專利名稱：一種積雪苷外用無菌粉劑及制備方法
技術領域：
本發明屬藥物制劑，涉及中藥提取物的外用制劑，尤其涉及一種積雪草苷的外用固體無菌制劑及其制備方法。
背景技術：
積雪草(Centella asiatica L.Urban)為《中國藥典》收載的常用中藥，為傘形科積雪草屬植物積雪草的干燥全草，始載于《神農本草經》，列為中品，具有清熱利濕、解毒消腫的功效，臨床上多用于治療跌打損傷、皮膚病等。
積雪草產于我國的江蘇、浙江、廣東、福建、廣西等多個省市，植物資源極為豐富。積雪苷是運用現代分離技術從中藥積雪草中提取分離精制的植物有效成份——積雪草總苷，主含積雪草苷(asiaticoside)和羥基積雪草苷(madecassoside)，其成份的化學結構明確，現代藥理藥效實驗證實，它具有以下功能能促進傷口愈合，防止粘連，軟化、縮小以至避免疤痕，恢復皮膚的平滑及彈性，淡化色素沉著等功能。其藥理作用機理主要是激活皮膚上皮細胞，促進正常肉芽組織的形成，使創面迅速愈合；同時它對成纖維細胞的增殖有明顯抑制作用，對無秩序的瘢痕疙瘩增生具有抑制和緩解作用，可防止粘連發生和緩解粘連的形成，以達到較好的治療目的與效果。臨床上它己有廣泛應用，對靜脈功能不良引起的長期不愈下肢潰瘍、手術等造成的創傷和肌鍵粘連、灼燒等因素所致的傷面恢復后形成的增生性瘢痕疙瘩、炎癥引起的損傷性粘連、其它因素產生的長期皮膚潰瘍、以及硬皮病和皮膚淀粉樣變性等均有顯著的治療效果。另外，積雪草總苷還有明顯的鎮痛和抗炎作用。
由此可見，積雪苷用途廣泛，藥用價值具有很大潛力，市場前景廣泛，有開發利用價值。
以積雪苷為主的積雪草提取物制成的片劑和霜劑己在國內生產，用于促進傷口愈合和疤痕疙瘩的治療等。片劑等制劑采用口服，不能使藥物高濃度的集中在病灶部位，無法充分發揮藥效；而霜劑(軟膏或乳膏)不易在創面涂布，即使可以涂布也無法保證創面的清潔，易造成創面的感染，在臨床上使用受到限制。
發明內容
本發明的目的是提供一種積雪苷外用無菌粉劑，它是由積雪苷組成或與適宜的藥用敷料組成的粉劑，制劑中含有效成分0.1％～100％的積雪草總苷(折純)。
本發明的積雪苷外用無菌粉劑通過以下技術方案來實現以藥用積雪苷粉末為原料、溶于熱的注射用水，溶解后進行粗濾，可減少后續工藝中過濾的操作難度，加入助溶劑，再加入0.1～5％的活性炭.經脫炭過濾后.經除菌過濾，在濾器上添加注射用水至全量，攪均，分裝于滅菌西林瓶中，冷凍真空干燥24小時。真空壓膠塞，軋蓋，得到積雪苷無菌凍干粉劑。助溶劑選用十二烷基硫酸鈉或烏洛托品。也可將積雪苷采用滅菌法或大盤凍干法制成無菌粉，在無菌的條件下分裝制備而成。
本發明的積雪苷無菌粉劑，在制劑過程中添加輔料更少，是一種療效好、成本低，用于創面的無菌制劑，解決了長期未能解決的藥物穩定性問題，減少了藥物分解產物，提高了藥品的質量，延長有效期，使制劑的有效期從18個月延長至數年，增加了藥物穩定性。便于室溫貯藏，保障了人民用藥安全，使該藥物能在藥廠大批量生產。運輸方便，解決了藥品的市場供應.從而方便了各級醫療單位臨床用藥的需要。
具體實施例方式
本發明結合實施例作進一步的說明。
實施例1制劑組成62.5g積雷草總苷(折純)、20.0g十二烷基硫酸鈉，注射用水加至1000ml。
制備方法稱取積雪草總苷原料，加入80％的注射用水，加熱攪拌使溶解，砂濾棒粗濾，再加入十二烷基硫酸鈉，攪拌使溶解，用1mol/L HCl調節pH值至6.0，加入0.2％的針用活性炭，60℃保溫30分鐘，砂濾棒粗濾，補足溶液，0.45μm膜過濾，0.22μm微孔砂芯精濾，灌裝，按設定的凍干曲線進行凍干(參見冷凍干燥表1)，壓塞，軋蓋，印字包裝，產品全檢合格后入庫，即得外用凍干積雪苷，規格為0.25g/瓶。
本發明制備中，積雪苷的pH值為5.0-6.0，皮膚的pH值在4.5-6.0之間，因此樣品的pH值宜呈弱酸性。加入助溶劑可使樣品pH值有所上升；當加入活性炭吸附后，pH值也有上升。考慮以上情況，我們在加入助溶劑后，用1mol/LHCl調節pH值至6.0，再加入注射用活性炭吸附，濾過，結果樣品pH值達到6.2左右，經加速和長期穩定性試驗，結果樣品pH很穩定。
冷凍干燥表1
實施例2助溶劑的選擇積雪草總苷含有許多水溶性較差的成分。當加熱后，這些成分可以溶解在水中，冷卻后又析出。將pH值調到堿性(pH＞9)雖也可以增加這些成分的溶解性，但是考慮到制劑對皮膚的刺激性，調pH值的方法難以在工藝中應用。因此，需要選用適當的助溶劑增加這些成分，特別是有效成分的溶解性。
對多種助溶劑進行了研究。研究方案及結果見表2
可見，十二烷基硫酸鈉和烏洛托品對積雪草總苷有一定的助溶作用，其它試劑的助溶作用較弱或者沒有。進一步對比，十二烷基硫酸鈉較烏洛托品的助溶作用更為明顯。烏洛托品為防腐藥，十二烷基硫酸鈉可用作外用制劑的輔料，處方決定選用十二烷基硫酸鈉做助溶劑，處方加入量參照FDA對外用輔料的要求＜1.47％。
實施例3制備方法研究積雪草總苷成分復雜，本發明先用熱的注射用水溶解后進行粗濾，可減少后續工藝中過濾的操作難度。后續步驟基本參照中藥凍干粉制劑的工藝。
按選定制劑組成及其方法制備三批樣品，重現性好，批間一致，達到生產的要求，結果參見表3。
主要設備Lyo-7.5型冷凍干燥機(上海東富龍科技有限公司)DGS8/2灌裝加塞機ZG-300軋蓋機表3
實施例4穩定性影響因素研究1.取實施例1制備的積雪苷外用凍干粉劑，按中國藥典2005年版二部附錄XI X C藥物穩定性試驗指導原則進行影響因素考察(高溫試驗，溫度60℃；高濕度試驗，相對濕度90％±5％；強光照射試驗，照度4500LX±500Lux，考察指標為性狀，pH值，含量和無菌，并與0天作比較。結果見表4表4
由上述試驗發現，在市售包裝條件下，樣品在高溫、高濕及光照條件下均較穩定。
2.溶液的穩定性取實施例1制備的積雪苷外用凍干粉劑，溶于10ml無菌水中，分別放于強光4500lx，高溫60℃，放置5、10天，考察其性狀，pH值，含量和無菌，結果見表5表5
結果，強光和高溫10天樣品溶液穩定。
實施例5制劑組成62.5g積雪草總苷(折純)，注射用水加至1000ml。
制備方法稱取積雪苷原料，加入80％的注射用水，加熱攪拌使溶解，砂濾棒粗濾，用1mol/L HCl調節pH值至6.0，加入5％的針用活性炭，60℃保溫30分鐘，砂濾棒粗濾，補足溶液，0.45μm膜過濾，0.22μm微孔砂芯精濾，灌裝，按設定的凍干曲線進行凍干(參數參見表1)，壓塞，軋蓋，印字包裝，產品全檢合格后入庫。
實施例6制劑組成0.5g積雪草總苷(折純)、45.5g甘露醇，注射用水加至1000ml。
制備方法稱取積雪草總苷原料，加入80％的純化水，加熱攪拌使溶解，砂濾棒粗濾，再加入甘露醇，攪拌使溶解，用1mol/L HCl調節pH值至6.0，加入1％的針用活性炭，60℃保溫30分鐘，砂濾棒粗濾，純化水補足至1000ml，0.45μm膜過濾，0.22μm微孔砂芯精濾，灌裝，按設定的凍干曲線進行凍干(參數參見表6)，壓塞，軋蓋，印字包裝，產品全檢合格后入庫。
冷凍干燥表6
實施例7制劑組成22.5g積雪草總苷(折純)、20.0g烏洛托品，注射用水加至1000ml。
制備方法稱取積雪草總苷原料，加入80％的注射用水，再加入烏洛托品，攪拌使溶解，用1mol/L HCl調節pH值至6.0，加入0.5％的針用活性炭，60℃保溫30分鐘，砂濾棒粗濾，補足溶液，0.45μm膜過濾，0.22μm微孔砂芯精濾，灌裝，按設定的凍干曲線進行凍干(曲線參數參見表6)，壓塞，軋蓋，印字包裝，產品全檢合格后入庫。
實施例8分裝滅菌法取積雪草苷粉碎、對粉碎后的原料再進行過80目篩。過篩后的原料分別裝入潔凈容器中，配料、混粉，取樣檢測，出料、用自動粉劑包裝機進行分裝。Co-60輻照滅菌。印字包裝后即得。
實施例9大盤凍干無菌分裝法取積雪草苷1000g用40-80℃5-20L熱水溶解，趁熱過濾，濾液中加入十二烷基硫酸鈉，采用凍干機冷凍干燥。在局部100級的潔凈條件下取出干燥品粉碎、過篩、過篩后的原料分別裝入潔凈容器中，進行分裝。印字包裝后即得。
實施例10外用凍干積雪苷對疤痕增生裸鼠模型的療效和安全性研究
1、材料來源(1)取實施例1制備的積雪苷外用無菌粉劑，(2)人增生性疤痕取材于杭州117醫院整形外科手術，(3)裸鼠，單純T淋巴細胞缺陷型，6～8周，由浙江省試驗動物中心提供。
2、主要試劑及儀器(1)RPMI1640(美國GIBICO)(2)小牛血清(華美公司提供)(3)透射電鏡(Philps CM10)(4)青霉素、鏈霉素等為普通化學純試劑3、方法(1)將手術切下的疤痕切割為5mm×7mm×2mm小塊，立即置于RPMI1640+雙抗(青霉素100)組織培養液的無菌瓶中；3h后在無菌條件下，將疤痕組織移植于6周齡裸鼠北部肩胛內側皮下，4周后疤痕生長并保持原有特性，無明顯推行性及排異反應，供試驗用。
(2)將外用凍干積雪苷配置成下列濃度積雪苷無菌溶液1.0mg/ml，5.0ug/ml，25mg/ml，250mg/ml。
(3)將疤痕組織大小一致的動物分成5組，每組9只，1～4組為治療組，分別給予不同濃度的外用凍干積雪苷無菌溶液，第5組為對照組，僅給予0.9％生理鹽水，每天3次，連續給藥時間為15天。
(4)觀察并記錄疤痕大小，形態及電鏡檢查，并進行t檢驗。
(5)用藥前后分別檢測裸鼠血、尿常規，血生化、功能等。
4、結果4.1、外用凍干積雪苷溶液作用后對疤痕大小和形態的作用，參見表7，表7外用凍干積雪苷溶液作用后裸鼠疤痕大小的測定和形態的觀察
*與對照組(第5組)比較。
4.2、外用凍干積雪苷溶液作用后對裸鼠血、尿常規，血生化、功能的測定用藥15天后，45只裸鼠全部成活，用藥過程中局部無紅腫、潰爛、皮疹，血常規、谷丙轉氨酶、乳酸脫氫酶、肌酐、鉀、鈉等檢測無異常。
5、討論與分析通過對疤痕增生裸鼠模型直接給予不同濃度的外用凍干積雪苷溶液，觀察其疤痕生長情況和毒性作用，可以得出以下結論(1)外用凍干積雪苷對疤痕增生裸鼠模型的疤痕增生有明顯的改善作用；(2)外用凍干積雪苷對疤痕增生裸鼠模型的疤痕增生改善作用呈正向濃度依賴；(3)給予常規治療劑量的10倍，沒有發現毒性作用。
無需進一步詳細闡述，相信采用前面所公開的內容，本領域技術人員可最大限度地應用本發明。因此，前面的實施方案應理解為僅是舉例說明，而非以任何方式限制本發明的范圍。
權利要求
1.一種積雪苷外用無菌粉劑，其特征是制劑由有效成分積雪苷組成或與藥用敷料組成，制劑中含折純重量百分比為0.1％～100％的積雪草總苷。
2.根據權利要求1所述的積雪苷外用無菌粉劑的制備方法，其特征是通過以下技術方案來實現以藥用積雪苷粉末為原料、溶于熱水，溶解后進行粗濾，加入助溶劑，再加入0.1～5％的活性炭、脫炭過濾后、菌過濾，添加無菌水至全量，攪均，分裝于滅菌西林瓶中，冷凍真空干燥24小時.真空壓膠塞，軋蓋，得到積雪苷無菌粉劑。
3.根據權利要求2所述的積雪苷外用無菌粉劑的制備方法，其特征是助溶劑選用十二烷基硫酸鈉或烏洛托品。
4.根據權利要求2所述的積雪苷外用無菌粉劑的制備方法，其特征是將積雪苷采用滅菌法或大盤凍干法制成無菌粉，在無菌的條件下分裝制備而成。
5.根據權利要求1所述的積雪苷外用無菌粉劑，其特征是將積雪苷無菌粉劑用生理鹽水或無菌用水溶解后，在傷患處均勻涂布或噴布或覆以合適大小的消毒雙層脫脂紗布，用藥液充分均勻浸濕紗布包扎即可。
全文摘要
本發明提供一種積雪苷外用無菌粉劑，由積雪苷組成或與適宜的藥用敷料組成的粉劑，制劑中含有效成分0.1％～100％的積雪草總苷(折純)。制備方法是以藥用積雪苷粉末為原料、溶于注射用水，粗濾，加入助溶劑，再加入活性炭，經脫炭過濾后除菌過濾，添加注射用水至全量，攪均，分裝于滅菌西林瓶中，冷凍真空干燥；也可采用滅菌法或大盤凍干法制成無菌粉。本發明在制備中加輔料更少，是一種療效好、成本低，用于創面的無菌制劑，解決了藥物穩定性問題，減少了藥物分解產物，提高了藥品的質量，延長有效期。便于室溫貯藏，保障了人民用藥安全，使該藥物能在藥廠大批量生產，運輸方便。
文檔編號A61K9/19GK1830450SQ20061005018
公開日2006年9月13日 申請日期2006年4月4日 優先權日2006年4月4日
發明者胡鋼亮, 鄭偉平, 邵勝榮, 呂慶中 申請人:杭州茵諾邦醫藥科技有限公司