心血管藥物制劑、制備方法及用途的制作方法

專利名稱：心血管藥物制劑、制備方法及用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及藥物技術領域，具體的說是一種心血管藥物制劑、制備方法及用途。
背景技術：
醋柳黃酮是從天然植物沙棘中提取、分離、精制得到的黃酮化合物，其主要有效成分為異鼠李素、槲皮素、異鼠李素-3-葡萄糖甙等多種黃酮化合物。能增加實驗動物心肌和腦組織的血流量，降低心肌耗氧量，提高耐缺氧能力，改善心腦缺血所致的心律失常和細胞損害；降低血清膽固醇和低密度脂蛋白的含量；擴張血管、降低血壓；抑制血小板聚集，降低血液黏度。目前市場只有口服固體制劑，由于醋柳黃酮難溶于水，疏水性強，片劑的崩解時間長，吸收差等(中國專利CN1490000A)，無法直接制備水溶性的注射劑，到目前為止還沒有增強其水溶性減少吸收差異的口服制劑，也還沒有文獻報道制備出易溶解的醋柳黃酮的注射劑，也沒有制備出易溶解的醋柳黃酮復合物或包合物，并闡明其用途的報道。

發明內容
本發明要解決的技術問題在于研究一種臨床適用的一種心血管藥物制劑及其制備方法，包括醋柳黃酮注射液、輸液、臨用前稀釋溶解的注射用凍干粉和無菌粉末制劑。心血管藥物制劑中可含有易溶解的醋柳黃酮復合物或包合物，并給出了醋柳黃酮復合物或包合物用途。
為解決上述問題，本發明提供如下技術方案心血管藥物制劑可由醋柳黃酮、藥學上可接受的無機堿或有機堿生成的易溶解于水的復合物，其中醋柳黃酮與藥學上可接受的無機或藥學上可接受的有機堿的摩爾比為1∶0.8至1∶100；或由醋柳黃酮與環糊精或環糊精衍生物形成水溶性的包合物，其中醋柳黃酮與環糊精或環糊精衍生物的質量比為1∶1至1∶100；也可以由醋柳黃酮和低分子醇，聚山梨醇酯、聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇、泊洛沙姆助溶劑中的一種或多種組成的水溶性的制劑；在制劑中并可含有藥學上可接受的載體，載體包括賦形劑、pH調節劑、抗氧劑、穩定劑、助溶劑，可以制備成包括注射液、輸液、凍干粉針、無菌分裝粉針制劑。在本發明中醋柳黃酮的量以異鼠李素計。
醋柳黃酮(以異鼠李素計)與藥學上可接受的無機或有機堿的摩爾比為1∶0.8至1∶100，可以制備成包括注射液、輸液、凍干粉針、無菌分裝粉針。醋柳黃酮復鹽或復合物中醋柳黃酮(以異鼠李素計)與藥學上可接受的無機堿或有機堿的摩爾比優選為1∶1.0～30。
醋柳黃酮復合物中醋柳黃酮(以異鼠李素計)與藥學上可接受的無機堿或有機堿的更為理想的摩爾比為1∶2.0～20。
所述醋柳黃酮注射劑，醋柳黃酮由異鼠李素組成，可含少量槲皮素、異鼠李素-3-葡萄糖甙等多種黃酮化合物，醋柳黃酮中有效成分異鼠李素的含量一般在5％～100％之間；一般每單位制劑可含醋柳黃酮復鹽或復合物或包合物1～200mg(以異鼠李素計)，也可以單獨含異鼠李素復鹽或復合物或包合物1～200mg(以異鼠李素計)。
所述的心血管藥物制劑，其特征在于其pH在6.5～12之間，優選pH在7.5～11.0之間。
令人驚訝的是，對藥用堿與醋柳黃酮作用形成的復合物，不僅使用無機堿藥用氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸三鈉等，而且使用藥用有機堿葡甲胺、葡乙胺、煙酰胺、枸櫞酸鈉、二乙醇胺、氨丁三醇、堿性氨基酸，如賴氨酸、L-精氨酸能與醋柳黃酮作用形成的復鹽或復合物，加少量注射用水，生理鹽水、5％葡萄糖水或10％葡萄糖水能夠很快地溶解，而原來幾乎不溶解，而且獲得的制劑能夠穩定長期儲存，滿足臨床用藥安全有效的目的。
藥用無機堿或有機堿為廣義的路易斯堿，藥用無機堿可以是氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸氫鹽、磷酸氫二鈉、磷酸三鈉、磷酸氫二銨、磷酸氫二鉀、磷酸鉀、偏磷酸鈉、稀氨水溶液等無機堿中的一種或幾種，有機堿可以是葡甲胺、葡乙胺、葡辛胺、氨丁三醇，無水或六水哌嗪、嗎啉、煙酰胺、1，2-己二胺、三羥甲基氨基甲烷、三乙醇胺、二乙醇胺、乙醇胺、異丙醇胺、二異丙醇胺、二異丙胺、二乙胺、乙二胺、苯甲酰胺、硫脲、烏洛托品、雙甘氨肽、氨基酸，如L-賴氨酸、D-賴氨酸、DL-賴氨酸、L-精氨酸、D-精氨酸、DL-精氨酸、組氨酸、L-鳥氨酸等，檸檬酸鹽、枸櫞酸二鈉、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸鈉、枸櫞酸鉀，乳酸鈉，乳酸鉀，泛酸鈉、葡萄糖酸鈉等其中的一種或多種。
堿性氨基酸可以是消旋的氨基酸，也可以是光學活性的氨基酸。如組氨酸可以是消旋的組氨酸，也可以是光學活性的組氨酸。
藥用堿較好的選擇可以是氫氧化鈉、枸櫞酸三鈉、葡甲胺、葡乙胺、葡辛胺、氨丁三醇，二乙醇胺、無水或六水哌嗪、嗎啉、煙酰胺、三羥甲基氨基甲烷、堿性氨基酸，如L-賴氨酸、DL-賴氨酸、L-精氨酸、D-精氨酸、DL-精氨酸、組氨酸、L-鳥氨酸等中的一種或幾種。
以上陳述并不妨礙賴氨酸、L-精氨酸等作為輔料存在于制劑中，如賴氨酸、L-精氨酸可作為本發明的凍干制劑中的賦形劑。
本發明突出的一點是得到藥用堿與醋柳黃酮作用形成易溶解的復合物，使用藥用無機堿或藥用有機堿的目的是使其與醋柳黃酮作用形成易溶解的復合物，復鹽或復合物存在的形式可以是任何分子形式存在，亦是指配制本發明制劑的物質，對它們在粉末、液體或經凍干狀態的制劑中的形態沒有限制。
在無菌凍干制劑中，藥學上可接受的賦形劑為右旋糖酐、甘露醇、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、乳糖、一水乳糖、乳糖醇、海藻糖、麥芽糖、木糖、木糖醇、糖類物質、氯化鎂、氯化鈉、硫酸鈉、琥珀酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、葡萄糖酸及鹽，如葡萄糖酸鈉、鉀、鈣、鎂等，葡萄糖醛酸及鹽，乳糖酸鹽、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇1000-4000、硫酸鎂、肌醇、植酸、咪唑、煙酰胺、枸櫞酸、枸櫞酸鹽、泛酸及其鹽，如泛酸鈣、泛酸鈉，天冬酰胺、甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、組氨酸、組氨酸等及其鹽，膽酸鹽、如甘氨膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、牛磺膽酸鈉、膽酸鈉、熊脫氧膽酸鈉等，甘草酸、甘草次酸、甘草次酸鹽、甘草甜素、甘草次酸鹽、甘草酸鹽如甘草酸三鈉、二鈉鹽、三胺鹽、二胺鹽、單胺鹽、鉀鹽，葡甲胺或其鹽、注射用水、水解明膠、可溶性淀粉、可溶性纖維素類物質，如羥丙基纖維素鈉等，環糊精或環糊精衍生物，可含其中的一種或多種。
環糊精或環糊精衍生物，包括α-環糊精、β-環糊精、γ-環糊精，葡糖基-環糊精(G1-CYD)，包括葡萄糖基-α-環糊精(G1-α-CYD)、葡糖基-β-環糊精(G1-β-CYD)、二葡糖基-β-環糊精(2G1-β-CYD)、麥芽糖基-環糊精(G2-CYD)，麥芽糖基-α-環糊精(G2-α-CYD)、麥芽糖基-β-環糊精(G2-β-CYD)、麥芽糖基-γ-環糊精(G2-γ-CYD)，麥芽三糖基-環糊精(G3-CYD)，麥芽三糖基-α-環糊精(G3-α-CYD)，麥芽三糖基-β-環糊精(G3-β-CYD)，麥芽三糖基-γ-環糊精(G3-γ-CYD)，甲基β-環糊精、乙基β-環糊精、二甲基β-環糊精、2，6二甲基β-環糊精(DM-β-CYD)、2，3，6三甲基β-環糊精(TM-β-CYD)、β-環糊精磺烷基醚(SAE-β-CYD)、羥乙基-β-環糊精、羥丙基β-環糊精、2-羥丙基β-環糊精(2-HP-β-CYD)、3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羥丙基β-環糊精(DHP-β-CYD)、磺丁醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等，環糊精聚合物CDPS、CDPS-H、CDPS-L等。
其中賦形劑優選甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡甲胺、賴氨酸、L-精氨酸、L-鳥氨酸、2-羥丙基β-環糊精、磺丁醚-β-環糊精、注射用水等中的一種或幾種。
本發明的相關制劑中，藥學上可接受的pH調節劑可以是鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、氫溴酸、甲酸、丙酸、醋酸、醋酸鉀、醋酸鈉、醋酸銨、硼酸、乳酸及其鹽，如乳酸鈉，枸櫞酸及其鹽，如枸櫞酸二鈉、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸鈉、一水檸檬酸、枸櫞酸鉀，無水碳酸鈉、結晶碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、蘇打石灰、氧化鈣、注射用水、稀磷酸、磷酸二氫鈣、磷酸氫鈣、磷酸鈣、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二銨、磷酸氫二鉀、順丁烯二酸、琥珀酸及鹽、植酸、D-酒石酸，L(+)-酒石酸、酒石酸氫鈉、DL-酒石酸、酒石酸氫鉀、酒石酸鉀鈉、硼砂、硼酸、丁二酸、己酸、己二酸、反丁烯二酸、碳酸銨、固體二氧化碳、液體二氧化碳、芳香胺醑、1，2-己二胺、次磷酸、偏磷酸鈉、聚偏磷酸鉀、偏磷酸鉀，三羥甲基氨基甲烷、三乙醇胺、二乙醇胺、乙醇胺、異丙醇胺、二異丙醇胺、2-氨基-2-(羥甲基)1，3-丙二醇胺、1，2-己二胺、N-甲基葡萄胺、二異丙胺以及它們的鹽，多羥基羧酸及鹽，多羥基羧酸是葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、乳糖醛酸、乳糖酸、半乳糖醛酸、蘋果酸、蘇糖酸、葡庚糖酸、雙(羥基甲基)乙酸、三羥基丁酸等，羥基乙酸、二羥基戊酸、二羥基丁酸、二羥基異戊酸、二羥基異丁酸、2，3-二羥基戊二酸、二羥基己二酸、煙酸、濃氨水溶液、稀氨水溶液、二氧化碳、δ-葡萄糖酸內酯，甘草酸鹽、植酸(肌醇六磷酸)及鹽、如肌醇六磷酸鈉、肌醇六磷酸鉀、苯甲酸及其鹽，如苯甲酸鈉，甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、乳糖醛酸、甘油酸、甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、蛋氨酸、氨基酸及氨基酸鹽的一種或多種。pH調節劑優選葡萄糖酸、鹽酸、氫氧化鈉、枸櫞酸、酒石酸、蘋果酸的一種或多種。
其抗氧劑和穩定劑可以是無機硫化合物，亞硫酸、亞硫酸鹽化合物(亞硫酸鈉、亞硫酸等)、亞硫酸氫鹽化合物(亞硫酸氫鈉、亞硫酸氫鉀等)、焦亞硫酸鹽(包括焦亞硫酸鈉、焦亞硫酸鉀等)、連二亞硫酸鹽(鈉鹽、鉀鹽等)、硫代硫酸鹽(包括鈉鹽、鉀鹽等)，有機硫化合物硫脲、谷胱甘肽、巰基乙酸鈉、二巰基丙醇、巰基乙酸及鹽、如巰基乙酸鈉等，甲醛次硫酸鈉、硫甘油、硫代乳酸及鹽、硫代二丙酸及鹽、硫代山梨醇、硫代水楊酸、二硫代草酰胺、8-羥基喹啉、吡多胺及鹽、苯酚類化合物，如沒食子酸及鹽、沒食子酸乙酯、沒食子酸丙酯、沒食子酸辛酯、沒食子酸十二酯、咖啡酸、咖啡酸鹽、阿魏酸、阿魏酸鹽、二丁基羥基甲苯、叔丁基對羥基茴香醚、二叔丁基對苯酚、去甲二氫愈創木酸(NDGA)、2，5-二羥基苯甲酸、2，5-二羥基苯甲酸鹽、葡萄糖酸、植酸(肌醇六磷酸)及鹽、苯酚或其衍生物、水楊酸或其金屬鹽；葡甲胺或其鹽、氨三丁醇或其鹽，氨基酸類化合物，包括谷氨酸鈉、甘氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、L-亮氨酸、L-異亮氨酸、L-色氨酸、L-賴氨酸、L-蛋氨酸、L-頡氨酸、氨基酸以及其鹽；甘草次酸鹽、甘草酸鹽、烯醇類化合物，如抗壞血酸及抗壞血酸鹽(包括抗壞血酸鈉等)、抗壞血酸棕櫚酯、異抗壞血酸及異抗壞血酸鹽、丙酮合抗壞血酸、a-生育酚、L-半胱氨酸、L-半胱氨酸鹽酸鹽、煙酰胺、酒石酸、EDTA及EDTA二鈉、EDTA四鈉、依地酸鈣鈉、二乙烯基三氨基戊乙酸、二乙基三胺基戊乙酸、N-(2-羥乙基)-乙二胺三乙酸三鈉鹽、N-二(2-羥乙基)甘氨酸中的一種或多種；優選L-半胱氨酸鹽酸鹽、亞硫酸鈉、依地酸鈣鈉、焦亞硫酸鈉。當在本制劑中加入抗氧劑時，抗氧劑或穩定劑加入量(重量比)為總量的0.0001～5％，優選0.001～1％。
醋柳黃酮可以與以上環糊精形成的水溶性的包合物(亦為復合物)，環糊精優選2-羥丙基β-環糊精(2-HP-β-CYD)、3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD)、磺丁醚-β-環糊精(SBE-β-CD)等中的一種或多種，并由此制備能夠穩定存放的制劑，這在已公開文獻中未曾報道過。醋柳黃酮與環糊精或環糊精衍生物形成水溶性的包合物，其中醋柳黃酮(以異鼠李素計)與環糊精或環糊精衍生物的質量或重量比為1∶5至1∶60；醋柳黃酮(以異鼠李素計)與環糊精或環糊精衍生物的質量或重量比更優選為1∶5至1∶40。
我們發現疏水的醋柳黃酮當和低分子醇，聚山梨醇酯、聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇、泊洛沙姆助溶劑中的一種或多種組成的水溶性的制劑時，我們發現疏水的醋柳黃酮能夠穩定存在，這在已公開的文獻中并沒有提供制備上述穩定的制劑的成分和方法。本方法中所提到的低分子醇，可以是丙二醇、乙醇、甘油等，聚山梨醇酯可以是吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇系列，可以是PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、1000、PEG1540、PEG4000，泊洛沙姆系列，可以是泊洛沙姆-188，泊洛沙姆-237，泊洛沙姆-338，泊洛沙姆-407等助溶劑其中的一種或多種，其中優選乙醇，丙二醇，吐溫80，PEG400、泊洛沙姆-407等藥學上可接受的水溶性高分子助溶劑中的一種或多種。以上制備的制劑并可含有藥學上可接受的載體，載體包括賦形劑、pH調節劑、抗氧劑、穩定劑。
心血管藥物注射劑的制備方法可以如下A.一種心血管藥物制劑的注射劑制備方法，將藥學上可接受的無機堿或有機堿中的一種或幾種的注射用水中，攪拌，使溶解，再將醋柳黃酮粉末加于其中，攪拌10-60分鐘，過濾，可加入藥學上可接受的抗氧劑，抗氧劑可以是亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、L-半胱氨酸、抗壞血酸鈉中的一種或幾種，亦可加等滲調節劑氯化鈉、或葡萄糖、或右旋糖酐，用藥學上可接受的pH調節劑如檸檬酸、醋酸、鹽酸、硫酸、磷酸、馬來酸、琥珀酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、抗壞血酸中的一種或幾種，調節pH至6.5～11.5，優選pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭攪拌30分鐘，過濾，添加注射用水至足量，濾過，通氮氣灌封，滅菌，得到醋柳黃酮注射液或輸液。
B.無菌凍干注射劑制備方法在配制容器中，加配制量80％的注射用水，加藥學上可接受的無機堿或有機堿中的一種或幾種，溶解于水中，再加醋柳黃酮，攪拌10～60min，過濾，再加藥學上可接受的抗氧劑中的一種或幾種，使溶解，然后以PH調節劑調節pH至7.0～12，優選pH至7.5～11，同時加0.001～2％(g/ml)的活性炭攪拌下30分鐘過濾，添加注射用水至足量，無菌過濾，測定中間體含量，分裝在西林瓶中，每瓶約1～5ml，加塞、-40℃～-70℃下預凍1～4小時，-25℃～-15℃左右冷凍干燥20～48小時，然后升溫15℃～35℃左右干燥2～8小時，重要的是要將控制水分在0.01～10％之間，壓塞、放真空、出箱。
C、將藥學上可接受的無菌無機堿或有機堿中的一種或幾種溶入蒸餾水中，加入醋柳黃酮，攪拌10～60min，加0.001～2％(g/ml)的活性炭攪拌下30分鐘過濾，補水，然后以PH調節劑調節pH至7.0～12，再經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，濾液經真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，控制水分在0.001～10％之間，粉碎得14～150目的顆粒大小的粉末，再將該復合物按劑量進行無菌分裝，壓蓋即得成品。
心血管藥物注射劑的制備方法還可以如下A、由無菌高純的醋柳黃酮與藥學上可接受的無菌無機堿或有機堿中的一種或幾種分別按粉針劑制備工藝程序操作，分裝于西林瓶中；另將一支無菌注射用水1～20ml/支組合成組合包裝，使用時將注射用水注入無菌粉針中，使有機堿與醋柳黃酮作用形成易溶解于水的穩定的復合物，使其pH為7.0～12，供臨床靜脈注射。
B、或將無菌高純的醋柳黃酮按粉針劑制備工藝程序操作，分裝于西林瓶中；另將藥學上可接受的無菌無機堿或有機堿中的一種或幾種溶解于無菌注射用水，加入適量的藥學上可接受的抗氧劑和穩定劑，使注射用溶媒每支體積為1～20ml，與分裝于西林瓶中無菌異鼠李素組合成組合包裝，使用時將注射用溶媒注入無菌粉針中，使有機堿與醋柳黃酮作用形成易溶解于水的穩定的復合物，使其pH為7.0～12，供臨床靜脈注射。
C、將藥學上可接受的無菌無機堿或有機堿中的一種或幾種溶入蒸餾水中，攪拌加入醋柳黃酮，使溶解，過濾，補水，然后以pH調節劑調節pH至7.0～12，再經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，濾液經真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，控制水分在0.001～10％之間，粉碎得14～150目的顆粒大小的粉末，再將該復合物按含醋柳黃酮(以異鼠李素計)的量1～200mg進行無菌分裝，分裝于西林瓶中；另將一支無菌注射用水1～20ml/支組合成組合包裝。
D、將藥學上可接受的無菌無機堿或有機堿中的一種或幾種溶入蒸餾水中，攪拌加入醋柳黃酮，溶解，過濾，濾液加甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、丙酮、苯、石油醚中的一種或幾種，于4℃靜置過夜，析出結晶，抽干，干燥，得水溶性醋柳黃酮復合物，控制水分在0.001～10％之間。取此復合物過14～100目篩，按醋柳黃酮復合物5～200mg分裝，壓蓋即得成品。
E、將相當于醋柳黃酮1～100倍量的環糊精或環糊精衍生物，優選羥乙基-β-環糊精、羥丙基β-環糊精，如2-羥丙基β-環糊精(2-HP-β-CYD)、3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羥丙基β-環糊精(DHP-β-CYD)，如磺丁醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等其中的一種或多種溶入適量的注射用水中，在10～100℃下攪拌0.2～4h，攪拌加入處方量的醋柳黃酮，使溶解，經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，濾液經真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，得水溶性醋柳黃酮包合物。該包合物的紅外光譜既不同于醋柳黃酮、上述β-環糊精，也不同于醋柳黃酮與上述β-環糊精的混合物。將上述水溶性醋柳黃酮β-環糊精包合物，測定其含量后，按含異鼠李素2～100mg劑量于西林瓶中進行無菌分裝，包裝得成品。
F、將相當于醋柳黃酮1～100倍量的環糊精或環糊精衍生物，優選羥乙基-β-環糊精、羥丙基β-環糊精，如2-羥丙基β-環糊精(2-HP-β-CYD)、3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羥丙基β-環糊精(DHP-β-CYD)，磺丁醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等其中的一種或多種溶入適量的注射用水中，攪拌溶解后攪拌下加入處方量的醋柳黃酮，在10～100℃下攪拌0.2～4h，可在其中加入藥學上可接受的抗氧劑中的一種或幾種，亦可加等滲調節劑氯化鈉、或葡萄糖、或右旋糖酐，用藥學上可接受的pH調節劑中的一種或幾種，調節pH至6.5～11.5，優選pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭攪拌30分鐘，過濾，添加注射用水至足量，濾過至澄明，測定中間體含量，通氮氣灌封，滅菌，得到醋柳黃酮注射液或輸液。
G、在攪拌中將醋柳黃酮加入溶有低分子醇，可以是丙二醇、乙醇、甘油等，聚山梨醇酯即包括吐溫20～吐溫40～吐溫60～吐溫80，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇系列，包括PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、1000、PEG1540、PEG4000，泊洛沙姆系列，包括泊洛沙姆-124，泊洛沙姆-188，泊洛沙姆-237，泊洛沙姆-388，泊洛沙姆-407等其中的一種或多種的注射用水溶液中，使溶解，過濾去掉不溶物，加入藥學上可接受的抗氧劑和穩定劑中的一種或幾種，攪拌使溶解，用藥學上可接受的pH調節劑中的一種或幾種，調節pH至6.5～11.5，優選pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭攪拌15～60分鐘，過濾，添加注射用水至足量，濾過至澄明，測定中間體含量，按每瓶2～10ml分裝，通氮氣灌封，滅菌即得。或添加注射用水至足量后，經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，測定中間體含量，按每瓶2～10ml分裝于西林瓶中，壓蓋包裝即得。
本發明一種心血管藥物制劑或醋柳黃酮復合物或包合物的用途心血管藥物制劑醋柳黃酮復合物或包合物抑制哺乳動物的循環和局部ACE活性，減少Ang II的生成和緩激肽的降解，是血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)，用于防治高血壓、充血性心力衰竭、抗動脈粥樣硬化、抗心肌缺血、以及高血壓、充血性心力衰竭、心肌缺血或心肌梗死等原因引起的心室重構、心肌肥大，非糖尿病腎病、1型糖尿病腎病以及蛋白尿。
本發明的優點是解決了長久以來沒有解決的難題。本發明心血管藥物注射劑單位劑量體積中的異鼠李素含量高，表明了本發明藥物制劑既可增加醋柳黃酮的溶解度，又有穩定的載藥量。注射液及凍干粉能被0.9％氯化鈉或5％的葡萄糖輸液稀釋而不產生沉淀，在40±2℃，RH75％條件下，經6個月的加速穩定性試驗和在25±2℃，RH60％條件下，12～24個月的長期穩定試驗證明，醋柳黃酮復合物或包合物注射劑的主藥含量基本保持不變，有關物質無明顯增加，說明配伍組成的制劑能夠長期存儲。
具體實施例方式
實施例1醋柳黃酮復合物注射液醋柳黃酮(以異鼠李素計99.8％)10g氫氧化鈉2g檸檬酸鈉適量檸檬酸 適量亞硫酸鈉0.1g注射用水加至1000ml在配制容器中，加配制量80％的注射用水。通氮氣飽和，加處方量的氫氧化鈉使溶解，再將處方量的醋柳黃酮攪拌使溶，過濾，再加亞硫酸鈉攪拌，使溶解，然后以檸檬酸和檸檬酸鈉調節pH至7.5～11.0，添加飽和氮氣的注射用水至足量，用垂熔玻璃漏斗或膜濾器濾過，測定中間體含量，在氮氣流下灌封，每支安瓿灌封2～10ml，用100℃流通蒸氣15-30分鐘滅菌即得。
樣品室溫留樣12個月，含量和有關物質無明顯變化，澄明度及穩定性均好，符合中國藥典2000年版注射劑的質量要求。
實施例2醋柳黃酮復合物注射液醋柳黃酮(以異鼠李素計) 10g碳酸鈉 20g檸檬酸鈉適量檸檬酸 適量亞硫酸鈉0.1g注射用水加至2000ml在配制容器中，加配制量80％的注射用水。通氮氣飽和，加碳酸鈉溶解后，再將醋柳黃酮加熱攪拌溶于其中，過濾，再加亞硫酸鈉攪拌使溶解，然后以檸檬酸和檸檬酸鈉調節pH至7.5～11.0，添加飽和氮氣的注射用水至足量，用垂熔玻璃漏斗或膜濾器濾過，測定中間體含量，在氮氣流下灌封，每支安剖灌封2～10ml，用100℃流通蒸氣15-30分鐘滅菌即得。
實施例3醋柳黃酮復合物氯化鈉輸液醋柳黃酮(以異鼠李素計)20mg，檸檬酸三鈉二水合物10mg，煙酰胺10mg，L-鳥氨酸1.8g，3-羥丙基β-環糊精10mg，蘋果酸適量，依地酸鈣鈉2mg，氯化鈉適量調節等滲注射用水加至100ml。
在配制容器中，加新鮮的注射用水，通氮氣飽和，加處方量的檸檬酸鈉三鈉二水合物、煙酰胺、依地酸鈣鈉、L-鳥氨酸、3-羥丙基β-環糊精溶解后，再加處方量的醋柳黃酮，攪拌，過濾，同時加濃溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，混勻，加熱煮沸約15分鐘，趁熱濾過脫炭。濾液加氮氣飽和注射用水稀釋至所需量，以蘋果酸調節pH至8.0～11.0，濾過至澄明，測定中間體含量，通氮氣灌封，用115℃流通蒸汽30分鐘滅菌即得。
實施例4注射用醋柳黃酮復合物(無菌凍干粉)醋柳黃酮(以異鼠李素計)1g，L-精氨酸8.5g，亞硫酸鈉0～0.5g，琥珀酸適量，甘露醇1～10g，EDTA二鈉10mg，注射用水加至200～400ml。
在配制容器中，加配制量80％的注射用水，加處方量的L-精氨酸、甘露醇、亞硫酸鈉、EDTA二鈉溶解后，再加醋柳黃酮，攪拌使溶解，過濾，然后以琥珀酸和琥珀酸鈉調節pH至7.8～11，添加注射用水至足量，0.22μm濾膜無菌過濾，測定中間體含量，分裝在西林瓶中，每瓶約1～5ml，加塞、-40℃～-70℃下預凍1～4小時，-25℃～-15℃左右冷凍干燥20～48小時，然后升溫15℃～35℃左右干燥2～8小時，控制水分在0.5～5％之間，壓塞、放真空、出箱。
樣品在40±2℃，RH75％條件下，經6個月的加速穩定性試驗和在25±2℃，RH60％條件下，24個月的長期穩定試驗證明，含量和有關物質均無明顯變化，復溶性良好，符合中國藥典注射劑的質量要求。
實施例5注射用醋柳黃酮復合物(無菌凍干粉)醋柳黃酮(以異鼠李素計)1g，DL-賴氨酸20g，葡乙胺70g，檸檬酸適量，甘露醇2～5g，EDTA二鈉10mg，注射用水加至400ml。
在配制容器中，加配制量80％的注射用水，加入處方量的DL-賴氨酸、葡乙胺、甘露醇、EDTA二鈉溶解后，再加醋柳黃酮，攪拌使溶解，過濾，然后以檸檬酸調節pH至7.8～11.5，添加注射用水至足量，0.22μm濾膜無菌過濾，測定中間體含量，分裝在西林瓶中，每瓶約1～5ml，加塞、-40℃～-70℃下預凍1～4小時，-25℃～-15℃左右冷凍干燥20～48小時，然后升溫15℃～35℃左右干燥2～8小時，控制水分在0.001～10％之間，壓塞、放真空、出箱。
凍干粉針室溫留樣兩年，含量和有關物質均無明顯變化，復溶性良好，符合中國藥典注射劑的質量要求。
實施例6注射用醋柳黃酮復合物(無菌分裝粉末)醋柳黃酮(含異鼠李素99.0％以上)10g，L-精氨酸水溶液適量。
醋柳黃酮10g置于三角瓶中，攪拌加入將L-精氨酸的水溶液，使醋柳黃酮全部溶解，無菌過濾，低溫冷凍干燥，得水溶性醋柳黃酮L-精氨酸復合物，過40～100目篩，將該復合物按含醋柳黃酮2～200mg進行無菌分裝，壓蓋包裝即得成品。
無菌分裝粉末室溫留樣兩年，含量和有關物質均無明顯變化，復溶性良好，符合中國藥典2000年版注射劑的質量要求。
實施例7注射用醋柳黃酮葡甲胺復合物(無菌分裝粉末)醋柳黃酮(含異鼠李素99.0％以上)2g葡甲胺10g將處方量的葡甲胺溶入注射用水中，攪拌加入處方量的醋柳黃酮使溶解，過濾，濾液加適量的甲醇、異丙醇和乙酸乙酯，于0～10℃靜置過夜，析出固體結晶，過濾，抽干，干燥，得水溶性醋柳黃酮葡甲胺復鹽。過40～100目篩，測定中間體含量，將醋柳黃酮葡甲胺復合物按醋柳黃酮2～50mg分裝，壓蓋即得成品。
無菌分裝粉末室溫留樣12個月，含量和有關物質均無明顯變化，復溶性良好，符合中國藥典2000年版注射劑的質量要求。
實施例8醋柳黃酮氯化鈉輸液醋柳黃酮(以異鼠李素計)0.2g，二乙醇胺0.4g，三羥甲基氨基甲烷0.4g亞硫酸鈉0.1g酒石酸適量，酒石酸鈉適量，氯化鈉適量調節等滲，注射用水加至1000ml。
在配制容器中，加處方量80％的注射用水，加處方量的二乙醇胺、亞硫酸鈉溶解后，再加醋柳黃酮攪拌使溶解，過濾，同時加濃溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，加熱煮沸約15～30分鐘，趁熱濾過脫炭。濾液加氮氣飽和注射用水稀釋至所需量，以酒石酸和酒石酸鈉調節pH至8.5～11，濾過至澄明，測定中間體含量，按每瓶50～100ml分裝，通氮氣灌封，用115℃流通蒸汽30分鐘滅菌即得。
樣品經6個月加速穩定性試驗，含量和有關物質均無明顯變化，穩定性及澄明度均符合中國藥典2000年版注射劑的質量要求。
實施例9在GMP條件下，將無菌異鼠李素10g與無菌L-精氨酸100g混合后按粉針劑制備工藝程序操作，分裝成500～10000支；另將無菌注射用水2～20ml一支組合成組合包裝，使用時將注射用水注入無菌粉針中，使堿與無菌異鼠李素作用形成易溶解于水的復合物，供臨床靜脈注射。
實施例10在GMP條件下，由無菌異鼠李素100克與無菌葡甲胺600g充分混合，制成組合制劑，按粉針劑制備工藝程序操作，分裝成1000～10000支。使用時將注射用水或5％葡萄糖注射液或生理鹽水注入無菌粉針中，使堿與無菌異鼠李素作用形成易溶解于水的復合物，供臨床靜脈注射或滴注。
實施例11將無菌異鼠李素1g分裝于100個西林瓶中，另將氨丁三醇1.62克、磷酸鈉2克溶于200ml注射用水中，磷酸氫鈉和磷酸二氫鈉調節pH為11～12，0.22μm濾膜無菌過濾，測定中間體含量，分裝在100個西林瓶中，再將一瓶無菌異鼠李素與一瓶注射用溶劑裝入同一個包裝盒中，組成組合包裝；使用時將堿性注射用專用溶劑注入無菌粉針中，使其與醋柳黃酮作用形成易溶解于水的復合物，供臨床使用。
實施例12注射用醋柳黃酮3-羥丙基β-環糊精包合物(無菌分裝粉末)醋柳黃酮(含異鼠李素99.0％以上)1g3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD)10g將處方量的3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD)溶入200～1000m注射用水中，攪拌溶解后，攪拌加入處方量的醋柳黃酮，使溶解，經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，濾液經真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，得水溶性醋柳黃酮3-羥丙基β-環糊精包合物。該包合物的紅外光譜既不同于醋柳黃酮、3-羥丙基β-環糊精，也不同于醋柳黃酮與3-羥丙基β-環糊精的混合物。將水溶性醋柳黃酮3-羥丙基β-環糊精包合物，控制水分在0.001～10％之間，測定其含量，然后按含異鼠李素2～100mg劑量于西林瓶中進行無菌分裝，包裝得成品。
實施例13注射用醋柳黃酮3-羥丙基β-環糊精包合物(無菌分裝粉末)醋柳黃酮(含異鼠李素99.0％以上) 1g2-羥丙基-β-環糊精(2-HP-β-CYD)80g將處方量的2-羥丙基-β-環糊精(2-HP-β-CYD)溶入500～1000ml注射用水中，攪拌溶解后，攪拌加入處方量的醋柳黃酮，使溶解，經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，濾液經真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，得水溶性醋柳黃酮3-羥丙基β-環糊精包合物。該包合物的紅外光譜既不同于醋柳黃酮、2-羥丙基β-環糊精，也不同于醋柳黃酮與2-羥丙基β-環糊精的混合物。將水溶性醋柳黃酮2-羥丙基β-環糊精包合物，控制水分在0.001～10％之間，測定其含量，然后按含異鼠李素2～100mg劑量于西林瓶中進行無菌分裝，即得。
樣品經6個月加速穩定性試驗，含量和有關物質均無明顯變化，復溶性良好，符合中國藥典2000年版注射劑的質量要求。
實施例14醋柳黃酮復鹽注射液醋柳黃酮(含異鼠李素99.0％)1g(以異鼠李素計)2，6二甲基β-環糊精 5gSBE7-β-CD1g葡乙胺1g焦亞硫酸鈉0.06g乳酸(2M) 適量乳酸鈉(2M)適量注射用水 100～500ml在攪拌中將處方量的2，6二甲基β-環糊精和SBE7-β-CD溶入適量注射用水中，溶解后，攪拌下加入處方量的醋柳黃酮，使溶解，再加入處方量的葡乙胺和焦亞硫酸鈉，攪拌使溶解，加濃溶液量的0.01％(g/ml)的活性炭，40～100℃攪拌約15～30分鐘，趁熱濾過脫炭。濾液加氮氣飽和注射用水至足量后，以乳酸和乳酸鈉調節pH至8.5～11.5，濾過至澄明，測定中間體含量，按每瓶2～20ml分裝，通氮氣灌封，滅菌即得。或添加注射用水至足量后，經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，測定中間體含量，按每瓶2～20ml分裝于西林瓶中，壓蓋包裝即得。
樣品室溫留樣12個月，含量和有關物質均無明顯變化，穩定性及澄明度符合中國藥典2000年版注射劑的質量要求。
實施例15醋柳黃酮復鹽注射液醋柳黃酮(含異鼠李素62.0％) 1g(以異鼠李素計)3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD) 60g葡乙胺 1g焦亞硫酸鈉 0.06g乳酸(2M) 適量乳酸鈉(2M) 適量注射用水加至 500ml在攪拌中將處方量的3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD)溶入400ml注射用水中，溶解后，攪拌下加入處方量的醋柳黃酮，使溶解，過濾，再加入處方量的葡乙胺和焦亞硫酸鈉，攪拌使溶解，加濃溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，加熱煮沸約15～30分鐘，趁熱濾過脫炭。濾液加氮氣飽和注射用水稀釋至所需量，以乳酸和乳酸鈉調節pH至8.5～11.5，濾過至澄明，測定中間體含量，按每瓶2～20ml分裝，通氮氣灌封，用100℃流通蒸汽30分鐘滅菌即得。
樣品室溫留樣12個月，含量和有關物質均無明顯變化，穩定性及澄明度符合中國藥典2000年版注射劑的質量要求。
實施例16
醋柳黃酮復合物注射液醋柳黃酮(含異鼠李素40.0％)(以異鼠李素計) 10g碳酸鈉 22g檸檬酸鈉(2M) 適量鹽酸(1M) 適量甘油 1ml吐溫-800.5mlL-半胱氨酸 0.1g注射用水 加至1000ml在配制容器中，加配制量80％的注射用水。通氮氣飽和，加處方量的吐溫-80、L-半胱氨酸、甘油、碳酸鈉攪拌溶解后，再攪拌加入處方量的醋柳黃酮，然后以鹽酸和檸檬酸鈉調節pH至7.5～11.0，過濾，添加飽和氮氣的注射用水至足量，再調節pH至7.5～11.0，用垂熔玻璃漏斗或膜濾器濾過，在氮氣流下灌封，每支安剖灌封2～10ml，用100℃流通蒸氣15-30分鐘滅菌即得。
樣品室溫留樣12個月，含量和有關物質均無明顯變化，澄明度及穩定性均好，符合中國藥典2000年版注射劑的質量要求。
實施例17醋柳黃酮注射液醋柳黃酮(含異鼠李素30.0％)1g(以異鼠李素計)乙醇 5ml吐溫-80 1ml亞硫酸鈉 0.03g依地酸鈣鈉20mg乳酸(2M) 適量乳酸鈉(2M)適量注射用水加至 400ml在攪拌中將處方量的醋柳黃酮加入含處方量的乙醇和PEG400的注射用水溶液100ml中，使溶解，攪拌下加入處方量的依地酸鈣鈉和亞硫酸鈉，攪拌使溶解，過濾，同時加濃溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，加熱煮沸約15分鐘，趁熱濾過脫炭。濾液加氮氣飽和注射用水稀釋至所需量，以乳酸(2M)和乳酸鈉(2M)調節pH至7.5～11，無菌濾過至澄明，測定中間體含量，按每瓶2～20ml分裝，通氮氣灌封，用蒸汽滅菌即得。或添加注射用水至足量后，以乳酸(2M)和乳酸鈉(2M)調節pH至7.5～11，經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，測定中間體含量，按每瓶2～20ml分裝于西林瓶中，壓蓋包裝即得。
樣品經6個月加速穩定性試驗，含量和有關物質均無明顯變化，澄明度等均好，符合中國藥典2000年版注射劑的質量要求。
實施例18醋柳黃酮注射液醋柳黃酮(含異鼠李素30.0％) 1g(以異鼠李素計)乙醇 3ml丙二醇 10ml吐溫-80 1ml
亞硫酸鈉0.03g依地酸鈣鈉 20mg乳酸(2M)適量乳酸鈉(2M) 適量注射用水加至400ml在攪拌中將處方量的醋柳黃酮加入含處方量的乙醇、丙二醇、依地酸鈣鈉、亞硫酸鈉和PEG400的注射用水溶液200ml中，攪拌使溶解，過濾，以乳酸(2M)和乳酸鈉(2M)調節pH至7.5～11，同時加濃溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，加熱煮沸約15分鐘，趁熱濾過脫炭。濾液加氮氣飽和注射用水稀釋至所需量，再調節pH至7.5～11，無菌濾過至澄明，測定中間體含量，按每瓶2～20ml分裝，通氮氣灌封，滅菌即得。或添加注射用水至足量后，以乳酸(2M)和乳酸鈉(2M)調節pH至7.5～11，經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，測定中間體含量，按每瓶2～20ml分裝于西林瓶中，壓蓋包裝即得。
樣品室溫留樣12個月，含量和有關物質等均無明顯變化，符合中國藥典的質量要求。
實施例19醋柳黃酮注射液醋柳黃酮(含異鼠李素51.0％)1g(以異鼠李素計)乙醇 80mlPEG4001ml吐溫-80 1ml亞硫酸鈉 0.1g依地酸二鈉20mg乳酸(2M) 適量乳酸鈉(2M)適量注射用水加至 400ml在攪拌中將處方量的醋柳黃酮加入含處方量的乙醇、PEG400及吐溫-80的注射用水溶液300ml中，使溶解，攪拌下加入處方量的依地酸鈣鈉和亞硫酸鈉，攪拌使溶解，過濾，同時加濃溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，加熱煮沸15～30分鐘，趁熱濾過脫炭。濾液加氮氣飽和注射用水稀釋至所需量，以乳酸(2M)和乳酸鈉(2M)調節pH至7.5～11，無菌濾過至澄明，測定中間體含量，按每瓶2～20ml分裝，通氮氣灌封，用100℃流通蒸汽滅菌即得。
藥效學試驗儀器及主要試劑紫外分光光度計(島津UV-2401)，低溫臺式離心機(MIKRO22R)。馬尿酰甘氨酰甘氨酸(HGG)(Sigma公司)和牛血清白蛋白(Gibco公司)。
Wistar大鼠280～300g8只，用1％戊巴比妥鈉腹腔麻碎，開胸心臟取血，血樣室溫靜置30min，3500r/min離心10min，取上清液-65℃保存，待測。對于肺組織，大鼠采血后即取肺臟，于4℃生理鹽水沖洗2次，去殘血，稱重，組織剪碎，加緩沖液(75mmol/L NaCl，50μmol/L ZnSO4，0.05mol/L Tris，pH7.4)，冰浴中勻漿，15000r/min 4℃離心30s，紗布過濾后濾液離心4000r/min離心15min，棄上清、沉淀加緩沖液懸浮，-65℃保存，考馬斯亮蘭法測定肺組織蛋白質含量。ACE活性的測定參考[王賦敏，等.中華醫學檢驗雜志，1983.6(3)，145～151]ACE活性測定方法。分別取14mmol/L HGG 0.1ml、樣本0.15ml、以及試驗藥物醋柳黃酮復鹽1溶液0.1ml、醋柳黃酮包合物溶液0.1ml或醋柳黃酮復鹽2溶液0.1ml(濃度分別為0.09，0.23，0.61，0.93，2.18mg/ml)于EP管中，反應30min，并設注射用水為空白對照。
統計學處理結果以x±S表示，數據作方差分析和t檢驗。
體外實驗結果大鼠(8只)血清、肺組織ACE活性為(56.9±8.25)IU和(151.34±15.68)IU。加入醋柳黃酮復合物A(為醋柳黃酮的主要成分異鼠李素L-精氨酸復合物)、醋柳黃酮包合物(為醋柳黃酮主要成分異鼠李素的2-羥丙基β-環糊精包合物)和不同濃度的醋柳黃酮復合物B(醋柳黃酮葡甲胺復合物)，與空白對照組相比，試驗組中大鼠血清、肺組織ACE活性呈濃度依賴性降低(P＜0.01)，醋柳黃酮復合物A(醋柳黃酮L-精氨酸復合物)、醋柳黃酮包合物和不同濃度的醋柳黃酮復合物B(醋柳黃酮葡甲胺復合物)明顯抑制ACE活性。結果見表1。
表1醋柳黃酮復合物對ACE活性的抑制作用

近年來，由于血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)在臨床心血管方面的廣泛應用，以及局部腎素-血管緊張素系統(RAS)的發現和研究，使人們認識到RAS，尤其是心血管局部RAS在許多心血管疾病中起著至關重要的作用。ACE位于RAS的中心，是RAS活性的限速酶，能將血管緊張素I(AngI)轉變為血管緊張素II(AngII)。現已證實AngII對心臟具有冠脈收縮和正性心肌力作用；可直接或間接通過促進兒茶酚胺釋放使血管平滑肌收縮；并能刺激平滑肌細胞增生，促使心肌細胞肥大；參與缺血-再灌注損傷，引起心律失常。ACE還能水解緩激肚，后者為擴血管物質。
研究表明ACEI的藥理作用是多方面的，主要包括①抑制循環中血管緊張素II轉化酶系統；②抑制組織及血管緊張素系統；③減少末梢神經元釋放去甲腎上腺素；④減少內皮系統形成內皮素；⑤增加緩激肽及擴血管的前列環素的形成；⑥減少醛固酮的分泌，使水鈉潴留減少。
血管緊張素轉換酶抑制劑通過上述作用可起到以下效應降低血壓；逆轉心臟及血管結構，減輕左心室肥厚及重量，使阻力血管中層/管腔徑比值減小，從而減少高血壓、心肌梗塞后及心功能障礙的心肌細胞過度增生及肥厚，改善心肌梗塞后的預后，減少意外發生率及死亡率，減少或防止高血壓病靶器官的損害，治療充血性心力衰竭及心功能障礙，降低充血性心力衰竭的發生及死亡率，增加大血管的順從性，減少動脈粥樣硬化形成及抗心肌缺血；減低胰島素抵抗，改善對胰島素的敏感性；具有保護腎臟的作用，特別是在糖尿病高血壓患者，由于入球小動脈的壓力增高、進入的血流也多(高灌注)，必然導致腎小球的高濾過狀態，血管緊張素II生成減少，達到保護腎功能的作用。
本實驗表明醋柳黃酮復合物或包合物對循環和局部ACE活性均有抑制作用，提示醋柳黃酮復合物或包合物可減少AngII的生成和緩激肽的降解，這可能是醋柳黃酮復合物擴管降壓，保護缺血心肌等的機理之一。因此，應用醋柳黃酮復合物或包合物有助于防治高血壓、充血性心力衰竭和心肌梗死等原因引起的心室重構、心肌肥大，非糖尿病腎病、1型糖尿病腎病以及蛋白尿。其給藥劑量以主藥異鼠李素計一般為2～200mg/天，可經胃腸道給藥和靜脈給藥，靜脈給藥優選為2～50mg/天。
醋柳黃酮復合物安全性試驗結果醋柳黃酮復合物A過敏反應試驗摘要豚鼠靜脈注射醋柳黃酮復合物A，未觀察到動物咳嗽、蜷縮、豎毛、呼吸困難等過敏反應現象。表明醋柳黃酮復合物A對受試動物無致敏作用。
一、試驗目的觀察醋柳黃酮復合物A經全身給藥有無致敏作用。
二、試驗材料1.受試動物成年健康白色豚鼠，雄性，體重200-300g。
2.受試物醋柳黃酮復合物A，臨用前稀釋為0.05％醋柳黃酮復合物溶液備用。
3.溶媒0.9％氯化鈉溶液。
4.對照藥卵清蛋白，臨用前用蒸餾水稀釋成5％卵清蛋白備用。
三、試驗方法1.致敏接觸取豚鼠24只，隨機分為3組，分別為溶媒對照組、受試藥物組和陽性對照組。每組8只動物。各組動物分別腹腔注射(ip)等容量(0.5ml)0.9％氯化鈉溶液、0.05％醋柳黃酮復合物A溶液及5％卵清蛋白，隔日一次，連續5次。
2.激發試驗將各組動物在末次致敏給藥后第12天進行激發性注射。溶媒對照組、受試藥物組及陽性對照組豚鼠分別經頸外靜脈注射0.9％氯化鈉溶液、0.05％醋柳黃酮復合物A溶液及5％卵清蛋白1ml。觀察并記錄給藥后即刻至15、30、60、120和180min內動物有無如過敏反應癥狀。
四、試驗結果豚鼠腹腔致敏注射0.9％氯化鈉溶液、0.05％醋柳黃酮復合物A溶液及5％卵清蛋白致敏后，動物一般情況良好，飲食、排尿及糞便狀況正常。動物在末次致敏給藥后第12天進行激發性注射。溶媒對照組和受試藥物組動物激發給藥后即刻至15、30、60、120和180min內均未見咳嗽、蜷縮、豎毛、呼吸困難甚至死亡等過敏反應癥狀，故評價為過敏反應陰性。陽性對照組豚鼠激發給藥后均立即出現痙攣抽搐、喘息、呼吸困難及紫紺等現象，并于激發給藥后5min內死亡，過敏反應均為極強陽性，見表2。
表2醋柳黃酮復合物A致豚鼠過敏反應及其程度

五、試驗結論本試驗表明醋柳黃酮復合物A對豚鼠無致過敏作用。
醋柳黃酮復合物A溶血性反應試驗摘要醋柳黃酮復合物A0.1～0.5ml加入到2％人紅細胞混懸液中，連續觀察3小時，結果各管均未出現溶血及紅細胞凝集現象，表明該藥無溶血反應及紅細胞凝集現象。
一、試驗目的觀察醋柳黃酮復合物A加入到紅細胞混懸液中是否產生溶血作用及紅細胞凝集現象。
二、試驗材料受試藥物醋柳黃酮復合物A，臨用前按臨床使用濃度稀釋為0.05％醋柳黃酮復合物A溶液備用。溶媒0.9％氯化鈉溶液三、試驗方法1. 2％紅細胞混懸液制備取健康人血6ml，肝素抗凝，用玻璃棒不斷攪動血液。加入約10倍量的生理鹽水，搖勻，1500rpm離心15min，去上清液，沉淀的紅細胞再用生理鹽水按上述方法反復洗滌3～4次，至上清液不顯紅色為止。將所得紅細胞用生理鹽水配成2％的混懸液，供試驗用。
2.試驗方法取潔凈試管7只，進行編號，1-5號管為供試品管，6號管為陰性對照管，7號管為陽性對照管。按表4所示依次加入2％紅細胞混懸液2.5ml和不同容積生理鹽水，混勻，37℃±0.5℃溫育半小時后，第1-5管加入不同容積的0.05％醋柳黃酮復鹽A溶液，第6管加入生理鹽水2.5ml，第7管加入蒸餾水2.5ml，混勻后，立即置37℃±0.5℃溫育。15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時和3小時各觀察一次。溶液若呈澄明紅色，管底無或有少量紅細胞殘留，表明有溶血發生；若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，振搖后不分散，則再進一步對細胞凝集現象進行判定。
四、試驗結果結果見表3。可見1～6管在所觀察的3小時內上清液均無色透亮，且無絮狀物。第7管溶液呈澄明紅色，表示陽性對照管有溶血產生。
表5醋柳黃酮復合物A對人紅細胞懸液的作用

五、試驗結論醋柳黃酮復合物A無溶血反應，未觀察到紅細胞凝集現象。
醋柳黃酮復合物A血管注射刺激性試驗摘要兔耳緣靜脈連續滴注醋柳黃酮復合物A，連續滴注五天。病理檢查結果表明其血管刺激性反應與對照組相比，無顯著差異。提示醋柳黃酮復鹽A對血管基本無刺激性。
一、試驗目的觀察動物在靜脈滴注醋柳黃酮復合物A后，產生的血管刺激反應情況。
二、試驗材料1.動物成年健康新西蘭大耳白雌性家兔，體重2.0～2.5kg。
2.受試物醋柳黃酮復合物A，臨用前稀釋為0.05％醋柳黃酮復合物A溶液備用。
3.溶媒0.9％氯化鈉溶液。
三、試驗方法雌性家兔4只。第1只未用任何藥物，作空白平行對照觀察。另3只于右耳緣靜脈滴注0.05％醋柳黃酮復合物A溶液，滴注速度為20～30滴/min；左耳緣靜脈給予等容量0.9％氯化鈉溶液作對照，滴注速度與受試藥相同。每天一次，連續滴注5天。滴注期間，每天肉眼定時觀察耳緣靜脈的刺激性反應。第7天處死家兔，在雙側耳緣靜脈近心端距注射部位1.0cm～1.5cm處取材，用甲醛固定，做常規組織切片，進行病理學檢查。
四、試驗結果1.肉眼結果血管紋路清晰，未見血管充血發紅，周圍組織水腫等炎癥反應。
2.病理結果空白對照組鏡下見靜脈血管腔完整，未見狹窄，其管壁未見炎性細胞浸潤。
醋柳黃酮復合物組(右耳緣靜脈，滴注0.05％醋柳黃酮復合物A溶液)鏡下見靜脈血管腔完整，其管壁見少許炎性細胞浸潤。余未見明顯病變。
生理鹽水組(左耳緣靜脈，滴注0.9％氯化鈉溶液)鏡下見靜脈血管腔完整，其管壁見少許炎性細胞浸潤。余未見明顯病變。
五、試驗結論家兔耳緣靜脈滴注0.05％醋柳黃酮復合物A溶液5天后，注射部位無肉眼所見刺激性反應。顯微病理檢查結果表明，未見血管結構異常、內皮損傷、血栓形成及其它病理變化，此結果與溶媒對照組一致。提示醋柳黃酮復合物A對血管無明顯刺激性。
本研究首次發現豚鼠靜脈注射醋柳黃酮復合物，未觀察到動物咳嗽、蜷縮、豎毛、呼吸困難等過敏反應現象，表明醋柳黃酮復合物A對受試動物無致敏作用。醋柳黃酮復合物對人無溶血反應及紅細胞凝集現象。兔耳緣靜脈連續滴注醋柳黃酮復合物，連續滴注五天，醋柳黃酮復合物對血管基本無刺激性，證明醋柳黃酮復合物可靜脈給藥，用于治療高血壓、充血性心力衰竭、心肌梗死，心功能不全、非糖尿病腎病、1型糖尿病腎病以及蛋白尿。
本發明不限于以上所述的實施例。
權利要求
1.心血管藥物制劑，其特征在于心血管藥物制劑可由醋柳黃酮、藥學上可接受的無機堿或有機堿生成的易溶解于水的復合物，其中醋柳黃酮與藥學上可接受的無機或藥學上可接受的有機堿的摩爾比為1∶0.8至1∶100；或由醋柳黃酮與環糊精或環糊精衍生物形成水溶性的包合物，其中醋柳黃酮與環糊精或環糊精衍生物的質量比為1∶1至1∶100；也可以由醋柳黃酮和低分子醇，聚山梨醇酯、聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇、泊洛沙姆助溶劑中的一種或多種加水組成的水溶性的制劑；其中醋柳黃酮的量以異鼠李素計。在制劑中并可含有藥學上可接受的載體，載體包括賦形劑、pH調節劑、抗氧劑、穩定劑、助溶劑，可以制備成包括注射液、輸液、凍干粉針、無菌分裝粉針制劑。
2.根據權利要求1所述的心血管藥物制劑，其特征在于醋柳黃酮主要由異鼠李素組成，醋柳黃酮中有效成分異鼠李素的含量在5％～100％之間，可含少量異鼠李素-3-葡萄糖甙、槲皮素。
3根據權利要求1所述的心血管藥物制劑，其特征在于醋柳黃酮與藥學上可接受的無機堿或藥學上可接受的有機堿的摩爾比為1∶1.0～30。
4.根據權利要求1所述的心血管藥物制劑，其特征在于藥學上可接受的無機堿為路易斯堿，可以是氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸氫鹽、磷酸氫二鈉、磷酸三鈉、磷酸氫二銨、磷酸氫二鉀、偏磷酸鈉等無機堿的一種或幾種，藥用有機堿為路易斯堿，可以是有機胺如葡甲胺、葡乙胺、葡辛胺、氨丁三醇，無水或六水哌嗪、嗎啉、煙酰胺、1，2-己二胺、三羥甲基氨基甲烷、二乙醇胺、乙醇胺、異丙醇胺、二異丙醇胺、二異丙胺，檸檬酸鹽枸櫞酸二鈉、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸鉀，乳酸鈉、泛酸鈉、葡萄糖酸鈉，堿性氨基酸如L-賴氨酸、DL-賴氨酸、L-精氨酸、D-精氨酸、DL-精氨酸、L-鳥氨酸、組氨酸等中的一種或幾種。
5.根據權利要求1、4所述的心血管藥物制劑的藥用堿，其特征在于藥學上可接受的無機堿和有機堿優選氫氧化鈉、碳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸三鈉、葡甲胺、葡乙胺、氨丁三醇，無水或六水哌嗪、嗎啉、煙酰胺、三羥甲基氨基甲烷、L-賴氨酸、DL-賴氨酸、L-精氨酸、D-精氨酸、DL-精氨酸、組氨酸、L-鳥氨酸、枸櫞酸三鈉中的一種或幾種。
6.根據權利要求1所述的醋柳黃酮與環糊精形成的包合物，其特征在于環糊精或環糊精衍生物，可以是α-環糊精、β-環糊精、γ-環糊精，葡糖基-環糊精(G1-CYD)，包括葡萄糖基-α-環糊精(G1-α-CYD)、葡糖基-β-環糊精(G1-β-CYD)、二葡糖基-β-環糊精(2G1-β-CYD)、麥芽糖基-環糊精(G2-CYD)，麥芽糖基-α-環糊精(G2-α-CYD)、麥芽糖基-β-環糊精(G2-β-CYD)、麥芽糖基-γ-環糊精(G2-γ-CYD)，麥芽三糖基-環糊精(G3-CYD)，麥芽三糖基-α-環糊精(G3-α-CYD)，麥芽三糖基-β-環糊精(G3-β-CYD)，麥芽三糖基-γ-環糊精(G3-γ-CYD)，甲基β-環糊精、乙基β-環糊精、二甲基β-環糊精、2，6二甲基β-環糊精(DM-β-CYD)、2，3，6三甲基β-環糊精(TM-β-CYD)、β-環糊精磺烷基醚(SAE-β-CYD)、羥乙基-β-環糊精、羥丙基β-環糊精、2-羥丙基β-環糊精(2-HP-β-CYD)、3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羥丙基β-環糊精(DHP-β-CYD)、磺丁醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等其中的一種或多種；并優選為羥乙基-β-環糊精、羥丙基-β-環糊精、磺丁醚-β-環糊精的一種或幾種。
7.根據權利要求1所述的心血管藥物制劑，其特征在于也可以由醋柳黃酮和低分子醇，如丙二醇、乙醇、甘油等，聚山梨醇酯可以是吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80，聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚乙二醇可以是PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、1000、PEG1540、PEG4000等助溶劑其中的一種或多種，其中優選乙醇、丙二醇、甘油、吐溫80、PEG400、泊洛沙姆-407其中的一種或多種組成水溶性的制劑。
8.根據權利要求1所述的心血管藥物制劑，其特征在于其pH在6.5～12之間，pH優選在7.5～11.2之間。
9.一種心血管藥物制劑的制備方法，其特征在于包括如下方法A.一種心血管藥物制劑的注射劑制備方法，將藥學上可接受的無機堿或有機堿中的一種或幾種的注射用水中，攪拌，使溶解，再將醋柳黃酮粉末加于其中，攪拌10-60分鐘，過濾，可加入藥學上可接受的抗氧劑，抗氧劑可以是亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、L-半胱氨酸、抗壞血酸鈉中的一種或幾種，亦可加等滲調節劑氯化鈉、或葡萄糖、或右旋糖酐，用藥學上可接受的pH調節劑如檸檬酸、醋酸、鹽酸、硫酸、磷酸、馬來酸、琥珀酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、抗壞血酸中的一種或幾種，調節pH至6.5～11.5，優選pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭攪拌30分鐘，過濾，添加注射用水至足量，濾過，通氮氣灌封，滅菌，得到醋柳黃酮注射液或輸液；B.無菌凍干注射劑制備方法在配制容器中，加配制量80％的注射用水，加藥學上可接受的無機堿或有機堿中的一種或幾種，溶解于水中，再加醋柳黃酮，攪拌10～60min，過濾，再加藥學上可接受的抗氧劑中的一種或幾種，使溶解，然后以PH調節劑調節pH至7.0～12，優選pH至7.5～11，同時加0.001～2％(g/ml)的活性炭攪拌下30分鐘過濾，添加注射用水至足量，無菌過濾，測定中間體含量，分裝在西林瓶中，每瓶約1～5ml，加塞、-40℃～-70℃下預凍1～4小時，-25℃～-15℃左右冷凍干燥20～48小時，然后升溫15℃～35℃左右干燥2～8小時，重要的是要將控制水分在0.01～10％之間，壓塞、放真空、出箱；C、將藥學上可接受的無菌無機堿或有機堿中的一種或幾種溶入蒸餾水中，加入醋柳黃酮，攪拌10～60min，加0.001～2％(g/ml)的活性炭攪拌下30分鐘過濾，補水，然后以pH調節劑調節pH至7.0～12，再經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，濾液經真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，控制水分在0.001～10％之間，粉碎得14～150目的顆粒大小的粉末，再將該復合物按劑量按進行無菌分裝，壓蓋即得成品。
10.一種心血管治療藥物制劑的制備方法，其特征在于A、由無菌高純的醋柳黃酮與藥學上可接受的無菌無機堿或有機堿中的一種或幾種分別按粉針劑制備工藝程序操作，分裝于西林瓶中；另將一支無菌注射用水1～20ml/支組合成組合包裝，使用時將注射用水注入無菌粉針中，使有機堿與醋柳黃酮作用形成易溶解于水的穩定的復合物，使其pH為7.0～12，供臨床靜脈注射；B、或將無菌高純的醋柳黃酮按粉針劑制備工藝程序操作，分裝于西林瓶中；另將藥學上可接受的無菌無機堿或有機堿中的一種或幾種溶解于無菌注射用水，加入適量的藥學上可接受的抗氧劑和穩定劑，使注射用溶媒每支體積為1～20ml，與分裝于西林瓶中無菌異鼠李素組合成組合包裝，使用時將注射用溶媒注入無菌粉針中，使有機堿與醋柳黃酮作用形成易溶解于水的穩定的復合物，使其pH為7.0～12，供臨床靜脈注射；C、將藥學上可接受的無菌無機堿或有機堿中的一種或幾種溶入蒸餾水中，攪拌加入醋柳黃酮，使溶解，過濾，補水，然后以PH調節劑調節pH至7.0～12，再經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，濾液經真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，控制水分在0.001～10％之間，粉碎得14～150目的顆粒大小的粉末，再將該復合物按含醋柳黃酮(以異鼠李素計)的量1～200mg進行無菌分裝，分裝于西林瓶中；另將一支無菌注射用水1～20ml/支組合成組合包裝。
11.一種心血管治療藥物制劑的制備方法，其特征在于將藥學上可接受的無菌無機堿或有機堿中的一種或幾種溶入蒸餾水中，攪拌加入醋柳黃酮，溶解，過濾，濾液加甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、丙酮、苯、石油醚中的一種或幾種，于4℃靜置過夜，析出結晶，抽干，干燥，得水溶性醋柳黃酮復合物，控制水分在0.001～10％之間，取此鹽過14～100目篩，按醋柳黃酮復合物5～200mg分裝，壓蓋即得成品。
12.一種心血管治療藥物制劑的制備方法，其特征在于A、將相當于醋柳黃酮1～100倍量的環糊精或環糊精衍生物，優選羥乙基-β-環糊精、羥丙基β-環糊精，如2-羥丙基β-環糊精(2-HP-β-CYD)、3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羥丙基β-環糊精(DHP-β-CYD)，如磺丁醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等其中的一種或多種溶入適量的注射用水中，在10～100℃下攪拌0.2～4h，攪拌加入處方量的，使溶解，經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，濾液經真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，得水溶性醋柳黃酮包合物，該包合物的紅外光譜既不同于醋柳黃酮、上述β-環糊精，也不同于醋柳黃酮與上述β-環糊精的混合物，將上述水溶性醋柳黃酮β-環糊精包合物，測定其含量后，按含異鼠李素2～100mg劑量于西林瓶中進行無菌分裝，包裝得成品；B、將相當于醋柳黃酮1～100倍量的環糊精或環糊精衍生物，優選羥乙基-β-環糊精、羥丙基β-環糊精，如2-羥丙基β-環糊精(2-HP-β-CYD)、3-羥丙基β-環糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羥丙基β-環糊精(DHP-β-CYD)，磺丁醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等其中的一種或多種溶入適量的注射用水中，攪拌溶解后攪拌下加入處方量的醋柳黃酮，在10～100℃下攪拌0.2～4h，可在其中加入藥學上可接受的抗氧劑中的一種或幾種，亦可加等滲調節劑氯化鈉、或葡萄糖、或右旋糖酐，用藥學上可接受的pH調節劑中的一種或幾種，調節pH至6.5～11.5，優選pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭攪拌30分鐘，過濾，添加注射用水至足量，濾過至澄明，測定中間體含量，通氮氣灌封，滅菌，得到醋柳黃酮注射液或輸液；C、在攪拌中將醋柳黃酮加入溶有低分子醇，可以是丙二醇、乙醇、甘油等，聚山梨醇酯即包括吐溫20～吐溫40～吐溫60～吐溫80，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇系列，包括PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、1000、PEG1540、PEG4000，泊洛沙姆系列，包括泊洛沙姆-124，泊洛沙姆-188，泊洛沙姆-237，泊洛沙姆-388，泊洛沙姆-407等助溶劑其中的一種或多種的注射用水溶液中，使溶解，過濾去掉不溶物，加入藥學上可接受的抗氧劑和穩定劑中的一種或幾種，攪拌使溶解，用藥學上可接受的pH調節劑中的一種或幾種，調節pH至6.5～11.5，優選pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭攪拌30分鐘，過濾，添加注射用水至足量，濾過至澄明，測定中間體含量，按每瓶2～10ml分裝，通氮氣灌封，滅菌即得，或添加注射用水至足量后，經0.20～0.22μm濾膜無菌過濾，測定中間體含量，按每瓶2～10ml分裝于西林瓶中，壓蓋包裝即得。
13.一種心血管藥物制劑或醋柳黃酮復合物或包合物的用途其特征在于心血管藥物制劑或醋柳黃酮復合物或包合物抑制哺乳動物的循環和局部ACE活性，減少Ang II的生成和緩激肽的降解，是血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)，用于防治高血壓、充血性心力衰竭、抗動脈粥樣硬化、抗心肌缺血、以及高血壓、充血性心力衰竭、心肌缺血或心肌梗死等原因引起的心室重構、心肌肥大，非糖尿病腎病、1型糖尿病腎病以及蛋白尿。
全文摘要
一種心血管藥物制劑、制備方法及用途包括心血管藥物制劑——由醋柳黃酮、藥學上可接受的無機堿或藥學上可接受的有機堿等組成；或由醋柳黃酮與環糊精形成水溶性的包合物；或由醋柳黃酮和低分子醇，聚山梨醇酯、聚乙二醇、泊洛沙姆等助溶劑組成的水溶性的制劑；使不溶于水的醋柳黃酮作用形成易溶解于水的制劑，并報道了醋柳黃酮復合物及制劑的用途。優點是解決了長久以來沒有解決的難題，表明了本發明藥物制劑既可增加醋柳黃酮的溶解度，又有穩定的載藥量，經加速穩定性試驗和長期穩定試驗證明，說明配伍組成的制劑能夠長期存儲。
文檔編號A61P9/12GK1839821SQ20061001818
公開日2006年10月4日 申請日期2006年1月17日 優先權日2006年1月17日
發明者劉力 申請人:劉力