專利名稱：地黃寡糖及其提取方法
技術領域：
本發明涉及化合物及其提取方法，特別是涉及地黃寡糖及其提取方法。
背景技術：
腦血管疾病是一種嚴重危害人民健康的常見病，其發病率、患病率、死亡率和致殘率都很高。統計資料表明，中國患心腦血管疾病的老年人在2000年達到1.3億，占我國人口總數的11％；初步估計，到2050年這類疾病的老年患者將達2.3億，占我國人口總數的20％。其中，65歲以上老年人腦血管疾病及腦癡呆的發病率在15％以上。腦血管疾病及腦癡呆不僅會引起老年人運動障礙，還會引起老年人語言和精神方面的障礙，從而降低其生活質量，因此，迫切需要增強老年人體質的醫療保健藥物及老年人神經系統疾病的治療藥物。
地黃為玄參科多年生草本植物，其新鮮或干燥塊根，始載于《神農本草經》，列為上品，性味甘、微溫。歸肝、腎經，具有補血滋陰，益精填髓功效。
現代藥理學證明，地黃中的有效成分地黃寡糖具有抗衰老、益智、增強免疫調節和治療心腦血管疾病等作用，因此，迫切需要一種簡單易行且經濟適用的地黃寡糖的提取方法。
發明內容
本發明的目的是一種簡單易行且經濟適用的地黃寡糖的提取方法。
本發明所提供的地黃寡糖的提取方法，包括以下步驟1)粉碎地黃；2)將地黃用水浸泡1-10小時；3)去除浸出液中的沉淀物，收集浸出液；4)對上清液減壓濃縮，回收濃縮液，或在40-60℃下將上清液揮干，得到浸膏；5)將濃縮液與體積百分含量(V/V)為70-100％的乙醇按體積比為1∶3-7混勻，或將浸膏溶解于70-100％乙醇中，以沉淀多糖；6)對步驟5)得到的混合液進行過濾，收集過濾液；7)對過濾液在20-60℃下真空減壓濃縮，同時除去乙醇，回收濃縮液；8)對濃縮液進行超濾，去除分子量大于5000道爾頓的物質，收集超濾液；9)將超濾液用活性炭進行吸附以除色素，得到地黃寡糖提取液。
在上述提取方法中，為獲得更好的提取效果，步驟1)中最好將地黃粉碎至粒徑小于2mm的顆粒，再進行提取。
步驟2)中用于浸提的水優選為注射用水。
步驟3)中可用離心的方法去除浸出液中的沉淀物。
為提高原料利用率，可將此步驟2)-3)重復1-3次，合并浸出液。
步驟4)中的減壓濃縮可在10-60℃下進行，優選為20-50℃。
步驟6)中可用孔徑為0.4-0.5mm的濾膜對混合液進行過濾，所述濾膜孔徑優選為0.45mm。
步驟8)中可用孔徑為10-0.2μm的超濾膜或截留范圍為3000-20000的超濾器對濃縮液進行超濾。
上述提取方法對鮮地黃和生地黃均適用。
此外，用上述方法獲得的地黃寡糖也屬于本發明的保護范圍。
同時，可以用上述方法獲得的地黃寡糖為活性成分制備成心腦血管疾病及其后遺癥、糖尿病和便秘等疾病的治療性藥物。
上述藥物中原料藥地黃寡糖的含量應大于85％。
需要的時候，在本發明所述應用中還可以加入一種或多種藥學上可接受的輔料，所述輔料包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、吸收促進劑、表面活性劑、潤滑劑、穩定劑等，必要時還可加入香味劑、甜味劑及色素等。
本發明所述應用除制成膠囊劑外，還可以制成片劑、粒劑、粉劑、口服劑、注射液等多種藥物形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規方法制備。
上述藥物的成人口服用量一般為400mg/kg/d，可以一次或多次使用，療程為10至20天。
本發明提供了一種有效的地黃寡糖的提取方法。該提取方法具有以下優點1、操作簡單，易于進行工業化應用；2、提取成本低廉；3、所用提取溶劑的毒性較小，提取周期短；4、提取液中地黃寡糖含量高，含量可達85％以上，且分子量小于5000道爾頓。同時，可以用本發明方法獲得的地黃寡糖為活性成分制備成心腦血管疾病及其后遺癥、糖尿病和便秘等疾病的治療性藥物。本發明為地黃寡糖的大規模生產奠定了基礎，并將在地黃寡糖的有效利用中發揮巨大作用，在醫藥領域的應用前景廣闊。
下面結合具體實施例對本發明做進一步詳細說明。
圖1為本發明地黃寡糖提取工藝的流程圖
具體實施例方式
下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規方法。
實施例1、地黃寡糖的提取及其質量鑒定一、地黃寡糖的提取選擇符合2005年版《中國藥典》標準的生地黃藥材，用下述方法從中提取地黃寡糖，提取工藝的流程圖見圖1，包括以下步驟1)取藥材20公斤，清洗干凈，將藥材粉碎成小于2mm的顆粒；2)用注射用水50升將地黃顆粒浸泡5小時；3)對浸出液進行離心，得到浸出液約45升；4)在35℃下將上清液減壓干燥至20升；5)將濃縮液與80升體積百分含量為95％的乙醇混勻；6)對步驟5)得到的混合液用孔徑為0.45mm的濾膜進行過濾，得到過濾液約100升；7)將過濾液在35℃下真空減壓濃縮至20升；8)將濃縮液用分子量為5000道爾頓的超濾器(購自北京旭邦膜設備有限責任公司)超濾，得到超濾液約20升；9)將超濾液用醫用活性炭進行吸附，得到地黃寡糖提取液約20升。
二、地黃寡糖的質量鑒定對步驟一獲得的黃寡糖提取液從下述幾方面進行質量鑒定1、性狀淡黃色的澄明液體。
2、鑒別(1)取地黃寡糖提取液1mL，加5％α-奈酚乙醇溶液5滴，搖勻，沿管壁緩緩加入濃硫酸0.5mL，在供試液與硫酸交界處可見兩液界面有紫紅色環，與預期結果相符。
(2)取地黃寡糖提取液2mL，加入茚三酮試液1滴，搖勻，加熱煮沸1分鐘，放冷后溶液無藍紫色，與預期結果相符。
3、高效液相色譜法檢測高分子量物質含量采用高效液相色譜法(中國藥典2005年版二部附錄VD)測定地黃寡糖提取液中的高分子量物質含量，用TSK-G2000swxl凝膠色譜柱(日本TOSOHAAS公司)，以乙腈—三氟醋酸—水(40∶0.1∶60)為流動相，流速為每分鐘0.8mL，檢測波長為190nm。理論塔板數按胰島素峰計算應不低于800。檢測方法為取地黃寡糖提取液，按標示量加水制成每1mL中含40mg地黃寡糖的溶液，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，將先于胰島素峰保留時間的峰視為高分子物質，按面積歸一化法計算高分子量物質含量。結果高分子量物質含量小于2％，符合標準。
4、重金屬含量檢測依據《中國藥典》2005年版二部附錄IXE第一法對地黃寡糖提取液中的重金屬含量進行檢測。結果重金屬含量低于百萬分之十，符合標準。
5、總糖含量測定1)稱量干重稱取灼燒過的海砂約1.5克，鋪平于稱量瓶的底部，置五氧化二磷干燥器中，于(53±2)℃下干燥至恒重。精密稱取地黃寡糖提取液2mL，置于上述稱量瓶中，在相同溫度下減壓干燥至恒重，精密稱定，依據苯酚硫酸法測定總糖含量，并按下述公式計算總糖含量總糖含量＝總糖/干重*100％結果總糖含量大于總干重的85％以上，表明用本發明的方法獲得了純度較高的地黃寡糖提取液，地黃寡糖的含量達86％。
實施例2、地黃寡糖的提取選擇符合2005年版《中國藥典》標準的鮮地黃，用下述方法從中提取地黃寡糖，包括以下步驟1)取藥材20公斤，清洗干凈，將藥材粉碎成小于2mm的顆粒；2)用注射用水50升將地黃顆粒浸泡8小時；3)對浸出液進行離心，得到上清液約45升；4)在50℃下將上清液揮干，得到浸膏；5)將浸膏粉碎，與100升體積百分含量為75％的乙醇混勻；6)對步驟5)得到的混合液用孔徑為0.45mm的濾膜進行過濾，得到過濾液約100升；7)將過濾液在40℃下真空減壓濃縮至20升；8)將濃縮液用分子量為5000道爾頓的超濾器(購自北京旭邦膜設備有限責任公司)超濾，得到超濾液約20升；9)將超濾液用醫用活性炭進行吸附，得到地黃寡糖提取液約20升。
用與實施例1相同的方法對提取的地黃寡糖進行質量鑒定，結果各項指標均符合標準，獲得了純度較高的地黃寡糖提取液，地黃寡糖的含量達90％。
實施例3、地黃寡糖的提取及其質量鑒定選擇符合2005年版《中國藥典》標準的生地黃藥材，用下述方法從中提取地黃寡糖，包括以下步驟1)取藥材20公斤，清洗干凈，將藥材粉碎成小于2mm的顆粒；2)用注射用水50升將地黃顆粒浸泡1.5小時；3)對浸出液進行離心，收集上清液；4)重復步驟2)-步驟3)3次，合并上清液，共得到浸出液約55升；5)將上清液減壓干燥至20升；6)將濃縮液與80升體積百分含量為95％的乙醇混勻；7)對步驟5)得到的混合液用孔徑為0.45mm的濾膜進行過濾，得到過濾液約100升；8)將過濾液在30℃下真空減壓濃縮至20升；9)將濃縮液用分子量為5000道爾頓的超濾器(購自北京旭邦膜設備有限責任公司)超濾，得到超濾液約20升；10)將超濾液用醫用活性炭進行吸附，得到地黃寡糖提取液約20升。
用與實施例1相同的方法對提取的地黃寡糖進行質量鑒定，結果各項指標均符合標準，獲得了純度較高的地黃寡糖提取液，地黃寡糖的含量達88％。
實施例4、動物實驗1、血管性癡呆試驗給予昆明小鼠腹腔注射實施例1提取的地黃寡糖5天，每次5mg/10g鼠重，每日一次，對給藥小鼠進行血管性癡呆試驗。結果表明較給藥可以提高小鼠的跳臺及水迷宮學習成績，和假手術組無明顯差異；明顯減少神經元的死亡數量。
2、小鼠耐缺氧試驗給予昆明小鼠腹腔注射實施例2提取的地黃寡糖5mg/10g鼠重，以未給藥小鼠為對照，對兩組小鼠進行耐缺氧試驗。結果給藥后小鼠耐缺氧的能力得到明顯提高，且和對照組相比，給藥組小鼠海馬組織的含水率降低。
3、海馬神經細胞的缺氧試驗檢測缺氧對海馬神經細胞的損傷，一組為給藥組給予實施例2提取的地黃寡糖1％(mg/V)，一組為不給藥的對照組。結果表明本發明的地黃寡糖可以降低缺氧對海馬神經細胞的損傷，LDH露出量明顯比對照組減少。
4、對小鼠腸的影響給予昆明小鼠灌胃實施例3提取的地黃寡糖5mg/10g鼠重，連續5天，每日一次，以未給藥小鼠為對照，觀察兩組小鼠的腸蠕動頻率，并統計腸道有益菌數量。結果與對照組小鼠相比，給藥小鼠的腸蠕動頻率和腸道有益菌數量得到顯著提高。
5、對四氧嘧啶糖尿病模型大鼠影響對四氧嘧啶糖尿病模型大鼠每日腹腔注射實施例1提取的地黃寡肽5mg/10g，連續7天，以未給藥的四氧嘧啶糖尿病模型大鼠為對照，對兩組大鼠進行觀察。結果與對照組大鼠相比，給藥大鼠的血糖值明顯降低。
權利要求
1.一種地黃寡糖的提取方法，包括以下步驟1)粉碎地黃；2)將地黃用水浸泡1-10小時；3)去除浸出液中的沉淀物，收集浸出液；4)對上清液減壓濃縮，回收濃縮液，或在40-60℃下將上清液揮干，得到浸膏；5)將濃縮液與體積百分含量為70-100％的乙醇按體積比為1∶3-7混勻，或將浸膏溶解于70-100％乙醇中；6)對步驟5)得到的混合液進行過濾，收集過濾液；7)對過濾液在20-60℃下真空減壓濃縮，回收濃縮液；8)對濃縮液進行超濾，去除分子量大于5000道爾頓的物質，收集超濾液；9)將超濾液用活性炭進行吸附以除色素，得到地黃寡糖提取液。
2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于所述步驟1)中的地黃包括鮮地黃和生地黃；將地黃粉碎至粒徑小于2mm的顆粒。
3.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于所述步驟2)中用于浸提的水為注射用水。
4.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于所述步驟3)中用離心或過濾的方法去除浸出液中的沉淀物。
5.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于將所述步驟2)-步驟3)重復1-3次，合并浸出液。
6.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于所述步驟4)中的減壓濃縮在10-60℃下進行。
7.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于所述步驟6)中用孔徑為0.4-0.5mm的濾膜對混合液進行過濾。
8.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于所述步驟8)中用孔徑為10-0.2μm的超濾膜或截留范圍為3000-20000的超濾器對濃縮液進行超濾。
9.用權利要求1-8任一項所述方法得到的地黃寡糖。
10.權利要求9所述的地黃寡糖在制備心腦血管疾病及其后遺癥、糖尿病和便秘治療性藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種地黃寡糖及其提取方法。該方法包括以下步驟1)粉碎地黃；2)將地黃用水浸泡1－10小時；3)去除浸出液中的沉淀物，收集上清液；4)對上清液減壓濃縮，回收濃縮液，或在40－60℃下將上清液揮干，得到浸膏；5)將濃縮液與體積百分含量為70－100％的乙醇按體積比為1∶3－7混勻，或將浸膏溶解于70－100％乙醇中；6)對步驟5)得到的混合液進行過濾，收集過濾液；7)對過濾液在20－60℃下真空減壓濃縮，回收濃縮液；8)對濃縮液進行超濾，去除分子量大于5000道爾頓的物質，收集超濾液；9)將超濾液用活性炭進行吸附以除色素，得到地黃寡糖提取液。
文檔編號A61P1/00GK1900100SQ200610088850
公開日2007年1月24日 申請日期2006年7月20日 優先權日2006年7月20日
發明者楊菁, 王洪新, 岳春麗 申請人:楊菁