專利名稱：：用于治療肝性腦病的含有鳥氨酸和苯基乙酸(phenylacetate)或苯基丁酸...的制作方法
技術領域：
：本發明涉及對肝失代償或肝性腦病的預防和治療。
背景技術：
：慢性肝病的特征是肝組織隨時間逐漸遭到破壞，從而導致健康的和再生的肝組織慢慢被瘢痕組織和壞死組織替代。這種現象被認為是肝硬化。正常肝功能受到損害，并且瘢痕組織逐漸減少肝內血流。正常的再生肝組織損失時，營養物、激素、藥物和毒素就不再有效地得到處理。這就可能導致多種癥狀，包括通過腸道吸收的蛋白質的清除異常導致氨的蓄積；分泌異常導致血液中膽紅素蓄積，產生黃疸；竇壓升高導致腹部液體蓄積(腹水)；以及門靜脈高血壓(門體循環分流)一_其中形成瘢痕的肝組織起到血流屏障的作用一一導致門靜脈血壓升高和食管靜脈曲張。慢性肝病患者可具有很穩定的臨床狀態，并表現出很少的癥狀或者根本不表現出癥狀。然而，這類患者會有病癥突然惡化的風險，這種惡化可導致慢加急性肝衰竭。這種從肝臟能起作用(即便水平有所降低)的"代償"狀態到肝臟不能起作用的"失代償"狀態的轉變與^JL事件的作用有關。與慢性肝病相關的CJL事件包括胃腸出血、感染(膿毒癥)、門靜脈血栓形成和脫水。例如，50%的肝硬化患者患有食管靜脈曲張，其中三分之一的患者在確診的兩年內會突然發生食管靜脈曲張，并導致胃腸出血(GraceND(1992)GastroenterolClinNorthAm21:149-161)。已知上消化道出血可增加對危及生命的并發癥的敏感性，所述并發癥例如細菌性腹膜炎、膿毒癥、腎衰竭和肝性腦病(Teranetal.(1997)Gastroenterology112:473-482;Gardenetal.(1985)BrJSurg72:91-95;Pauwelsetal.(1996)Hepatology24:802-806;Bleichneretal.(1986)BrJSurg73:724-726),盡管對出血進行了足夠的控制，但仍由此造成約30%的患者死亡(Grace1992，同上)。肝性腦病(HE)是一種發生于多種臨床條件例如急性或慢性肝病和自發性門體靜脈分流中的復雜神經性精神病癥。肝性腦病早期會發生些微精神變化例如思維不集中、意識錯亂和定向障礙。在嚴重的情況下，肝性腦并可導致木僵、昏迷、腦腫脹(腦水腫)和死亡。對于因慢性肝病而發生HE的患者，HE的發病通常是由臨床促發事件例如胃腸出血、膿毒癥(感染)、門靜脈血栓形成或脫水造成的結果。胃腸出血和門體分流可使通常由肝代謝的毒性物質經過肝進入體循環，并跨過血腦屏障，以對中樞神經系統產生直接或間接神經毒性作用。氨的蓄積被認為在肝性腦病和多器官衰竭(呼吸衰竭、心血管衰竭、腎衰竭)的進程中具有重要的作用。除氨外，胃腸出血后隨即發生的敗血癥(或細菌性腹膜炎)也可能是促發肝性腦病的一個因素。由此肝失代償可導致多器官衰竭和肝性腦病。在肝性腦病早期可發生一些微小的變化，例如思維不集中或不能構建簡單物體。嚴重的情況下，肝性腦病可導致木僵、昏迷、腦腫脹和死亡。由于慢性肝病存在許多病因，因此很難對慢性肝病患者的預后作出估計。盡量不使代償狀態向失代償狀態發展的預防性措施包括避開會使疾病惡化的其他致病因素，例如徹底戒酒和針對曱型和乙型肝炎進行接種。然而，一旦發生肝失代償，生存的幾率就有所下降，而肝移植是唯一可延長生命的治療方法。由于肝失代償導致壽命縮短，因此十分需要防止肝失代償的發生。對肝性腦病患者的通常療法包括使氨濃度減小的方法。這些方法包括限制膳食蛋白質的攝入,給予乳果糖、新霉素、L-鳥氨酸L-天冬氨酸(LOLA)或苯甲酸鈉，和清潔灌腸。
發明內容本發明涉及苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸用于預防或治療患者肝失代償或肝性腦病(HE)的用途。對于因例如胃腸出血而還患有異亮氨酸缺乏的患者還可給予異亮氨酸。因此，本發明提供一一鳥氨酸用于制備與苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種聯合使用以預防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物的用途；一一苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種用于制備和鳥氨酸聯合使用以預防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物的用途；一一苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸用于制備預防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物的用途；一一含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸的產品，同時、分別或相繼使用以預防或治療肝失代償或肝性腦病；---種含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸的藥物組合物；---種用于預防或治療肝失代償或肝性腦病的藥劑，含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸；和---種治療肝失代償或肝性腦病患者或具有肝失代償或肝性腦病患病風險的患者的方法，所述方法包括向所述患者給予有效量的苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸。圖l表示硬變患者的嗜中性粒細胞功能發生改變，并隨肝病加重而惡化。圖2表示氨減弱嗜中性粒細胞的吞噬作用。圖3表示氨減弱嗜中性粒細胞的趨化作用。圖4表示氨對嗜中性粒細胞的吞噬作用的影響可通過干預而得到逆轉。圖5表示模擬的胃腸出血可減弱嗜中性粒細胞的趨化作用，所述趨化作用的減弱可通過給予異亮氨酸而#:部分逆轉。圖6表示模擬的出血減少蛋白質合成并不適當地刺激異亮氨酸的氧化。圖7表示在模擬的出血過程中給予異亮氨酸可增強蛋白質合成，但不降低氨濃度。圖8表示給予LOLA可降低氨濃度但會使氨再生。圖9表示主動除去谷氨酰胺可防止氨濃度再次升高。圖10表示苯基乙酸與谷氨酰胺結合從而生成可分泌化合物，并且苯基乙酸預防氨再次增加。圖ll表示鳥氨酸和苯基丁酸對晚期硬變患者的氨水平的影響。圖12表示鳥氨酸和苯基丁酸對晚期硬變患者的谷氨酰胺水平的影響。圖13表示用安慰劑、0、P或0+P治療的患者的精神狀態的變化。圖14表示鳥氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對晚期硬變患者的氨水平的影響。圖15表示鳥氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對晚期硬變患者的谷氨酰胺水平的影響。圖16表示鳥氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對晚期硬變患者的甘氨酸水平的影響。圖17表示鳥氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對晚期硬變患者的異亮氨酸水平的影響。圖18表示鳥氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對晚期硬變患者的鳥氨酸水平的影響。圖19表示在膽管結扎大鼠模型中，鳥氨酸和苯基丁酸對動脈中氨的影響。圖20表示在膽管結扎大鼠模型中，鳥氨酸和苯基丁酸對血漿中鳥氨酸的影響。圖21表示在高血氨急性肝衰竭大鼠模型中，鳥氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對動脈血漿氨水平的影響。圖22表示在用OP治療急性肝衰竭的血行阻斷豬模型中，動脈氨水平的增加程度變小。圖23表示在0和OP治療的動物中，通過肌肉去除血氨(從股靜脈-股動脈中取樣)。相比之下，使用安慰劑和單獨使用P的動物表現出肌肉產生的氨增加。圖24表示在除0P治療的動物之外的所有動物中，消化道產生氨(從門靜脈排流組織(portaldrainedviscera)-動l^樣)。圖25表示單獨使用0增加了肌肉谷氨酰胺的釋放，但單獨使用P并不使之增加。OP使得肌肉谷氨酰胺顯著更多地釋放(由此以肌肉中谷氨酰胺的形式捕獲氨)。圖26表示0增強消化道對谷氨酰胺的吸收，但0P使其吸收減少(由此減少消化道中產生的氨)。圖27表示在給藥的兩組動物(單獨給予0的組和給予0P的組)中，動脈鳥氨酸水平升高。圖28表示使用0時動脈谷氨酰胺水平升高，但使用0P時該水平升高較少。圖29表示聯合使用OP可防止氨源M酸甘氨酸的增加。圖30表示單獨使用鳥氨酸可造成腦積水增加，苯基乙酸誘導腦積水減少的程度很小，但將這些藥劑聯合就顯著減少腦積水(對照％)。具體實施例方式本說明書和隨附的權利要求書通篇中的詞語"包含"和"包括"及其變化形式例如"包含了"、"包含有"、"包括了"、"含有"均做非排他性解釋。也就是，這些詞語意在表示可能包括未明確述及的但上下文所允許的其他要素或整數。本發明涉及在發展成肝失代償之前以及在由此而發生肝性腦病之前，為預防或延遲肝失代償發病而對肝病患者進行的早期治療。此外，本發明涉及通過有效減少氨濃度和維持嗜中性粒細胞功能來對肝性腦病進行的治療。凈甜被財本發明涉及預防或治療肝失代償或肝性腦病。因此受試者的肝應處于代償狀態。受試者可患有慢性肝病。受試者可患有肝硬化。受試者可患有急性肝衰竭。待治療的受試者可患有肝性腦病。急性和慢性肝病的發病可歸因于異生物因素。例如受試者可能已暴露于某種造成肝損害的化學物質、藥物或一些其他藥劑。受試者可能對導致肝損害的非處方藥、處方藥或"消閑性"藥物有反應。受試者可能服用了Rezulin頂(曲格歹'J酉同；Parke一Davis)、Serzone(奈、法峻嗣；Bristol—MyersSquibb)或者其他被認為導致肝損害的藥物。受試者可能服用了過量的特定藥物或服用了超過推薦劑量的、可導致肝損害的藥物。例如受試者可能服用了過量的對乙酰氨基酚。受試者可能例如在他們的工作地點已暴露于可導致肝損害的化學物質。例如，受試者可能在工業或農業環境中已暴露于這類化學物質。受試者可能已攝入了含有可導致肝損害的化合物的植物，尤其當受試者是動物例如食草動物時可能發生這種情況。例如，受試者可能攝入了含有吡咯聯啶生物堿的植物例如美狗舌草。受試者可能已暴露于被認為會導致肝病的環境毒素。藥物相關肝毒性造成所有急性肝病(急性肝衰竭)病例的50%以上。在美國和英國，樸熱息痛(也稱為對乙酰氨基酚和舲乙酰對氨基苯酚)毒性是引起急性肝衰竭的最常見原因。服用治療量或稍微過量樸熱息痛的長期中重度飲酒者具有患嚴重肝損傷和可能為急性的肝衰竭的風險。飲酒可增強樸熱息痛的毒性作用。特應性藥物毒性也會引起急性肝衰竭。特應性藥物毒性被認為是一種超敏反應，在這種反應中受試者是以異常的藥理學方式產生對藥物的反應。這種異常反應可導致急性肝衰竭。急性肝衰竭或慢性肝病可以是由病原微生物感染所致。例如，肝病可以是由病毒感染所致的。尤其地，受試者可能被或已被導致肝炎的病毒感染。受試者可能患有慢性病毒性肝炎。所述病毒可以是例如乙型、丙型或丁型肝炎病毒。在某些情況下，尤其在受試者患有病毒性肝炎的情況下，該受試者還可被HIV-I或n感染。受試者可以是AIDS患者。受試者可能已被或將被其他導致肝病的微生物、尤其是那些在其生命周期的某些階段存在于肝中的微生物感染。例如，受試者中可能有或已有肝吸蟲。受試者可患有導致慢性肝病或增加患慢性肝病風險的遺傳性疾病。例如受試者可患有肝血色素沉著病、威爾遜(氏)病或a-1-抗胰蛋白酶缺乏癥中的一種或多種疾病。受試者可患有導致某種肝結構或功能異常的遺傳性病癥，所述肝結構或功能異常增加了肝纖維化的幾率。受試者可在遺傳上易發生損害肝并因此引起肝纖維化的自身免疫性疾病。慢性肝病可以是酒精誘導的。待治療的男性或女性可能是或已是飲酒者。他或她可能或已經每周平均攝入50或50單位以上的酒精、每周60或60單位以上的酒精、每周75或75單位以上的酒精甚至是每周100或100單位以上的酒精。該男性或女性可能或者已經每周平均攝入最多達100單位的酒精，每周最多達150單位的酒精，甚至每周最多達200單位的酒精。酒精的一個單位的量度各國不一。本文中，根據聯合王國標準，一個單位等于8克乙醇。男性或女性攝入上述水平的酒精可已有5年或多于5年、10年或多于10年，15年或多于15年，或者20年或多于20年。受試者才聶入上述水平的酒精可已達最多10年、最多20年、最多30年以及甚至最多40年。對于酒精誘導的肝硬化，受試者可以為例如25歲或25歲以上、35歲或35歲以上、45歲或45歲以上或甚至60歲以上。受試者可以是男性或女性。女性對酒精的不良作用可能比男性更敏感。相對男性而言，女性可在更短的時間段內，由更少量的酒精產生酒精性慢性肝病。造成女性對酒精性肝損害的敏感性更高的原因似乎不是唯一的，但激素對酒精代謝的影響可能具有重要的作用。在本發明的其他實施方案中，受試者患有許多已知會造成肝損害的其他疾病的一種或多種，所述疾病例如為原發性膽汁性肝硬變、自身免疫性慢性活動性肝炎和/或血吸蟲病(寄生蟲感染)。受試者可能將患有或已患有膽管阻塞。在某些情況下可能并不知曉導致慢性肝病的潛在原因。例如受試者可能已被診斷為原因不明的硬變。在一個實施方案中，受試者可被懷疑患有本文所列的任意疾病。診斷慢性肝病、急性肝衰竭和肝性腦病的方法為本領域所熟知，尤其對于本領域的臨床醫師和獸醫而言是熟知的。優選地，受試者將被例如醫學或獸醫專業人員診斷為患有肝病或肝性腦病。受試者可表現出一種或多種與肝病相關的癥狀，例如一種或多種下述癥狀黃疸、腹水、皮膚改變、液體潴留、指(趾)曱改變、易挫傷、鼻出血、食管靜脈曲張，并且男性受試者可能會有乳房增大。受試者可表現出虛脫、疲勞、厭食、惡心、虛弱和/或體重減輕。受試者還可表現出一種或多種與肝性腦病相關的癥狀，例如一種或多種以下癥狀意識錯亂、定向障礙、癡呆、木僵、昏迷、腦水腫、多器官衰竭(呼吸衰竭、心血管衰竭或腎衰竭)、肌強直/肌肉強直、癲癇發作或言語障礙。待治療的受試者可能正在服用或未服用治療肝病的其他藥物。待治療的受試者可具有患肝性腦病的風險。肝病可能已經通過或將通過包括例如超聲技術在內的生理檢查證實。可進行肝臟活組織檢查以查明積累的纖維化、壞死細胞、細胞變性和/或炎癥以及肝病的其他特有特征。可在受試者中進行肝功能評價，以確定受試者中是否發生肝功能損害。肝病的性質和潛在病因可得到表征。暴露于肝病致病因素的任何病史均可被確定。待治療的受試者可為有肝性腦病發作風險的患者，例如等待肝移植、外科手術的患者和/或門靜脈高壓的患者。具有肝性腦病發作風險的人是這樣一種人他未經歷任何肝性腦病發作，或者在較長一段時間(約12周或更長)內未經歷肝性腦病發作，但患有某種產生肝性腦病發作風險的疾病或醫學病癥。肝性腦病發作是一種臨床疾病，其特征為肝病或肝功能障礙患者存在腦功能障礙。肝性腦病中存在許多種精神紊亂，輕則其主要影響為降低生活質量，重則可導致昏迷并最終至死亡。可使用評分系統對肝病與肝性腦病的嚴重性和對受試者的預后進行評價。可采用Child-Pugh、WestHaven標準、格拉斯哥昏迷評分(GlasgowComaScale)或改進的Child-Pugh評分系統。或者，可采用(APACHE)n評分系統。對包括血清膽紅素水平、血清清蛋白水平等的參數和包括存在腹水或腦病等的征候分配分數。待治療的受試者可分為Child-Pugh評分系統的A、B或C等級。通常待治療的受試者被歸為Child-Pugh評分系統的C等級。待治療的男性或女性年齡可在例如25至80歲。在一個實施方案中，該男性或女性為45至70歲。在另一個實施方案中，該男性或女性為25至44歲。在再一個實施方案中，該男性或女性為65歲以上。但是，本發明還確實具有獸醫用途。待治療的受試者可以是養殖動物例如母牛或公牛、綿羊、豬、牛、山羊或馬，或者可以是馴養動物例如狗或貓。受試者是否為肝病動物模型均可。動物可以是任何年齡的，但通常應是發育成熟的成年受試者。斧M本發明所使用的氬基酸可以是純的晶體氨基酸。一般而言，氨基酸為L型而非D型，或者是D和L的混合物。通常使用分離形式的氛基酸。可使用任何活性形式的氨基酸以預防或治療肝失代償或肝性腦病。可使用可藥用形式的氨基酸。使用的氛基酸可以是游離的氨基酸或者氨基酸鹽或衍生物。鳥氨酸可以是純的晶體氨基酸形式。一般而言，鳥氨酸為L型而非D型，或者為D和L的混合物。通常使用分離形式的鳥氨酸。可使用任何活性形式的鳥氨酸或可藥用形式的鳥氨酸。使用的鳥氨酸可以是游離的氨基酸或者氨基酸鹽或衍生物。通常，鳥氨酸以單一單體氨基酸形式使用。可使用鹽形式的鳥氨酸，例如可使用鳥氨酸鹽酸鹽。鳥氨酸可為游離形式的生理上可接受的鹽。因此鳥氨酸或鳥氨酸鹽通常并不與任何其他藥劑進行化學鍵合或共價連接。可使用鳥氨酸的衍生物。例如可以給予鈉鹽或鈣鹽形式的鳥氨酸的酮基或羥基類似物。鳥氨酸的酮酸包括鳥氨酸酮戊二酸鹽、鳥氨酸酮亮氨酸和鳥氨酸酮纈氨酸。可使用鳥氨酸的鹽或衍生物以替代游離鳥氨酸，或同時使用游離鳥氨酸。可使用苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種。苯基乙酸和/或苯基丁酸可為生理上可接受的鹽形式，例如堿金屬或堿土金屬鹽。所述鹽可以是苯基乙酸鈉或苯基丁酸鈉。苯基乙酸和苯基丁酸的鹽形式可以是游離的形式。因此苯基乙酸和苯基丁酸或者苯基乙酸鹽和苯基丁酸鹽通常不與任何其他藥劑進行化學鍵合或者共價連接。任選使用異亮氨酸。異亮氨酸可為純的晶體氨基酸形式。一般而言，異亮氨酸為L型而非D型，或D和L的混合物。通常使用分離形式的異亮氨酸。可使用任何活性形式的異亮氨酸或者可使用可藥用形式的異亮氨酸。使用的異亮氨酸可以是游離的氨基酸或氨基酸鹽或衍生物。通常，異亮氨酸以單一單體氨基酸形式使用。可使用鹽形式的異亮氨酸，例如可使用異亮氨酸鹽酸鹽。異亮氨酸可為游離形式的生理上可接受的鹽。因此異亮氨酸或異亮氨酸鹽通常并不與任何其他藥劑進行化學鍵合或共價連接。通常用可藥用載體或稀釋劑配制用于給藥的鳥氨酸和苯基乙酸和/或苯基丁酸。因此，可用制藥領域常規的一種或多種標準可藥用載體和/或賦形劑，將鳥氨酸和苯基乙酸和/或苯基丁酸配制成一種藥物。制劑的確切性質將依賴于包括所需給藥途徑在內的多種因素。通常將鳥氨酸和苯基乙酸和/或苯基丁酸配制成用于口服、靜脈內、胃內、血管內或腹膜內給一所述藥物載體或稀釋劑例如可為等滲溶液例如生理鹽水。固體口服形式中除活性化合物外還可含有稀釋劑例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉等；潤滑劑例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇；黏合劑例如淀粉、阿拉伯膠、明膠、曱基纖維素、羧曱基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑例如淀粉、海藻酸、海藻酸鹽或羥乙酸淀粉鈉；泡騰混合物；染料；甜味劑；濕潤劑例如卵磷脂、聚山梨酯、硫酸月桂酯；以及藥物制劑中通常使用的無毒無藥理學活性的物質。這類藥物制劑可通過已知方式制備，例如通過混合、制粒、壓片、糖包衣或膜包衣過程制備。口服液體分散系可以是糖漿劑、乳劑或懸浮劑。糖漿可含有作為載體的例如蔗糖，或者蔗糖與甘油和/或甘露醇和/或山梨糖醇。懸浮劑和乳劑可含有作為載體的例如天然樹膠、瓊脂、海藻酸鈉、果膠、曱基纖維素、羧曱基纖維素或聚乙烯醇。肌內注射用的懸浮劑或溶液除含苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種和鳥氨酸外，還可含有可藥用載體，例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二醇例如丙二醇，若需要，還可含適量的利多卡因鹽酸鹽。本發明的藥物可含有鳥氨酸作為唯一的氨基酸組分。本發明的藥物可含有鳥氨酸和異亮氨酸作為僅有的氨基酸組分。藥物可基本上由苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸組成。藥物可基本上由苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種、鳥氨酸和異亮氨酸組成。藥物可基本上由鳥氨酸、苯基乙酸和/或苯基丁酸以及可藥用載體組成。因此這類藥物除鳥氨酸外基本上不含其他氨基酸。藥物可基本上可由鳥氨酸、異亮氨酸、苯基乙酸和/或苯基丁酸以及可藥用載體組成。因此這類藥物除含鳥氨酸和異亮氨酸外，基本上不含其他氨基酸。存在的苯基乙酸的量按重量計算可為鳥氨酸重量的5%-100%，例如10%-50%或20%-40%。存在的苯基丁酸的量按重量計算可為鳥氨酸重量的5%-100%,例如10%-50%或20%-40%。然而，藥物可含有非肽形式的游離天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸，它們通常以非顯著量存在。一般，按重量計算的天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸的量不超過按重量計算的鳥氨酸的量。非顯著量意為按重量計算的天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸或者這些氨基酸的組合的量不超過鳥氨酸重量的20%。因此，藥物基本上不含天冬氨酸。在一個實施方案中，組合物不含天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸。組合物中可存在痕量的天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸。痕量意為按重量計算的天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸或者這些氨基酸的組合的量不超過鳥氨酸重量的1%。優選地，天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸按重量計算的量不超過鳥氨酸重量的0.5%。在另一個實施方案中，組合物還可含有其他非肽形式的氨基酸，通常為游離氨基酸或其生理上可接受的鹽的游離形式。上述其他氨基酸的量按重量計通常不超過鳥氨酸的量。例如，存在的其他氨基酸的量按重量計最高達鳥氨酸重量的20%，例如為鳥氨酸重量的5%-20%。可存在于組合物中的上述其他氨基酸包括必需氨基酸和非必需氨基酸。組合物可含有其他支鏈氨基酸(BCAA)。BCAA包括異亮氨酸、纈氨酸和亮氨酸。因此，本發明的組合物可進一步含有異亮氨酸和/或纈氨酸和/或亮氨酸。甜將苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種與鳥氨酸聯合給予受試者以預防或延遲肝失代償或肝性腦病的發病。因此可聯合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸以改善受試者例如在促發事件之后患慢性肝病的受試者的狀況。可聯合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸以緩解受試者的癥狀，例如與受試者促發事件之后的慢性肝病相關的癥狀。可聯合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸以對抗或延遲肝失代償或肝性腦病的發病。可將苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸聯合給予受試者以治療肝性腦病。可聯合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸以改善肝性腦病患者的狀況。可聯合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸以緩解與肝性腦病相關的癥狀。可聯合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸以對抗肝性腦病。可聯合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸以預防具有肝性腦病發作風險的人的初始肝性腦病發作。可聯合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥可聯合給予i基乙酸和苯基丁酸中的至少一;以及鳥氨酸以延遲具有肝性腦病發作風險的人的初始肝性腦病發作。肝失代償和肝性腦病的發展與"促發事件"(或"急性發病")有關。這類促發事件包括胃腸出血、感染(膿毒癥)、門靜脈血栓形成和脫水。這類急性發病可能導致住院。患者可能經受某種這類急性發病或者這類急性發病的組合。根據本發明，聯合鳥氨酸與苯基乙酸和/或苯基丁酸來治療經歷過或疑似經歷過急性發病的受試者，以預防肝向失代償狀態發展。因此本發明可預防肝失代償的醫學后果，例如肝性腦病。鳥氨酸與苯基乙酸和/或苯基丁酸可用于維持肝功能。因此，使用鳥氨酸和苯基乙酸和/或苯基丁酸可延長肝病患者的壽命。在一個實施方案中，防止了胃腸出血的代謝性后果，例如出血期后的高血氨、低異亮氨酸血癥和蛋白質合成減少。通常，對受試者的治療可在發生或疑似發生促發事件(急性發病)時盡快開始。優選在反復急性發病前就對受試者開始治療。更優選地，在第一次急性發病后對受試者開始治療。通常在急性發病開始后隨即給予治療。可在醫務人員例如醫師、急救醫士或護士檢測出急性發病或疑似急性發病的癥狀之后開始治療。可在受試者住院后立即開始治療。因此，可在檢測出急性發病或疑似急性發病癥狀后6小時內、3小時內、2小時內或1小時內開始治療。因此，可在檢測出了急性發病或疑似急性發病的癥狀1至48小時，例如1-36小時或1-24小時后開始對受試者的治療。可在檢測出急性發病或疑似急性發病后，進行最多達8周，例如最多達6周、最多達4周或最多達2周的治療。因此可在檢測出急性發病或疑似急性發病后，進行最多達48小時，例如最多達36小時或最多達24小時的治療。通常治療進行到從急性促發事件中明顯得到恢復的時候。用鳥氨酸和苯基乙酸和/或苯基丁酸治療受試者。可以單一的藥物形式聯合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸，或者以兩種或三種不同藥物的形式獨立給予。當以組合的藥物形式給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸時，可在制好組合物后立即給藥，或者可以以組合藥物的形式貯藏。當獨立地給予鳥氨酸與苯基乙酸和/或苯基丁酸時，可在一段時間內同時或相繼給藥。可在一段時間內獨立地給予兩種或三種的藥物。當給予兩種藥物時，可先給予鳥氨酸，然后給予苯基乙酸和苯基丁酸、苯基乙酸或苯基丁酸。或者，可先給予苯基乙酸和苯基丁酸、苯基乙酸或苯基丁酸，然后給予鳥氨酸。在另一個實施方案中，先聯合給予鳥氨酸和苯基乙酸，然后再給予苯基丁酸。或者，先聯合給予鳥氨酸和苯基丁酸，然后給予苯基乙酸。在另一個實施方案中，可先給予苯基乙酸，然后聯合給予鳥氨酸和苯基丁酸。或者，先給予苯基丁酸，然后聯合給予鳥氨酸和苯基乙酸。當給予三種藥物時，可在不同的時間分別給予鳥氨酸、苯基乙酸和苯基丁酸。鳥氨酸可最先給予，或其次給予，或在最后給予。當首先給予鳥氨酸時，可其次給予苯基乙酸或苯基丁酸，之后再給予苯基丁酸或苯基乙酸。當其次給予鳥氨酸時，可首先給予苯基乙酸或苯基丁酸，再次再給予苯基丁酸或苯基乙酸。當最后給予鳥氨酸時，可首先給予苯基乙酸或苯基丁酸，之后給予苯基丁酸或苯基乙酸。可在給予第一種藥物最長達5小時例如最長達2小時或最長達l小時后給予第二種藥物。因此可在給予第一種藥物15分鐘-5小時后，例如30分鐘-4小時或1小時-3小時后給予第二種藥物。可在給予第二種藥物最長達5小時例如最長達2小時或最長達1小時后給予第三種藥物。因此可在給予第二種藥物15分鐘-5小時后，例如30分鐘-4小時或l小時-3小時后，給予第三種藥物。可在相同部位或不同部位給予本發明的藥物。可通it^目同途徑或不同途徑給予本發明的藥物。可通過任何合適的途徑給予本發明的藥物。優選通過口服、靜脈內、胃內、腹膜內或血管內途徑給藥。例如，當分別給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸時，它們均可口服或它們均可靜脈內給藥，或者鳥氨酸可口服給藥，而苯基乙酸和/或苯基丁酸可靜脈內給藥，或者苯基乙酸和/或苯基丁酸可口服給藥，而鳥氨酸可靜脈內給藥。向受試者給予治療有效量的鳥氨酸、苯基乙酸和/或苯基丁酸以及任選的異亮氨酸。鳥氨酸、苯基乙酸和/或苯基丁酸以及異亮氨酸的劑量可根據各種參數確定，所述參數例如待治療的受試者的年齡、體重和病癥；肝病的類型和嚴重程度；給藥途徑和所需的治療方案。鳥氨酸的常規劑量、苯基乙酸或苯基丁酸的常規劑量或者異亮氨酸的常規劑量為約0.02-1.25g/kg體重，例如0.1-0.5g/kg體重，具體根據上述參數而定。因此，鳥氨酸的劑量、苯基乙酸或苯基丁酸的劑量或者異亮氨酸的劑量可為1-50g，例如5-30g。鳥氨酸的劑量可為10至30g。異亮氨酸的劑量可為5-15g。鳥氨酸與苯基乙酸/苯基丁酸可以以10:1-1:IO的重量比進行給藥，例如重量比為5:1-1:5或2:l-l:2或約1:1。醫師可針對任意具體的患者確定所需的鳥氨酸與苯基乙酸或苯基丁酸以及任選的異亮氨酸的劑量。可給予單劑量的鳥氨酸和單劑量的苯基乙酸和/或苯基丁酸。任選地，還可給予單劑量的異亮氨酸。或者，可給予多劑量例如2、3、4或5個劑量的鳥氨酸和/或苯基乙酸和/或苯基丁酸和/或任選的異亮氨酸。上述多劑量給藥可進行一個月或兩周或一周時間。在另一個實施方案中，可每天給予單劑量或多劑量例如2、3、4或5個劑量的鳥氨酸和/或苯基乙酸和/或苯基丁酸。如上所述，可向受試者給予其他氨基酸。所述或每種其他氨基酸可與鳥氨酸和/或苯基乙酸和/或苯基丁酸以同一藥物的形式進行給藥，或者可獨立給藥。若進行獨立給藥，則所述或每種其他氨基酸的給藥可在鳥氨酸和/或苯基乙酸和/或苯基丁酸給藥同時進行，或者可在不同的時間例如在給予鳥氨酸和/或苯基乙酸和/或苯基丁酸最長達5小時、最長達2小時或最長達l小時之前或之后進行。所述或每種其他氨基酸通常為口服給藥或靜脈內給藥。向受試者給予治療有效量的所述或每種其他氨基酸。劑量應才艮據不同的參數例如以上針對鳥氨酸、苯基乙酸和苯基丁酸述及的參數而變化。所述或每種其他氨基酸的常規劑量為0.02-1.25g/kg體重，例如0.1-0.5g/kg體重。因此所述或每種其他氨基酸的劑量為1g-50g,例如5g一30g。可給予單劑量的所述或每種其他氨基酸。或者，可給予多劑量例如2、3、4或5個劑量。這類多劑量給藥可進行一個月或兩周或一周。在另一個實施方案中，可每天進行單劑量或多劑量例如2、3、4或5個劑量的給藥。以下實施例對本發明進行說明。實施例1:硬變患者的嗜中性粒細胞功能發生改變并隨肝病加重而惡魚測量嗜中性粒細胞吞噬作用和氧化爆發的方法在^試發將肝素化全血與受調理素作用的FITC標記的大腸桿菌和CD16—起培養。然后用5危式細胞術(FACScanBectonDickinson)對細胞進行分析，通過前向角散射和側向角散射設門，隨后基于藻紅蛋白(PE)[Immunotech,Marseille,France]熒光染料表達對細胞進4亍評價以i口、別CD16陽性細胞。然后對門內細胞群進行評價以確定FITC標記的細菌的存在情況。在虔4發將肝素化的全血與受調理素作用的大腸桿菌懸液一起培養以激發氧化爆發。加入底物溶液以測定二氫羅丹明(DHR)123向熒光源化合物羅丹明(R)123的轉化情況。使反應終止并固定，然后與CD16抗體一起培養以識別陽性嗜中性粒細胞。然后用流式細胞術進行分析。嗜^#在勿^^鷹必#_席通過改進的Boyden小室法，利用白細胞介素8作為化學引誘物質以激發化學激活作用，來測量嗜中性粒細胞的趨化作用。患者和方法我們對30名硬變患者(酒精性硬變；平均年齡53.2歲(SEM4.6))和20名健康志愿者進行了研究。將硬變患者分為疊加性酒精性肝炎(superimposedalcoholichepatitis)(AH+)患者和肝失代償或肝代償患者。利用吞噬試驗測定吞噬細胞的能力，利用吞噬爆發測定細胞在與大腸桿菌接觸時是否能夠產生氧化爆發。結果我們觀察到來自硬變患者的嗜中性粒細胞吞噬細菌的能力顯著下降。我們還發現，在使氧化爆發產生率增加方面，硬變患者對大腸桿菌刺激嗜中性粒細胞的作用產生應答的能力顯著下降(圖1)。這種能力下降與肝病的嚴重程度相關，表明肝病越處于晚期，對感染的產生應答和抵抗的能力就越弱。實施例2:氨降低嗜中性粒細胞的吞噬能力測量嗜中性粒細胞的吞噬作用和氧化爆發的方法如實施例1所述。患者和方法從健康志愿者(n=15)收集血液，將血液與濃度遞增的氨一起培養1小時。通過吞噬試驗和嗜中性粒細胞趨化作用分析測定嗜中性粒細胞吞噬細菌的能力。在嗜中性粒細胞趨化作用分析中使用10ng/ml的IL-8。結果隨著培養的氨的濃度增加，嗜中性粒細胞的吞噬作用(圖2)和嗜中性粒細胞趨化作用(圖3)顯著減弱。實施例3:通過干預手段可以逆轉氨對嗜中性粒細胞吞噬作用的影響測量嗜中性粒細胞的吞噬作用和氧化爆發的方法如實施例1所述。患者和方法從健康志愿者(n=15)收集血液，將血液與氨和選定的氨基酸一起培養1小時。通過吞噬試驗測定嗜中性粒細胞吞噬細菌的能力。結果我們觀察到，氨誘導的嗜中性粒細胞吞噬作用的減弱可被鳥氨酸和谷氨酰胺部分逆轉(圖4)。然而，氨與天冬氨酸共培養則使得嗜中性粒細胞吞噬作用惡化，但使用L-鳥氨酸L-天冬氨酸時可保持不變。實施例4:模擬胃腸出血使得嗜中性粒細胞趨化作用減弱，可通過給予異亮氨酸使得所述趨化作用的減弱被逆轉方法對10名[9名男性和一名女性；平均年齡為49.6歲(SEM9.1);Child-Pugh平均評分為7.8(SEM1.2)]禁食一夜、代謝穩定、經活組織檢查證實的肝硬化患者進行研究，所述研究在口服給予75g模擬血紅蛋白分子(Nutricia，Cuijk，Netherlands)的氨基酸混合物之前以及在給藥2小時后進行。在另外的7名患者[4名男性和3名女性；平均年齡為51.4歲(SEM6.7);Child-Pugh平均評分為8.1(SEM1.4)]中，在給予氨基酸混合物后，2小時內靜脈內給予異亮氨酸(含40mg/1異亮氨酸的等滲溶液，速度為100ml/hr)。測定周圍靜脈血樣的嗜中性粒細胞趨化作用(參見實施例1的方法)和血漿氨。結果與年齡匹配的對照(53.3SEM4.6)相比，這些硬變患者的嗜中性粒細胞的趨化作用明顯較低，并且在模擬出血后顯著減弱，從30(士4.2)減至8(±5.4)個細胞/高倍視野(p<0.0001)(圖5)。氨的血漿濃度顯著增加，從75.1(±4.2)增加至124(±8.5)(/<0.001)。氨濃度的改變與嗜中性粒細胞趨化作用的改變相關(r=0.65，/7<0.05)。在模擬出血組觀察到的嗜中性粒細胞趨化作用的減弱在使用異亮氨酸治療的患者組中被消除(25.4(±6.0)細胞/高倍視野)。實施例5:模擬出血可減少蛋白質的合成并不適當地刺激異亮氨酸氧魚方法招募5名禁食一夜的肝硬化患者。收集血樣并采集呼出氣樣本，然后開始輸注穩定的同位素以測定背景同位素的富集程度。然后，患者接受預先準備的[l-"C]-異亮氨酸的連續靜脈輸注(lmg/kgbw/h)直至試驗結束(t=480min)。結果圖6顯示輸注鹽水(黑色條柱)和氨基酸(棕色條柱)最后一小時內的異亮氨酸平均全身表觀率(WbRa)和異亮氨酸氧化作用(值以平均值士SEM表示；#表示？<0.05)。硬變患者的上消化道出血導致了異亮氨酸的減少和全身蛋白質合成的顯著減少。盡管異亮氨酸濃度顯著降低，但用于氧化作用的異亮氨酸流通部分在模擬出血后并未發生改變，這表明出現了BCAA拮抗作用。實施例6:在模擬出血期間給予異亮氨酸增強了蛋白質合成但不降低氨濃度方法對16名代謝穩定、經活組織檢查證實的肝硬化患者進行研究。在4小時的模擬出血期間，隨機對患者補充異亮氨酸(40mg/L溶液；50ml/hr)或安慰劑。氨和(通過預先地連續輸注L-[環-l]苯丙氨酸、L-[環-2114]-酪氨酸和L-[環-2H2]-酪氨酸來測量的)蛋白質合成。結果結果表明在肝硬化患者模擬出血期間輸注亮氨酸，使得肝和肌肉的遭損害的蛋白質合成得到恢復，導致了這些器官的凈合成代謝狀態(表1)。兩組的氨濃度顯著增加，但與給予異亮氨酸和給予安慰劑的組間并無顯著差異(圖7)。實施例7:晚期硬變患者輸注L-鳥氨酸L-天冬氨酸后的天冬氨酸累積方法用L-鳥氨酸L-天冬氨酸，以40g/天對5名等待肝移植的晚期硬變患者(年齡59;3名男性，ChildC級疾病，嚴重腹水，肌酸酐102pmol/L)進行治療。結果天冬氨酸濃度在3天時間內顯著遞增，增至基礎值的5倍(表2)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>數據為平均值土SEM咖ol/kg體細胞質量/min。結束時的數值代表氨基酸輸注最后一小時的平均值。對肝和腎的蛋白質合成的數據進行幾基化校正(見方法)。統計p值反映進行Mann-WhitneyU檢驗的組間差異；發現組間無顯著性差異。實施例8:LOLA的給藥降低氨濃度但可使氨再生患者和方法對8名硬變患者(年齡56(5.6)，5M，ALD-6;2級服4例；3-4級HE:4例)進行L0LA輸注(40g，8小時)治療。采集血樣以對氨和谷氨酰胺進行測量。結果結果表明，給予LOLA使得氨濃度顯著下降，同時伴隨有谷氨酰胺濃度升高(圖8)。這種氨的減少對HE的嚴重程度具有有益作用。然而，當停止LOLA給藥時，循環氨水平出現反彈升高，導致已得到改善的6名患者中的3名患者的HE復發。實施例9:主動除去谷氨酰胺防止了氨濃度再次升高患者和方法對進行血液濾過(heamofiltration(CVVH))的3名患者(年齡45(4.1)2M,ALD，HE全部為3級，HRS全部為3)進行LOLA輸注(40g，8小時)治療。釆集血樣以對氨和谷氨酰胺進行測量。結果結果表明，LOLA使得氨濃度降低，但加入透析阻止了谷氨酰胺濃度同時升高(圖9)。因此，我們認為氨濃度是持續降低的。實施例10:苯基乙酸與谷氨酰胺結合，從而生成可分泌的化合物并且防止了氨再次升高患者和方法用LOLA和苯基乙酸(40g/天，8小時)對6名急性肝衰竭(5例非甲非乙型肝炎)和嚴重肝性腦病(3-4級)的患者進行治療。結果聯合治療并未使得谷氨酰胺濃度顯著增高，但使得氨水平下降(圖10)。未觀察到氬良彈性增加。實施例11:鳥氨酸和苯基丁酸對肝性腦病病人的作用患者1.分組每組3名患者，總共12名。2.選入標準—18-80歲的成年患者，一通過組織學或臨床標準證實肝硬化-C型HE，—氨濃度>80jimol/L，告知同意/贊成3.排除標準-其他并發神經性疾病，-使用另一種特定的降氨藥物，-需要機械通氣和鎮靜的呼吸衰竭，—未控制住的胃腸出血，—需要inotrope的低血壓，明顯腎衰竭(肌酸酐>2mg/dl)，血液透析，-體外肝支持，已知的對任何研究藥物的高敏感性，-妊娠。對精神狀態的評價肝性腦病分級(WestHaven標準)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>方法在開放的標記性研究中，我們選入了8名患有硬變和高血氨的患者。根據肝病的嚴重性對他們進行匹配(見表3)。采用以下方案之一在3天時間內對他們進行治療，進行5天時間的觀察。研究組別為(i)安慰劑5%葡萄糖，4小時；(ii)單用鳥氨酸20g于500ml5%葡萄糖中，0800時至1200時；(Hi)苯基丁酸每天兩次，每次10g，口服(0800時和1600時)；和(iv)鳥氨酸+苯基丁酸20g于500ml5%葡萄糖中，0800時至1200時+#天兩次，每次10g,口服(0800時和1600時)。患者從午夜0000時至上午0800禁食一夜。按25KCal/Kg向他們提供胃內膳食，從0800開始至午夜結束，其中25KCal/Kg膳食中含有lg/Kg的蛋白質膳食。在0730時以及之后的1800時采集血樣，以便對氨和谷氨酰胺進行測量。密切監測對患者的副作用。各組的藥物均耐受良好，未觀察到不良事件。表3患者人口統計<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>SBP:特發性細菌性腹膜炎，非酒精性脂肪肝炎，ICU:必要的重癥監護支持，HRS:肝腎綜合征結果圖11表明，安慰劑組在治療期間的平均氨水平基本上保持不變。L-鳥氨酸組和苯基丁酸組中，氨濃度相對基線值有所升高。在L-鳥氨酸和苯基丁酸一起治療的組，氨顯著減少。OP治療的動物中，除了氨濃度降低外，餐后氨增加的程度也降低了。到第3天，OP組的兩名患者的肝性腦病評分得到了兩級改善，但在任一其他六名患者中未觀察到此現象。圖12表明，0P組在治療期間，雖然有氨的減少，但平均谷氨酰胺水平基本上保持不變。苯基丁酸組中，谷氨酰胺減少，這很可能是有害的。在L-鳥氨酸組和安慰劑組中，谷氨酰胺濃度增加，在餐后狀態中這一現象得到顯著加強。圖13表示用安慰劑、0、P和OP治療的組的精神狀態的變化。實施例12:鳥氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對肝性腦病病人的作用患者1.分組每組2名患者，總共6名。2.選入標準-18-80歲的成年患者，通過組織學或臨床標準證實肝硬化，ChildB或C，最近有因靜脈曲張的胃腸出血(顯現后6小時內)，告知同意/贊成3.排除標準-其他并發神經性疾病，使用另一種特定的降氨藥物，需要機械通氣和鎮靜的呼吸衰竭，未控制住的胃腸出血，需要inotrope的低血壓，明顯腎衰竭(肌酸肝〉2mg/dl),血液透析，體外肝支持，已知的對任何研究藥物的高敏感性，妊娠/哺乳。方法在開放的標記性研究中，我們選入了6名硬變患者，且這些患者因治療靜脈曲張性出血而被接受。根據肝病的嚴重性對他們進行匹配(見表4)。采用以下方案之一在3天時間內對他們進行治療，進行5天時間的觀察。研究組別為i.安慰劑5%葡萄糖，4小時(250ml)H.單用異亮氨酸10gm溶于250ml5%葡萄糖，分成兩個劑量，2小時內靜脈內注射iH.異亮氨酸+鳥氨酸+苯基丁酸異亮氨酸10gm溶于250ml5%葡萄糖，分成兩個劑量，2小時內靜脈內注射；鳥氨酸20g于250ml5%葡萄糖中(t-O、24、48hr);苯基丁酸每天兩次，每次10g,口服(t-O、12、24、36、48hr)患者從午夜0000時至上午0800時禁食一夜。按25KCal/Kg向他們提供胃內膳食，從0800開始至午夜結束，其中25KCal/Kg膳食中含有lg/Kg的蛋白質膳食。在0730時以及之后的1800時采集血樣，以便對氨和谷氨酰胺進行測量。密切監測患者的副作用。各組的藥物均耐受良好，未觀察到不良事件。患者由于最初進行了內鏡檢查術而接受了鎮靜劑，因此精神狀態評價不能用于解釋。安慰劑組和異亮氨酸組各一名患者因多器官衰竭而在醫院死亡。其余患者存活。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>SBP:特發性細菌性炎，非酒精性脂肪肝炎，ICU:必要的重癥監護支持，HRS:肝腎綜合征結果圖14表明安慰劑組和異亮氨酸組的氨濃度無顯著變化。OIP治療組的氨濃度顯著減少。圖15表明，給予異亮氨酸、安慰劑或OIP并未顯著改變谷氨酰胺水平。氨濃度僅在OIP組有顯著降低。圖16表明OIP作用的另一種方式是通過減少氨源氨基酸即甘氨酸。僅在OIP組觀察到甘氨酸的顯著減少。圖17表明各組開始的異亮氨酸水平均很低，但異亮氨酸治療組的該水平增至正常值的兩倍。安慰劑組的濃度保持低水平并且未變化。圖18表明，治療過程中患者的鳥氨酸水平的變化示出了鳥氨酸濃度顯著持續性升高并在停藥后所述濃度顯著降至基礎值，由此表明了不同組織中的吸收。實施例13:鳥氨酸和苯基丁酸對膽管結扎的大鼠的作用方法通過膽管結扎(BDL)誘導硬變在本方法中使用雄性SD大鼠(Sprague-Dawleyrat)(200-250g)。麻醉后，進行正中線剖腹術，暴露膽管，用4.0的絲線三重結扎，在第二結扎處和第三結扎處間切斷。用可吸收縫線對傷口進行分層縫合，使動物在安靜的室內恢復，之后放回動物飼養室。將動物置于常溫(20X:)下，進行12小時的光照/避光循環，并使其隨意接近水和標準的嚙齒動物食物。BDL(或假手術)五周后，將給予動物的嚙齒動物食物轉換為完全液體食物(Liquidiet，Bio-Serv，FrenchtownNJ，USA),所述完全液體食物中加入了模擬血紅蛋白組合物的氨基酸混合物(2.8g/Kg/天，NutriciaCuijk，TheNetherlands,ProdUctNo.24143)。在第6周于麻醉狀態下，插入右側頸動脈導管，并用其反復采集血樣。此步驟之后收集基線樣品，然后通過IP注射給予所研究的制劑。研究組為801^對照+鹽水(n=5)、BDL+IP鳥氨酸(0.22g/Kg，n=6)鹽水、BDL+IP苯基丁酸(0.3g/Kg,11=7)鹽水、BDL+IP0P鹽水(0.22g/Kg/0.3g/Kg，n=7)。將血樣收集至預冷的肝素化試管中，在處理前置于水上保存。離心(3，000rpm,10min)后收集血漿，在分析前于-80t:保存。利用COBASMiraS，按照廠商說明書測量氨、葡萄糖、乳酸鹽和脲。用熒光檢測的HPLC對氨基酸進行定量。結果與健康對照(25.6士2ymol/L，p<0.001，數據未顯示)相比，在硬變的膽管結扎的大鼠模型(205±11jimol/L，平均值士SEM)中，動脈血漿氨水平顯著升高。在該模型中，我們發現在鹽水治療的安慰劑組中，動脈氨水平在三小時內未改變。圖19表示BDL硬變大鼠在IP注射鹽水(BDL對照，n=5)、鳥氨酸(0rn,0.22g/Kg，n=6)、苯基丁酸(PB，0.3g/Kg，n=7)和鳥氨酸苯基丁酸(0P，0.22g/Kg+0.3g/Kg，n=7)后的動脈血漿氨水平的變化。*表明在3小時時0P與0rn比較p〈0.05(雙因素方差分析)。該圖表明，在鳥氨酸治療的動物中檢測到氨濃度有少許降低，但未發現它與安慰劑有差異。在苯基丁酸治療組中，發現在l小時后血漿氨顯著增加(與其他所有組相比，p<0.01)，但發現這種差異在3小時時間點時變小。此結果與苯基丁酸(苯基乙酸)只對谷氨酰胺濃度升高的患者有效的假說是吻合的。在未給予鳥氨酸(可代謝形成谷氨酰胺)的動物中，單純的P的作用是不想要的，也是潛在有害的。在鳥氨酸+苯基丁酸(0P)的治療組中，觀察到了氨水平的顯著降低。在這些動物中，測量到在研究的三小時內氨持續減少，在研究結束時發現其水平顯著低于單用鳥氨酸的組的水平(p<0.05)。上述結果清楚地證明了，在減少血漿氨方面，0P聯合比單用0或P效力更強。而且，單用P治療的動物中，升高的血漿氨水平可能是有害的。我們用一系列樣品對IP注射0或0P后鳥氨酸被吸收iiyV血流的情況進行了檢測。圖20表示補充組的動脈鳥氨酸濃度。可清楚地看出，IP注射后1小時時，兩組的血漿鳥氨酸濃度顯著升高，隨后又在3小時時降低，這是由于該鳥氨酸在體內被代謝。在任何時間點，均未發現這些組之間的血漿鳥氨酸濃度有顯著差異。這一發現很重要，因為它證實了選定的給藥方法可有效地在這些動物體內送遞鳥氨酸。而且，快速吸收和所觀察到的血漿中的水平降低表明該氨基酸正發生主動代謝。實施例14:鳥氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對膽管結扎的大鼠的作用方法在本方法中使用雄性SD大鼠(200-250g)。將動物處死前48hr時將給予動物的標準嚙齒動物食物轉換為完全液體食物(Liquidiet，Bio-Serv，FrenchtownNJ,USA),所述完全液體食物中加入了模擬血紅蛋白組合物的氨基酸混合物(2.8g/Kg，NutriciaCuijk，TheNetherlands,ProductNo.24143)。處死前24小時時，通過IP注射半乳糖胺(lg/Kg，Sigma,PooleUK)鹽水誘導急性肝衰竭(ALF)(每組n-5)。將動物處死前3小時時，用0IP(鳥氨酸0.22g/Kg，異亮氨酸0.25g/Kg,苯基丁酸0.3g/Kg，于鹽水中IP)制劑或者鹽水對照治療。在實驗終止時，將動脈血收集至預冷的肝素化試管中，在處理前置于水上保存。如上所述收集血漿并保存。如上所述測定氨。結果與安慰劑對照相比，OIP治療急性肝衰竭大鼠的動脈氨水平顯著下降(圖21)。本研究是為了測試異亮氨酸與鳥氨酸和苯基丁酸(苯基乙酸)聯合是否能有效減少血漿氨。先前已經在對人類的研究中證實，單用異亮氨酸并不影響氨水平，但它與0和P聯合的有效性之前并未測試過。圖21表示用鹽水安慰劑(ALF)和OIP治療(ALF+0IP)的高血氨急性肝衰竭模型中的動脈血漿氨水平。這兩組間存在p<0.01的顯著性水平(T檢驗)。該結果支持了異亮氨酸與鳥氨酸和苯基丁酸聯合可有效降低氨水平的假說。這是異亮氨酸除了前文所述的對于蛋白質合成的有益效果之外的又一有益效果。實施例15:鳥氨酸和苯基丁酸對血行阻斷的豬模型的作用方法將5頭豬隨機分為4組急性肝衰竭(ALF)+安慰劑+安慰劑(n=2)、ALF+鳥氨酸+安慰劑、ALF+苯基丁酸+安慰劑、ALF+鳥氨酸和苯基丁酸。將導管插入豬的股動脈和股靜脈、門靜脈、腎靜脈和肺動脈。在開始安慰劑或治療劑輸注前1小時時開始實驗。1.安慰劑3小時內輸注5%葡萄糖，口服水安慰劑2.單用鳥氨酸0.3g/Kg,5%葡萄糖，3小時內血管內滴注3.苯基丁酸0.3g/Kg，5%葡萄糖，3小時內胃內進食鳥氨酸+苯基丁酸0.3g/Kg，5%葡萄糖，3小時內血管內滴注，0.3g/Kg5%葡萄糖，3小時內胃內進食。通過在時間-0hr時的門靜脈與下腔靜脈的接合，以及隨后的肝動脈結扎(血行阻斷)來誘導ALF;時間=+2hr時停止輸注，時間=8hr時停止實驗。在時間-0、1、3、5、7和9hr時收集血樣和尿樣，以便測量局部氨和氨基酸的變化。在實驗結束時，取額皮質部分以測量腦積水。結果輸注鳥氨酸后產生細胞內谷氨酸以及同時胃內提供苯基乙酸的結果顯示，在該肝衰竭激變模型中，整體氨水平和對谷氨酰胺的利用情況明顯發生變化。安慰劑治療的動物中，自血行阻斷后，動脈氨濃度隨時間持續升高(圖22),其中有一些是肌肉產生的(圖23),而大量的氨則來自消化道(圖24)。該動物表明了肌肉釋放的谷氨酰胺較少(圖25)而通過消化道吸收的谷氨酰胺較顯著(圖26)。在單獨用鳥氨酸治療的動物中，早期的氨升高起初被抑制，但之后它在實驗結束時升至最高(圖22)。在該動物中，肌肉對氨為凈吸收(圖24)，與安慰劑治療的動物相比，從肌肉釋放的谷氨酰胺的量基本相當(圖25)，而消化道對谷氨酰胺的吸收增加(圖26)。單用苯基丁酸也表現出動脈氨水平的初始抑制，但該水平很快升至與單用鳥氨酸在實驗結束時的相當的水平(圖22)，并且肌肉對氨的吸收基本上無變化(圖23)，但消化道產生的氨較顯著(圖24)。有意思的是，與安慰劑治療的動物相比，單用苯基丁酸的治療中，肌肉對谷氨酰胺為凈移除，而該治療對消化道的谷氨酰胺的吸收無明顯影響(圖26)。鳥氨酸和苯基丁酸聯用對動脈氨水平影響最大，與所有其他動物相比，它使得在實驗結束時的循環水平顯著降低(圖22)。在該動物中，肌肉將氨從血液中主動去除，并且消化道產生的氨顯著減少(圖24)。有意思的是，注意到與安慰劑治療和單用鳥氨酸治療的動物相比，肌肉釋放的谷氨酰胺增加(圖25)。雖然在肌肉中產生的谷氨酰胺增多，但消化道對谷氨酰胺的吸收顯著減少(圖26)。如圖27所示，證實了在鳥氨酸治療的動物中，鳥氨酸的循環水平升高。血行阻斷和治療干預對動脈谷氨酰胺的影響如圖28所示。在鳥氨酸治療的動物中，谷氨酰胺的循環水平升高，這一現象可通過聯合給予苯基乙酸得到改善。一個有趣的發現是，在鳥氨酸和苯基丁酸聯合治療的動物中，動脈甘氨酸水平得到顯著改善(圖29)。在實驗結束時，取腦額皮質，并對腦積水含量進行測量(圖30)。一位獨立的病理學家對這些實驗動物的腦的細胞解剖學作了報道。對他的報道概括如下ALF:微血管血管周圍水腫，周圍有嚢泡。嚢泡周圍的神經元壞死性改變。ALF+0+P:微血管血管周圍水肺，周圍有嚢泡(較無任何治療ALF的程度輕)。細胞內水腫。假手術腦組織超微結構改變最小=正常腦組織。結論本發明人發現，對與慢性肝病相關的急性發病的一些癥狀的模擬例如提高氨濃度或模擬胃腸出血，可導致嗜中性粒細胞功能減弱，這種減弱可被鳥氨酸或異亮氨酸部分逆轉。通過鳥氨酸和異亮氨酸聯合對嗜中性粒細胞功能的補救在預防膿毒癥中具有重要作用，而所述膿毒癥是肝失代償進程中的常見促發因素。此外，發明人還發現，在模擬胃腸出血后，異亮氨酸對氨濃度的升高無影響。因此，氨水平不受影響的結果與下述假說相反，所述假說為在給予異亮氨酸后，由于刺激蛋白質合成，氨水平將降低。因此，聯合使用異亮氨酸和鳥氨酸是特別有利的，這種使用已知可降低氨水平。因此，給予鳥氨酸和異亮氨酸可防止胃腸出血在代謝上的后果。氨水平的升高被抑制，異亮氨酸的缺乏得到彌補，嗜中性粒細胞功能得到補救。因此聯合使用鳥氨酸和異亮氨酸提供了一種對促發事件后的患者進行治療的新方法以預防肝失代償的發生。發明人還發現，在肝性腦病患者中用來減少氨的L-鳥氨酸L-天冬氨酸(L0LA)，并不逆轉氨對嗜中性粒細胞功能的影響。因此，單用鳥氨酸比使用LOLA更為有利，因為鳥氨酸即可減少氨又可補救嗜中性粒細胞的功能。另外，LOLA的天冬氨酸組分也會在體內蓄積。天冬氨酸的這種蓄積實際上可能對患者是有害的，因為天冬氨酸使得氨對嗜中性粒細胞功能的影響惡化，進一步減弱嗜中性粒細胞的功能。因此，預防或延遲肝失代償的發作可通過聯合使用鳥氨酸和異亮氨酸來實現，優選地不給予天冬氨酸。另外，發明人還發現用L-鳥氨酸L-天冬氨酸(LOLA)治療肝性腦病(HE)患者，可降低氨水平，從而升高了谷氨酰胺水平。然而，谷氨酰胺只是暫時的氨緩沖劑，因為它可在腎和小腸中進行再循環并重新產生氨。因此單用LOLA治療可導致氨水平再次升高，進一步加重肝性腦病的病狀。對尿素循環障礙的兒童使用苯基乙酸或苯基丁酸可降低谷氨酰胺的異常高水平。相比而言，HE患者具有正常的谷氨酰胺水平，但除了如實施例l所示用LOLA對他們進行治療以外，所述LOLA降低氨水平但增高谷氨酰胺水平。因此使用苯基乙酸和/或苯基丁酸可去除谷氨酰胺，從而預防HE患者的氨水平再次升高。所以，可通過聯合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸，來實現對肝性腦病的改善性治療，優選地不給予天冬氨酸。我們在硬變動物模型以及硬變病人中的廣泛研究支持了這樣一種觀點，即硬變患者中清除氨的主要器官是肌肉，在將氨轉變為谷氨酰胺的反應中，利用了谷氨酸。在肝衰竭中，負責該反應的酶谷氨酰胺合成酶被誘導，谷氨酸的供應會增強氨解毒作用。谷氨酸的前體鳥氨酸，通過轉化成谷氨酰胺而對氨進行解毒。然而，我們的初步研究表明這種谷氨酰胺可使氨再循環和再生。我們的發明提供了一種新方法，該方法不僅對把氨轉化為谷氨酰胺進行解毒，還清除了產生的多余的谷氨酰胺。因此，OP比單用其中一種更為顯著地明顯減小硬變和高血氨患者的氨濃度。該作用顯然是協同作用而非加合作用。此外，餐后的氨增加可通過給予0P而消除。這就使得可向失代償的硬變患者提供富含蛋白質的膳食，且無高血氨風險。氨的減少與精神狀態的改善相關。它可通過防止谷氨酰胺的增加來減小氨濃度來實現。這與一種假說是一致的，所述假說即為在肌肉中鳥氨酸促使產生谷氨酰胺(由此捕獲一分子的氨)，但該谷氨酰胺被排出(可能以苯基乙酸的加合物形式)，以防止全身性的谷氨酰胺升高，由此防止了反彈性的高血氨。苯基乙酸使得在呈現出尿素循環障礙的高血氨嬰兒中的氨減少這一確證知識證實了氨被捕獲轉變成谷氨酰胺，谷氨酰胺被運至腎從而以苯基乙酸谷氨酰胺加成物形式排出。這些嬰兒表現出高血氨，并且很重要的一點是表現出高谷氨酰胺。相反，硬變患者表現出高血氨和正常至較低的谷氨酰胺。上述的豬模型在肝被隔離后谷氨酰胺未升高，而氨水平顯著增高。單用鳥氨酸治療可增加血液谷氨酰胺，而氨水平不受影響。單用苯基丁酸少量增加谷氨酰胺，并且對氨水平也沒有顯著影響。截然不同的是，在血氨升高的激變模型中，聯用鳥氨酸和苯基丁酸(0P)使得循環氨顯著減少，并改善了在單用鳥氨酸時所觀察到的谷氨酰胺的增加。甘氨酸一一一種產生氨的氨基酸一一在所有動物中均增加，但僅在0P治療的動物中，該氨基酸的增加基本上被抑制，由此顯示出這種形式的干預的額外益處。氨升高的確定后果為由于腦中水含量增加所引起的腦腫脹。來自單用鳥氨酸治療的豬的腦顯示，水含量顯著增加，而鳥氨酸和苯基丁酸聯合則減少腦的水含量。在組織學上，與安慰劑治療的動物相比，鳥氨酸和苯基丁酸聯合治療的動物的腦的顯微結構損傷比較不明顯。權利要求1.鳥氨酸在制備與苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種聯合使用以預防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物中的用途。2.苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種在制備與鳥氨酸聯合使用以預防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物中的用途。3.苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸在制備預防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物中的用途。4.前述權利要求任一項的用途，其中所述肝失代償為慢性肝病患者的肝失代償。5.前述權利要求任一項的用途，其中所述預防或治療包括延遲肝失代償的發病。6.前述權利要求任一項的用途，其中所述患者中存在或疑似存在促發事件。7.權利要求6的用途，其中所述促發事件為胃腸出血、感染、門靜脈血栓形成或脫水。8.權利要求6或7的用途，其中在檢測出所述促發事件或疑似促發事件的癥狀6小時內給藥。9.前述權利要求任一項的用途，其中對慢性肝病或急性肝衰竭患者治療肝性腦病。10.前述權利要求任一項的用途，其中所述鳥氨酸以游離的單體氨基酸或生理上可接受的鹽的形式存在。11.前述權利要求任一項的用途，其中所述苯基乙酸或苯基丁酸中的至少一種的存在形式為苯基乙酸鈉或苯基丁酸鈉。12.前述權利要求任一項的用途，其中所述藥物還含有異亮氨酸。13.權利要求12的用途，其中所述異亮氨酸以游離的單體氨基酸或生理上可接受的鹽的形式存在。14.前述權利要求任一項的用途，其中所述藥物基本上不含其他氨基酸。15.前述權利要求任一項的用途，其中所述藥物^:配制成用于靜脈內、腹膜內、胃內、血管內或口服給藥。16.含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸的產品，作為同時、分別或相繼使用以預防或治療肝失代償或肝性腦病的組合制劑。17.權利要求16的產品，所述產品還含有異亮氨酸。18.權利要求16或17的產品，所述產品基本上不含其他氨基酸。19.一種藥物組合物，所述藥物組合物含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸。20.權利要求19的藥物組合物，所述藥物組合物還含有異亮氨酸。21.權利要求19或20的藥物組合物，所述藥物組合物基本上不含其他氨基酸。22.權利要求19至21任一項的藥物組合物，在預防或治療肝失代償或肝性腦病的方法中使用所述藥物組合物。23.—種用于預防或治療肝失代償或肝性腦病的藥劑，所述藥劑含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸。24.權利要求23的藥劑，所述藥劑還含有異亮氨酸。25.—種治療患有肝失代償或肝性腦病或具有肝失代償或肝性腦病患病風險的患者的方法，所述方法包括向所述患者給予有效量的苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥氨酸。26.權利要求25的方法，所述方法還包括向所述患者給予有效量的異亮氨酸。27.權利要求26的方法，其中所述患者患有由胃腸出血造成的異亮氨酸缺乏。全文摘要本發明涉及鳥氨酸用于制備與苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種聯合使用以預防和治療肝失代償或肝性腦病的藥物的用途。本發明還涉及苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種用于制備與鳥氨酸聯合使用以預防和治療肝失代償或肝性腦病的藥物的用途。文檔編號A61K31/192GK101102816SQ200580046990公開日2008年1月9日申請日期2005年11月28日優先權日2004年11月26日發明者K·N·賈蘭,R·賈蘭申請人:Ucl商業有限公司