專利名稱：一種蛇床子素乳劑及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥配制品領域，具體涉及一種含五節環、僅有一個氧原子作為環雜原子的雜環化合物的配制品，特別是一種乳劑。
背景技術：
蛇床子素(Osthol)又名甲氧基歐芹酚，其化學名為7-甲氧基-8異戊烯基香豆素，是首先從傘形科植物中提取的一種香豆素類化合物。其結構式為 研究表明，蛇床子素藥理活性廣泛，具有增強免疫功能、抗骨質疏松、抗病毒、抗突變、擬植物雌激素樣作用、抗誘變、抗腫瘤等功效，特別是其強大的抗腫瘤活性提示該化合物在惡性腫瘤的臨床治療方面具有廣闊的前景，因而受到本領域的普遍關注。
國家知識產權局于2005年1月12日公開了一項發明專利申請“從蛇床子中提取總香豆素及單體成分的工藝及其藥物制劑”(申請號200410010743.3)，該申請公開了將蛇床子素制備成各種制劑的方法；2006年1月25日公開了一項發明專利申請“高純度蛇床子素及其制備方法和以該化合物為活性成分的藥物組合”(申請號200510014590.4)，該申請公開了以蛇床子素為活性成分的藥物組合物的制備方法。由于蛇床子素脂溶性強，幾乎不溶于水，上述申請所公開的蛇床子素制劑或藥物組合物，都是以油性基質為輔料制備的，其制劑的藥物載藥量較低，也不容易被人體吸收，使得蛇床子素的藥效得不到充分發揮。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提高蛇床子素在制劑中的溶解度和穩定性，進而提高其制劑的載藥量以及藥物靶向性。
本發明解決上述技術問題的技術方案是一種蛇床子素乳劑，該乳劑為一種水包油型乳劑，含有質量百分比為0.6～10％的蛇床子素，0.5～15％的乳化劑，0.01～1.0％的助乳化劑，10～30％的油相分散介質，1～3％的滲透壓調節劑，其余為水。
所述的乳化劑可以是阿拉伯膠、明膠、膽固醇、西黃耆膠、吐溫、司盤、平平加、壬烷基酚聚氧乙烯醚、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸鈉、甲基纖維素、高嶺土、硬脂酸鎂、甘油三硬脂酸酯中的一種或兩種以上任意組合的復合乳化劑；所述的乳化劑還可以是天然磷脂、天然磷脂氫化物或合成磷脂。
所述的助乳化劑可以是油酸鈉、油酸、丙二醇、PEG或PVP。
所述的滲透壓調節劑可以是甘油。
所述的pH值調節劑可以是氫氧化鈉、磷酸、磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉。
所述的油相分散介質可以是植物油如大豆油、橄欖油、紅花油、玉米油或中鏈甘油三脂，還可以是乙醇、液體石蠟或人工合成的甘油三酸酯。
上述的乳化劑和油相分散介質是制備本發明乳劑可以選擇的種類，但由于不同的劑型對乳化劑和油相分散介質有不同的要求，本領域技術人員可根據所制備的劑型加以選擇，如制備成注射乳劑，油相分散質可選植物油或乙醇。
本發明所述的蛇床子素乳劑可以是普通乳、亞微乳或復乳，其中所述的蛇床子素普通乳的制備方法是取配方量的乳化劑、助乳化劑加入到適量水中，攪拌均勻，形成水相，取配方量的蛇床子素溶解在油相分散介質中形成油相；將油相滴加入水相中，滴加過程不斷攪拌，最后加入水至蛇床子素濃度為6～100mg/ml。
所述的蛇床子素亞微乳的制備方法是將配方量的助乳化劑、滲透壓調節劑和水攪拌成均勻的混合物，形成水相。蛇床子素和0.5～15％磷脂類乳化劑、10-30％油相分散介質在氮氣流(0.1-2MPa)保護下形成油相，加熱至60℃，油相和水相混合制備成粗乳，加入pH值調節劑調節乳劑的pH值為6.0-9.0，將粗乳轉入高壓乳勻機中循環數次至乳粒符合規定，過濾，最后加入水至蛇床子素濃度為6～100mg/ml。
所述的蛇床子素復乳的制備方法是取0.1～1.0％乳化劑，配方量的助乳化劑和水混合形成水相，取蛇床子素、0.2～1.0％乳化劑加入油相分散介質中形成油相；在攪拌下將水相滴入油相中，高速攪拌，得初乳；另取0.2～1.0％乳化劑和水混合形成外水相，將上述初乳在攪拌下緩緩滴入外水相，經高速攪拌至質量符合規定，最后加入水至蛇床子素濃度為6～100mg/ml。
蛇床子素難溶于水，但在大豆油、中鏈油、橄欖油等脂肪油中有良好的溶解性，每100克上述脂肪油可溶解蛇床子素最高達20～50克，而本發明乳劑每亳升乳劑含蛇床子素可達6～100mg，在用藥劑量方面有較大的選擇范圍；本發明乳劑不需引入有機溶劑(如乙醇或聚乙二醇)即可大大提高載藥量并實現靜脈注射，同時也可避免有機溶劑的副作用；蛇床子素屬內酯結構，易水解和氧化，制備成含藥脂肪乳劑后，大部分藥物分布在油相或油水界面，避免與水直接接觸，這種隔離作用大大提高了藥物穩定性。
本發明蛇床子素乳劑可用于制備治療惡性腫瘤疾病的各種制劑，如口服液、片劑、膠囊劑，亞微乳型蛇床子素乳劑可用于制備注射劑。
下面將通過動物實驗和實施例來證明本發明具有的效果。
以下實驗所用的蛇床子素乳劑均為制備例3所述的乳劑。
1、體外抗腫瘤細胞(HepG2、LOVO、MCF-7、A549、K562、SGC-7901)試驗采用RPMI-1640培養液，加15％新生小牛血清(FCS，56℃滅活30min)，用Hepes緩沖液調pH至約7.2，HepG2(人肝癌細胞)、LOVO(人結腸癌細胞)、MCF-7(人乳腺癌細胞)、A549(人肺腺癌細胞)、K562(人白血病細胞)、SGC-7901(人胃癌細胞)細胞株分別配成單個細胞懸液，在37℃飽和濕度、5％CO2培養箱中培養，待用。取對數生長期的以上各種細胞分別以0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA消化后，用上述培養液稀釋至濃度4～5×104/ml，接種于96孔板，每孔加入190μl。同時設溶劑對照及空白對照，每個劑量設3個平行孔，常規培養24h后，加入不同劑量的受試藥物10μl，在37℃飽和濕度、5％CO2培養箱中培養72h后，每孔加入MTT溶液(用生理鹽水配制，0.2μm微孔濾膜濾過)10μl(5mg/ml)，振蕩混勻后，培養箱中繼續培養4h。棄去上清液，每孔加入150μl二甲基亞砜，微量振蕩器振蕩，約1h后，用酶標儀在570nm波長處測其OD值，計算抑制率，求IC50，測定時減去空白對照。按下列公式計算細胞毒性細胞毒性＝(1-實驗組吸光度值/對照組吸光度值)×100％。
結果見表1。如表1所示，本發明所述乳劑對多種腫瘤細胞均有抑制作用。
表1本發明藥物對不同腫瘤細胞株的抑制作用(％)
注與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
2、體內抗腫瘤作用取接種于昆明小鼠腹腔約7～10天的S180腫瘤細胞腹水，無菌條件下操作，根據細胞濃度加入等量的生理鹽水，配制成瘤細胞懸液(最佳細胞數為1～2×107/ml)，接種于同種異體小鼠左后肢液皮下，雄性體重18～22g，雌性17～21g，每次實驗均用同一性別，每只小鼠注射0.2ml或灌胃0.3ml/10g。瘤細胞接種第2天，將小鼠稱重，并隨機分組，10只小鼠一組，開始給試驗用藥、陰性對照溶劑(ip生理鹽水0.2ml/d)、陽性對照藥(10mg氟尿嘧啶/Kg小鼠體重)，連續給藥10天。至第11天，動物稱重，并剖取各組動物的腫瘤，稱重，最后統計各組動物的抑瘤率。實驗結果及統計結果見表2。如表2所示，本發明所述乳劑具有較好的體內抗腫瘤作用。
瘤重抑制率＝(1-治療組平均瘤重/對照組平均瘤重)×100％表2本發明藥物對S180荷瘤小鼠瘤重及體重的影響
具體實施方式
制備例例1普通乳型
將處方量的豆磷脂、甘油與預熱至80℃的適量注射用水進行混合，轉入組織攪碎機內，以每分鐘20000轉攪拌3分鐘，反復3次，直至豆磷脂均勻分散，成初乳；(2)將處方量的蛇床子素與平平加溶解于精制豆油中，加熱至80℃，然后加至上述分散液中，轉入組織攪碎機內，以每分鐘20000轉攪拌3min，反復3次，直至油相均勻分散；(3)取上述初乳加入預熱至80℃的注射用水使達全量，轉移至高壓乳勻機內，勻化3次，即得蛇床子素濃乳，粒徑在1～100μm范圍內，所得乳劑蛇床子素含量為100mg/ml。
例2亞微乳型
將處方量的卵磷脂放入高速組織攪碎機內，加甘油及30ml注射用水，在在氮氣流下作成均勻的磷脂分散液，將此分散液轉入二步高壓乳勻機內，再加入溶有處方量蛇床子素和吐溫80的花生油，在氮氣流下用4號垂熔玻砂漏斗過濾，在氮氣流下裝瓶、扎蓋。經90℃預熱，再經121℃滅菌15分鐘，沖60℃熱水降溫。得粒徑在1μm以下的乳白色蛇床子素亞微乳，所得乳劑蛇床子素含量為50mg/ml。
例3復乳型
取處方量蛇床子素、單脂酸甘油酯、Tween80加入液體石蠟中，加熱熔融，作為油相；取明膠溶液作為水相，在攪拌下將水相滴入油相中，高速攪拌數小時即得W/O型初乳；將單脂酸甘油酯、Tween80和PVP溶液加入蒸餾水作為外水相，將新制初乳在攪拌下緩緩滴入外水相，經數小時高速攪拌(20000r/min)，即得W/O/W型蛇床子素復乳，粒徑在50μm以下，所得乳劑蛇床子素含量為10mg/ml。
應用例例1口服液取制備例1所述的蛇床子素乳劑(1000ml)，灌裝成100支，滅菌，每支10ml，每支中含蛇床子素為1.0克。
例2片劑取制備例1所述的蛇床子素乳劑(1000ml)，取1000g糊精和4000g淀粉混勻，然后加入蛇床子素乳劑，混合均勻，制粒，于60～80℃烘干，過五號篩，混勻，壓片，共制成10000片，每片含蛇床子素10mg。
例3膠囊劑取制備例1所述的蛇床子素乳劑(1000ml)，取1000g糊精和4000g淀粉混勻，然后加入蛇床子素乳劑，混合均勻，制粒，于60～80℃烘干，過七號篩，裝膠囊，共制成10000粒，每粒含蛇床子素10mg。
例4注射劑取制備例2所述的蛇床子素乳劑(1000ml)，分裝成10瓶，每瓶100ml，滅菌，每瓶蛇床子素乳劑注射液含蛇床子素5.0g。
權利要求
1.一種蛇床子素乳劑，該乳劑為一種水包油型乳劑，含有質量百分比為0.6～10％的蛇床子素，0.5～15％的乳化劑，0.01～1.0％的助乳化劑，10～30％的油相分散介質，1～3％的滲透壓調節劑，其余為水。
2.根據權利要求1所述的蛇床子素乳劑，其特征在于所述的乳化劑是阿拉伯膠、明膠、膽固醇、西黃耆膠、吐溫、司盤、平平加、壬烷基酚聚氧乙烯醚、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸鈉、甲基纖維素、高嶺土、硬脂酸鎂、甘油三硬脂酸酯中的一種或兩種以上任意組合的復合乳化劑；或者是天然磷脂、天然磷脂氫化物或合成磷脂。
3.根據權利要求1所述蛇床子素乳劑，其特征在于所述的助乳化劑是油酸鈉、油酸、丙二醇、PEG或PVP。
4.根據權利要求1所述蛇床子素乳劑，其特征在于所述的滲透壓調節劑是甘油。
5.根據權利要求1所述蛇床子素乳劑，其特征在于所述的pH值調節劑是氫氧化鈉、磷酸、磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉。
6.根據權利要求1所述蛇床子素乳劑，其特征在于所述的油相分散介質是大豆油、橄欖油、紅花油、玉米油、中鏈甘油三脂、乙醇、液體石蠟或人工合成的甘油三酸酯。
7.權利要求1至6之一所述的蛇床子素乳劑的制備方法，該方法由以下步驟組成取配方量的乳化劑、助乳化劑加入到適量水中，攪拌均勻，形成水相，取配方量的蛇床子素溶解在油相分散介質中形成油相；將油相滴加入水相中，滴加過程不斷攪拌，最后加入水至蛇床子素濃度為6～100mg/ml，得到普通型蛇床子素乳劑。
8.權利要求1至6之一所述的蛇床子素乳劑的制備方法，該方法由以下步驟組成將配方量的助乳化劑、滲透壓調節劑和水攪拌成均勻的混合物，形成水相。蛇床子素和0.5～15％磷脂類乳化劑、10-30％油相分散介質在0.1-2MPa氮氣流保護下形成油相，加熱至60℃，油相和水相混合制備成粗乳，加入pH值調節劑調節乳劑的pH值為6.0-9.0，將粗乳轉入高壓乳勻機中循環數次至乳粒符合規定，過濾，最后加入水至蛇床子素濃度為6～100mg/ml，得到亞微乳型蛇床子素乳劑。
9.權利要求1至6之一所述的蛇床子素乳劑的制備方法，該方法由以下步驟組成取0.1～1.0％乳化劑，配方量的助乳化劑和水混合形成水相，取蛇床子素、0.2～1.0％乳化劑加入油相分散介質中形成油相；在攪拌下將水相滴入油相中，高速攪拌，得初乳；另取0.2～1.0％乳化劑和水混合形成外水相，將上述初乳在攪拌下緩緩滴入外水相，經高速攪拌至質量符合規定，最后加入水至蛇床子素濃度為6～100mg/ml，得到復乳型蛇床子素乳劑。
10.權利要求1至6之一所述的蛇床子素乳劑在制備治療惡性腫瘤疾病藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種蛇床子素乳劑，其特征是該乳劑為一種水包油型乳劑，含有質量百分比為0.6～10％的蛇床子素，0.5～15％的乳化劑，0.01～1.0％的助乳化劑，10～30％的油相分散介質，1～3％的滲透壓調節劑，其余為水。本發明所述的蛇床子乳劑可以通過不同的制備方法制備成普通乳、亞微乳或復乳，每毫升乳劑含蛇床子素可達6～100mg，不需引入有機溶劑即可大大提高載藥量并實現靜脈注射，同時也可避免有機溶劑的副作用；大部分藥物分布在油相或油水界面，避免與水直接接觸，大大提高了藥物穩定性。本發明所述的蛇床子乳劑可制備成治療惡性腫瘤的各種制劑。
文檔編號A61K47/34GK1985802SQ20061012421
公開日2007年6月27日 申請日期2006年12月14日 優先權日2006年12月14日
發明者賴小平, 黃松, 蔣東旭, 趙愛國, 黃鳴清, 謝友良 申請人:廣州中醫藥大學