對生物液體進行病毒滅活的成套一次性袋的制作方法

專利名稱：對生物液體進行病毒滅活的成套一次性袋的制作方法
技術領域：
本發明涉及包括病毒滅活袋的一次性袋成套系統，以及任選結合其它用于進一步純化并制備治療性蛋白質的袋和裝置使用該成套一次性袋的方法。
本發明涉及在無菌條件下對單個單位或小池(pool)形式的諸如人或動物血漿、血清和血漿組分的生物液體進行病毒滅活。
人和動物血漿以及血漿組分在現代醫學中起著重要的作用。它們主要在出血期、感染期治療時用于輸血或用于預防或在某些臨床情況中的手術之前用于對患者預處理。
使用人或動物血漿或血漿組分的主要缺點是冒著傳播血液攜帶病毒的危險，這些病毒例如為人類免疫缺陷病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)以West Nile病毒。
因此，已經發展了對血漿和/或血漿組分進行病毒滅活的不同方法。例如，最近發展的一種病毒滅活方法是用亞甲基藍進行處理，接著用可見光照射，這可以應用于單份獻血。遺憾的是這種方法導致蛋白質活性，特別是因子VIII、纖維蛋白原以及Von Willebrand因子(VWF)活性的某種程度的損失，并且在大劑量的亞甲基藍時可能出現蛋白質變性。此外，關于亞甲基藍可能的致突變性的問題已經引發人們的關注。
第4,481,189號和第4,540,573號美國專利描述了使用有機溶劑/除垢劑組合，或者單獨使用溶劑以使血漿和血漿制品中含有的或加入其中的肝炎病毒或其它包膜病毒的傳染性減少幾個數量級。
第4,789,545號美國專利公開了一種通過分配入無毒天然油或合成甘油三酯從血漿和血漿制品中除去有機溶劑/除垢劑組合或單獨溶劑的方法。
第5,094,960號美國專利描述在溫和條件下，即在蛋白質、鹽和其它生物組分的天然濃度下，通過疏水相互作用層析法從血漿或血漿制品中除去溶劑/除垢劑組合。
在試劑濃度、溫度和接觸時間適宜的條件下，溶劑/除垢劑或單獨溶劑處理有效地分解具有結合脂質的包膜蛋白的病毒，同時可以忽略對敏感的血漿蛋白質的分子構象和生物活性的影響。
然而，用溶劑/除垢劑、單獨溶劑處理對人血漿進行病毒滅活常常涉及處理大量份數獻血的大池(100到500升或更多)，并且需要大的及昂貴的藥用制造設備。此外，溶劑/除垢劑或單獨溶劑處理對非包膜病毒沒有效果，例如目前已知的血漿攜帶的病毒細小病毒B19或甲肝病毒(HAV)。因此，如果血漿池的一份獻血被非包膜病毒污染，整個池就會被污染。
另外，盡管沒有闡明原因但可能是由于大規模進行的嚴酷工業處理步驟，已經顯示加入血漿大池中的工業溶劑/除垢劑處理導致蛋白酶抑制劑和抗血栓/抗凝血蛋白質，例如蛋白質S和α-2抗纖溶酶的損失，以及Von Willebrand因子的高分子量多聚體的減少。
本發明的一個目的在于提供一種方便、易用以及節省成本的裝置，其允許對小池的生物液體，例如血漿或血漿組分進行病毒滅活。另一目的在于避免蛋白質變性以及蛋白質活性損失。
目前本發明人意外地并經過深入研究之后發現該目的可以通過包括至少一個病毒滅活袋的一套一次性袋實現，該病毒滅活袋包括內室和均與內室連接的入口裝置和出口裝置，該袋的形狀特征在于內室具有卵形的縱截面，任選地該袋可連接到其它處理裝置上，例如一套一個或幾個漏斗形袋、和/或各種蛋白質吸附袋、和/或各種蛋白質處理袋、和/或各種層析吸附袋或柱或裝置系統，不同的袋或處理系統可彼此連接從而在處理步驟中保持無菌并減少或消除所需的引起蛋白質損失的細菌過濾步驟。
優選地，病毒滅活袋的卵形縱截面為橢圓形的。
有利的是，該橢圓形縱截面具有第一水平軸a和第二垂直軸b，比率a/b大于1。所用的術語水平的和垂直的是相對于使用時出口裝置垂直向下的袋的位置而言。軸a對應于水平橫截面，軸b對應于垂直橫截面。
卵形，優選為橢圓形縱截面的內室具有沒有任何角落的優點，這些角落會保留一些生物液體并阻止液體和病毒滅活劑全部充分的混合。
病毒滅活袋由治療上可接受的柔性材料制成。柔性材料理解為一種當例如由于填充和晃動袋而受到壓力或應力時可變形的材料。所述材料應當在5℃至60℃溫度范圍內，尤其是在溶劑/除垢劑組合或單獨溶劑進行病毒滅活處理中普遍采用20℃至60℃范圍內保持其柔性。
適合的材料為適于與血液和血漿制品及其衍生物接觸的材料，例如血液和血漿行業中使用的傳統醫用/藥用級聚氯乙烯(PVC)。
病毒滅活袋優選由治療上可接受的柔性材料的兩層壓薄片制成，為了分別形成包括至少兩個用于入口裝置的孔和一個用于出口裝置的孔的卵形內室，兩薄片在其邊緣焊接在一起。該焊接應能承受生物液體，特別是填充和晃動袋時產生的壓力和應力。優選地，為了避免內室被化學品污染，所述薄片例如通過超聲密封或射頻(高能)密封焊接在一起。
有利的是，病毒滅活袋包括一個鄰近出口裝置的至少半透明的部分。優選地，整個袋是半透明的。
在特定的實施方案中，病毒滅活袋配備有將袋垂直懸掛的裝置，使出口裝置向下。有利的是，用于懸掛袋的裝置設置在袋的上邊緣區域中，以使得可以懸掛或放置袋而不變形。其也可以配備有使其平放的裝置(例如，用于在控制溫度和溫和晃動下的病毒滅活步驟)。
內室的體積取決于要處理的生理液體的量。有利的是，內室的體積在50ml至20l的范圍內，優選在50ml至5000ml范圍內，更優選在100ml至3000ml范圍內，甚至更優選在200ml至2000ml范圍內，這取決于要進行病毒滅活的血漿或血漿組分或用作起始池的血漿單位的數量。
入口裝置和出口裝置優選設置在病毒滅活袋的相對邊上。
在優選的實施方案中，入口裝置包括兩個端口，用于轉移生物液體的第一端口和用于加入處理化學品的第二端口。處理化學品理解為在病毒滅活過程中使用的任何化學產品。有利的是，為了容易地將生物液體從儲存或收集袋轉移到病毒滅活袋，第一端口提供有至少一個現有技術的袋針刺件或路厄氏鎖(Luer-lock)，例如一個、或兩個或三個袋針刺件或路厄氏鎖。
出口裝置使得能從病毒滅活袋直接或借助柔性管轉移到另一容器，例如一次性漏斗形袋。
用于除去病毒滅活試劑的一次性漏斗形袋包括內室和均連接到內室的入口裝置和出口裝置，特征在于內室包括與出口裝置相接的漏斗狀下部，并且內室含有分離試劑。
優選地，漏斗形袋的內室具有包括基本上為三角形的下部的縱截面，所述三角形由內室的縱截面的下部界限形成。下部界限基本上為線形，并圍起15°至170°的角度α，優選30°至150°，更優選50°至130°，例如120°。所述角α與漏斗形袋的出口裝置重合。
優選地，三角形部分的高度為圍成角度α的三角形的頂點和漏斗形袋的入口裝置的下端之間的總高度的10至100％，優選15至50％，更優選20％至40％，例如25％。
內室的下部為漏斗形具有的優點在于允許例如上部油相和含有生物液體的下部相之間最佳的相分離，以及令人滿意的、即規則的并連續地排出內容物以及生物組分相(下層)與油相(上層)的控制良好的、可能機械輔助的分離。
漏斗形袋由治療上可接受的柔性材料制成。柔性材料理解為當例如由于填充和晃動袋而受到壓力或應力時可變形的材料。該材料應當在5℃至60℃溫度范圍內，尤其是在20℃至37℃范圍內保持其柔性，該20℃至37℃范圍是在沒有熱穩定劑時穩定蛋白質溶液的最佳溫度。
適合的材料例如為醫用/藥用的常規聚氯乙烯(PVC)。
漏斗形袋可由治療上可接受的柔性材料的兩薄片制成，這兩薄片彼此疊合并且它們的邊緣焊接在一起，以便形成包括分別用于入口和出口裝置的兩個孔的內室。所述焊接應能承受生物液體、特別是填充和晃動袋時產生的壓力和應力。優選地，為了避免內室被化學品污染，所述薄片通過超聲密封焊接在一起。
有利的是，漏斗形袋包括一個鄰近出口裝置的至少半透明的部分。優選地，整個袋是半透明的。
在特定的實施方案中，漏斗形袋配備有將袋垂直懸掛的裝置，使出口裝置向下。有利的是，用于懸掛袋的裝置設置在袋的上邊緣區域中，以使得可以懸掛或放置袋而不變形。
內室的體積基本上取決于含有處理化學品的生物液體的體積。有利的是，內室的體積比病毒滅活袋的內室體積大10％，并且在55ml至22L范圍內，優選在55ml至5500ml范圍內，更優選在110ml至3300ml范圍內，甚至更優選220ml至2200ml的范圍內，這取決于要進行病毒滅活的血漿或血漿組分或用作起始池的血漿單位的數量。
入口裝置和出口裝置優選設置在漏斗形袋的相對邊上。有利的是，為了使得混合物能容易轉移到萃取袋，入口裝置包括現有技術的血漿袋針刺件。為此，病毒滅活袋的出口裝置用針刺件刺穿，混合物通過重力轉移到萃取袋中。
有利的是，病毒滅活袋的出口裝置和下游漏斗形袋的入口裝置可以通過管狀物連接并且由易碎閥(breakable valve)和夾子控制。
優選漏斗形袋的出口裝置被密封。
為了進行油萃取以及隨后的相分離，漏斗形袋適于含有無菌藥用級油。在特定的實施方案中，在油萃取之前，油在漏斗形袋中例如通過高壓蒸汽滅菌。
藥用級油可以是天然產生的油，例如從植物或動物提取的，或有類似結構的合成化合物。適合的天然產生的油包括蓖麻油、大豆油、葵花油、棉籽油。優選的合成化合物為合成的甘油三酯。適合的合成甘油三酯的實例包括三油酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆寇酸甘油酯及其組合。
袋中藥用級油的量使得能萃取至少80％脂溶性處理化學品，基于生物液體重量油的用量為2至20％重量比，優選為從5到15％重量比，更優選為從5到10％重量比，例如7.5％重量比。
上述漏斗形袋也能與層析固定相結合使用。在這種情況下，也可以考慮其它形式的一次性袋。層析固定相在所述一次性袋中被處理后，被轉移至一次性柱層析裝置。
可用于進一步處理生物制品的適合的固定相包括如那些用于除去溶劑或除垢劑病毒滅活劑的反相(疏水作用)基質，或諸如離子交換(陰離子和陽離子)基質和親和(如免疫親和或固定的肝素)基質的蛋白吸附基質，或體積排阻基質。優選的反相基質為C18硅膠填充材料或SDR(去除溶劑-除垢劑)hyper D。取決于要純化的蛋白質，優選的陰離子交換基質為陰離子交換凝膠，例如DEAE-Sephadex A-50、DEAE-Sepharose FF， Q-Sepharose、 DEAE-Toyopearl 650M、DEAE-Hyper D。
由于經濟原因，為了填充一次性柱層析袋裝置，在本發明的一次性袋中優選使用便宜的固定相。較貴的固定相優選反復使用，從而用于傳統的層析柱中，所述層析柱可與本發明的一次性袋連接并且在無菌條件下使用。
更具體地，一次性柱層析袋裝置可被用于使用DEAE-SephadexA-50純化凝血酶原復合物濃縮物。
柱層析袋由治療上可接受的半剛性材料制成。半剛性材料被理解為當例如由于填充和晃動袋而受到壓力或應力時可以變形的材料。所述材料應當在4℃至50℃溫度范圍內保持其半剛性。
在一種實施方案中，本發明的成套袋包括兩個病毒滅活袋。盡管只使用一個袋已經能完全進行病毒滅活，但使用第二個病毒滅活袋進一步增加所有的生物液體與病毒滅活劑接觸的可能性。
在特定的實施方案中，本發明的成套一次性袋中的袋，例如通過柔性管彼此連接。所述管有利地配備停止并最終調節生物液體從一個袋流到另一個袋的流動的裝置，例如夾子或閥。
在對用于輸血的全血漿進行病毒滅活的實施方案中，成套一次性袋包括至少一個、優選兩個本發明的病毒滅活袋，1至3個、優選2個、更優選3個，有利的是連續的預先填充有無菌藥用級油的本發明漏斗形袋，以及預先填充有用于柱層析的固定相的本發明的漏斗形袋。優選地，這些袋彼此連接，即，病毒滅活袋的出口裝置連接第一漏斗形袋的入口裝置，第一漏斗形袋的出口裝置連接第二漏斗形袋的入口裝置，第二漏斗形袋的出口裝置連接第三漏斗形袋的入口裝置。第三漏斗形袋的出口裝置連接層析系統。該層析系統也包括含有純化緩沖液或溶劑的塑料袋。如果成套一次性袋包括兩個病毒滅活袋，在第一病毒滅活袋前采用另外的病毒滅活袋，即其出口裝置與第一病毒滅活袋的入口裝置連接。
在對用于輸血的全血漿、無冷凝蛋白血漿(cryo-poor plasma)或冷凝蛋白質(cryoprecipitate)進行病毒滅活的另一實施方案中，成套一次性袋包括至少一個、優選兩個本發明的病毒滅活袋，1至3個、優選2個、更優選3個，有利的是連續的預先填充無菌藥用級油的本發明的漏斗形袋。優選地，這些袋彼此連接，即，病毒滅活袋的出口裝置連接第一漏斗形袋的入口裝置，第一漏斗形袋的出口裝置連接第二漏斗形袋的入口裝置，第二漏斗形袋的出口裝置連接第三漏斗形袋的入口裝置。第三漏斗形袋的出口裝置連接不必要具有漏斗形的第四袋的入口裝置。如果成套一次性袋包括兩個病毒滅活袋，在第一病毒滅活袋前采用另外的病毒滅活袋，即其出口裝置與第一病毒滅活袋的入口裝置連接。
在對用于純化PCC或任何其它存在于無冷凝蛋白血漿中的蛋白質的無冷凝蛋白血漿進行病毒滅活，或在對冷凝蛋白質進行病毒滅活的實施方案中，成套一次性袋包括至少一個、優選兩個本發明的病毒滅活袋，1至3個、優選2個、更優選3個，有利的是連續的預先填充有藥用級油的本發明漏斗形袋，以及預先填充有用于柱層析的固定相的本發明漏斗形袋。優選地，這些袋彼此連接，即，病毒滅活袋的出口裝置連接第一漏斗形袋的入口裝置，第一漏斗形袋的出口裝置連接第二漏斗形袋的入口裝置，第二漏斗形袋的出口裝置連接第三漏斗形袋的入口裝置，第三漏斗形袋的出口裝置連接含有固定相的漏斗形袋的入口裝置。含有固定相的漏斗形袋的出口裝置被密封。如果所述成套一次性袋包括兩個病毒滅活袋，在第一病毒滅活袋前采用另外的病毒滅活袋，即其出口裝置與第一病毒滅活袋的入口裝置連接。
無論所述成套一次性袋具體實施方案，這些袋以柔性管狀物連接。所述管狀物有利地配備停止并最終調節生物液體從一個袋流到另一個袋的裝置，例如夾子或閥。
用于或和成套一次性袋一起使用的任何裝置或附件，例如管狀物、夾子或閥均由醫學和藥物上可接受的材料制成。
本發明的成套一次性袋使用時非常有柔性。它可節省空間、容易運輸，因此可在可能需要對生物液體進行病毒滅活的任何地方使用。使用所述成套一次性袋不需要配置任何工業設施，例如制藥車間。然而該一次性使用的一次性袋系統也可用在制造設備組中以減少不銹鋼裝置的使用，并消除制備血漿衍生物過程中所需的沖洗和消毒。
此外，可以容易地改進成套一次性袋的組成。為了極好適應需要的制備過程，可以使用或不使用漏斗形袋和/或使用或不使用柱層析袋裝置。病毒滅活袋和漏斗形袋的數量也可改變。因此成套袋可以適應個別需要以及每種情況的要求。
本發明的成套袋的另一優點在于每次使用后它們被棄去。因此避免了污染其它批次的風險。
本發明還涉及使用上述成套一次性袋的方法。其特別涉及對生物液體進行病毒滅活的方法，包括以下步驟a.在至少一個本發明的病毒滅活袋中對生物液體進行病毒滅活，以及任選地b.在含有藥用級油的本發明的漏斗形袋內用油萃取生物液體，和/或c.在本發明的柱層析袋內對生物液體進行柱層析。
根據本發明，生物液體包括哺乳動物血液、血漿、血清、血漿組分、來自血液組分的沉淀物和血液分級分離的上清液、貧血小板血漿、無冷凝蛋白血漿(冷上清)。優選的生物液體為血漿，包括回收血漿(recovered plasma)(來自全血的血漿)和置換血漿(apheresis plasma)、無冷凝蛋白血漿、血漿組分，例如用于純化因子VIII、Von Willebrand因子、纖維蛋白原、粘連蛋白、凝血酶原復合物、因子IX、因子VII、蛋白質C、蛋白質S、抗凝血酶、α1抗胰蛋白酶、C1-抑制劑、免疫球蛋白、白蛋白的組分，血漿的沉淀物，例如冷凝蛋白質，聚乙二醇、辛酸或硫酸銨沉淀的組分，及其相應的上清液，或來自血漿分級分離的任何其它沉淀物或上清液，如冷上清、上清液I+II+III、沉淀物I+II+III、上清液II+III、沉淀物II+III、上清液I+III、沉淀物II、上清液IV、沉淀物V。血漿組分、沉淀物和上清液可以從回收血漿(來自全血的血漿)以及置換血漿中獲得。來自一份全血獻血的回收血漿的體積通常在100到240毫升之間，而一份分離血漿獻血的體積通常在500到900毫升之間。
優選的可在本發明的病毒滅活袋中進行的病毒滅活方法為S/D(溶劑/除垢劑)法，單獨溶劑法或單獨除垢劑法，其中加入生物液體中的處理化學品為溶劑/除垢劑組合、溶劑或單獨溶劑的組合、或除垢劑或單獨除垢劑的組合。
適合的溶劑為二-或三烷基磷酸酯，如三-(正丁基)磷酸酯、三-(叔丁基)磷酸酯、三-(正己基)磷酸酯、三-(2-乙基己基)磷酸酯、三-(正癸基)磷酸酯、二-(正丁基)磷酸酯、二-(叔丁基)磷酸酯、二-(正己基)磷酸酯、二-(2-乙基己基)磷酸酯、二-(正癸基)磷酸酯以及含不同烷基鏈的二烷基磷酸酯。可以使用具有不同烷基鏈的二或三烷基磷酸酯，如乙基-二-(正丁基)磷酸酯。一種特別優選的三烷基磷酸酯是三-(正丁基)磷酸酯(TnBP)。
適合的除垢劑包括脂肪酸的聚氧乙烯衍生物、山梨醇酐的偏酯，例如以名稱“Tween 80”(聚氧乙烯(20)山梨聚糖單油酸酯)銷售的產品，也被叫做“聚山梨醇酯80”，“Tween 20”(聚氧乙烯(20)山梨聚糖單月桂酸酯)，以及非離子油溶性水除垢劑，如以名稱“Triton X-100”銷售的氧乙基化烷基酚(聚氧乙烯(9-10)對叔辛基苯酚；分子式t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)xOH，X＝9-10)和“Triton X-45”(聚氧化乙烯(4-5)對叔辛基苯酚，也叫做4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇或聚乙二醇4-四-辛基苯基醚；分子式t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)xOH，x＝～5)。
進一步考慮的除垢劑是去氧膽酸鈉和磺基甜菜堿(sulfobetaine)，如N-十二烷基-N，N-二甲基-2-銨基丁氧硫氰醚磺酸酯(lethanesulphonate)。特別優選的除垢劑是“Tween 80”，“Triton X-100”和“Triton X-45”。
有利的是，如果單獨使用，溶劑的用量為生物液體重量的0.1到3％重量比，優選為0.3到2.5％重量比，甚至更優選為2％重量比。
有利的是，當與除垢劑結合使用時，溶劑的用量為生物液體重量的0.1至2％重量比，優選0.3至1％重量比，對復合混合物如血漿、無冷凝蛋白血漿或冷凝蛋白質進行病毒滅活甚至更優選1％重量比，或者對于更純的組分如因子VIII進行病毒滅活為0.3％重量比。
有利的是，當與溶劑結合使用時，除垢劑的用量為生物液體重量的0.1至2％重量比，優選0.3至1.5％重量比，對于復合混合物如血漿、無冷凝蛋白血漿或冷凝蛋白質進行病毒滅活更優選1％ ％重量比，或者對于更純的組分如因子VIII進行病毒滅活為1％重量比。
有利的是，如果單獨使用除垢劑，其使用量為生物液體重量的0.5至2％重量比，優選1％重量比。
在4至8小時的時間段用溶劑/除垢劑組合、溶劑或除垢劑處理生物液體時期，優選4至6小時，例如，使用例如1％TnBP和1％TritonX-45或Triton X-100對血漿、無冷凝蛋白血漿或冷凝蛋白質進行病毒滅活處理4小時，或使用例如0.3％TnBP和1％Tween-80對因子VIII組分進行病毒滅活處理6小時。在使用超過1個病毒滅活袋的情況下，在不同的袋之間分配時間。例如，4.5小時的總處理時間可以以如下方式分給第一和第二袋第一袋內30分鐘，第二袋內4小時。總處理期的這種分配使得能遵循良好操作規范，因為第一袋用于生物液體和處理化學品的混合以及病毒滅活的起始，而第二袋用于最后的病毒滅活。
可以用藥用級油通過油萃取從生物液體中萃取出溶劑和/或除垢劑。為此，優選將含有溶劑和/或除垢劑的生物液體轉移到本發明含有無菌藥用級油的漏斗形袋中。
內室的下部的漏斗形設計的一個優點在于油和朝向出口裝置的生物液體相之間的接觸面減少并且朝向出口裝置的上層相的厚度增加。因此臨近下層相排出終了時界面(2個流動相之間的區域)更加明顯，兩個相可容易地分開，因而最優化對病毒滅活化學品的去除和血漿體積回收率。
藥用級油可以是天然產生的油，例如從植物或動物中提取的，或具有類似結構的合成化合物。適合的天然產生的油包括蓖麻油、大豆油、葵花油、棉籽油。優選的合成化合物為合成甘油三酯。適合的合成甘油三酯的例子包括三油酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯及其組合。
存在于袋中的藥用級油的量使得能萃取至少80％的脂溶性處理化學品，油的用量基于生物液體的重量為2至20％重量比，優選5至15％重量比，更有選5至12％重量比，例如7.5或10％重量比。
可以進行幾次或多次油萃取，例如1至3次，優選為2次，更優選3次，這特別取決于油濃度以及也有助于除去溶劑和/或除垢劑的進一步的凈化步驟的能力。
萃取步驟可以采用2％重量比的油或更少，但是為了得到期望純度的生物液體，萃取步驟將不得不重復多次，由于費時并且可能引起物質損失而并不優選。
也可使用裝有用于柱層析的固定相的漏斗形袋或與本發明的系統連接的一次性層析柱裝置或其它層析系統，通過柱層析法從生物液體中除去溶劑和/或除垢劑。
可以在油萃取之后或在溶劑/除垢劑處理之后直接進行柱層析。
在某些情況下為了令人滿意地除去病毒滅活中使用的處理化學品，需要在油萃取之后進行另外的柱層析步驟。不能完全通過油萃取除去因而需要柱層析分離的除垢劑的例子是Triton X-100。
當對因子VIII血漿組分進行病毒滅活時，為了除去病毒滅活所使用的處理化學品、純化因子VIII并濃縮因子VIII，通常也使用柱層析。適合種類的柱層析包括陰離子交換免疫親和層析、固定因子VIII配體或固定肝素上的親和層析。通常，在病毒滅活步驟之后直接進行病毒滅活的因子VIII的柱層析，而沒有任何之前的油萃取。
本發明的一次性病毒滅活袋也可用于使用其它處理化學品的生物液體的其它病毒滅活法，例如亞甲基藍處理、核黃素(維生素B2)處理、酸性pH處理(通常使用鹽酸，pH＝4)或辛酸處理(通常pH＜6.5)。
在本發明成套袋中對生物液體，特別是血漿、無冷凝蛋白血漿、冷凝蛋白質和其它血漿組分，例如因子VIII血漿組分進行病毒滅活，允許對小量的生物液體進行病毒滅活。
當滅活方法不是對所有類型的病毒都有效時，例如對非包膜病毒進行溶劑/除垢劑處理的情況，這是特別重要的。這樣，避免了污染多達幾千升生物液體的大池的風險。
此外，與現有技術溶劑/除垢劑(S/D)病毒滅活大池的生物液體相比，根據本發明對單份獻血或生物液體的小池進行病毒滅活避免機械現象，例如聚集、絡合或氧化現象，這都能使蛋白質變性。
處理小量的另一優點在于可能特制經病毒滅活的生物液體。因此，患者可能使用例如單獨來自一個獻血者或者少數獻血者的病毒滅活血漿組分，從而減少暴露到任何血漿攜帶的傳染物的風險。
本發明描述的這種處理的另一優點在于可能處理及病毒滅活用于治療性臨床研究的作為單份獻血或作為小池的病毒感染血漿，例如HCV陽性血漿或SARS陽性血漿，或任何其它含有可治療其它患者的中和抗體的潛在的傳染性血漿。因此，患者可能例如使用單獨來自一個獻血者或少數獻血者的經病毒滅活的HCV陽性或SARS陽性血漿組分，因此消除暴露于HCV或SARS或任何血漿攜帶的傳染物的風險。
參照附圖，通過下面的描述本發明上述和其它目的、特征以及優勢將會更顯而易見。


圖1是本發明病毒滅活袋的一種實施方案的縱截面示意圖；圖1a是本發明病毒滅活袋的另一種實施方案的縱截面示意圖；圖1b是當袋為空的時，沿圖1實施方案的線AA’的橫截面示意圖；圖1c是當袋被裝滿時，沿圖1實施方案的線AA’的示意圖橫截面；圖2是本發明萃取袋的一種實施方案的縱截面示意圖；圖2a是本發明萃取袋的另一實施方案的縱截面示意；圖2b是當袋為空時，沿圖2實施方案的線AA’的橫截面示意圖；圖2c是當袋被裝滿時，沿圖2實施方案的線AA’的橫截面示意圖；圖3是一次性層析柱的一種實施方案的縱截面示意圖；圖4是本發明成套一次性袋的一種實施方案的縱截面示意圖；圖5是本發明成套一次性袋的另一實施方案的縱截面示意圖；下文使用的術語水平、垂直、上面和下面是相對于使用中的出口裝置垂直向下的袋的位置。
圖1顯示的病毒滅活袋1基本上具有矩形的外形，水平邊2比垂直邊3長。
袋1包括內室4、入口裝置5和出口裝置6。內室4具有橢圓形的縱截面，具有第一軸a和第二軸b。第一軸a與袋1的水平邊2a和2b平行，第二軸b與其垂直邊3平行，比率a/b＞1。
入口5和出口6裝置各自分別連接到內室4。入口裝置5設置在上水平邊2b的中央并與橢圓的第二軸b重合。出口裝置6正好與入口裝置5相對、設置在下水平邊2a的中央，并且也與橢圓的第二軸b重合。
入口裝置5包括柔性管狀入口管，與入口管的端部相連的第一端口5a以及側向連接到入口管的第二端口5b。第一端口5a是袋針刺件。采用其將生物液體例如從儲存或收集袋轉移到病毒滅活袋1的內室4。第二端口5b為用于加入處理化學品的端口。
病毒滅活袋1由兩個常規醫用/藥用級聚氯乙烯(PVC)或其它合適材料的長方形薄片層壓并將其邊緣焊接在一起制成，從而形成包括分別用于入口5和出口6裝置的兩個孔的內室4。
內室4被焊接在一起的邊緣區域7圍繞，邊緣區域延伸到薄片的邊界。該邊緣區域7包括兩個孔8，其位于入口裝置的左側和右側。孔8用作垂直懸掛袋1的裝置。
圖1a顯示本發明的病毒滅活袋1的可選擇的實施方案。圖1a的病毒滅活袋1與圖1的袋的不同之處不僅在于其入口裝置5沒有包括第一5a和第二端口5b，還在于袋1包括第二入口裝置1a，其鄰近于上平行邊2b上的入口裝置5。通常，在該結構中，第一入口裝置5用于加入處理化學品，第二入口裝置1a用于將生物液體轉移到病毒滅活袋1中。入口裝置5被密封裝置5c密封，該密封裝置適于例如被針或插管穿孔。
病毒滅活袋1的入口裝置1a包括現有技術的管夾1c。
病毒滅活袋1的出口裝置6包括現有技術的易碎閥6a。
圖1b顯示空的病毒滅活袋1。圖1c中，相同的袋被填滿，薄片分開并向外膨脹。填充袋的厚度c小于兩個軸a和b中最小的那一個。
圖2顯示的漏斗形袋9包括內室10、入口裝置11和出口裝置12。入口11和出口12裝置各自分別連接到內室10，并設置在袋9的相對邊上。
內室包括漏斗狀底部10a。
入口裝置11包括一端與內室11連接并且另一端與現有技術的血漿袋針刺件連接的柔性管狀入口管。這樣，含有處理化學品的生物液體容易借助重力例如從病毒滅活袋1轉移到漏斗形袋9中。
漏斗形袋9由兩個常規醫用/藥用級聚氯乙烯(PVC)或其它合適材料的長方形薄片層壓并將其周邊焊接在一起形成，從而形成包括分別用于入口11和出口12裝置的兩個孔的內室10。
內室10被焊接在一起的邊緣區域13圍繞，該邊緣區域延伸到薄片的邊界。該邊緣區域13包括兩個孔14，其位于入口裝置的左側和右側。孔14用作垂直懸掛袋9的裝置。
圖2a顯示本發明漏斗形袋的優選實施方案。
在該實施方案中，漏斗形袋9的內室10的縱截面包括基本上為三角形的下部10a，該三角形由內室10的縱截面的下部界限c和d形成。下部界限c和d基本上為線性，并圍起大約125°的角度α。所述角α與漏斗形袋9的出口裝置12重合。
三角形部分的高度htri大約為圍成角度α的三角形頂點和漏斗形袋9入口裝置11下端11a之間的總高度h的1/3。
漏斗形袋9包括另外的端口9a。該端口被密封裝置9c密封，該密封裝置適于例如被針或插管穿孔。
漏斗形袋9的入口裝置11包括現有技術的管夾11c。
漏斗形袋9的出口裝置12包括現有技術的易碎閥12a。
圖2b顯示空的漏斗形袋9。圖2c中，相同的袋被填滿，薄片分開并向外膨脹。
圖3中顯示的一次性層析柱袋裝置15包括裝有層析固定相的圓柱形中空體16，該中空體的下部設有過濾器17。圓柱體的上端設有入口裝置18，在其相對的下端設有出口裝置19。入口裝置包括三個端口(18a、18b、18c)，出口裝置也包括三個端口(19a、19b和19c)。
圖4顯示的一套一次性袋包括本發明的病毒滅活袋1，三個連續的本發明的漏斗形袋9，其預先裝有藥用級油(沒有顯示油)，以及本發明的漏斗形袋9，其預先裝有柱層析的固定相。
所述袋用柔性管彼此連接，即，病毒滅活袋1的出口裝置6與第一漏斗形袋9的入口裝置11連接，第一袋9的出口裝置12與第二漏斗形袋9的入口裝置11連接，第二漏斗形袋9的出口裝置12與第三漏斗形袋9的入口裝置11連接，第三漏斗形袋9的出口裝置12與含有固定相的漏斗形袋9的入口裝置11連接。含有固定相的漏斗形袋9的出口裝置12被密封。
圖4中成套袋的病毒滅活袋1的入口裝置5的第一端口5a用于將生物液體轉移到所述病毒滅活袋1。通過從一個或多個收集袋轉移生物液體，生物液體可以直接匯集在第一病毒滅活袋1中。
圖5顯示的一套一次性袋包括圖1a實施方案的兩個病毒滅活袋1，三個連續的圖2a實施方案的漏斗形袋9，其預先裝有藥用級油(沒有顯示油)，以及用于收集病毒滅活的生物液體的標準血袋20。
所述袋通過柔性管彼此連接，即，第一病毒滅活袋1的出口裝置6連接第二病毒滅活袋1的入口裝置1a，第二病毒滅活袋1的出口裝置6連接第一漏斗形袋9的入口裝置11，第一袋9的出口裝置12連接第二漏斗形袋9的入口裝置11，第二漏斗形袋9的出口裝置12連接第三漏斗形袋9的入口裝置11，以及第三漏斗形袋9的出口裝置12連接標準血袋20的入口裝置21。
圖5中成套袋的第一病毒滅活袋1的入口裝置1a用于將生物液體轉移到所述病毒滅活袋1中。通過從一個或多個收集或儲存袋轉移生物液體，生物液體可以直接匯集在第一病毒滅活袋1中。
病毒滅活袋1、漏斗形袋9和標準血袋20的入口裝置1a、11、21各自包括現有技術的管夾1c、11c、21c。
病毒滅活袋1和漏斗形袋9的出口裝置6、12各自分別包括現有技術的易碎閥6a、12a。
為了更充分地描述本發明的本質及其實現方式，提供了下面非限定性的實施例。
實施例實施例1使用2％TnBP對1915ml置換血漿進行病毒滅活將來自三份大約650ml獻血的置換血漿轉移到圖1的無菌、單個2000ml病毒滅活袋中，將所述袋加熱至31℃+/-1℃。
將純三(正丁基)磷酸酯(TnBP)溶液預先填充到無菌注射器中。
接著，在30分鐘內將TnBP溶液用注射器(通過滅活袋的第二端口)緩慢加入血漿中。例如使用血小板濃縮振蕩器使滅活袋輕微晃動，直到按血漿總重量計的最終濃度達到2％。
加入TnBP溶液后，為了隔離滅活袋，將入口裝置的管熱密封。
接著，有力混合30秒，并且在例如使用血小板濃縮振蕩器或任何其它適宜的裝置的溫和攪拌下將袋保持在31℃+/-1℃4小時，確保溫和持續地混合血漿/SD混合物。
接著將血漿轉移到圖2含有100ml藥用級蓖麻油的漏斗形袋中。為此，將病毒滅活袋的出口裝置用漏斗形袋的入口裝置的針刺件刺穿，依靠重力轉移含有TnBP的血漿。
有力地晃動油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，接著為了用油萃取TnBP，在室溫下溫和晃動15分鐘。
接著為了使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離，將漏斗形袋懸掛大約30分鐘。
下層依靠重力通過出口裝置排到含有150ml藥用級蓖麻油的第二漏斗形袋中。
有力地晃動第二漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP，接著室溫下溫和晃動大約15分鐘。
然后，為了使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離，將第二漏斗形袋懸掛大約30分鐘。
下面的血漿層依靠重力通過出口裝置排入含有150ml藥用級蓖麻油的第三漏斗形袋中。用設置在第二漏斗形袋的出口裝置平面上的UV檢測器檢測相界面。
有力地晃動第三漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP，然后室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，為了使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離，將第三漏斗形袋懸掛大約30分鐘。
最后，通過重力將下面的血漿層通過出口裝置排入標準血漿儲存袋中。
各種步驟之后，測定血漿中因子VIII活性、因子IX活性和總凝結測試PT(凝血酶原時間)和APTT(激活部分促凝血酶原激酶時間)
結果顯示，經過3次油萃取后的血漿與起始血漿相比，保存了通過PT和PTT評價的血漿總凝結活性。類似的，FVIII和FIX的恢復極好。
數據也顯示含有2％TnBP的血漿，PT和PTT延長，2次油萃取后正常化，表明除去TnBP。
實施例2在31℃用2％TnBP對200ml回收血漿進行病毒滅活將來自一份大約200ml的回收血漿轉移到圖1的無菌、單個200ml病毒滅活袋中，將所述袋加熱至31℃+/-1℃。
將純三(正丁基)磷酸酯(TnBP)溶液預先填充到無菌注射器中。
接著，在30分鐘內將TnBP溶液用注射器(通過滅活袋的第二端口)緩慢加入血漿中。例如使用血小板濃縮振蕩器裝置使滅活袋輕微晃動，直到按血漿總重量計的最終濃度達到2％。
加入TnBP溶液后，為了隔離滅活袋，將入口裝置的管熱密封。
接著，有力混合30秒，并且在例如使用血小板濃縮振蕩器裝置或任何其它適宜的裝置的溫和攪拌下，將袋保持在31℃+/-1℃4小時，確保溫和持續地混合血漿/SD混合物。
接著將血漿轉移到圖2含有10ml藥用級蓖麻油的漏斗形袋中。為此，將病毒滅活袋的出口裝置用漏斗袋的入口裝置的針刺件刺穿，依靠重力轉移含有TnBP的血漿。
有力地晃動油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，接著為了用油萃取TnBP，在室溫下溫和晃動15分鐘。
接著懸掛漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離。
下層依靠重力通過出口裝置排到含有10ml藥用級蓖麻油的第二漏斗形袋中。
有力地晃動第二漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP，接著室溫下溫和晃動15分鐘。
然后懸掛第二漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離。
下面的血漿層依靠重力通過出口裝置排入含有10ml藥用級蓖麻油的第三漏斗形袋中。用肉眼觀察相界面。
有力地晃動第三漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP，然后在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后懸掛第三漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離。
最后，通過重力將下面的血漿層通過出口裝置排入標準血漿儲存袋中。
每次萃取步驟后，測量血漿中的TnBP
結果顯示，經過3次油萃取后在最終的血漿中沒有檢測到TnBP(＜10ppm)。
在所有的步驟中也檢測PT、APTT、INR(國際標準比率)以及FVIII和FIX生理機能
結果顯示，3次油萃取后，凝結活性得到良好的恢復，所有分析值都正常化。
實施例3用2％TnBP進行病毒滅活的200ml置換血漿中的蛋白質C、蛋白質S、α2抗纖溶酶和Von Willebrand因子瑞斯托菌素輔因子活性的恢復將來自一份大約200ml的獻血的置換血漿轉移到圖1的無菌、單個200ml病毒滅活袋中，將所述袋加熱至31℃+/-1℃。
將純三(正丁基)磷酸酯(TnBP)溶液預先填充到無菌注射器中。
接著，在30分鐘內用注射器(通過滅活袋的第二端口)將TnBP溶液緩慢加入血漿中。例如使用該袋的血小板濃縮振蕩器裝置使滅活袋輕微晃動，直到按血漿總重量計的最終濃度達到2％。
加入TnBP溶液后，為了隔離滅活袋，將入口裝置的管熱密封。
接著，有力混合30秒，并且在例如使用血小板濃縮振蕩器裝置或任何其它適宜的裝置的溫和攪拌下，將袋保持在31℃+/-1℃4小時，確保溫和持續地混合血漿/SD混合物。
接著將血漿轉移到圖2含有10ml藥用級蓖麻油的漏斗形袋中。為此，將病毒滅活袋的出口裝置用漏斗形袋的入口裝置的針刺件刺穿，依靠重力轉移含有TnBP的血漿。
有力地晃動油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，接著為了用油萃取TnBP，在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，為了使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離，將漏斗形袋懸掛大約30分鐘。
下層依靠重力通過出口裝置排到含有10ml藥用級蓖麻油的第二漏斗形袋中。
有力地晃動第二漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP，接著在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛第二漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離。
下面的血漿層依靠重力通過出口裝置排到含有10ml藥用級蓖麻油的第三漏斗形袋中。用肉眼觀察相界面。
有力地晃動第三漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP，接著在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛第三漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離。
最后，通過重力將下面的血漿層通過出口裝置排入標準血漿儲存袋中。
在所有步驟中測定蛋白質C、蛋白質S、α2抗纖溶酶和VonWillebrand因子瑞斯托菌素輔因子活性值
結果顯示3次油萃取后，實現生理功能的良好恢復。
實施例4用1％TnBP和1％Triton X-45對200ml回收血漿進行病毒滅活將來自一份大約200ml獻血的回收血漿轉移到圖1的無菌、單個200ml病毒滅活袋中，將所述袋加熱至31℃+/-1℃。
將1∶1的純三(正丁基)磷酸酯(TnBP)和Triton X-45溶液預先填充到無菌注射器中。
接著，在30分鐘內用注射器(通過滅活袋的第二端口)將TnBP/Triton X-45溶液緩慢加入血漿中。例如使用血小板濃縮振蕩器裝置使滅活袋輕微晃動，直到按血漿總重量計的最終濃度達到1％TnBP和1％Triton X-45。
加入TnBP/Triton X-45溶液后，為了隔離滅活袋，將入口裝置的管熱密封。
接著，有力混合30秒，并且在例如使用血小板濃縮振蕩器裝置或任何其它適宜的裝置的溫和攪拌下，將袋保持在31℃+/-1℃4小時，確保溫和持續地混合血漿/SD混合物。
接著將血漿轉移到圖2含有15ml(即，相對于血漿重量的7.5wt％)藥用級蓖麻油的漏斗形袋中。為此，將病毒滅活袋的出口裝置用漏斗形袋的入口裝置的針刺件刺穿，依靠重力轉移含有TnBP和Triton X-45的血漿。
有力地晃動油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，接著為了用油萃取TnBP和Triton X-45，在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP和TritonX-45的油相分離。
下層依靠重力通過出口裝置排到含有15ml藥用級蓖麻油的第二漏斗形袋中。用肉眼觀察相界面。
有力地晃動第二漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP和Triton X-45，接著在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛第二漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP和Triton X-45的油相分離。
下面的血漿層依靠重力通過出口裝置排到含有15ml藥用級蓖麻油的第三漏斗形袋中。
有力地晃動第三漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP和Triron X-45，接著在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛第三漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP和Triron X-45的油相分離。
最后，通過重力將下面的血漿層通過出口裝置排入標準血漿儲存袋中。
每次萃取步驟后，測量血漿中TnBP和Triron X-45的含量
結果顯示，分別經過2次或3次油萃取后，在最終的血漿中沒有檢測到TnBP和Triton X-45(＜10ppm)。
在所有步驟中也檢測PT、PTT、INR(國際標準比率)以及FVIII和FIX生理功能
結果顯示，3次油萃取后凝結活性得到良好的恢復，所有分析的值都正常。
實施例5用1％TnBP和1％Triron X-100對200ml回收血漿進行病毒滅活將來自一份大約200ml獻血的回收血漿轉移到圖1的無菌、單個200ml病毒滅活袋中，將所述袋加熱至31℃+/-1℃。
將1∶1的純三(正丁基)磷酸酯(TnBP)和Triton X-100溶液預先填充到無菌注射器中。
接著，在30分鐘內用注射器(通過滅活袋的第二端口)將TnBP/Triton X-100溶液緩慢加入血漿中。例如使用血小板濃縮物振蕩器裝置使滅活袋輕微晃動，直到按血漿總重量計的最終濃度達到1％TnBP和1％Triton X-100。
加入TnBP/Triton X-100溶液后，為了隔離滅活袋，將入口裝置的管熱密封。
接著，有力混合30秒，并且在例如使用血小板濃縮振蕩器裝置或任何其它適宜的裝置溫和攪拌下，將袋保持在31℃+/-1℃4小時，確保溫和持續地混合血漿/SD混合物。
接著將血漿轉移到圖2含有15ml(即，相對于血漿重量的7.5wt％)藥用級蓖麻油的漏斗形袋中。為此，將病毒滅活袋的出口裝置用漏斗形袋的入口裝置的針刺件刺穿，依靠重力轉移含有TnBP和TritonX-100的血漿。
有力地晃動油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，接著為了用油萃取TnBP和少量的Triton X-100，在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP和TritonX-100的油相分離。
下層依靠重力通過出口裝置排入含有15ml藥用級蓖麻油的第二漏斗形袋中。用肉眼觀察相界面。
有力地晃動第二漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP和少量的Triton X-100，接著在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛第二漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP和少量Triton X-100的油相分離。
下面的血漿層依靠重力通過出口裝置排入含有15ml藥用級蓖麻油的第三漏斗形袋中。
有力地晃動第三漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，接著為了進一步用油萃取TnBP和少量的Triron X-100，在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛第三漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP和少量Triron X-100的油相分離。
在第三次油萃取之后，將血漿轉移到離心袋中，在20℃下在血庫離心機上以3,900rmp離心30分鐘。
接著，將血漿在C18層析柱上經柱層析，以除去大量的TritonX-100。
每次萃取步驟之后以及柱層析之后測量血漿中TnBP和TritonX-100的含量。
結果顯示經過3次萃取、離心和C18層析之后，最終的血漿中沒有檢測到TnBP和Triton X-100(＜10ppm)。
在所有的步驟中也檢測PT、PTT、INR(國際標準比率)以及FVIII和FIX生理功能。
結果顯示，經過3次油萃取后凝結活性得到良好的恢復，所有測定值都正常化。
實施例6在37℃用2％TnBP對200ml回收血漿進行病毒滅活將來自一份約200ml獻血的回收血漿轉移到圖1的無菌、單個200ml病毒滅活袋中，將所述袋加熱至37℃+/-1℃。
將純三(正丁基)磷酸酯(TnBP)溶液預先填充到無菌注射器中。
接著，在30分鐘內將TnBP溶液用注射器(通過滅活袋的第二端口)緩慢加入血漿中。例如使用血小板濃縮振蕩器裝置使滅活袋輕微晃動，直到按血漿總重量計的最終濃度達到2％。
加入TnBP溶液后，為了隔離滅活袋，將入口裝置的管熱密封。
接著，有力混合30秒，并且在例如使用血小板濃縮振蕩器裝置或任何其它適合的裝置溫和攪拌以確保溫和持續地混合血漿/SD混合物的條件下，將袋保持在37℃+/-1℃4小時。
接著將血漿轉移到圖2含有10ml藥用級蓖麻油的漏斗形袋中。為此，將病毒滅活袋的出口裝置用漏斗形袋的入口裝置的針刺件刺穿，依靠重力轉移含有TnBP的血漿。
有力地晃動油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，接著為了用油萃取TnBP，在室溫下溫和晃動15分鐘。
接著為了使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離，將漏斗形袋懸掛大約30分鐘。
下層依靠重力通過出口裝置排到含有15ml藥用級蓖麻油的第二漏斗形袋中。用設置在第一漏斗形袋出口裝置的水平面上的UV檢測器檢測相界面。
有力地晃動第二漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP，接著室溫下溫和晃動大約15分鐘。
然后，懸掛第二漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離。
下面的血漿層依靠重力通過出口裝置排入含有15ml藥用級蓖麻油的第三漏斗形袋中。
有力地晃動第三漏斗形袋內的油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP，接著在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛第三漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP的油相分離。
第三次油萃取之后，血漿在20℃以3,700rmp澄清離心(clarifyingcentrifugation)30分鐘。
每次萃取步驟后，測量血漿中的TnBP。
結果顯示，經過3次油萃取后在最終的血漿中沒有檢測到TnBP(＜10ppm)。
在所有的步驟中也檢測PT、APTT、INR(國際標準比率)以及FVIII和FIX生理功能。
結果顯示，經過3次油萃取后凝結活性得到良好的恢復，所有測定值都正常化。
實施例7用1％TnBP和1％Triton X-45對200ml無冷凝蛋白血漿進行病毒滅活根據實施例4的方法用1％TnBP和1％Triton X-45處理200ml無冷凝蛋白血漿。
每次萃取步驟后，測量無冷凝蛋白血漿中TnBP和Triton X-45含量。
結果顯示，經過3次油萃取后在最終的無冷凝蛋白血漿中檢測不到TnBP和Triton X-45(＜10ppm)。
在所有的步驟中也檢測PT、APTT、INR(國際標準比率)以及FVIII和FIX。
結果顯示3次油萃取后凝結活性得到良好的恢復，所有測定值都正常化。由于無冷凝蛋白血漿某些凝結因子的減少，PT和APTT的凝固時間比血漿的長是正常的。
實施例8用1％TnBP和1％Triton X-100對200ml無冷凝蛋白血漿進行病毒滅活。
根據實施例5的方法用1％TnBP和1％Triton X-100對200ml無冷凝蛋白血漿進行處理。
將從捐獻的一份大約200ml回收血漿中得到的無冷凝蛋白血漿轉移到圖1的無菌、單個200ml病毒滅活袋中，將所述袋加熱至31℃+/-1℃。
將1∶1的純三(正丁基)磷酸酯(TnBP)和Triton X-100溶液預先填充到無菌注射器中。
接著，在30分鐘內用注射器(通過滅活袋的第二端口)將TnBP/Triton X-100溶液緩慢加入無冷凝蛋白血漿中。例如使用血小板濃縮振蕩器裝置使滅活袋輕微晃動，直到按無冷凝蛋白血漿總重量計的最終濃度達到1％TnBP和1％Triton X-100。
加入TnBP/Triton X-100溶液后，為了隔離滅活袋，將入口裝置的管熱密封。
接著，有力混合30秒，并且在例如使用血小板濃縮振蕩器裝置或任何其它適合的裝置溫和攪拌以確保溫和持續地混合血漿/SD混合物的條件下，將袋保持在31℃+/-1℃4小時。
接著將無冷凝蛋白血漿轉移到圖2含有15ml(即，相對于無冷凝蛋白血漿重量的7.5wt％)藥用級蓖麻油的漏斗形袋中。為此，將病毒滅活袋的出口裝置用漏斗形袋的入口裝置的針刺件刺穿，依靠重力轉移含有TnBP和Triton X-100的無冷凝蛋白血漿。
有力地晃動油/血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了用油萃取TnBP和少量的Triton X-100，接著在室溫下溫和晃動15分鐘。
接著，懸掛漏斗形袋，以使下層的無冷凝蛋白血漿相與上層含TnBP和少量Triton X-100的油相分離。
下層依靠重力通過出口裝置排入含有15ml藥用級蓖麻油的第二漏斗形袋中。用肉眼檢測相界面。
有力地晃動第二漏斗形袋內的油/無冷凝蛋白血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP和少量的Triton X-100，接著在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛第二漏斗形袋，以使下層無冷凝蛋白血漿相與上層含TnBP和少量Triton X-100的油相分離。
下面的血漿層依靠重力通過出口裝置排入含有15ml藥用級蓖麻油的第三漏斗形袋中。
有力地晃動第三漏斗形袋內的油/無冷凝蛋白血漿混合物，直到形成乳液大約1分鐘，為了進一步用油萃取TnBP和少量的Triron X-100，接著在室溫下溫和晃動15分鐘。
然后，懸掛第三漏斗形袋，以使下層的血漿相與上層含TnBP和少量Triron X-100的油相分離。
在第三次油萃取之后，將血漿轉移到離心袋中，20℃下在血庫離心機中以3,900rmp離心30分鐘。
接著，將血漿在SDR層析柱上經柱層析以除去大量的TritonX-100。
每次萃取步驟后以及柱層析后，測定血漿中的TnBP和TritonX-100的含量每次萃取步驟后以及SDR上柱層析后，測量無冷凝蛋白血漿中的TnBP和Triton X-100的含量
結果顯示，分別經過3次油萃取和柱層析后，在最終的無冷凝蛋白血漿中沒有檢測到TnBP和Triton X-100(＜10ppm)。
在所有的步驟中也檢測PT、APTT、INR(國際標準比率)、FVII和FIX
結果顯示3次油萃取后凝結活性(因子VII和因子IX)得到良好的恢復，SDR層析步驟后所有測定值都正常化。
實施例9在37℃用2％的TnBP對200ml無冷凝蛋白血漿進行病毒滅活根據實施例6的方法用2％TnBP處理200ml無冷凝蛋白血漿。
每次萃取步驟后，測定無冷凝蛋白血漿中的TnBP。
結果顯示，經過3次油萃取后在最終的無冷凝蛋白血漿中檢測不到TnBP(＜10ppm)。
在所有的步驟中也測定PT、APTT、INR(國際標準比率)以及FVIII和FIX生理功能
結果顯示3次油萃取后因子VII和因子IX的凝結活性得到良好恢復，所有測定值都正常化。
實施例10用1％TnBP和1％Triton X-45對150ml冷凝蛋白質進行病毒滅活根據實施例4的方法用1％TnBP和1％Triton X-45處理150ml冷凝蛋白質。
每次萃取步驟后，測量冷凝蛋白質中TnBP和Triton X-45的含量。
結果顯示，經過3次油萃取后在最終的冷凝蛋白質中TnBP和Triton X-45小于10ppm。
在所有的步驟中也檢測PT、FVIII、纖維蛋白原，von willebrand因子和FIX的生理功能
結果顯示3次油萃取后因子VIII、纖維蛋白原以及von Willebrand因子的活性得到良好的恢復。
實施例11用1％TnBP和1％Triton X-100對150ml冷凝蛋白質進行病毒滅活根據實施例5的方法用1％TnBP和1％Triton X-100處理150ml冷凝蛋白質。
每次萃取步驟后以及柱層析后，測量冷凝蛋白質中TnBP和TritonX-100的含量
結果顯示，分別經過3次油萃取和柱層析后，在最終的冷凝蛋白質中檢測不到TnBP和Triton X-100(＜10ppm)。
在所有步驟中也檢測FVIII、纖維蛋白原和VWF的生理功能
結果顯示經過3次油萃取后凝結活性得到的良好的恢復。實施例1237℃下用2％TnBP對150ml冷凝蛋白質進行病毒滅活根據實施例6的方法用2％TnBP處理150ml冷凝蛋白質。
每次萃取步驟后，測量冷凝蛋白質中的TnBP。
結果顯示，經過3次油萃取后在最終的冷凝蛋白質中檢測不到TnBP(＜10ppm)。
在所有的步驟中也檢測FVIII、纖維蛋白原和VWF的生理功能
結果顯示經過3次油萃取后凝結活性得到良好的恢復。
權利要求
1.一次性袋成套系統，包括至少一個病毒滅活袋(1)，以及至少一個漏斗形袋(9)和/或柱層析袋(15)，所述病毒滅活袋包括內室(4)以及均與所述內室(4)連接的入口裝置(5)和出口裝置(6)，所述袋(1)特征在于所述內室(4)具有卵形的橫截面，所述不同的袋彼此連接。
2.如權利要求1所述的一次性袋成套系統，特征在于其包括兩個病毒滅活袋(1)。
3.如權利要求1或2所述的一次性袋成套系統，特征在于所述內室(4)的橫截面為橢圓形。
4.如權利要求1至3中任一項所述的一次性袋成套系統，特征在于所述病毒滅活袋(1)的入口裝置(5)和出口裝置(6)設置在所述袋(1)的相對邊上。
5.如權利要求3或4中任一項所述的一次性袋成套系統，特征在于所述病毒滅活袋(1)的內室(4)具有有第一軸(a)和第二軸(b)的橢圓形縱截面，所述第一軸(a)與所述袋(1)的水平邊(2)平行，而所述第二軸(b)與所述袋(1)的垂直邊(3)平行，且比率a/b大于1。
6.如權利要求1至5中任一項所述的一次性袋成套系統，特征在于所述內室(4)的體積在50ml至20000ml的范圍內，優選在50ml至5000ml范圍內，更優選100ml至3000ml，甚至更優選200ml至2000ml。
7.如權利要求1至6中任一項所述的一次性袋成套系統，特征在于所述漏斗形袋(9)包括內室(10)以及均與所述內室(10)連接的入口裝置(11)和出口裝置(12)，所述內室(10)具有與所述出口裝置(12)相接的漏斗形的下部，所述內室(10)含有分離試劑。
8.如權利要求1至7中任一項所述的一次性袋成套系統，特征在于袋(1、9、15)由醫用/藥用級聚氯乙烯制成。
9.如權利要求1至8中任一項所述的一次性袋成套系統，特征在于其包括三個連續的其中所述分離試劑為藥用級油的漏斗形袋(9)，以及一個其中所述分離試劑為用于柱層析的固定相的額外的漏斗形袋(9)。
10.如權利要求1至9中任一項所述的一次性袋成套系統，特征在于所述袋以柔性管連接，并且所述病毒滅活袋(1)的出口裝置(6)連接第一漏斗形袋(9)的入口裝置(11)、所述第一袋(9)的出口裝置(12)連接第二漏斗形袋(9)的入口裝置(11)，所述第二漏斗形袋(9)的出口裝置(12)連接第三漏斗形袋(9)的入口裝置(11)，所述第三漏斗形袋(9)的出口裝置(12)連接含有所述固定相的漏斗形袋(9)的入口裝置(11)。
11.如權利要求1至10中任一項所述的一次性袋成套系統，特征在于所述袋以確保待處理的生物液體無菌的方式連接。
12.一次性病毒滅活袋(1)，包括內室(4)和均與所述內室(6)連接的入口裝置(5)和出口裝置(6)，所述袋(1)特征在于所述內室(4)具有卵形的橫截面，且所述入口裝置(5)和所述出口裝置(6)設置在所述袋(1)的相對邊上。
13.如權利要求12所述的一次性病毒滅活袋(1)，特征在于所述內室(4)具有有第一軸(a)和第二軸(b)的橢圓形橫截面，所述第一軸(a)與所述袋(1)的水平邊(2)平行，而所述第二軸(b)與所述袋(1)的垂直邊(3)平行，且比率a/b大于1。
14.一次性漏斗形袋(9)，包括內室(10)和均與所述內室(10)連接的入口裝置(11)和出口裝置(12)，所述內室(10)具有與出口裝置(12)相接的漏斗形的下部，特征在于所述內室(10)含有分離試劑。
15.對生物液體進行病毒滅活的方法，包括以下步驟a.在權利要求1所述的或權利要求12所述的病毒滅活袋中對生物液體進行病毒滅活，以及任選地b.在權利要求14所述的含有藥用級油的漏斗形袋內以油萃取所述生物液體，和/或c.對所述生物液體進行層析分離。
16.如權利要求15所述的病毒滅活方法，特征在于所述生物液體選自哺乳動物血液、血漿、血清、血漿組分、來自血液組分的沉淀物和來自血液分級分離的上清液、貧血小板血漿、無冷凝蛋白血漿。
17.如權利要求15或16所述的病毒滅活方法，特征在于所述病毒滅活法選自S/D(溶劑/除垢劑)法、單獨溶劑法、單獨除垢劑法、亞甲基藍處理、核黃素處理、酸性pH處理或辛酸處理。
18.如權利要求17所述的病毒滅活方法，特征在于所述病毒滅活法為S/D(溶劑/除垢劑)法或單獨溶劑法。
19.如權利要求18所述的病毒滅活方法，特征在于所述溶劑選自三-(正丁基)磷酸酯、三-(叔丁基)磷酸酯、三-(正己基)磷酸酯、三-(2-乙基己基)磷酸酯、三-(正癸基)磷酸酯、二-(正丁基)磷酸酯、二-(叔丁基)磷酸酯、二-(正己基)磷酸酯、二-(2-乙基己基)磷酸酯、二-(正癸基)磷酸酯、乙基-二(正丁基)磷酸酯或其混合物。
20.如權利要求18或19所述的病毒滅活方法，特征在于所述除垢劑選自包括脂肪酸的聚氧乙烯衍生物、山梨醇酐的偏酯、非離子的油溶性水除垢劑、去氧膽酸鈉和磺基甜菜堿或其混合物的組。
21.如權利要求18或19所述的病毒滅活方法，特征在于步驟a在4至8小時期間完成，優選4至6小時，優選約4小時。
22.如權利要求18至20中任一項所述的病毒滅活方法，特征在于步驟b被重復1至3次。
23.如權利要求18至21中任一項所述的病毒滅活方法，特征在于步驟b中的所述藥用級油選自蓖麻油、大豆油、葵花油、棉籽油、三油酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆寇酸甘油酯及其組合。
24.如權利要求18至22中任一項所述的病毒滅活方法，特征在于，步驟b中所述藥用級油的用量基于所述生物液體的重量為2％至20％重量比，優選為從5％至15％重量比，更優選為從5％到10％重量比。
25.如權利要求18至23中任一項所述的病毒滅活方法，特征在于所述生物液體選自血漿、無冷凝蛋白血漿和冷凝蛋白質，所述病毒滅活方法為單獨溶劑法，所述溶劑為三-(正丁基)磷酸酯，并且步驟b進行3次。
26.如權利要求18至23中任一項所述的病毒滅活方法，特征在于所述生物液體選自血漿、無冷凝蛋白血漿和冷凝蛋白質，所述病毒滅活方法為S/D法，溶劑為三-(正丁基)磷酸酯，除垢劑為4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇(t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)XOH，X≈5)，并且步驟b進行3次。
27.如權利要求18至23中任一項所述的病毒滅活方法，特征在于所述生物液體選自血漿、無冷凝蛋白血漿和冷凝蛋白質，所述病毒滅活方法為S/D法，溶劑為三-(正丁基)磷酸酯，除垢劑為聚氧乙烯(9-10)對叔辛基苯酚(t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)XOH，X＝9-10)，步驟b進行3次并且在步驟b之后進行步驟c。
28.權利要求1至11中任一項所述的一次性成套袋系統的用途，其用于對生物液體進行病毒滅活，并具有極好的蛋白質恢復。
全文摘要
本發明涉及一次性袋成套系統，其包括至少一個病毒滅活袋(1)，以及至少一個漏斗形袋(9)和/或柱層析袋(15)，所述病毒滅活袋包括內室(4)和均與內室(4)連接的入口裝置(5)和出口裝置(6)，袋(1)的特征在于內室(4)具有卵形的縱截面，不同的袋彼此連接。本發明還涉及所述一次性袋成套系統的用途，其用于對生物液體進行病毒滅活，且具有極好的蛋白質恢復。
文檔編號A61M1/02GK1953728SQ200680000200
公開日2007年4月25日 申請日期2006年2月1日 優先權日2005年2月1日
發明者蒂爾瑞·伯爾諾弗, 馬格迪·艾爾-埃吉貝, 哈迪阿方斯·古布蘭, 米爾亞納·拉多塞維奇 申請人:診斷研究基金會