專利名稱：：用于治療青光眼的血清淀粉狀蛋白A的RNAi抑制的制作方法用于治療青光眼的血清淀粉狀蛋白A的RNAi抑制發明領域本發明涉及干擾RNA組合物用于抑制青光眼、尤其是原發性開角型青光眼中血清淀粉狀蛋白A(SAA)表達的領域。發明背景青光眼是共有某些臨床特征的一組多樣的視神經病。青光眼中視力損失的原因是神經視網膜中視網膜神經節細胞的選擇性死亡，該選擇性死亡在臨床上通過視野特征性改變、神經纖維層缺陷和視神經頭(ONH)進行性杯化來診斷。青光眼t艮的一個主要風險因素是高眼壓癥(升高的眼內壓力，IOP)的存在。需要足夠的眼內壓力以維持眼的形狀并提供壓力梯度以允許房水流向無血管的角膜和晶狀體。IOP似乎還參與正常張力青光眼的發病機制，此時常認為患者具有正常的IOP。與青光^bf目關的升高的IOP的原因是位于眼前房虹膜角膜角內一小片特化組織-小梁網(TM)中升高的房水流出阻力。TM的青光眼性改變包括TM細胞的損失和胞外殘片(包括蛋白斑樣物質)沉積和聚集.此外，還發生青光B艮性ONH的改變，在青光眼性眼中，ONM神經膠質細胞中存在形態學改變和運動性改變.作為對升高的IOP和/或短暫缺血性損傷的反細胞軸突形態學發生改變，原發性青光眼因具有解剖學或生理學基礎的眼內液體流動紊亂造成。繼發性青光眼因眼的外傷或創傷或宿疾發生。原發性開角型青光眼(POAG)，也稱作慢性或單純性青光眼，占全部原發性青光眼的90%。POAG以小梁網的退化為特征，該退化導致對來自眼的液體排出有異常高的阻力。這種阻力的后果是IOP的增加，這種增加為推動由眼正常產生的液體克服這種增加的阻力所需要。目前的抗青光眼療法包括通過使用房水形成抑制劑或增強葡萄膜鞏膜流出的藥劑降低IOP、激光小梁成型術或作為旨在改善排出的濾過手術的小梁切除術。藥物抗青光眼方法已經顯示出多種有害副作用。例如，縮瞳藥如毛果蕓香堿可以引起視力模糊和其它不利的視覺副作用。全身施用的碳酸酐酶抑制劑還可以引起惡心、消化不良、疲勞和代謝性酸中毒.另夕卜，某些)8-阻斷劑已經日益與嚴重的肺部副作用相關，其原因是i3-阻斷劑對肺組織中/3-2受體的影響，擬交感神經藥引起心動過速、心律不齊和高血壓。此類副作用可以導致患者適從性降低或終止治療。更重要地是，目前的抗青光眼療法不直接解決持續無法緩解的對小梁網、視神經的病理性損傷以及視網膜神經節細胞和軸突的損失。鑒于青光眼的重要性以及目前治療方法的不當，擁有對付青光眼JSJL^礎性原因的治療青光眼的改良方法會受到歡迎。發明簡述本發明涉及把向SAAmRNA并因此干擾SAAmRNA表達的千擾RNA。本發明的干擾RNA用于治療SAA相關性青光眼。本發明的實施方案提供減弱受試者眼中血清淀粉狀蛋白AmRNA表達的方法，該方法包括向受試者眼中施用包含有效量的19至49個核苷酸長度的干擾RNA(如雙鏈(ds)siRNA或單鏈(ss)siRNA)和可藥用載體的組合物.雙鏈siRNA包含有義核苷酸序列、反義核苷酸序列和至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。此外，反義序列在生理條件下與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的一部分雜交，并具有與分別對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域，其中SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3是分別編碼SAAl、SAA2和SAA4的DNA的有義鏈(GenBank參考號NM—000331、BC020795和NM_006512)。此組合物的施用減弱受試者眼中血清淀粉狀蛋白AmRNA的表達。當干擾RNA是單鏈時，干擾RNA包含具有與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域的核苷酸序列。在本發明的一個實施方案中，將反義siRNA設計成靶向對應于SEQIDNO:1的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸處起始的核苷酸序列。在本發明另一個實施方案中，將反義siRNA設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷^起始的核苷酸序列。在本發明又一個實施方案中，將反義siRNA設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325或343位核苷酸處起始的核苷酸序列。在本發明的又一個實施方案中，將反義siRNA設計成靶向對應于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、3卯、396、406或423位核香酸處起始的核苷酸序列。本發明的又一個實施方案是治療有此需要的受試者中血清淀粉狀蛋白A相關性青光眼的方法。該方法包括向受試者眼中施用包含有效量的19至49個核苷酸長度的干擾RNA和可藥用載體的組合物，其中干擾RNA包含有義核苷酸序列、反義核苷酸序列和至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。反5Uf列在生理^Hf下與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的一部分雜交，并具有與分別對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。血清淀粉狀蛋白A相關性青光眼因此得到治療。附圖簡述圖1提供SAA2mRNA/18srRNA比率的QPCR分析以檢查siRNA對用靶向SAAmRNA的SMARTPOOLsiRNA轉染的NTM765正常小梁網細胞中內源性SAAmRNA的影響。使用三個不同濃度的Dharmafect#l試劑將小梁網細胞用100nMsiRNA轉染24小時Con:對照；處理l:以0.05#1/100孔處理的處理1;處理2:以0.2pi/100/tl孔處理的處理2;處理3:以0.4#1/100/il孔處理的處理3。圖2提供SAA2mRNA/18srRNA比率的QPCR分析以檢查siRNA對用靶向SAAmRNA的SMARTPOOLsiRNA轉染的GTM686青光眼小梁網細胞中內源性SAAmRNA的影響。使用三個不同濃度的Dharmafect弁l試劑將小梁網細胞用100nMsiRNA轉染24小時Con:對照；處理l:以0.05#1/100/d孔處理的處理1;處理2:以0.2#1孔處理的處理2;處理3:以0.4/d/100孔處理的處理3。*:通過單因素方差分析和Newman-Keuls多重比較檢驗，相對于對照和處理1p<0.05。圖3提供SAAsiRNA處理對正常小梁網細胞(NTM765-04)和青光目艮小梁網細胞(GTM686-03)的生長和形態學影響的實時電子監測(RE-CESTM)。使用三個不同濃度的Dharmafect#1試劑將細胞用100nM把向SAAmRNA的SMARTPOOLsiRNA轉染48小時Tl:0.05/il/100/d孔；T2:0.2#1/100|d孔；T3:0.4/d/100/d孔。圖4拔_供經siRNA處理的NTM765正常小梁網細胞裂解物中內源性SAA蛋白水平的ELISA測定結果。使用三個不同濃度的Dharmafect#1試劑將細胞用100nM靶向SAAmRNA的SMARTPOOLsiRNA轉染48小時處理l:以0.05/d/100/d孔處理的處理l;處理2:以0.2/d/100jl孔處理的處理2;處理3:以0.4/*1/100pl孔處理的處理3。圖5提供經siRNA處理的GTM686青光眼小梁網細胞裂解物中內源性SAA蛋白水平的ELISA測定結果J吏用三個不同濃度的Dharmafect弁l試劑將細胞用100nM靶向SAAmRNA的SMARTPOOLsiRNA轉染48小時處理l:以0.05id/100pl孔處理的處理l;處理2:以0.2/tl/100孔處理的處理2;處理3:以0.4pi孔處理的處理3。*:通過方差分析和Bonferroni's多重比較檢驗，相對于對照p<0.05;**:相對于對照p<0.01。發明詳述稱作"RNAi"的RNA干擾是用于降低受單鏈或雙鏈小RNA分子作用的乾基因表達的方法。干擾RNA包括雙鏈或單鏈的小干擾RNA(dssiRNA或sssiRNA)、微RNA(miRNA)、小發夾RNA(shRNA)及其它。不希望受理論的約束，RNA干擾似乎在體內發生，伴隨著dsRNA前體被切割成為長度約20至25個核苷酸的小RNA。切割由RNA酶III-RNA解螺旋酶Dicer完成。siRNA的"有義，，鏈(即與把mRNA序列完全相同的鏈)被除去，留下與靶mRNA互補的"反義"鏈以發揮降低mRNA表達的作用。siRNA的反義鏈似乎將稱作RISC(RNA誘導性沉默復合體)的蛋白質復合體引導至mRNA，該復合體隨后通過RISC的Argonaute蛋白質切割mRNA,因而降低通過該mRNA的蛋白質產生，干擾RNA是催化性的并且降低mRNA的表達可以用相對于mRNA而言亞化學計量數量的千擾RNA實現。mRNA表達的降低還可以通過翻譯和轉錄機制實現。本發明涉及干擾RNA用于在眼病中抑制血清淀粉狀蛋白A(SAA)表達的用途。根據本發明，外源提供的siRNA在眼結構中引起SAAmRNA沉默。本發明人先前已經證實在青光眼性TM組織和細胞中血清淀粉狀蛋白A(SAA)mRNA和蛋白質的表達顯著上調(于2003年12約17日提出的名為"UseofSerumAmyloidAGeneinDiagnosisandTreatmentofGlaucomaandIdentificationofAnti-GlaucomaAgents"的懸而未決的美國專利申請USSN60/530,430)。本發明人已經證實使用Affymetrix基因芯片通過實時定量聚合酶鏈式反應(QPCR)觀察到差異性mRNA表達并通過SAAELISA觀察到增加的SAA蛋白質水平(如上提及的懸而未決的美國專利申請，本文中完整地引用作為參考).除非另外說明，本文中提及的核酸序列以5，至3，方向書寫。術語"核酸"，如本文中所用，指DNA或RNA或其修飾的形式，包含存在于DNA中的嘌呤或嘧咬^^(腺嘌呤"A"、胞嘧咬"C"、鳥噤呤"G"、胸腺嘧咬"T")或存在于RNA中的噤呤或嘧咬g(腺噤呤"A"、胞嘧咬"C"、鳥噪呤"G"、尿嘧咬"U，，)。雖然"T"堿基未天然地存在于RNA中，但本文中提供的千擾RNA包含"T"堿基，尤其在3'端包含"T"堿基。"核酸"包括術語"寡核苷酸，，和"多核苷酸"并且可以指單鏈分子或雙鏈分子。雙鏈分子通過A和T堿基、C和G堿基以及A和U4^之間的Watson-Crick堿基配對形成。雙鏈分子的鏈可以具有彼此部分的、大部分的或完全的互補性并且形成雜種雙鏈體，其結合強度取決于M序列互補性的性質和程度。mRNA序列通過獲知編碼該mRNA的DNA的有義鏈或反義鏈序列容易地加以確定。例如，SEQIDNO:1提供對應于血清淀粉狀蛋白AlmRNA的DNA的有義M列。mRNA的序列與將"T"4^換成"U"^后的DNA有義鏈的序列完全相同，因此，血清淀粉狀蛋白Al的mRNA序列從SEQIDNO:1中獲知，血清淀粉狀蛋白A2的mRNA序列從SEQIDNO:2中獲知，血清淀粉狀蛋白A4的mRNA序列從SEQIDNO:3中獲知。血清淀粉狀蛋白AmRNA:人血清淀粉狀蛋白A包含眾多差異性表達的小的脫脂栽脂蛋白，其由位于11號染色體短臂上的基因編碼，SAA存在四種同種型。在ncbi.nlm.nih.gov上的國立生物技術信息中心GenBank數據庫提供血清淀粉狀蛋白Al的信使RNA的相應DNA序列，參考號NM一000331，作為SEQIDNO:1提供如下。血清淀粉狀蛋白Al的編碼序列來自核苷酸225-593。SAA1:SEQIDNO:1:1aaggctcagt61cagcacagat121ctttcccwc181taccattctg241gcctggtttt301gcgaggcttt361atttacatcgg421gacctggggg481tctttggcca541gtggcaaaga601cttcactctg661gagagggtac721caggtgsLggaaaggtgtcttctgctccttgtgatggggcttgcctgggcttggtgcggagcccca^tcacctctcaggagacaatgggtagccaccgctctttccttt貼atctcctctggtcctgggtgcgggacatgttacttccatggcagaagtgagactcgctggttccgacctgatctggctgttct貼taaatcctggcagrgcgagtgattttatctagagagtcagcagccgggagagcctactcgggggaatcagcgatgcctga^tcaggcctggcctgccacttaagaggagggacccgctaaaacttactatcctggggcaccatgaag貼gcttctttctctgacatgctatgatgctcagagagaattgccaatgaatgaga^atacgggcagggatagctcagctatctgttttctcatacagccacttctcacggtcgttccttgsgagaagccagccaaaagggatccagsigattggggcaggatgagcttcctaca站gcggg上述SAAlmRNA序列的等效物是可變剪接形式、等位基因形式或其同族形式。同族形式是來自另一個哺乳動物物種的與SEQIDNO:1同源的血清淀粉狀蛋白AlmRNA。與SEQIDNO:l相關的SAAl核,列是具有GenBank登錄號NM—009117(來自小鼠)、NM—199161(人轉錄變體2)、BC007022.1、BG533276.1、BG567902.1、BQ691948.1、CD102084.1、M10卯6,1、M23698.1、X51439.1、X51441,1、X51442.1、X51443.1和X56652.1的那些SAAl核酸序列。GenBank數據庫提供血清淀粉狀蛋白A2的信使RNA的相應DNA序列，參考號NM—BC020795,作為SEQIDNO:2提供如下。血清淀粉狀蛋白A2的編碼序列來自核苷酸38-406。SAA2:SEQIDNO:2611211812413013S1421481541tttctgctccttttgatgggcggctcagsicgggtgcctggccatggtgcgagaccccaatctgctctcagtatgtccagaagctcagctattggtcctgagctcgggacaaaatacttccgccgcsg貼ggaggactcgccacttccgacgagacctggcgadgetgagacagcacagatgtgtcagcagtgtggagagceitgctcggggtgatcagcaatggecgateactgctggccttatgaggececagcaccatgccgaagcttcctactctgacgaactatgattgccagageigggctgccaatgectgagaaateggggcagg5L5ltaggC5LtCaagcttctcattttcgttccgctgcc5L5Lei5Leiata^tccagaaaatggggcatactgagcttgatacaaagttaataaatgccgggcctggtttggcgaggcccaattacatggggscctgggactcacaggggagtggcagcctcttcacttagtgaggtcttaagaggtc上述SAA2mRNA序列的等效物是可變剪接形式、等位基因形式或其同族形式。同族形式是來自另一個哺乳動物物種的與SEQIDNO:2同源的血清淀粉狀蛋白A2mRNA。與SEQIDNO:2相關的SAA2核酸序列是具有GenBank登錄號NM—030754(人)、BC058008.1、J03474.1、L05921.1、M23699.1、M2370(K1、M26152.1、X5144(U、X51444.1、X51445.1和X56653.1的那些SAA2核酸序列。SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的蛋白質產物(SAA1和SAA2)稱作急性期反應物并且類似于C反應蛋白，它們由促炎癥細胞因子顯著上調。SAA1和SAA2蛋白質在氨基酸水平93.5%相同并且基因在核苷酸水平96.7%相同。GenBank數據庫提供血清淀粉狀蛋白A4的信使RNA的相應DNA序列，參考號NMJ)06512，作為SEQIDNO:3提供如下。血清淀粉狀蛋白A4的編碼序列來自核苷酸76-468。SAA4:SEQIDNO:31tatagctccacggccagaagataccagcag61站ggtccacagcetc站tgaggcttttcacsi121gtcaccagtgaaagctggcgttcgtttttc181ggcagagcct6ittggg沃cataatgatatcc241gctcggggSLCtatgeitgc:tgcccaaaga301atcagccgfttccagggtctatcttcaggga3515Lgcactgtattggaggactcgaagtccaac421aaagaccccgaccgcttcagacctgacggc481tctgctctcagggaaactgggctgtgagcc541ggtcactgagctttgtgtccccaggaactg601gtttgtc站attgactctgcctttactgetaatttcagctggagaggcattgttttctgctccttggtcatgggaaaggaggctctcc站ggggttggggacatgaatcaccaaaattcacagatatctctatggacctgggggtgtctgggctgctactcttaatagractacta±ttatttggaaacagrcgag說agctgagg&atggrggccggagtggcctgcctaagaaatactgagcttcctgctccacacacttctccccccagsccSLgggacacaggtatagggcacctagaggtgttcaataaatSAA4是低水平組成型表達的基因。上述SAA4mRNA序列的等效物是可變剪接形式、等位基因形式或其同族形式。同族形式是來自另一個哺乳動物物種的與SEQIDNO:3同源的血清淀粉狀蛋白A4mRNA,與SEQIDNO:3相關的SAA4核酸序列是具有GenBank登錄號BC007026、M81349.1和S48983.1的那些SAA4核酸序列。減弱mRNA的表達短語"減弱mRNA的表達"，如本文中所用，意指施用一定量的干擾RNA以在細胞中引起把基因的全長mRNA水平減少，因而與具有雜亂序列的對照mRNA相比，減少mRNA翻譯成為蛋白質。降低mRNA表i^it常稱作"敲低"mRNA。通過本文中實施方案預期敲低的表達量包括并且在50%至100%之間。然而，為了本發明的目的，無需實現此敲低水平。此外，兩套干擾RNA可以各自適度有效地進行敲低，然而共同施用時，可以顯著更有效地進行敲低。在一個實施方案中，單個dssiRNA有效地敲低達70%。在另一個實施方案中，兩種或多種dssiRNA共同有效地敲低達70%。敲低通常由通過定量聚合SI^式反應(QPCR)擴增測定的mRNA水平或通過蛋白質印跡或酶聯免疫吸附測定法(ELISA)測定的蛋白質水平測量，蛋白質水平的分析提供對因RNA誘導性沉默復M(RISC)和翻譯抑制所致的mRNA降解的評估。其它用于測量敲低的技術包括RNA溶液雜交、核酸酶保護、RNA印跡雜交、逆轉錄、用微陣列監測基因表達、抗體結合、it射免疫測定和熒光激活的細胞分析，SAA的抑制還在人或哺乳動物中因觀察到青光眼癥狀的改善，例如眼內壓力的改善、視野損失的改善或旨經頭改變的改善加以推測。本發明實施方案的干擾RNA以催化方式起作用，即干擾RNA能夠以化學計量的量實現乾mRNA的抑制。與反義治療相比，需要顯著較少量的干擾RNA以產生治療效果.雙鏈干擾RNA:雙鏈干擾RNA(又稱作dssiRNA),如本文中所用，具有有義核苷^列和反義核苷酸序列，有義序列和反義序列包含至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。千擾RNA的長度包含19至49個核苷酸，并且可以包含19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49個核苷酸。dssiRNA的反義序列在生理條件下與SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的一部分雜交，并且具有與分別對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。siRNA的反義鏈是siRNA活性的定向劑，因為反義鏈結合至細胞內的RISC復合體，并引導結合的復合體在與反義RNA序列互補的序列處特異性地結合至mRNA，因而允許隨后通過結合的復合體切割mRNA。用來選擇siRNA的靼序列的技術通過Tuschl,T.等"ThesiRNAUserGuide，，(2004年5月6日修訂，在洛克菲勒大學網站上可獲得)、通過Ambion公司網站上的506號技^^^艮"siRNADesignGuidelines"、通過Invitrogen網站(使用錄G/C含量最小350/0，最大55%)以及通過Dharmacon網站提供。乾序列可以位于mRNA的編碼區內或5'或3'非翻譯區內。用于SAA1的DNA把序列的實施方案存在于SEQIDNO:1的核苷酸531至549處5'-TGGGGCAGGAGTGGCAAAG-3，SEQIDNO:4。用于靶向SEQDDNO:4的相應mRNA序列并在每一鏈上具有3，UU突出端的本發明雙鏈siRNA是5'-UGGGGCAGGAGUGGCAAAGUU-3'SEQIDNO:53'國UUACCCCGUCCUCACCGUUUC-5'SEQIDNO:6。該3，突出端可以具有多個"U，，殘基，例如在2、3、4、5和6間并包含2、3、4、5和6個的多個"U，，絲。5'端還可以具有5，核苷酸突出端。用于靶向SEQDDNO:4的相應mRNA序列并在每一鏈上具有3'TT突出端的本發明雙鏈siRNA是5'-UGGGGCAGGAGUGGCAAAGTT曙3'SEQIDNO:73，-TTACCCCGUCCUCACCGUUUC-5，SEQIDNO:8。雙鏈siRNA的鏈可以通過發夾環連接以形成如下單鏈siRNA:5，-UGGGGCAGGAGUGGCAAAGUUNNN\N3'-UUACCCCGUCCUCACCGUUUCNNNNN/SEQIDNO:9。N是核苷酸A、T、C、G、U或本領域普通技術人員所知的修飾形式。核苷酸數目N在如下數字之間并包括這些數字3至23、或5至15、或7至13、或4至9、或9至11，或者核苷酸數目N是9。表1列出SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3的SAADNA耙序列的實例，以如上所述形式從SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3設計本發明的siRNA。表l用于siRNA的SAA耙序列<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>如以上實例中引用，技術人員能夠使用表l中提供的把序列信息，通過參考SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3中的序列位置并添加或缺失分別與SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3互補或接近互補的核苷酸，設計長度比表l中提供的序列更短或更長的干擾RNA。由dssiRNA或sssiRNA指導的靶RNA切割反應是高度序列特異性的。通常，含有與靶mRNA的一部分完全相同的有義核苷酸序列及與mRNA有義序列完全互補的反義部分的siRNA是用于抑制SAAmRNA的siRNA實施方案。然而，實施本發明不需要siRNA的反義鏈與把mRNA間100%序列互補。因此本發明允許因遺傳突變、抹多態性或進化趨異可以預期的序列變異。例如，相對于靶序列具有插入、缺失或單點突變的siRNA序列對抑制是有效的。在本發明的某些實施方案中，反義序列包含CUUUGCCACUCCUGCCCCA(SEQIDNO:37)或UCGGAAGUGAUUGGGGUCU(SEQIDNO:38)并且反5Lf列與對應于SEQIDNO:1的mRNA的,分雜交，在本發明的更多實施方案中，反義序列包含UUUGUCUGAGCCGAUGUAA(SEQIDNO:39)AACCAGGCCCGUGAGAAGC(SEQIDNO:40)CUGAGCCGAUGUAAUUGGC(SEQIDNO:41)CCCCCGAGCAUGGAAGUAU(SEQIDNO:42)CUCUGGCAUUGCUGAUCAC(SEQIDNO43)GCCUGUGAGUCUCUGGAUA(SEQIDNO:44)GCCACUCCUGCCCCMJUUA(SEQIDNO:45)GCCAGCAGGUCGGAAGUGA(SEQIDNO:46)，并且反5Cf列與對應于SEQIDNO:1的mRNA的一部分或對應于SEQIDNO:2的mRNA的一部分雜交。在本發明另一個實施方案中，反義序列包含AGUCUCUGGAUAUUCUCUC(SE()IDNO47)、UUUAUUGGCAGCCUGAUCG(SEQIDNO48)、UUGCUGAUCACUUCUGCGG(SEQIDNO49)、CUGGAUAUUCUCUCUGGCA(SEQIDNO50)、UCUGCCACUCCUGCCCCAU(SEQIDNO51)或GCCACUCCUGCCCCAUUUA(SEQIDNO:69)并且反5C4列與對應于SEQIDNO:2的mRNA的一部分雜交。以上提及的方法包括如此實施方案，即其中反義序列包含AACCCCUUGGAGAGCCUCC(SEQIDNO:52)、UGCCCAUGUCCCCAACCCC(SEQIDNO:53)、AUAGAGAUAUCUGUUUGAA(SEQIDNO:54)、CGAGCAUAGAGAUAUCUGU(SEQIDNO:55)、CUUUGGGCAGCAUCAUAGU(SEQIDNO:56)、AGACACCCCCAGGUCCUCU(SEQIDNO:57)、CCUGGAACGGCUGAUGAGU(SEQIDNO:58)、CCAAAUAAAUAGUAGUCUA(SEQIDNO:59)、UCCAAUACAGUGCUGCUGU(SEQIDNO:60)、CUCAGCUUUCUCGUUGGAC(SEQIDNO:61)、CCAUUCCUCAGCUUUCUCG(SEQIDNO:62)、CCGGCCCCAUUCCUCAGCU(SEQIDNO:63)、CUUUGCCACUCCGGCCCCA(SEQIDNO:64)或UCUGAAGCGGUCGGGGUCU(SEQIDNO:65)，并且反5C^列與對應于SEQIDNO:3的mRNA的一部分雜交。siRNA的反義序列具有與mRNA的乾序列中至少19個核苷酸接近完全連續的互補性。"接近完全"如本文中所用意指siRNA的反義序列M上與靶mRNA的至少一部分互補，并且siRNA的有義序列基本上與靶mRNA的至少一部分完全相同。"同一性，，如本領域普通技術人員所知是如通it^列間核苷酸的順序匹配而測定的核苷酸序列間序列相關性的程度.在一個實施方案中，將對于靶mRNA具有80%以及具有80%至100%間的互補性的反義RNA視為幾乎完全互補，并且可以在本發明中使用。"完全"連續的互補性是鄰近^對的標準Watson-Crick減基配對。"至少接近完全"連續的互補性包括如本文中所用的"完全"互補性。設計用于測定同一性或互補性的計算機方法，例如BLASTP和BLASTN(Altschul，S.F.等(1990)J.Mol.Biol.215:403-410)以及FASTA以提供最大程度的核苷酸序列匹配。對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的耙序列可以位于mRNA的5，或3'非翻譯區以及在mRNA的編碼區內。雙鏈干擾RNA的一條或兩^:可以具有1至6個核普酸的3'突出端，其中核苷酸可以是一核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或其混合物。突出端的核苷酸不發生堿基配對。在本發明的一個實施方案中，干擾dsRNA包含TT或UU的3'突出端。雙鏈siRNA的有義鏈和反義鏈可以是如上所述的兩條單鏈的雙鏈體形式或可以是單個分子，在所述單個分子中互補區域發生堿基配對并且通過發夾或環共價地連接以形成單一的鏈。據信發夾通過稱作Dicer的蛋白質干擾RNA可以因添加、缺失、置換或修飾一個或多個核普酸而不同于天然存在的RNA,非核苷酸物質可以在5'端、3'端或在內部與干擾RNA結合。通常設計此類修飾以增加干擾RNA的核酸酶抗性、促進細胞攝取、增強細胞靶向性、輔助追蹤干擾RNA或進一步改善穩定性。例如，干擾RNA可以在突出端的末尾包含噪呤核苷酸，例如，膽固醇通過他咯烷連接體綴合至dssiRNA分子有義鏈的3'端也對siRNA提供穩定性。其它修飾例如包括3'末端生物素分子、已知具有穿透細胞特性的肽、納米粒子、模擬肽、熒光染料或樹狀聚體。核苷酸可以在分子的4^部分、其糖部分或磷酸部分被修飾并且在本發明實施方案中發揮作用。修飾例如包括用烷基、烷氧基、氨基、脫氮(deaza)、卣素、羥基、硫羥基或其組合置換。核苷酸可以例如用具有更高穩定性的類似物取代，如用2'脫氧-T取代U，或具有糖修飾，如2，OH由2'M或2'甲基、2'甲氧乙基或2'-0,4'-C亞甲基橋取代。核苷酸的嘌呤或嘧啶類似物實例是黃嘌呤、次黃嘌呤、氮雜嘌呤、甲M代腺嘌呤、7-脫氮-腺嘌呤以及O-和N-修飾的核苷酸。核苷酸的磷^可以通過用氮或用硫(硫代磷酸S旨)取代磷酸基的一個或多個氧進行修飾。修飾對改善功能是有用的，例如改善穩定性或通透性或者有用定位或靶向。反義siRNA中可以存在與SEQIDNO:1中一部分不互補的區域。非互補性區域可以位于互補區域的3'端、5'端或兩端。千擾RNA可以合成產生，例如通過體外(iViv&n>)轉錄、siRNA表達栽體或PCR表達盒產生。作為轉染的siRNA發揮良好作用的干擾RNA在作為體內表達的siRNA時同樣發揮良好作用。干擾RNA可使用受保護的核糖核苷亞磷跣胺和常規DNA/RNA合成儀化學合成并且可以例如從商業供應商如AmbionInc.(Austin，Texas)、Invitrogen(Carlsbad，CA)或Dharmacon(Lafayette，Colo.，美國)得到，干擾RNA例如通過用溶劑或樹脂提取、沉淀、電泳、層析或其組合加以純化。備選地，干擾RNA可以幾乎不進行純化而加以使用以避免因樣品加工引起的損失。干擾RNA可以通過使用本領域普通技術人員已知的組成型或誘導型啟動子如U6或H1RNA聚合酶III啟動子、巨細胞病毒啟動子、SP6、T3或T7啟動子從重組質粒上表達而向受試者提供。例如，來自InvivoGen(SanDiego，CA)的psiRNATM允許在細胞內從RNA聚合酶III啟動子上產生siRNA。從重組質粒中表達的干擾RNA可以通過標準技術分離。用于表達干擾RNA的病毒載體可以使用如上所述的例如用于質粒的啟動子衍生自腺病毒、船目關病毒、痘病毒、逆轉錄病毒(例如慢病毒、彈狀病毒、鼠白血病病毒)、皰滲病毒等。病毒栽體的選擇、用于由栽體表達干擾RNA的方法和用于遞送栽體的方法在本領域普通技術人員能力范圍內。干擾RNA的表達還通過使用SILENCEREXPRESSTM(Ambion，Austin，Texas)經具有人Hl、人U6或小鼠U6啟動子的表達盒(SEC)通過PCR提供。沉默表達盒是在發夾siRNA模板兩側包含有啟動子和終止子的PCR產物。一旦轉染ii^細胞，發夾siRNA從PCR產物上表達并"i秀導特異性沉默。生理條件下雜交"雜交，，指這樣的技術，在其中允許單鏈核酸(DNA或RNA)相互作用以致于氫鍵結合的復合體(稱作雜化物)由具有互補或幾乎互補g序列的這些核酸形成。雜^t^是敏感的和選擇性的以致于特定目的序列在存在低濃度此序列的樣品中得到鑒定。雜交的特異性(嚴格性)受例如體外預雜交溶液和雜交溶液中鹽或甲酰胺的濃度、以及雜交溫度的控制，并且在本領域內是眾所周知的。具體而言，嚴格性通過降低鹽的濃度、增加甲酰胺的濃度或升高雜交溫度而增加。例如，高嚴^^件可以在約50。/。甲酰胺于37。C至42。C下發生。降低的嚴M件可以在約35%至25%甲酰胺于約30。C至35。C下發生。用于雜交的嚴格條件實例由Sambrook，J.，1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.提供。嚴格雜交條件的其它實例包括400mMNaCl、40mMPIPESpH6.4、lmMEDTA、50。C或70。C持續12-16小時，隨后洗滌，或于70°C在lxSSC或于50°C在lxSSC、50。/。甲酖胺中雜交，隨后于70°C在0.3xSSC中洗滌，或于70。C在4xSSC或于50。C在4xSSC、50%甲酰胺中雜交，隨后于67。C在lxSSC中洗滌。用于雜交的溫度是低于雜合物解鏈溫度(Tm)約5-10°C的溫度，其中對于長度19至494UJtt的雜合物，Tm使用如下計算式確定Tm。C=81.5+16.6(log1()[Na+D+0.41(%G+C)-(600/N)，其中N是雜合物中堿基的數目，并且Na+l是雜交緩沖液中鈉離子的濃度.在本發明的實施方案中，與SAAmRNA在體外高嚴旨fr下雜交的干擾RNA的反義鏈將在生理條件下在體內特異性地結合。鑒定或分離在高嚴旨降下不與核酸雜交的相關核酸在降低的嚴格性下實施。單鏈干擾RNA:如上所提及，干擾RNA最終作為單^C揮作用。已發現sssiRNA實現了mRNA沉默，盡管效率低于雙鏈siRNA。因此，本發明的實施方案還提供siRNA的施用，其中單鏈siRNA在生理條件下與SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的一部分雜交，并具有與分別對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。sssiRNA具有如以上乾良dssiRNA相同的19至49個核苷酸長度。sssiRNA具有5'磷酸或在原位或在體內在5，位置處磷酸化。術語"5，磷酸化"用于描述例如具有通過酯鍵連接至5，糖(例如5，核糖或脫氧核糖，或其類似物)的C5羥基的磷酸基團的多核苷酸或寡核苷酸。sssiRNA可以具有單個、兩個或三個磷酸基團。sssiRNA可如dssiRNA那樣化學合成或通過載體合成。5'磷脧基團可以通過激酶添加或5'磷酸可以是核酸酶切割RNA的結果。遞送如對于dssiRNA所述。在一個實施方案中，施用具有被保護末端和核酸酶抗性修飾的sssiRNA用于沉默。sssiRNA可以被干燥用于貯存或溶解于水溶液中。溶液可以含有緩沖劑或鹽以便抑制退火或用于穩定.干擾性發夾RNA:干擾性發夾RNA是單鏈的并JLfr—^:內含有有:^列和反5Uf列.為了通過DNA栽體表達，將對應于有義siRNA序列的至少19個核苷酸的相應DNA寡核苷酸通過短間隔區與它的反向互補反義序列連接。對于所選擇表達栽體，如果需要可以添加3'末端T和形成限制性位點的核苷酸。得到的RNA轉錄物自身回折以形成莖-環結構.施用模式干擾RNA可以通過眼組織注射直接遞送至眼，如眼周、結膜、筋膜下、前房內、玻璃體內、視網膜下、目姊后或小管內注射；通過使用導管或其它的布放裝置如視網膜顆粒劑(retinalpellet)、眼內插入物、栓劑或者包含多孔材料、非多孔材料或膠狀材料的^體；通過局部使用的眼滴劑或眼骨；通過在盲管內的或^鞏膜附近(經鞏膜的)或眼內的緩釋裝置直接應用至眼。前房內注射可以穿過角膜抵達前房室以允許藥物到達小梁網。前房內注射可以it/v流出施萊姆管的靜脈收集通道或iiA施萊姆管。受試者因青光眼或有青光眼發展風險而需要治療的受試者是具備患有與SAA表達或活性相關的青光眼即SAA相關性青光眼的病癥或風險的人或其它動物。與此類疾病相關的眼結構可以包括例如視網膜、脈絡膜、晶狀體、角膜、小梁網、虹膜、視神經、視神經頭、鞏膜、眼房、玻璃體腔或睫狀體。制劑和劑量藥物制劑包含與生理可接受的眼用栽體介質如水、緩沖劑、鹽水、甘油、透明質酸、甘露醇等混合的重量至多為99。/。的本發明干擾RNA或其鹽。本發明的干擾RNA作為溶液劑、混懸劑或乳劑施用。如下是由本發明的可能的制劑的實例。量(重量百分比)干擾RNA至多99;0.1-99;0.1—50;0.5-10.0羥丙基曱基纖維素0.5氯化鈉0.8糾氯銨0.01EDTA0.01NaOH/HCl調至pH7.4純化水補足至100mL量(重量百分比)干擾RJNA至多99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸緩沖鹽水1.0絲氯銨0.01聚山梨酯800.5純化水補足至100%量(重量百分比)干擾RNA至多99;0.1-99;0.1—50;0.5-10.0磷酸二氫鈉0.05磷酸氫二鈉(無水)0.15氯化鈉0.75EDTA二鈉0.05CremophorEL0.1糾氯銨0.01HC1和/或NaOHpH7.3-7.4純化水補足至100%量(重量百分比)干擾RNA至多99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸緩沖鹽水1.0幾丙基-^環糊精4.0純化水補足至100%通常，本發明實施方案的干擾RNA的有效量包含從20pM至100nM、或從1nM至50nM、或從5nM至約25nM的眼部或其附近細胞間濃度。面.制劑的pH為約pH4-9，或pH4,5至pH7.4,雖然精確給藥方案由臨床醫生自行決定，但干擾RNA可以通過每曰四次每只眼各滴一滴施用，或按照臨床醫生指導施用。制劑的有效量取決于如下因素，如受試者的年齡、種族和性別或青光眼的嚴重性。在一個實施方案中，將干擾RNA以治療劑量局部遞送至眼睛并抵達小梁網、視網膜或視神經頭，由此改善SAA相關性疾病過程。可接受的載體。可眼用的載體指至多引起輕微眼刺激至不引起眼刺激、根據需要提供適宜防腐作用、并且以均一劑量遞送一種或多種本發明干擾RNA的栽體。用于施用本發明實施方案的干擾RNA的可接受載體包括MinisTransIT-TKOsiRNA轉染試劑(MinisCorporation,Madison,Wisconsin)、LIPOFECTIN、lipofectamine、OLIGOFECTAMINETM(Invitrogen，Carlsbad,CA)、CELLFECTIN、DHARMAFECTTM(Dharmacon，Chicago,IL)或聚陽離子如^Jl氨酸、脂質體或脂溶試劑如膽固醇。脂質體例如從標準的形成載體的脂和固醇如膽固醇形成，并且可以例如包括把向性分子，如具有內皮細胞表面抗原結合親和力的單克隆抗體。此外，脂質體可是PEG化的脂質體。對于眼用遞送，干擾RNA可以與眼科可用的防腐劑、共溶劑、表面活性劑、增黏劑、滲透增強劑、緩沖劑、氯化鈉或水組合以形成含水的無菌眼用混懸劑或溶液劑。眼用溶液制劑可以通過將抑制劑溶解于生理可接受的等滲含水緩沖液內加以制備。此外，目艮用溶液劑可包括眼科可用的表面活性劑以輔助抑制劑溶解。黏度形成劑如羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等可以添加至本發明的組合物以改"S^f匕合物的滯留.為了制備無菌的眼用軟骨制劑，將干擾RNA與合適載體如礦物油、液體羊毛脂或白fc5蠟中的防腐劑組合。無菌的眼用皿制劑可以通過將干擾RNA混懸于親水性基質內制備，其中親水性M根據本領域已知用于其它眼用制劑的方法例如從CARBOPOL-940(BFGoodrich,Charlotte,NC)等的組合中制備。VISCOAT⑧(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)可以例如用于眼內注射。當干擾RNA在眼中穿透性較弱時，本發明的其它組合物可以含有滲透增強劑如Cremephor和TWEEN80(聚氧乙烯失水山梨糖醇單月桂酸酯，SigmaAldrich，St.Louis，MO)。試劑盒本發明的實施方案提供包含用于減弱細胞中SAAmRNA表達的試劑的試劑盒。試劑盒^^有DNA;^板，該;^板具有兩個不同的啟動子如T7啟動子、T3啟動子或SP6啟動子，每一啟動子有效連接至編碼兩條對應于干擾RNA的互補單鏈RNA的核苷酸序列。RNA從DNA;^板上轉錄并退火以形成有效減弱靶mRNA表達的雙鏈RNA。試劑盒任選地含有用于從DNA模板擴增DNA序列的擴增引物和用于合成RNA的核苷三磷酸(即ATP、GTP、CTP和UTP)。任選地，試劑盒含有兩種RNA聚合酶(其中每種聚合酶能夠結合在DNA^^上的一個啟動子并引起與該啟動子有效連接的核普酸序列的轉錄)、用于純化單鏈RNA的純化柱如大小排阻柱、一種或多種緩沖液(例如用于單鏈RNA退火以產生雙鏈RNA的緩沖液)、用于純化雙鏈RNA的RNA酶A或RNA酶T。SAA干擾RNA敲低例如人小梁網(TM)細胞中內源性SAA表達水平的能力如下實施。命名為GTM3或HTM-3的已轉化的人TM細胞系(見Pang，LH.等，1994.Curr.EyeRes.13:51-63)的轉染使用標準體外濃度(100nM)的如本文所述SAA干擾RNA以及LIPOFECTAMINETM2000(Invitrogen，Carlsbad,CAlifornia)以l:l(w/v)比例進行。雜亂siRNA和laminA/CsiRNA(Dharmacon)用作對照。QPCRTAQMAN⑧正向引物和反向引物以及包含靶位點的探針組用于評估mRNA切割的程度。此類引物/探針組可以由例如ABI(AppliedBiosystems，FosterCity,CA)合成。為減少非特異性脫靶效應的可能，對siRNA確定抑制SAAmRNA表達的siRNA的最低可能濃度。SAAmRNA敲低使用合適引物/探針組通過QPCR擴增評估。SAAsiRNA在GTM3細胞中的劑量反應在例如以0、1、3、10、30和100nM劑量范圍的siRNA處理24小時后的GTM3細胞中觀察到。數據使用GraphPadPrism4軟件(GraphPadSoftware,Inc"SanDiego，CA)以可變斜率、sigmoidal劑量反應算法和100%最大約束(topconstraint)加以擬合。對于所測試的特定siRNA獲得IC50。實施例l用于在小梁網細胞中沉默SAA的干擾RNA本研究檢測SAA干擾RNA敲低人正常小梁網細胞和人青光眼性小梁網(TM)細胞中內源性SAA表達水平的能力。人正常TM細胞系(NTM765-04-OD,p5)和人青光眼性TM細胞系(GTM686-03-OS，p6)的轉染使用SMARTPOOLSAA-干擾RNA庫的標準體外濃度(100nM)和DHARMAFECT#1轉染試劑(DharmaconResearchInc"Chicago,IL)實施。SMARTPOOLSAA-干擾RNA含有混合的四種同源雙鏈siRNA，其中所述的雙鏈siRNA被設計成靶向具有序列標識SEQIDNO:11、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19和SEQIDNO:20的SAAmRNA區域，并在三個不同濃度上(處理1:0.05/tl/100pi孔；處理2:0.2/d/100/d孑L;處理3:0.4(d/100/d孔)一式三份處理24或48小時。對照不作處理。對mRNA水平的影響對于SAAmRNA的QPCR分析，使用RNAqueous-4TMPCR(Ambion，Austin,TX)從處理24小時的細胞中提取總RNA并且用TaqMai^逆轉錄試劑(PEBiosystems，FosterCity，CA)合成cDNA,使用TaqMan通用PCR主混合物以及7700SDS(PEBiosystems)—式三份開展QPCR。使用核糖體RNA(18srRNA，PEBiosystems)作為多重QPCR中的歸一化對照.QPCR分析使用兩組TaqMan探針/引物(PEBiosystems)開展，第一組(P423)靶向SAAcDNA序列的編碼區并且笫二組(P428)把向非編碼區。如圖1中所示，使用P423引物組，在處理3條件下用siRNA處理的NTM765-04正常細胞中觀察到，相對于18srRNA約35%的SAAmRNA被抑制。如圖2中所示，使用P423引物組，在處理3條件下用siRNA處理的GTM686-03青光眼性細胞中觀察到，相對于18srRNA約41%的SAAmRNA被抑制。使用引物組P428得到相似結果。對SAA蛋白水平的影響使用ELISA測定法檢測自處理48小時的細胞制備的細胞裂解物中內源性SAA蛋白質的水平。在經處理1、處理2和處理3siRNA處理的全部GTM686青光眼性細胞(圖5)內觀察到約66%的SAA蛋白質降低，而在NTM765細胞中(圖4)^Ji見察到如此情況。內源性SAA蛋白質水平在兩種小梁網細胞系、尤其在NTM765正常細胞系內極低。對細胞生長和形態學的影響SAAsiRNA對TM細胞形態學的影響通過實時電子感知系統(RT-CESTM，ACEABiosciences,Inc.,SanDiego,CA)監測。如圖3中所示，:^M見察到因siRNA處理對TM細胞生長或形態學的毒性效應。本文中所4I^L參考文獻以它們提供示例性方法或其它細節補充本文中所述的方法和細節的程度具體引用作為參考。本領域技術人員在本公開指示下將認識到可以對本文中公開的實施方案進行明顯修改而不脫離本發明的精神和范圍。本文中公開的全部實施方案可以在本公開指示下無需過度實驗即得到實施和執行。本發明的全部范圍在本公開及其等效實施方案中闡述。說明書不得解釋為過于縮小本發明所授予4^P保護范圍。如本文中所用并且除非另外說明，術語"a"和"an"具有"一"、"至少一"或"多于一"的意思。權利要求1.減弱受試者眼中血清淀粉狀蛋白AmRNA表達的方法，包括向受試者眼中施用包含有效量的19至49個核苷酸長度的干擾RNA和可藥用載體的組合物，其中血清淀粉狀蛋白AmRNA的表達因此減弱；所述干擾RNA包含有義核苷財列、反義核苷,列以^4有義序列和反:JUf列間有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域;其中反義序列在生理條件下與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的一部分雜交，并具有與分別對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。2.如權利要求l中所述的方法，其中受試者患有青光眼。3.如權利要求l中所述的方法，其中受試者具有iUL成為青光眼的風險。4.如權利要求l中所述的方法，其中反:SC^列具有與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分有至少21至23個核苷酸接近完全連續互補的區域，并且在有義序列和反義序列各自的3，端包含額外的TT序列。5.如權利要求l中所述的方法，其中有義核苷酸序列和反義核苷^列由核苷酸序列環連接。6.如權利要求l中所述的方法，其中組合物經局部途徑、玻璃體內途徑或經鞏膜途徑施用。7.如權利要求1中所述的方法，其中將反義序列設計成靶向對應于SEQIDNO:1的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸處起始的核苷酸序列。8.如權利要求1中所述的方法，其中將反義序列設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸處起始的核苷酸序列。9.如權利要求1中所述的方法，其中將反義序列設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核普酸處起始的核苷酸序列。10.如權利要求1中所述的方法，其中將反義序列設計成靶向對應于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、3卯、396、406或423位核普酸處起始的核苷酸序列。11.如權利要求l中所述的方法，其中反義序列包含CUUUGCCACUCCUGCCCCA(SEQIDNO:37)、UCGGAAGUGAUUGGGGUCU(SEQIDNO:38)、UUUGUCUGAGCCGAUGUAA(SEQIDNO:39)、AACCAGGCCCGUGAGAAGC(SEQIDNO:40)、CUGAGCCGAUGUAAUUGGC(SEQIDNO:41)、GCCACUCCUGCCCCAUUUA(SEQIDNO:69)、CCCCCGAGCAUGGAAGUAU(SEQIDNO:42)、CUCUGGCAUUGCUGAUCAC(SEQIDNO:43)、GCCUGUGAGUCUCUGGAUA(SEQIDNO:44)、GCCACUCCUGCCCCAUUUA(SEQIDNO:45)、GCCAGCAGGUCGGAAGUGA(SEQIDNO:46)、AGUCUCUGGAUAUUCUCUC(SEQIDNO:47)、UUUAUUGGCAGCCUGAUCG(SEQIDNO:48)、UUGCUGAUCACUUCUGCGG(SEQIDNO:49)、CUGGAUAUUCUCUCUGGCA(SEQIDNO:50)、UCUGCCACUCCUGCCCCAU(SEQIDNO:51)、AACCCCUUGGAGAGCCUCC(SEQIDNO:52)、UGCCCAUGUCCCCAACCCC(SEQIDNO:53)、AUAGAGAUAUCUGUUUGAA(SEQIDNO:54)、CGAGCAUAGAGAUAUCUGU(SEQIDNO:55)、CUUUGGGCAGCAUCAUAGU(SEQIDNO:56)、AGACACCCCCAGGUCCUCU(SEQIDNO:57)、CCUGGAACGGCUGAUGAGU(SEQIDNO:58)、CCAAAUAAAUAGUAGUCUA(SEQIDNO:59)、UCCAAUACAGUGCUGCUGU(SEQIDNO:60)、CUCAGCUUUCUCGUUGGAC(SEQIDNO:61)、CCAUUCCUCAGCUUUCUCG(SEQIDNO:62)、CCGGCCCCAUUCCUCAGCU(SEQIDNO:63)、CUUUGCCACUCCGGCCCCA(SEQIDNO:64)或UCUGAAGCGGUCGGGGUCU(SEQIDNO:65)。12.如權利要求l中所述的方法，其中干擾RNA包含在4^J^部分、在糖部分或在磷酸部分上的修飾。13.如權利要求1中所述的方法，其還包括向受試者眼中施用第二干擾RNA，所述第二干擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并包含有義核苷酸序列、反義核苷,列以及在有義序列和反5C亭列間有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域；其中第二干擾RNA的反義序列在生理^fr下與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的第二部分雜交，并且具有與分別對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的第二雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。14.如權利要求1中所述的方法，其中組合物包含有效量的至少四種干擾RNA的混合物和可藥用載體，其中每一干擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并且每一干擾RNA包含有義核苷酸序列、反義核苷M列以及在四種干擾RNA的每一干擾RNA的有義序列和反義序列間有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域；其中混合物的反M列在生理M下與對應于SEQIDNO:2的mRNA中分別在175、252、276和325位核苷酸處起始的一部分雜交，并具有與對應于SEQIDNO:2的mRNA中分別在175、252、276和325位核苷酸處起始的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。15.減弱受試者眼中血清淀粉狀蛋白AmRNA表達的方法，包括向受試者眼中施用包含有效量的19至49個核普酸長度的干擾RNA和可藥用載體的組合物，其中血清淀粉狀蛋白AmRNA的表達因此減弱；其中干擾RNA包含具有與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的雜交部分有至少19個核香酸接近完全連續互補的區域的核苷酸序列。16.如權利要求15中所述的方法，其中組合物經局部途徑、玻璃體內途徑或經鞏膜途徑施用。17.如權利要求15中所述的方法，其中將干擾RNA設計成粑向對應于SEQIDNO:l的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸處起始的核苷酸序列。18.如權利要求15中所述的方法，其中將干擾RNA設計成乾向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸處起始的核苷酸序列。19.如權利要求15中所述的方法，其中將干擾RNA設計成把向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核普酸處起始的核苷酸序列。20.如權利要求15中所述的方法，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、390、396、406或423位核苷酸處起始的核苷酸序列。21.如權利要求15中所述的方法，其還包括向受試者眼中施用第二干擾RNA,所述第二千擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并包含具有與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的第二雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域的第二核苷酸序列。22.如權利要求15中所述的方法，其中組合物包含有效量的至少四種干擾RNA的混合物，每一千擾RNA具有19至49個核香酸長度，并且混合物包含具有與對應于SEQIDNO:2的mRNA中的分別在175、252、276和325位核苷酸處起始的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域的第一、第二、第三和第四核苷酸序列。23.治療有此需要的受試者中血清淀粉狀蛋白A相關性青光眼的方法，其包括向受試者眼中施用包含有效量的19至49個核苷酸長度的干擾RNA以及可藥用載體的組合物，其中血清淀粉狀蛋白A相關性青光眼因此得到治療；所述干擾RNA包含有義核苷酸序列、反義核苷酸序列以及在有義序列和反義序列間有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域；其中反義序列在生理條件下與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的一部分雜交，并具有與分別對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。24.如權利要求23中所述的方法，其中組合物經局部途徑、玻璃體內途徑或經鞏膜途徑施用。25.如權利要求23中所述的方法，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:l的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸處起始的核普酸序列。26.如權利要求23中所述的方法，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸處起始的核普酸序列。27.如權利要求23中所述的方法，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核普酸處起始的核苷酸序列。28.如權利要求23中所述的方法，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、390、396、406或423位核苷酸處起始的核苷酸序列。29.如權利要求23中所述的方法，其還包括向受試者眼中施用第二干擾RNA，所述第二干擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并包含有義核苷i^列、反義核苷酸序列以及在有義序列和反義序列間有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域；其中第二干擾RNA的反義序列在生理M下與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的第二部分雜交，并且具有與分別對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的第二雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。30.如權利要求23中所述的方法，其中組合物包含有效量的至少四種干擾RNA的混合物和可藥用載體，其中每一干擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并且每一干擾RNA包含有義核苷酸序列、反義核苷酸序列以及在四種干擾RNA的每一干擾RNA的有義序列和反義序列間有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域；其中混合物的反義序列在生理條件下與對應于SEQIDNO:2的mRNA中分別在175、252、276和325位核苷酸處起始的一部分雜交，并具有與對應于SEQIDNO:2的mRNA中分別在175、252、276和325位核苷酸處起始的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。31.治療有此需要的受試者中血清淀粉狀蛋白A相關性青光眼的方法，包括向受試者眼中施用包^^有效量的19至49個核苷酸長度的干擾RNA和可藥用載體的組合物，其中血清淀粉狀蛋白AmRNA的表達因此減弱；其中干擾RNA包含具有與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域的核苷酸序列。32.如權利要求31中所述的方法，其中組合物經局部途徑、玻璃體內途徑或經鞏膜途徑施用。33.如權利要求31中所述的方法，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:l的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸處起始的核苷酸序列。34.如權利要求31中所述的方法，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸處起始的核苷酸序列。35.如權利要求31中所述的方法，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核苷酸處起始的核苷酸序列。36.如權利要求31中所述的方法，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、3卯、396、406或423位核苷酸處起始的核苷酸序列。37.如權利要求31中所述的方法，其還包括向受試者眼中施用第二干擾RNA，所述第二干擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并包含具有與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的笫二雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域的第二該普酸序列。38.如權利要求31中所述的方法，其中組合物包含有效量的至少四種干擾RNA的混合物，每一干擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并且混合物包含具有與對應于SEQIDNO:2的mRNA中的分別在175、252、276和325位核苷^t起始的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域的第一、第二、第三和第四核苷酸序列，39.包含有效量的19至49個核苷酸長度的干擾RNA以及可藥用載體的組合物在制造用于減弱受試者眼中血清淀粉狀蛋白AmRNA表達的藥物中的用途；所述干擾RNA包含有義核普酸序列、反義核苷酸序列以及在有義序列和反義序列間有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域；其中反義序列在生理條件下與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的一部分雜交，并具有與分別對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。40.如權利要求39中所述的用途，其中反義序列具有與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的雜交部分有至少21至23個核苷酸接近完全連續互補的區域，并且在有義序列和反義序列各自的3，端包含額外的TT序列。41.如權利要求39中所述的用途，其中有義核苷酸序列和反義核苷酸序列由核苷酸序列環連接。42.如權利要求39中所述的用途，其中將組合物制備成用于經局部途徑、玻璃體內途徑或經鞏膜途徑的施用。43.如權利要求39中所述的用途，其中將反義序列設計成靶向對應于SEQIDNO:1的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸處起始的核苷酸序列。44.如權利要求39中所述的用途，其中將反義序列設計成耙向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸處起始的核苷酸序列。45.如權利要求39中所述的用途，其中將反義序列設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核苷酸處起始的核苷酸序列。46.如權利要求39中所述的用途，其中將反義序列設計成靶向對應于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、390、396、406或423位核苷酸處起始的核苷酸序列。47.如權利要求39中所述的用途，其中反義序列包含CUUUGCCACUCCUGCCCCA(SEQIDNO:37)、UCGGAAGUGAUUGGGGUCU(SEQIDNO:38)、UUUGUCUGAGCCGAUGUAA(SEQIDNO:39)、AACCAGGCCCGUGAGAAGC(SEQIDNO:40)、CUGAGCCGAUGUAAUUGGC(SEQIDNO:41)、GCCACUCCUGCCCCAUUUA(SEQIDNO:69)、CCCCCGAGCAUGGAAGUAU(SEQIDNO:42)、CUCUGGCAUUGCUGAUCAC(SEQIDNO:43)、GCCUGUGAGUCUCUGGAUA(SEQIDNO:44)、GCCACUCCUGCCCCAUUUA(SEQIDNO:45)、GCCAGCAGGUCGGAAGUGA(SEQIDNO:46)、AGUCUCUGGAUAUUCUCUC(SEQIDNO:47)、UUUAUUGGCAGCCUGAUCG(SEQIDNO:48)、UUGCUGAUCACUUCUGCGG(SEQIDNO:49)、CUGGAUAUUCUCUCUGGCA(SEQIDNO:50)、UCUGCCACUCCUGCCCCAU(SEQIDNO:51)、AACCCCUUGGAGAGCCUCC(SEQIDNO:52)、UGCCCAUGUCCCCAACCCC(SEQIDNO:53)、AUAGAGAUAUCUGUUUGAA(SEQIDNO:54)、CGAGCAUAGAGAUAUCUGU(SEQIDNO:55)、CUUUGGGCAGCAUCAUAGU(SEQIDNO:56)、AGACACCCCCAGGUCCUCU(SEQIDNO:57)、CCUGGAACGGCUGAUGAGU(SEQIDNO:58)、CCAAAUAAAUAGUAGUCUA(SEQIDNO:59)、UCCAAUACAGUGCUGCUGU(SEQIDNO:60)、CUCAGCUUUCUCGUUGGAC(SEQIDNO:61)、CCAUUCCUCAGCUUUCUCG(SEQIDNO:62)、CCGGCCCCAUUCCUCAGCU(SEQIDNO:63)、CUUUGCCACUCCGGCCCCA(SEQIDNO:64)或UCUGAAGCGGUCGGGGUCU(SEQIDNO:65)。48.如權利要求39中所述的用途，其中干擾RNA包含在^J^部分、在糖部分或在磷酸部分上的修飾，49.如權利要求39中所述的用途，其中組合物還包含第二干擾RNA,所述第二干擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并包含有義核苷酸序列、反義核苷酸序列以及在有義序列和反義序列間有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域；其中第二千擾RNA的反義序列在生理條件下與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的笫二部分雜交，并且具有與分別對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的第二雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域。50.如權利要求39中所述的用途，其中組合物包含有效量的至少四種干擾RNA的混合物和可藥用載體，其中每一干擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并且每一干擾RNA包含有義核苷酸序列、反義核苷酸序列以及在四種干擾RNA的每一干擾RNA的有義序列和反義序列間有至少19個核香酸接近完全連續互補的區域；其中混合物的反義序列在生理條件下與對應于SEQIDNO:2的mRNA中分別在175、252、276和325位核苷酸處起始的一部分雜交，并具有與對應于SEQIDNO:2的mRNA中分別在175、252、276和325位核苷酸處起始的雜交部分有至少19個核普酸接近完全連續互補的區域。51.包含有效量的19至49個核苷酸長度的干擾RNA和可藥用載體的組合物在制造用于減弱受試者眼中血清淀粉狀蛋白AmRNA表達的藥物中的用途；其中干擾RNA包含具有與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域的核苷酸序列。52.如權利要求51中所述的用途，其中將組合物制備成用于經局部途徑、玻璃體內途徑或經鞏膜途徑施用。53.如權利要求51中所述的用途，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:l的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557處開始的核普酸序列。54.如權利要求51中所述的用途，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸處起始的核苷酸序列。55.如權利要求51中所述的用途，其中將干擾RNA設計成靶向對應于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核苷酸處起始的核苷*列。56.如權利要求51中所述的用途，其中將干擾RNA設計成乾向對應于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、390、396、406或423位核苷酸處起始的核苷酸序列。57.如權利要求51中所述的用途，其中組合物還包含第二干擾RNA，所述第二干擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并包含具有與對應于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的第二雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域的第二核苷酸序列。58.如權利要求51中所述的用途，其中組合物包含有效量的至少四種干擾RNA的混合物，每一干擾RNA具有19至49個核苷酸長度，并且混合物包含具有與對應于SEQIDNO:2的mRNA中的分別在175、252、276和325位核苷酸處起始的雜交部分有至少19個核苷酸接近完全連續互補的區域的第一、第二、第三和第四核苷酸序列。59.權利要求39至58中任一項所述的用途，其中受試者患有血清淀粉狀蛋白A相關性青光眼。全文摘要本發明提供用于在涉及SAA表達的青光眼中抑制血清淀粉狀蛋白AmRNA表達的RNA干擾。文檔編號A61K31/713GK101124322SQ200580048548公開日2008年2月13日申請日期2005年12月19日優先權日2004年12月23日發明者A·F·克拉克,L·麥克納特,王萬恒申請人:愛爾康公司