專利名稱：從銅污染土壤的修復植物海州香薷中提取總黃酮的方法
技術領域：
本發明涉及從銅污染土壤的修復植物海州香薷中提取總黃酮的方法。
背景技術：
生物類黃酮具有清除自由基和抗氧化的能力，其作用機理在于它阻止了自由基在體內產生。生物類黃酮可以通過抗自由基作用直接抑制癌細胞生長及抗致癌因子達到抗癌、防癌作用。黃酮類物質還可以保護細胞免受致癌因子損害。而且，黃酮類物質可以防止低密度脂蛋白發生脂質過氧化反應，降低病人血漿中的低密度脂蛋白被氧化的易感系數，提高血漿中低密度脂蛋白的抗氧化、抗凝聚、抗滯留能力，可用來治療各種因血脂高、脂質氧化所引起的疾病。
海州香薷是唇形科香薷屬植物，在東南亞地區多作為民間藥草使用。有發汗解暑，和中祠濕之功效，主治胸痞腹痛，嘔吐腹瀉，水腫腳氣等。近年來，銅耐性/富集植物海州香薷廣泛用于銅污染土壤的植物修復。在銅污染土壤種植海州香薷，能夠降低污染土壤中有效態銅含量，恢復土壤農耕。隨著海州香薷植物修復銅污染土壤的大規模田間示范和應用推廣，植物修復材料的產后處置和資源化是個急需解決的環境問題。研究表明銅耐性/富集植物海州香薷能夠及時清除銅離子產生的氧自由基，保護細胞膜完整性。但如何從銅污染土壤的修復植物海州香薷中提取總黃酮，還未見報道。
發明內容
本發明的目的是提供從銅污染土壤的修復植物海州香薷中提取總黃酮的方法，該方法以修復銅污染土壤的銅耐性/富集植物海州香薷全草、花枝或種子為原料提取總黃酮，既可在醫藥成分方面開發利用，又可實現植物修復材料的產后資源化高效利用，提高其經濟價值。
本發明所提供的從銅污染土壤的修復植物海州香薷中提取總黃酮的方法，包括以下步驟(1)收獲種植在銅污染土壤的盛花期海州香薷全草、花枝或種子，干燥、粉碎后，過40目篩，收集過篩下的粉末；(2)粉碎過篩后的粉末用體積濃度為40％～60％的乙醇-水混合溶劑回流浸提，或者在室溫下用超聲提取，獲取提取液，粉碎過篩后的粉末與乙醇-水混合溶劑的體積重量比為1∶10～1∶20；
(3)減壓回收提取液中的乙醇后，用蒸餾水稀釋，除去水不溶性雜質，再用石油醚萃取，除去脂溶性雜質，然后母液用乙酸乙酯萃取，除去乙酸乙酯萃取層，再用正丁醇萃取，濃縮正丁醇萃取層。得到總黃酮。
本發明以修復銅污染土壤的銅耐性/富集植物海州香薷為原料提取總黃酮，提高了銅耐性/富集植物海州香薷的附加值，工藝簡單，總黃酮溶出量可達到5.6～11.8％(分光光度法測定)，利于高效資源化利用我國銅污染土壤的植物修復材料，降低植物修復成本，加快植物修復進程。
具體實施例方式
以下結合實例對本發明作進一步描述。
實施例1盛花期收獲種植在銅污染土壤的海州香薷花枝，烘干，粉碎后，過40目篩。稱取干粉50g，用體積濃度為60％的乙醇-水溶液500毫升，回流浸提4小時，冷卻，抽濾，濾渣繼續用同一種溶液提取，反復3次，冷卻，抽濾，合并濾液。乙醇回收，得到海州香薷總黃酮粗提物，分光光度計測總黃酮含量為11.6％。繼續用蒸餾水稀釋總黃酮粗提物，除去水不溶性雜質，再用石油醚萃取2次，每次提取液與石油醚以體積比為1∶10，至石油醚層無色后，除去脂溶性雜質；然后母液用乙酸乙酯萃取2次，每次提取液與乙酸乙酯以體積比為1∶10，至乙酸乙酯層無色后，除去乙酸乙酯萃取層；最后母液用正丁醇萃取1次，提取液與正丁醇以體積比為1∶10，減壓濃縮正丁醇萃取層，冷凍干燥得到總黃酮6.2克。
實施例2盛花期收獲種植在銅污染土壤的海州香薷花枝，烘干，粉碎后，過40目篩。稱取干粉50g，用體積濃度為50％的乙醇-水溶液700毫升，回流浸提4小時，冷卻，抽濾，濾渣繼續用同一種溶液提取，反復3次，冷卻，抽濾，合并濾液。乙醇回收，得到海州香薷總黃酮粗提物，分光光度計測總黃酮含量為9.8％。繼續用蒸餾水稀釋總黃酮粗提物，除去水不溶性雜質，再用石油醚萃取2次，每次提取液與石油醚以體積比為1∶10，至石油醚層無色后，除去脂溶性雜質；然后母液用乙酸乙酯萃取2次，每次提取液與乙酸乙酯以體積比為1∶10，至乙酸乙酯層無色后，除去乙酸乙酯萃取層；最后母液用正丁醇萃取1次，提取液與正丁醇以體積比為1∶10，減壓濃縮正丁醇萃取層，冷凍干燥得到總黃酮5.4克。
實施例3盛花期收獲種植在銅污染土壤的海州香薷花枝，烘干，粉碎后，過40目篩。稱取干粉50g，用體積濃度為40％的乙醇-水溶液650毫升，回流浸提4小時，冷卻，抽濾，濾渣繼續用同一種溶液提取，反復3次，冷卻，抽濾，合并濾液。乙醇回收，得到海州香薷總黃酮粗提物，分光光度計測總黃酮含量為7.8％。繼續用蒸餾水稀釋總黃酮粗提物，除去水不溶性雜質，再用石油醚萃取2次，每次提取液與石油醚以體積比為1∶10，至石油醚層無色后，除去脂溶性雜質；然后母液用乙酸乙酯萃取2次，每次提取液與乙酸乙酯以體積比為1∶10，至乙酸乙酯層無色后，除去乙酸乙酯萃取層；最后母液用正丁醇萃取1次，提取液與正丁醇以體積比為1∶10，減壓濃縮正丁醇萃取層，冷凍干燥得到總黃酮4.1克。
實施例4盛花期收獲種植在銅污染土壤的海州香薷花枝，風干，粉碎后，過40目篩。稱取干粉50g，在室溫下用體積濃度為60％的乙醇-水溶液1000毫升，超聲波提取2小時，獲取提取液，冷卻，過濾，濾液回收乙醇，得到海州香薷總黃酮粗提物，分光光度計測總黃酮含量為8.8％。繼續用蒸餾水稀釋總黃酮粗提物，除去水不溶性雜質，再用石油醚萃取2次，每次提取液與石油醚以體積比為1∶10，至石油醚層無色后，除去脂溶性雜質；然后母液用乙酸乙酯萃取2次，每次提取液與乙酸乙酯以體積比為1∶10，至乙酸乙酯層無色后，除去乙酸乙酯萃取層；最后母液用正丁醇萃取1次，提取液與正丁醇以體積比為1∶10，減壓濃縮正丁醇萃取層，冷凍干燥得到總黃酮5.2克。
實施例5盛花期收獲種植在銅污染土壤的海州香薷種子，風干，粉碎后，過40目篩。稱取干粉50g，在室溫下用體積濃度為60％的乙醇-水溶液800毫升，超聲波提取2小時，獲取提取液，冷卻，過濾。濾液回收乙醇，得到海州香薷總黃酮粗提物，分光光度計測總黃酮含量為8.2％。繼續用蒸餾水稀釋總黃酮粗提物，除去水不溶性雜質，再用石油醚萃取2次，每次提取液與石油醚以體積比為1∶10，至石油醚層無色后，除去脂溶性雜質；然后母液用乙酸乙酯萃取2次，每次提取液與乙酸乙酯以體積比為1∶10，至乙酸乙酯層無色后，除去乙酸乙酯萃取層；最后母液用正丁醇萃取1次，提取液與正丁醇以體積比為1∶10，減壓濃縮正丁醇萃取層，冷凍干燥得到總黃酮4.6克。
實施例6盛花期收獲種植在銅污染土壤的海州香薷全草，風干，粉碎后，過40目篩。稱取干粉50g，在室溫下用體積濃度為60％的乙醇-水溶液8500毫升，超聲波提取2小時，獲取提取液，冷卻，過濾。濾液回收乙醇，得到海州香薷總黃酮粗提物，分光光度計測總黃酮含量為5.2％。繼續用蒸餾水稀釋總黃酮粗提物，除去水不溶性雜質，再用石油醚萃取2次，每次提取液與石油醚以體積比為1∶10，至石油醚層無色后，除去脂溶性雜質；然后母液用乙酸乙酯萃取2次，每次提取液與乙酸乙酯以體積比為1∶10，至乙酸乙酯層無色后，除去乙酸乙酯萃取層；最后母液用正丁醇萃取1次，提取液與正丁醇以體積比為1∶10，減壓濃縮正丁醇萃取層，冷凍干燥得到總黃酮2.7克。
權利要求
1.從銅污染土壤的修復植物海州香薷中提取總黃酮的方法，其特征在于包括以下步驟(1)收獲種植在銅污染土壤的盛花期海州香薷全草、花枝或種子，干燥、粉碎后，過40目篩，收集過篩下的粉末；(2)粉碎過篩后的粉末用體積濃度為40％～60％的乙醇-水混合溶劑回流浸提，或者在室溫下用超聲提取，獲取提取液，粉碎過篩后的粉末與水-乙醇混合溶劑的體積重量比為1∶10～1∶20；(3)減壓回收提取液中的乙醇后，用蒸餾水稀釋，除去水不溶性雜質，再用石油醚萃取，除去脂溶性雜質，然后母液用乙酸乙酯萃取，除去乙酸乙酯萃取層，再用正丁醇萃取，濃縮正丁醇萃取層，得到總黃酮。
全文摘要
本發明涉及從銅污染土壤的修復植物海州香薷中提取總黃酮的方法，步驟如下收獲種植在銅污染土壤的盛花期海州香薷全草、花枝或種子干燥、粉碎后，過40目篩，收集過篩下的粉末；用體積濃度為40％～60％的乙醇－水混合溶劑回流浸提，或者在室溫下用超聲提取，獲取提取液；減壓回收提取液中的乙醇后，用蒸餾水稀釋，除去水不溶性雜質，再用石油醚萃取，除去脂溶性雜質，然后母液用乙酸乙酯萃取，除去乙酸乙酯萃取層，再用正丁醇萃取，濃縮正丁醇萃取層，得到總黃酮。本發明以修復銅污染土壤的銅耐性/富集植物海州香薷為原料提取總黃酮，工藝簡單，利于高效資源化利用我國銅污染土壤的植物修復材料，降低植物修復成本，加快植物修復進程。
文檔編號A61P3/06GK1857397SQ20061005020
公開日2006年11月8日 申請日期2006年4月5日 優先權日2006年4月5日
發明者石偉勇, 吳龍華, 章國林, 彭紅云, 倪亮, 駱永明 申請人:浙江大學, 中國科學院南京土壤研究所