用于治療癌癥的抗-ctla4抗體和吲哚酮組合治療的制作方法

專利名稱：用于治療癌癥的抗-ctla4抗體和吲哚酮組合治療的制作方法
用于治療癌癥的抗-CTLA4抗體和W咮酮組合治療發明背景癌癥目前是在美國造成死亡的主要原因。目前，癌癥是通過一種 或三種類型的治療方法的組合治療的手術，放射和化學療法。化學 療法涉及破壞細胞復制或細胞代謝。用于腫瘤性疾病的治療的系統性 化學療法的負面作用可能是威脅生命的，并且成為了癌癥患者臨床管 理的主要任務。定向治療的發展集中在對肺瘤細胞的特異性靶定，同時不傷害正 常組織，以便減輕副作用方面。定向治療集中在血管發生方面，因為 隨著腫瘤細胞生長，它們需要營養來源。由腫瘤細胞特別產生的生長 因子(例如，VEGF和PDGF)能刺激血管發生，以便形成新的血管提供 重要的養分，并且提供腫瘤細胞轉移的手段(Klagsburn and D'Amore， 1996, Cytokine & Growth Factor Reviews 7: 259-270)。另夕卜， 由于它們在血管發生中的作用，治療方法還集中在受體型酪氨酸激酶 (RTK)和它的抑制劑(RTKIs)方面。細胞培養和基因剔除實驗表明，每一個受體影響血管發生的不同 的方面。另外，業已表明腫瘤生長容易受到VEGF受體拮抗劑的抗血管 生成作用的影響(例如，參見，Kimet al. , 1993， Nature 362: 841-844; Weidner et al. , 1991， N. Engl. J. Med. 324: 1-8 )。另外，PDGF 在血管發生中起著重要作用，它能支持正常血管發育所必需的周皮細 胞的生長和存活。因此，實體腫瘤可以通過酪氨酸激酶抑制劑治療，因為所述腫瘤 依賴于血管發生，以便形成支持它們生長所需要的血管。所述實體腫 瘤包括組織細胞性淋巴瘤，腦，泌尿生殖道，淋巴系統，胃，咽喉和 肺的癌癥，包括肺腺癌和小細胞肺癌，結腸直腸，乳腺和胰腺癌，以 及神經內分泌腫瘤(NET)。其他例子包括出現Raf-激活的癌基因(例
如，K-ras, erb-B)的超量表達或激活的癌癥。所述癌癥包括胰腺和 乳腺癌。因此，所述酪氨酸激酶的抑制劑可用于預防和治療依賴于所 述酶的增殖性疾病。因此，需要開發用于抑制，調節和/或控制酪氨酸 激酶信號轉導的治療方法。癌癥治療的替代和/或補充方法是靶定免疫系統("免疫療法") 而不是和/或作為靶定腫瘤本身的補充。 一種癌癥免疫療法靶定細胞毒 性T淋巴細胞-相關的抗原4 (CTLA4; CD152)，它是在激活的T細胞 上表達的細胞表面受體。CTLA4與它的天然配體，B7. 1(CD80)和B7. 2 (CD86)的結合向T細胞發送負調控信號，并且阻斷該負信號會導致 在動物模型內產生增強的T細胞免疫功能和抗胂瘤活性(Thompson and Al 1 ison/層w/7/0^7: 445-450 ( 1997 ); McCoy and LeGros /層w"o/.》 77: 1-10 ( 1999 ))。若干研究業已證實使用抗體的CTLA4 阻斷能顯著增強T細胞介導的腫瘤殺傷作用，并且可以誘導抗腫瘤免 疫(Leach et al. ， 5We腳271: 1734-1736 ( 1996 ) ; Kwon et al. 尸roc. ScA94: 8099-8103 ( 1997 ) ; Kwon et al.，JcaJ. i"c/. ^S^ 96: 15074-15079 ( 1999 ))。盡管使用抗-CTLA4抗體誘導抗腫瘤反應給癌癥治療帶來了很大 希望，但長時間內仍然需要開發使用所述抗體治療腫瘤，特別是實體 腫瘤的新型療法。類似地，盡管現有的抗癌治療方法取得了成功，但 對所述治療的完全反應很少發生，并且患者群體對這些治療方法的抵 觸仍然較大。因此，有必要開發新的治療方案，特別是能夠增強或加 強其他抗肺瘤制劑，優選RTKIs的抗腫瘤活性，同時減輕現有化學療 法的細胞毒性副作用的方法。本發明滿足了上述要求。發明概述本發明包括用于治療需要這種治療的患者的癌癥的方法。該方法 包括給患者組合施用治療有效量的抗-CTLA4抗體或它的抗原結合部 分，和治療有效量的吲哚酮受體酪氨酸激酶抑制劑(RTKI)。一方面，所述吲味酮RTKI是選自下列一組的至少一種化合物 N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ (Z) - ( 5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H--引咮-3-亞基)甲基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨曱酰，N-[2-(乙氨基)乙 基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)曱基]-2， 4-二甲基-1H-吡咯-3-氨曱酰，和5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫 -3H-吲哚-3-亞基)甲基]-N-[ (2S) -2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2, 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨曱酰，或其可以藥用的鹽。另一方面，所述RTKI是N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-。引咮-3-亞基)曱基]-2， 4-二曱基-111-吡咯-3-氨曱酰.另一方面，所述N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[(Z)-(5-氟-2-氧-l, 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨甲酰的治 療有效量為大約25 mg-87. 5 mg/天，而所述N-[2-二乙氨基]乙 基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨曱酰是口服的。另一方面，所述治療有效量的N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ (Z)-(5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)曱基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨甲酰的施用量為大約37.5 mg-50 mg/天。另一方面，所述N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[(Z)-(5-氟-2-氧-l， 2-二氬-3H-p引味-3-亞基)甲基]-2， 4-二甲基-lH-吡咯-3-氨曱酰是按照選自下列一組的給藥方案施用的每天施用；每天施用，持續大約 4周；每天施用，持續大約4周，然后停藥大約2周；每天施用，持 續大約3周，然后停藥大約l周；和每天施用，持續大約2周，然后 停藥大約1周。另一方面，所述治療是選自下列一組的治療方法新輔助治療， 輔助治療，第一線治療和第二線治療。另一方面，所述人抗-CTLA4抗體的治療有效量為大約0.1 mg/kg-50 mg/kg。 另一方面，所述人抗-CTLA4抗體的治療有效量為大約0.3 mg/kg-20 mg/kg。另一方面，所述治療有效量的人抗-CTLA4抗體選自下列一組 至少1 mg/kg，至少3 mg/kg，至少6 mg/kg，至少10 mg/kg，和至 少15 mg/kg。另一方面，所述抗體是按照選自下列一組的給藥方案施用的每 28天施用大約6 mg/kg，每三個月施用大約6 mg/kg，每28天施用大 約10mg/kg,每三個月施用大約10mg/kg,每28天施用大約15 mg/kg， 和每三個月施用大約15 mg/kg。一方面，所述N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-丐l咮-3-亞基)甲基]-2， 4-二甲基-lH-吡咯-3-氨甲酰是以 大約37. 5 mg/天的用量施用的，而所述抗-CTLA4抗體是按照選自下列 一組的給藥方案施用的每三個月施用大約10mg/kg和每三個月施用 大約15 mg/kg。另一方面，所述癌癥選自下列一組乳腺癌，前列腺癌，卵巢 癌，胰腺癌，肺癌，急性髓細胞性白血病，結腸直腸癌，腎細胞癌， 胃腸道基質癌，和肉瘤。另一方面，所述抗-CTLA4抗體或它的抗原結合部分，是選自下列 一組的至少一種抗體(a)對CTLA4的結合親和力為大約10_8或以上的人抗體，并且它 抑制在CTLA4和B7-l之間的結合，和抑制在CTLA4和B7-2之間的結合；(b) 具有以下氨基酸序列的人抗體，包括至少一個人CDR序 列，它相當于選自下列一組的抗體的CDR序列4. 1. 1， 4. 8. 1， 4. 10. 2, 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1， ticilimumab (也稱作抗體11.2.1或 CP-675, 206 )， 11. 6. 1， 11. 7. 1. ， 12. 3. 1. 1, 12. 9. 1. 1，和ipilim蘭b;(c) 具有選自下列一組的抗體的重和輕鏈的氨基酸序列的人抗 體4.1.1, 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1， ticilim觀b， 11.6.1， 11.7.1.， 12.3.1.1， 12.9.1,1，和ipili瞧ab; (d)抗體或它的抗原結合部分，它與CTLA4竟爭結合具有選自 下列一組的抗體的重和輕鏈的氨基酸序列的至少一種抗體4. 1. 1, 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1, ticilim畫b， 11.6.1， 11.7.1., 12.3.1.1， 12.9.1.1，和ipilim腿b;和(e)抗體或它的抗原結合部分，它與CTLA4交叉竟爭結合具有 選自下列一組的抗體的重和輕鏈的氨基酸序列的至少一種抗體 4. 1. 1, 4. 8. 1， 4. 10. 2， 4. 13. 1， 4. 14. 3, 6. 1. 1, ticilim腿b, 11. 6. 1， 11.7.1.， 12.3.1.1， 12.9.1.1，和ipilim醒b。一方面，所述抗體是具有選自下列一組的抗體的重和輕鏈的氨基 酸序歹'J的人抗體4.1.1， 4.13.1， ticilimumab和ipilimumab。更優選的是，所述抗體是ticilim畫b。另一方面，所述抗體或它的抗原結合部分，包括重鏈和輕鏈， 其中，所述重鏈的重鏈可變結構域和所述輕鏈的輕鏈可變結構域的氨 基酸序列選自下列一組(a) SEQ ID NO: 3的氨基酸序列和SEQ ID NO: 9的氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 15的氨基酸序列和SEQ ID NO: 21的氨基酸序列；(c) SEQ ID NO: 27的氨基酸序列和SEQ ID NO: 33的氨基酸序列；(d) 由核酸序列SEQ ID NO: 1編碼的氨基酸序列和由核酸序 列SEQ ID NO: 7編碼的氨基酸序列；(e) 由核酸序列SEQ ID NO: 13編碼的氨基酸序列和由核酸序 列SEQ ID NO: 19編碼的氨基酸序列；(f) 由核酸序列SEQ ID NO: 25編碼的氨基酸序列和由核酸序 列SEQ ID NO: 31編碼的氨基酸序列；和(g) ipilimumab的重和輕鏈的氨基酸序列。另一方面，所述抗體或它的抗原結合部分是選自下列一組的抗體 (a) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 4， SEQ ID NO: 5， SEQ ID NO: 6， SEQ ID NO: 10， SEQ ID NO: 11和 SEQ ID NO: 12;(b) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 16， SEQ ID NO: 17， SEQ ID NO: 18， SEQ ID NO: 22， SEQ ID NO: 23和 SEQ ID NO: 24;和(c) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 28， SEQ ID NO: 29， SEQ ID NO: 30， SEQ ID NO: 34， SEQ ID NO: 35和 SEQ ID NO: 36.另一方面，所述抗體或它的抗原結合部分，包括具有SEQIDNO: 27所示氨基酸序列的重鏈可變區和具有SEQ ID NO: 33所示氨基酸序 列的輕鏈可變區。另一方面，所述抗體選自下列一組(a) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 2和 SEQ ID NO: 8;(b) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 14 和SEQ ID NO: 20;和(c) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 26 和SEQ ID NO: 32。另一方面，所述抗體是施用p引咮酮RTKI結束之后施用的，最優 選的是，其中，所述患者的免疫反應水平大于所述患者在吲哚酮RTKI 施用期間或之后不久的免疫反應水平。一方面，所述抗體是在施用吲哚酮RTKI之后大約1-100天施用的。本發明包括用于治療癌癥的藥用組合物。所述組合物包括治療有 效量的抗-CTLA4抗體或它的抗原結合部分，和治療有效量的吲哚酮 RTKI，和可以藥用的載體。一方面，所述吲哚酮RTKI是選自下列一組的至少一種化合物 N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ (Z) -(5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-吲哚-3- 亞基)甲基]-2, 4-二甲基-lH-吡咯-3-氨曱酰，N-[2-(乙氨基)乙 基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-1, 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨曱酰，和5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-1, 2-二氫 -3H-吲哚-3-亞基)曱基〗-N-[ (2S) -2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2, 4-二甲基-lH-吡咯-3-氨甲酰，或其可以藥用的鹽。附圖的簡要說明通過結合附圖閱讀能夠更好地理解本發明的以上概述和以下詳 細說明。為了說明本發明，在附圖中示出了目前優選的實施方案。不 過，應當理解的是，本發明并不局限于所示出的確切的結構和手段。在附圖中圖l，包括

圖1A-1D,表示抗-CTLA4抗體4. 1. l的核苷酸和氨基酸 序列。圖1A表示4.1.1重鏈的完整長度的核苷酸序列(SEQ ID NO: 1)。圖1B表示4.1.1重鏈的完整長度的氨基酸序列(SEQ IDN0: 2)， 而4.1.1重鏈可變區的氨基酸序列(SEQ ID NO: 3)在括號"[]" 之間示出。在每一個4. 1.1重鏈CDR的氨基酸序列下面劃線。所述CDR 序列如下CDR1: GFTFSSHGMH( SEQ ID NO: 4 ); CDR2: VIWYDGRNKYYADSV (SEQ ID NO: 5);和CDR3:GGHFGPFDY (SEQ ID NO: 6)。圖IC表 示4. 1.1輕鏈的核苷酸序列(SEQ ID NO: 7)。圖ID表示完整長度的 4.1.1輕鏈的氨基酸序列(SEQ IDN0: 8)，而所述可變區在括號"[]" 之間示出(SEQ ID NO: 9)。每一個CDR的氨基酸序列如下CDR1: RASQSISSSFLA (SEQ IDN0: 10); CDR2: GASSRAT ( SEQ ID NO: 11); 和CDR3:QQYGTSPWT (SEQ ID NO: 12)。圖2，包括圖2A-2D，表示抗-CTLA4抗體4. 13. l的核苷酸和氨基酸 序列。圖2A表示完整長度的4. 13. 1重鏈的核苷酸序列(SEQ ID NO:13) 。圖2B表示完整長度的4. 13. 1重鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO:14) ，而4. 13. 1重鏈可變區的氨基酸序列(SEQ ID NO: 15)在括號 "[]"之間示出。在每一個4. 13. 1重鏈CDR的氨基酸序列下面劃線。所述CDR序列如下CDR1: GFTFSSHGIH (SEQ ID NO: 16) ; CDR2: VIWYDGRNKDYADSV ( SEQ ID NO: 12);和CDR3:VAPLGPLDY ( SEQ ID NO: 18)。圖2C表示4. 13. 1輕鏈的核苷酸序列(SEQ ID NO: 19)。 圖2D表示完整長度的4. 13. 1輕鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 20)， 而所述可變區在括號"[]"之間示出(SEQ ID NO: 21)。每一個CDR 的氨基酸序列如下 CDR1: RASQSVSSYLA ( SEQ ID NO: 22); CDR2: GASSRAT (SEQ IDNO: 23);和CDR3:QQYGRSPFT ( SEQ ID NO: 24)。 圖3，包括圖3A-3D，表示抗-CTLA4抗體ticilimumab的核苷酸和 氨基酸序列。圖3A表示完整長度的ticilimumab重鏈的核苷酸序列(SEQ ID NO: 25)。圖3B表示完整長度的t ici 1 imumab重鏈的氨基 酸序列(SEQ ID NO: 26)，而tici 1 imumab重鏈可變區的氨基酸序列(SEQ IDNO: 27 )在括號"[]，，之間示出。在每個t ici 1 imumab重鏈 CDR的氨基酸序列下面劃線。所述CDR序列如下CDR1: GFTFSSYGMH(SEQ ID NO: 28) ; CDR2:VIWYDGSNKYYADSV (SEQ ID NO: 29); 和CDR3: DPRGATLYYYYYGMDV( SEQ IDNO: 30)。圖3C表示tici 1 imumab 輕鏈的核苷酸序列(SEQ IDNO: 31)。圖3D表示完整長度的tici 1 imumab 輕鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 32),而所述可變區在括號"[]" 之間示出(SEQ ID NO: 33)。每一個CDR的氨基酸序列如下CDR1: RASQSINSYLD (SEQ IDNO: 34); CDR2:AASSLQS ( SEQ ID NO: 35); 和CDR3:QQYYSTPFT (SEQ ID NO: 36)。發明的詳細說明本發明涉及將抗-CTLA4抗體與至少一種吲哚酮(例如，化合物1， 化合物2和化合物3等)組合用于治療需要所述治療的患者的癌癥。 化合物1或它的L-蘋果酸鹽又被稱為SU11248, SU011248, sunitinib 蘋果酸鹽(USAN/WHO名稱)或SUTENTTM ( L-蘋果酸鹽)。本發明還 涉及通過組合抗體-吲哚酮的組合與至少 一種其他制劑治療癌癥。可用于本發明的抗體和用于生產它們的方法披露于以下文獻中 國際申請號PCT/US99/30895，
公開日為2000年6月29日，公開號為 WO 00/37504(例如，ticilim謹b，又被稱作11. 2. 1和CP-675, 206 )，歐洲專利申請號EP 1262193 Al，
公開日為2002年4月12日，美國 專利申請號09/472, 087，目前已被授權為美國專利號6， 682， 736， 美國專利申請號09/948, 939，目前公開為美國專利申請公開號 2002/0086014(例如，ipi 1 imumab,又被稱作10D1和MDX-010，Medarex， Princeton, NJ )，以上每一份文獻都被收作本文參考。盡管本文提供 了與所述抗體相關的氨基酸和核酸序列的信息，但其他信息可以參見 美國專利號6, 682, 736，以及公開號W0 00/37504， EP 1262193， 和US2002/0086014;在所述申請中提供的序列被收作本文參考。所述抗體用于治療各種癌癥的某些用途披露于美國專利申請號 10/153, 382，目前公開為美國專利申請公開號2003/0086930中，它 被以全文形式收作本文參考。除非在本文中另有說明，本發明所使用的科技術語應當具有本領 域普通技術人員普遍了解的含義。另外，除非本文另有需要，單數名 詞應當包括復數形式，并且復數形式應當包括單數形式。 一般，本文 所披露的用于與細胞和組織培養，分子生物學，免疫學，微生物學，知的和常用的。本發明的方法和技術一般是按照本領域眾所周知的方法操作的， 并且在各種一般性和更專業的參考文獻中公開，這些文獻是本說明書 中引用和討論的，除非另有說明。所述文獻包括，例如，Sambrookand Russell, #o7ecw7<2r C7oo//7g, J Za6orato/y^PProacA, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY ( 2001 ) ， Ausubel et al.， Cwrre/7f r"oco/s // #o/ecw7ar W/o/o《7， John Wiley & Sons, NY ( 2002 )，以及Harlow and Lane爿Z由r"or/ Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1990 ),以上文獻被收做本文參考。酶促反應和純化技術是按照生 產商的說明進行的，正如本領域所常用的或本文所披露的。用于本文 所披露的分析化學，合成有機化學以及醫學和藥物化學相關的名詞和 實驗室方法和技術是本領域眾所周知的和常用的。將標準技術用于化
學合成，化學分析，藥物制備，配制和輸送，以及用于化學治療。 定義在本文中，下面每一個術語具有與在該部分相關的含義。冠詞"一"和"一個"在本文中用于表示一個或一個以上(即，至少一個)所述冠詞的語法賓語。舉例來說，"一個因子"表示一種因子或一種以上因子。在本文中，二十種常用氨基酸和它們的縮寫遵循常規用法。參見/卿W3o7og7一~^外/^力e51/.51( 2nd Edi t ion， E. S. GolubandD. R. Gren， Eds. ， Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))， 以上 文獻被收做本文參考。"保守性氨基酸取代"是這樣的取代，其中， 一個氨基酸殘基被具 有類似化學性質(例如，電荷或疏水性的)側鏈R基團的另一個氨基 酸殘基取代。 一般，保守性氨基酸取代大體上不會改變蛋白的功能特 性。當兩種或兩種以上氨基酸序列彼此之間的差別是保守性取代時， 百分序列相同性或相似程度可以上調，以便校正所述取代的保守性質。 實現這種調整的方法為本領域技術人員所熟知。例如，參見，Pearson, "/o厶243: 307-31 ( 1994 )。具有類似化學性質的側鏈的氨基酸基因的例子包括1)脂肪族側 鏈甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，和異亮氨酸；2)脂肪族-羥基側鏈絲氨酸和蘇氨酸；3)含酰胺的側鏈天冬酰胺和谷氦酰 胺；4)芳香族側鏈苯丙氨酸，酪氨酸，和色氨酸；5)堿性側鏈 賴氨酸，精氨酸，和組氨酸；6)酸性側鏈天冬氨酸和谷氨酸；和 7)含硫的側鏈半胱氨酸和曱硫氨酸。優選的保守性氨基酸取代基 團是纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸，苯丙氨酸-酪氨酸，賴氨酸-精氨酸， 丙氨酸-纈氨酸，谷氨酸-天冬氨酸，和天冬酰胺-谷氨酰胺。另外，保守性取代是在PAM25G log-相似形矩陣中具有正值的任 何變化，參見Gonnet et al. ， Sc/e/2ce 256: 1443-45 ( 1992 )，,皮 收做本文參考。"適當保守性"取代是在PAM250 log-相似形矩陣中具
有非負值的任何變化。優選的氨基酸取代是以下取代(1 )降低對蛋白水解的敏感性， (2)降低對氧化作用的敏感性，(3)改變形成蛋白復合物的結合親 和力，和(4)產生或改變所述類似物的其他物理化學或功能特性。包列的各種突變型蛋白。例如，可以在天然存在的序列(優選在形成分 子間接觸的結構域以外的多肽部分)上形成一個或多個氨基酸取代(優 選保守性氨基酸取代)。保守性氨基酸取代應當不會顯著改變親本序 列的結構特征(例如，氨基酸置換應當不會破壞在親本序列上出現的 螺旋，或破壞親本序列所特有的其他類型的二級結構)。本領域公認 的多肽的二級和三級結構的例子可以參見戶rote/"s, i7rwct"res a/2d #o7eci//<2_r尸r/z c/p7es( Creighton, Ed. ， W. H. Freeman and Company ， New York ( 1984 ) ); //zfrof/z;cf 2'0/7 f<9 ^Profe//3 57rwcti/re( C. Branden and J. Tooze， eds. ， Garland Publishing, New York, N. Y. ( 1991 )); 和Thornton et al. , 354: 105 ( 1991 )，以上文獻分別-陂收做本文參考。多肽的序列相似形，又被稱為序列相同性，通常是使用序列分析 軟件測定的。蛋白分析軟件使用指定給各種取代，缺失和其他修飾， 包括保守性氨基酸取代的相似性參數比較相似序列。例如，GCG包括 諸如"Gap"和"Bestfit"的程序，它可以與缺省參數一起用于測定密切 相關的多肽之間的序列同源性或序列相同性，如來自不同生物物種的 同源多肽或野生型蛋白和它的突變型蛋白之間的比較。例如，參見， GCG Version 6.1。還可以使用FASTA利用缺省或推薦的參數比較多肽 序列，GCG Version 6.1. FASTA中的程序(例如,FASTA2和FASTA3 )提供了查詢序列和檢索序列之間最佳重疊部分的比對和百分序列相同 性(Pearson, #"Ao& 183: 63-98 ( 1990 ) ; Pearson,#eMocr;y "/o厶132: 185-219 ( 2000 ))。比較本發明的序列和包括來自不同生物的大量序列的數據庫的另 一種優選算法是計算機 程序BLAST,特別是blastp或tblastn，使用缺省參數。例如，參見，Altschul et al.， /. 215: 403—410 ( 1990 ) ; Altschulet al. ， #"c/e2'c Jc/^ 25: 3389-402 ( 1997 );,皮收j故本文參考。完整的"抗體"包括至少兩個通過二硫鍵連接的至少兩個重(H) 鏈和兩個輕(L)鏈。 一般參見，/^//2t/3/z7e/2rs/ /yzw7i//70/0《/, Ch. 7(Paul, W. ， ed. ， 2nd ed. Raven Press, N. Y. ( 1989 ))(在各方面都以它 的全文形式收作本文參考)。每一個重鏈由重鏈可變區(HCVR或Vh) 和重鏈恒定區(Ch)組成。所述重鏈恒定區由三個結構域，CHl， CH2和 CH3組成。每一個輕鏈由輕鏈可變區(LCVR或Vl)和輕鏈恒定區組成。 所述輕鏈恒定區由一個結構域Cj且成。所述Vh和Vl區還可以進一步 細分成超變區，被稱為互補性決定區(CDR)，在它們之間分布有更保 守的被稱為框架區(FR)的區域。每一個Vh和Vl由三個CDRs和四個 FRs組成，從氨基末端到羧基末端按以下順序排列FRl， CDR1, FR2， CDR2， FR3， CDR3， FR4。每一個結構域的氨基酸排列符合以下定義Institutes of Health, Bethesda, MD ( 1987 and 1991 ))，或Chothia & Lesk， /. "/o/. 196: 901-917 ( 1987) ; Chothia et al.,m"re 342: 878-883 ( 19890 。重和輕鏈的可變區包括與抗原相互作用的結合結構域。所迷抗體 的恒定區可以介導免疫球蛋白與宿主組織或因子的結合，包括免疫系 統的各種細胞(例如，效應細胞)，和典型補體系統的第一種成分(Clq )。術語"抗體"可以包括完整抗體的抗原結合部分，它保留了專一 性結合完整抗體的抗原，例如，CTLA4的能力。抗原結合部分可以通 過重組DNA技術或通過完整抗體的酶促或化學裂解生產。抗原結合部分的例子包括(i)Fab片段，由VL， VH， CL和CH144 結構域組成的一價片段；(ii) F (ab') 2片段，包括兩個通過二硫鍵 在鉸鏈區連接的Fab片段的二價片段；(iii)由VH和CHl結構域組 成的Fd片段；(iv)由抗體的一個臂的VL和VH結構域組成的Fv片 段，(v)單一結構域抗體("dAb")，它由VH結構域組成，參見Ward etal.， vVa/^re 341: 544-546 ( 1989 );和(vi)獨立的互補 決定區(CDR)。另外，盡管Fv片段的兩個結構域Vh和Vl是由獨立的 基因編碼的，但可以通過重組方法，用合成接頭將它們連接在一起， 使它們成為一個蛋白鏈，其中，Vh和Vl區配對，以便形成一價分子(被 稱作單鏈Fv( scFv);例如，參見，Birdetal. Sc/e/ ce 242: 423-426(1988 );和Huston et al.尸roc. yVa〃. Jcad. Sc人^S^ 85: 5879-5883(1988 ))。所述單鏈抗體屬于術語"抗體"的范圍。"雙特異性抗體"具有兩種不同的結合專一性，例如，參見，美 國專利號5, 922， 845和美國專利號5， 837, 243; Zeilder /. /邁邁w o入 163: 1246-1252 ( 1999 ); Somasundaram 腸.J/7〃6嶺9: 47-54(1999 ) ; Keler Ca/ cer 57: 4008-4014 ( 1997 )。例如，本發明提供了具有細胞表面抗原例如人CTLA4的一個結合位點，和效應 細胞表面上的Fc受體的第二個結合位點的雙特異性抗體。本發明還提 供了多特異性抗體，它具有至少三個結合位點。術語"雙特異性抗體"還包括"雙抗體"。雙抗體是二價的， 雙特異性抗體，其中，Vh和1結構域是在一個多肽鏈上表達的。不過， 使用太短的接頭可以在同一條鏈的兩個結構域之間實現配對，以便強 制所述結構域與另一條鏈上的互補結構域配對，并且形成兩個抗原結 合4立點(例々口，參見，Holliger et al.，戶roc. ^a〃. Sc/. 90: 6444-6448 ( 1993 ) ; Poljak et al. , 5Y藩&re 2: 1121-1123(1994 ))。術語"人抗體"或"人序列抗體"在本文中可以交換使用，它包括 具有來自人種系免疫球蛋白序列的可變和恒定區(如果有的話)的抗的氨基酸殘基(例如，通:體外隨:或位點專二誘變或通過體內體細 胞誘變引入的突變)。不過，在本文中，術語"人抗體"并不包括"嵌 合"抗體，其中，來自諸如小鼠的其他哺乳動物物種或種系的CDR 序列業已嫁接到人類框架序列上(即，"人源化"或PRIMATIZED 抗體)。
在本文中，術語"嵌合抗體"表示包括來自兩個或兩個以上不同抗體的區域的抗體。在一種實施方案中，來自一個或一個以上CDRs 來自人抗-CTLA4抗體。在另一種實施方案中，所有CDRs來自人抗 -CTLA4抗體。在另一種實施方案中， 一個以上人抗-CTLA4抗體的CDRs 可以組合成嵌合人抗體。例如，嵌合抗體可以包括來自第一人抗-CD40 抗體輕鏈的CDR1，來自第二人抗-CTLA4抗體輕鏈的CDR2，以及CDR3 和來自第三種人抗-CTLA4抗體輕鏈的CDR3，而來自重鏈的CDRs可以 來自一種或一種以上其他抗-CD40抗體。另外，所述框架區可以來自 一種相同的抗-CTLA4抗體或一種或多種不同的人類抗體。另外，正如上文所討論的，嵌合抗體包括含有來自一個以上物種 的種系序列的一部分的抗體。在本文中，術語"有效量"，或"治療有效量"表示在給哺乳動 物，優選人類施用時，與在缺少該化合物時檢測到的反應相比能介導 可檢測的治療反應。治療反應，例如，但不局限于抑制和/或減弱腫瘤 生長，腫瘤大小，和轉移等，可以通過本領域公知的多種方法，例如， 包括本文所披露的方法方便地評估。技術人員可以理解的是，本文所使用的化合物或組合物的有效量 可以改變，并且可以才艮據多種因素方便地確定，如要治療的疾病或癥 狀，疾病階段，接受治療的哺乳動物的年齡，健康和體能狀態，疾病 的嚴重性，和所施用的特定化合物等。"治療有效量"，或"有效量"是指用于將一種或多種腫瘤疾病癥 狀減輕到某種程度所需要的藥物數量，包括但不局限于l)癌細胞數 量的減少；2)肺瘤尺寸的縮小；3)抑制(即某種程度的延緩，優選 阻止)癌細胞滲入外周器官；3)抑制(即，某種程度延緩，優選阻止) 腫瘤轉移；4)在某種程度上抑制腫瘤生長；5)在某種程度上緩解或 減輕與疾病相關的一種或多種癥狀；和/或6)緩解或減輕與施用抗癌 藥物相關的副作用。在本文中，術語"竟爭"在針對抗體時，表示第一抗體，或其抗 原結合部分，與第二抗體，或抗原結合部分竟爭結合，其中，與在缺
少第二抗體時第一抗體的結合相比，在存在第二抗體時，第一抗體與 它的同源表位的結合可檢測地減弱。另外，在存在第一抗體時，第二 抗體與它的表位的結合也可能，但不一定可檢測地減弱。就是說，第 一抗體可以抑制第二抗體與它的表位結合，而第二抗體沒有抑制第一 抗體與它的相應的表位的結合。不過，每一種抗體都可檢測地抑制其 他抗體與它的同源表位或配體結合，無論是以相同，更大或更小的程度，所述抗體被稱為彼此"交叉竟爭"結合它們的相應的表位。例如，交叉竟爭抗體可以與本發明的抗體(例如，3.1.1， 4.1.1， 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1, 4.14.3， 6.1.1， ticilimumab， 11.6.1， 11.7.1， 12.3.1.1，和12. 9. 1. 1 )結合的所述表位或表位部分結合。本發明包括竟爭和交叉竟爭抗體。無論發生所述竟爭或交叉竟爭的機制如何(例 如，空間位阻，構象變化，或與共同表位或它的部分結合等)，本領 域技術人員可以理解的是，根據本文所披露的內容，所述竟爭和/或交 叉竟爭抗體屬于本發明的范圍，包括并且可用于本文所披露的方法。術語"表位"包括能夠專一性結合免疫球蛋白或T-細胞受體的任 何蛋白決定子。表位決定子通常由諸如氨基酸或糖側鏈分子的化學活 性表面基團組成，并且通常具有特殊的三維結構特征，以及特殊的電 荷特征。構象和非構象表位的差別在于在存在變性溶劑情況下，與前 者的結合會消失，而與后者的結合則不會消失。在本文中，術語"引咮酮"或"p引味酮受體酪氨酸激酶抑制劑"， 表示具有包括2-吲哚酮核心的結構的任何化合物，例如，化合物l， 它的任何代謝物，包括但不局限于下面所示出的化合物2，和化合物3。<formula>formula see original document page 21</formula><formula>formula see original document page 22</formula>化合物2所述化合物4皮露于以下文獻中國際乂>開號W0 2003/016305 (US 2003/0069298 )，WO 2005/033098(US 2005/0118255 )和WO 2004/024127 (US 2004/229229 )，以及美國專利號6， 573， 293和6, 653， 308， 上述每一份文獻都以它們的全文形式收作本文參考，并且，其中所述 化合物包括針對至少一種受體酪氨酸激酶，以及它們的任何可以藥用 的鹽的任何活性的可檢測的抑制活性。更優選的是，所述化合物可檢 測地抑制KIT, FLT3, VEGFR，和/或PDGFR. 更優選的是，所述化合 物可檢測地抑制KIT, FLT3， VEGFR和PDGFR，更優選的是，所述化 合物是化合物1以及它的活性代謝物化合物2，和化合物3。在本文中，術語"說明材料"包括出版物，錄音，圖表，或任何 其他表達介質，可將它用于傳達有關化合物，組合和/或本發明的組合 物在用于影響，緩解或治療本文所引用的各種疾病或失調的試劑盒中 的用途。選擇性地或可替代地是，所述說明材料可以描述緩解細胞， 組織或哺乳動物的疾病或失調的一種或多種方法，正如在本文的其他 部分所披露的。
例如，所述試劑盒的說明材料可以貼在容納本發明的化合物和/ 或組合物的容器上或與容納所述化合物和/或組合物的容器一起運送。 另外，所述說明材料可以與容器分開運送，以便受體合作性地使用所 述說明材料和化合物。除非另有說明，術語"患者"或"對象"可以交換使用，并且表示諸 如人類患者和非人靈長類的哺乳動物，以及獸醫對象，如兔子，大鼠 和小鼠，以及其他動物。優選的是患者表示人類。在本文中，短語"可以藥用的鹽，，包括酸或堿基團的鹽，它可 以存在于化合物中。堿性化合物能夠與各種無機和有機酸形成多種鹽。 可用于制備可以藥用的所述堿性化合物的酸加成鹽的酸是能夠形成無 毒的酸加成鹽的酸，即，含有可以藥用的陰離子的鹽，如乙酸鹽、苯 磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、二曱苯磺酸鹽、酒石酸氫 鹽、硼酸鹽、溴化物、乙二胺四乙酸鉤、右旋樟腦磺酸、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸、檸檬酸鹽、二氫氯化物、乙二胺四乙酸鹽、edislyate、 丙酸酯月桂硫酸酯、乙磺酸鹽、乙基琥珀酸鹽、延胡索酸鹽、紅霉素、 葡糖酸鹽、谷氨酸、甘鉍胂、己基間苯二酚酸鹽、海巴青霉素、氫溴 化物、氫氯化物、碘化物、異硫代疏酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂 酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、硫酸二曱酯、粘 液酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(embonate)、 棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、多聚半乳糖酪酸鹽、水楊酸鹽、 硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、氯茶堿鹽、 甲苯磺酸鹽、thiethiodode、和戊酸鹽。化合物1-3的優選的鹽披露 于PCT公開號2003/016305，美國專利申請號10/956， 420中，申請 曰為2004年9月30日，和PCT申請號PCT/IB2004/003070，申請日 為2004年9月20日，以上文獻內容4皮以它們的全文形式收作本文參 考。化合物1的特別優選的鹽包括蘋果酸鹽，最優選的是L-蘋果酸鹽。 化合物3的特別優選的鹽是馬來酸鹽。在本文中，描述多肽序列的常用符號如下多肽序列的左端是氨 基末端；多肽序列的右端是羧基末端。在本文中，短語"特異性結合"表示化合物，例如，蛋白，核 酸和抗體等能識別并且結合特定分子，但基本上不能識別或結合樣品中的其他分子。例如，抗體或肽抑制劑能識別并且結合樣品中的同源配體(例如，抗-CTLA4抗體能與它的同源抗原CTLA4結合)，但是基 本上不能識別或結合樣品中的其他分子。因此，在指定的分析條件下， 特定的結合部分(例如，抗體或抗原結合部分)能優選結合特定目標 分子，但是不能大量結合存在于測試樣品中的其他成分。多種分析方 法可用于選擇能專一性地結合感興趣的分子的抗體。例如，固相ELISA 免疫測定，免疫沉淀反應，BIAcore和Western印跡分析;故用于鑒定 能與CTLA4專一性起反應的抗體。 一般，專一性或選擇性反應至少是 背景信號或噪音的兩倍，更常用的是，是背景的10倍以上，更具體地 講，當平衡離解常數(KJ < 1 ^M，優選< 100 nM，最優選《10nM 時，抗體就被稱為"專一性地結合"抗原。術語"K。"表示特定抗體-抗原相互作用的平衡離解常數。 在本文中，"大體上純的"表示目標物質是所存在的占優勢的物質(即，根據摩爾數計算，它比該組合物中的任何其他一種物質的含量 更豐富)，優選的是，大體上純化的部分是組合物，其中，目標物質(例如，抗-CTLA4抗體)至少占存在的所有大分子類型的大約50%(以 摩爾數計算)。 一般，大體上純的組合物占該組合物中所存在的所有 大分子物質的大約80%以上，更優選85%， 90%， 95%，和99°/。以上。最 優選的是，所述目標物質被純化到大體上同質(通過常規檢測方法不 能檢測到組合物中的污染物質)，其中，所述組合物大體上包括單一 的大分子物質。在本文中，"治療"表示減少患者出現發病癥狀的頻率(即，腫 瘤生長和/或轉移，或由免疫細胞的數量和/或活性介導的其他作用 等)。該術語包括施用本發明的化合物或制劑，以便預防或延緩一定 的癥狀，并發癥，或生物化學現象的出現(例如，PSA水平的升高)， 緩解所述癥狀或控制或抑制疾病，癥狀，或失調的進一步發展。治療 可以是預防性(預防或推遲疾病發作，或預防臨床或亞臨床癥狀的出
現)或治療性抑制或緩解發病之后的癥狀。"組合治療"包括施用蛋白激酶抑制劑，優選化合物l，化合物2， 和化合物3，更優選的是，化合物l，和化合物2，最優選的是，化合 物1,和CTLA4抗體作為特定治療方案的一部分，以便通過上述治療 制劑的協同作用提供有益效果。所述組合的有益效果包括但不局限于 來自所述治療劑組合的藥物動力學或藥效協同作用。組合施用所述治 療劑通常是在特定時間內進行的(根據所選擇的組合，通常以分鐘， 小時，天或周計算)。 一般，"組合治療"不包括施用兩種或兩種以上 所述治療劑作為獨立的單一療法的部分，所述方案能偶爾和任意地導 致本發明的組合。"組合治療"包括按順序施用所述治療劑，就是說， 其中，每一種治療劑是在不同的時間施用的，并且大體上同時施用所 述治療劑或至少兩種所述治療劑。例如，大體上同時施用可以通過給 對象施用具有固定比例的每一種治療劑的單一的膠嚢或每一種治療劑 的多個單一膠嚢的組合。依次或大體上同時施用每一種治療劑可以通過任何合適的途徑實現，包括但不局限于口服途徑，靜脈內途徑，肌 內途徑，通過黏膜組織直接吸收。所述治療劑可以通過相同的途徑或 不同的途徑施用。例如，特定組合的第一種治療劑可以通過靜脈注射 施用，而所述組合的其他治療劑可以口服。另外，例如，兩種治療劑 都可以口服或兩種治療劑都可以通過靜脈注射施用。施用所述治療劑 的順序不受狹隘的限制。"組合治療"還包括施用進一步與其他生物活 性成分(如，但不局限于第二種和不同的抗腫瘤藥)和非藥物治療(如， 但不局限于手術或放射治療)組合的上述治療劑的施用。其中，所述 組合治療還包括放射治療，所述放射治療可以在任何合適的時間進行， 只要可以獲得所述治療劑和放射治療的協同作用的有益效果就行。例 如，在適當場合下，當施用治療劑時臨時取消放射治療幾天或幾周時， 仍然能獲得所述有益效果。說明本發明涉及新的治療方法，包括給需要治療的患者同時-組合施
用抗-CTLA4抗體和p引咮酮，優選化合物1,化合物2或化合物3用于 治療癌癥，例如，腎細胞癌，乳腺癌，前列腺癌，胃腸基質癌，結腸 直腸癌，肺癌，非-何杰金氏淋巴瘤，曱狀腺癌，腦瘤，卵巢癌，膀胱 癌，肝細胞癌，子宮頸癌，頭頸癌，急性和慢性白血病，骨髓和淋巴 性白血病，胰腺癌，何杰金氏病，黑素瘤，皮膚扁平細胞癌，卡波濟 氏肉瘤，其他類型的肉瘤(例如，脂肉瘤，骨肉瘤)等。
在一種實施方案中，所述方法包括與抗體組合施用p引味酮RTKI。 一方面，所述方法提供了癌癥的新輔助，輔助，第一線，和笫二線治 療。在另一種實施方案中，所述抗體-巧l味酮RTKI組合與至少一種其 他治療劑一起施用，例如，但不局限于不針對CTLA4的其他單克隆抗 體(例如，AVASTIN (貝伐單抗)，MYELOTARG (吉妥單抗)，BEXXAR (托西莫單抗),RIT狙N(rituximab)，腿CEPTIN( trastuz畫b))， 包括能增強免疫反應的抗體(例如，抗-CD40刺激劑抗體)，或具有 類似作用的蛋白配體，能激活抗原呈遞細胞(樹突細胞，巨嗟細胞，B 細胞，單核細胞)的制劑，包括1型干擾素(例如，干擾素oc和P); 干擾素Y; BCG;能以任何和所有形式提供腫瘤抗原的制劑，包括蛋 白抗原，肽抗原，全細胞裂解物及其衍生物，遺傳編碼的抗原(例如， 腺病毒編碼的抗原)；免疫系統的細胞組分，它在體內或體外進行過 改變，以便增強它們的免疫特性(例如，自體樹突細胞，淋巴細胞， 熱休克蛋白等)；化學治療劑，例如，但不局限于，環磷酰胺，曱氨 蝶呤，依托泊苷，阿霉素，紫杉烷，氟尿嘧啶，阿糖胞苷(AraC), 以及含鉑制劑等。
I.抗-CTLA4抗體
正如本文上面所指出的，優選的抗-CTLA4抗體是能專一性結合人 CTLA4的人抗體。典型的人抗-CTLA4抗體詳細披露于以下文獻中國 際申請號PCT/US99/30895，
公開日為2000年6月29日，公開號為W0 00/37504，歐洲專利申請號EP 1262193 Al，
公開日為2002年4月 12日，和美國專利申請號09/472, 087，現在已授權給Hanson等，
美國專利號6， 682， 736，以及美國專利申請號09/948， 939，公開號 為US2002/0086014，以上文獻的完整內容被收作本文參考。所述抗體 包括但不局限于，3.1.1， 4.1.1， 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1, ticilim腿b， 11.6.1， 11.7.1， 12.3.1.1，和12. 9. 1.1,以 及ipilimumab。人抗體提供了本發明治療方法的顯著優點，因為，預反應。
本發明的有用的人抗-CTLA4抗體的特征在以下文獻中有充分的 介紹W0 00/37504， EP 1262193，和美國專利號6， 682， 736,以及 美國專利申請公開號US2002/0086014和US2003/0086930，以及上述 文獻中所提供的氨基酸和核酸序列，以它們的全文形式收作本文參考。 簡單地講，本發明的抗體包括具有抗體的重和輕鏈的氨基酸序列的抗 體，例如，但不局限于，抗體3. 1. 1， 4. 1. 1， 4. 8. 1, 4. 10. 2， 4. 13. 1， 4. 14. 3， 6. 1. 1， ticilimumab, 11. 6. 1, 11. 7. 1, 12. 3. 1. 1， 12. 9. 1. 1， 和ipilimumab。本發明還涉及具有所述抗體的重和輕鏈的CDRs的氨 基酸序列的抗體，以及在CDR區具有變化的抗體，參見上述申請和專 利。本發明還涉及具有所述抗體的重和輕鏈的可變區的抗體。在另一 種實施方案中，所述抗體選自具有以下抗體的重和輕鏈的完整長度， 可變區，或CDR，氨基酸序列的抗體3. 1. 1， 4. 1. 1， 4. 8. 1， 4. 10. 2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1, ticilimumab， 11.6.1， 11.7.1, 12.3.1.1， 和12. 9.1. 1, 和ipilimumab。
在一種實施方案中，本發明包括抗體-治療劑組合，包括在以下 文獻中披露的人抗-CTLA4抗體美國專利申請號09/948, "9,公開 號為美國專利申請/>開號2002/0086014和2003/0086930，以及所述 文獻所引用的參考文獻，包括但不局限于，MAb 10D1 (ipilimumab, Medarex, Princeton, NJ )。更優選的是，抗-CTLA4抗體是ipilim醒b。
在另一種實施方案中，vh的氨基酸序列包括SEQ ID N0s: 3， l5 和27所示氨基酸序列。在另一種實施方案中，所述Vl包括SEQ IDN0s: 9， 21和33所示氨基酸序列。更優選的是，Vh和Vl包括SEQ ID NO:
3(VH 4. 1.1)和SEQ ID NO: 9 ( VL 4. 1. 1 )分別所示的氨基酸序列； SEQ ID NO: 15 (VH 4.13. 1)和SEQ ID NO: 21 ( VL 4.13.1)分別 所示的氨基酸序列；以及EQIDNO: 27 (VH 11. 2. 1 )和SEQ ID NO: 33 (VL11.2. 1)分別所示的氨基酸序列。
在另一種實施方案中，所述重鏈的氨基酸序列包括由包括SEQ ID NOs: 1， 13，和25所示核酸序列的核酸編碼的氨基酸序列。在另一種 實施方案中，所述輕鏈包括SEQ IDNOs: 7， 19和31所示核酸序列的 核酸編碼的氨基酸序列。更優選的是，所述重和輕鏈包括由SEQ ID NO: 1 (重鏈 4. 1. 1)和SEQ ID NO: 7 (輕鏈4.1.1)分別所示核酸序列 的核酸編碼的氨基酸序列；由SEQ ID NO: 13(重鏈 4. 13. l)和SEQ ID NO: 19(輕鏈 4. 13. 1 )分別示出的核酸序列編碼的氨基酸序列； 以及由SEQ ID NO: 25 (重鏈11. 2. 1 )和SEQ ID NO: 31 (輕鏈11. 2. 1 ) 分別示出的核酸序列編碼的氨基酸序列。
另外，所述抗體可以包括重鏈氨基酸序列，包括來自VH 3-30或 3-33基因的人CDR氨基酸序列，或其中的保守性取代或體細胞突變。 所述抗體還可以在它的輕鏈上包括來自A27或012基因的CDR區，即， 少于五個，或少于十個所述突變。所述抗體還可以包括來自所述基因 的框架區，包括由少于五個，或少于十個氨基酸差異的框架區。所述 抗體還包括本文所披露的框架區，它被突變成能體現原始種系序列。
在本發明的其他實施方案中，所述抗體能抑制CTLA4和B7-1, B7-2，或這兩者之間的結合。優選的是，所述抗體可以抑制與ICs。為 大約100 nM或以下，更優選的是，大約10nM或以下，例如，大約5 nM或以下，或更優選的是，大約2 nM或以下，更優選的是，例如， 大約1 nM或以下的B7-l結合。同樣，所述抗體可以抑制與ICs。為大 約100 nM或以下，更優選的是，10 nM或以下，例如，更優選的是， 大約5 nM或以下，更優選的是，大約2 nM或以下，或更優選的是， 大約1 nM或以下的B7-2結合。
另外，在另一種實施方案中，抗-CTLA4抗體對CTLA4的結合親和 力為大約l(T或以上的親和力，更優選的是，大約10—9或以上的親和
力，更優選的是，大約10_1°或以上的親和力，更優選的是，大約1011
或以上的親和力。
所述抗-CTLA4抗體可以與具有選自下列一組的抗體的重和輕鏈 氨基酸序列的抗體竟爭結合4.1.1, 6.1.1, ticilimumab, 4.13.1 和4.14.3。另外，所述抗-CTIjU抗體可以與ipilimumab抗體竟爭結 合。
在另一種實施方案中，所述抗體優選與具有抗體4. 1. 1， 4.13.1， 4.14.3, 6. 1. l.或ticilimumab的重和輕鏈序列，可變重和可變輕鏈 序列，和/或重和輕CDR序列的抗體交叉竟爭。例如，所述抗體可以 與特定表位結合，具有選自下列一組的抗體的重和輕鏈氨基酸序列， 可變序列和/或CDR序列的抗體可以結合所述表位4.1.1， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1，或ticilimumab。在另一種實施方案中，所述抗體能 夠與具有MDX-D010重和輕鏈序列，或抗原結合序列的抗體交叉竟爭。
在另一種實施方案中，本發明是使用抗-CTLA4抗體實施的，它包 括含有抗體的CDR-l, CDR-2，和CDR-3的氨基酸序列的重鏈，和含有 抗體的CDR-l, CDR-2，和CDR-3的氨基酸序列的輕鏈，所述抗體選自 下列一組3.1.1， 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1， ticilimumab, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1，和12.9.1.1，或具有選 自下列一組的變化的CDR序列保守性變化，其中，所述保守性變化 選自下列一組非極性殘基被其他非極性殘基取代，極性帶電荷的殘 基被其他極性不帶電荷的殘基取代，極性帶電荷的殘基被其他極性帶 電荷的殘基取代，以及結構相似殘基的取代；非-保守性取代，其中， 所述非-保守性取代選自下列 一組極性不帶電荷的殘基取代極性帶電 荷的殘基，以及極性殘基取代非極性殘基，添加和缺失。
在本發明的其他實施方案中，所述抗體包括相對所述種系序列在 框架或CDR區包括少于10, 7， 5，或3個氨基酸變化。在另一種實施 方案中，所述抗體在框架區包括少于5個氨基酸變化和在所述CDR區 包括少于IO個氨基酸變化。在一種優選實施方案中，所述抗體在框架 區包括少于3個氨基酸變化，在CDR區包括少于7個氨基酸變化。在一種優選實施方案中，所述框架區的變化是保守性的，而CDR區的變 化是體細胞突變。
在另一種實施方案中，所述抗體與抗體3.1.1， 4.1.1， 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1， ticilimumab， 11.6.1， 11.7.1， 12. 3. 1. l,和12. 9. 1. 1的CDR序列在重和輕鏈CDR-l，CDR-2和CDR-3 序列上具有至少80°/。，更優選至少85%，更優選至少90%,更優選至少 95%,更優選至少99%的序列相同性。更優選的是，所述抗體與抗體 3. 1. 1， 4. 1. 1， 4. 8. 1， 4. 10. 2， 4. 13. 1， 4. 14. 3， 6. 1. 1， ticili隱ab， 11.6.1， 11.7.1， 12.3.1.1，和12. 9. 1. 1的序列在重和輕鏈CDR-1， CDR-2和CDR-3部分擁有100%的序列相同性。
在另一種實施方案中，所述抗體與抗體3.1.1， 4.1.1, 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3, 6.1.1， ticilimumab， 11.6.1， 11.7.1， 12. 3. 1. l，和12. 9. 1. 1的可變區序列上與重和輕鏈可變區序列具有至 少80%,更優選至少85%，更優選至少90%，更優選至少95%,更優選 至少99%的序列相同性。更優選的是，所述抗體與抗體3. 1. 1, 4. 1. 1， 4.8.1， 4.10.2, 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1， ticilim腿b, 11.6.1， 11.7.1， 12.3.1.1，和12.9.1.1的序列的重和輕鏈可變區序列擁有 100%的序列相同性。
盡管上文所討論的抗-CTLA4抗體可能是優選的，但技術人員根據 本文所提供的說明可以理解的是，本發明涉及多種抗-CTLA4抗體，并 且不局限于上述特定抗體。更具體地講，盡管人抗體是優選的，本發 明絕非要局限于人抗體；相反，本發明涉及有用的抗體，無論它的物 種起源是什么，并且包括嵌合人源化和/或靈長類化抗體。另外，盡管 本文所披露的抗體是使用轉基因哺乳動物，例如，包括人免疫所有組 成成分的小鼠的轉基因哺乳動物，但技術人員根據本文所披露的內容 可以理解的是，本發明不局限于通過這種或任何其他特定方法生產的 抗體。相反，本發明包括通過任何方法生產的抗-CTLA4抗體，包括但 不局限于本領域公知的方法(例如，篩選噬菌體展示文庫等)或在未 來開發，以便生產本發明的抗-CTLA4抗體的方法。根據本文所提供的
充分說明，以及在下文披露的說明例如，授予Hanson等的美國專利 號6， 682, 736,和美國專利申請公開號2002/0088014，本領域技術 人員可以使用本文所披露的新方法方便地生產和鑒定可用于與治療劑 組合治療乳腺癌的抗體。
本發明涉及使用轉基因非人哺乳動物，即，XenoMouse (Abgenix, Inc., Fre麵t， CA)生產的人抗體，參見授予Ha謂n 等的U. S. 6， 682， 736。
用于生產"人"抗體的其他轉基因小鼠系統被稱作 "HuMAb-Mouse " (Medarex， Princeton, NJ)，它包括人免疫球蛋白 基因小基因座，它編碼未重組的人重(jLI和Y )和K輕鏈免疫球蛋白 序列，同時具有使內源H和K鏈基因座失活的定向突變(Lonberg et al. 368: 856—859 ( 1994 ),和美國專利號5， 770, 429 )。
不過，本發明利用使用任何轉基因哺乳動物生產的人抗-CTLA4抗 體，例如，但不局限于，Kirin TC Mouse (Kirin Beer Kabushiki Kaisha, Tokyo, Japan)， 例如,參見Tomizuka等，^Va 〃 icsc/ Sc/KS^ 97: 722 ( 2000 ); Kuroiwa等，#a f wre ^/0fec力/207 18: 1086 (2000 ); Mikay謹et al.的美國專利申請公開號2004/0120948; 和HuMAb-Mouse ( Medarex,Princeton,NJ )和XenoMouse (Abgenix， Inc. ， Fremont, CA )，同上。因此，本發明涉及使用利用轉基因或其 他非人動物生產的抗-CTLA4抗體。
另外，盡管生產人抗-CTLA-4抗體的優選方法包括使用含有人類 免疫所有組成部分的非人轉基因哺乳動物制備所述抗體，但本發明絕 非要局限于這種方法，相反，正如了解了本文所提供的知識的本領域 技術人員可以理解的，本發明涉及用于生產對按照本領域任何公知方 法生產的對CTLA4專一的人或任何其他抗體的任何方法或未來開發生
產能專一性結合感興趣的抗原的抗體的方法。
可以通過一些方法，包括但不局限于使用噬菌體展示抗體文庫。 使用所述技術開發人抗體，可以在CTLA4表達細胞中產生抗體，CTLA4 本身，各種形式的CTLA4，它的表位或肽，以及它的表達文庫(例如，參見美國專利5， 703， 057 )，隨后可以篩選它的上述理想的活性。
在另一種實施方案中，在本發明的方法中使用的抗體不完全是人 的，而是"人源化的"。具體地講，鼠抗體或來自其他物種的抗體可 以使用本領域眾所周知的技術"人源化，，或"靈長類化"。例如，參 見，Winter和Harris /咖,人 7Wa/ 14: 43-46 ( 1993 ) ， Wright et al. i/ /卿謹/. 12: 125-168 ( 1992 )，和Cabilly
et al的美國專利號4, 816， 567，以及Mage和Lamoyi 卓義謦 爿/^/6of/y尸roducf2'o/ rec力/2/。wes a/ d爿； /772'cat/o/7s pp. 79—97 ， Marcel Dekker， Inc. ， New York, NY (1987)。
正如根據本文所提供的說明可以理解的，用于本發明的抗體可以 從轉基因非人哺乳動物，以及由它產生的雜交瘤獲得，不過，還可以 在除了雜交瘤以外的細胞系中表達。
可用作表達宿主的哺乳動物細胞系為本領域所熟知，并且可以包 括可以從美國模式培養物保藏所(ATCC)獲得的任何永生化細胞系， 包括但不局限于中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，NSO (又被稱為NSO)， HeLa細胞，幼倉鼠腎(BHK)細胞，猴腎細胞(COS),和人肝細胞癌 細月包(例如，Hep G2)。還可以使用非哺乳動物原核和真核細胞，包 括細菌，酵母，昆蟲和植物細胞。
正如本領域所乂/^知，可以使用各種表達系統，例如，但不局限于 在以下文獻中所才皮露的系統，例如，Sambrook和ussell， #o7ec"/ sr C7ao7/7《,^ Za6orafor/爿; ;7roac力，Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY ( 2001 )，和Ausubel et al. ， C"rre/7f戶rofoco/s #o/ec"/ar 5/。70《/， John Wiley & Sons, NY ( 2002 )。所述表 達系統包括二氫葉酸還原酶(DHFR )-型系統等。谷氨酰胺合成酶表達 系統在歐洲專利號EP 216 846， EP 256 055，和EP 323 997和歐洲 專利公開號89303964中作了全面或部分討論。在一種實施方案中，所 使用的抗體是在NSO細胞中利用谷氨酰胺合成酶系統(GS-NSO)制備 的。在另一種實施方案中，所述抗體是在CHO細胞中利用DHFR系統制 備的。這兩種系統都是本領域乂>知的，并且披露于Barnes et al.
A/Wec力》"2'oe"g2'/ eer//^ 73: 261-270 ( 2001 )中，以及它所引用 的文獻。對抗體CH2結構域進行位點定向誘變以消除糖基化是優選的，以 便防止免疫原性，藥物動力學和/或效應子功能因為非人糖基化而發生 改變。另外，可以通過酶促方法(例如，參見，Thotakura et al. ^7z//z7o/. 138: 350 ( 1987 ))和/或化學方法(例如，參見，Hakimuddin et al.，5/oc力e邁.259: 52 ( 1987 ))對抗體進^f亍 去糖基化。另外，本發明涉及使用包括改變了的糖基化形式的抗-CTLA4抗 體。技術人員可以理解的是，根據本文所提供的方案，可以將抗-CTLA4 抗體修飾成包括與天然存在的抗體相比具有額外的，少數的，或不同 的糖基化位點。例如，所述修飾披露于以下文獻中美國專利申請公 開號2003/0207336，和2003/0157108，以及國際專利7>開號W0 01/81405和00/24893。另外，本發明包括使用抗-CTLA4抗體，無論抗體上存在的(如果 有的話)糖基化形式如何。另外，充分重新改造糖蛋白上的糖基形式 的方法為本領域所熟知，并且包括，例如，參見國際專利公開號W0 03/031464， W0 98/58964，和W0 99/22764，和授予Umafia等的美國 專利申請號 2004/0063911， 2004/0132640 , 2004/0142856， 2004/0072290，和美國專利號6， 602， 684。另外，本發明涉及使用具有任何本領域公知的共價和非共價修飾 的抗-CTLA4抗體，所述抗體包括但不局限于將多肽連接在多種非蛋白 類聚合物中的一種上，例如，聚乙二醇，聚丙二醇，或聚氧化烯，通 過下文所披露的方式連接，例如，美國專利申請公開號2003/0207346 和2004/0132640，以及美國專利號4， 640， 835; 4， 496， 689; 4， 301， 144; 4， 670， 417; 4， 791， 192; 4， 179， 337。另外，本發明涉及使用抗-CTLA4抗體或它的抗原結合部分，嵌合 蛋白質，它包括，例如，人血清白蛋白多肽，或它的片段。無論所述 嵌合蛋白是使用重組方法生產的，例如，克隆編碼所述嵌合蛋白的嵌
合核酸，或通過兩種肽部分的化學連接生產的，技術人員一旦了解了 本文所披露的內容就可以理解，所述嵌合蛋白質是本領域所熟知的， 并且可以產生理想的生物學特性，例如，但不局限于提高本發明的抗 體的穩定性和血清半衰期，并且，因此本發明包括所述分子。為了用于本發明而制備的抗體最初不需要具有特別需要的同種 型。相反，所制備的抗體可以具有任何同種型，并且可以在隨后使用 常規技術進行同種型切換。其中，包括定向重組技術(例如，參見美國專利4， 816， 397 ),以及細胞-細胞融合技術(例如，參見美國專 利號5， 916， 771 )。本發明的抗體的效應子功能為了各種治療用途可以通過同種型 切換而切換成IgGl， IgG2， IgG3， IgG4， IgD， IgA， IgE，或IgM而 改變。另外，根據補體，通過使用例如，雙特異性、免疫毒素或放射 性標記可以避免細胞殺傷。因此，盡管用于本發明的優選抗體是通過具有3.1.1, 4.1.1， 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1, 4.14.3， 6.1.1， ticilim腿b， 11.6丄 11.7.1， 12.3.1.1， 12.9.1.1，和ipilimumab的氨基酸序列，或， 例如，它的V區或CDRs的序列的抗體進行說明的，但本發明絕非要以 任何方式局限于使用上述，或任何其他特定抗體。本發明涉及組合施 用本發明的任何抗-CTLA4抗體和吲哚酮RTKI。優選的是，所述抗體 是4.1.1， 4.13.1，ticilimumab， 和/或 ipilimumab。 不過，在本 文其他部分所披露的，或本領域公知的或未來開發的任何抗-CTLA4抗 體或它的抗原結合部分可用于本發明的方法中。更具體地講，來自任 何物種的人源化嵌合抗體，抗-CTLA4抗體(包括從駱駝體內獲得的單 鏈抗體，例如，參見授予Casterman和Hamers的美國專利號5， "759， 808和6， 765， 087 )，以及任何人抗體可以與治療劑組合實施本文 所披露的新方法。本發明還涉及在文獻中公開的抗體，特別是參見國際專利公開號 W0 00/37504 (
公開日為2000年6月29日)；WO 01/14424 (公開 日為2001年3月1日)；W0 93/00431 (
公開日為1993年1月7日)；
和WO 00/32231 (
公開日為2000年6月8日)等。盡管所述抗體4.1.1， 4. 13, 1和ticilimumab是IgG2抗體，在 本文中(圖1-3),以及在本文所引用和收作參考的專利申請和專利 中提供了所述抗體的可變區的序列，但可以理解的是，本發明涉及所 述抗體的完整長度的序列，以及包括SEQ IDN0s: 1-36所示序列的>(壬 何抗體的用途，并且還包括任何恒定區，無論同種型是否在本文的其 他部分作了更全面的討論。同樣，包括ipilimumab的完整長度序列， 或它的任何部分的4壬何抗體，包括編碼ipilimumab的抗原結合部分的 序列，它可以與吲哚酮RTKI，例如，sunitinib蘋果酸鹽組合施用， 以^更治療癌癥。因此，技術人員一旦具備了本文所提供的知識，就能夠方便地理 解，本發明的抗-CTLA4抗體-治療劑的組合可以包括多種抗-CTLA4抗 體。在一種實施方案中，本發明的方法使用ticilimumab。在本發明 的另一種實施方案中，所述方法使用以下文獻描述的抗-CTLA4抗體， 例如參見以下申請和專利美國專利申請號09/472, 087，現在已授 權為美國專利號6， 682, 736;國際申請號PCT/US99/30895 (
公開日
為2000年6月29日，公開號為WO00/37504 );美國專利申請號10/612， 497 (
公開日為2004年11月18日，公開號為US2004/0228858 );美 國專利申請號10/776， 649 (
公開日為2004年11月18日，公開號為 US2004/0228861 );國際申請號PCT/US00/23356 (
公開日為2001年 3月1日，公開號為WO01/14424 X例如，抗體IODI，又被稱作MDX-010， 和ipilimumab，Medarex，Princeton,NJ );國際申請號PCT/US99/28739 (
公開日為2000年6月8日，公開號為WO00/32231 );授予Linsley 等的美國專利號5， 811， 097， 5， 855, 887， 6， 051， 227，和6, 207, 156;美國專利號5， 844， 095;國際申請號PCT/US92/05202 (
公開日
為1993年1月7日，公開號為WO93/00431 );美國專利申請號10/153， 382 (
公開日為2003年5月8日，公開號為US2003/0086930 );美國 專利申請號10/673， 738 (
公開日為2005年2月24日，公開號為 US2005/0042223 );美國專利申請號11/085， 368 (
公開日為2005 年10月13日，公開號為US2005/0226875 );美國專利申請號60/624， 856 (申請日為2004年11月4日)；美國專利申請號60/664， 364 (申 請日為2005年3月23日)；美國專利申請號60/664， 653 (申請日 為2005年3月23日)；美國專利申請號60/697, 082 (申請日為2005 年7月7日)；美國專利申請號60/711， 707 (申請日為2005年8月 26曰)。另外，本領域技術人員根據本文披露的方案可以理解的是，本發 明并不局限于僅施用一種抗體；相反，本發明涉及施用至少一種抗 -CTLA4抗體，例如，4.1.1， 4.13.1， ticilim畫b，和ipilimumab， 與治療劑組合施用。另外，本發明涉及組合施用任何已知的抗-CTLA4 抗體，包括但不局限于組合施用治療劑和，例如，4.1.1， 4.13.1, ticilimumab和ipilimumab。因此，抗-CTLA4抗體的任意組合可以 與至少 一種治療劑組合，并且本發明涉及任何這樣的組合和它們的置 換形式。II. 抗體-"l咮酮組合治療 A.丐l咮酮RTKI可用于本發明的組合和方法中的典型的吲哚酮RTKIs特別是披 露于以下文獻中國際公開號WO 2003/016305 ，
公開日為"03年2 月27日，(US 2003/0069298，
公開日為2003年4月10日)，W0 2005/033098, 7〉開日為2005年4月14日，(US 2005/0118255, 乂〉 開日為2005年6月2日)和WO 2004/024127，
公開日為2004年3月 25日，(US 2004/0229930，
公開日為2004年11月18日)，和美國 專利號6， 573， 293和6, 653, 308,以上文獻的內容^L以它們的全 文形式收作本文參考。因此，正如掌握了本文所披露的方法的技術人 員所能理解的，盡管在一種實施方案中，本文所披露的化合物l是優 選的巧l味酮，但本發明并不局限于這種化合物，或任何其他特定的吲 咮酮RTKI。在一種實施方案中，用于本發明的吲哚酮在抑制至少一種受體酪 氨酸激酶，包括但不局限于，KIT， FLT3， VEGFR，和PDGFR。更優選 的是，所述P引哚酮可檢測地抑制KIT， FLT3， VEGFR,和PDGFR方面具 有可檢測的活性。與抗-CTLA4抗體組合使用的吲哚酮RTKI包括化合 物l和它的任意代謝物(例如，化合物2)，或化合物3。優選的是， 吲哚酮RTKI是化合物1和化合物2。更優選的是，所述丐l咮酮RTKI 是化合物l。本發明的抗體--引咮酮RTKI包括所述化合物的任何可以 藥用的鹽。優選的是，化合物1的鹽是蘋果酸鹽，更優選L-蘋果酸鹽。 化合物3的鹽優選是馬來酸鹽。用于本發明的典型的吲哚酮RTKIs披露于以下文獻中國際公開 號W0 2003/01630
公開日為2003年2月27日，國際乂>開號WO 2004/02412
公開日為2004年3月25日，國際公開號WO 2004/045523，
公開日為2004年6月3日，美國專利號6, 573， 293， 和6， 653， 308，以及美國專利申請號10/991， 244 (公開號為 US2005/0182122,
公開日2005年8月18日)，上述每一份文獻都以 它們的全文形式收作本文參考。上述化合物的用途披露于前面所提到 的文獻中，還可以參見國際公開號WO 2003/015608，
公開日為2003 年2月27日(US 2003/0216410,
公開日為2003年11月20日)和國 際公開號WO 2004/04552
公開日為2004年6月3日，(US 2004/0152759
公開日為2004年8月5日)，美國專利申請公開號US 2005/0182122 (
公開日為2005年8月18日)，和美國臨時申請號 60/719， 119 (申請日為2005年9月20日)，60/680， 837 (申請日 為2005年5月12日)和60/753， 797(申請曰為2005年12月23日)，上述所有文獻都以它們的全文形式收作本文參考。在一種實施方案中，所述吲哚酮RTKI是化合物l,被稱作N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ ( Z ) - ( 5-氟-2-氧-l ， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基) 甲基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨甲酰，并且由上文所示出的結構式 1表示(以前被稱作sunitinib蘋果酸鹽，SU11248, SU011248和 SUTENT)。本發明涉及化合物1的活性代謝物(以前被稱作SU12662， 其代謝物被稱作N-[2-(乙氨基)乙基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2, 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨曱酰，并 且由上文所示出的結構式2表示。在另一種實施方案中，所使用的p引 哚酮RTKI是化合物3，被稱作5-[(Z)-(5-氟-2-氧-1， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-N-[ (2S) -2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2, 4-二 甲基-lH-吡咯-3-氨甲酰，并且由結構式3表示。正如技術人員根據本 文所提供的方法所能理解的，可以使用吲味酮RTKI的任何可以藥用 的鹽。用于本發明的吲哚酮化合物是蛋白激酶(PKs)的泛抑制劑，并 且因此可用于治療癌癥，因為已知PKs能介導和/或在癌形成中發揮作 用。用于本發明的它的催化活性通過所述吲哚酮調節的PKs包括蛋白 酪氨酸激酶，如受體酪氨酸激酶(RTKs ),細胞酪氨酸激酶(CTKs )， 和絲氨酸-蘇氨酸激酶(STKs ) 。 RTK-介導的信號轉導是通過與特殊 生長因子(配體)的細胞外相互作用啟動的，然后進行受體二聚體化， 瞬時刺激內在性蛋白酪氨酸激酶活性和磷酸化。因此，產生了細胞內 信號轉導分子的結合位點，并且導致與多種細胞質信號傳導分子形成 復合物，這有利于適當的細胞反應(例如，細胞分裂，對細胞外微環 境的代謝影響等，例如，參見Schlessinger和Ullrich, 1992， Neuron 9: 303-391。業已證實生長因子受體上的酪氨酸磷酸化位點起著信號傳導分子的SH2 ( src同源性)結構域的高親和力結合位點的作用。Fantl etal.， 1992, Cell 69: 413-423， Songyang et al. ， 1994， Mol.Cell.Biol. 14: 2777—2785 )， Songyang et al. ， 1993， Cell 72: 767-778，和Koch et al. ， 1991， Science 252: 668-678。業已鑒定了與RTKs相關的若干細胞內底物蛋白，并且受體和它們的底物的SH2結構域之間相互作用的專一性是由磷酸化的酪氨酸殘基周圍的氨基酸殘基決定的(Songyang et al. ， 1993， Cell 72: 767-778 ) 。 SH2結構域和環繞特定受體上的磷酸酪氨酸殘基的氨基酸序列之間的結合親和力的 差異與觀察到的它們的底物磷酸化特征方面的差異吻合。以上發現表明，每一種RTK的作用不僅是由它的表達形式和配體的可利用性
決定的，而且還由一系列下游信號轉導途徑決定，這些途徑是通過特 殊受體激活的。因此，磷酸化提供了重要的調控步驟，該步驟決定了 通過特殊生長因子受體，以及分化因子受體恢復的信號傳導途徑的選 擇性。PK信號轉導導致了細胞增殖，分化，生長和代謝等其他反應。 異常的細胞增殖可能導致多種疾病和失調，包括腫瘤形成，如癌，肉 瘤，成膠質細胞瘤和血管瘤，疾病，如白血病，牛皮痺，動脈硬化， 關節炎和糖尿病視網膜病以及與不受控制的血管發生和/或脈管生成 相關的其他疾病。對用于本發明的吲哚酮化合物作用機制的了解并不是實現本發 明所必需的。不過，并不希望受任何特殊理論的制約，用于本發明的 吲咮酮化合物可以與PKs的催化區域的氨基酸相互作用。就是說，PKs 通常具有二裂片結構，其中，ATP似乎結合在一個區域的兩個裂片之 間的裂縫上，其中，所述氨基酸在PKs之間是保守的。PKs抑制劑， 如p引哚酮RTKI被認為通過非共價相互作用，如氫鍵，范德華力和/或 離子相互作用在相同的總體區域結合，其中，ATP還與PKs結合。更 具體地講，用于本發明的化合物的2-吲哚酮成分被認為結合通常情況 下由ATP的腺噤呤環占據的總的空間。特定PK的特定分子的專一性可 能因為2-吲哚酮核心上的各種取代基和對特定PKs專一的氨基酸結構 域之間的額外相互作用而產生。因此，不同的吲哚酮取代基可能造成 與特定PKs的優勢結合。選擇對不同ATP (或其他核苷酸)結合位點 起作用的化合物的能力使得本發明的吲哚酮化合物特別適用于靶定具 有所述位點的任何蛋白。因此，用于本發明的化合物可用于通過與PKs 的相互作用在體內介導治療作用。用于本發明的吲哚酮化合物與抗-CTLA4抗體組合，提供了治療多 種實體腫瘤的有效的治療方法，所述腫瘤包括但不局限于癌，肉瘤， 包括Kaposi's肉瘤，成紅細胞瘤，成膠質細胞瘤，腦膜瘤，星形細胞 瘤，黑素瘤和成肌細胞瘤。本發明還涉及治療或預防非實體腫瘤癌癥， 如白血病。其代表可以包括但不局限于腦癌，膀胱癌，卵巢癌，胃癌，
胰腺癌，結腸癌，腎癌，腸癌，乳腺癌，前列腺癌，血癌，肺癌和骨 癌。另外，但不局限于與不適當的PK活性相關的疾病的類型是當用 于本發明的吲哚酮化合物與抗-CTLA4抗體組合時，可用于預防，治療 和研究的細胞增殖疾病，纖維化疾病和代謝疾病。另外，可以通過本 發明預防治療或進一步研究的細胞增殖疾病包括癌癥，血管增殖性疾 病和膜細胞增殖性疾病。B.巧l咮酮RTKI和抗-CTLA4抗體組合本發明涉及組合治療，包括同時施用吲哚酮PK抑制劑，優選p引 咮酮RTKI,更優選的是，所述p引咮酮RTKI是化合物l,化合物2, 或化合物3，和抗-CTLA4抗體，優選包括抗體4.1.1， 4.13.1,和 ticilimumab, ipilimumab等的抗原結合部分的抗體。對于本發明來 說，所提到的吲味酮RTKIs，包括化合物l，化合物2，或化合物3, 包括它們的可以藥用的鹽，例如，但不局限于本文所披露的優選的鹽。在一種實施方案中，抗-CTLA卩抗體和吲哚酮PK抑制劑的組合是 同時給患者施用的，以便治療癌癥，其中，所述吲哚酮是化合物1。 化合物1可用于治療的疾病包括前列腺癌，卵巢癌，曱狀腺癌，黑素 瘤，肉瘤，乳腺癌，GIST (伊馬替尼-抗性或非抗性)，NSCLC,胰腺 癌，結腸直腸癌，和腎細胞癌等。因此，抗-CTLA4抗體和吲哚酮RTKI 的組合可用于治療所述癌癥。更具體地講，很多潛在的治療選項包括 p引哚酮RTKI和抗-CTLA4組合治療可用于治療伊馬替尼-抗性GIST， 轉移性腎細胞癌，轉移性乳腺癌，結腸直腸癌，卵巢癌，非-小細胞肺 癌，轉移性乳腺癌，和神經內分泌癌(例如，胰島細胞癌)等。盡管 所述癌癥是優選的，本發明涉及治療多種惡性細胞增殖疾病，包括但 不局限于間皮瘤，肝膽(肝和膽管)，原發性和繼發性CNS腫瘤，原 發性和繼發性腦瘤，肺癌(NSCLC和SCLC)，骨癌，皮膚癌，頭頸癌， 皮膚或眼內黑素瘤，肛門區癌癥，胃癌，胃腸(胃，結腸直腸，和十 二指腸)癌，乳腺癌，子宮癌，輸卵管癌，子宮內膜癌，子宮頸癌，
陰道癌，外陰癌，何杰金氏病，食管癌，小腸癌，內分泌系統癌，曱 狀腺癌，副曱狀腺癌，腎上腺癌，軟組織肉瘤，尿道癌，陰莖癌，睪 丸癌，慢性或急性髓細胞性白血病，慢性或急性淋巴細胞性白血病，淋巴細胞性淋巴瘤，皮膚T細胞淋巴瘤，膀胱癌，腎或輸尿管癌，腎 細胞癌，腎盂癌，中樞神經系統(CNS)腫瘤，原發性CNS淋巴瘤， 非何杰金氏淋巴瘤，脊柱腫瘤，腦干神經膠質瘤，垂體腺瘤，腎上腺 皮質癌，膽嚢癌，多發性骨髓瘤，膽管上皮癌，纖維肉瘤，成神經細 胞瘤，視網膜神經膠質瘤，或上述一種或多種癌癥的組合。在所述抗 體-巧l咮酮RTKI組合的另一種實施方案中，所述組合可用于治療任何 異常細胞生長，包括良性增殖性疾病，例如，但不局限于牛皮癬，良 性前列腺肥大和再狹窄。另外，本發明涉及將抗-CTLA4抗體與吲哚酮RTKI組合用于癌癥 的新輔助，輔助，笫一線治療，第二線和/或第三線治療(例如，乳腺 癌的輔助治療，轉移性肺癌的第一線治療，胚細胞腫瘤的第三線治療 等)。就是說，在一種實施方案中，所述抗體-吲哚酮RTKI的組合可 以作為新輔助治療同時施用，例如，在手術切除腫瘤(例如，前列腺 癌)之前。在另一種實施方案中，所述吲哚酮RTKI-抗體組合可以作 為新輔助治療施用(即，在手術之前)，并且還可以在手術之后作為 輔助治療。在另一種實施方案中，所述吲哚酮RTKI-抗體組合可以同 時施用，用于治療細胞因子-耐受患者的轉移性腎細胞癌。另外，所述 組合可以用作第一線治療取代其他制劑(例如，干擾素-ot )。本領域 技術人員根據本文所提供的說明可以方便地理解其他組合和治療方 案，包括但不局限于同時施用吲哚酮RTKI-抗-CTLA4抗體組合，以便 治療轉移性腎細胞癌，作為細胞因子-耐受患者的第二線治療，作為伊 馬替尼-抗性GIST患者的第二線治療等。本發明還涉及所述治療的組 合，其中吲哚酮RTKI-抗-CTLA4組合是同時施用的，例如，但不局限 于將所述組合用于新輔助，輔助，第一線，和第二線治療，或它們的 任意組合。在一種實施方案中，本發明的組合進一步與護理治療的標準進一步組合之后使用，用于治療上述癌癥之一。在另一種實施方案中，所 述組合被用于對護理治療標準沒有反應的患者。一旦掌握了本文所披露的方法，技術人員可以理解的是，本發明涉及吲哚酮RTKI治療與使用抗-CTLA4抗體的免疫療法組合，與手術， 放射療法，或這兩種方法同時或依次(之前或之后)治療癌癥。就是 說，各種治療可以與sunitib-抗-CTLA4組合治療組合，正如掌握了 本文所提供的方法的本領域技術人員所能理解的。在另一種實施方案中，將吲哚酮-RTKI，優選化合物l，化合物2 和化合物3，和抗-CLTA-4抗體組合同時使用，以便增強，延長，或同 時增強和延長對肺瘤的免疫反應。這是因為在吲咮酮RTKI和本發明的 抗-CTLA4抗體的抗-腫瘤效果之間存在相互作用，這種相互作用能導致 以任何制劑單獨更有效的抗-腫瘤效果。因此，不希望受任何特定理論 的約束，吲咮酮RTKI和抗-CTLA4抗體的組合可以在腫瘤內誘導比預期 的更有效的免疫反應。不希望受任何特定理論的約束，由RTKI，例如， 巧l咮酮RTKI的抗-腫瘤效果介導的腫瘤抗原的釋;^可以增強針對所述 抗原的抗-CTLA4的免疫治療效果。業已證實，這有可能是因為使用抗 體的CTLA4阻斷，能破壞對腫瘤抗原的耐受性(例如，恢復或預防無反 應性或對腫瘤抗原的耐受性)，從而使得腫瘤細胞更容易受到免疫攻 擊。因此，巧l咮酮RTKI與抗-CLTA-4抗體的組合可以提供有效的協同 效應，從而提供對癌癥的重要的新的治療方法。在一種實施方案中，本發明提供了使用抗-CTLA4抗體-吲哚酮 RTKI組合產生或加強抗-腫瘤反應的組合物和方法。其中，所述吲哚 酮RTKI通過一定數量的抗體增強抗-腫瘤反應，而所述數量的抗體在 單獨使用時不是誘導相同水平的抗-腫瘤反應的最佳用量。在某些實施 方案中，當所述吲哚酮RTKI不是與誘導抗-腫瘤反應的抗體組合使用 時，單獨施用吲哚酮RTKI不能產生或增強所述抗-腫瘤反應。在其他 實施方案中，所述吲哚酮RTKI和所述抗-CTLA4抗體能夠單獨和/或在 組合施用時誘導抗-腫瘤反應。在某些實施方案中，所述吲哚酮RTKI能夠以疊加方式增強所述抗-CTLA4抗體的效果。在一種優選實施方案中，所述-引咪酮RTKI能 夠以協同方式增強所述抗-CTLA4抗體的效果。在另一種實施方案中， 所述抗-CTLA4抗體能夠以疊加方式增強吲咮酮RTKI的效果。優選的 是，所述效果是以協同方式增強的。因此，在某些實施方案中，本發 明涉及疾病治療或預防方法，它能提供比單獨施用p引咮酮RTKI和/或 單獨施用抗-CTLA4抗體更好的治療效果。本發明涉及具有疊加效力或疊加治療效果的組合治療方法，同時 減輕或避免了有害的或不良影響。本發明還涉及協同組合，其中，治 療效果比疊加效果更好，同時減輕或避免了有害的或不良影響。在某 些實施方案中，本發明的方法可以治療或預防疾病和失調，其中，通 過使用較低和/或較少次數的抗-CTLA4抗體和/或吲咮酮RTKIs的劑 量增強了抗-紳瘤反應，以便降低由單獨施用抗-CTLA4抗體和/或吲哚 酮RTKIs所導致的有害的或不良影響的出現頻率，同時保持或增強了 治療效果，優選增強了患者的順從性，改善了治療和/或減輕了有害的 或不良影響而改善了治療。本發明的方法和組合物不僅可用于未治療過的患者，而且還可用 于治療對單獨施用吲哚酮RTKIs或單獨施用抗-CTLA4抗體部分或完全沒有反應的患者。在各種實施方案中，本發明提供了可用于治療患 者的疾病或失調的方法和組合物，所述患者業已被證實對包括單獨或 同時施用抗-CTLA4抗體和/或吲哚酮RTKIs有耐受性或無反應的患 者，其中，通過增強免疫反應改善了治療。在一種實施方案中，該方 法包括組合吲哚酮RTKI (優選化合物1 )和抗-CTLA4抗體(優選抗體 4.1.1，抗體4.13.1， ticilimumab， ipilim畫b，或它們的任意組 合)。丐l咮酮RTKI可以按照本領域眾所周知的標準給藥方案施用，例 如，但不局限于在以下文獻中披露的方法美國專利申請號10/991, 244 (公開號US2005/0182122，
公開日為2005年8月18日)。簡單 地講，在本發明的一種實施方案中，吲哚酮RTKI，更優選的是化合物 1是每天一次連續施用的。在另一種實施方案中，吲哚酮RTKI每天 連續每天施用持續大約4周，并且不施用額外的p引咮酮RTKI。在本發 明的一種實施方案中，所述吲哚酮RTKI連續施用超過4周時間。在本發明的一種實施方案中，吲哚酮RTKI是按照間歇給藥方案 施用的，包括至少一個服藥周期(或"治療")周期，隨后是"停藥" 期，此期不施用所述p引味酮RTKI。在另一種實施方案中，p引咮酮RTKI 施用大約4周，然后停藥大約2周，此時不施用藥物，并且，隨后再 進行至少一個周期的服藥/停藥周期。在另一種實施方案中，巧l咮酮 RTKI施用大約2周，然后停藥大約l周，此期不施用藥物，然后進行 至少一個額外的服藥/停藥周期。在另一種實施方案中，吲哚酮RTKI 施用大約3周，然后停藥大約l周，此期不施用藥物，隨后進行至少 一個額外的服藥/停藥周期。然后可以重復所述服藥和停藥周期至少一 次，優選重復服藥/停藥周期兩次。在另一種實施方案中，所述服藥/ 停藥周期進行調整，以便釆用服藥/停藥周期的任意組合。例如，所述 丐l咮酮RTKI是按照4/2給藥方案施用的(即，服藥4周，然后停藥 兩周)，然后采用3/1周期。因此，本發明涉及間歇給藥方案的任意 組合，正如為患者所提供的方案。在一種實施方案中，吲哚酮RTKI 的施用，無論是按照連續或間歇給藥方案施用，都持續到直到疾病發 展停止，例如，治療可以持續至少兩年時間。化合物l的優選給藥方 案可以詳細參見美國專利申請號10/991, 244，申請日為2004年11 月17日，(公開號為US2005/0182122，2005年8月18日)，以上文獻的完整內容被收做本文參考。在一種實施方案中，吲哚酮RTKI是每天一次施用的，施用數量 為大約25mg-87.5mg。更優選的是，吲咮酮RTKI (例如，化合物1) 是每天一次施用的，施用量為大約37.5 mg-50 mg。在本文中，吲哚 酮RTKIs包括化合物l， 2和3的用量表示游離堿等效質量。在一種實施方案中，所述吲哚酮RTKI (例如，化合物1， 2，和 3)和所述抗體是同時施用的，其中，吲哚酮是每天施用的，持續4 周，隨后停藥2周，并且重復該循環，其中，所述抗體是在適當的停 藥期之后施用的。更優選的是，吲哚酮是口服的，施用量為大約50mg,
而所述抗體是通過靜脈輸液施用的，施用量為大約0.1 mg/kg-50 mg/kg，更優選的是，大約0. 3mg/kg-20mg/kg，更優選的是，大約1 mg/kg-15 mg/kg，更優選的是，大約3 mg/kg-15 mg/kg，更優選的是， 大約6 mg/kg-15 mg/kg。在另一種實施方案中，所述抗體的施用劑量為至少0.3mg/kg， 優選至少1 mg/kg，更優選至少3 mg/kg,更優選至少5 mg/kg，優選 至少6 mg/kg，更優選至少10 mg/kg，更優選至少15 mg/kg，更優選 至少20 mg/kg。在本發明的一種實施方案中，所述抗體是以每28天大約6mg/kg 的用量施用的。在另一種實施方案中，所述抗體是以每三個月大約6 mg/kg的用量施用的。在本發明的一種實施方案中，所述抗體是以每 28天大約10 mg/kg的用量施用的。在另一種實施方案中，所述抗體 是以每三個月大約10rag/kg的用量施用的。在另一種實施方案中，所 述抗體是以每28天大約15 mg/kg的用量施用的。在另一種實施方案 中，所述抗體是以每三個月大約15 rag/kg的用量施用的。在一種實施方案中，所述吲哚酮RTKI (例如，化合物1, 2，和 3)和所述抗體是同時施用的，其中，吲咮酮是每天施用的持續4周時 間，然后停藥2周，并且重復該循環，并且所述抗體是在施用所述吲 咮酮的第一天施用的，然后每隔28天再次施用抗體至少一個周期，其 中，所述抗體的施用量為10mg/kg。在另一種實施方案中，所述吲哚 酮RTKI是按照4/2的間歇給藥方案施用的，而所述抗體是以每三個 月10 mg/kg的用量施用的。在另一種實施方案中，所述吲哚酮RTKI 是按照4/2的間歇給藥方案施用的，并且所述抗體是每28天施用 一次 的，施用量為15mg/kg。在本發明的一種實施方案中，所述吲哚酮RTKI 是按照4/2的間歇給藥方案施用的，而所述抗體是每三個月施用一次 的,施用量為15mg/kg。在本發明的另一種實施方案中，吲哚酮RTKI (例如，化合物1)是以大約37.5 mg的用量每天連續施用的，而所 述抗體是每三個月施用一次的，施用量為大約10mg/kg。在本發明的 另一種實施方案中，吲哚酮RTKI(例如，化合物l)是以大約5mg的用量每天連續施用的，而所述抗體是每三個月一次施用的，施用量為大約l5 mg/kg。在本發明的另一種實施方案中，丐|咪酮RTKI (例 如，化合物1)是以37.5 mg的用量每天連續施用的，而所述抗體是 每三個月一次施用的，施用量為大約10 mg/kg和/或15 mg/kg。就是 說，抗體的劑量是變化的，并且可以包括每三個月10或15 mg/kg， 正如所指出的。不希望受任何特定理論的約束，吲咮酮RTKI能夠在患者體內有 效導致可檢測的免疫抑制作用，其中，在施用。引哚酮RTKI時可能出 現暫時淋巴細胞減少癥。因此，在本發明的一種實施方案中，所述抗 體能夠在施用最后一劑的-引咮酮RTKI后大約一至大約一百天施用。 就是說， 一旦用吲咪酮RTKI(例如，化合物l, 2，和3)進行的治療 結束，就可以評估患者的免疫反應性(例如，可以測定淋巴細胞減少 水平，如果有的話，包括很多其他測定)。所述免疫反應如果減弱， 可以進行評估，并且一旦所述免疫反應與施用吲哚酮RTKI期間和/ 或之后不久的反應相比出現了可檢測的增強，就可以施用抗-CTLA4抗 體。免疫反應水平能夠，但不一定恢復到給患者施用吲哚酮RTKI之 前的水平。在一種實施方案中，給需要的患者施用吲哚酮RTKI，優選化合 物1，在施用過程結束時，允許一段合適的停藥時間，然后施用抗 -CTLA4。合適的停藥時間包括任何時間，其中，通過本領域/>知的方 法評估的免疫反應水平與患者在施用吲哚酮RTKI期間或之后不久的 免疫反應水平相比可檢測地增強了 。典型的間歇給藥方案包括治療和 停藥時間，參見美國專利申請號10/991， 244 (公開號為 US2005/0182122，
公開日為2005年8月18日)，該文獻4皮以它的全 文形式收作本文參考。盡管可以使用任何合適的停藥時間以便在施用吲哚酮RTKI之后 增強免疫反應，但本發明在施用所述吲哚酮RTKI和所述抗體之間不 需要任何停藥時間，因此，所述抗體和吲哚酮RTKI可以大體上同時 施用。施用吲咮酮RTKI的時間和施用所述抗體的時間屬于相關領域
技術人員根據本文所披露的方法的技能范圍。因此，技術人員根據本文所提供的方法可以理解的是，劑量和給 藥方案可以按照治療領域眾所周知的方法調整。就是說，可以方便地 確定最大耐受劑量，并且，還可以測定給患者提供可檢測的治療效果 的有效量，例如，可能臨時需要施用每一種制劑，以便給患者提供可 檢測的治療效果。因此，盡管本文披露了某些劑量和服藥方案，但這 些例子并非要以任何方式限定可以給本發明治療方案的患者提供的劑 量和施用方案。另外，本領域技術人員根據本文所披露的方法可以理 解的是，治療效果，例如但不局限于腫瘤尺寸和/或轉移的可檢測的減少，前列腺癌PSA水平的降低，以及復發時間的延長和很多其他參數 可以通過本領域所公知的多種方法評估，以便評估治療癌癥的效果， 并且，上述方法以及將來開發的方法都屬于本發明的范圍。盡管本發明以涉及輔助，第 一線和/或第二線治療的方法為例進 行了說明，該方法包括同時施用吲哚酮RTKI，例如，化合物l,和抗 -CTLA4抗體的組合，但掌握了本文提供的方法的技術人員可以理解的 是，本發明并不局限于任何特定治療方法。相反，包括組合的吲哚酮 RTKI和抗-CTLA4抗體治療的方法涉及將所述組合用于整個疾病和治療 過程。更具體地講，本文所披露的新方法可以在轉移之前和之后，以 及在患者對化學治療劑產生耐受性之后提供治療效果，其中，所述抗 體可以增強免疫反應，包括由治療引起的任何反應和由吲哚酮RTKI 介導的任何反應。因此，本發明不局限于將本發明的組合僅用于新輔助治療；相反， 本發明包括所有治療方案，包括但不局限于癌癥的輔助，第一線，和/ 或第二線治療。這是因為本文披露的數據表明，包括抗-CLTA-4抗體的 免疫療法可以單獨或與至少 一 種其他制劑組合在治療期間的任何時間 點提供治療效果。就是說，通過施用本發明的抗-CTLA4抗體可以增強 治療方法的效果，該方法能介導腫瘤特異性抗原的釋放，如細胞毒性 治療(例如，輻射，化學治療，和PKs的抑制作用等)，其中，所述抗 原要接觸免疫系統。實際上，本文披露的數據還表明，通過組合施用 用于治療癌癥，更具體地講，用于治療前列腺癌，乳腺癌，CRC，黑 素瘤，胰腺癌，肺癌，GIST, RCC等的所述抗體和RTKI療法，可以介導 協同效果。因此，本發明提供了用于治療癌癥的重要新型治療劑，以 便增強患者的免疫系統，提供抗肺瘤效果。III. 其他組合治療根據本文披露的說明，包括給患者施用抗-CTLA4抗體的免疫增強 作用，以及同時施用所述抗體與吲咮酮RTKI (優選化合物1)的組合 的組合的疊加或協同作用，技術人員可以理解的是，本發明涉及多種 組合治療，其中，所述抗體-吲咮酮RTKI是與至少一種其他治療劑組 合之后給患者施用的，以便提供治療效果。盡管本領域技術人員在掌 握本發明的方法之后可以方便地了解很多這樣的組合，但下面還是要 討論若干種組合。不過，本發明并非要局限于這些組合，提供這些組 合僅僅是為了說明目的。同時施用抗體--引咮酮和其他治療劑(組合治療)包括同時施用 所述抗-CTLA4抗體，-引咮酮，和一種或多種其他治療劑，并且還包括 同時施用兩種或兩種以上獨立的藥用組合物， 一種組合物包括所述抗 -CTLA4抗體，而其他組合物包括所述吲哚酮，以及包括至少一種其他 治療劑的其他組合物。另外，盡管同時施用或組合(結合)治療一般 表示所述抗體，吲咮酮，和其他治療劑彼此同時施用的，但它還包括 同時，依次或分別施用所述治療的每一種成分。另外，當抗體通過靜 脈內途徑施用，而所述抗癌制劑(例如，吲哚酮RTKI等)是口服的， 或通過皮下或肌內注射時，可以理解的是，所述組合優選以兩個，三 個，或三個以上獨立的藥用組合物形式施用。在對哺乳動物進行額外的化學療法時，本領域眾所周知的化學治 療劑可以與抗-CTLA 4組合使用。另外，還可以使用生長因子抑制劑， 生物反應修飾劑，烷化劑，插入抗生素，長春花屬生物堿，免疫調節 劑，紫杉烷，選擇性雌激素受體調節劑(SERMs)，例如，但不局限于， 拉索昔芬，血管發生抑制劑，和很多治療劑，下面就討論其中的某些 治療劑。血管發生抑制劑本文前面業已討論了血管發生抑制劑與抗-CTLA4抗體組合使用。 另外，血管發生抑制劑包括但不局限于，貝伐單抗(AVASTIN; Genentech)， 針對VEGF的人源化抗體。它可以與5FU組合使用，并 且被證實是患有結腸或直腸轉移性癌癥的患者的第一線治療。直接針 對血管發生因子或它們的受體的制劑通過阻斷自分泌受體信號傳導提 供了受體-感受性血液學惡性腫瘤的更大的治療活性。貝伐單抗能產生 持續的對循環VEGF的中和作用，并且可用于治療骨髓發育異常綜合征(MDS)，淋巴瘤，急性髓細胞性白血病(AML),和實體腫瘤。除了 p引咮酮之外，本發明還涉及血管發生受體信號傳導的其他RTKI小分子 抑制劑，用于血液學惡性腫瘤臨床試驗的第一種受體拮抗劑是SU5416(Sugen)，它能破壞VEGFR-1和VEGFR-2受體和c-Kit的配體誘導 的自體磷酸化。SU5416能在白血病細胞系中抑制VEGF-誘導的克隆源 性反應，并且促進來自AML患者的成髓細胞的細胞凋亡。評估了其他 RTKIs ，包4舌 PTK787/ZK222584 ( Novartis )， 和 AG-13736(Agouron/Pf izer )治療AML和其他受體-感受態血液學惡性腫瘤的作 用。本發明還包括癌癥，例如，腎癌，和胃腸道基質癌等的治療，使 用抗-CTLA4抗體和丐l咮酮RTKI，例如，化合物1，化合物2，和化合 物3，以及至少一種其他血管發生抑制劑，例如，AG-13736, AG-26， 798等，以及本領域眾所周知的或將來開發的其他血管發生抑制劑的 組合。因此，抗-血管發生劑，如匪P-2 (基質-金屬蛋白酶2)抑制劑， 匪P-9 (基質-金屬蛋白酶9)抑制劑，和COX-II (環加氧酶II)抑 制劑可以與本發明的抗體-吲哚酮RTKI組合使用。有用的COX-II抑 制劑的例子包括CELEBREX (celecoxib)，伐地考昔，羅非昔布，帕 瑞考昔，德拉昔布，SD-8381 ， ABT-963 ，依托考昔，羅美昔布， BMS-347070, NS-398， RS 57067，美洛昔康。有用的基質金屬蛋白酶 抑制劑的例子可以參見國際專利公開號W0 96/331"; W0 96/27583;WO 98/07697， WO 98/03516, WO 98/34918， WO 98/34915, WO 98/33768， WO 98/30566， WO 90/05719, WO 99/52910， WO 99/52889， WO 99/29667， 歐洲專利申請號780386(
公開日為1997年6月25日，)，97304971. 1 (申請曰為1997年7月8日，)，99308617. 2 (申請日為1999年10 月29日，)，606046 (
公開日為1994年7月13日，)，931788 (公 開日為1999年7月28日，)，99302232. 1 (申請日為1999年3月 25日，)國際申請PCT/IB98/01113 (申請日為1998年7月21日)， 英國專利申請號9912961. 1 (申請日為1999年6月3日)，美國臨時 專利申請號60/148, 464 (申請日為1999年8月12日)，和美國專 利號5， 863， 949，和5， 861, 510。優選的MMP-2和醒P-9抑制劑是少有或沒有抑制MMP-1活性的抑 制劑。更優選的是相對其他基質-金屬蛋白酶(即MMP-l，MMP-3，MMP-4， MMP-5， MMP-6， MMP-7， MMP-8， MMP-IO， MMP-ll, MMP-12,和MMP-13) 而言能選擇性地抑制MMP-2和/或MMP-9的抑制劑。信號轉導抑制劑本文所披露的治療方法還可以與除了吲哚酮RTKI (例如，化合 物1)之外的其他信號轉導抑制劑一起使用，如能夠抑制EGFR (上皮 生長因子受體)反應，如EGFR抗體，EGF抗體，和作為EGFR抑制劑 的分子；VEGF (血管內皮生長因子)抑制劑，如VEGF受體和能夠抑 制VEGF的分子；和erbB2受體抑制劑，如能夠結合erbB2受體的有 機分子或抗體，例如，HERCEPTIN ( Genentech， Inc. ， San Francisco， CA)。例如，EGFR抑制劑可以參見國際專利公開號W0 95/19970， W0 98/14451， W0 98/02434，和美國專利號5， 747, 498，并且，正如本 文所披露的，所述物質可用于本發明。EGFR-抑制劑包括但不局限于單 克隆抗體C225 (ERBITUX),抗-EGFR 22Mab ( ImClone Systems Inc., New York, NY )，和ABX-EGF ( panitumumab， Abgenix Inc. ， Fremont, CA )，化合物ZD-1839 ( AstraZeneca ) , BIBX-1382 ( BoehringerIngelheim) ， MDX-447 (Medarex， Inc. ， A畫油le, NJ )，和0LX-103 (Merck & Co. ， Whitehouse Station, NJ ) ， VRCTC-310 ( Ventech Research )和EGF融合毒素(Seragen Inc. ， Hopkinton， MA )。 上 述和其他EGFR-抑制劑可用于本發明。導致抑制上皮生長因子受體(EGFR)酪氨酸激酶(TK)的化合物 代表了可用于本發明的方法的抗腫瘤藥物的相對較新的類型。很多人 類癌癥在細胞表面上表達多種EGFR家族。當配體與EGFR結合時，它 會啟動一系列細胞反應，導致增強了的細胞分裂并且影響癌癥發生和 發展的其他方面，包括血管發生，轉移性擴散，和對細胞凋亡的抑制 作用。EGFR-TK抑制劑能選擇性地靶定EGFR家族的成員之一(EGFR(又 被稱作HER1或ErbB-1) ， HER2/neu (又被稱作ErbB-2 ) ， HER3 (又 被稱作ErbB-3)，或HER4 (又被稱作ErbB-4 )),或可以耙定它們 中的兩個或兩個以上。適用于本發明的EGFR-TK抑制劑包括易瑞沙 (IRESSA)，埃羅替尼(TARCEVA) ， CI-1033 (Pfizer) ， GW2016 (GlaxoSmithKline) ， EKB—569 (Wyeth) , PKI—166 (Novartis)， CP-724, 714 (Pfizer)，和BIBX-1382 ( Boeringer-Ingelheim)。 其他EGFR-TK抑制劑披露于申請日為2001年6月18日的美國專利申 請號09/883， 752中。除了p引咮酮RTKI之外，VEGF抑制劑，例如SU-5416和SU-6668 (Sugen Inc., San Francisco, CA)也可用于與抗體和吲咮酮RTKI 的組合組合使用。VEGF抑制劑披露于，例如以下文獻中國際專利/> 開號PCT/IB99/00797 (申請日為1999年5月3日，)，國際專利^> 開號WO 99/24440; WO 95/21613; WO 99/61422; WO 98/50356; WO 99/10349; WO 97/32856; WO 97/22596; WO 98/54093; WO 98/02438; WO 99/16755; WO 98/02437;美國專利號5， 834， 504; 5， 883， 113; 5, 886， 020;和5， 792， 783。可用于本發明的某些特定VEGF抑制 劑的其他例子包括IM862 ( Cytran Inc. ， Kirkland， WA ) ; Genentech， Inc., San Francisco, CA的IMC-lCll Imclone抗體，抗-VEGF單克 隆抗體；和angiozyme,從Ribozyme ( Boulder， CO )和Chiron
(Emeryville, CA )購買的合成核糖酶。ErbB2受體抑制劑，如GW-282974 (Glaxo Wellcome pic)，和 單克隆抗體AR-209 ( A醒ex Pharmaceuticals Inc., Woodlands, TX)和2B-1 (Chiron)也可以與抗體-丐l咮酮RTKI的組合組合使用， 例如，可以參見國際專利公開號W0 98/02434; W0 99/35146; W0 99/35132; W0 98/02437; W0 97/13760; W0 95/19970;美國專利號5， 587， 458，和5， 877， 305。可用于本發明的ErbB2受體抑制劑還拔: 露于EP1029853 (
公開日為2000年8月23日)和國際專利公開號WO 00/44728 (
公開日為2000年8月3日)中。erbB2受體抑制劑化合 物和披露于上述PCT申請，美國專利和美國臨時申請中的物質，以及 能抑制erbB2受體的其他化合物和物質可以與本發明的抗體組合使 用。本發明的治療還可與用于治療異常細胞生長或癌的其他制劑一 起使用，包括但不局限于能夠增強抗腫瘤免疫反應的其他制劑，如其 他的，不同的CTLA4抗體，并且其他制劑還能夠阻斷CTLA4;和抗-增 生制劑，如法呢基蛋白轉移酶抑制劑(例如，BMS 214662 )，和ot v P3抑制劑，如ctvP 3抗體VITAXIN，ctvP5抑制劑，和p53抑制劑等。當本發明的抗體與其他免疫調節劑組合施用時，所述免疫調節劑 可以從，例如下列一組中選擇樹突細胞激活劑，如CD40配體和抗 -CD40刺激劑抗體，以及抗原呈遞增強劑，T-細胞向性增強劑，腫瘤-相關的免疫抑制因子抑制劑，如TGF-P (轉化生長因子p )，和IL-10。 優選的抗-CD4Q刺激劑抗體包括披露于以下文獻中的抗體國際專利
發明者C·M·鮑姆, J·格梅斯-納瓦羅 申請人:輝瑞產品公司