酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌在制備治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉藥物中的應用的制作方法

專利名稱：：酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌在制備治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌的藥物新用途，具休涉及酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌作為藥物活性成份在制備治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉藥物中的應用，屬于生物藥領域。
背景技術：
：腸易激綜合征(irritablebowelsyndrome,氾S)指的是一組包括腹痛、腹脹、排便習慣改變和大便性狀異常、黏液便等表現的經檢查排除可引起這些癥狀的器質性疾病的臨床綜合征，持續存在或反復發作。本病已經發展為常見病，在普通人群進行問巻調查，有IBS癥狀者歐美報道為10o/。20o/。，我國北京一組報道為8.7%。目前，傳統的胃腸病理論認為其病因和發病機制不清楚，所以腹瀉型IBS又被稱為不明原因腹瀉。冷涼瀉，即冷涼性腹瀉，是指人體受寒著涼、飲用冷飲料或食用生冷瓜果食物后，而引發的腹瀉，有時伴有腹痛、腹脹等癥狀。喝酒瀉，既喝酒性腹瀉，是指喝酒(啤酒、白酒等)后，由于酒精的刺激等原因而導致的腹瀉，有時伴有腹痛、腹脹等癥狀。由青島市微生態工程技術研究屮心和青島東海藥業有限公司聯合組織醫學人員和統計學人員，對通過腸道健康熱線由醫學專業人員詳細記錄的629例腹瀉患者的資料進行回顧性統計分析發現冷涼瀉和喝酒瀉發病率很高，分別占到慢性腹瀉患者的85.6%和89.1%，許多患者受涼、喝酒后就腹瀉的病史，反反復復持續了十幾年，甚至幾十年，部分患者后來到醫院檢査已經發展為潰瘍性結腸炎，甚至腸癌。腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉長期反復發作給患者的生活、學習和工作帶來很多不便，降低了患者的生活質量。對于腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉，目前的治療藥物主要為抗菌消炎藥、止瀉藥和中藥等，但都療效不高，只能緩時的癥狀，治療后易復發，且長期應用副作用大。因此，尋找能根治腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉，且沒有副作用的藥物是臨床迫切需求的，木發明的藥物新用途解決了這一難題，社會意義巨大。
發明內容本發明人通過研究和分析發現大部分腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉患者的發病機制是各種原因導致的腸道菌群紊亂，有害菌增多，產生的氨、糞臭素、吲哚等毒素增加，使腸道的生物屏障、粘膜免疫屏障、機械屏障乃至化學屏障均輕度受損，處于亞健康狀態，腸鏡檢査不出明顯的器質性損傷，但此時的腸遒耐受能力減弱，受到一些不良刺激，就會發生腹瀉、便秘、腹脹、腹癇等癥狀。本發明人經臨床研究證實，酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌由于能夠恢復腸道菌群平衡，減少有害菌及其產生的毒素，產生短鏈脂肪酸修復腸黏膜，從而恢復腸道功能。所以，把這三種菌單獨或組合制成活菌制劑對治療腸從激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉療效顯著。木發明以酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌為藥物活性成份制成的制劑，可以是以酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌單獨為藥物活性成份分別制成相關劑型；也可以是酪酸梭菌與凝結芽孢桿菌組合，酪酸梭菌與雙歧桿菌組合，凝結芽孢扦菌與雙歧桿菌組合作為藥物活性成份分別制成相關劑型；也可以是酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌與雙歧桿菌三種菌組合制成相關劑型。本發明所述酪酸梭菌選自但不限于酪酸梭菌(Clostridiumbutyricum)、CGMCC、保藏編號0313.1。本發明所述凝結芽孢桿菌選自但不限于凝結芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)、CGMCC、保藏編號1207。本發明所述雙歧桿菌選自但不限于嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacteriuminfantis)、CGMCC、保存編號0313.2,長雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum)、CGMCC、保存編號0313.5,短雙歧桿菌(Bifidobacteriumbreve)、CGMCC、保存編號0313.6，兩歧雙歧桿菌(Bifidobacteriumbifidum)、CGMCC、保存編號0313.7。本發明所述的酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌指活生物個體。本發明是以有效劑量的酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌根據上面所述單獨或組合作為藥物活性成份，按照一定的制劑工藝，加入常規的賦性劑、調味劑、崩解劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、黏合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑等口服劑型，或肛門栓劑、灌腸劑型等。本發明所指有效劑量是指以酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌根據上面所述單獨或組合作為藥物活性成份，即以酪酸梭菌凝結芽孢桿菌；雙歧桿菌;酪酸梭菌和凝結芽孢桿菌；酪酸梭菌和雙歧桿菌；凝結芽孢桿菌和雙歧桿菌；酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌和雙歧桿菌分別為藥物活性成份制成的活菌制劑包含的總活菌數不能低于1X106CFU/g，一般在1X107CFU/g以上，最高可達到1X1012CFU/g或1X1012CFU/g以上。本發明優選的制劑工藝為，先在液體培養基中接種菌種，進行培養或多級擴增培養，然后將液態培養物離心，收集濕菌泥，并將所述菌泥千燥、粉碎，得到干燥菌粉。將所得千燥菌粉與藥用載體混合，制成最終劑型。由于本發明首次公開了以酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌為藥物活性成份治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的藥物作用，特別是對冷涼瀉和喝酒瀉的藥物作用，因此，酪酸梭菌、凝結芽孢桿齒、雙歧桿菌按上面所述單獨或組合作為藥物活性成份或主要藥物活性成份與輔料組合制成藥劑，只要是該藥劑用于治療腸易激綜合征，特別是用于治療冷涼瀉或喝酒瀉，均屬于本發明的保護范圍。木發明的酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌在制成任何一種劑型時，均具有治療腸易激綜合征、冷涼瀉或喝酒瀉的作用。任何藥劑，如果其組份中含有酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌中的一種或兒種成份制備成藥，在其包裝或說明書等標識上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的作用，則落入本發明的保護范圍之內。本發明的酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌是益生菌。因此，也可以將酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌制成保健食品或保健藥品。將酪酸梭菌、凝結芽孢桿菡、雙歧桿菌制成的保健食品，如果在其包裝或說明書等標識上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的作用，則落入木發明的保護范圍之內。具體實施方式藥物制備例說明以酪酸梭菌為藥物活性成分制成膠囊劑為例，說明制備方法。酪酸梭齒、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌按上面所述單獨或組合作為藥物活性成份，制備方法同下，制備方法不只局限以下的方法，公知的方法均可以。所配成的制劑含兩種菌以上活性成份可分別發酵或混合發酵，然后制成單一組分菌粉或混合組分菌粉，最后按常規方法制備成所需的劑型。實施例l酪酸梭菌活菌菌粉制備取酪酸梭菌活菌菌種管一支，溶于已滅菌裝有10ml生理鹽水和璃珠的100ml三角瓶中，活化10分鐘，用1ml無菌吸管吸取1ml菌懸液接種裝有50ml擴增培養基的250ml三角瓶中，置搖擺床內37'C恒溫振蕩(l卯rpm)培養24小時，轉接裝有450ml擴增培養基2500ml檔板三角瓶中，37'C恒溫振蕩培養24小時，鏡檢無雜菌后再轉接于裝有4.5L擴增培養基的種子罐中，厭氧培養(充氣量3:1)24小時，鏡檢無雜菌后轉接有45L發酵培養基的發酵罐中，37。C厭氧培養24小時，鏡檢芽孢率達80%以上，停止培養。用連續離心機，12000rpm離心。收集濕菌泥，稱重，按l:1(w/v)添加適量脫脂奶粉等保護劑后，千燥，粉碎，常溫保存備用。實施例2酪酸梭菌活菌膠囊制備將上述組份中1~3組中充分拌勻，然后利用常規灌裝膠囊技術按單位劑量制成膠囊。試驗例說明我們以口服酪酸梭菌活菌膠囊、口服凝結芽孢桿菌活菌片、口服雙歧桿菌活菌片為例，介紹以酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌按上面所述單獨或組合為藥物活性成份制成的活菌制劑治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的臨床效果。由于酪酸梭菌、凝結芽孢桿齒、雙歧桿齒都是益生菌，作用機理相同，所以酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌按上面所述組合作為藥物活性成份制成的活菌制劑與單獨作為藥物活性成份制成的活齒制劑治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的臨床效果相同或相近，所以在這里只介紹單獨作為藥物活性成份制成的口服酪酸梭菌活菌膠囊、口服凝結芽孢桿菌活菌片、口服雙歧桿菌活菌片的臨床研究效果為代表。試驗例1酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌治療腸易激綜合'征療效觀察1對象與方法1.1觀察對象選擇20052006年就診的按1999年提出的羅馬II診斷標準診斷明確的腸易激綜合征患者隨機分入LJ服酪酸梭菌活菌膠囊治療組、口服凝結芽孢桿菌活菌片治療組和口服雙歧桿菌活菌片治療組。1.2療效判定標準1.2.1癥狀分級①腹痛0級無疼癇1級(輕度)有疼痛，但不影響曰常活動或工作，亦不需服藥；2級(中度)有疼痛，部分影響日常活動或工作，并需服藥；3級(重度)有疼痛，影響曰常活動或工作，需休息，并需服藥。②腹脹0級無癥狀1級偶有癥狀；2級間斷發生；3級經常有癥狀。③排便費力、急迫感、排便不凈感0級無癥狀；1級輕度，偶有；成份酪酸梭菌活菌菌粉微晶纖維素葡萄糖20.00份40.00份40.00份2級屮度，間斷有；3級重度，經常有。腸鳴音O級正常；1級稍活躍；2級活躍；3級亢進。⑤腹部壓痛0級無壓痛1級壓痛輕微；2級壓痛較明顯；3級壓痛明顯。1.2.2療效分級(1)治愈治療后患者糞便性狀及排便次數恢復正常(每天排12次黃色條狀軟便)，全身癥狀消失。(2)顯效治療后患者糞便性狀及排便次數明顯好轉(每天排23次黃色軟便)或每周排便>3次，全身癥狀明顯改善。(3)進步治療后患者糞便性狀及排便次數有好轉(每天排3次黃色爛便)或每周排便等于3次，全身癥狀有好轉。(4)無效治療后患者糞便性狀和排便次數及全身癥狀無好轉，甚至:惡化。1.3安全性評價治療中認真觀察可能與治療藥有關的不良反應，記錄發生時間、癥狀及持續時間、處理結果。1.4統計學分析釆用SAS統計分析軟件，數據分別用百分率或均數士標準差表示，治OTT后的差異顯著性測驗，用5C2檢驗和精確概率法，或t檢驗，差異的顯著性水平為p0.05。2結果口服酪酸梭菌活菌膠囊治療組治療50例，口服凝結芽孢桿菌活菌片治療組治療46例，口服雙歧桿菌活菌片治療組治療57例。評:細疔效觀察結果如下2.1口服酪酸梭菌活菌膠囊治療腸易激綜合征50例療效觀察結果2丄1臨床資料男性33例，女性17例，男女=2:1，平均年齡41.8歲，平均病程19.9月。IBS分型，腹瀉為主型34例，便秘為主型8例，腹瀉便秘交替型8例。2.1.2給藥方法U服酪酸梭菌活菌膠囊，每粒420mg(含酪酸梭菌活菌數不低于1.0X106ciWg)，由青島東海藥業有限公司提供。3粒/次，一夭2次，療程1421天。對脫水者補充水、電解質等支持疔法。2.1.3療效觀察結果2.1.3.1腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較50例舊S患者的腹瀉和便秘等癥狀，治療后均有顯著的改善(p<0.05)，見表l。表1腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>※用卡方檢驗或精確概率法2丄3.2腸易激^^合征患者治療前后的排便次數、療程與療效治療后舊S患者的腹瀉為主型和腹瀉便秘交替型的排便次數有顯著的減少(pO.Ol)，而便秘為主型的則有顯著的增加(pO.Ol)，型間療效無明顯不同，21天的療效比14天的要好，見表2。表2腸易激綜合征患者治療前后的排便次數、療程與療效<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>※自身對比t檢驗，an=42;bn=82.1.3.3腸易激綜合征患者的總療效50例IBS患者，痊愈31例，顯效16例，總有效率為94%，無效為O，見表3。表3腸易激綜合征患者的總療效、平均起效時間<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2.2口服凝結芽孢桿菌活菌片治療腸易激綜合征46例療效觀察結果2.2.1臨床資料男性29例，女性17例，平均年齡43.5±11.9歲，平均病程22.9月。IBS分型，腹瀉為主型30例，便秘為主型6例，腹瀉便秘交替型10例。2.2.2給藥方法口服凝結芽孢桿菌活菌片，每片350mg(含凝結芽孢桿菌活菌數不低T1.0X106cfii/g)，由青島東海藥業有限公可提供。3片欣，一夭3次，療程1421天。對脫水者補充水、電解質等支持療法。2.2.3療效觀察結果2.2.3.1腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較46例IBS患者的腹瀉和便秘等癥狀，治療后均有顯著的改善(p<0.05)，見表l。表l腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較癥狀治療前(46例)治療后(46例)例數構成比例數構成比-顯著性檢驗(P值)腹瀉306524<0.05便秘61300<0.05腹瀉+便秘10221<0.05水樣、稀爛388324<0.05便或軟便硬便102200<0.05腹痛3065817<0.05腹脹3576613<0.05排便不凈感3065715<0.05排便費力51100<0.05排便急迫感204349<0.05腹壓痛2554511<0.05腸鳴音30651022<0.05※用卡方檢驗或精確概率法2.2.3.2腸易激綜合征患者治療前后的排便次數、療程與療效治療后舊S患者的腹瀉為主型和腹瀉便秘交替型的排便次數有顯著的減少(p<0.01)，而便禾必為主型的則有顯著的增加(pO.Ol)，型間療效無明顯不同，21天的療效比14天的要好，見表2。表2腸易激綜合征患者治療前后的排便次數、療程與療效排便次數/天治療前治療后&療程與療效(總有效率)p值——14大21夭(—X士SD)※例數構成比例數構成比4.20±1.921.70土0.60'O.O士O.O1.2±0.4h<0.0138834393<0.01※自身對比t檢驗，an=40;bn=62.2.3.3腸易激綜合征患者的總療效46例IBS患者，痊愈30例，顯效U例，總有效率為93%，無效為0，見表3。__________表3腸易激綜合征患者的總療效、平均起效時間_______________aw痊愈顯效進^^效S、有效^平均起效時間9^str---------------------------------------------------------——'"例％例％例％例％例％(天)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>5療效=痊愈+顯效，合計為總有效率2.3n服雙歧桿菌活菌片治療腸易激綜合征57例療效觀察結果2.3.1臨床資料男性35例，女性22例，平均年齡40.5士10.8歲，平均病程20.5jj。IBS分型，腹瀉為主型38例，便秘為主型9例，腹瀉便秘交替型10例。2.3.2給藥方法口服雙歧桿菌活幽片，每片350mg(含雙歧桿齒'活菌數不低于1.0X106dWg)，由靑島東海藥業有限公司提供。3片/次，一天3次，療程1421天。對脫水者補充水、電解質等支持療法。2.3.3療效觀察結果2.3.3.1腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較57例IBS患者的腹灣和便秘等癥狀，治療后均有顯著的改善(p<0.05)，見表l。表l腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>※用卡方檢驗或精確概率法2.3.3.2易激綜合征患者治療前后的排便次數、療程與療效治療后IBS患者的腹瀉為主型和腹瀉便秘交替型的排便次數有顯著的減少(pO.Ol)，而便秘為主型的則有顯著的增加(pO.Ol)，型間療效無明顯不同，21天的療效比14夭的要好，見表2。表2腸易激綜合征患者治療前后的排便次數、療程與療效—排便次數/天療程與療效(總有效率)-俱治療前治療后O(士SD)※_例數構成比例數構J比4.50±1.711.60士0.30"〈0.0145795189O.O士O.O1.3±0Mlh<0.01※自身對比t檢驗，an=48;bn=92.4腸易激綜合征患者的總療效57例IBS患者，痊愈35例，W.效16例，總有效率為89%，無效為0，見表3。表3腸易激綜合征患者的總療效、平均起效時間總例數痊愈顯效進歩無效總有效率平均起效時間例％例％例％例％例％(天)57356116286110051892.40總療效=痊愈+顯效，合計為總有效率3討論本發明人通過臨床研究和分析發現IBS的真正病因是由各種原因導致的腸道菌群紊亂，有害菌增多，產生的氨、糞臭素、吲哚等毒素增加，使腸道的生物屏障、粘膜免疫屏障、機械屏障乃至化學屏障均輕度受損，腸道處于亞健度狀態，腸鏡檢査不出明顯的器質性損傷，伹此時的腸道耐受能力減弱，從而導致腸易激綜合征各種癥狀的發生。本發明正是利用酪酸梭菌、凝結^&桿菌、雙歧桿菌能恢復腸道菌群平衡達到從根源治療腸易激綜合征的目的。木試驗發現酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌單獨應用治療腸易激綜合征療效顯著，有效率分別達到了94%、93%、89%。且彼此之間的療效沒有顯著性差異，并且它們都是益生菌作用機理相似，所以可以預計把它們按上面所述的紹_合制成活菌制劑一樣會達到同樣的結果，所以組合制成活菌制劑的試驗例在此省略。而由酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌按上面所述單獨或組合作為藥物活性成份制成的藥物之所以對治療腸易激綜合征有效，主要是以下幾方面原因1、酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌都是有益菌，nj'以恢^腸道菌群平衡，恢復生物屏障對于恢復正常的腸道功能非常有益。同時減少了腸道有害菌及其產生的毒素，從而減少了腸道的損傷因素，消除了毒素對腸麻痹作用，是治療腹瀉和便秘的機理之一。2、酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿齒在腸道可以產生消化酶，有助千消化，消除腹脹。3、酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌可以在腸道產生丁酸、乙酸等短鏈脂肪酸。短鏈脂肪酸是腸黏膜再生和修復的營養物質及能量來源，有助于修復腸黏膜，恢復腸道功能，是治療舊S的重要機理之一；短鏈脂肪酸還可以刺激腸蠕動，是治療便秘癥狀的重要機理之一。4、同時酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌還可以促進腸道內源有益菌的增殖，腸道內源有益菌也具有上述作月i，可以起到協同作用。試驗例2酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌治療冷涼汚療效觀察1對象與方法1.1觀察對象選擇符合以下標準的就診的腹瀉患者，隨機分入口服酪酸梭菌活菌膠囊治療組、口服凝結芽孢桿菌活菌片治療組和口服雙歧桿菌活菌片治療組。入組標準(1)受涼或食用生冷等食物后24小時內，腹痛或腹部不適伴有排便頻率異常(排便〉3次/24小時)，年齡在1870歲；(2)受涼或食用生冷等食物后24小時內，腹痛或腹部不適伴有糞便性狀改變(糊狀便、水樣便或粘液便)；(3)因受涼或食用生冷等食物引發腹瀉，持續或間斷性發作在2周2個月以上者；(4)無嚴重的心、肝、腎、神經系統等疾患者。1.2給藥方法口服酪酸梭菌活菌膠囊，毎粒420mg(含酪酸梭菌活菌數不低于1.0X106dWg)，由青島東海藥業有限公司提供。3粒/次，一天2次。口服凝結芽孢桿菌活菌片，每片350mg(含凝結芽孢桿齒活菌數不低于1.0X106dWg)，由肯島東海藥業有限公司提供。3片/次，一夭3次。口服雙歧桿菌活菌片，每片350mg(含雙歧桿茵活菌數不低于1.0X106cfii/g)，由肯島東海藥業有限公司提供。3片/次，一天3次。以il療程均為1421天。1.3觀察方法設自身對照，觀察治療前后的大便次數、大便性狀、腹痛、腹脹、腹部壓癇、腸鳴音等癥狀變化。治療前做血常規、大便常規檢査。1.4療效判定標準治愈治療后患者糞便性狀及次數恢復正常，全身癥狀消失顯效治療后患者糞便性狀及次數明顯好轉(每天排23次黃色軟便)，全身癥狀明顯好轉；進步治療后患者糞便性狀及次數有好轉(每天排3次以上黃色糊便)；無效治療后患者糞便性狀、次數及全身癥狀無好轉，甚至惡化。2結果共收治127例，男79例，女48例，平均年齡39歲。2.1綜合疔效顯著，但三組間比較無顯著性差異，見表l。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>痊愈和顯效合計為有效，計算有效率。2.2腹瀉癥狀治療前后比較，絕大部分癥狀明顯減少，與治療前比較有顯著性差異，見表2。表2酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌治療冷涼瀉前后癥狀改變酪酸梭菌凝結芽孢桿菌雙歧桿齒癥狀治療前治療后治療前治療后治療前治療后例數(％)例數(％)例數(°/。)例數(％)例數(％)例數(％)大便性狀45(100)5(11.1)40(100)042(100)8(19.0)腹痛29(64.4)3(6.7〉18(45.0)5(11.1)25(59.5)8(19.0)腹脹8(17.8)06(15.0)010(23.8)1(2.4)腹部壓痛'11(24,4)012(30.0)06(14.3)0腸鳴音16(35.6)011(27.5)015(35.7)2(4.8)2.3腹瀉次數治療前后有顯著性差異(P<0.05)，見表3表3酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌治療冷涼瀉前后腹瀉次數(次/天)組別治療前治療后酪酸梭菌組4.20±1.231.30±1.12凝結芽孢桿菌組4.11±1.181.54±1.43雙歧桿菌組3.94±1.151.72±1.283討論在收治的127例冷涼瀉患者屮大部分都有長期的抗菌藥應用史，抗菌藥的應用導致腸道菌群紊亂，生物屏障及免疫屏障造到破壞，有害菌及其產生的毒素增多，使腸黏膜遭到不同程度的破壞，耐受冷涼刺激減弱，受到冷涼刺激就容易腹瀉、腹痛、腹脹。應用酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌按上面所述方法單獨或組合制成的活菌制劑一方面可增加腸道有益菌，恢復腸道菌群平衡，修復生物屏障和免疫屏障，消除病源另一方面可產生短鏈脂肪酸，修復腸黏膜。從而徹底治愈冷涼瀉。試驗例3酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌治療喝酒瀉療效觀察1對象與方法1.1觀察對象選擇符合以下標準的就診的腹瀉患者，隨機分入口服酪酸梭菌活菌膠囊治療組、口服凝結芽孢桿菌活菌片治療組和tl服雙歧桿菌活菌片治療組。入組標準(1)飲酒(啤酒、白酒等)后24小時內，腹癇或腹部不適伴有排便頻率異常(排便>3次/24小時)，年齡在1870歲；(2)飲酒(啤酒、白酒等)后24小時內，腹痛或腹部不適伴有糞便性狀改變(稀爛便、水樣便或粘液便)(3)l到飲酒(啤酒、白酒等)引發腹瀉，持續或間斷性發作在2周2個月以上者；(4)無嚴重的心、肝、腎、神經系統等疾患者。1.2給藥方法口服酷酸梭菌活菌膠囊，每粒420mg(含酪酸梭菌活菌數不低于1.0X106cfij/g)，山青島東海藥業有限公司提供。3粒/次，一夭2次。口服凝結芽孢桿菌活菌片，每片350mg(含凝結芽孢桿菌活菌數不低于1.0X106dWg)，由青島東海藥業有限公司提供。3片/次，一天3次。口服雙歧桿菌活菌片，每片350mg(含雙歧桿菌活菌數不低于1.0X106dWg)，由青島東海藥業有限公司提供。3片/次，一天3次。以Jl療程均為1421天。1.3觀察方法設自身對照，觀察治療前后的大便次數、大便性狀、腹痛、腹脹、腹部壓痛、腸鳴音等癥狀變化。治療ttr做血常規、大便常規檢査。1.4療效判定標準治愈治療后患者糞便性狀及次數恢復正常，全身癥狀消失；顯效治療后患者糞便性狀及次數明顯好轉(每天排23次黃色軟便)，全身癥狀明顯好轉；進歩治療后患者糞便性狀及次數有好轉(每天排3次以上黃色糊便)；無效治療后患者糞便性狀、次數及全身癥狀無好轉，甚至惡化。2結果共收治114例，男100例，女14例。平均年齡42歲。2.1綜合療效顯著，但三組間比較無顯著性差異，見表l。表1酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌治療喝酒瀉綜合療效<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>2.2腹瀉癥狀治療前后比較，絕大部分癥狀明顯減少，與治療前比較存顯著性差異，見表2。表2酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌治療喝酒瀉前后癥狀改變<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>2.3腹瀉次數治療前后有顯著性差異(P<0.05),見表3表3酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌治療喝酒瀉前后腹瀉次數(次/天)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>3討論治療的喝酒瀉患者幾乎都有抗菌藥使用史，有的甚至常年用抗菌藥，導致腸道菌群嚴重紊亂，生物屏障和免疫屏障造到破壞，有害菌及其產生的毒素增多，使腸黏膜遭到不同程度的破壞，耐受力減弱，腸道處于亞健康狀態。喝酒瀉和冷涼瀉的發病機制一樣，有的患者冷涼瀉和喝酒瀉交替發生。應用酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌按上面所述方法單獨或組合制成的活菌制劑通過增加腸道有益菌，恢復腸道菌群平衡，修復生物和免疫屏障，消除病根，并產生短鏈脂肪酸，修復腸黏膜，而使喝酒瀉治愈。治療因病史而異，病程短的，治療周期短，病程長而嚴重的，隨治療周期的延長，治愈率進一步提高。本發明在實施過程中所使用的微生物菌種已分別于1997年7月28日和2004年8月23日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市海淀區中關村北一條13號，中國科學院微生物研究所郵編100080)保藏，共六個下述微生物菌種，但本發明所述的酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌并不局限于這六種微生物菌種。(O分類命名酪酸梭菌Clostridiumbutyricum，保存編號0313.1。(2)分類命名嬰兒雙歧桿菌Bifidobacteriuminfantis，保存編號0313.2。(3)分類命名長雙歧桿菌Bifidobacteriumlongum，保存編號0313.5。(4)分類命名短雙歧桿菌Bifidobacteriumbreve，保存編號0313.6。(5)分類命名兩歧雙歧桿菌Bifidobacteriumbifidum，保存編號0313.7。(6)分類命名凝結芽孢桿菌Bacilluscoagulans，保存編號1207。上述六個微生物菌種經該微生物中心檢測，檢測結果均為存活。權利要求1、酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌在制備治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的藥物中的應用，其中所述的酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌單獨應用或組合應用作為藥物活性成份制成活菌制劑。2、按權利要求l所述應用，其特征在于雙歧桿菌包括嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌。3、按權利要求l所述應用，其特征在于將有效劑量的權利要求1所述的酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌三種菌和藥學上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門栓劑、灌腸劑。4.按權利要求l所述應用，其特征在于將有效劑量的權利要求1所述的酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌兩種菌和藥學上可接受的不同載休制成口服劑型、肛門栓劑、灌腸劑。5、按權利要求l所述應用，其特征在亍將有效劑量的權利要求1所述的酪酸梭菌、雙歧桿菌兩種菌和藥學上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門栓劑、灌腸劑。6、按權利要求1所述應用，其特征在亍將有效劑量的權利要求1所述的凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌兩種菌和藥學上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門栓劑、灌腸劑。7、按權利要求l所述應用，其特征在于將有效劑量的權利要求1所述的酪酸梭菌和藥學上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門栓劑、灌腸劑。8、按權利要求l所述應用，其特征在于將有效劑量的權利要求1所述的凝結芽孢桿菌和藥學上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門栓劑、灌腸劑。9、按權利要求l所述應用，其特征在于將有效劑量的權利要求1所述的雙歧桿菌和藥學上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門栓劑、灌腸劑。10、按權利要求3、4、5、6、7、8或9所述，其特征在于所述有效劑量是指制劑包含的總活菌數不能低于1X106CFU/g，一般在1X107CFU/g以上，最高可達到1X1012CFU/g或1X10l2CFU/g以上。全文摘要本發明公開了酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌的藥物新用途，具體涉及酪酸梭菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌單獨或組合作為藥物活性成分制成活菌制劑在制備治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉藥物中的應用。文檔編號A61K35/66GK101134051SQ20061013848公開日2008年3月5日申請日期2006年11月17日優先權日2006年11月17日發明者崔云龍申請人:青島東海藥業有限公司;北京東方百信生物技術有限公司