用于染色眼膜的染色組合物的制作方法

專利名稱：：用于染色眼膜的染色組合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及用于染色眼膜(ophthalmicmembrane)的染色組合物。更具體而言，本發明涉及作為佐劑用于染色眼膜，特別是用于摘除眼膜的染色組合物。
背景技術：
：內界膜(ILM)染色是用于諸如黃斑裂孔和視網膜前膜(ERMS)等玻璃體^見網膜疾病的外科手術的重要進展之一(Indocyaninegreen-assistedpeelingoftheretinalinternallimitingmembrane.BurkSE等.Ophthalmology.2000;107:2010-2014)。現在普遍認為，在不使用手術佐劑的情況下，由于ILM和ERMS的可視性較差，摘除眼膜是極其困難的。特別是，在各種玻璃體視網膜疾病中，吲哚菁綠(ICG)和臺盼藍(TB)染色非常有利于ILM和ERMS剝離，結果，該技術現在已經被許多外科醫生廣泛接受。然而，最近出現了大量關于在實驗和臨床應用中玻璃體內注射ICG和TB引起i見網膜損害的才艮道(Morphologicalandfunctionaldamageoftheretinacausedbyintravitreousindocyaninegreeninrateyes.EnaidaH，等.GraefesArchClinExpOphthalmol.2002;240:209-213;UemuraA，等.Visualfielddefectsafteruneventfulvitrectomyforepiretinalmembranewithindocyaninegreen-assistedinternallimitingmembranepeeling.AmJOphthalmol.2003;136:252-257;VeckeneerM，等.Oculartoxicitystudyoftrypanblueinjectedintothevitreouscavityofrabbiteyes.GraefesArchClinExpOphthalmol.2001;239:698-704)。此外，在白色的成熟白內障眼中進行連續曲線形撕嚢術(ccc)可能是挑戰性的，因為難以區分前嚢與下面的白色皮質。較差的前嚢可視性傾向于導致不完全的或不充分的ccc，這可能導致隨后的嚢撕裂、玻璃體損失和眼內晶狀體(IOL)脫位。為了在具有較差紅反射或沒有紅反射的白內障眼內進行CCC而眼內施用染沖牛進行前嚢染色已經越來越普遍。數據證明，嚢染色有利于ccc，甚至在未成熟白內障中也是如此，并且可以是實習外科醫生的有用輔助手段。已經使用0.1%和0.06%的臺盼藍進行了嚢染色，并且發現其在體內沒有明顯的毒性。但是，曾經報道在苛刻條件下臺盼藍在體外對角膜內皮有毒。p引咮菁綠(ICG)也是常用于嚢染色的染料。McEnerney和Peyman記載了應用ICG對兔角膜內皮進行細胞計數，并且提出該染料不損害活的內皮。但是，本發明人在2002年報道了ICG對視網膜細胞的潛在毒性，最近，在視網膜色素上皮細胞、神經節細胞和光感受器中報道了ICG的毒性。(Indocyaninegreeninducesapoptosisinhumanretinalpigmentepithelialcells.RezaiKA,等.AmJOphthalmol.2004;137:931-933;Trypanblueinducesapoptosisinhumanretinalpigmentepithelialcells.RezaiKA等.AmJOphthalmol.2004;138:492-495.)如上所述，常規用于染色眼膜，特別是內界膜和前嚢的染料(如IC或TB)已經產生了關于安全性的問題。由于對視網膜細胞的毒性、致畸性等的可能性的報道，產生了這些疑慮。此外，還存在諸如無法獲得較低濃度的令人滿意的染料和復雜的染色方法等技術問題。因此，這些問題^f吏得眼科手術更加困難。因此，為了促進眼科手術的改進，非常需要發展一種特異性地染色眼膜，并且具有在低濃度下高水平染色以及高水平安全性的目標的染料。
發明內容因此，本發明的一個目的是提供一種染色組合物，它是常規用于染色眼膜的染料的替代物。一個更詳細的目的是提供特別用于染色內界膜或前嚢的染色組合物，可用作摘除該膜的外科手術的佐劑。為了提供用于實現這些目的的染色組合物，使用了所有染料，包括當前尚未用于生物體的染料，然后在其中篩選候選染料。另外，作為篩選條件，特別注意安全性和染色親和力。然后使用大鼠對范圍縮小的候選染料進行安全性評價。根據較高的染色親和力和安全性，亮藍G(BBG)成為最終的候選物。進而，為了檢查含有BBG的染色組合物用于染色眼膜的最佳條件，進行了各種實驗。這樣，獲得了本發明的染色組合物。應當注意，BBG尚未在臨床上使用，特別是對于人類而言。但是，通過本發明的最佳條件，可以提供一種臨床應用安全的并且也具有高染色親和力的染色組合物。因此，根據本發明的第一主要方面，提供了一種含有BBG作為主要成分的染色組合物，用于在摘除眼膜時染色眼膜。也就是說，本發明的一個方面涉及一種當進行眼膜摘除時用于染色眼膜的染色組合物，其中該染色組合物包含亮藍G(BBG)衍生物、其藥學上可接受的鹽或其水合物作為主要成分。優選的BBG衍生物由通式[I]代表，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中，W代表Cw。烷氧基、氫原子、-OH、Cw。烷基、C2.K)烯基、C2_10炔基、被一個或兩個芳基取代的Cwo烷基、羥基Cwo烷基、卣代d.io烷氧基、或鹵代Cwo烷基，n代表1-5中的任一個，le和y相同或不同，各自代表氫原子、-OH、Cwo烷基、Cwo烯基、C2.H)炔基、被一個或兩個芳基取代的Cwo烷基、Cwo烷氧基、羥基C2.u)烷基、或鹵代Cwo烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、W和R"相同或不同，各自代表氫原子、-OH、Cwo烷基、C2.H)烯基、C2-H)炔基、^皮一個或兩個芳基取代的Cwo烷基、Cwo烷氧基、羥基Q.K)烷基、或囟代Cwo烷基，p、p，和p"相同或不同，各自代表1-4中的任一個，114和114'相同或不同，各自代表氫原子、-OH、Cwo烷基、Cwo烯基、C2.K)炔基、被一個或兩個芳基取代的Cw。烷基、Cwo烷氧基、羥基Cwo烷基、或卣代Cwo烷基，且R5代表氫原子、-OH、Cwo烷基、C2-K)烯基、CwQ炔基、被一個或兩個芳基取代的Cwo烷基、Cwo烷氧基、羥基Cwo烷基、或卣代Ci-io坑基。通式[I]代表的進一步優選的BBG衍生物是，Ri代表CL6烷氧基、氫原子、-OH、Cw烷基、<:2.6烯基、(:2.6炔基、被一個或兩個芳基取代的d，6烷基、羥基(:2.6烷基、囟代c^烷氧基、或卣代C^烷基，n代表l-5中的任一個，112和W相同或不同，各自代表氫原子、-OH、C^烷基、Cw烯基、C2-6炔基、被一個或兩個芳基取代的Cw烷基、d-6烷氧基、羥基C2-6烷基、或鹵代d-6烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、R3'和R3"相同或不同，各自代表氫原子、-OH、Cw烷基、C2_6烯基、C2-6炔基、被一個或兩個芳基取代的d-6烷基、d.s烷氧基、羥基Cw烷基、或卣代C^烷基，p、p'和p"相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R"和R^相同或不同，各自代表氫原子、-OH、d-6烷基、(:2_6烯基、C2—6炔基、被一個或兩個芳基取代的C^烷基、d-6烷氧基、羥基Cw烷基、或面代d-6烷基，且R5代表氫原子、-OH、d—6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、被一個或兩個芳基取代的Cw烷基、Cw烷氧基、羥基C2—6烷基、或面代烷基。優選的BBG衍生物由通式[II]代表，R4(R"m'叨基,其中，R^代表氫原子、-OH、d,6烷基、羥基C^6烷基、或卣代d-6烷n代表l-5中的任一個，z4戈表誦o-、-s-、-n=、-oc(-o)-或-c(-o)o-，Ra代表氫原子、-OH、Cw烷基、羥基C^烷基、或囟代d-6烷基，W和112'相同或不同，各自代表氫原子、-OH、C^烷基、Cw烷氧基、羥基C2-6烷基、囟代d-6烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、R3'和R3"相同或不同，各自代表氫原子、-OH、d-6烷基、d_6烷氧基、羥基C2-6烷基、或卣代d-6烷基，p、p，和p"相同或不同，各自代表1-4中的任一個，Rb和Re相同或不同，各自代表d-6烷基、Cw烷氧基、羥基C2.6烷基、或卣代C^烷基，114和114'相同或不同，各自代表氫原子或C^烷基，且RS代表氫原子、Cw烷基、或卣代C^烷基。優選地，在通式[II]中，Ri代表氫原子或Cw烷基，n代表1-5中的任一個，z代表-o-，Ra代表C^烷基，W和R"相同或不同，各自代表氫原子或d-6烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、W和R"代表氫原子，p、p'和p"代表4，Rb和Re相同或不同，各自代表CL6烷基，R"和W相同或不同，各自代表C^烷基，且RS代表氫原子、d-6烷基。優選的BBG衍生物由通式[III]代表，則<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中，Z代表-O曙、-S-、-N=、-OC(-O)誦或-C(-O)O-，Ra代表氫原子、-OH、d-6烷基、羥基C2-6烷基、或鹵代d-6烷基，Rb和Re相同或不同，各自代表d-6烷基、d-6烷氧基、羥基C2.6烷基、或囟代Cw烷基，且R"和R"'相同或不同，各自代表氫原子或d-6烷基。優選地，在通式[III]中，Z代表-O-，Ra代表C^烷基或卣代C^6烷基，Rb和RC相同或不同，各自代表CL6烷基或閨代CL6烷基，且R"和R"'相同或不同，各自代表d-6烷基。優選地，在通式[III]中，z代表-o-,Ra代表d-3烷基，Rb和RC相同或不同，各自代表Cw烷基，且114和114'相同或不同，各自代表Cw烷基。一種進一步優選的BBG衍生物、其藥學上可接受的鹽或其水合物是BBG染料。Cw。烷基意思是具有1-10個碳原子的直鏈烷基，具有3-10個碳原子的支鏈烷基，或具有3-10個碳原子的環烷基。直鏈烷基的例子包括曱基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。支鏈烷基的例子包括異丙基、異丁基、l-甲基丙基、叔丁基、1-曱基丁基、2-曱基丁基、3-甲基丁基、l-乙基丙基、l，l-二甲基丙基、2，2-二曱基丙基、1，2-二甲基丙基、l-曱基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-曱基戊基、l-乙基丁基、2-乙基丁基、1,1-二曱基丁基、1，2-二曱基丁基、1,3-二曱基丁基、2,2-二甲基丁基、2，3-二曱基丁基、3,3-二曱基丁基、5-甲基己基、3-乙基戊基、l-丙基丁基、1，4-二曱基戊基、3，4-二甲基戊基、1，2，3-三甲基丁基、1-異丙基丁基、4，4-二曱基戊基、5-甲基庚基、6-甲基庚基、4-乙基己基、2-丙基戊基、2,5-二甲基己基、4,5-二曱基己基、2-乙基-3-曱基戊基、1,2，4-三甲基戊基、2-曱基_1_異丙基丁基、3-甲基辛基、2，5-二甲基庚基、l-(l-曱基丙基)-2-曱基丁基、1，4，5-三曱基己基、1,2,3,4國四曱基戊基、7-甲基辛基、6-曱基壬基、8-甲基壬基、5-乙基-2-曱基庚基、2，3-二甲基-1-(1-甲基丙基)丁基、環丙基曱基、2-(環丙基)乙基、3，7-二曱基辛基、3-(環丁基)戊基、環戊基甲基和環己基曱基。環烷基的例子包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基和環辛基。在d.H)烷基中，優選C^烷基，進一步優選d-3烷基。Cw。烯基意思是具有2-10個碳原子并且具有至少一個雙^:的直鏈烯基，具有3-10個碳原子的支鏈烯基，或具有5-10個碳原子的環烯基，其例子包括乙烯基、烯丙基、3-丁烯基、4-戊烯基、5-己烯基、6-庚烯基、7-辛烯基、8-壬烯基、9-癸烯基、l-甲基-2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2-曱基-3-丁烯基、2-戊烯基、2-曱基-2-己烯基和2-環戊烯基。在C^。烯基中，優選(32.6烯基，進一步優選C2.3烯基。(:2_1()炔基意思是具有2-10個碳原子并且具有至少一個三4建的直鏈炔基，或具有4-10個碳原子的支鏈炔基，其例子包括2-丙炔基、3-丁炔基、4-戊炔基、5-己炔基、6-庚炔基、7-辛炔基、8-壬炔基、9-癸炔基、3-戊炔基和4-甲基-2-戊炔基。在Cwo炔基中，優選C2-6炔基，進一步優選C2.3炔基。被一個或兩個芳基取代的Cwo烷基意思是，例如，爺基、聯苯曱基、2-苯乙基、2-苯丙基、l-甲基-l-苯乙基、l-甲基-2-苯戊基、2-硝基節基、3-硝基節基、4-硝基節基、2,4-二硝基節基、2，4，6-三硝基爺基、2-苯基爺基、3-苯基爺基、4-苯基卡基、2-羥基爺基、基、4-羥基芐基、2-氯芐基、3-氯芐基、4-氯芐基、2-氟芐基、3-氟千基、4-氟芐基、2-溴芐基、3-溴芐基、4-溴芐基、2-碘芐基、2-碘爺基、2，3-二氯節基、2,4-二氯節基、2，5-二氯節基、2，6-二氯爺基、3，4-二氯芐基、3，5-二氯芐基、2-曱基芐基、3-曱基芐基、4-甲基芐基、2-乙基爺基、3-乙基節基、4-乙基爺基、2-異丙基千基、3-異丙基節基、4-異丙基芐基、2-曱氧基芐基、3-甲氧基芐基、4-甲氧基芐基、2,3-二甲氧基節基、2，4-二曱氧基爺基、2,5-二曱氧基爺基、2，6-二曱氧基芐基、3，4-二曱氧基芐基、3，5-二曱氧基芐基、2-乙氧基芐基、3畫乙氧基芐基、4-乙氧基芐基、2-異丙氧基芐基、3-異丙氧基芐基、4-異丙氧基節基、2-曱氧基甲基節基、3-甲氧基甲基千基、4-曱氧基曱基節基、2-異丙基曱基千基、3-異丙基曱基千基、4-異丙基曱基芐基、2-三氟甲基、3-三氟甲基、4-三氟甲基、2-羥基羰基節基、3-羥基羰基節基、4-羥基羰基卡基、2-氨基爺基、3-氨基節基、4-氨基節基、2-氨甲基芐基、3-氨曱基節基、4-氨甲基芐基、2-氰基芐基、3-氰基爺基、4-氰基千基、2-羥甲基芐基、3-羥甲基芐基、4-羥甲基芐基、2-苯氧基節基、3-苯氧基節基和4-苯氧基爺基。作為被一個或兩個芳基取代的Cwo烷基，優選d-6烷基，進一步優選d.3烷基。芳基意思是苯基、取代的苯基或多環芳基，如l-萘基或2-萘基。羥基Cw。烷基意思是被至少一個羥基取代的Cw。烷基，其例子包括2-羥基乙基、3-羥基丙基、4-羥基丁基、5-羥基戊基、6-羥基己基、7-羥基庚基、8-羥基辛基、9-羥基壬基、10-羥基癸基、2-羥基丙基、2，3-二羥基丙基和2-羥基-3-甲基丁基。在羥基C2-H)烷基中，優選羥基C^烷基，進一步優選羥基Cw烷基。鹵代d.H)烷基意思是被至少一個氟原子、氯原子、溴原子或碘原子取代的Cwo烷基，其例子包括2-氯乙基、2-溴乙基、2-碘乙基、3-氯丙基、3-溴丙基、3-碘丙基、4-氯丁基、4-溴丁基、4-碘丁基、5-氯戊基、6-氯己基、7-氯庚基、8-氯辛基、9-氯壬基、10-氯癸基、2-氯丙基、2-氯丁基、2，4-二氯丁基和2-氯-3-甲基丁基。在鹵代Cwo烷基中，優選鹵代C^6烷基，進一步優選卣代Cwo烷基。Cw。烷氧基d-H)烷基意思是被具有1-10個碳的直鏈烷氧基、具有3-10個碳的支鏈烷氧基或具有3-10個碳的環烷氧基取代的具有1-IO個碳原子的烷基，其例子包括2-曱氧基乙基、2-乙氧基乙基、2-丙氧基乙基、2-異丙氧基乙基、2-丁氧基乙基、2-異丁氧基乙基、2-叔-丁氧基乙基、2-戊氧基乙基、2-己烯基氧基乙基、3-乙氧基丙基、4-乙氧基丁基、4-乙氧基-3-甲氧基丁基和4-乙氧基-3-曱基戊基。在d.10烷氧基Cw。烷基中，優選d-6烷氧基Cw烷基，進一步優選Cw烷氧^Ci-3坑基。鹵代Cw。烷氧基意思是被至少一個氟原子、氯原子、溴原子或碘原子取代的d.H)烷氧基。在鹵代Cwo烷氧基中，優選卣代C^烷氧基，進一步優選囟代Cw烷氧基。體，^旦是本發明的BBG書f生物可以作為對映體或對映體混合物如外消旋體存在。因此，本發明的BBG衍生物包括上述通式[I]代表的BBG衍生物的所有旋光活性體、對映體混合物如外消旋體和非對映體混合物。藥學上可接受的鹽的例子包括用無機堿、氨、有機堿、無機酸、有機酸、堿性氨基酸、卣素離子等形成的鹽，和分子內鹽(innermolecularsalts)。無才幾石威的例子包^"堿金屬(例如Na、K)和堿土金屬(例如Ca、Mg)。有機堿的例子包括三曱胺、三乙胺、膽堿、普魯卡因、乙醇胺等。無機酸的例子包括鹽酸、氫溴酸、疏酸、硝酸和磷酸等。有機酸的例子包括對曱苯磺酸、甲磺酸、蟻酸、三氟乙酸和馬來酸等。堿性氨基酸的例子包括賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸、組氨酸等。該化合物可以是藥學上可接受的水合物。根據本發明的一個優選實施方案，所述染色組合物可以在與眼科疾病有關的眼科手術中用作手術佐劑，所述疾病如玻璃體視網膜疾病，如黃斑裂孔、hymyopic黃斑裂孔引起的視網膜剝離、視網膜前膜、增殖性糖尿病視網膜病、糖尿病黃斑水腫和增殖性玻璃體視網膜病變，和特定的白內障，如過熟白內障和先天性白內障，和分層(split-thickness)角膜移植等。根據本發明的染色組合物，能夠更清楚地顯示難以看到的眼膜，并且改善手術操作中的安全性。在本發明一個進一步優選的實施方案中，所述染色組合物可以用于染色眼膜，更優選地，用于染色內界膜和/或前嚢。在本發明一個優選實施方案中，期望本發明的染色組合物含有濃度為0.1-10mg/ml，優選濃度為0.1-1.0mg/ml,最優選濃度為0.1-0.25mg/ml的BBG衍生物。在該實施方案中，提供了在低濃度和少量時具有高染色親和力的染色組合物。此外，根據本發明的一個實施方案，染色組合物優選地具有298mOsm的環境滲透壓。根據該實施方案，本發明的染色組合物具有等于生理鹽水的滲透壓。因此，由于滲透壓不同而引起的任何問題都得到解決。在本發明的一個優選實施方案中，期望本發明的染色組合物顯示中性pH，即pH為pH=7.4左右。根據本發明的第二主要方面，提供了一種用于染色和摘除眼膜的方法，包括以下步驟制備含有BBG衍生物作為主要成分的染色組合物；用預定濃度的所述染色組合物染色眼膜；和摘除已染色的眼膜。在本發明的一個優選實施方案中，所述眼膜是內界膜和/或前嚢，但是并非限定于此。根據本發明的第三主要方面，提供了BBG衍生物在制備用于治療眼科疾病的染色組合物中的用途。此外，根據本發明的第四主要方面，提供了BBG衍生物作為眼科手術的手術佐劑的用途。本文提供的材料、方法和實施例只是說明性的，并非限制性的。通過以下詳細描述和權利要求，本發明的其他特征和優點將是顯而易見的。圖1示出了在14天顯示的玻璃體內注射BBG(10mg/ml，0.05ml/眼)的大鼠眼睛的光學顯微鏡照片。(原始放大倍數A:x200,B:x400)圖2示出了在14天顯示的玻璃體內注射BBG(10mg/ml和lmg/ml，0.05ml/眼)的大鼠眼睛的透射電子顯微鏡照片。(原始放大倍數x2000)圖3示出了顯示通過TUNEL才全測的凋亡細月包死亡的照片。(原始放大倍數x400)圖4示出了顯示大鼠眼中ERG的波形和最大幅度的圖。圖5示出了顯示在靈長類動物眼中BBG對ILM染色的照片。圖6示出了顯示用于MH的BBG輔助的ILM剝離的照片。圖7示出了顯示用于ERM的BBG輔助的膜剝離的照片。圖8示出了ILM的透射電子顯樣M竟照片。圖9示出了BBG嚢染色的代表性活組織顯微圖片。(原始放大倍數x4)。圖IO示出了前房注射染料后蘇木精和伊紅染色的角膜切片(原始放大倍數x權)。圖11示出了顯示通過TUNEL檢測的凋亡細胞死亡的照片。圖12示出了通過透射電子顯微鏡檢查顯示角膜細胞和膠原細胞基質的超微結構的照片。圖13示出了通過掃描電子顯微鏡檢查顯示角膜內皮細胞的超微結構的照片。圖14示出了顯示BBG輔助的CCC的照片。具體實施方式如前所述，評價集中于提供用于染色眼膜的染料，作為常規使用的染料如ICG或TB的替代物。因此，如下所述，組合了大量特征，獲得了具有高染色親和力和高水平安全性的染色組合物。本發明的一個方面涉及一種當進行眼膜摘除時用于染色眼膜的染色組合物，其中該染色組合物含有亮藍G(BBG)衍生物、其藥學上可接受的鹽或其水合物作為主要成分。優選的BBG衍生物由通式[I]代表，其中，W代表d.k)烷氧基、氫原子、-OH、Cw。烷基、Cwo烯基、C2-10炔基、被一個或兩個芳基取代的Cwo烷基、羥基Cwo烷基、卣代Cl10烷氧基、或鹵代Cwo烷基，n代表1-5中的任一個，r2和r2'相同或不同，各自代表氫原子、-oh、d.h)烷基、(:2-10烯基、C2.h)炔基、被一個或兩個芳基取代的Cw。烷基、Cwo烷氧基、羥基C2.10烷基、或鹵代Cwo烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、！13'和R"相同或不同，各自代表氫原子、-OH、Cwo烷基、C2.k)烯基、C2.k)炔基、被一個或兩個芳基取代的Cwo烷基、Cw()烷氧基、羥基Cwo烷基、或囟代Cwo烷基，p、p，和p"相同或不同，各自代表1-4中的任一個，r4和r4'相同或不同，各自代表氫原子、-oh、Cwo烷基、<:2_10烯基、C2.h)炔基、被一個或兩個芳基取代的Cw。烷基、Cwo烷氧基、羥基C2.h)烷基、或卣代Cwo烷基，且R5代表氫原子、-OH、Cwo烷基、C2.k)烯基、C2-h)炔基、被一個或兩個芳基取代的Cw。烷基、Cw。烷氧基、羥基Cw。烷基、或囟代C"io坑基o通式[i]代表的進一步優選的bbg衍生物是，Ri代表d-6烷氧基、氫原子、-oh、d-6烷基、(:2.6烯基、(:2.6炔基、被一個或兩個芳基取代的CL6烷基、羥基(:2.6烷基、卣代d.s烷氧基、或囟代CL6烷基，n代表l-5中的任一個，W和W相同或不同，各自代表氫原子、-OH、Cw烷基、(:2_6烯基、<:2.6炔基、被一個或兩個芳基取代的C^烷基、d—6烷氧基、羥基<:2.6烷基、或卣代c^烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、R3'和r3"相同或不同，各自代表氫原子、-OH、Cw烷基、C2.6烯基、C2，6炔基、被一個或兩個芳基取代的d.s烷基、d-6烷氧基、羥基Cw烷基、或卣代C^烷基，p、p'和p"相同或不同，各自代表l-4中的任一個，W和！^'相同或不同，各自代表氫原子、-OH、d-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、被一個或兩個芳基取代的Cw烷基、C^烷氧基、羥基Cw烷基、或卣代d-6烷基，且R5代表氫原子、-OH、d-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、被一個或兩個芳基取代的C"烷基、d—6烷氧基、羥基(32.6烷基、或鹵代烷基。優選的BBG衍生物由通式[II]代表，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>其中，W代表氫原子、-oh、d-6烷基、羥基(:2.6烷基、或卣代d.s烷基，n代表1-5中的任一個，Z代表-O-、-S-、-N=、-OC(-O)-或-C(-O)O-，Ra代表氫原子、-OH、CL6烷基、羥基(:2.6烷基、或卣代d，6烷基，W和R"相同或不同，各自代表氫原子、-OH、d-6烷基、C^烷氧基、羥基<:2.6烷基、卣代c^烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、R3'和R3"相同或不同，各自代表氫原子、-OH、d-6烷基、d.6烷氧基、羥基(:2-6烷基、或鹵代C^烷基，p、p，和p"相同或不同，各自代表1-4中的任一個，Rb和Re相同或不同，各自代表d一6烷基、d-6烷氧基、羥基C2.6烷基、或卣代C^6烷基，R"和W相同或不同，各自代表氫原子或C^烷基，且RS代表氫原子、C^烷基、或閨代C^烷基。優選地，在通式[II]中，R/代表氫原子或CL6烷基，n代表1-5中的任一個，Z代表國O-，Ra代表d-6烷基，re和ie'相同或不同，各自代表氫原子或C^烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、R3'和R3"代表氫原子，p、p'和p"代表4，Rb和Re相同或不同，各自代表d-6烷基，W和ir相同或不同，各自代表C^烷基，且Rs代表氫原子、C^烷基。優選的BBG衍生物由通式[III]代表，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>其中，z代表-o-、畫s-Ra代表氫原子則畫N-、-OC(-O)-或-C(K))O-,-OH、d-6烷基、羥基C2-6烷基、或面代d-6烷基，Rb和Re相同或不同，各自代表d-6烷基、C^烷氧基、羥基C^烷基、或囟代C^6烷基，且114和114'相同或不同，各自代表氫原子或d-6烷基。優選地，在通式[III]中，Z代表-O-，Ra代表d_6烷基或卣代C^6烷基，Rb和Re相同或不同，各自代表CM烷基或卣代CL6烷基，且!^和R"'相同或不同，各自代表d—6烷基。優選地，在通式[III]中，z代表-o-，Ra代表d.3烷基，Rb和Re相同或不同，各自代表Cw烷基，且114和114'相同或不同，各自代表Cw烷基。一種進一步優選的BBG衍生物、其藥學上可接受的鹽或其水合物是BBG染料。Cwo烷基意思是具有1-10個碳原子的直鏈烷基，具有3-10個碳原子的支鏈烷基，或具有3-10個碳原子的環烷基。直鏈烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。支鏈烷基的例子包括異丙基、異丁基、l-曱基丙基、叔丁基、1-曱基丁基、2-曱基丁基、3-曱基丁基、l-乙基丙基、1,1-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、l-曱基戊基、2-曱基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、l-乙基丁基、2-乙基丁基、l，l-二甲基丁基、1，2-二曱基丁基、1，3-二曱基丁基、2,2-二曱基丁基、2，3-二曱基丁基、3，3-二曱基丁基、5-甲基己基、3-乙基戊基、l-丙基丁基、1，4-二曱基戊基、3,4-二甲基戊基、1,2，3-三甲基丁基、1-異丙基丁基、4，4-二曱基戊基、5-甲基庚基、6-甲基庚基、4-乙基己基、2-丙基戊基、2，5-二曱基己基、4，5-二曱基己基、2-乙基-3-曱基戊基、1,2,4-三甲基戊基、2-曱基小異丙基丁基、3-曱基辛基、2，5-二甲基庚基、l-(l-曱基丙基)-2-曱基丁基、1，4，5-三曱基己基、1，2,3，4-四甲基戊基、7-甲基辛基、6-曱基壬基、8-甲基壬基、5-乙基-2-甲基庚基、2，3-二甲基-1-(1-曱基丙基)丁基、環丙基曱基、2-(環丙基)乙基、3，7-二曱基辛基、3-(環丁基)戊基、環戊基曱基和環己基甲基。環烷基的例子包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基和環辛基。在Cwo烷基中，優選d-6烷基，進一步優選d.3烷基。Cw。烯基意思是具有2-10個碳原子并且具有至少一個雙鍵的直鏈烯基，具有3-10個碳原子的支鏈烯基，或具有5-10個碳原子的環烯基，其例子包括乙烯基、烯丙基、3-丁烯基、4-戊烯基、5-己烯基、6-庚烯基、7-辛烯基、8-壬烯基、9-癸烯基、l-甲基-2-丁烯基、2-曱基-2-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、2-戊烯基、2-甲基-2-己烯基和2-環戊烯基。在C2.H)烯基中，優選(:2.6烯基，進一步優選Cw烯基。Cw。炔基意思是具有2-10個碳原子并且具有至少一個三鍵的直鏈炔基，或具有4-10個碳原子的支鏈炔基，其例子包括2-丙炔基、3-丁炔基、4-戊炔基、5-己炔基、6-庚炔基、7-辛炔基、8-壬炔基、9-癸炔基、3-戊炔基和4-曱基-2-戊炔基。在Cwo炔基中，優選C2-6炔基，進一步優選C2.3炔基。被一個或兩個芳基取代的d.H)烷基意思是，例如，節基、聯苯曱基、2-苯乙基、2-苯丙基、l-甲基-l-苯乙基、l-甲基-2-苯戊基、2-硝基節基、3-硝基節基、4-硝基爺基、2，4-二硝基節基、2，4，6-三硝基節基、2-苯基千基、3-苯基爺基、4-苯基節基、2-羥基節基、3-羥基節基、4-羥基芐基、2-氯芐基、3-氯芐基、4-氯芐基、2-氟芐基、3-氟芐基、4-氟芐基、2-溴芐基、3-溴芐基、4-溴千基、2-碘芐基、2-碘芐基、2，3-二氯千基、2，4-二氯節基、2,5-二氯千基、2，6-二氯千基、3,4-二氯芐基、3，5-二氯芐基、2-甲基芐基、3-甲基芐基、4-曱基芐基、2-乙基節基、3-乙基節基、4-乙基千基、2-異丙基節基、3-異丙基爺基、4-異丙基芐基、2-曱氧基芐基、3-甲氧基芐基、4-甲氧基芐基、2，3-二甲氧基節基、2,4-二曱氧基節基、2，5-二甲氧基節基、2，6-二曱氧基芐基、3，4-二曱氧基芐基、3，5-二甲氧基芐基、2-乙氧基芐基、3-乙氧基芐基、4-乙氧基芐基、2-異丙氧基芐基、3-異丙氧基芐基、4-異丙氧基節基、2-曱氧基甲基節基、3-甲氧基曱基節基、4-甲氧基甲基芐基、2-異丙基甲基芐基、3-異丙基甲基芐基、4-異丙基曱基芐基、2-三氟甲基、3-三氟曱基、4-三氟甲基、2-羥基羰基爺基、3-羥基羰基節基、4-羥基羰基卡基、2-氨基節基、3-氨基節基、4-氨基爺基、2-氨曱基芐基、3-氨曱基芐基、4-氨曱基芐基、2-氰基芐基、3-氰基爺基、4-氰基節基、2-羥甲基爺基、3-羥曱基千基、4-羥甲基節基、2-苯氧基爺基、3-苯氧基卡基和4-苯氧基節基。作為被一個或兩個芳基取代的Cw。烷基，優選CL6烷基，進一步優選d.3烷基。芳基意思是苯基、取代的苯基或多環芳基，如l-萘基或2-萘基。羥基C^。烷基意思是被至少一個羥基取代的C^。烷基，其例子包括2-羥基乙基、3-羥基丙基、4-羥基丁基、5-羥基戊基、6-羥基己基、7-羥基庚基、8-羥基辛基、9-羥基壬基、10-羥基癸基、2-羥基丙基、2,3-二羥基丙基和2-羥基-3-甲基丁基。在羥基Cwo烷基中，優選羥基(:2.6烷基，進一步優選羥基Cw烷基。囟代Cwo烷基意思是被至少一個氟原子、氯原子、溴原子或碘原子取代的Cwo烷基，其例子包括2-氯乙基、2-溴乙基、2-碘乙基、3-氯丙基、3-溴丙基、3-碘丙基、4-氯丁基、4-溴丁基、4-石典丁基、5-氯戊基、6-氯己基、7-氯庚基、8-氯辛基、9-氯壬基、10-氯癸基、2-氯丙基、2-氯丁基、2，4-二氯丁基和2-氯-3-甲基丁基。在鹵代Cwo烷基中，優選卣代C^烷基，進一步優選囟代Cwo烷基。Cwo烷氧基Cw。烷基意思是被具有1-10個碳的直鏈烷氧基、具有1-10個碳的支鏈烷氧基或具有3-10個碳的環烷氧基取代的具有1-IO個碳原子的烷基，其例子包括2-曱氧基乙基、2-乙氧基乙基、2-丙氧基乙基、2-異丙氧基乙基、2-丁氧基乙基、2-異丁氧基乙基、2-叔-丁氧基乙基、2-戊氧基乙基、2-己烯氧基乙基、3-乙氧基丙基、4-乙氧基丁基、4-乙氧基-3-曱氧基丁基和4-乙氧基-3-甲基戊基。在Cwo烷氧基Cwo烷基中，優選d-6烷氧基Cw烷基，進一步優選Cw烷氧基Ci-3坑基。卣代Cw。烷氧基意思是被至少一個氟原子、氯原子、溴原子或不典原子取代的Cwo烷氧基。在鹵代Cwo烷氧基中，優選鹵代Cw烷氧基，進一步優選囟代Cw烷氧基。但是本發明的BBG衍生物可以作為對映體或對映體混合物如外消凝:體存在。因此，本發明的BBG衍生物包括上述通式[I]代表的BBG衍生物的所有旋光體、對映體混合物如外消旋體和非對映體混合物。藥學上可接受的鹽的例子包括用無機堿、氨、有機堿、無機酸、有機酸、堿性氨基酸、卣素離子等形成的鹽，和內分子鹽(innermolecularsalts)。無機堿的例子包括堿金屬(例如Na、K)和堿土金屬(例如Ca、Mg)。有機堿的例子包括三甲胺、三乙胺、膽堿、普魯卡因、乙醇胺等。無機酸的例子包括鹽酸、氫溴酸、碌u酸、硝酸和磷酸等。有機酸的例子包括對甲苯磺酸、甲磺酸、蟻酸、三氟乙酸和馬來酸等。堿性氨基酸的例子包括賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸、組氨酸等。該化合物可以是藥學上可接受的水合物。本發明的BBG衍生物、其藥學上可接受的鹽或其水合物，特別是BBG，可以購買以及使用有機化學7>知常識制備。進一步地，可以通過美國專利No.6，057，160說明書中公開的方法制備，該文件在此引入作為參考。本發明的一個實施方案將用如下的實施例和附圖加以描述。首先，使用了所有染料，包括當前尚未用于生物體的染料，然后篩選候選染料。篩選出的染料是伊文思藍、酸性藍9、固綠、亮藍FCF、靛胭脂、甲基藍、亞甲基藍、亮藍G(BBG)。篩選條件特別集中于染色親和力和安全性。在一些先導候選物中，從候選物中除去顯示優良的安全性但是不能染色目標的那些，或者相反，顯示良好的染色但是對視網膜有毒性的那些。然后使用大鼠對范圍縮小的候選染料進行安全性評價，并根據較好的染色親和力和安全性，BBG成為最終的候選物。下面詳細敘述了BBG成為本發明的最終候選物的原因。首先，與ICG相比，BBG染色的質量非常相似，并且能夠在極低濃度(l/10-l/20)時染色目標。甚至在檢查仍保留在眼內的極高濃度的溶液時，也沒有證明對眼睛有明顯毒性的觀點。另外，由于BBG(不同于ICG)不是焚光染料，因此認為幾乎不存在因眼內高照度照明而發生的對視網膜的光毒性。而且，與ICG相比，清洗后該染料在組織表面上的存留極少。再者，由于BBG是冷色型染料，而眼內組織是暖色型，可以突出染料的對比。其次，為了評價含有BBG的染色組合物用于染色眼膜的最佳條件，進行了各種實驗。而且，迄今為止BBG尚未在臨床上使用，特別是對于人類而言。但是，通過本發明的最佳條件，可以提供在臨床應用上既安全又具有高染色親和力的染色組合物。因此，根據本發明的第一主要方面，提供了一種含有BBG衍生物作為主要成分的染色組合物，用于在摘除眼膜時染色眼膜。根據本發明的一個優選實施方案，所述染色組合物可以在與眼科疾病有關的眼科手術中用作手術佐劑，所述疾病如玻璃體視網膜疾病，如黃斑裂孔、hymyopic黃斑裂孔引起的視網膜剝離、視網膜前膜、增殖性糖尿病視網膜病、糖尿病黃斑水腫和增殖性玻璃體視網膜病變，特定的白內障，如過熟白內障和先天性白內障和分層角膜移植等。根據本發明的染色組合物，能夠更清楚地顯示難以看到的眼膜，并且改善手術梯:作過程中的安全性。在本發明一個進一步優選的實施方案中，所述染色組合物可以用于染色眼膜，更優選地，用于染色內界膜和/或前嚢。另外，根據本發明的一個實施方案，本發明的染色組合物可以與藥學上可接受的載體組合。其可以制備為具有溶解溶液和藥物粉末的組合的形式，或作為充滿注射器容器的溶液，以及當與透明質酸組合時為凝膠態溶液的形式。最優選地，其制備為溶液形式，但并不需要限定于此。在本發明的一個實施方案中，所述染色組合物制備為藥學上可接受的溶液，但是不必限定于此。這是由于BBG的質量，其可以直接并且容易地溶解在眼內清洗溶液中，并且能夠用注射器式濾器除菌。此外，根據本發明的一個實施方案，所述染色組合物制備為溶液，其中該染色組合物溶解在眼內灌洗液、平衡鹽溶液(BSS)、生理鹽7K溶液，或最優選;也，OPEGUARD曙MA(SenjyuPharmaceuticalCo.，Ltd.，Osaka,日本)中，OPEGUARD-MA是一種眼內灌洗液(眼內清洗溶液)。但是，并不需要限定于這種形式。在本發明的一個優選實施方案中，所述染色組合物含有濃度為0.1-10mg/ml,優選濃度為0.1-1.0mg/ml，最優選濃度為0.1-0.25mg/ml的BBG。在本發明的一個實施例中，在所述染色組合物中，染色靈長類動物的ILM所需的BBG的濃度與ICG相比約為1/10。另夕卜，為了染色前嚢，所述染色組合物內的BBG在0.25mg/ml的低濃度下可以提供令人滿意的染色，與其相比，ICG需要5mg/ml，TB需要lmg/ml。換句話說，根據該實施方案，可以提供在低濃度和少量時具有高染色親和力的染色組合物。此外，根據本發明的一個實施方案，染色組合物優選地具有298mOsm的環境滲透壓。根據該實施方案，本發明的染色組合物具有等于生理鹽水溶液的滲透壓。以前報道在視網膜色素上皮細胞中使用ICG的缺陷可能是由于其溶液的低摩爾滲透壓濃度。關于這一點，本發明一個實施方案的染色組合物具有出色的效果，因為視網膜色素上皮細胞處滲透壓差異引起的缺陷——這是與細胞腫大或脫水(如細胞忽略或細胞死亡)有關的組織紊亂——沒有發生。在本發明的一個優選實施方案中，期望本發明的染色組合物顯示中性pH，即pH為pH=7.4左右。根據本發明的第二主要方面，提供了用于染色和摘除眼膜的方法，包括以下步驟制備含有BBG衍生物作為主要成分的染色組合物；用預定濃度的所述染色組合物染色眼膜；和摘除已染色的眼膜。對于本發明的一個優選實施方案，所述染色眼膜的方法可以使用本領域技術人員容易理解的方法，例如，注射、輸注、灌洗、確認和剝離，在本發明的一個實施例中，優選地所述染色眼膜的方法包括注射所述染色組合物。對于該實施例，另外的一個步驟如液體-氣體交換不是必需的，而該步驟在對眼膜應用TB時是必需的。作為一個例子，能夠僅在眼科手術期間使用時染色。根據本發明的第三主要方面，提供了BBG衍生物在制備用于治療眼科疾病的染色組合物中的用途。此外，根據本發明的第四主要方面，提供了BBG衍生物作為用于眼科手術的手術佐劑的用途。而且，在本發明的一個實施方案中，所述染色組合物和/或使用它的染色方法可以適當地作為眼科手術的一部分使用。根據本發明的一個優選實施方案，所述眼科手術是用于治療如下疾病的手術黃斑裂孔、hymyopic黃斑裂孔引起的視網膜剝離、視網膜前膜、增殖性糖尿病視網膜病、糖尿病黃斑水肺和增殖性玻璃體視網膜病變，特定的白內障，如過熟白內障和先天性白內障，和分層角膜移植等，最優選玻璃體視網膜疾病(特別是黃斑裂孔或視網膜前膜(ERMS))和白內障。此外，本發明的一個優選實施方案是，對哺乳動物的眼睛，更優選地對人眼實施所述眼科手術。提供下列實施例是為了更詳細地闡述本發明。它們只是用于說明，而不是限制本發明。實施例1集中于安全性和染色膜的能力篩選各種染料作為候選物為了提供能夠實現這些目的的染色組合物，使用了所有染料，包括當前尚未用于生物體的染料，然后對從中篩選候選染料。篩選出的染料是伊文思藍、酸性藍9、固綠、亮藍FCF、靛胭脂、曱基藍、亞甲基藍、亮藍G(BBG)。另外，作為篩選條件，特別注意安全性和染色親和力。在一些先導候選物中，從候選物中除去顯示優良的安全性但是不能染色目標的那些，或者相反，顯示良好的染色但是對視網膜有毒性的那些。然后使用大鼠對范圍縮小的候選染料進行安全性評價。根據較高的染色親和力和安全性，BBG成為最終的候選物。然后，為了檢查含有BBG的染色組合物用于染色眼膜的最佳條件，進行了各種實驗。這樣，獲得了本發明的染色組合物。實施例22.玻璃體內BBG對視網膜的影響覺研究中使用動物的聲明和日本福岡九州大學的動物保護指南。2.1BBG溶液的表征BBG也被稱為酸性藍90和考馬斯亮藍G。除了我們以前的出版物以外，還沒有關于研究BBG在眼科應用中的毒性的報道。表1顯示了不同濃度的BBG溶液的摩爾滲透壓濃度和pH。發現BBG的摩爾滲透壓濃度和pH類似于眼內灌洗液。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>對照顯示OPEGUARD-MA。2.2.在大鼠眼內進行玻璃體內BBG的手術操作褐色挪威大鼠(BrownNorwayrat)(n=78，雄性，8周齡，Kyudo，福岡，日本)通過腹膜內注射劑量為75mg/kg體重的鹽酸氯胺酮進行麻醉。如以前所述，用0.05ml純SF6氣體對每只動物的一只眼(每劑量組總共n=6只)進行玻璃體切割。氣體注射后，在手術過程中使用顯微鏡進行增強放大，向每只玻璃體切割后的眼睛的玻璃體腔內注射0.05ml的BBG溶液。通過在眼內灌洗液(OPEGUARD(注冊商標)-MA，SenjyuPharmaceuticalCo.Ltd.,Osaka,日本)中稀釋，將BBG溶液(亮藍G,考馬斯(注冊商標)亮藍G250;Signa-Aldrich,St丄ouis,USA)制備為0.01、0.1、1.0和1Omg/ml的濃度，并且通過0.22pm注射器式濾器除菌。使用滲透壓計(OSMOSTATION,Arkray，Kyoto,日本)測定平均摩爾滲透壓濃度，并測量制備的所有濃度的每種溶液的pH(表1)。根據用于人的玻璃體切割術使用的ICG溶液(2.5-5.0mg/ml)確定終濃度，以給大鼠提供產生良好染色的安全劑量的BBG。使用24只假手術的眼(注射SF6,然后0.05ml眼內灌洗液)作為對照。2.3.光學顯微鏡檢查在手術后第14天(n=30;每個劑量組和對照6只)和2個月(n=30;每個劑量組和對照6只)摘取眼睛，在10%多聚甲醛中固定。整個眼睛大致沿垂直經線切開。石蠟包埋的切片用蘇木精-伊紅(HE)染色，并用光學顯微鏡檢查每個切片。玻璃體內注射BBG后，在2個月的時間里通過外科顯微鏡^r查未觀察到BBG的毒性作用，如角膜水腫、重度視網膜水腫或眼內炎。在手術后第14天和2個月時摘取眼睛。在第14天和2個月時觀察到注射最高劑量BBG(10mg/ml)的眼睛保持正常的視網膜結構。另外，未觀察到炎癥細胞的浸潤(圖1,第14天)。第14天或2個月時，注射較低劑量BBG的組也保持正常的視網膜結構，在切片中未觀察到細胞變性的跡象。2.4.透射電子顯微術(TEM)在手術后第14天和2個月時摘取眼睛，并在1%戊二醛和1%多聚曱醛的PBS溶液中固定。標本在乙酸巴比妥緩沖液四氧化鋨(2%)中后固定，在乙醇和水中脫水，并包埋在Epon中。由包埋塊切成超薄切片，并放置在銅載網上。用JEM100CX電子顯微鏡(JEOL，Tokyo)觀察標本。注射最高劑量BBG(10mg/ml)的一些標本在第14天(圖2A,第14天)和2個月時在神經纖維的神經節細胞和MUller細胞中顯示空泡化。盡管在注射lmg/mlBBG的組中也觀察到相同的改變，但是空泡化等級低于10mg/ml組(圖2B)。在接受較低劑量的組或對照組中未觀察到空泡化。在所有組之間，視網膜，包括內核、外核和視網膜色素上皮細胞層，均未觀察到明顯改變。2.5.TdT-dUTP末端缺口-末端標記(TUNEL)使用如以前所述的TdT-dUTP末端缺口-末端標記(TUNEL)檢測凋亡細胞死亡。利用恒冷切片機由在4%多聚甲醛中固定并且包埋在石蠟中的樣品制備4pm的切片。用ApopTag熒光素直接原位凋亡檢測試劑盒(IntergenCompany,NewYork,USA)按照廠商方案進行TUNEL染色。切片用碘化丙錠(MolecularProbes,Eugene,OR,USA)共染色，從而允許用熒光顯微鏡(01ympus，Tokyo)觀察細胞核。每個眼標本隨機選擇10個切片，用顯微鏡進行觀察。在施用最高劑量BBG(10mg/ml)的組中，在10個切片中觀察到一例凋亡細胞死亡。但是，凋亡細胞比率與對照切片相比沒有顯著的不同(圖3，第14天)。在注射較低劑量BBG的組中，在第14天在視網膜中未觀察到TUNEL染色。而且，所有BBG劑量組中的視網膜細胞在2個月后都不經歷凋亡細胞死亡。2.6.視網膜電描記術在氣體注射后，向玻璃體腔內注射0.05m舊BG溶液(lmg/ml和10mg/ml)或眼內灌洗液。每個劑量組有6只大鼠，并且有6只對照。測定前證實所有大鼠都沒有白內障。在14天的時間點時，以及在2個月后，將大鼠放置在只有微弱的紅光照明的暗室中一夜，并通過腹膜內注射15jxl/g體重的含氯胺酮(lmg/ml)、賽拉。秦(0.4mg/ml)和烏拉坦(40mg/ml)的鹽水溶液麻醉。然后如以前所述進行;現網膜電描記術(ERG)。用2.5%去氧腎上腺素HC1和1%托吡卡胺滴劑擴大瞳孔，在ERG記錄前顯示最大擴大。角膜用1%丙美卡因HC1滴劑麻醉，然后在整個實驗過程中將大鼠置于加熱墊上。將涂覆有1%甲基纖維素的線電極放置在角膜上記錄ERG。放置在口中的類似的線電極用作參比電極，而插入尾內的針電極接地。將響應差異放大(0.8-l，200Hz)，平均，用計算機存儲。針對消色差適應場(achromaticadaptingfield),Ganzfeld刺激器(VPA畫10;Cadwell，Kennewick，Washington，USA)中具有白色(氙)閘門閃光器(strobeflash)。首先記錄暗適應(視桿介導的)ERG以檢查在兩個強度下的反應穩定性。然后使每只大鼠適應暗背景亮度20分鐘，這是足以達到穩定反應水平的時間段。之后，在1.30logcdsec/m2的閃爍照明下激發暗適應a(視桿介導的)和暗適應b(雙極和Miiller-介導的)ERG。然后對刺激間期為1分鐘的5次連續閃光的響應進行平均，以確定暗適應響應。大鼠然后暴露于白光適應場(1.50logcd/m2)至少25分鐘，然后以1.30logcdsec/m2的閃爍照明(大鼠中的視桿脫敏條件)激發光適應b(視錐介導的)ERG。將對2Hz下進行的50次連續閃光的響應進行平均。用Studentt檢驗評價ERG幅度的結果，p值O.05認為具有統計學顯著性差異。圖4A表示第14天對照組和高劑量組的響應的暗適應和光適應ERG波型。在實驗開始時獲得的暗適應響應的幅度顯示低組間變異性。盡管在高劑量組中觀察到第14天的暗適應a波(圖4B，第14天)的平均最大幅度以劑量依賴的方式輕微減少，但是與對照相比，最大波幅沒有顯著性差異(10mg/ml:p-0.054和1.0mg/ml:p=0.063;t檢驗)。而且，暗適應b波(10mg/ml:p二0.553和1.0mg/ml:p=0.508;t檢驗)和光適應b波ERG(10mg/ml:p-0.451和1.0mg/ml:p-0.550;t檢驗)證明沒有明顯減少，幅度之間沒有統計學顯著性差異(圖4B，第14天)。2個月后，記錄相同劑量組(1.0mg/ml和10mg/ml)中的ERG,發現暗適應a波幅的減少以類似于對照組的方式恢復。2.7.靈長動物眼中使用BBG的ILM染色由于ILM剝離在大鼠眼中是不可能的，本發明人研究了BBG染色靈長動物眼中ILM的能力。在該研究中使用兩只3歲短尾猴的兩只眼睛。將動物限制在籠子中，向大腿內肌肉注射20mg/kg鹽酸氯胺酮(SankyoYellPharmaceuticalProductsCo.Ltd.，曰本)進行全身麻醉。然后將猴子轉移到手術室。手術包括標準的三孔睫狀環玻璃體切割術(threeportparsplanavitrectomy)，通過用3皮璃體切割器才由吸i秀導J皮璃體后部脫離，使用曲安奈德注射液進行玻璃體顯示。將10毫克BBG溶解在20ml眼內灌洗液中，4吏用注射器式濾器除菌。BBG的終濃度為0.5mg/ml。然后將制備的BBG溶液(0.5ml)輕輕注射到玻璃體腔內，并立即用平衡鹽溶液(BSSplus(注冊商標)，Santen，Osaka，日本)洗出。使用ILM鑷子進行ILM的摘除。然后取出工具，用7-0polygalatin縫合線縫合鞏膜切孔。術后檢查包括在第1、3、14天的裂隙燈顯微鏡檢查和檢眼鏡檢查。在第14天行焚光素血管造影術。灌洗玻璃體腔后，ILM染色為淡藍色。在ILM剝離過程中，ILM的邊緣和瓣清晰可見(圖5A)。在ILM剝離后ILM下面的圓形區域清晰可見(圖5B)。手術后第14天在裂隙燈顯微鏡檢查和檢眼鏡檢查中沒有觀察到BBG的毒性作用，如角膜水腫、重度視網膜水腫和眼內炎。熒光素血管造影術也顯示在第14天BBG沒有明顯的視網膜損害(圖5C)。進一步的檢眼鏡檢查顯示在6個月的隨訪期間視網膜沒有進一步的改變。實施例33.BBG作為用于膜剝離的潛在染色溶液的介入臨床病例系列在各種玻璃體視網膜疾病中，吲哚菁綠(ICG)和臺盼藍(TB)染色非常有利于ILM的剝離。但是，最近出現了大量關于在實驗和臨床應用中ICG和TB引起的視網膜損害的報道。根據臨床前研究，選擇BBG作為ILM染色的候選染料。這顯然是BBG在人眼中的第一次臨床研究。這是BBG在人眼中第一次已知的臨床研究。3丄BBG在ILM染色中的應用以及在人眼中的效果和安全性(第一次嘗試)在2004年8月至9月之間，從九州大學醫院(福岡，日本)的門診招募了16名黃斑裂孔(MH)和視網膜前膜(ERMS)患者，16只眼睛。排除了諸如青光眼、眼色素層炎和角膜異常等眼科疾病患者。患者的特征在表1中示出。該研究在適宜的機構倫理委員會的批準下實施，并且按照1989年赫爾辛基宣言制定的倫理學標準進行。在手術前向患者解釋了該治療可能的優點和危險，并且獲得所有患者的知情同意。手術包括三孔睫狀環玻璃體切割術，通過用玻璃體切割器抽吸誘導玻璃體后部脫離，使用曲安西龍。20毫克BBG(亮藍G250;Signa-Aldrich，St丄ouis，USA)溶解于10ml眼內灌洗液(OPEGUARD(注冊商標)畫MA，SenjyuPharmaceuticalCo.,Ltd.,Osaka,日本)中，4吏用注射器式濾器(Minisart(注冊商標)SartoriusAG，Goettingen，德國)除菌。BBG的終濃度為0.25mg/ml。然后將制備的0.5ml的BBG溶液(289mOsm,pH-7.44)輕輕注射到玻璃體腔內，并立即用平衡鹽溶液(BSSplus(注冊商標)，Santen，Osaka，日本)洗出。ILM染色為淡藍色。使用ILM鑷子(D.O.R.C.;DutchOphthalmicResearchCenterInternationalb.v.，荷蘭)進行ILM的摘除。但是，在該濃度時可能無法證實ERMS的染色。術后檢查包括裂隙燈顯微鏡檢查、檢眼鏡檢查、最佳矯正視力(BCVA)和眼內壓。2個月后用Humphrey3見野分析4義II(HumphreySystems,Dublin,California,USA)評價視野。手術操作完全成功。所有病例的視力均恢復。沒有患者的眼內壓升高。未觀察到視野強度的明顯減少和缺陷。在觀察期內沒有觀察到BBG引起的其他副作用(表2)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>表2中的縮寫MH:黃斑裂孔,ERM:視網膜外層膜，BCYA:最佳矯正視力，preop.:手術前，postop.:手術后，IOL:眼內晶狀體，IOP:眼內壓,VF:視野3.2.BBG在ILM染色中的應用以及在人眼中的效果和安全性(第二次嘗試)本發明人繼續研究了臨床病例，獲得如下結果。在2004年8月至9月之間，對表現為黃斑裂孔(MH:IO名患者的IO只眼；5名男性，5名女性)或視網膜前膜(ERM:IO名患者的10只眼；5名男性，5名女性)的20名連續患者的20只眼睛進行玻璃體切割術，使用BBG染色溶液，摘除膜。排除諸如青光眼、糖尿病性3見網膜病、眼色素層炎和角膜疾病等眼科疾病患者。患者年齡的平均值±SD為67±11.9歲，范圍為33至85歲。平均隨訪期為7.3±1.0個月。患者詳情在表3和表4中列出。手術前和手術后眼科檢查包括裂隙燈顯微鏡檢查、檢眼鏡檢查、最佳矯正視力(BCVA)和眼內壓(IOP)。MH的閉合和中心凹厚度的測量(ERM病例)通過光學相干性斷層才聶影術(OCT3:HumphreyInstruments,SanLeandro,CA,USA)確定。平均中心凹厚度由總共4次掃描計算得出。從4只眼(2只眼來自MH患者，2只眼來自ERM患者)上切下的標本進行透射電子顯微鏡檢查，以證實ILM的存在。標本在乙酸巴比妥緩沖液四氧化鋨(2%)中后固定，在乙醇和水中脫水，并包埋在Epon中。從包埋塊切成超薄切片，并固定在銅載網上。用JEM100CX電子顯微鏡(JEOL，Tokyo)觀察標本。該研究在機構審查委員會的批準下進行，并且按照1989年赫爾辛基宣言制定的倫理學標準進行。在手術前向患者解釋了該治療的可能的優點和危險，并且獲得書面知情同意。需要時進行標準晶狀體乳化法。手術包括三孔睫狀環玻璃體切割術，通過用玻璃體切割器抽吸誘導玻璃體后部脫離(PVD),需要時<吏用曲安奈德注射'液(Kenakolt-A⑧BristolPharmaceuticalsKK,Tokyo,日本)。將BBG(亮藍G250;Sigma-Aldrich，St.Louis,USA)溶解于眼內灌洗液(OPEGUARD⑧-MA，SenjyuPharmaceuticalCo.Ltd.,Osaka,日本)中。使溶液通過0.22nm注射器式濾器除菌。BBG的終濃度為0.25mg/ml(289mOsm，pH=7.44)。然后將制備的BBG溶液(0.5ml)輕輕注射到玻璃體腔內(圖6A),并立即用平衡鹽溶液(BSSplus(注冊商標)，Santen，Osaka,日本)洗出。在MH病例中，ILM立即染色成淡藍色。使用ILM鑷子進行ILM的摘除(圖6B，C)。摘除ILM后，已經除去ILM的區域和周圍區域之間視網膜表面顏色的差異清晰可現(圖6D)。但是在ERM病例中，ERM的染色在該濃度可能無法證實(圖7A)。ERM剝離后(圖7B)，再次注射BBG溶液，然后立即灌洗玻璃體腔。已經除去ERM的區域的ILM被BBG良好染色(圖7C)。但是，仍有殘余ERM和后部玻璃體的區域沒有染色。良好染色的ILM可以與未染色的殘余ERM和后部玻璃體^皮容易地去除(圖7D)。最后，在所有病例中插入眼內晶狀體，在MH病例中，進行液體-氣體交換，并且置換為15%的六氟化硫氣體。建議患者保持臉朝下位一周。在手術過程中成功地從所有20只眼睛中摘除包括ERM的ILM。透射電子顯微鏡檢查證實在所有處理的標本中存在ILM(r^4)(圖8)。手術后，到第14天，通過裂隙燈顯微鏡檢查和檢眼鏡檢查，沒有觀察到BBG注射誘導的任何急性毒性，如角膜水腫、重度視網膜水腫和重度眼內炎癥，如眼內炎。根據檢眼鏡檢查和OCT檢查，所有MH病例在解剖學上完全閉合。手術前BCVA中值為20/100(范圍20/200-20/50)。手術后BCVA中值為20/32(范圍20/200-20/20)。有9只眼睛(90%)的視力改善了2斯內倫行或更多，而有l只眼沒有變化。在兩個病例中，并發癥包括醫源性周圍視網膜斷裂，這在手術期內通過眼內激光光凝固法得到治療。只有1例MH的IOP在6個月后升高(26mmHg),并用拉坦前列素治療(表3)。在ERM手術病例中，用OCT測量的視網膜中心凹厚度的平均值從454.7士141.3(xm(手術前)降至249.4士71.3[im(手術后)。在ERM病例中，手術后BCVA(20/100-20/12.5;中值20/32)好于手術前BCVA(20/100-20/40;中值:20/50)(表4)。8名患者(80%)在斯內倫視力表上提高了2行或更多，而另兩名患者的BCVA保持不變或提高了1行。唯一的并發癥是在一例中有玻璃體出血的延長，在觀察后吸收。在所有病例的隨訪期中沒有觀察到其它副作用，如視網膜色素上皮(RPE)萎縮。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表3的縮寫<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>表4的縮寫ERM:視網膜外層膜,MH:黃斑裂孔，BCVA:最佳校正視力,preop.:手術前，postop.:手術后,IOL:眼內晶狀體，IOP:眼內壓實施例44.BBG的生物相容性BBG作為嚢染色輔助劑的臨床前研究4丄BBG的嚢染色能力使用染料的分級濃度在豬眼中評價BBG的嚢染色能力。豬眼從當地的屠宰場獲得，并且在冰上運至實-瞼室。仔細切除眼外肌和其他結締組織，將眼睛置于手術容器上。使用如下方法制備BBG溶液。20毫克BBG(考馬斯亮藍G250;Signa-Aldrich，St丄ouis,USA)溶解在10ml眼內灌洗液(OPEGUARD,MA,SenjyuPharmaceuticalCo.，Ltd.，Osaka,日本)中，并用注射器式濾器(Minisart.SartoriusAG，Goettingen，德國)除菌。在手術顯孩M竟下，如下檢查使用BBG的嚢染色。用安在注射器上的26號針頭通過透明的角膜進入前房。通過經由相同入口進入的26號針頭將BBG注射到前嚢上(IO、1、0.5、0.25、0.1和0.01mg/ml)。立即用增強的平衡鹽溶液(BSSPlus，SantenPharmaceuticals,日本)灌洗前房，過量的染料容易被洗掉。為了加深前房，注射1%透明質酸鈉(Healon,Pharmacia,Uppsala,瑞典)。通過用安在粘彈性注射器上的26號一次性彎針頭制備小三角形前嚢瓣開始CCC。使用截嚢刀或撕嚢術鑷子完成CCC。染料均勻地染色前嚢，CCC的邊緣在手術顯^t鏡下可清楚地識別。當染料濃度提高時(從0.25mg/ml至lmg/ml,圖9)，染色加深。發現產生清楚顯色的高質量染色所需的最小濃度為0.25mg/ml(圖9,右上)。在0.1mg/ml和0.01mg/ml時，嚢染色不清楚，使用該染料未發現優點(圖9，左中和左下)。前房注射也使側孔染色。4.2.BBG的生物相容性出生后8周的褐色挪威大鼠(Kyudo，Fukuoka，日本)如下進行研究。通過腹膜內注射戊巴比妥麻醉大鼠，用局部1%托吡卡胺和2.5%鹽酸去氧腎上腺素放大它們的瞳孔。使用安在注射器上的30號針頭通過透明的角膜進入前房。然后用每種染料進行一次前房注射BBG(IO、1、0.5、0.25、0.1和0.01mg/ml)、ICG(5mg/ml)、臺盼藍(lmg/ml)和對照OPEGUARD溶液(每種染料n=6，總共54只眼睛)。每種溶液的平均摩爾滲透壓濃度和pH在表1中列出。染料保留在前房中，然后進行2個月的活組織顯微鏡檢查。在手術后2周和2個月時摘除眼睛。用光學顯微鏡檢查、透射和掃描電子顯微鏡檢查對眼睛進行分析。4.3.光學顯微鏡檢查眼睛在4%多聚甲醛中固定，對半切開，包埋在石蠟中，在二曱苯中去石蠟化，在乙醇中再水合，并在磷酸緩沖液(PBS)中洗滌。4pm厚的切片用蘇木精和伊紅染色，并用光學顯微鏡觀察。每組中蘇木精和伊紅染色的角膜切片顯示沒有明顯變化(BBG，ICG，TB;圖10)。在光學顯微鏡檢查中，沒有觀察到內皮細胞損失或角膜水腫的跡象。片狀膠原層、基質細胞和上皮細胞層保持良好。在所有角膜層中都沒有觀察到炎癥細胞浸潤。4.4.TdT-dUTP末端缺口-末端標記(TUNEL)通過TdT-dUTP末端缺口-末端標記(TUNEL)檢測凋亡細胞死亡。由在4%多聚曱醛中固定并且包埋在石蠟中的樣品制備4微米厚的切片。用ApopTag⑧熒光素直接原位凋亡檢測試劑盒(IntergenCompany,NewYork,NY)按照廠商方案進行TUNEL染色。切片用多典化丙鎮(MolecularProbes,Eugene,OR)共染色，從而允許通過焚光顯微鏡(Olympus,Tokyo)觀察細胞核。每個眼標本隨機選擇10個切片觀察(n=3)。結果表示為平均值士標準差。在所有組中，偶然觀察到生理更新引起的角膜上皮的凋亡細胞死亡(圖11，箭頭)。在BBG組中，在角膜基質細胞、內皮、睫狀體和晶狀體細胞中沒有觀察到TUNEL染色(圖11)。在ICG組中，在5mg/ml濃度時沒有檢測到明顯的凋亡細胞死亡。在TB組中，在全部內皮細月包的2%中才企測到角膜內皮的凋亡細月包死亡。TB組中的其它細月包不經歷凋亡細力包死亡。4.5.透射電子顯樣史術(TEM)摘除眼睛，在1%戊二醛和1。/o多聚甲醛的PBS溶液中固定前段。標本在乙酸巴比妥緩沖液四氧化鋨(2%)中后固定，在乙醇和水中脫水，并包埋在Epon中。由包埋塊切成超薄切片，并固定在銅載網上。用JEM100CX電子顯微鏡(JEOL，Tokyo)觀察標本。在BBG組中，在10mg/ml的最高濃度下角膜細胞和膠原細胞基質的超微結構保持良好(圖12，左圖)。在角膜內皮中，細胞膜、良好限定的核和胞質細胞器顯示沒有退行性變化(圖12,左下圖)。ICG組顯示保持良好的內皮細胞結構，但是有些內皮細胞證明有線粒體膨脹的跡象(圖12,中圖，箭頭)。TB組由于細胞間分離而在內皮細胞層顯示嚢肺形成(圖12,右圖)，以及斑片方式的偶然的角膜內皮退化(圖12，右下圖)。4.6.掃描電子顯微鏡術(SEM)摘除眼睛，在1%戊二醛和1%多聚曱醛的PBS溶液中固定前段。標本在乙酸巴比妥緩沖液四氧化鋨(2%)中后固定，在乙醇和水中脫水。標本在叔丁醇中飽和，并進行臨界點干燥(Eiko，Tokyo)。然后利用自粘附碳片將標本置于棒(stub)上，并通過氬等離子體涂覆器(Eiko)噴射上厚度為20nm的金。然后，用JEM840掃描電子顯微鏡(JEOL)研究角膜的內皮表面。在BBG暴露的角膜中，SEM顯示類似于對照的正常細胞。SEM圖像證明正常的六角形內皮細胞片，具有完整的邊緣，沒有內皮腫脹(圖13，上圖)。ICG組也顯示在角膜內皮片中有一些細胞腫脹。偶然觀察到在原位置不含變性的內皮細胞，在TB組中，在角膜中央區可見內皮細胞皺縮。細胞皺縮以零星的方式導致內皮細胞損失。實施例55.亮藍輔助的連續曲線形撕嚢術如上所述，本發明人報道了關于新染料亮藍G(BBG)的臨床前研究的結果，該染料在較低濃度時染色前嚢，并且具有最低的毒性。本實施例證明了BBG在人眼嚢染色中的效果。一名70歲的白內障女性在2004年8月接受了BBG-輔助的CCC和晶狀體乳化以及眼內晶狀體(IOL)植入。該患者沒有其它眼部疾病，如青光眼、眼色素層炎或角膜疾病。考馬斯⑧BBG250(Sigma-Aldrich,St丄ouis，USA)以0.25mg/ml的劑量溶解在眼內灌洗液(OPEGUARD⑧畫MA;SenjyuPharmaceuticalCo.，Ltd.,Osaka,曰本)中，并用注射器式濾器除菌。將BBG溶液輕輕地注射到前房內，然后立即用平衡鹽溶液(BSS)洗出。根據圖14,在CCC手術過程中亮藍前嚢清晰可見。向眼睛前房內注射BBG溶液(0.25mg/ml)，立即灌洗。(A)箭頭指示在具有白內障的眼睛中產生的CCC。(B)箭頭示出完成的CCC的邊緣。(C)晶狀體乳化和抽吸后，插入IOL。次日，沒有觀察到急性毒性(如角膜水腫、重度炎癥或眼內壓升高)。患者的視力從光感(LP)提高到20/20，2個月后觀察到0.8%的最低角膜內皮細胞損失。該研究在我們機構的內部審查委員會的批準下進行，并且按照1989年赫爾辛基宣言制定的倫理學標準進行。在手術前向患者解釋了該治療的可能的優點和危險，并且在手術前獲得她的知情同意。對于本領域技術人員而言，基于前面的詳細描述，本發明的其他特征和優點將是顯而易見的。采用已經使用的術語和表述作為說明書的術語，并且不是限制性的，而應當認為在請求保護的本發明的范圍內各種改變都是可能的。權利要求1.一種當進行眼膜摘除時用于染色眼膜的染色組合物，其中該染色組合物包含亮藍G(BBG)衍生物、其藥學上可接受的鹽或其水合物作為主要成分，其中所述BBG衍生物由通式[I]代表，R1代表C1-10烷氧基、氫原子、-OH、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、被一個或兩個芳基取代的C1-10烷基、羥基C2-10烷基、鹵代C1-10烷氧基、或鹵代C1-10烷基，n代表1-5中的任一個，R2和R2’相同或不同，各自代表氫原子、-OH、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、被一個或兩個芳基取代的C1-10烷基、C1-10烷氧基、羥基C2-10烷基、或鹵代C1-10烷基，m和m′相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、R3′和R3″相同或不同，各自代表氫原子、-OH、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、被一個或兩個芳基取代的C1-10烷基、C1-10烷氧基、羥基C2-10烷基、或鹵代C1-10烷基，p、p’和p″相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R4和R4’相同或不同，各自代表氫原子、-OH、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、被一個或兩個芳基取代的C1-10烷基、C1-10烷氧基、羥基C2-10烷基、或鹵代C1-10烷基，且R5代表氫原子、-OH、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、被一個或兩個芳基取代的C1-10烷基、C1-10烷氧基、羥基C2-10烷基、或鹵代C1-10烷基。2.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述BBG衍生物由上述通式[I]代表，并且在通式[I]中，R/代表d-6烷氧基、氫原子、-OH、d-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、被一個或兩個芳基取代的CL6烷基、羥基Cw烷基、卣代C^烷氧基、或卣代Q-6烷基，n代表1-5中的任一個，112和R"相同或不同，各自代表氫原子、-OH、d-6烷基、<:2-6烯基、C2-6炔基、被一個或兩個芳基取代的d-6烷基、Cw烷氧基、羥基02.6烷基、或卣代c^烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、R3'和r3"相同或不同，各自代表氫原子、-OH、Cw烷基、C2_6烯基、C2-6炔基、被一個或兩個芳基取代的d-6烷基、C"6烷氧基、羥基Cw烷基、或卣代d—6烷基，p、p'和p"相同或不同，各自代表1-4中的任一個，仗4和R"'相同或不同，各自代表氫原子、-OH、d-6烷基、(:2.6烯基、<:2.6炔基、被一個或兩個芳基取代的d.s烷基、d-6烷氧基、羥基(:2.6烷基、或囟代d-6烷基，且R"代表氫原子、-OH、d-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、被一個或兩個芳基取代的Q-6烷基、d.s烷氧基、羥基C2-6烷基、或鹵代d.6烷基。3.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述BBG衍生物由通式[n]代表，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中，R/代表氫原子、-OH、d—6烷基、羥基(:2.6烷基、或卣代Cw烷基，n代表1-5中的任一個，Z代表-O-、-S-、-N=、-OC(-O)-或畫C(-O)O-,Ra代表氫原子、-OH、d，6烷基、羥基Cw烷基、或卣代Cw烷基，f和y相同或不同，各自代表氫原子、-OH、d-6烷基、d-6烷氧基、羥基Cw烷基、卣代d-6烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、f和R3"相同或不同，各自代表氫原子、-OH、d-6烷基、d.6烷氧基、羥基C2-6烷基、或鹵代d-6烷基，p、p，和p"相同或不同，各自代表1-4中的任一個，Rb和Re相同或不同，各自代表d-6烷基、d-6烷氧基、羥基C2_6烷基、或卣代C^6烷基，R"和W相同或不同，各自代表氫原子或d-6烷基，且RS代表氫原子、d-6烷基、或囟代C^烷基。4.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述BBG衍生物由上述通式[II]代表，并且在通式[II]中，R/代表氫原子或Ch6烷基，n代表1-5中的任一個，Z代表-O-，Ra代表d-6烷基，je和ie'相同或不同，各自代表氫原子或d-6烷基，m和m'相同或不同，各自代表1-4中的任一個，R3、W和R"代表氫原子，p、p'和p"代表4，Rb和Re相同或不同，各自代表d-6烷基，仗4和114'相同或不同，各自代表d-6烷基，且RS代表氫原子、Cw烷基。5.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述BBG衍生物由通式[ni]代表，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，Z代表國O國、-S-、-N=、-OC(-O)-或-C(-O)O-，Ra代表氫原子、-OH、Cw烷基、羥基C^烷基、或面代d-6烷基，Rb和Re相同或不同，各自代表d-6烷基、CL6烷氧基、羥基Cw烷基、或g代d-6烷基，且仗4和114'相同或不同，各自代表氫原子或CL6烷基。6.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述BBG衍生物由上述通式[III]代表，并且在通式[III]中，z代表國o-，Ra代表d_6烷基或卣代d_6烷基，Rb和RC相同或不同，各自代表d-6烷基或卣代CL6烷基，且114和114'相同或不同，各自代表d-6烷基。7.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述BBG衍生物由上述通式[III]代表，并且在通式[III]中，Z代表國O-,Ra代表d.3烷基，Rb和RC相同或不同，各自代表Cw烷基，且R"和R"'相同或不同，各自代表Cw烷基。8.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述BBG衍生物、其藥學上可接受的鹽或其水合物是BBG染料。9.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述眼膜是內界膜(ILM)。10.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述眼膜是前嚢。11.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述染色組合物含有用于染色眼膜的有效濃度的BBG。12.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述染色組合物含有濃度在0.1mg/ml至10mg/ml范圍內的BBG。13.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述染色組合物含有濃度在0.1mg/ml至1.0mg/ml范圍內的BBG。14.如權利要求1所述的染色組合物，其中所迷染色組合物含有濃度在0.1mg/ml至0.25mg/ml范圍內的BBG。15.如權利要求1所述的染色組合物，其中所述染色組合物具有約298mOsm的滲透壓，該滲透壓與鹽水溶液相同。16.—種染色和摘除眼膜的方法，包括制備權利要求1的染色組合物；使用預定濃度的所述染色組合物染色眼膜；和剝離已染色的膜。17.如權利要求16所述的方法，其中所述染色組合物的預定濃度為0.1mg/ml至10mg/ml的BBG。18.如權利要求16所述的方法，其中所述染色組合物的預定濃度為O.lmg/ml至l.Omg/ml的BBG。19.如權利要求16所述的方法，其中所述染色組合物的預定濃度為O.lmg/ml至0.25mg/ml的BBG。20.亮藍G衍生物在制備用于治療眼科疾病的染色組合物中的用途。21.如權利要求20所述的用途，其中所述治療包括染色和摘除內界膜(ILM)。22.如權利要求20所述的用途，其中所述治療包括染色和摘除前23.如權利要求20所述的用途，其中在所述治療過程中所述染色組合物具有O.lmg/ml至10mg/ml的BBG的濃度。24.如權利要求20所述的用途，其中在所述治療過程中所述染色組合物具有O.lmg/ml至l.Omg/ml的BBG的濃度。25.如權利要求20所述的用途，其中在所述治療過程中所述染色組合物具有O.lmg/ml至0.25mg/ml的BBG的濃度。26.如權利要求20所述的用途，其中在所述治療過程中所述染色組合物的滲透壓約為298mOsm。27.亮藍G衍生物作為眼科手術佐劑的用途。28.—種當進行視網膜摘除時用于染色視網膜的染色組合物，其中所述染色組合物含有亮藍G染料。全文摘要一種當進行眼膜摘除時用于染色眼膜的染色組合物，其中該染色組合物包含亮藍G(BBG)衍生物作為主要成分。文檔編號A61K31/185GK101132814SQ20058004167公開日2008年2月27日申請日期2005年12月6日優先權日2004年12月6日發明者久富智朗,江內田寬,畑快右,石橋達朗,鍵本忠尚申請人:國立大學法人九州大學