專利名稱：積雪草苷的新用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及積雪草苷的一種新用途，具體地涉及積雪草苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
背景技術：
積雪草苷(Asiaticoside，Ad)為積雪草提取物三萜皂苷的主要成分之一，已有的資料顯示，在各種皮膚損傷修復治療中，無論是在正常創面，還是在延遲愈合的創面中，Ad均具有促進皮膚損傷修復的藥物活性，通過促進成纖維細胞增殖，抗菌和抗氧化活性，有較好的上皮化速率和愈合后外觀。但積雪草苷在制備治療或預防急慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥理作用未見報道，本發明人通過大量的實驗研究，發現了積雪草苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
發明內容
本發明提供了由積雪草苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
本發明提供的積雪草苷純度大于等于90％小于100％。
本發明提供了以積雪草苷為活性成分的藥物組合物在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
本發明提供的藥物組合物在用于慢性腎功能衰竭及腎纖維化時，口服時使用劑量范圍是25mg～1000mg，優選25～500mg。
本發明提供的藥物以制劑形式存在時，其有效成分的含量25～200mg。
本發明提供的藥物組合物可以根據制劑需要，加入相應輔料，以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、軟膠囊、糖漿等形式存在，優選為軟膠囊及片劑。本發明提供的各種劑型均可以采用藥學常規方法制備而成。
本發明人進行了下列實驗來證實積雪草苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用(下面的實施例用來更詳細的說明本發明，但并不意味著本發明僅限于此)。
具體實施實例制備例1 積雪草苷片劑的制備處方積雪草苷50.0g糖粉85.0g乳糖40.0g羧甲基淀粉鈉23.0g3％PVPK30水溶液適量硬脂酸鎂2.0g共制成 1000粒操作稱取處方量的積雪草苷、糖粉、乳糖和羧甲基淀粉鈉充分混合均勻后過100目篩，加入3％PVPK30水溶液適量制軟材，20目篩制粒，60℃干燥3小時，18目篩整粒，加入處方量的硬脂酸鎂，混合均勻后壓片，每片約200mg，即得。
制備例2 積雪草苷軟膠囊的制備處方積雪草苷25.0g藥用豆油225mL共制成 1000粒操作稱取處方量的積雪草苷加藥用豆油充分混合均勻后制軟膠囊，每粒約250mg，即得。
試驗例1 積雪草苷對腺嘌呤導致大鼠慢性腎衰及腎纖維化的影響1.1材料實驗動物 普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開發公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
藥物 積雪草苷，中國廣西昌洲天然產物開發有限公司，含量99％，批號040218；腺嘌呤，常州華通化工公司，批號040611；甲強龍，比利時法瑪西亞普強公司，批號040706；肌酐和尿素氮試劑盒，北京中生科技公司，批號050606；羥脯氨酸試劑盒，南京建成生物公司，批號050906。
1.2試驗方法與結果大鼠90只，體重150-200g，動物喂養1周，將動物分為9組，即正常組，模型組、甲強龍(12mg/kg)組，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4，除正常組外，每只大鼠ip腺嘌呤150mg/kg，連續給予4天，7天后，大鼠眼框取血，血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸，觀察造模情況，從第8天開始給藥，連續給藥14天，從眼眶取血，測定血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸，處死作病理切片，觀察腎功能的病理改變。
從表1結果可以看出，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組降低大鼠慢性腎衰血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸(與模型組比較，p＜0.05)；甲強龍(12mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4明顯降低大鼠慢性腎衰血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸(與模型組比較，p＜0.01)。
病理檢查正常對照組腎組織結構正常，模型組有明顯腎組織結晶沉淀物，腎小管破壞，萎縮，管腔變小，其中可見淋巴細胞浸潤及局部纖維組織增生，腎小球腫大，腎小球上皮細胞出現空泡變性，內皮細胞下出現大量疏松物質，基底膜增厚，定量分析腎小管面積與腎小球體積，模型組與正常對照組比較有顯著性差異。積雪草苷各劑量組隨劑量增加損傷程度明顯減輕，但仍未恢復至正常水平。
表1 積雪草苷對大鼠慢性腎衰血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸的影響(n＝10)
*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較試驗例2 積雪草苷對腎切除導致大鼠慢性腎衰的影響2.1材料實驗動物 普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開發公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
藥物 積雪草苷，中國廣西昌洲天然產物開發有限公司，含量99％，批號040218；甲強龍，比利時法瑪西亞普強公司，批號040706；肌酐和尿素氮試劑盒，北京中生科技公司，批號050606；羥脯氨酸試劑盒，南京建成生物公司，批號050906。
2.2試驗方法與結果大鼠135只，體重150-200g，動物喂養1周，將動物分為9組，即正常組，模型組、甲強龍(12mg/kg)組，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4，除正常組外，大鼠用5/6腎切除方法制成慢性腎衰模型，第一次手術切除左腎2/3，一周后行第二次手術切除右腎，第二次手術后一周開始給藥，給藥后4周、8周分別大鼠眼框取血，測定血清肌酐和尿素氮，給藥后4周處死5只，實驗結束處死10只，作病理切片，觀察腎功能的病理改變。
從表2、表3結果可以看出，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮(與模型組比較，p＜0.05)；甲強龍(12mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4明顯降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮(與模型組比較，p＜0.01)；積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮與積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4比較，無顯著性差異。
病理改變給藥第4周模型組光鏡下見腎小球有不同程度代償性肥大，系膜細胞增生，系膜基質增多，腎小球毛細血管襻呈分葉狀，部分腎小球囊腔消失，毛細血管管壁增厚，腎小管腫脹、擴張，管腔內有蛋白沉積，部分小管萎縮，間質有炎性細胞浸潤，各給藥組亦見上述改變，但病變程度較輕，隨劑量增大，病變程度減輕；給藥第8周模型組光鏡下見系膜細胞增生，基質明顯增多，毛細血管管壁塌陷，毛細血管節段性硬化，硬化區多在血管壁附近硬化的腎小球內可見均質圓形PAS染色深紅色的沉積物，個別腎小球有局灶球囊粘連，局灶新月體形成，間質可見炎細胞浸潤，纖維組織增生，各組腎小球硬化程度不等，隨劑量增大，病變程度減輕。
表2 積雪草苷對大鼠腎切除慢性腎衰給藥4周血清肌酐和尿素氮的影響(n＝5)
*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較表3 積雪草苷對大鼠腎切除慢性腎衰給藥8周血清肌酐和尿素氮的影響
*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較試驗例3 積雪草苷對單側輸尿管結扎大鼠腎間質纖維化的影響3.1材料實驗動物 普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開發公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。
藥物 積雪草苷，中國廣西昌洲天然產物開發有限公司，含量99％，批號040218；苯那普利，北京諾華制藥有限公司生產，批號040306；羥脯氨酸試劑盒，南京建成生物公司，批號050906。
3.2試驗方法與結果大鼠90只，體重150-200g，動物喂養1周，各大鼠以10％水合氯醛3.0mL/kg腹腔注射麻醉后，將大鼠右側臥位固定于手術臺上，剪毛后用碘酒、75％酒精消毒手術區，行左側腹切口，逐層切開皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分離左側輸尿管，假手術組僅切開腹腔并游離左側輸尿管，但不結扎和剪斷，其他各組大鼠用4-0絲線結扎兩道，上一道結扎點位于左腎下極水平，然后在兩道結扎點間剪斷輸尿管，逐層縫合，將動物分為9組，即假手術組，模型組、苯那普利(10mg/kg)組，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4，術后各組開始給藥，21天后10％水合氯醛麻醉后處死各組動物，生理鹽水反復灌洗后留取左側腎臟，腎組織經4％的多聚甲醛緩沖液固定。切取適量腎組織，按羥脯氨酸試劑盒測定說明測定羥脯氨酸。
從表4結果可以看出，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組降低單側輸尿管結扎大鼠腎羥脯氨酸含量(與模型組比較，p＜0.05)；苯那普利(10mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4明顯降低單側輸尿管結扎大鼠腎羥脯氨酸含量(與模型組比較，p＜0.01)；積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3降低單側輸尿管結扎大鼠腎羥脯氨酸含量與積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4比較，無顯著性差異。
常規病理學檢查①肉眼檢查假手術組腎臟顏色鮮紅，表面光滑，包膜光澤，無粘連。其他各組腎臟體積增大，顏色蒼白，表面呈顆粒狀，類似人體大白腎，少數區域腎包膜粘連。②光鏡檢查假手術組腎單位結構清晰，腎小球囊無擴張或縮小，腎小管上皮細胞無明顯變性及壞死，管腔內無脫落上皮細胞或管型，間質中無血管擴張或炎細胞浸潤。模型對照組大片腎小管壞死，腎間質纖維細胞增生，腎小管擴張，內有大量棕黃色折光物質或壞死脫落的上皮細胞，腎小球數目減少，部分腎小球纖維化并與包曼氏囊壁粘連，囊腔消失。給藥各組病變與模型對照組類似，但均有不同程度的形態學改善，尤以積雪草苷灌胃大劑量各組顯著，與模型對照組比較有明顯差異。
表4 積雪草苷對單側輸尿管結扎大鼠腎羥脯氨酸含量的影響
*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較。
權利要求
1.積雪草苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，藥物組合物可以以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、軟膠囊或糖漿的形式存在。
3.根據權利要求2所述的應用，藥物組合物優選為片劑、軟膠囊。
4.根據權利要求2或3所述的應用，口服時使用劑量范圍為25～1000mg。
5.根據權利要求4所述的應用，使用劑量范圍優選為25～500mg。
6.根據權利要求2或3所述的應用，其有效成分的含量為25～200mg。
全文摘要
本發明提供了積雪草苷的新用途，具體提供了積雪草苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
文檔編號A61K9/48GK101073577SQ200610044269
公開日2007年11月21日 申請日期2006年5月19日 優先權日2006年5月19日
發明者蔣王林, 田京偉, 宋吉倫 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發有限公司