專利名稱：注射用腦蛋白水解物凍干劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及治療藥，具體為用于改善失眠、頭痛、記憶力下降、頭暈及煩躁等癥狀、促進腦外傷后遺癥、腦血管疾病后遺癥、腦炎后遺癥、急性腦梗塞和急性腦外傷的康復用藥注射用腦蛋白水解物凍干劑及其制備方法。
背景技術：
腦蛋白水解物是以健康豬的新鮮大腦經脫脂、酶水解、干燥而成。含有游離氨基酸和分子量在10000以下的小分子肽等的混合物。能以多種方式作用于中樞神經，調節和改善神經元的代謝，促進突觸的形成，誘導神經元的分化，并進一步保護神經細胞在受各種卻血和神經毒素的損害，可通過血腦屏障，促進腦內蛋白質的合成，影響呼吸鏈，具有抗缺氧的保護能力，改善腦內能量代謝，激活腺苷酸環化酶和催化其他激素系統。提高神經遞質，肽類激素及輔酶前體。
現在市場上主要有片劑、注射液、凍干粉針等劑型，在臨床上廣泛應用于改善失眠、頭痛、記憶力下降、頭暈及煩躁等癥狀、促進腦外傷后遺癥、腦血管疾病后遺癥、腦炎后遺癥、急性腦梗塞和急性腦外傷的康復。
發明內容
本發明的目的在于提供了一種在臨床上廣泛應用于改善失眠、頭痛、記憶力下降、頭暈及煩躁等癥狀、促進腦外傷后遺癥、腦血管疾病后遺癥、腦炎后遺癥、急性腦梗塞和急性腦外傷的康復用凍干制劑的注射用腦蛋白水解物凍干劑及其制備方法。本發明的目的是這樣實現的它包含主藥腦蛋白水解物、輔料。a、主藥為腦蛋白水解物，制備注射用腦蛋白水解物凍干劑；b、主藥為腦蛋白水解物，加入輔料甘露醇、山梨醇、低分子右旋糖苷中的任一種，制備注射用腦蛋白水解物凍干劑。本發明以瓶為計量單位，每瓶含總氮12～120mg，總氮與游離氨基酸的重量比為6∶35，即每瓶含游離氨基酸70～700mg，每瓶含輔料為0～400mg；1、預處理將冷凍豬腦用純化水清洗兩遍后放入不銹鋼桶中自然解凍；2、勻漿按1∶1～3加入純化水攪拌5～30min，膠體磨勻漿兩次，第一次細度20μm，第二次細度10μm；3、一次酶解勻漿液置水解罐中，用HCl調PH值3.0～6.0，加熱至30～50℃，按原料重量加入1～10％胃酶酶解，酶解12～18小時后，加熱至80～100℃15～30min，冷卻降溫至30～50℃；4、二次酶解用NaOH調PH值7.0～9.5，按原料重量加入1～10％胰酶，酶解溫度30～50℃，酶解1～6小時后加熱至80～100℃15～30min，冷卻降溫至30～50℃時濾布過濾，得粗濾液，稱取重量，計算收率；5、精濾粗濾液置夾層鍋中按濾液重量0.1～1％加入藥用活性炭加熱至80～100℃攪拌吸附15～30min后，冷卻降溫至25～35℃時，用0.45μm微孔濾膜過濾除炭，再用0.22μm微孔濾膜過濾，得精濾液，稱取重量，計算收率；
6、超濾精濾液調PH值6.0～8.0，藥液溫度20～25℃，用3000～10000道爾頓超濾器超濾，壓力0.05～0.1MPa。超濾液裝入無熱原的塑料桶中，取樣送檢，冷凍貯存；7、凍干工藝(1)、稱取處方量的輔料，加注射用水，攪拌使溶解，按溶液量的0.05～1％加入針用活性炭，80～100℃攪拌15～35min，過濾至溶液澄明，備用；(2)、取處方量的腦蛋白水解物提取液，與上述溶液混合，加注射用水至溶液總量的80～90％，調pH至6.0～8.0，補注射用水至全量；(3)、過微孔濾膜，測定含量；(4)、灌裝于管制瓶中；(5)、灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，先降溫至-50～-20℃，保溫1～6小時，然后抽真空，并按1～2℃/小時升溫，當溫度達-5℃后，按5～10℃/小時升溫至45℃，保溫2～3小時，壓膠塞。
(6)、扎蓋，質檢，裝箱。
本發明的優點在于(1)本品為凍干制劑，其特點為穩定性好，避免了腦蛋白注射液在長期保存及長途運輸過程中，多肽類物質易受環境影響發生聚合而影響產品質量的現象，從而降低了高分子物質的形成的幾率，同時減少了臨床過程中過敏反應的發生。
將樣品于溫度25℃、相對濕度60％的條件下放置24個月，分別于第0、3、6、9、12、18、24個月取樣，根據質量標準草案規定項目方法進行檢驗，主要考察本品的性狀、酸堿度、其他物質、折光率、蛋白質、干燥失重、澄明度、細菌內毒素、熱原、含量測定，并與0月數值比較，結果見表1、2。各樣品的質量與0月相比無明顯變化。(2)本品的藥理作用、藥效、用法用量均等同于腦蛋白注射液，且無毒副作用。(3)本發明中輔料的種類不只是局限于右旋糖苷，又增加了甘露醇、山梨醇，為工業大生產增加了選擇性。(4)本發明突破了輔料的量對本品凍形的局限，可不加輔料，采用腦蛋白水解物通過創新性的凍干工藝進行冷凍干燥，得到凍形良好的本品，同時大大降低了生產成本。
具體實施例方式a、主藥為腦蛋白水解物，制備注射用腦蛋白水解物凍干劑；b、主藥為腦蛋白水解物，加入輔料甘露醇、山梨醇、低分子右旋糖苷中的任一種，制備注射用腦蛋白水解物凍干劑。本發明以瓶為計量單位，每瓶含總氮12～120mg，總氮與游離氨基酸的量比為6∶35，即每瓶含游離氨基酸70～700mg，每瓶含輔料為0～400mg；1、預處理將冷凍豬腦用純化水清洗兩遍后放入不銹鋼桶中自然解凍；2、勻漿按1∶1～3加入純化水攪拌5～30min，膠體磨勻漿兩次，第一次細度20μm，第二次細度10μm；3、一次酶解勻漿液置水解罐中，用HCl調PH值3.0～6.0，加熱至30～50℃，按原料重量加入1～10％胃酶酶解，酶解12～18小時后，加熱至80～100℃15～30min，冷卻降溫至30～50℃；4、二次酶解用NaOH調PH值7.0～9.5，按原料重量加入1～10％胰酶，酶解溫度30～50℃，酶解1～6小時后加熱至80～100℃15～30min，冷卻降溫至30～50℃時濾布過濾，得粗濾液，稱取重量，計算收率；5、精濾粗濾液置夾層鍋中按濾液重量0.1～1％加入藥用活性炭加熱至80～100℃攪拌吸附15～30min后，冷卻降溫至25～35℃時，用0.45μm微孔濾膜過濾除炭，再用0.22μm微孔濾膜過濾，得精濾液，稱取重量，計算收率；6、超濾精濾液調PH值6.0～8.0，藥液溫度20～25℃，用3000～10000道爾頓超濾器超濾，壓力0.05～0.1MPa。超濾液裝入無熱原的塑料桶中，取樣送檢，冷凍貯存；7、凍干工藝(1)、稱取處方量的輔料，加注射用水，攪拌使溶解，按溶液量的0.05～1％加入針用活性炭，80～100℃攪拌15～35min，過濾至溶液澄明，備用；(2)、取處方量的腦蛋白水解物提取液，與上述溶液混合，加注射用水至溶液總量的80～90％，調pH至6.0～8.0，補注射用水至全量；(3)、過微孔濾膜，測定含量；(4)、灌裝于管制瓶中；(5)、灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，先降溫至-50～-20℃，保溫1～6小時，然后抽真空，并按1～2℃/小時升溫，當溫度達-5℃后，按5～10℃/小時升溫至45℃，保溫2～3小時，壓膠塞。
(6)、扎蓋，質檢，裝箱。
實施例1將冷凍豬腦用純化水清洗兩遍后放入不銹鋼桶中自然解凍。按1∶1加入純化水攪拌5min，膠體磨勻漿兩次，第一次細度20μm，第二次細度10μm。勻漿液置水解罐中，用8mol/LHCl調PH值3.0，加熱至30℃，按原料重量加入1％胃酶酶解，酶解18小時后，加熱至80℃30min，冷卻降溫至50℃。用6mol/LNaOH調PH值7.0，按原料重量加入1％胰酶，酶解溫度30℃，酶解6小時后加熱至80℃30min，冷卻降溫至30℃時濾布過濾，得粗濾液，稱取重量，計算收率。粗濾液置夾層鍋中按濾液重量0.1％加入藥用活性炭加熱至100℃攪拌吸附30min后，冷卻降溫至25℃時，用0.45μm微孔濾膜過濾除炭，再用0.22μm微孔濾膜過濾，得精濾液，稱取重量，計算收率。精濾液調PH值8.0，藥液溫度25℃，用10000道爾頓超濾器超濾，壓力0.05～0.1MPa。超濾液裝入無熱原的塑料桶中，取樣送檢，冷凍貯存。
稱取20g的甘露醇，加注射用水，攪拌使溶解，按溶液量的0.05％加入針用活性炭，80℃攪拌15min，過濾至溶液澄明，備用。取腦蛋白水解物提取液1009ml，與上述溶液混合，加注射用水至溶液總量的90％，調pH至8.0，補注射用水至全量。過微孔濾膜，測定含量。灌裝于管制瓶中。灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，先降溫至-50℃，保溫1小時，然后抽真空，并按1～2℃/小時升溫，當溫度達-5℃后，按10℃/小時升溫至45℃，保溫3小時，壓膠塞。扎蓋，質檢，裝箱。
實施例2腦蛋白水解物提取方法同實施例1。
稱取400g的甘露醇，加注射用水，攪拌使溶解，按溶液量的1％加入針用活性炭，100℃攪拌35min，過濾至溶液澄明，備用。取腦蛋白水解物提取液10013ml，與上述溶液混合，加注射用水至溶液總量的80％，調pH至6.0，補注射用水至全量。過微孔濾膜，測定含量。灌裝于管制瓶中。灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，先降溫至-20℃，保溫6小時，然后抽真空，并按1～2℃/小時升溫，當溫度達-5℃后，按5℃/小時升溫至45℃，保溫2小時，壓膠塞。扎蓋，質檢，裝箱。
實施例3腦蛋白水解物提取方法同實施例1。
稱取50g的山梨醇，加注射用水，攪拌使溶解，按溶液量的0.05％加入針用活性炭，80℃攪拌15min，過濾至溶液澄明，備用。取腦蛋白水解物提取液995ml，與上述溶液混合，加注射用水至溶液總量的90％，調pH至8.0，補注射用水至全量。過微孔濾膜，測定含量。灌裝于管制瓶中。灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，先降溫至-50℃，保溫1小時，然后抽真空，并按1～2℃/小時升溫，當溫度達-5℃后，按10℃/小時升溫至45℃，保溫3小時，壓膠塞。扎蓋，質檢，裝箱。
實施例4腦蛋白水解物提取方法同實施例1。
稱取400g的山梨醇，加注射用水，攪拌使溶解，按溶液量的1％加入針用活性炭，100℃攪拌35min，過濾至溶液澄明，備用。取腦蛋白水解物提取液9987ml，與上述溶液混合，加注射用水至溶液總量的80％，調pH至6.0，補注射用水至全量。過微孔濾膜，測定含量。灌裝于管制瓶中。灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，先降溫至-20℃，保溫6小時，然后抽真空，并按1～2℃/小時升溫，當溫度達-5℃后，按5℃/小時升溫至45℃，保溫2小時，壓膠塞。扎蓋，質檢，裝箱。
實施例5腦蛋白水解物提取方法同實施例1。
稱取70g的低分子右旋糖苷，加注射用水，攪拌使溶解，按溶液量的0.05％加入針用活性炭，80℃攪拌15min，過濾至溶液澄明，備用。取腦蛋白水解物提取液989ml，與上述溶液混合，加注射用水至溶液總量的90％，調pH至8.0，補注射用水至全量。過微孔濾膜，測定含量。灌裝于管制瓶中。灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，先降溫至-50℃，保溫1小時，然后抽真空，并按1～2℃/小時升溫，當溫度達-5℃后，按10℃/小時升溫至45℃，保溫3小時，壓膠塞。扎蓋，質檢，裝箱。
實施例6腦蛋白水解物提取方法同實施例1。
稱取320g的低分子右旋糖苷，加注射用水，攪拌使溶解，按溶液量的1％加入針用活性炭，100℃攪拌35min，過濾至溶液澄明，備用。取腦蛋白水解物提取液9996ml，與上述溶液混合，加注射用水至溶液總量的80％，調pH至6.0，補注射用水至全量。過微孔濾膜，測定含量。灌裝于管制瓶中。灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，先降溫至-20℃，保溫6小時，然后抽真空，并按1～2℃/小時升溫，當溫度達-5℃后，按5℃/小時升溫至45℃，保溫2小時，壓膠塞。扎蓋，質檢，裝箱。
實施例7腦蛋白水解物提取方法同實施例1。
取腦蛋白水解物提取液9989ml，加注射用水至溶液總量的80％，調pH至6.5，補注射用水至全量。過微孔濾膜，測定含量。灌裝于管制瓶中。灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，先降溫至-20℃，保溫6小時，然后抽真空，并按1～2℃/小時升溫，當溫度達-5℃后，按5℃/小時升溫至45℃，保溫2小時，壓膠塞。扎蓋，質檢，裝箱。
實施例8將冷凍豬腦用純化水清洗兩遍后放入不銹鋼桶中自然解凍。按1∶3加入純化水攪拌30min，膠體磨勻漿兩次，第一次細度20μm，第二次細度10μm。勻漿液置水解罐中，用10mol/LHCl調PH值6.0，加熱至50℃，按原料重量加入10％胃酶酶解，酶解12小時后，加熱至100℃15min，冷卻降溫至30℃。用8mol/LNaOH調PH值9.5，按原料重量加入10％胰酶，酶解溫度50℃，酶解1小時后加熱至100℃15min，冷卻降溫至50℃時濾布過濾，得粗濾液，稱取重量，計算收率。粗濾液置夾層鍋中按濾液重量1％加入藥用活性炭加熱至80℃攪拌吸附15min后，冷卻降溫至35℃時，用0.45μm微孔濾膜過濾除炭，再用0.22μm微孔濾膜過濾，得精濾液，稱取重量，計算收率。精濾液調PH值6.0，藥液溫度20℃，用3000道爾頓超濾器超濾，壓力0.05～0.1MPa。超濾液裝入無熱原的塑料桶中，取樣送檢，冷凍貯存。
實施例9將冷凍豬腦用純化水清洗兩遍后放入不銹鋼桶中自然解凍。按1∶2.5加入純化水攪拌20min，膠體磨勻漿兩次，第一次細度20μm，第二次細度10μm。勻漿液置水解罐中，用8mol/LHCl調PH值4.0，加熱至40℃，按原料重量加入2％胃酶酶解，酶解15小時后，加熱至95℃25min，冷卻降溫至35℃。用7mol/LNaOH調PH值7.8，按原料重量加入3％胰酶，酶解溫度35℃，酶解3小時后加熱至85℃20min，冷卻降溫至40℃時濾布過濾，得粗濾液，稱取重量，計算收率。粗濾液置夾層鍋中按濾液重量0.5％加入藥用活性炭加熱至100℃攪拌吸附30min后，冷卻降溫至35℃時，用0.45μm微孔濾膜過濾除炭，再用0.22μm微孔濾膜過濾，得精濾液，稱取重量，計算收率。精濾液調PH值7.5，藥液溫度23℃，用6000道爾頓超濾器超濾，壓力0.05～0.1MPa。超濾液裝入無熱原的塑料桶中，取樣送檢，冷凍貯存。
表1、注射用腦蛋白水解物長期穩定性試驗結果
表2、注射用腦蛋白水解物長期穩定性試驗氨基酸含量測定結果
權利要求
1.預處理將冷凍豬腦用純化水清洗兩遍后放入不銹鋼桶中自然解凍；
2.勻漿按1∶1～3加入純化水攪拌5～30min，膠體磨勻漿兩次，第一次細度20μm，第二次細度10μm；
3.一次酶解勻漿液置水解罐中，用HCl調PH值3.0～6.0，加熱至30～50℃，按原料重量加入1～10％胃酶酶解，酶解12～18小時后，加熱至80～100℃15～30min，冷卻降溫至30～50℃；
4.二次酶解用NaOH調PH值7.0～9.5，按原料重量加入1～10％胰酶，酶解溫度30～50℃，酶解1～6小時后加熱至80～100℃15～30min，冷卻降溫至30～50℃時濾布過濾，得粗濾液，稱取重量，計算收率；
5.精濾粗濾液置夾層鍋中按濾液重量0.1～1％加入藥用活性炭加熱至80～100℃攪拌吸附15～30min后，冷卻降溫至25～35℃時，用0.45μm微孔濾膜過濾除炭，再用0.22μm微孔濾膜過濾，得精濾液，稱取重量，計算收率；
6.超濾精濾液調PH值6.0～8.0，藥液溫度20～25℃，用3000～10000道爾頓超濾器超濾，壓力0.05～0.1MPa。超濾液裝入無熱原的塑料桶中，取樣送檢，冷凍貯存；
7.凍干工藝(1)、稱取處方量的輔料，加注射用水，攪拌使溶解，按溶液量的0.05～1％加入針用活性炭，80～100℃攪拌15～35min，過濾至溶液澄明，備用；(2)、取處方量的腦蛋白水解物提取液，與上述溶液混合，加注射用水至溶液總量的80～90％，調pH至6.0～8.0，補注射用水至全量；(3)、過微孔濾膜，測定含量；(4)、灌裝于管制瓶中；(5)、灌裝好的樣品置入冷凍干燥機中，先降溫至-50～-20℃，保溫1～6小時，然后抽真空，并按1～2℃/小時升溫，當溫度達-5℃后，按5～10℃/小時升溫至45℃，保溫2～3小時，壓膠塞；(6)、扎蓋，質檢，裝箱。
全文摘要
本發明涉及治療藥，具體為用于改善失眠、頭痛、記憶力下降、頭暈及煩躁等癥狀、促進腦外傷后遺癥、腦血管疾病后遺癥、腦炎后遺癥、急性腦梗塞和急性腦外傷的康復用藥注射用腦蛋白水解物凍干劑及其制備方法。其特點是a、主藥為腦蛋白水解物，制備注射用腦蛋白水解物凍干劑；b、主藥為腦蛋白水解物，加入輔料甘露醇、山梨醇、低分子右旋糖苷中的任一種，制備注射用腦蛋白水解物凍干劑。本發明以瓶為計量單位，每瓶含總氮12～120mg，總氮與游離氨基酸的重量比為6∶35，即每瓶含游離氨基酸70～700mg，每瓶含輔料為0～400mg。本發明的優點在于本品為凍干制劑，其特點為穩定性好，避免了腦蛋白注射液在長期保存及長途運輸過程中，多肽類物質易受環境影響發生聚合而影響產品質量的現象，從而降低了高分子物質的形成的幾率，同時減少了臨床過程中過敏反應的發生。
文檔編號A61P25/04GK1939341SQ20061015089
公開日2007年4月4日 申請日期2006年10月13日 優先權日2006年10月13日
發明者郭維城, 俞嘉林 申請人:郭維城