專利名稱::旋覆花總多糖制備、及其通便、排毒的用途的制作方法
技術領域:
:本發明涉及旋覆花植物總多糖的制備方法,及其通便、排毒的用途。技術背景旋覆花(包括/nw/flysj//2/ca和Znw7a6r/fa/in/caJ屬菊科植物。具有消痰、下氣、軟堅和行水之功效。文獻報道旋覆花含有倍半萜及其內酯、二薛、三萜和黃酮類成分(天然產物研究和開發,2005,17(6):804-807;黃泰康,常用中藥成分與藥理手冊,p1608,1994)。已經發現,旋覆花(//iz/a》/7//z/ca)水提物具有顯著降血糖和降血脂作用(5/o7.^/7/,2006,29(3):455—459),并申請發明專利(專利申請號200510069547.8)。
發明內容本發明人采用水或含有機溶劑的水溶液提取旋覆花(包括/力Wa力;n'/z/ca和//7i//fl6W^/7//ca)植物(包括花序、莖和葉)獲得水提物,再經有機溶劑沉淀獲得旋覆花總多糖。經研究發現旋覆花總多糖無毒,具有明顯潤腸、通便、排毒的功效。在上述發現的基礎上完成了本發明。因此,在第一方面,本發明涉及制備旋覆花總多糖的方法,包括如下步驟(a)含水溶劑提取旋復花植物材料,獲得旋復花的水提取物,(b)將所得提取物用有機溶劑沉淀。在一個優選實施方案中,所述旋復花植物材料是旋復花植物的地上部分,優選花序。在具體實施方案中,步驟(a)所述含水溶劑是水或者舍有有機溶劑的水溶液,其中有機溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮或正丁醇或它們的任何組合。在另一個具體實施方案中,步驟(b)中沉淀旋覆花總多糖的有機溶劑可以是曱醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合。在一些實施方案中,在用含水溶劑提取旋復花植物材料之前用有機溶劑如乙醇如95%的乙醇提取該旋復花植物材料。不限于理論,先用有機溶劑提取可以去除旋覆花植物中脂溶性成分。在另一實施方案中,本發明的方法還包括將步驟(b)的產物透析、離心和濃縮干燥。在一個具體實施方案中,本發明的方法包括將旋覆花植物材料粉碎,用五倍重量以上的水浸泡1-2小時,常壓煎煮0.5-2小時,過濾,濾液用有機溶劑(例如曱醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合)沉淀24-48小時后離心,沉淀用2-10倍重量水溶解、離心,上清液透析,透析時間大于48小時(例如48-72小時),透析后離心,上清液濃縮干燥獲得旋覆花總多糖。另一方面,本發明還涉及可通過本發明上述方法獲得的旋覆花總多糖。另一方面,本發明還涉及旋復花總多糖,其特征在于所述總多糖具有附圖l或2的特征。另一方面,本發明還涉及用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的組合物,其含有本發明的旋復花總多糖,任選地,還含有食用或藥用栽體或賦形劑。優選地,所述組合物是藥物組合物、保健組合物、食品組合物、或者飲料組合物。另一方面,本發明還涉及本發明的旋復花總多糖或者含有旋復花總多糖的組合物在制備用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的產品中的用途。其中優選的是,所述產品是藥物、保健品、食品、或者飲料。本發明旋覆花植物總多糖具有潤腸、通便和排毒之用途。實驗表明,旋覆花總多糖能明顯促進胃腸蠕動、減少食物在胃腸消化和吸收時間,加強毒素和糞便的排出,減少毒素吸收。旋覆花植物總多糖可用于通便、排毒的用途。圖1為實施例2制備的旋復花總多糖DEAE-纖維素柱層析圖,見實施例3。--曲線表示收集的洗脫液用苯酚-硫酸法顯色后,在490nm波長處檢測含有糖的吸收峰;--曲線表示收集的洗脫液在280nm波長處檢測的吸收峰。其中A處代表用水進行洗脫得到的吸收峰;Bl和B2代表用0.25mol/L碳酸氫鈉進行洗脫得到的吸收峰;C代表用0.50mol/L碳酸氫鈉進行洗脫得到的吸收峰;D代表用0.1Omol/L氫氧化鈉進行洗脫得到的吸收峰。圖2為圖1的局部放大圖。具體實施方案根據本發明,術語"總多糖"是指寡糖,多糖,及糖復合物。根據本發明,術語"糖復合物"是指含有糖成分的復合分子,如糖和肽鏈共價結合形成的糖蛋白、蛋白聚糖和肽聚糖,糖與脂類共價結合形成的糖脂和脂多糖等。根據本發明,術語"產品"包括功能性食品,保健品或藥品。本發明旋覆花總多糖通常可以在采用含水溶劑的水溶液提取旋覆(復)花(包括J/w/aj'flp/zn'ca和//7i//fl6W"/7/z/ca)植物(包括花序、莖和葉)獲得水提物后,再經有機溶劑沉淀獲得。旋復花水提物可通過如下方法獲得。典型地,制備旋復花的水提取物的方法包括獲得旋復花植物材料;用含水溶劑提取旋復花植物材料,獲得旋復花的水提取物。可通過煎煮法、浸漬法、滲漉法、或水蒸氣蒸鎦法等提取(或者浸出)旋復花植物材料。在一個具體實施方案中,用含水溶劑提取旋復花植物材料包括水溶劑浸泡旋復花植物材料;(2)分離液相和固相;(3)任選地,重復步驟(1)和(2)—次或多次(例如重復l-數次、l-5次、l-2次、2-5次、3次、4次);(4)任選地,合并液相;和(5)任選地,將由步驟(2)或者步驟(4)得到的液相濃縮。在步驟(l)中,所述適當條件可通過試驗確定。溫度通常為大約0-100r,例如大約0-80X:,優選大約0-60。C,例如大約4-5(TC,如大約15-40X:、大約20-30匸,方便的是大約室溫,也可以是大約60-100t;。壓力通常為大約0.1個大氣壓-5個大氣壓,例如大約0.5個大氣壓-3個大氣壓,例如大約1個大氣壓,方便的是大約常壓。漫泡時間通常是至少大約1小時,長至例如10天,例如大約6小時-5天,大約12-96小時,例如大約24、48、72小時,或者其中的任何時間,優選不短于24小時。旋復花植物材料與含水溶劑的重量體積比通常為大約1:l到大約1:100(千克/升),例如大約1:l到大約1:50、大約1:2到大約1:40,優選大約1:5到大約1:20,更優選大約1:5到大約1:15(千克/升)。優選在浸泡時攪拌,例如多次攪拌或者連續攪拌。步驟(2)中的分離可通過本領域已知的任何方法來實現,包括但不限于,過濾、離心、自然沉降等。步驟(5)的濃縮可通過本領域已知的任何方法來實現。這種濃縮沒有特別的限制,前提是不破壞活性成分,例如,該濃縮可以是減壓濃縮。溫度可以在大約or到大約801C,例如大約室溫到大約80X:,優選不超過大約60r,例如大約01C到大約60X:,例如大約50-601C,如大約55t:。步驟(5)的濃縮也可以是冷凍干燥。一種常見的濃縮方法是蒸發,例如常壓蒸發、減壓蒸發、薄膜蒸發等。濃縮之后可以進行干燥,例如,常壓干燥、減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等。干燥不是必需的步驟,但在某些實施方案中是優選的。在有些實施方案中,濃縮步驟也可以省略。例浸出液進行后續步驟(沉淀等)。在本發明方法中,所述旋復花植物可以是""/a力pZ/2/ca或者^r/ra/2//ca或者它們的組合。在本發明方法中,所述旋復花植物材料可以是旋復花植物全株或其任何部分,例如其器官、組織、或細胞,包括花、果實、種子、莖、葉、根,優選是旋復花植物的地上部分,例如花序。旋復花植物材料可以是藥材,也可以是生藥。旋復花植物材料可以是組織培養物、細胞培養物。旋復花植物可以是天然的或者轉基因的。旋復花植物材料可以是干燥的或者新鮮的。在本發明的提取方法中,所述旋復花植物材料可以是經過預先處理的。這些處理包括物理處理、化學處理、生物處理等。例如,旋復花植物材料可以預先進行簡單洗滌、粉碎。在一個實施方案中,在用含水溶劑提取旋復花植物材料之前可以預先用有機溶劑提取(例如簡單地提取)。有機溶劑包括但不限于石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮或正丁醇或它們的任何組合等,如乙醇如95%的乙醇。在本發明中,所述"含水溶劑"是任何含水的溶劑,它可以是水或者含有有機溶劑的水溶液;其中有機溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮或正丁醇或它們的任何組合。水可以是例如蒸餾水、離子交換水、或者自來水。含水溶劑還可以是添加適當其它物質的提取用水。其它物質可以是例如有機溶刑、緩沖劑等。優選地,所述含水溶劑是水或者含有有機溶劑的水溶液。含水溶劑中水的含量(體積比)可以是例如至少大約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或者更高,優選至少大約10%,更優選至少大約20%、50%或者更多。在一個具體實施方案中,本發明旋復(覆)花植物水提取物的制備方法是將旋復(覆)花植物的地上部分在常溫、常壓下,用水或含有機溶劑的水溶液浸提獲得旋復(覆)花提取浸骨。生藥旋復(覆)花與漫泡用水或含有機溶劑的水溶液的重量體積比推薦為1:5-15(千克/升)。浸泡時間推薦大于24小時,浸泡溫度推薦ox:-60匸。所用有機溶劑包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、丙酮及正丁醇。濃縮可以是將萃取液減壓濃縮,溫度推薦等于或低于60'C進行。在另一個具體實施方案中,本發明旋復(覆)花植物水提取物的制備方法是將旋覆花植物材料粉碎,用五倍重量以上的水浸泡l-2小時,常壓煎煮O.5-2小時,過濾,獲得濾液用于沉淀總多糖。獲得旋覆花水提物后,再經有機溶劑沉淀獲得總多糖。沉淀旋覆花總多糖的有機溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合。一個例子是使用有機溶劑(例如95%乙醇或者無水乙醇),使得終濃度為例如60%-95%,例如70%-90%,例如80%或者85%(例如80%或者85%乙醇)。沉淀時間為例如至少12小時,例如至少24小時,例如12-48小時。沉淀的條件可以通過常規實驗來確定,以獲得總多糖為準。本發明的旋覆花總多糖制備方法還包括將步驟(b)的產物透析、離心和濃縮干燥。例如,將(b)的沉淀用2-10倍重量水溶解、離心,上清液透析,透析時間通常大于48小時(例如48-72小時),透析后離心,上清液濃縮干燥獲得旋覆花總多糖。在一個具體實施方案中,本發明的旋覆花總多糖制備方法包括將旋覆花植物材料粉碎,用五倍重量以上的水浸泡1—2小時,常壓煎煮O.5-2小時,過濾,濾液用有機溶劑(例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合)沉淀24-48小時后離心,沉淀用2-10倍重量水溶解、離心,上清液透析,透析時間大于48小時(例如48-72小時),透析后離心,上清液濃縮千燥獲得旋覆花總多糖。所得總多糖可以進一步配制成目的組合物,如藥物組合物、保健組合物、食品組合物、或者飲料組合物。在另一方面,本發明涉及含有本發明旋復花水總多糖的組合物。優選地,該組合物還含有可食用或者藥用賦形刑或者栽體。在具體實施方案中,所述組合物是藥物組合物、保健組合物、食品組合物、或者飲料組合物。將本發明旋復花總多糖配制成目的組合物的方法是本領域已知的。根據不同的需要,本發明所屬領域技術人員可以選擇適當的添加物、配制方法、劑型、單位劑量等。當本發明組合物是藥物組合物時,可以含有適當的藥用賦形劑、載體或者稀釋劑。可以采用制藥領域公知的技術進行制劑。本發明藥物組合物可以采用多種劑型,這往往取決于給藥途徑。例如,本發明旋復花總多糖可用于制備治療糖尿病和高血脂的藥品,包括口服藥和腸胃外給藥用的制劑,如注射劑。本發明藥物組合物可以通過多種途徑給藥,例如口服、腸胃外給藥等。給藥方案和劑量取決于多種因素,如給藥途徑、患者健康狀況等,并且可由醫生確定。劑量范圍可以由本領域技術人員通過常規實驗確定。本發明藥物組合物可以用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥。另一方面,本發明還涉及旋復花植物材料或者其提取物(優選總多糖)或者含有這種提取物的組合物在制備用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的產品中的用途。其中優選的是,所述產品是藥物、保健品、食品、或者飲料。另一方面,本發明涉及一種潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的方法,包括向患者給予旋復花植物材料或者其提取物(優選總多糖)或者含有這種提取物的組合物或者其它由旋復花植物材料加工后的產ff口o"患者"包括任何動物,優選哺乳動物,特別是寵物、飼養動物。在一個優選實施方案這,患者是人。本發明的旋復花植物材料或者其提取物(優選總多糖)或者含有這種提取物的組合物或者其它由旋復花植物材料加工后的產品的用途不僅包括治療,也包括預防例如預防便秘。實施例下面的實施例用于進一步說明本發明,但其不意味著對本發明有任何限制。實施例1旋覆花1公斤用10升水室溫浸泡48小時,過濾。殘渣再用5升水繼續浸泡24小時,過濾,合并濾液,60X:減壓濃縮至2-4升。然后用95%的乙醇沉淀,乙醇終濃度為80%,醇沉24小時。離心,沉淀用2.5升水溶解,離心,無離子水透析48-72小時。60t:減壓濃縮后冷凍干燥,即獲得旋覆花總多糖7.33克(得率0.733%)。實施例2旋覆花1公斤,加入IO升95%乙醇室溫浸泡72小時,過濾,殘渣再用6升95%乙醇繼續浸泡48小時,過濾。殘渣自然涼干或50t:烘干后,用10升水室溫浸泡48小時,過濾。殘渣再用5升水繼續浸泡24小時,過濾。合并濾液,60C減壓濃縮至2-4升。然后用95%的乙醇沉淀,乙醇終濃度為80%,醇沉24小時。離心,沉淀用2.5升水溶解,離心,無離子水透析48-72小時。60匸減壓濃縮后冷凍千燥,即獲得旋覆花總多糖5.51克(得率O.551%)。實施例3稱取實施例2制備的旋覆花總多糖1克,用10毫升水溶解,上DEAE-纖維素柱(4.5x32cm,050815),依次采用水、0.1MNaHC(h、0.25MNa跳、0.5MNaHC03和0.1MNaOH洗脫液進行洗脫,流速為10ml/min,同時采用苯酚-硫酸法和280nm紫外吸收法檢測多糖。收集洗脫峰,用蒸餾水透析,分別在6ox:減壓濃縮,冷凍干燥。柱層析圖謙見附圖1和2。實施例4昆明小鼠30只,雌雄各半,22±2克,禁食12小時(不禁水)后隨機分成3組,分別灌胃給予含有5%炭末的生理鹽水、旋覆花總多糖(實施例2制備的)(200mg/kg)和陽性藥溴吡啶斯的明(40mg/kg)。給藥30分鐘時脫臼處死小鼠,打開腹腔,將自胃賁門至直腸末端完整摘出。剪開腸系膜,不加牽引平鋪于加有生理鹽水的玻璃板上,測胃腸道全長,同時記錄前沿到賁門的距離,然后計算炭末推進率。結果見表1。實驗結果表明旋覆花總多糖顯著促進小鼠胃腸蠕動,加強糞便排出。"m*,0/、炭末前沿與賁門的距離,0/炭末推進率(%)--胃腸道全長"~一xioo%表l旋覆花總多糖對小鼠胃腸推進功能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例5昆明小鼠30只,雌雄各半,22±2克,禁食12小時(不禁水)后隨機分成3組,分別灌胃給予含有5%炭末的生理鹽水、旋覆花總多糖(實施例2制備的)(200mg/kg)和陽性藥溴吡啶斯的明(40mg/kg)。每只小鼠置于鋪有濾紙的塑料盒中,觀察小鼠出現黑便的時間、形狀,記錄給藥6小時內每只小鼠排便次數。結果見表2。實驗表明旋覆花總多糖能促進排便,加快體內廢毒物排泄,減少毒素吸收。表2旋復花總多糖對小鼠排便時間和次數的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注與生理鹽水組相比,*P<0.05,**P<0.01,"*P<0.001,n-10權利要求1.制備旋覆花總多糖的方法,包括如下步驟(a)含水溶劑提取旋復花植物材料,獲得旋復花的水提取物,(b)將所得提取物用有機溶劑沉淀。2.權利要求1的方法,其中所述旋復花植物材料是旋復花植物的地上部分,優選花序。3.權利要求1-2任一項的方法,其中所述含水溶劑是水或者含有有機溶劑的水溶液,其中有機溶劑可以是甲醇、乙酵、丙醇、丙酮或正丁醇或它們的任何組合;步驟(b)中沉淀旋覆花總多糖的有機溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合。4.權利要求1-3任一項的方法,其中在用含水溶劑提取旋復花植物材料之前用有機溶劑如乙醇如95%的乙醇提取該旋復花植物材料。先用有機溶劑提取旋覆花植物中脂溶性成分。5.權利要求l-4任一項的方法,還包括將步驟(b)的產物透析、離心和濃縮干燥。6.權利要求1-5任一項的方法,包括將旋覆花植物材料粉碎,用五倍重量以上的水浸泡1-2小時,常壓煎煮0.5-2小時,過濾,濾液用甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合沉淀24-48小時后離心,沉淀用2-10倍重量水溶解、離心,上清液透析,透析時間大于48小時(例如48-72小時),透析后離心,上清液濃縮干燥獲得旋復花總多糖。7.可通過權利要求l-6任一項的方法獲得的旋覆花總多糖。8.旋復花總多糖,其特征在于所述總多糖具有附圖1或2的特征。9.用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的組合物,其含有權利要求7或8的旋復花總多糖,任選地,還含有食用或藥用栽體或賦形劑。10.權利要求7或8的旋復花總多糖或者權利要求9的組合物或者用含水溶劑提取旋復花植物材料得到的提取物在制備用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的產品中的用途。全文摘要本發明涉及旋覆花植物總多糖制備方法,及其潤腸、通便和排毒之用途。實驗表明旋覆花總多糖能明顯促進胃腸蠕動、減少食物在胃腸消化和吸收時間,加強毒素和糞便的排出。旋覆花植物總多糖可用于通便、排毒的用途。文檔編號A61K36/28GK101209273SQ20061017158公開日2008年7月2日申請日期2006年12月30日優先權日2006年12月30日發明者單俊杰,林韶輝,趙毅民申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所;北京蘇里曼醫藥科技有限公司