專利名稱：一種仙茅總苷和淫羊藿總黃酮藥物組合物及制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種仙茅和淫羊藿的活性提取組合物及其在醫藥上的應用。該提取物組合物含有仙茅總苷和淫羊藿總黃酮。該組合物可用于制成治療骨質疏松癥的藥物，屬于中藥制藥領域。
背景技術：
骨質疏松是以骨量減少、骨的顯微結構受損、骨骼脆性增加，從而導致骨骼發生骨折的危險性升高為特征的一種疾病現象。骨質疏松癥是一個世界范圍的、越來越引起人們重視的健康問題。目前全世界約2億人患有骨質疏松，其發病率已躍居常見病、多發病的第七位。最新研究表明，在我國一直被認為是老年人特有疾病的骨質疏松癥，實際上在兒童時期就已存在。隨著人口老齡化日趨明顯，作為中老年多發的退行性疾病--骨質疏松癥及其并發癥，已成為一個社會性的健康問題而備受老年病學者的關注，并引起了各國政府的高度重視。
目前治療骨質疏松的藥物中，大部分是骨吸收抑制劑，通過減少破骨細胞的生成(如雌激素)或減少破骨細胞活性(如雙膦酸鹽)來抑制骨的吸收，防止骨量過多丟失。這些藥物存在著一定的副作用，且治療費用高。
骨質疏松在中醫中稱為骨瘺，中醫認為，腎為先天之本，主骨生髓，骨的生長、發育、強勁、衰弱與腎精盛衰關系密切。腎精充足則髓生化有源，骨骼得以滋養而強健有力。因此，中醫在治療骨質疏松方面，以補腎為主，調動人體內因從而達到強骨的目的。仙茅為石蒜科植物仙茅根莖，性辛、熱，有毒；歸腎、肝、脾經；補腎陽，強筋骨，祛寒濕；用于陽痿精冷，筋骨痿軟，腰膝冷痹，陽虛冷瀉。《本草正義》中稱仙茅“補陽溫腎之專藥，亦兼能祛除寒濕。”淫羊藿為小檗科植物淫羊藿、箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿或朝鮮淫羊藿的地上部分。淫羊藿味辛甘、性溫，入腎經；具有補腎陽，強筋骨，祛風濕之功效；用于陽痿遺精，筋骨痿軟，風濕痹痛，麻木拘攣，更年期高血壓。李時珍在《本草綱目》中稱淫羊藿有“益精氣，堅筋骨，補腰膝，強心力”之功效。上海著名中醫專家張伯訥將仙茅、淫羊藿、巴戟天、當歸、知母和黃柏組成方劑，即二仙湯，用以治療更年期綜合征。臨床應用表明二仙湯對治療骨質疏松有一定的療效。申請號為200510023433.X的中國專利公開文獻中報導了將仙茅、淫羊藿、巴戟天、當歸、知母和黃柏按一定比例煎煮提取制成的中藥提取物用以防治婦女更年期綜合癥或骨質疏松癥。但湯劑服用不方便，質量不穩定，有效成分不明確；申請號為200510023433.X的中國專利所發明的中藥提取物，亦存在有效成分不明確，質量不易控制等缺點。
現代醫學研究表明仙茅也具有治療骨質疏松的作用，見高曉艷，杜曉鵑，趙春穎.補腎中藥對成骨樣細胞UMR106的增殖的影響(I).承德醫學院學報，2001，18(4)283沈驊睿，呂文科，楊松濤.中藥仙茅對骨髓干細胞向神經元細胞定向誘導的實驗研究.成都中醫藥大學學報，2005，28(4)8-11及黃有霖.仙茅的研究進展.中藥材，2003，26(3)225。淫羊藿中的淫羊藿總黃酮具有治療骨質疏松的作用，見李勇，季暉，李萍，謝林.淫羊藿總黃酮對體外培養成骨細胞的影響.中國藥科大學學報，2002，33(1)48-50劉亦恒，藏洪敏，張海英，陳君長.淫羊藿總黃酮對成骨細胞中OPG和RANKLmRNA基因表達的影響的實驗研究.中藥材，2005，28(12)1076-1078及馬慧萍，賈正平，白孟海，葛欣，何曉英，陳克明.淫羊藿總黃酮對大鼠實驗性骨質疏松生化學指標的影響.中國藥理學通報，2003，(02)。以上是仙茅或淫羊藿總黃酮單一活性組分對骨質疏松的治療，尚沒有將仙茅的活性組分仙茅總苷和淫羊藿總黃酮組合起來用于骨質疏松癥的治療或研究。
發明內容
本發明的目的在于解決西藥現有技術和現有中藥在治療骨質疏松癥的不足，在傳統中醫理論的基礎上，運用現代醫藥理論和科技技術，開發一種組方精簡，有效成分明確，質量可控的仙茅總苷和淫羊藿總黃酮藥物組合物。仙茅總苷淫羊藿總黃酮的重量比例為1∶0.0.1～50，其最佳重量比例為1∶0.5～10。
本組合物與藥學上所稱的輔料或基質組合可制成液體或固體制劑。固體制劑包括片劑、膠囊劑(含軟膠囊)、丸劑、顆粒劑、滴丸劑、霜劑、貼劑、膏劑等。液體制劑包括口服液體制劑、注射液體制劑和外用液體制劑等。
所述制劑的給藥途徑包括口服給藥和非口服給藥，優選口服給藥。
本發明的另一目的是提供該藥物組合物在制備治療骨質疏松癥的藥物中的應用。
本發明人將淫羊藿總黃酮和仙茅總苷按一定比例組合后，通過藥理藥效進行兩者比例的篩選，反復試驗，得出其較優的配比，其組合物在治療骨質疏松癥方面，療效確切，療效高于淫羊藿總黃酮或仙茅總苷單獨應用。
本發明可以通過以下方案進行實施(1)仙茅總苷的制備取仙茅藥材，粉碎，加6～10倍量水或含醇的溶液進行提取，提取1～3次，每次1～2小時，合并提取液，濃縮為相對密度1.18～1.20(60℃測)的稠膏，加蒸餾水適量稀釋，冷藏18～24小時后，濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱，首先用水洗脫，洗至洗脫液顏色較淡時，用20％～80％濃度的乙醇進行洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，即得仙茅總苷成品。仙茅總苷的含量大于50％(2)淫羊藿總黃酮的制備取淫羊藿藥材，加8～25倍醇水混合物進行提取，得提取液，濃縮為相對密度1.18～1.20(60℃測)的稠膏，加水適量溶解稀釋，離心過濾，收集濾液。將所得的濾液，通過大孔樹脂柱，首先用水洗脫，棄去洗脫液，然后用20％～80％的乙醇進行洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得淫羊藿總黃酮成品。淫羊藿總黃酮的含量大于50％。
取仙茅總苷和淫羊藿總黃酮按一定比例組合后，與藥學上所稱的輔料或基質組合可制成液體或固體制劑。
本發明的有益效果1.該組合物基于中醫藥理論，參考醫學資料，選用了治療骨質疏松癥的傳統藥材的有效部位組合。因此具有傳統中醫藥的臨床有效性基礎，具有現代特色。
2.藥效學實驗證實該組合物能有效的治療骨質疏松癥，其療效高于淫羊藿總黃酮或仙茅總苷任一活性組分，二者具有較好的協同增效作用。
3.該組合物療效確切，小劑量即可起到治療作用，服用方便。
本發明藥效學實驗如下1.淫羊藿總黃酮與仙茅總苷組合物對成骨細胞的影響(1)成骨細胞的培養取新生1～3天的SD大鼠，無菌取顱蓋骨，剔除粘附的骨膜、血管和結締組織，剪碎，經0.25％胰蛋白酶37℃消化15分鐘，每3分鐘振蕩一次，棄去消化液，再以0.1％II型膠原酶37℃、磁力攪拌(50r/min)下消化60min，消化液1000r/m/in離心5min，收集細胞，接種于含10％新生牛血清DM EM培養液的培養瓶中，置37℃、5％CO2孵育箱中培養，24h換液，以后每3天換液一次，待細胞鋪滿培養瓶時，用0.25％胰蛋白酶消化，并傳代培養，所用實驗細胞均為第3代細胞。
(2)細胞增殖檢測細胞按2.5×101個/ml密度接種于96孔板，24h后分別加入濃度均為5μg/ml的淫羊藿總黃酮、仙茅總苷、仙茅總苷和羊藿總黃酮的組合物A(重量比1∶0.1)、仙茅總苷和羊藿總黃酮的組合物B(重量比1∶50)，并設陽性對照組NaF1.0×10-6及空白對照組，每組6孔。在加入受試藥后68h，每孔加入20μlM TT，繼續培養4h后小心吸棄培養液，再每孔加入150μl DM SO(分析純)，于酶標儀上490nm波長處測各孔吸光度值，結果用OD490表示。
(3)礦化結節形成測定細胞以2.0×104個/cm2密度接種于24孔板，24h后換含10％新生牛血清的DM EM培養液(其中含有50μg/ml維生素C和10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉)，同時加入濃度均為5μg/ml的淫羊藿總黃酮、仙茅總苷、仙茅總苷和淫羊藿總黃酮的組合物A(重量比1∶0.1)、仙茅總苷和羊藿總黃酮的組合物B(重量比1∶50)，并設陽性對照組氟化鈉1.0×10-6及空白對照組，每組重復3孔。每3d換液一次，于第15d用95％乙醇原位固定，0.1％茜素紅染色30min，以橘紅色結節、邊界清晰、大于200μm為標準，于低倍光鏡下作礦化結節計數。礦化是成骨細胞成熟的表現。
(4)結果見下表1。
表1樣品對細胞增殖及礦化結節形成的影響
p*＜0.05vs淫羊藿總黃酮組 p**＜0.05vs氟化鈉組有上表可知，淫羊藿總黃酮和仙茅總苷組合物組A與B組均與淫羊藿總黃酮存在顯著差別，仙茅總苷與NaF組存在顯著差別，即仙茅總苷和淫羊藿總黃酮組合物能有效的促進成骨細胞增值及分化成熟，并且作用效果優于淫羊藿總黃酮或仙茅總苷單一成分。
2.仙茅總苷與淫羊藿總黃酮組合物對大鼠骨質疏松的治療及其組合比例篩選取仙茅總苷和淫羊藿總黃酮按以下比例組合組合物A仙茅總苷∶淫羊藿總黃酮＝1∶0.05組合物B仙茅總苷∶淫羊藿總黃酮＝1∶0.1組合物C仙茅總苷∶淫羊藿總黃酮＝1∶0.5組合物D仙茅總苷∶淫羊藿總黃酮＝1∶10組合物E仙茅總苷∶淫羊藿總黃酮＝1∶50組合物F仙茅總苷∶淫羊藿總黃酮＝1∶80將以上組合物分別混合均勻，藥物的總量恒定為50g。
(1)原發性骨質疏松癥模型的建立取體重170～200g雌性大鼠90只隨機分為9組，每組10只，分別為組合物A組、組合物B組、組合物C組、組合物D組、組合物E組、組合物F組、陽性對照組、模型對照組和假手術組。其中前8組大鼠經乙醚麻醉后，腹部消毒備皮后切入，完全摘除雙側卵巢。假手術組過程與前8組相同，但不切除卵巢而切除小塊脂肪組織。術后飼養3個月，以建立骨質疏松模型。
(2)給藥方法仙茅總苷和淫羊藿總黃酮組合物組分別按每日用藥量0.10g/kg體重，取仙茅總苷和淫羊藿總黃酮組合物A、B、C、D、E和F各0.1g分別加入10ml純化水，每日以10ml/kg體重的劑量灌胃；陽性對照組，以二仙湯提取物0.10g加入10ml純化水，每日以10ml/kg體重的劑量灌胃；對照模型組和假手術組每天以純化水灌胃。
(3)測定指標各組按要求試驗15周，處死大鼠，測量大鼠股骨中點及股骨干骺端骨密度，剝離左側股骨，測量股骨的長度，將股骨烤干至恒重，稱量骨干重。依照中華人民共和國國家標準GB12398-90測定骨鈣含量。結果見表2。
表2樣品對大鼠股骨的長度、重量、骨密度及骨鈣的影響(n＝10)
p*＜0.05vs陽性對照組，p**＜0.05vs組合物B組，p***＜0.05vs組合物E組有結果可知，各組大鼠股骨長度無顯著差異；模型對照組的大鼠股骨重量、股骨干骺端骨密度、骨中點骨密度、骨鈣含量均顯著低于其他組。仙茅總苷和淫羊藿總黃酮組合物B、C、D和E大鼠股骨重量、股骨干骺端骨密度、骨中點骨密度、骨鈣含量均顯著高于陽性對照組。同時，仙茅總苷和淫羊藿總黃酮組合物A、B、C、D、E和F組間比較，B、C、D、E組各項指標優于A和F。
由藥效學試驗結果可知，仙茅總苷與淫羊藿總黃酮藥物組合物具有顯著的治療骨質疏松作用，其治療效果優于淫羊藿總黃酮或仙茅總苷單一活性組分，也優于二仙湯。且仙茅總苷與淫羊藿總黃酮的重量比例優選為1∶0.1～50，最佳比例優選為1∶0.5～10。
具體實施例方式
本發明結合實施例作進一步說明。
實施例1仙茅總苷的制備取仙茅藥材，粉碎成粗粉，取2kg，加10倍量70％乙醇進行回流提取3次，每次1.5小時，合并提取液，回收乙醇至相對密度1.18～1.20(60℃測)的稠膏，加蒸餾水5L使溶解，冷藏24小時后抽濾，取濾液通過D101型大孔吸附樹脂柱，然后分別用4倍柱床體積的水和6倍柱床體積的50％乙醇進行洗脫，收集50％的乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得仙茅總苷成品，重量為50.2g，仙茅總苷含量為60.6％。
實施例2淫羊藿總黃酮的制備取淫羊藿藥材2kg，加20倍50％乙醇進行回流提取3次，每次2小時，合并提取液，回收乙醇至相對密度1.18～1.20(60℃測)的稠膏，放冷，加蒸餾水10L使溶解，離心濾過，取濾液使其以30ml/min的流速通過D140型大孔樹脂柱(徑高比1∶8)，然后分別用3倍柱床體積的水和5倍柱床體積的65％乙醇進行洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得淫羊藿總黃酮成品，重量為187.5g，淫羊藿總黃酮含量為72.8％。
實施例3片劑的制備將仙茅總苷成品5g、淫羊藿總黃酮成品15g、淀粉75g、羧甲基淀粉鈉5g混合均勻，以60％乙醇25ml為潤濕劑，制粒，加入硬脂酸鎂0.5g混勻，制成片劑。
實施例4膠囊劑的制備將仙茅總苷成品5g、淫羊藿總黃酮成品20g、微晶纖維素55g、滑石粉3g混合均勻，直接填充膠囊。
實施例5分散片的制備將仙茅總苷成品10g、淫羊藿總黃酮成品20g、微晶纖維素20g、羧甲基纖維素鈣5g與聚乙烯吡咯烷酮1.5g混勻，以1％羥丙基甲基纖維素水溶液為粘合劑，制軟材，過30目篩制粒，60℃鼓風干燥約1小時，放置室溫后過篩整粒，加入1％的微粉硅膠和0.5g聚乙烯吡咯烷酮混合均勻，控制片劑硬度在(5.0±0.5)kg，壓片。
實施例6緩釋膠囊的制備(1)空白丸芯的制備取80g糊精置于高速混合制粒機中，加純化水制成細小顆粒，將此顆粒置包衣鍋中滾動約45min成丸芯，取出烘干，過20目篩，備用。
(2)素丸的制備及包衣將仙茅總苷成品5g、淫羊藿總黃酮成品25g、硬脂酸15g分別粉碎過100目篩，混合均勻，置70℃的烘箱使硬脂酸融化，取出過100目篩，作為素丸細粉備用。在包衣鍋中加入已制好的空白丸芯，不斷旋轉，用5％的聚乙烯吡咯烷酮醇液噴濕丸芯表面，間斷撒入素丸細粉，吹熱風干燥，重復操作至素丸細粉全部附著在丸芯上，取出，70℃以下烘干。
將已烘干的素丸胃包衣鍋中，不斷旋轉，間斷噴如5％的乙基纖維素包衣液約600ml，吹熱風干燥，重復至包衣液用完。取出，70℃以下烘干。即得緩釋微丸，填充與2號胃溶型膠囊。
實施例7親水凝膠骨架緩釋片的制備取仙茅總苷成品(80目)20g、淫羊藿總黃酮成品(80目)10g、羥丙基甲基纖維素(15Pa*s，80目)35g、乙基纖維素20g、乳糖10g混合均勻，以1.5％羥丙基甲基纖維素60％乙醇溶液為粘合劑，采用沸騰制粒機，30～40℃噴漿，40～50℃干燥0.5小時，加入硬脂酸鎂0.3g，用9mm淺凹沖頭壓片，即得。
實施例8胃內滯留漂浮型控釋片的制備取仙茅總苷成品(80目)5g、淫羊藿總黃酮成品(80目)50g、羥丙基甲基纖維K4M(80目)23g、羧甲基纖維素鈉1g、十八醇25g、硬脂酸鎂0.3g混合均勻，全粉末直接壓片。
實施例9軟膠囊的制備(1)囊材膠液的制備將純化水、尼泊金乙酯和甘油加熱至60～70℃，加入明膠浸泡并溶解；另取適量水與甘油，加三氧化二鐵及二氧化鈦研磨，混勻后，加至明膠溶液中，真空脫氣。
(2)藥液的制備取仙茅總苷成品和淫羊藿總黃酮成品粉碎，過100目篩，各取20g，加入大豆油30g、聚乙二醇(400)6ml、甘油6ml和吐溫-80 2ml，研磨均勻，備用。
取以上囊材膠液和藥液，采用壓制法制成軟膠囊。
實施例10滴丸的制備將聚乙二醇(6000)40g和硬脂酸10g的混合物于水浴中加熱至全部融化后，加入仙茅總苷成品(100目)5g和淫羊藿總黃酮成品(100目)30g，攪拌均勻后裝入滴瓶中，于85±1℃滴制，滴入盛有冷卻的液體石蠟和二甲硅油的玻璃冷凝柱中，成型后取出，用吸水紙吸去冷凝劑，即得。
實施例11巴布劑的制備取4g明膠加入適量水中溶脹后，于50℃水浴使溶解，放入攪拌機中攪拌；另取甘油5g加入氧化鋅0.8g、蓖麻油0.5g聚丙烯酸1g和阿拉伯樹膠3g，攪拌均勻，將所得甘油漿緩緩加入明膠液中，邊加邊攪拌，同時加入仙茅總苷成品(100目)1g、淫羊藿總黃酮成品(100目)7g和氮酮0.3g，攪拌約30分鐘，使其混勻，即得膏料。將膏料倒入涂布劑中，涂在襯布上，膏體厚度1.0mm，放置24小時后，覆以聚乙烯薄膜，切片，即得。
實施例12口服液的制備取仙茅總苷成品10g、淫羊藿總黃酮成品1g和甜菊素0.1g，加水適量，攪勻，冷藏，靜置，濾過，灌裝，滅菌，即得。
實施例13注射用制劑的制備取仙茅總苷成品2g、淫羊藿總黃酮成品100g，加注射用水適量，攪拌使溶解，加入5％的甘露醇，攪拌使溶解，冷藏，濾過，濾液加熱至微沸，再加入0.1％的活性炭，保溫15分鐘，濾過，再用0.22μm的微孔濾膜濾過，灌裝，凍干，即得。
權利要求
1.一種用于治療骨質疏松癥的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要由仙茅總苷和淫羊藿總黃酮組成。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征是該組合物組成比例為仙茅總苷淫羊藿總黃酮的重量比值為1∶0.1～50。
3.根據權利要求1或2所述的組合物，其特征是該組合物仙茅總苷淫羊藿總黃酮的優選重量比值為1∶0.5～10。
4.根據權利要求1-3任一權利要求所述的藥物組合物，其特征在于仙茅總苷的含量不低于50％，淫羊藿總黃酮的含量大于50％。
5.根據權利要求1-3任一權利要求所述的仙茅總苷，可以通過以下步驟制備(1)取仙茅藥材，加水或醇水混合物進行提取，得提取液。(2)取(1)所得的提取液，濃縮為稠膏(無醇味)。(3)取(2)所得的稠膏，加水適量稀釋，冷藏后濾過，收集濾液。(4)取(3)所得的濾液，通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，棄去洗脫液，然后用10％～80％的乙醇進行洗脫，收集乙醇洗脫液。(5)取(4)所得的乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，即得仙茅總苷成品。
6.根據權利要求1-3任一權利要求所述的淫羊藿總黃酮，可以通過以下步驟制備(1)取淫羊藿藥材，加醇水混合物進行提取，得提取液。(2)取(1)所得的提取液，濃縮為稠膏。(3)取(2)所得的稠膏，加水適量溶解稀釋，離心過濾，收集濾液。(4)取(3)所得的濾液，通過大孔吸附樹脂柱，首先用水洗脫，棄去洗脫液，然后用20％～80％的乙醇進行洗脫，收集乙醇洗脫液。(5)取(4)所得的乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得淫羊藿總黃酮成品。
7.根據權利要求1-3所述的仙茅總苷和淫羊藿總黃酮的藥物組合物，其特征是該組合物可以與藥學上所稱的輔料或基質制備成包括液體和固體的藥物制劑。
8.根據權利要求6所述的藥物制劑，其特征是固體制劑主要包括片劑、膠囊劑(含軟膠囊)、丸劑、顆粒劑、滴丸劑、霜劑、貼劑、膏劑。
9.根據權利要求6所述的藥物制劑，其特征是液體制劑主要包括口服液體制劑、注射液體制劑。
10.仙茅總苷和淫羊藿總黃酮組合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供一種主要由仙茅總苷和淫羊藿總黃酮組成的藥物組合物。該組合物與藥學上所稱的輔料或基質可制備成包括液體和固體的藥物制劑。本發明提供的組合物可用于治療骨質疏松癥藥物的制備。該藥物組合物組成是仙茅總苷∶淫羊藿總黃酮的重量比值為1∶0.01～50，其優選重量比值為1∶0.5～10。
文檔編號A61K9/14GK1899462SQ20061009477
公開日2007年1月24日 申請日期2006年7月24日 優先權日2006年7月24日
發明者王愛民, 劉文堯, 朱海龍 申請人:北京卓越陽光醫藥科技有限公司