專利名稱：一種夏天無提取物的制備工藝及其新用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種一種夏天無提取物的制備工藝及其新用途。
背景技術：
夏天無系罌粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens(Thunb.)Pers.的干燥塊莖。上世紀六十年代，江西天施康中藥股份有限公司(原江西余江制藥廠)從民間發掘出夏天無，對其生物學特性、栽培技術、化學成分、藥理作用、毒性反應、臨床應用進行了系統的研究，并相繼研制出夏天無系列制劑。隨著科學技術發展和現代分析技術的應用，對夏天無的研究得以進一步深入，從夏天無植物中分離出原阿片堿、紫堇米定堿、延胡索乙素、畢扣扣靈、巴馬汀、小檗堿等20多種生物堿。
傳統的夏天無總生物堿提取工藝以稀鹽酸提取，通過陽離子交換樹脂吸附純化，用氨水的乙醇溶液回流洗脫，回收乙醇，得夏天無提取物。該工藝提取的夏天無總生物堿純度較低，較多的雜質使制劑的穩定性差，通常多用于制備口服固體制劑。
2003年該公司用大孔吸附樹脂提取夏天無總生物堿，并將其用于治療中樞神經系統退化性疾病的治療進行了深入研究和二次開發，申報了夏天無總生物堿的提取方法及其新用途專利并獲專利證書。為進一步保護新工藝提取的夏天無總生物堿及其應用，公司通過多項試驗摸索出幾種夏天無提取物的制備工藝，并證實了在其他領域中的應用。
發明內容
本發明的目的在于提供一種夏天無提取物的制備工藝及其新用途。該工藝提取的夏天無總生物含量達到80％以上，其中原阿片堿占總生物堿的50％以上。該夏天無中間體及其制劑可應用于中風偏癱、跌撲損傷、風濕性關節痛、小兒麻痹后遺癥、降血壓、抗心律失常、腦血管痙攣、心肌梗死、防治青少年近視眼、鎮痛、戒毒脫癮。
本發明是這樣來實現的，將夏天無藥材打成粗粉，過10目篩，以0.05％-5.5％的稀鹽酸為溶媒提取，收集提取液，用氫氧化鈉調節PH值至7，以每分鐘5ml的速度過大孔吸附樹脂柱，至流出液生物堿呈陽性即飽和；水洗大孔吸附樹脂柱，再用30％-60％的中濃度乙醇洗至顏色變淺后再用60％-98％高濃度乙醇洗脫，至洗脫液生物堿反應呈陰性后，收集高濃度乙醇洗脫液，然后以每分鐘5ml的流速過氧化鋁層析柱吸附除去雜質。經氧化鋁層析柱除雜后，減壓回收乙醇，濃縮物在PH1-5的酸性條件下溶解過濾，濾液在PH8-10的堿性條件下析出沉淀，干噪，得夏天無提取物。
本發明用0.05％-5.5％鹽酸為溶媒提取的方法可以是滲漉、回流、浸漬工藝，調節PH1-5酸性時用鹽酸，調節PH8-10堿性用氫氧化鈉。
本發明的夏天無提取物為夏天無的有效部位總生物堿，其總生物堿含量達到80％以上，其中原阿片堿含量可達到50％以上。
本發明的夏天無提取物可作為各類制劑的中間體，加上適當的輔料制成口服固體制劑的硬膠囊劑、顆粒劑、片劑、滴丸、丸劑、軟膠囊劑，口服液體制劑、注射劑、滴眼劑、經皮吸收制劑的貼劑、巴布膏劑、膜劑。
本發明的夏天無提取物及其制劑可用于中風偏癱、跌打損傷、風濕性關節痛、小兒麻痹后遺癥、降血壓、抗心律失常、腦血管痙攣、心肌梗塞、防治青少年近視眼、鎮痛、戒毒脫癮。
具體實施例方式 實施例1取夏天無藥材1000g，打碎，過10目篩，加1.0％(v/v)稀鹽酸浸漬48小時后以每分鐘1-3ml的速度滲漉，收集滲漉液，至滲漉液生物堿反應呈陰性為止。加10％(g/v)氫氧化鈉溶液調PH值至7，過AB-8型大孔吸附樹脂柱，至流出液呈生物堿反應呈陽性止。依次用水、40％(v/v)乙醇洗至顏色變淡，再用95％(v/v)乙醇洗脫，直到洗出液呈生物堿陰性反應為止，收集95％乙醇洗脫液，過氧化鋁層析柱，收集流出液并減壓回收乙醇，在浸膏中加1.0％(v/v)稀鹽酸調節PH至2-3條件下溶解，然后再次用10％氫氧化鈉溶液調PH至9.0析出生物堿，過濾，沉淀物減壓低溫干燥，即得夏天無提取物。
實施例2取夏天無藥材1000g，打成粗粉，加0.5％(v/v)稀鹽酸回流提取二次，第一次加12倍量稀鹽酸，第二次加10倍量稀鹽酸，每次1小時，過濾，合并濾液，加10％(g/v)氫氧化鈉溶液調節PH至7，過AB-8型大孔吸附樹脂柱，至大孔吸附樹脂飽和為止，先用水洗柱，再用30％-40％(v/v)乙醇洗脫，流出液顏色變淡后用95％(v/v)乙醇洗脫，直至洗脫液生物堿呈陰性反應。合并95％乙醇洗脫液，過氧化鋁層析柱除雜，流出液減壓回收乙醇后，加0.5％稀鹽酸調節PH2-3溶解浸膏，再用10％氫氧化鈉溶液調PH值至9.0，析出提取物，過濾，沉淀物在80℃以下干燥，得夏天無提取物。
實驗結果研究 實驗一夏天無提取物對大鼠實驗性腦血栓形成的影響 取SD大鼠50只，雄性，體重350±30g，隨機分成5組，將夏天無總堿配成溶液劑，灌胃給藥，1ml/100g，每天一次，連續7天。模型組灌生理鹽水，對照組灌尼莫地平懸濁液16mg/kg/d，觀察組用高、中、低夏天無提取物，劑量分別為1.0、0.5、0.25mg/kg/d。
1、夏天無提取物對大鼠腦梗塞區伊文思藍含量的影響 腦血栓模型制造后，肉眼可明顯看出右側腦半球藍染，以顱底藍染程度為甚，左半球看不到藍染，說明右側腦半球血栓模型制造成功。研究表明，夏天無提取物大、中劑量(1.0、0.5mg/kg/d)可減少梗塞半球的伊文思藍含量，說明其能減輕大鼠腦梗塞的嚴重程度。尼莫地平作為臨床常用藥對大鼠血栓模型有明顯的治療作用。
表1夏天無提取物對大鼠腦血栓伊文思藍含量的影響(
±S) 2、夏天無提取物對大鼠腦血栓左右半球濕重的影響 與模型組比較表明，腦血栓模型形成后，右腦濕重/左腦濕重的比例有所增加，夏天無提取物可減輕腦栓塞引起的腦組織水腫。
表2夏天無提取物對大鼠腦梗塞側腦組織水腫程度的影響(
±S) 實驗二夏天無提取物戒毒脫癮作用實驗 夏天無提取物對小鼠具有減少自主活動、抑制扭體反應及延長戊巴比妥鈉閾上劑量睡眠時間的作用，提示該藥對中樞神經系統具有抑制作用。實驗對戊巴比妥鈉閾下、閾上劑量催眠作用的影響。
1、對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠作用的影響 取小鼠40只，隨機分成4組，即空白對照組，夏天無提取物3個劑量組(0.5、1.0、1.50mg/kg)。實驗時各組小鼠灌胃給藥，于給藥后30min各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(25mg/kg)，翻正反射消失達1min以上者為發生睡眠。結果夏天無提取物對戊巴比妥鈉在閾下催眠的劑量下高劑量組(1.50mg/kg)可使少量動物(3只)產生催眠作用，其它各組無明顯影響，長方檢驗無統計學意義。
2、對戊巴比妥鈉閾上劑量催眠作用的影響 取小鼠40只，實驗分組給藥同上，于給藥后30min各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(40mg/kg)，以翻正反射為指標，觀察各組小鼠催眠潛伏期的縮短以及睡眠時間的延長(以小鼠翻正反射消失為睡眠指標)，詳見表3，結果表明，夏天無提取物具有一定的催眠作用。
表3夏天無提取物對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠作用的影響 (
±S，n＝10，t/min) *P＜0.05，與空白組對照 3、對小鼠自主活動的影響 取小鼠50只，雌雄兼用，隨機分成5組，即空白對照組(生理鹽水組)，陽性藥腹腔注射戊巴比妥鈉(25mg/kg)、夏天無提取物3個劑量組(0.5、1.0、1.5mg/kg)。灌胃給藥，分別測定各組小鼠給藥前及給藥后30min、60min的自主活動，方法是將小鼠置于小鼠自主活動儀中穩定5min，測定10min內小鼠自主活動次數，給藥后30min、60min與對照組比較差異有顯著意義(P＜0.01，P＜0.001＝，見表4。結果表明夏天無提取物具有一定的鎮靜作用。
表4夏天無提取物對小鼠自主活動的影響(
±S，n＝10) *P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，與空白組比較 實驗三夏天無提取物對大鼠體內血小板聚集的影響 將大鼠隨機分為空白對照組、阿司匹林組、夏天無提取物低、中、高3個劑量組、夏天無提取物按每天(0.25、0.5、1.0mg/kg)給藥，阿司匹林組按50mg/kg給藥，給藥體積為每100g體重每天1ml灌胃。連續7天，第8天給藥后用20％烏來糖麻醉。常規法制備血小板懸液，用Born’s比濁法測定血小板聚集性。
人體外給藥，抽取健康人靜脈血液以3.8％的枸櫞酸鈉溶液抗凝，血與抗凝劑之比為9∶1，取出富血小板血漿(PRP)，分別加入不同濃度的夏天無提取物溶液，37℃溫育5min，操作方法同上。測定結果并計算血小板最大聚集率。血小板聚集抑制率(％)＝(對照管最大聚集率—給藥管最大聚集率)/對照管最大聚集率。
SIPA的檢測方法。家兔心臟取血，以3.8％的枸櫞酸鈉溶液1∶9抗凝，取血后離心制備PRP和PPP，將受試藥品分為三個劑量加入血小板樣品中，37℃溫育5min，然后取出加入到粘質儀錐板中，剪切應力為8000達因/cm2，剪切時間為5min，吸取20μl錐板中的PRP，計數游離血小板數目，按CA610血細胞方析儀說明書介紹的單通道檢測血小板數目的方法進行檢測，按原始通用公式計算出SIPA值。
1、夏天無提取物對大鼠體內血小板聚集的影響 夏天無提取物對ADP誘導血小板聚集影響見表5。不同濃度的夏天無提取物對花生四烯酸誘導的血小板聚集的影響見表6。中、高劑量對血小板聚集有明顯的抑制作用。
表5夏天無提取物對ADP誘導血小板聚集的影響(
±S) 與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
表6夏天無提取物對花生四烯酸誘導血小板聚集的影響(
±S) 與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
2、夏天無提取物對人血小板聚集的影響 夏天無提取物對ADP誘導的血小板聚集的影響見表7，對花生四烯酸誘導血小板聚集的影響見表8。表7、表8結果表明，中、高劑量對血小板聚集有明顯的抑制作用。
表7夏天無提取物對ADP誘導人血小板聚集的影響(
±S) 與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
表8夏天無提取物對花生四烯酸誘導人血小板聚集的影響 與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
3、夏天無提取物對SIPA的影響 夏天無提取物對剪切力誘導的血小板聚集的影響見表9，中、高劑量對SIPA有明顯的抑制作用。
表9夏天無提取物對剪切力誘導的血小板聚集的影響(
±S) 與模型組比較，**P＜0.01。
權利要求
1、一種夏天無提取物的制備工藝及其新用途，其特征在于將夏天無藥材打成粗粉，用0.05-5.5％的稀鹽酸提取，提取液經堿化后過大孔吸附樹脂柱，水洗后依次用30％-60％中濃度的乙醇和60％-95％高濃度的乙醇洗脫，收集高濃度乙醇洗脫液合并，過氧化鋁層析柱，回收乙醇后在酸性條件溶出，在堿性條件下析出所需要的夏天無提取物。
2、如權利要求1所述的一種夏天無提取物的制備方法，其特征在于用0.05％-5.5％的稀鹽酸提取夏天無，其提取方法選自滲漉、回流、浸漬，其堿化用氫氧化鈉調PH至中性。
3、如權利要求1所述的一種夏天無提取物的制備方法，其特征在于在酸性條件下溶出，其酸性條件是PH1-5，在堿性條件下析出，其堿性條件是PH8-10。
4、一種夏天無提取物的新用途，其特征在于夏天無提取物具有活血通絡，行氣止痛的功效，有止痛、興奮平滑肌、解除肌肉痙攣的作用；具有抑制血栓形成和血小板粘附，減輕腦梗塞引起的伊文思藍藍染和腦水腫；能擴張腦血骨和下肢血管的作用；能顯著對抗缺血性和復灌性心律失常的反應。
5、如權利要求5所述的夏天無提取物的新用途，其特征在于夏天無提取物在中風偏癱、跌撲損傷、風濕性關節炎、坐骨神經痛、小兒麻痹后遺癥、降血壓、抗心律失常、腦血管痙攣、心肌梗死、防治青少年近視眼、鎮痛、戒毒脫癮中的應用。
6、如權利要求5所述的夏天無提取物的應用，其特征在于夏天無提取物可制成口服固體制劑、口服液體制劑、注射劑、滴眼劑、經皮吸收制劑。
全文摘要
本發明公開了一種夏天無提取物的制備工藝及其新用途。本發明的夏天無提取工藝采用0.05－5.5％的鹽酸作溶媒提取堿化后，經大孔吸附樹脂吸附再用水和30％－98％的乙醇依次洗脫，高濃度乙醇洗脫液過氧化鋁層析柱吸附除雜，回收乙醇后在pH1－5條件下溶出，再在pH8－10的條件析出，得夏天無總生物堿提取物，該提取物及其制劑可用于中風偏癱、跌撲損傷、風濕性關節痛、小兒麻痹后遺癥、降血壓、抗心律失常、腦血管痙攣、心肌梗死、防治青少年近視眼、鎮痛、戒毒脫癮。
文檔編號A61P9/00GK1951429SQ200610124689
公開日2007年4月25日 申請日期2006年9月29日 優先權日2006年9月29日
發明者吳朝陽, 徐發紅, 陳科茂, 黃經球 申請人:江西天施康中藥股份有限公司