK尋耙載體，即用PGK-neo盒替換2.5kbTWEAK基因，包括第一個和所有五個下游外顯子。該構建物包含兩段衍生自小鼠基因組的DNA:位于戶GA:-恥o盒5'端的3.1kb片段包含TWEAK的第6個和第7個外顯子及TWEAK外顯子1的一部分，而位于戶(7A:-"eo盒3，端的4.1kb片段包含SMT3/尸/的第1個和第2個外顯子。通過電穿孔用線性化載體轉染Rl胚胎干細胞(Nagyetal.,GeneTargeting:APracticalApproach,A丄.Joyner，ed.,OxfordUniversityPress,Oxford,England,pp.147-179(1993))，并通過Southern印跡分析用5'和3'特異性DNA探針(如圖8所示)對G418抗性克隆篩選預期重組事件的存在。將兩個獨立的r^S4A:-A細胞系顯微注射入C57BL/6胚細胞(blastocyte)。通過皮毛顏色檢測到將嵌合雄鼠與C57BL/6雌鼠雜交而生成的小鼠中的種系傳遞(germlinetransmission),并通過兩步基因組PCR(圖8)使用以下外部(E)和內部(I)引物組得到i正實E正向，TGCCCTAAGCCAGTCTACACCCAGTATTCCTTC(SEQIDNO:3);E反向，TGGCCTGAAAGAAATGCTCACACTATCACCAAC(SEQIDNO:4);I正向，CTTAGAACCAGCCGTAGGAAGGATT(SEQIDNO:5);I反向，GTGCCAGGGCGTCCAGTACATACAA(SEQIDNO:6)。將7TF五^^敲除動物最少6次回交到C57BL/6背景上。APRIL、TWEAK和SMT3IP1mRNA表達的檢驗。通過定量RT-PCR對若干組織的分析i正明『,^4《-/-小鼠不表達TWEAK轉錄物，而敲除動物中兩種鄰近基因，APRIL和SMT31P1的mRNA表達沒有改變(Varfolomeevetal.，Mol.Cell.Biol"24:997-1006(2004》;圖9。流式細胞術分析。通過用金屬篩網和注射器的橡膠塞解離分離的組織，自8周齡小鼠得到造血器官的單細胞懸浮液。將單細胞懸浮液與Fc阻斷性抗體(2嗎/mL,BDBiosciences)—起溫育，隨后用譜系特異的針對B220、CD3、CD4、CD8、CDllb、CDllc、CD19、CD45、DX5、LinlFITC(BDBiosciences,SanJose,CA)、CD161和F4/80(e-Biosciences)的偶聯的單克隆抗體于室溫染色30分鐘。表面染色后，將RBC用ACK溶胞緩沖液(BiosourceInternational)依照制造商的說明書溶胞，并將剩余細胞固定。將TRUCount珠(BDBiosciences)加到管中以用于定量。用FACSCaliburi殳備及相關CellQuest軟件(BDBiosciences)分析細胞結合熒光。NK細胞AICD測定法。自lOOmL人供體全血分離人PBMC，并用TNF-a(500ng/mL)、LPS(5嗎/L)或IFN-y(500ng/mL)刺激24小時，不存在或存在抗TWEAKmAb(CARL-1,e-Biosciences)或FN14-Fc(包含圖12氨基酸1-129的融合蛋白)(Genentech)。刺激后，用MiltenyiCDS6+珠分離NK細胞，并對sub-GlDNA內含物染色，如Maecker等人所述(Maeckeretal.，CancerCell,2:139-148(2002))。LPS實驗。纟^#組10只71^￡^/-和7^￡^4尺+/+小鼠腹膜內(*.)注射LPS(大腸桿菌055:B5;Sigma)。將劑量范圍lOOmg/kg至lOmg/kg的LPS溶于無菌鹽水。在5天期間每個小時監測小鼠的存活力。通過給每組IO只小鼠腹膜內注射30mg/kgLPS并在24小時后分離血液和脾臟，進行鼠細胞因子分析。將單細胞懸浮液在存在布雷菲德菌素A(5昭/mL)的條件下溫育6小時。在此溫育的最后20分鐘對細胞進行Fc封閉(2fig/mL,BDBiosciences),隨后用語系特異的針對DX5(用于鑒定NK細胞)、CDllb和F4/80(用于鑒定巨噬細胞)、及CD45(共同的白細胞抗原)的偶聯單克隆抗體于室溫染色30分鐘。表面染色后，將RBC如上所述溶胞。將細胞透化，然后用針對IFN-y、IL-12或IL-10的抗體染色，并在FACSCalibur(BDBiosciences)上進行分析。通過自4名人供體分離PBMC，進行人細胞因子分析。將供體的PBMC在存在/不存在l嗎/mLLPS的情況下體外溫育16小時。在刺激的最后6小時，向細胞中加入布雷菲德菌素A至終濃度5昭/mL。將人PBMC于室溫Fc封閉(Miltneyi)20分鐘，然后于室溫表面染色(CD3、CD56、CD14、CD45;BDBiosciences)30分鐘。表面染色后，將RBC依照制造商的說明書溶胞供胞內染色。將細胞固定和透化，用IFN-y或IL-12抗體染色，并在FACSCalibur上進4亍分才斤。STAT-1活性測定法。分別使用MiltenyiCD56+和CDllb+珠，自人供體的脾臟分離NK細胞和巨噬細胞。將1.0xl()6個NK細胞/0.5mL與1.0xl(^個巨噬細胞/0.5mL巨噬細胞-SFM培養基(Invitrogen)共溫育。讓細胞在無血清培養基中靜息(rest)12小時，然后用l嗎/mLLPS進行刺激。12小時后，將細胞對CD56和CD1lb進行表面染色，隨后針對磷酸化STAT-1進行胞內染色，如Perez和Nolan所述(Krutziketal.,Clin.Immunol"110:206-221(2004);Perezetal"Meth.Mol.Biol"263:67-94(2004);PerezandNolan,Nat.Biotechnol"20:155-162(2002》。NF-kB分析。分別使用MiltenyiCD56+和CDllb+5朱，自人供體的脾臟分離NK細胞和巨噬細胞。在每個時間點將5.0xl()S個NK細胞與5.0xl(^個巨噬細胞在5mL巨噬細胞-SFM培養基中共溫育。讓細胞靜息(rest)12小時，然后用TWEAK(100ng/mL)或TNF-a(100ng/mL)進行刺激。依照制造商的說明書(CellSignaling,Beverly,MA)制備溶胞液(20嗎總蛋白質)和免疫沉淀物(50嗎總蛋白質)。用于后續免疫印跡和免疫沉淀的所有抗體購自CellSignaling,而且實驗依照他們的方案進行。組織學和免疫組織化學。將3、6和12月齡雄性7^￡4尺-/-和小鼠的組織稱重，固定，切片，并分析病理狀態。對蘇木精和曙紅染色切片分析總的組織學異常。對花生凝集素(peanutagglutinin)(VectorResearch,Burlingame,CA)染色的冷凍切片分析生發中心的結構。將來自12月齡雄性小鼠的5只7￥^4尺-/-和『^￡^:+/+脾臟解離，染色，并使用TruCount珠(BDb16黑素瘤實驗。給10只7W^4《-/-和7Tr^4《+ah、鼠在右后側皮下(s.c.)注射0.1-0.5xl(^個細胞/0.1mL無菌鹽水。每天監測小鼠，隔天測量肺瘤，持續4周(B16.BL6研究)或6周(B16.F10研究)。研究結束時，取出腫瘤，稱重，并解離，首先通過金屬篩網，隨后用非酶性細胞解離緩沖液(Sigma)處理5分鐘以產生單細胞懸浮液。將自注射腫瘤的小鼠分離的脾細胞與無菌鹽水或腫瘤細胞懸浮液在存在布雷菲德菌素A的條件下共溫育12小時以測量胞內細胞因子生成。實驗結果TWEAK在各種造血組織中的表達先前已有報道(Chicheporticheetal.,supra;Marstersetal.,supra)，但是先前已有報道說表達TWEAK的唯一淋巴樣細胞是單核細胞(Nakayamaetal.,J.Exp.Med.,192:1373-1380(2000))。為了進一步闡明TWEAK的免疫學耙物，對眾多淋巴樣群體分析了TWEAK及其受體FN14在各種炎癥刺激后的的表達(圖1A和IB)。TWEAK及其受體FN14顯示出由先天性免疫系統的細胞表達(見圖1)。只發現NK細胞、巨噬細胞和樹突細胞表達TWEAK(圖1A)及其受體FN14(圖1B)。此外，受體和配體二者的表面表達在用IFN-y或PMA刺激后上調。NKT細胞表達TWEAK,但不表達FN14，而且二者都不受IFN-y或PMA上調。其它淋巴樣細胞類型，包括T和B細胞，不表達顯著水平的TWEAK或FN14(數據未顯示)。為了檢驗TWEAK在體內的生物學作用，構建了TWEAK基因敲除小鼠(圖8)。詳細的解剖學和組織學分析沒有揭示7Tf￡^^-/-小鼠的非淋巴樣組織有任何顯著異常(圖10)。然而，造血組織分析揭示了7TF^4X-/-小鼠具有與年齡相仿的野生型同胞相比顯著更多的NK細胞(圖2A)。這種增多在次級淋巴樣器官中是明顯的，包括脾臟、派伊爾氏斑(Peyer，spatches)、淋巴結和外周血(圖2A),而且在雄鼠中(圖2A,頂圖)大于在雌鼠中(圖2A，底圖)。與NK細胞數增多相反，7^￡/-小鼠展現出正常的服丁細胞(圖2B)以及CD4+或CD8+T細胞、B細胞、巨噬細胞、樹突細胞、粒細胞和血小板水平(數據未顯示)。7>^/-和野生型小鼠骨髓中的NK細胞數是相似的(圖2C),說明NK計數升高可能不是由NK細胞發育(devel叩ment)變化引起的(Kimetal"Nat.Immunol"3:523-528(2002))。或者，激活誘導的細胞死亡(activation-inducedcelldeath,AICD)對NK細胞消除的減弱可能導致NK在不存在TWEAK的情況下積累。自人外周血分離NK細胞，并檢驗TWEAK中和對其AICD敏感性的影響(圖2D)。可溶性FN14-Fc誘餌受體(decoyreceptor)或TWEAK中和性抗體對TWEAK的抑制顯著保護NK細胞免于TNF-a、LPS或IFN-y刺激所致的AICD，說明NK細胞可能因為通過AICD的NK消除不足而在7TF^4《-/-小鼠中積累。蘭氏陰性細菌內毒素脂多糖(LPS)檢驗已建立的系統攻擊模型(圖3A)。71^^/-小鼠在較寬的LPS劑量范圍內與野生型對照相比對LPS誘導的死亡更加易感，說明在不存在TWEAK時形成了更強烈的先天性炎性應答。在注射LPS的小鼠的外周血和脾臟分離的7Tf五yl^ANK細胞和巨噬細胞生成與野生型細胞相比更多的INF-y和IL-12但更少的IL-10(圖3B)。類似地，用抗體中和TWEAK提升人外周血NK細胞和巨噬細胞在LPS刺激后的IFN-y和IL-12生成(圖3C)。如此，認為77f￡^《-/-小鼠對LPS過度敏感，不僅因為它們具有升高的NK細胞數，而且還因為它們的NK細胞和巨噬細胞生成更多的IFN-y和IL-12，它們進一步促進炎性應答(D'Andreaetal.，J.Exp.Med.,178:1041-1048(1993);Emotoetal.,J.Immunol"169:1426-1432(2002);Heremansetal.，Eur.J.Immunol"24:1155-1160(1994》。這些結果說明TWEAK發揮削弱先天性炎癥應答的功能。為了調查TWEAK的缺失如何促進先天性免疫細胞生成IFN-y和IL-12,檢驗了信號轉導物和轉錄激活物(STAT-1)的活性，它對于應答病原體而在NK細胞誘導IFN-y表達、在巨噬細胞中誘導IL-12表達是重要的(Marodietal.,Clin.Exp.Immunol"126:456-460(2001);Morrisonetal.,J.Immunol"172:1825-1832(2004);Nelsonetal.,J.Immunol.,156:3711-3720(1996);Varmaetal"Clin.Diag.LabImmunol"9:530-543(2002))。中和TWEAK提高了Nk細胞和巨噬細胞中的基礎STAT-1磷酸化，并且進一步增強了這些細胞中LPS對STAT-1的刺激(圖4A)。如此，促使TWEAK抑制IFN-y和IL-12生成的一種機制可能是削弱STAT-1的激活。TNP-a,在提升先天性炎癥應答中發揮關鍵作用的細胞因子，通過激活典范NF-kB1途徑而誘導IFN-y和IL-12(以及其它免疫調控基因)的表達(BonizziandKarin,TrendsImmunol"25:280-288(2004);ChenandGreene,Nat.Rev.Mol.CellBiol"5:392-401(2004);Chenetal.,J.Immunol.,166:270-276(2001);D'Andreaetal.，J.Exp.Med"178:1041-1048(1993);Zhongetal.,Mol.Cell,9:625-636(2002))。TNF-a誘導p65/RelANF-kB1亞基的瞬時磷酸化，導致其與p50亞基結合及所得異聚復合物的核易位。在核中，p65/p50易二聚體通過結合p300/CBP轉錄輔激活物(co-activator)而反式激活下游靶基因，諸如IFN-y和IL-12(ChenandGreene,supra;Chenetal.,J.Immunol"166:270-276(2001);Chenetal.，Immunology,107:199-208(2002);Kiernanetal.,J.Biol.Chem.,278:2758-2766(2003);Zhongetal.,supra)。或者，NF-kBI可以與組蛋白脫乙酰基酶(HDAC)-l,-2或-3相互作用，造成靶基因的轉錄抑制(Ashburneretal.,Mol.CellBiol"21:7065-7077(2001);Kiernanetal.，J.Biol.Chem.,278:2758-2766(2003);QuivyandVanLint，Biochem.Pharmacol"68:2507-2515(2004);Rahmanetal"Biochem.Pharmacol"68:1255-1267(2004);Zhongetal.,supra)。鑒于TNF-a選4奪性激活典范NF-kB1途徑，TWEAK表現出能夠寸足進典范NF-kBI(Chicheporticheetal.，supra;Marstersetal"supra;Saitohetal.,supra)禾口非典范NF-kB2亞基(Saitohetal.,supra)二者的核易位。為了檢驗TWEAK是否還可能通過調控NF-KB1的轉錄相互作用而影響基因表達，比較了TWEAK和TNF-a在人脾NK細胞和巨噬細胞中對p65NF-kB1磷酸化的影響(圖4B)。與引起在0.5小時可檢測的p65瞬時改變(modification)的TNF-a不同，TWEAK誘導延長的p65磷酸化，自0.25小時開始，持續至8小時。接著，將來自受刺激細胞的p65NF-kb1免疫沉淀，并通過免疫印跡分析探查與p300或HDAC-1的結合(圖4C)。盡管TNF-a誘導p65與p300但非與HDAC-1的強相互作用，然而TWEAK誘導p65與HDAC-1但非p300的強結合。如此，在抑制STAT-1激活以外，TWEAK可通過促進NF-kB1與HDAC-1的相互作用而抑制IFN-y和IL-12的轉錄。TWEAK對NK細胞的IFN-y生成和巨噬細胞的IL-12生成的抑制效果得到HDAC抑制劑曲古抑菌素(Trichostatin)A的逆轉(數據未顯示)。為了調查TWEAK缺陷是否改變免疫系統發育，比較了3、6和12月齡時小鼠和野生型同胞的淋巴樣組織(圖5)。到6個月時，7TF￡^/-小鼠顯示出與對照相比顯著的脾臟和淋巴結增大(圖5A、5B),而胸腺和肝臟沒有不同(數據未顯示)。組織學評估表明7^^^4尺-/-脾臟具有正常的生發中心形成，而且沒有惡性腫瘤，正如淋巴結一樣(圖5C)。然而，脾臟的免疫組織化學染色顯示出12月齡7TF五^I尺-/-小鼠中與年齡相仿的同胞相比更強的抗CD3抗體信號(圖5C),說明T細胞隔室(compartment)有擴大。FACS分析證實了CD4+和CD8+兩種T細胞在年老的7TT五^^-A小鼠中都顯著地更加豐富(圖5D)。脾NK細胞數也增加，而B細胞、巨噬細胞、粒細胞或血小板的數目是相似的(數據未顯示)。考慮到NK細胞只占到脾臟細胞的較小百分比，有可能的是脾臟大小增大主要是由TWEAK缺失下T細胞隔室擴大引起的。進一步的分析證明了/-小鼠中記憶T細胞和TH1特異性轉錄因子T-bet表達為陽性的T細胞有顯著增加(圖5E)。這些結果說明TWEAK發揮抑制適應性TH1免疫(immuneprofile)發育的功能。為了進一步評估TWEAK在調控轉變成適應性免疫中的參與情況，檢驗了已建立的基于同基因小鼠C57Black6B16黑素瘤細胞的抗腫瘤免疫力模型(Yangetal.，Int.J.Cancer,105:512-519(2003);Yangetal.,Cell.Immunology,179:84-95(1997);Yeietal"GeneTher"9:1302-1311(2002))。在此模型中，NK細胞和效應T細胞二者對于腫瘤排斥都是重要的(Prevost-Blondeletal.,Eur.IImmunol.，30:2507-2515(2000);Turketal.，J.Exp.Med,,200:771-782(2004);Yangetal"Int.J.Cancer,105:512-519(2003);Yangetal"Cell.Immunol"179:84-95(1997);Yeietal.,GeneTher"9:1302-1311(2002》。首先，用中等攻擊性的B16細胞系B16.F10亞克隆攻擊小鼠(圖6)。7『￡^^-/-小鼠完全抵抗B16.F10腫瘤的建立和生長，而野生型動物以與先前報道的數據相當的速率屈從腫瘤生長(圖6a和6b)(Yeietal.,supm)。為了確定是哪些免疫學差異引起了腫瘤排斥方面的這種顯著不同，分析了注射B16.F10的小鼠的脾淋巴細胞群(圖6c)。與其它發現一致的是，tweak缺陷動物具有與野生型對照相比更多的脾nk細胞。令人驚訝的是，盡管它們缺乏可檢測的腫瘤及因此缺乏豐富的肺瘤相關抗原，7^￡4尺-/-小鼠展現出cd8+t細胞相對于對照的顯著增多。將此發現與年老的rW^^AV-小鼠中記憶T細胞數增加的觀察結果結合起來，認為tweak的缺失可促進腫瘤誘導的記憶應答增強，可能是通過存在更高水平ifn-y和il-12從而更強地激發了t細胞。還用更具攻擊性的b16黑素瘤亞克隆b16.bl6攻擊小鼠；這確保了腫瘤植入，盡管1個月時的平均胂瘤重量表明在77f^4《-/-小鼠中胂瘤生長與野生型對照相比受到顯著削弱(圖7A)。自7^￡^/-小鼠分離的肺瘤展現出極大增加的淋巴細胞浸潤，T和NK細胞比對照多2-8倍(圖9)。攜瘤7^^4AV-小鼠還具有比對照更大的脾臟(圖7B),其中NK和T細胞群擴增小鼠分離脾細胞，離體(exvivo)用B16.BL6腫瘤細胞再次攻擊，并測定它們生成特定細胞因子的能力。在用腫瘤再次攻擊后，與相應的野生型對照相比，TWEAK缺陷的CD8+T細胞和NK細胞生成顯著更多的IFN-y,而T7f^/-巨噬細胞生成更多的IL-12(圖7D、7E)。總之，這些研究證明了TWEAK的缺失提升先天性及適應性抗腫瘤免疫力，說明TWEAK在生理學上的作用是抑制這兩種應答。另外，7Tf￡A^-/-小鼠中T細胞擴增和抗腫瘤細胞因子生成增強的證據說明TWEAK調控先天性-適應性免疫的接合(interface)。權利要求1.治療癌癥的方法，包括使哺乳動物癌細胞暴露于有效量的拮抗劑分子，其中所述拮抗劑選自(1)抗TWEAK抗體；(2)抗TWEAK受體抗體；(3)TWEAK受體免疫粘附素；和(4)阻斷或截斷TWEAK受體的胞內信號傳導的藥劑或分子。2.權利要求1的方法，其中所述TWEAK受體免疫粘附素包含與免疫球蛋白Fc區融合的TWEAK受體序列。3.權利要求2的方法，其中所述TWEAK受體序列包含FN14受體的胞外結構域序列。4.權利要求1的方法，其中所述抗TWEAK抗體結合包含圖11(SEQIDNO:l)氨基酸94-249的人TWEAK多肽。5.權利要求4的方法，其中所述抗TWEAK抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。6.權利要求1的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體結合包含圖12(SEQIDNO:2)氨基酸序列的人FN14受體多肽。7.權利要求6的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。8.權利要求l的方法，其中還使所述哺乳動物癌細胞暴露于化療、輻射、前體藥物、細胞毒劑或生長抑制劑。9.增強哺乳動物中NK細胞活性的方法，包括對所述哺乳動物施用有效量的拮抗劑分子，其中所述拮抗劑選自(1)抗TWEAK抗體；(2)抗TWEAK受體抗體；(3)TWEAK受體免疫粘附素；和(4)阻斷或截斷TWEAK受體的胞內信號傳導的藥劑或分子。10.權利要求9的方法，其中所述TWEAK受體免疫粘附素包含與免疫球蛋白Fc區融合的TWEAK受體序列。11.權利要求10的方法，其中所述TWEAK受體序列包含FN14受體的胞外結構域序列。12.權利要求9的方法，其中所述抗TWEAK抗體結合包含圖11(SEQIDNO:l)氨基酸94-249的人TWEAK多肽。13.權利要求12的方法，其中所述抗TWEAK抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。14.權利要求9的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體結合包含圖12(SEQIDNO:2)氨基酸序列的人FN14受體多肽。15.權利要求14的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。16.增強哺乳動物中先天性THl應答或活性的方法，包括對所述哺乳動物施用有效量的拮抗劑分子，其中所述拮抗劑選自(1)抗TWEAK抗體；(2)抗TWEAK受體抗體；。)TWEAK受體免疫粘附素；和(4)阻斷或截斷TWEAK受體的胞內信號傳導的藥劑或分子。17.權利要求16的方法，其中所述TWEAK受體免疫粘附素包含與免疫球蛋白Fc區融合的TWEAK受體序列。18.權利要求17的方法，其中所述TWEAK受體序列包含FN14受體的胞外結構域序列。19.權利要求16的方法，其中所述抗TWEAK抗體結合包含圖11(SEQIDNO:l)氨基酸94-249的人TWEAK多肽。20.權利要求19的方法，其中所述抗TWEAK抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。21.權利要求16的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體結合包含圖12(SEQIDNO:2)氨基酸序列的人FN14受體多肽。22.權利要求21的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。23.治療哺乳動物中TH2介導的病癥的方法，包括對所述哺乳動物施用有效量的拮抗劑分子，其中所述拮抗劑選自(1)抗TWEAK抗體；(2)抗TWEAK受體抗體；(3)TWEAK受體免疫粘附素；和(4)阻斷或截斷TWEAK受體的胞內信號傳導的藥劑或分子。24.權利要求23的方法，其中所述TWEAK受體免疫粘附素包含與免疫球蛋白Fc區融合的TWEAK受體序列。25.權利要求24的方法，其中所述TWEAK受體序列包含FN14受體的胞外結構域序列。26.權利要求23的方法，其中所述抗TWEAK抗體結合包含圖11(SEQIDNO:l)氨基酸94-249的人TWEAK多肽。27.權利要求26的方法，其中所述抗TWEAK抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。28.權利要求23的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體結合包含圖12(SEQIDNO:2)氨基酸序列的人FN14受體多肽。29.權利要求28的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。30.權利要求23的方法，其中所述TH2介導的病癥是變態反應或孝喘。31.治療免疫相關病癥的方法，包括對哺乳動物施用有效量的激動劑分子，其中所述激動劑選自(1)抗TWEAK受體抗體；(2)TWEAK多肽；和(3)TWEAK多肽變體。32.權利要求31的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體結合包含圖12(SEQIDNO:2)氨基酸序列的人FN14受體多肽。33.權利要求32的方法，其中所述抗TWEAK受體抗體是嵌合的、人源化的或人的抗體。34.權利要求31的方法，其中所述免疫相關病癥是自身免疫病。35.權利要求34的方法，其中所述自身免疫病是克羅恩氏病、炎性腸病、多發性硬化或關節炎。全文摘要提供了調控TWEAK和TWEAK受體活性的激動劑和拮抗劑。本發明的方法、組合物和試劑盒可用于治療諸如癌癥和免疫相關疾病等病癥。文檔編號A61K39/395GK101171035SQ200680015597公開日2008年4月30日申請日期2006年3月2日優先權日2005年3月7日發明者希瑟·梅克爾,阿維·J·阿什克納齊申請人:健泰科生物技術公司