專利名稱：一種人造藥用蛇膽及其制備方法
技術領域：
本發明涉及中藥材及其制備方法，特別涉及人工制備的中藥材，尤其涉及蛇膽及其制備方法。
背景技術：
蛇膽是我國沿用上千年的一種名貴的傳統藥材，是生產各種蛇膽復方制劑的主要原料。蛇膽及其制劑具有顯著的鎮咳、祛痰、平喘和抗炎等功效，主要用于治療呼吸系統、中樞神經系統及運動系統的疾病。長期的臨床應用表明，蛇膽是集多種藥理作用于一體的、具有中國特色的一味良藥，療效確切，且無毒副作用，是任何一種西藥難以代替的藥物，久用不衰。尤其自上世紀八十年代以來，成了發展中成藥生產的熱門品種之一，制劑新品種不斷涌現，產量日益增加。而蛇類的野生資源卻日趨枯竭，蛇膽供應嚴重短缺。由于經濟利益的驅使，野生蛇被大肆捕殺，瀕臨滅種。為了保護物種和維護生態平衡，世界各國都嚴禁捕殺蛇類動物，尤其我國政府除禁止捕殺之外，還禁止養殖和銷售蛇類動物，其執法力度之大達到前所未有的程度。由此給我國制藥工業帶來一個嚴重問題——蛇膽制劑的生產面臨“無米之炊”。為了保住或延續這味良藥的品種生產，當務之急就是要尋找或發明藥用蛇膽代用品。
發明內容
本發明應用人工模擬方法解決藥用蛇膽的來源問題。發明者根據現代中醫藥理論——藥效主要取決于有效成分和合理配方。我們在弄清天然藥用蛇膽汁化學組成和藥理作用的基礎上，選用某些非蛇類動物膽汁(如牛、羊及家禽等膽汁)為原料，采用現代生化技術進行提煉(提取或半合成)，將所得的有效組分(或組分群)按適當比例組成配方，進行人工模擬，從化學組成和藥效兩個方面與天然藥用蛇膽進行對比，篩選出科學合理的、可工業化生產的配方，制成符合制藥使用的天然蛇膽代用品——人造藥用蛇膽或稱人工蛇膽。
蛇膽是我國沿用上千年的一種名貴的傳統藥材，是生產各種蛇膽復方制劑的主要原料。蛇膽及其制劑具有顯著的鎮咳、祛痰、平喘和抗炎等功效，主要用于治療呼吸系統、中樞神經系統及運動系統的疾病。長期的臨床應用表明，蛇膽是集多種藥理作用于一體的、具有中國特色的一味良藥，療效確切，且無毒副作用，是任何一種西藥難以代替的藥物，久用不衰。尤其自上世紀八十年代以來，成了發展中成藥生產的熱門品種之一，制劑新品種不斷涌現，產量日益增加。而蛇類的野生資源卻日趨枯竭，蛇膽供應嚴重短缺。由于經濟利益的驅使，野生蛇被大肆捕殺，瀕臨滅種。為了保護物種和維護生態平衡，世界各國都嚴禁捕殺蛇類動物，尤其我國政府除禁止捕殺之外，還禁止養殖和銷售蛇類動物，其執法力度之大達到前所未有的程度。由此給我國制藥工業帶來一個嚴重問題——蛇膽制劑的生產面臨“無米之炊”。為了保住或延續這味良藥的品種生產，當務之急就是要尋找或發明藥用蛇膽代用品。
據國內外文獻報道，世界上有3000多種蛇，國內有1700多種蛇。按我國藥典規定或認可的藥用蛇膽，主流品種是眼鏡蛇、金環蛇、灰鼠蛇、三索蛇、烏梢蛇等的膽汁，并視這些品種的蛇膽為上品或優質品。為了人造藥用蛇膽，我們對這些蛇的膽汁進行了化學成分分析，結果見表1。
表1 五種優質藥用蛇膽成分分析結果
注①同一品種的蛇，由于產地不同，捕捉季節不同、處死時饑餓程度不同及個體差異，其膽汁的化學組成及含量有明顯差異。
②本分析樣品是由廣西梧州市蛇倉提供的活蛇，餓一周(只給水)后處死所取得的膽汁。
③分析方法主要采用HPLC法(分析卵磷脂、總膽酸和粘蛋白用比色法或分光光度法。) ④還測定了各種蛇膽的微量元素及各種氨基酸含量，未列入表中。
從表1結果看出(1)所測的五種優質蛇膽汁，其牛磺膽酸含量一般不低于30mg/ml；(2)牛磺鵝去氧膽酸含量略高于牛磺去氧膽酸，兩者之和約為4～9mg/ml范圍內；(3)膽甾醇含量普遍較高，大體上在100～200mg/ml范圍內；(4)卵磷脂、膽紅素的含量普遍很低，而膽綠素約為膽紅素的5～6倍；(5)總膽酸含量(糠醛比色法結果)一般在40mg/ml以上；(6)蛇膽汁中TCA、TCDCA和TDCA三種組分的質量比約為15～20∶2～3∶1，無嚴格的比例關系。
根據五種優質蛇膽的上述化學組成的主要特征，我們設計了五個模擬配方，其中三個用純組分組方，見表2；另外2個用雞膽或兔膽浸膏粉與半合成的主成分組方，見表3，制成的樣品經藥效學試驗證實，見表6～表9，上述五個均為有效配方。
在本發明配方設計中，突出TCA為主要成分的地位，為君藥，而TCDCA和TDCA的配比基本參照烏梢蛇膽和灰鼠蛇膽兩者的平均數值。這些配方中的組方成分質量比為牛磺膽酸29～34g/L，牛磺鵝去氧膽酸4.5～5.5g/L，牛磺去氧膽酸1.5～4.5g/L，膽甾醇4.0～6.0g/L，粘蛋白5.0～7.0g/L，卵磷脂1.0～3.0g/L，膽綠素0.5～1.5g/L，牛磺酸0.0～0.5g/L，無機鹽(ZnSO4、CuSO4、MgSO4)合計0.49g/L，另外還加有葡萄糖鈣9.50～10.5g/L及碳酸氫鈉0.0～12g/L。配方IV和V配成膽粉，1公斤膽粉配成13升溶液，其質量與配方I～III相當，所不同的是用了雞膽浸膏粉或兔膽浸膏粉代替配方I～III中全部或部分的TCDCA、TDCA、BV，使配方得到簡化，本質上是相同的，更符合中藥配方的慣例。
表2 三個“人工蛇膽液”模擬配方的組成及配比 注表2三個配方中的膽汁酸也可用它們相當量的鈉鹽配制，PH值控制在8.0～8.5。
表3 加有雞膽或兔膽浸膏粉的二個“人造蛇膽粉”配方組成與配比 *若將1kg固態混合物配成13升溶液，其質量與前面三個配方基本相當。
本發明人工蛇膽配方用主要單味藥制備 (1)牛磺膽酸的合成 綜合國外文獻報道，以膽酸為起始原料合成牛磺膽酸或其鈉鹽，主要有四種方法，即邦迪(Bondi)法[Cortese F.The synthesis of cojuugated bile acids.IV.The Bondi and Muellerprocedure[J].J Am Chem Soc，1937，592532.、柯特斯(Cortese)法[Cortese F.The synthesis ofConjugated bile acids[J].J Biol Chem，1936，119177.]、諾曼(Norman)法[3]Norman A.Preparation of conjugated bile acids using mixed carboxylic acid anhydrides[J].Ark Kemi，1955，8331]和利昂·勒克(Leon Lack)法[Leon lack，et al.Synthesis of conjugated bile acids by meansof a peptide coupling reagent[J].J Lipid Res，1973，14367]，或稱EEDQ法。發明者根據各條合成路線的技術難易程度、原料及試劑供應情況及設備條件和對環境污染等情況，選擇了諾曼法合成TCA，并用此法合成TCDCA和TDCA。實際應用時對該法作了某些修正或改進。諾曼法合成牛磺膽酸，采取“一鍋煮”的辦法，先將膽酸(原料)與三正丁胺在二氧六環中成鹽，再與氯甲酸乙酯反應生成膽酸基甲酰酐乙酯，在堿性水溶液中與牛磺酸偶合，得到目標化合物。后處理方法和精制，主要采用濃縮和重復結晶等方法，所得產品純度不高(≤90％)，消耗大量多種溶劑，生產周期很長。我們為使該法適用于工業化生產，做了多方面改進。現將改進后的工藝操作敘述如下 牛磺膽酸的合成 稱取3.2kg純膽酸投入30升反應罐中，加入2升三正丁胺和10升四氫呋喃，在室溫下攪拌使固體物料至全溶。向反應罐夾層中通入冰水，使內溫降至8～9℃后，加入1.0升氯甲酸乙酯，攪拌至反應罐中的白煙消失后，在劇烈攪拌下緩緩加入由1.2kg牛磺酸溶于1.5M NaOH溶液配成的6升溶液，控制加入速度，并讓其在10℃左右和PH值在8～9下反應50-60min。減壓濃縮，回收四氫呋喃。將濃縮液轉移到20升的分液器中，靜置片刻，分出下層水溶液(上層為三正丁胺，處理后重復使用)。下層水溶液用硫酸中和并酸化到PH3.0-3.5，冷凍后過濾，收集濾液，中和至近于中性將其噴霧干燥，得白色固體，研成細粉，稱重。置于反應罐中，加入甲醇和濃硫酸(按每100g干粉，加300ml無水甲醇和4ml濃硫酸計)在室溫下攪拌8h以上，放置過夜后抽濾或壓濾，收集濾液，加粉狀碳酸氫鈉中和至PH值8左右，減壓濃縮至干。加25升無水乙醇攪拌回流1h，待冷卻至室溫后抽濾，收集濾液，濃縮至原體積的
時加入乙酸乙酸，直至恰好析出白色沉淀為止。密閉后置于冰箱或冰庫中冷凍24h，抽濾，收集沉淀，用冷的乙醇-乙醚混合液(1∶1，V/V)洗滌、抽干；再用90％乙醇-乙醚混合液反復重結晶，得成品約3.8kg，純度≥90％。必要時再進行硅膠柱層層析或其他方法純化，可提高純度達94％～95％。
(2)牛磺去氧膽酸的合成 稱取34.2g去氧膽酸于500ml三頸燒瓶中，加入22ml三正丁胺和180ml四氫呋喃，在室溫下攪拌使溶，降溫到8℃～9℃時加入9ml氯甲酸乙酯，攪拌反應20min，緩緩加入由12g牛磺酸溶于120ml 1.0mol/L NaOH配成的冷溶液，加完后繼續攪拌反應1h，加NaOH調節反應液的PH值8～9，升溫至50℃左右減壓濃縮至糖漿狀。向濃縮物中加入600ml無水乙醇，攪拌回流30min，過濾除去不溶物，收集濾液，減壓濃縮至呈現渾濁為止，加入適量乙醚后置0°～4℃冰箱中冷凍過夜。抽濾，收集沉淀，用少量冷的乙醇-乙醚(1∶1，V/V)及乙醚依次洗滌、抽干。用干燥空氣吹干，置真空干燥箱中在45℃左右減壓干燥6h，得粗品約31g，mp169℃～174℃，用乙醇重結晶，mp可達172°～175℃。最后用90％乙醇配成飽和溶液，向其中加入乙醚，加至出現明顯渾濁為止，密封后置0℃冰箱中冷凍24h，過濾，收集結晶，用冷乙醇-乙醚混合液(1∶2，V/V)洗滌，置于盛有P2O5的真空干燥器中減壓干燥3～4d，再移至70℃恒溫箱中干燥至近于恒重。如果純度偏低，可用硅膠柱層層析法或其他方法進一步純化。
(3)牛磺鵝去氧膽酸的合成 以純粹的鵝去氧膽酸投料，使用的各種溶劑、試劑的種類和配比與牛磺去氧膽酸的合成相同，反應的溫度、反應時間和操作也相同。僅后處理做些改變先將所得濃縮物用適量1.0mol/NaOH溶液溶解，轉移到分液漏斗中加兩倍體積的乙醚萃取其中的三正丁胺，被萃取后的母液用稀鹽酸調節PH值3-4，用等體積正丁醇萃取2-3次，合并萃液，加
體積水，滴加2MNaOH溶液使其PH值達8～9，轉移到分液漏斗中，加入
體積乙酸乙酯，充分搖蕩，靜置片刻分出水層。加入二倍體積的乙酸乙酯-乙醚混合液(1∶1，V/V)，混合后密閉，置于0℃冰箱中冷凍過夜。抽濾，收集沉淀(其余操作與牛磺去氧膽酸合成相同)。
(4)雞膽和兔膽浸膏粉的制備 分別取新鮮的肉雞膽和兔膽，洗凈后劃破膽衣放出膽汁，各稱取1kg膽汁分別置于2升的分液漏斗中，滴加6M鹽酸酸化至PH值2-3，加入等體積乙酸乙酯萃取其中的膽色素(主要是膽綠素)，萃取3～4次，合并綠色萃液，減壓濃縮(T＜50°)至粘稠狀；另向母液中加入4倍乙醇，在室溫下放置48h后抽濾，收集濾液，并將其減壓蒸干(溫度≤70℃)，再將綠色粘稠液加入其中，在50℃下減壓蒸干，移至真空干燥箱中真空干燥(溫度≤50℃)2d，取出研成粉末，即為“膽汁浸膏粉”，進行質量分析(稱重計算浸膏收率，測定總膽酸、牛磺膽酸和牛磺鵝去氧膽酸、牛磺去氧膽酸、膽綠素及各種氨基酸和無機元素含量)。
(5)牛磺膽汁酸硫酸酯的合成 最近我們發現蛇膽汁中存在著3～4種未被人們認識的微量成分，通過提取分離和結構鑒定，證實為牛磺膽汁酸硫酸酯類化合物，含量較高的為牛磺膽酸-3-硫酸酯(Taurocholicacid-3-sulfate，TSCA)和牛磺去氧膽酸-3-硫酸酯(Taurodexoycholic acid-3-sulfate，TSDCA)，含量很低的為牛磺石膽酸-3-硫酸酯(Taurolithocholic acid-3-sulfate，TSLCA)和牛磺膽酸-3，7-雙硫酸酯(Taurocholic acid-3，7-bisulfates，TSSCA)。它們都是蛇膽中牛磺膽汁酸的二重結合物——牛磺膽汁酸分子中的一個或兩個羥基被硫酸酯化的產物。國外雖有這類化合物的結構和合成牛磺石膽酸-3-硫酸酯的報道[Tserng，K-y，and P.D.Klein.[J]Synthesis of sulfateesters of Lithocholic acid and taurolithocholic acid with sulfur trioxide-triethylamine.J.Lipid Res.18491(1977)]，但沒有和蛇膽成分“掛鉤”，也未見其它幾種硫酸酯合成方法的報道。我們為全面模擬蛇膽成分，所以設計合成了這些“未知化合物”。現將其合成方法敘述如下 稱取某種游離膽汁酸(如膽酸、去氧膽酸或鵝去氧膽酸等)5m mol，溶于10ml二甲基甲酰胺(DMF)中，加入酯化試劑——三氧化硫·三乙胺復合物5m mol，在室溫下攪拌30min，升溫至40℃再反應1h，待冷至室溫后加入125ml乙醚混合，置冰箱中冷凍4～5h，過濾，收集結晶，用少量乙醚洗滌、干燥，得三乙胺膽酸鹽，加0.1mol/L NaOH甲醇溶液120ml溶解，過濾除去不溶物，收集濾液，加入100ml乙醚即析出沉淀，過濾收集沉淀，用乙醇-乙醚混合液(1∶3，V/V)洗滌，真空干燥，得膽汁酸-3-硫酸酯鈉。稱取3.5m mol，溶于5ml二氧六環中，再加3.5m mol三正丁胺攪拌，再在13℃～15℃下加入3.5m mol氯甲酸乙酯，攪拌反應30min，滴加4ml牛磺酸鈉冷溶液(由0.5g牛磺酸溶于4ml1MNaOH溶液配成，預冷至5℃以下后加入)，攪拌反應15min，減壓濃縮至干，得濃縮物，將其溶于25ml的沸騰狀態的無水乙醇中，過濾除去不溶物，收集濾液，向其中加入無水乙醚，直加至析出沉淀為止，密封后置0℃～4℃冰箱中冷凍48h，過濾，收集結晶，用無水乙醚洗滌、真空干燥，得牛磺膽汁酸-3-硫酸酯鈉粗品，用硅膠G干柱層析純化(以乙酸乙酯-正丁醇-冰醋酸-水(8∶6∶3∶3，V/V)為展開劑)，得單點物(純品)。我們已證實，與從蛇膽中分離出的4種未知物相對應，它們的結構式表示如下
X＝Y＝H時，為牛磺石膽酸-3-硫酸酯(TSLCA) X＝H，Y＝OH時，為牛磺去氧膽酸-3-硫酸酯(TSDCA) X＝Y＝OH時，為牛磺膽酸-3-硫酸酯(TSCA) X＝OSO3Na，Y＝OH時，為牛磺膽酸-3，7-二硫酸酯(TSSCA) 它們在S1和S2展開系統中的Rf值列入表4中。
S1展開系統乙酸乙酯-正丁醇-冰醋酸-水(8∶6∶3∶3，V/V) S2展開系統氯仿-甲醇-醋酸-水(65∶24∶15∶9，V/V)表4 4種合成物在不同展開系統中的Rf值 表5 各合成物樣品質譜(MS)測試結果 結果表明，合成物的分子離子峰M+的質荷比與目標化合物的分子量一致。
本發明的配制工藝及其質量控制 (1)液態產品的配制及其質量控制 人造蛇膽若以溶液的形式作為上市產品，可選擇25％以上濃度的乙醇作溶劑(如果樣品是用于動物試驗則用水或生理鹽水為溶劑，適當加入羥甲基纖維素鈉配成溶液)。從物質的溶解度看，配方所用的物質大多是水溶性的，僅有少數幾種是脂溶性的(如膽甾醇、卵磷脂等)。根據我國藥典規定，“商品蛇膽”是蛇膽囊保存在1∶1的50％以上的白酒中，臨用時從浸泡液中將膽囊取出，劃破膽衣放出膽汁，并與等量的浸泡液混合，實際的乙醇濃度約為25％或略大于25％。所以人造藥用蛇膽液用≥25％藥用乙醇配制。具體操作方法如下先將膽甾醇、卵磷脂等脂溶性物質按配方規定的量，用200ml乙醇溶解；另將TCA、TDCA、CA、雞膽浸膏粉、無機鹽和碳酸氫鈉等水溶性物質混合物，加750ml蒸餾水(或去離子水)溶解，并轉移到1升的容量瓶中。然后將乙醇配成的溶液加入其中，充分混合，并追加無水乙醇至容量瓶刻度，密閉后在溫度約為15℃下靜置48h，過濾除去少量不溶物，即得。該液態產品的質量指標主要是①棕黃色或棕色透明液體；②TCA含量不低于29mg/ml；③總膽汁酸含量≥60mg/ml；④TLC圖譜(揮去溶劑后的干品用甲醇配成每1ml含1mg的樣品液，點樣10μL于硅膠G板，用氯仿-甲醇-水混合液(65∶28∶4，V/V/V)為展開劑，10％磷鉬酸乙醇液為顯色劑，80℃顯色5min)，與相同條件下的灰鼠蛇膽或烏梢蛇膽的TLC圖譜基本一致(見附圖1)；(5)IR圖譜(干樣品與KBr壓片)，紅外掃描圖譜與灰鼠蛇膽粉或烏梢蛇膽粉基本一致。
(2)固態產品的配制及其質量控制 若人造蛇膽以固態(即粉末)形式為上市產品，配制1kg產品可按配方I～III的量13倍或按配方IV或V全量制成，操作方法如下按配方分別稱取各物質的重量，并分別研成細粉(卵磷脂除外)，過40目藥篩；另將卵磷脂用200ml無水酒精溶解，置于混合器中與過篩后的其他藥粉一起混合均勻，減壓揮去酒精，再置于真空干燥箱中于60℃、0.1m mHg的真空度下干燥5h，球磨、過60目藥篩，在干燥室內用食料袋分裝(每1kg為一袋)密封，再裝入木質盒外包裝，密封后置于干燥室中保存。其產品質量控制主要指標與前面的液體產品基本相同，只是外觀不同，為淺棕色或黃綠色粉末。干品中TCA含量在38％～41％范圍內。
紅外吸收光譜特征及解析 五個配方的人工蛇膽紅外吸收光譜疊加圖譜(見圖3-圖7)與天然蛇膽(見圖2)極為相似，均顯示以牛磺膽汁酸為主成分的特征吸收，只是由于人工蛇膽中其他成分含量差異和相互影響不完全相同，使某些峰位和峰形略有改變。它們的主要特征吸收(波數，cm-1)和歸屬列舉如下 天然蛇膽(圖2)3395(VOH+VNH)，2933
2867(
CH3+CH2)，1643(VC＝O，仲酰胺普帶I)，1551(
仲胺普帶II)，1448(
CH3)，1377(
CH3)，1218(VCN+VS＝O，R-SO2-OH)，1047(VC-O，7β-OH)，912(VOH，7α-OH)，590(VOH，3α-OH)，528(VOH，7β-OH)。
人工蛇膽配方I(圖3)3396(VOH+VNH)，2930
2867(
CH3+CH2)，1643(VC＝O，仲酰胺譜帶I)，1562(
仲酰胺譜帶II)，1446(
CH3)，1377(
CH3)，1214(VCN+VS＝O，R-SO2-OH)，1047(VC-O，7β-OH)，618，581(VOH，3α-OH)，529(VOH，7β-OH)。
人工蛇膽配方II(圖4)3361(VOH+VNH)，2986
2867(
CH3+CH2)，1643(VC＝O，仲酰胺譜帶I)，1562(
仲酰胺譜帶II)，1377(
CH3)，1214(VCN+VS＝O，R-SO2-OH)，1047(VC-O，7β-OH)等等。
人工蛇膽配方III(圖5)3419-3311(VOH+VNH)，2936
2868(
CH3+CH2)，1641(VC＝O，仲酰胺譜帶I)，1565(
仲酰胺譜帶II)，1375(
1206(VCN+VS＝O，R-SO2-OH)，1051(VC-O，仲醇7β-OH)等等。
人工蛇膽配方IV(圖6)3311(VOH+VNH)，2931
2860(
CH3+CH2)，1637(VC＝O，仲酰胺譜帶I)，1547(
仲酰胺譜帶II)，1450(
CH3)，1376(
CH3)，1213(VCN+VS＝O，R-SO2-OH)，1047(VC-O，7β-OH)980，809，737，590，531等。人工蛇膽配方V(圖7)3326(VOH＝VNH)，2935(
2866(
CH3+CH2)，1637(VC＝O，仲酰胺譜帶I)，1552，(
仲酰胺譜帶II)，1447(
CH3)，1377(
CH3)，1214-1078(VCN+VS＝O，R-SO2-OH)，1047(VC-O，7β-OH)，980，809，737，590，531等。
上述各圖譜中幾乎都有1250，1080，1047，980，920，610及530或其附近出現吸收峰，這7個峰是5-β構型膽甾烷核上(C3、C7、C12位C-O與α-OH伸縮振動的特征吸收峰。另外，各圖譜中都看不見明顯的1710cm-1 VC＝O(-COOH)吸收峰，提示樣品基本上不含游離膽汁酸，即使有，其含量極低。
本發明提供的人造藥用蛇膽的主要藥效學實驗結果 本品加適量的羥甲基纖維素鈉蒸餾水配成各配方所述的樣品液，以牛磺膽酸為劑量指標給藥，以合格的昆明純種同批小鼠、豚鼠和大鼠為實驗動物，按文獻所載的經典方法(模型)進行鎮咳、祛痰、平喘和抗炎等實驗，結果見表6-表9。
表6 各配方制備的人造藥用蛇膽液鎮咳實驗結果 *以TCA為劑量指標，按400mg/kg劑量給藥；以下各實驗亦同此。
表7 各配方制備的人造藥用蛇膽液祛痰作用實驗結果 表8 各配方制備的人造藥用蛇膽液平喘實驗結果 表9 各配方人工藥液抗炎作用——對角叉菜膠致大鼠足腫脹抑制率實驗結果 以上藥效學實驗結果表明，人工蛇膽五個配方樣品都是有效的，與天然蛇膽沒有顯著性差異。
人工蛇膽新舊配方及工藝比較 本專利申請人于1995年申請了人工蛇膽發明專利[申請號95112441.2；專利號ZL95112441.2]，隨著對本項發明的進一步研究，發現原專利雖然構思正確，但配方和工藝有不完善之處，尤其是工業化生產的可行性較差，涉及的工藝生產成本較高，難以工業化實施，較難把此新藥開發出來；另一方面在后繼的研究中有新的發現和改進，原專利無法概括，現將本專利申請提供的技術方案與上述原專利技術進行對比如下 (1)人工蛇膽新舊配方的對比(見表10) 表10 人工蛇膽新舊配方比較 ※由于加入的雞膽粉中有這些成分，所以未另外加入。
(2)說明及解析 ①根據我們對天然蛇膽成分的最新分析結果，其主要藥用成分除牛磺膽酸和牛磺去氧膽酸之外，牛磺鵝去氧膽酸(TCDCA)也是其中的一種，而且較之于牛磺去氧膽酸(TDCA)更為重要(含量較高，藥效較強)的有效成分，而原配方未將其列入。另外還發現各種蛇膽中普遍含有微量的牛磺膽酸硫酸酯(TSCA或TSDCA)這類成分，據文獻報道有抑制癌細胞活性和抗艾滋病毒的作用。新配方中加入了這類物質，原配方沒有。這樣也解釋了天然蛇膽TLC圖譜下部出現所謂“雜質斑點”，意味著對蛇膽成分認識的深入。
②在新配方中首次把雞膽汁或兔膽汁浸膏粉作為“人工蛇膽”的一味重要的組方藥物(實際上是有效組分群)。它代替了原配方中的膽綠素、牛磺鵝去氧膽酸及牛磺去氧膽酸，微量元素等有效成分，而且是純天然的。用膽汁浸膏配方符合中醫中藥觀點和習慣，它有國家標準或地方標準，而單一組分如膽綠素尚無國家標準。何況，近期研究發現雞膽汁與蛇膽汁的化學成分和藥理作用最為相似。雞膽汁主含牛磺鵝去氧膽酸和膽綠素等；兔膽汁主含牛磺去氧膽酸和膽綠色等。它們都有鎮咳、祛痰等作用。原配方中雖然意識到雞膽汁藥用，但只把其中的膽綠素作為一種著色劑，而沒有考慮到雞膽汁在配方中的妙用。相反地，原配方把去毒魚膽汁作為一種配方藥物，而“魚膽去毒”技術的難度很大，會導致安全性問題。
③在配方中的幾種膽汁酸作為組方成分，不僅要考慮它們的合理配比，而且還考慮到入藥成分的形式對產品穩定性、工藝過程的影響。實踐表明，它們的鈉鹽易吸濕、穩定性較差，包裝、貯藏、運輸都存在問題，現改用它們的酸型就較好地解決了這些問題，所以新配方以它們的酸型入藥，并強調以固態粉末作為上市產品為好。
④配方中的主成分(牛磺膽汁酸)無論是通過半合成或提取分離等手段獲得，成本較高，幾乎由它決定了人工蛇膽的產品價位。原配方中這些主要成分的配方量是新配方的二倍，所以按原配方生產成本較高，而藥效不及新配方產品的藥效。
⑤新配方中加入的無機鹽都是國內市場可購到藥用品，而原配方中有的是不能口服的化工產品，如ZnCI2等各種氯化物，國內大多不作藥用品，而它的硫酸鹽才作藥用品。
(3)實施新、舊配方工業化生產的工藝比較 表11 實施新、舊配方的工藝比較 根據五種優質蛇膽的上述化學組成的主要特征，本發明提供了五個人造藥用蛇膽模擬配方，其中三個用純組分組方，見表2；另外2個用雞膽或兔膽浸膏粉與半合成的主成分組方，見表3，本發明提供的人造藥用蛇膽經藥效學試驗證實與天然蛇膽等效，見表6～表9。
本發明提供的人造藥用蛇膽的這些配方中的組分及組分質量比為牛磺膽酸29～34g/L，牛磺鵝去氧膽酸4.5～5.5g/L，牛磺去氧膽酸1.5～4.5g/L，膽甾醇4.0～6.0g/L，粘蛋白5.0～7.0g/L，卵磷脂1.0～3.0g/L，膽綠素0.5～1.5g/L，牛磺酸0.0～0.5g/L，無機鹽(ZnSO4、CuSO4、MgSO4)合計0.49g/L，另外還加有葡萄糖鈣9.50～10.5g/L及碳酸氫鈉0.0～12g/L。配方IV和V配成膽粉，1公斤膽粉配成13升溶液，其質量與配方I～III相當，所不同的是用了雞膽浸膏粉或兔膽浸膏粉代替配方I～III中全部或部分的TCDCA、TDCA、BV，使配方得到簡化，本質上是相同的，更符合中藥配方的慣例。
圖1為天然蛇膽汁與配方V人工品的TLC圖譜；圖2為天然蛇膽粉IR圖譜；圖3為配方I人工品IR圖譜；圖4為配方II人工品IR圖譜；圖5為配方III人工品IR圖譜；圖6為配方IV人工品IR圖譜；圖7為配方V人工品IR圖譜。
具體實施例方式 實施例1. 本發明人造藥用蛇膽所含組分和各組分的重量配比是牛磺膽酸380～400重量份；雞膽汁干浸膏162～210重量份；膽甾醇40重量份；粘蛋白96重量份；硫酸鋅ZnSO4·7H2O 1重量份；葡萄糖酸鈣128～148重量份；碳酸氫鈉108～120重量份；牛磺酸5重量份；牛磺去氧膽酸0～12重量份；兔膽汁干浸膏0～48重量份。根據上述組分和重量配比選取原料，配制成固態粉末狀混合物即得本發明人造藥用蛇膽粉。具體操作例如下 取 牛磺膽酸400重量份 雞膽汁干浸膏162重量份 膽甾醇 40重量份 粘蛋白 96重量份 硫酸鋅ZnSO4·7H2O1重量份 葡萄糖酸鈣 128重量份 碳酸氫鈉108重量份 牛磺酸 5重量份 配制成固態粉末狀混合物，得本發明人造藥用蛇膽粉。
實施例2 配制人造藥用蛇膽粉 按下列組分和重量配比選取原料，配制成固態粉末狀混合物，即得本發明提供的人造藥用蛇膽粉 牛磺膽酸 380重量份 雞膽汁干浸膏 162重量份 膽甾醇 40重量份 粘蛋白 96重量份 硫酸鋅ZnSO4·7H2O1重量份 葡萄糖酸鈣 128重量份 碳酸氫鈉108重量份 牛磺酸 5重量份 牛磺去氧膽酸1重量份 兔膽汁干浸膏1重量份 實施例3 配制人造藥用蛇膽粉 按下列組分和重量配比選取原料，配制成固態粉末狀混合物即得本發明提供的人造藥用 蛇膽粉 牛磺膽酸400重量份 雞膽汁干浸膏210重量份 膽甾醇 40重量份 粘蛋白 96重量份 硫酸鋅ZnSO4·7H2O1重量份 葡萄糖酸鈣 148重量份 碳酸氫鈉120重量份 牛磺酸 5重量份 牛磺去氧膽酸12重量份 兔膽汁干浸膏48重量份 實施例4 配制人造藥用蛇膽粉 按下列組分和重量配比選取原料，配制成固態粉末狀混合物即得本發明提供的人造藥用 蛇膽粉 牛磺膽酸 390克 雞膽汁干浸膏 190克 膽甾醇 40克 粘蛋白 96克 硫酸鋅ZnSO4·7H2O 1克 葡萄糖酸鈣 135克 碳酸氫鈉 110克 牛磺酸5克 牛磺去氧膽酸 8克 兔膽汁干浸膏 25克 實施例5 制備人造藥用蛇膽液 取上述實施例1至4中任一項所制得的人造藥用蛇膽粉，溶于25％的乙醇溶液中，即得本發明提供得人造藥用蛇膽液。
實施例6 制備人造藥用蛇膽液 取上述實施例1至4中任一項所制得的人造藥用蛇膽粉，溶于50％的乙醇溶液中，即得本發明提供得人造藥用蛇膽液。
實施例7 牛磺膽酸的合成 稱取3.2kg純膽酸投入30升反應罐中，加入2升三正丁胺和10升四氫呋喃，在室溫下攪拌使固體物料至全溶。向反應罐夾層中通入冰水，使內溫降至8～9℃后，加入1.0升氯甲酸乙酯，攪拌至反應罐中的白煙消失后，在劇烈攪拌下緩緩加入由1.2kg牛磺酸溶于1.5M NaOH溶液配成的6升溶液，控制加入速度，并讓其在10℃左右和PH值在8～9下反應50-60min；減壓濃縮，回收四氫呋喃。將濃縮液轉移到20升的分液器中，靜置片刻，分出下層水溶液；下層水溶液用硫酸中和并酸化到PH3.0-3.5，冷凍后過濾，收集濾液，中和至近于中性將其噴霧干燥，得白色固體，研成細粉，稱重，置于反應罐中，加入甲醇和濃硫酸，按每100g干粉，加300ml無水甲醇和4ml濃硫酸計在室溫下攪拌8h以上，放置過夜后抽濾或壓濾，收集濾液，加粉狀碳酸氫鈉中和至PH值8左右，減壓濃縮至干，加25升無水乙醇攪拌回流1h，待冷卻至室溫后抽濾，收集濾液，濃縮至原體積的三分之二時加入乙酸乙酸，直至恰好析出白色沉淀為止，密閉后置于冰箱或冰庫中冷凍24h，抽濾，收集沉淀，用冷的體積比為1∶1的乙醇-乙醚混合液洗滌、抽干；再用90％乙醇-乙醚混合液反復重結晶，得成品約3.8kg。
權利要求
1.一種人造藥用蛇膽粉，其特征在于它含的組分和各組分間的重量配比是
牛磺膽酸 380～400重量份
雞膽汁干浸膏 162～210重量份
膽甾醇 40重量份
粘蛋白 96重量份
硫酸鋅ZnSO4·7H2O 1重量份
葡萄糖酸鈣 128～148重量份
碳酸氫鈉 108～120重量份
牛磺酸 5重量份
牛磺去氧膽酸 0～12重量份
兔膽汁干浸膏 0～48重量份
2.根據權利要求1所述的人造藥用蛇膽粉，其特征在于它含的組分和各組分間的重量配比是
牛磺膽酸 400重量份
雞膽汁干浸膏 162重量份
膽甾醇40重量份
粘蛋白96重量份
硫酸鋅ZnSO4·7H2O 1重量份
葡萄糖酸鈣128重量份
碳酸氫鈉 108重量份
牛磺酸5重量份
3.根據權利要求1所述的人造藥用蛇膽粉，其特征在于它含的組分和各組分間的重量配比是
牛磺膽酸 380重量份
雞膽汁干浸膏 162重量份
膽甾醇 40重量份
粘蛋白 96重量份
硫酸鋅ZnSO4·7H2O 1重量份
葡萄糖酸鈣 128重量份
碳酸氫鈉 108重量份
牛磺酸 5重量份
牛磺去氧膽酸1重量份
兔膽汁干浸膏1重量份
4.根據權利要求1所述的人造藥用蛇膽粉，其特征在于它含的組分和各組分間的重量配比是
牛磺膽酸400重量份
雞膽汁干浸膏210重量份
膽甾醇 40重量份
粘蛋白 96重量份
硫酸鋅ZnSO4·7H2O 1重量份
葡萄糖酸鈣 148重量份
碳酸氫鈉120重量份
牛磺酸 5重量份
牛磺去氧膽酸12重量份
兔膽汁干浸膏48重量份
5.一種人造藥用蛇膽粉的制備方法，其特征在于按照權利要求1或2或3所述的組分和配比選取原料，配制成固態粉末狀混合物。
6.一種人造藥用蛇膽液的制備方法，其特征在于將按照權利要求3的方法所制得的人造藥用蛇膽粉溶于乙醇溶液中。
7.根據權利要求5所述的人造藥用蛇膽液的制備方法，其特征在于所述的乙醇溶液的濃度為25％至50％。
8.根據權利要求6所述的人造藥用蛇膽液的制備方法，其特征在于所述的乙醇溶液的濃度為25％。
9.牛磺膽酸的合成方法，其步驟如下
稱取3.2kg純膽酸投入30升反應罐中，加入2升三正丁胺和10升四氫呋喃，在室溫下攪拌使固體物料至全溶。向反應罐夾層中通入冰水，使內溫降至8～9℃后，加入1.0升氯甲酸乙酯，攪拌至反應罐中的白煙消失后，在劇烈攪拌下緩緩加入由1.2kg牛磺酸溶于1.5MNaOH溶液配成的6升溶液，控制加入速度，并讓其在10℃左右和PH值在8～9下反應50-60min；減壓濃縮，回收四氫呋喃。將濃縮液轉移到20升的分液器中，靜置片刻，分出下層水溶液；下層水溶液用硫酸中和并酸化到PH3.0-3.5，冷凍后過濾，收集濾液，中和至近于中性將其噴霧干燥，得白色固體，研成細粉，稱重，置于反應罐中，加入甲醇和濃硫酸，按每100g干粉，加300ml無水甲醇和4ml濃硫酸計在室溫下攪拌8h以上，放置過夜后抽濾或壓濾，收集濾液，加粉狀碳酸氫鈉中和至PH值8左右，減壓濃縮至干，加25升無水乙醇攪拌回流1h，待冷卻至室溫后抽濾，收集濾液，濃縮至原體積的三分之二時加入乙酸乙酸，直至恰好析出白色沉淀為止，密閉后置于冰箱或冰庫中冷凍24h，抽濾，收集沉淀，用冷的體積比為1∶1的乙醇-乙醚混合液洗滌、抽干；再用90％乙醇-乙醚混合液反復重結晶，得成品約3.8kg。
全文摘要
一種人造藥用蛇膽粉，它是由牛磺膽酸、雞膽汁干浸膏、膽甾醇、粘蛋白、硫酸鋅ZnSO4·7H2O、葡萄糖酸鈣、碳酸氫鈉和牛磺酸配制成固態粉末狀混合物，它還可含有牛磺去氧膽酸和/或兔膽汁干浸膏，將該人造藥用蛇膽粉溶于25％至50乙醇溶液中可制成人造藥用蛇膽液，具有與優質天然蛇膽極為相似的化學組成和藥理效應，具有顯著的鎮咳、祛痰、平喘、抗炎等作用，無明顯毒副作用，是天然藥用蛇膽的理想代用品。
文檔編號A61K35/413GK101028510SQ200610018468
公開日2007年9月5日 申請日期2006年3月3日 優先權日2006年3月3日
發明者石朝周 申請人:石朝周