專利名稱：一種甾體總皂苷提取物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種甾體總皂苷提取物及其制備方法和應用。
背景技術：
中藥穿山龍為薯蕷科植物穿龍薯蕷Dioscorea nipponica Makino的干燥根莖，別名為穿地龍、地龍骨、穿龍骨等。主產于東北、華北地區。中藥盾葉薯蕷為薯蕷科植物盾葉薯蕷Dioscorea zingiberensis C.H.Wright的根莖，別名為黃姜、火藤根等。穿山龍和盾葉薯蕷均具有祛風濕、止痛、舒筋活血、止咳平喘祛痰之功效。臨床用于治療風濕性關節炎、腰腿疼痛、麻木、大骨節病、跌撲損傷、閃腰岔氣、慢性支氣管炎、咳嗽氣喘等疾病。
化學藥品地方標準上升國家標準第16冊中薯蕷皂苷片(WS1-XG-012-2000)為口服制劑，該方法制備的提取物不能直接作為靜脈注射液的原料；部頒標準第17冊中穿山龍注射液(WS3-B-32)主要采用水煎煮提取、乙醇沉淀法制備，該方法得到的產品有效成分含量不高；名稱為“一種穿山龍凍干粉針劑及其制備方法(申請號200410086729.1)”的專利申請中采用超聲水提取、乙醇沉淀、大孔樹脂純化的方法得到有效成份，加入藥用輔料，制備成凍干粉針劑，該方法中采用超聲提取大規模生產應用難度較大。目前，尚未查到關于以穿山龍或盾葉薯蕷為原料制備靜脈注射用甾體總皂苷提取物的方法及應用的文獻報道。
發明內容
本發明的目的是提供一種甾體總皂苷提取物及其制備方法和在制備治療心腦血管疾病、風濕病以及呼吸系統疾病的靜脈注射劑中的應用，以彌補現有技術的上述不足。
一種甾體總皂苷提取物，其特征在于它含有甾體總皂苷的重量百分數為80％～98％。
上述甾體總皂苷提取物的制備方法，其特征在于將穿山龍或盾葉薯蕷或將二者混合，經水洗、切片后，在室溫或加熱條件下用水提取1～3小時，重復提取1～3次，過濾或離心分出藥液，再通過大孔吸附樹脂柱，先用0.05％～4％的堿溶液洗至流出液無色，再用水洗至流出液為中性，最后用乙醇或含水乙醇洗至流出液無色，收集洗脫液，回收洗脫液中的乙醇后濃縮至相對密度為1.15～1.20，加乙醇至含醇量達75％～90％，靜置，過濾，回收乙醇，濃縮干燥，粉碎。
上述的甾體總皂苷提取物在制備治療冠心病、心絞痛、心肌缺血、心衰、心律失常、腦梗塞、腦缺血、病毒性心肌炎或動脈血管粥樣硬化疾病的靜脈注射液中的應用。
上述的甾體總皂苷提取物在制備治療哮喘、急慢性支氣管炎或肺氣腫疾病的靜脈注射液中的應用。
上述的甾體總皂苷提取物在制備治療風濕性關節炎、類風濕病、痛風、骨性關節炎、糖尿病關節炎或強直性脊柱炎疾病的靜脈注射液中的應用。
本發明的甾體總皂苷提取物使用時作為有效成分的劑量低，通常按成人計算，其優選的臨床用量為0.5mg～10mg/kg/日/人。用甾體總皂苷提取物所制備的注射液既能擴張冠脈血管、降低心肌耗氧量、溶解血栓、改善心肌缺血和微循環、改善血管內皮細胞功能、增加腦血流、對缺血性腦細胞損傷具有保護作用，還能降低血壓、血脂、血糖；同時還具有抗炎、鎮痛、鎮咳、平喘、解除平滑肌痙攣、提高免疫力、抗變態反應等作用，從而能達到治療心腦血管疾病、風濕病、呼吸系統疾病的目的。該靜脈注射液的功效明顯，起效快，生物利用度高，質量穩定可靠，具有很好的臨床推廣運用價值。
具體實施例方式
實施例1穿山龍甾體總皂苷提取物的制備稱取穿山龍10公斤，用水洗凈、切片后加水120升，煎煮提取1.5小時，向濾渣加水80升，煎煮提取1小時，過濾。合并兩次濾液，并使其通過HPD100型大孔吸附樹脂柱，先用2％(重量百分濃度，下同)碳酸鈉水溶液洗至流出液無色，再用水洗至流出液為中性，最后用75％乙醇水溶液洗至流出液無色，收集洗脫液，回收洗脫液中的乙醇后濃縮至相對密度為1.15(60℃測)，加乙醇至含醇量達85％，靜置，濾過，回收乙醇，濃縮干燥，粉碎，得170克穿山龍甾體總皂苷提取物，其穿山龍甾體總皂苷含量為總重量的92％。
實施例2盾葉薯蕷甾體總皂苷提取物的制備稱取盾葉薯蕷10公斤，用水洗凈、切片后加水100升，80℃下提取2小時，向濾渣加水80升，80℃下提取1.5小時，過濾。合并兩次濾液，使其通過D101型大孔吸附樹脂柱，先用3％碳酸氫鈉水溶液洗至流出液無色，再用水洗至流出液為中性，最后用80％乙醇水溶液洗至流出液無色，收集洗脫液，回收洗脫液中的乙醇后濃縮至相對密度為1.20(60℃測)，加乙醇至含醇量達90％，靜置，過濾，回收乙醇，濃縮干燥，粉碎，得208克盾葉薯蕷甾體總皂苷提取物，其盾葉薯蕷甾體總皂苷含量為總重量的89％。
上述制備方法中，所述的提取次數可為1～3次，提取時間可為1～3小時，加水量可為藥材重量的4～16倍；所述的大孔吸附樹脂可為非極性樹脂、弱極性樹脂或極性樹脂；所述的堿溶液可為碳酸鈉、碳酸氫鈉或氫氧化鈉水溶液，濃度可為0.05％～4％；所述的洗脫劑乙醇的濃度可為30～95％；所述的相對密度可為1.15～1.20(60℃測)。
可用輔料氯化鈉、葡萄糖、丙二醇或聚乙二醇將本發明的甾體總皂苷提取物制成多種規格的靜脈注射液。
實施例3穿山龍甾體總皂苷氯化鈉注射液的制備稱取穿山龍甾體總皂苷提取物2g，加入氯化鈉9g，加注射用水至1000ml，用10％氫氧化鈉水溶液調pH值至7.0～7.5，冷藏，用G3垂熔漏斗過濾，分裝，灌封，100℃流通蒸氣下滅菌30分鐘即得。
實施例4盾葉薯蕷甾體總皂苷葡萄糖注射液的制備稱取盾葉薯蕷甾體總皂苷提取物2g，加入葡萄糖50g，加注射用水至1000ml，再加入0.2g活性炭，煮沸30分鐘，放冷，過濾，用10％氫氧化鈉調pH值至7.0～7.5，冷藏，用G3垂熔漏斗過濾，分裝，灌封，110℃流通蒸氣下滅菌30分鐘即得。
實施例5本發明的藥物對結扎冠狀動脈引起的大鼠急性心肌缺血的影響取昆明種大鼠40只，雌雄各半，分為4組模型對照組、穿山龍甾體總皂苷氯化鈉注射液組(用實施例3所制備的樣品，簡稱CSN氯化鈉注射液組)、盾葉薯蕷甾體總皂苷葡萄糖注射液組(用實施例4所制備的樣品，簡稱DYSY葡萄糖注射液組)、葛根素氯化鈉注射液組。以上4組動物，除正常對照組動物外，其余3組動物均于每天上午尾靜脈給藥一次，連續7天。各組動物于最后1次給藥后30min，烏拉坦110g/kg，腹腔注射麻醉，固定，接動物呼吸機，同時監測心電圖(肢體II導聯)，經胸骨左緣開胸，暴露心臟，撕開心包膜，在肺動脈圓錐與左心耳間的冠狀靜脈下，用5/0帶線縫合針結扎左冠狀動脈，以心電圖T波顯著升高作為結扎成功指標，閉緊胸腔(排盡胸腔內空氣)，穩定呼吸約10min，去除呼吸機恢復自主呼吸。結扎4h后，處死動物，取出心臟染色，進行缺血面積測定。結果見表1。
表1.本發明的藥物對結扎冠狀動脈引起的大鼠急性心肌缺血面積的影響(n＝10，x±s)
*P＜0.05，**P＜0.01與模型組相比。
表1的結果表明，模型組動物缺血部分心肌為31.6％，而葛根素氯化鈉注射液20mg/kg能使缺血面積明顯縮小，缺血區比例為24.8％(P＜0.05)。穿山龍甾體總皂苷氯化鈉注射液20mg/kg、盾葉薯蕷甾體總皂苷葡萄糖注射液20mg/kg也可顯著減少缺血面積，缺血區比例分別為23.8％和22.4％(P＜0.01)。說明本發明的藥物對心腦血管疾病有明顯的治療作用。
附錄缺血面積的測定取出大鼠心臟，去除心房，心室用生理鹽水洗凈血后于-20℃冷凍10min，徒手刀片切成1～2mm的心肌片，置于pH7.4PBS配制的1％TTC溶液中，37℃溫育10min染色，心肌片上正常的心肌被染為深紅色，缺血心肌呈灰白色。將染色后心肌片上正常和缺血部分心肌分別稱重，以缺血部分心肌所占全部心室肌重量的比例作為缺血指標。
實施例6本發明的藥物對小鼠醋酸致痛的鎮痛作用取昆明種小鼠40只，雌雄各半，分為4組生理鹽水組、穿山龍甾體總皂苷氯化鈉注射液組(用實施例3所制備的樣品，簡稱CSN氯化鈉注射液組)、盾葉薯蕷甾體總皂苷葡萄糖注射液組(用實施例4所制備的樣品，簡稱DYSY葡萄糖注射液組)、鹽酸曲馬多注射液組(取2ml鹽酸曲馬多注射液溶于50ml生理鹽水，此時鹽酸曲馬多的含量為1mg/ml)。每日小鼠尾靜脈給藥1次，給藥3天；生理鹽水組給藥容量0.5ml/只，每天1次，給藥3天，于末次給藥后1小時，腹腔注射1％醋酸致痛，觀察記錄20min內各組小鼠出現扭體動物數及扭體反應次數，與對照組比較，作顯著性測定。結果見表2。
表2小鼠扭體次數比較(n＝10 x±s)
注*P＜0.05，**P＜0.01與模型組相比。
表2結果表明，穿山龍甾體總皂苷氯化鈉注射液20mg/kg、盾葉薯蕷甾體總皂苷葡萄糖注射液20mg/kg均可顯著抑制小鼠扭體反應，抑制率分別為53.0％和53.7％(P＜0.01)。說明本發明的藥物具有明顯的鎮痛作用。
實施例7本發明的藥物對小鼠引咳潛伏期、咳嗽次數的影響取昆明種小鼠40只，雌雄各半，分為4組生理鹽水組、穿山龍甾體總皂苷氯化鈉注射液組(用實施例3所制備的樣品，簡稱CSN氯化鈉注射液組)、盾葉薯蕷甾體總皂苷葡萄糖注射液組(用實施例4所制備的樣品，簡稱DYSY葡萄糖注射液組)、止喘靈注射液組。實驗前各組小鼠禁食12小時，尾靜脈給藥1小時后，將小鼠放入250ml廣口瓶內，注入二氧化硫觀察小鼠咳嗽潛伏期(從注入二氧化硫至發生咳嗽所需時間)及2分鐘內咳嗽的次數。結果見表3。
表3各組小鼠引咳潛伏期、咳嗽次數比較(n＝10 X±s)
注與生理鹽水組比料P＜0.01從表3可以看出，穿山龍甾體總皂苷氯化鈉注射液5ml/kg、盾葉薯蕷甾體總皂苷葡萄糖注射液5ml/kg均能明顯延長引咳潛伏期，與生理鹽水對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)；穿山龍甾體總皂苷氯化鈉注射液5ml/kg、盾葉薯蕷甾體總皂苷葡萄糖注射液5ml/kg均能明顯減少小鼠2分鐘內咳嗽次數，與生理鹽水組比較有顯著性差異(P＜0.01)。說明本發明的藥物對呼吸系統疾病有明顯的治療作用。
附錄二氧化硫引咳法用250ml側口燒瓶，側口用橡皮管通過三通管依次連接球膽、裝有水并標有刻度的U形管、氣球、5ml注射器、250ml廣口瓶，側口燒瓶內放無水硫酸鈉，燒瓶塞上裝有一滴定管，內加入50％硫酸。產生的氣體儲于球膽和氣球中，調整壓力保持在4cm水柱，每次抽取4ml以供引咳用。
通過上述具體實施方式
，充分說明本發明的甾體總皂苷提取物所制備的注射液對心腦血管疾病、風濕病、呼吸系統疾病有顯著的治療作用，為臨床提供了一種新的用藥選擇。
權利要求
1.一種甾體總皂苷提取物，其特征在于它含有甾體總皂苷的重量百分數為80％～98％。
2.權利要求1所述的甾體總皂苷提取物的制備方法，其特征在于將穿山龍或盾葉薯蕷或將二者混合，經水洗、切片后，在加熱條件下用水提取1～3小時，重復提取1～3次，過濾或離心分出藥液，再通過大孔吸附樹脂柱，先用0.05％～4％的堿溶液洗至流出液無色，再用水洗至流出液為中性，最后用乙醇或含水乙醇洗至流出液無色，收集洗脫液，回收洗脫液中的乙醇后濃縮至相對密度為1.15～1.20，加乙醇至含醇量達75％～90％，靜置，過濾，回收乙醇，濃縮干燥，粉碎。
3.權利要求1所述的甾體總皂苷提取物在制備治療冠心病、心絞痛、心肌缺血、心衰、心律失常、腦梗塞、腦缺血、病毒性心肌炎或動脈血管粥樣硬化疾病的靜脈注射液中的應用。
4.權利要求1所述的甾體總皂苷提取物在制備治療哮喘、急慢性支氣管炎或肺氣腫疾病的靜脈注射液中的應用。
5.權利要求1所述的甾體總皂苷提取物在制備治療風濕性關節炎、類風濕病、痛風、骨性關節炎、糖尿病關節炎或強直性脊柱炎疾病的靜脈注射液中的應用。
全文摘要
一種以穿山龍或盾葉薯蕷為原料制備的甾體總皂苷提取物，其特征在于它含有甾體總皂苷的重量百分數為 80％～98％。用它所制備的靜脈注射液既能擴張冠脈血管、降低心肌耗氧量、溶解血栓、改善心肌缺血和微循環、改善血管內皮細胞功能、增加腦血流、對缺血性腦細胞損傷具有保護作用，還能降低血壓、血脂、血糖；同時還具有抗炎、鎮痛、鎮咳、平喘、解除平滑肌痙攣、提高免疫力、抗變態反應等作用，從而達到治療心腦血管疾病、風濕病、呼吸系統疾病的目的。本發明的藥物中有效成分的劑量低，功效明顯，起效快，生物利用度高，質量穩定可靠，具有很好的臨床推廣運用價值。
文檔編號A61P9/10GK1830998SQ20061004361
公開日2006年9月13日 申請日期2006年4月17日 優先權日2006年4月17日
發明者邢雅成 申請人:青島浩普醫藥研究有限公司