專利名稱：Vla－4拮抗劑的制作方法
背景技術：
VLA-4(″極遲抗原-4″；CD49d/CD29；或α4β1)是在除了血小板和成熟嗜中性粒細胞之外的所有細胞(包括樹狀細胞和巨噬細胞樣細胞)上表達的整聯蛋白并且是這些細胞類型的細胞-細胞相互作用和細胞-基質相互作用的關鍵介質。VLA-4的配體包括血管細胞粘著分子-1(VCAM-1)、纖連蛋白(FN)的CS-1結構域和基質蛋白、骨橋蛋白。抵消抗α4抗體或阻斷那些抑制在VLA-4與其配體之間的互相作用的肽在包括以下的疾病的若干動物模型中已經證明具有預防有效性和治療有效性哮喘、多發性硬化、炎癥性腸病和類風濕性關節炎。
對抗α4的人源化單克隆抗體，那他珠他單抗(natalizumab，Antegren，Elan/Biogen)，已經在多發性硬化(D.H.Miller等人，NewEngland Journal of Medicine，348，15(2003))和克羅恩氏病(S.Ghosh等人，New England Journal of Medicine，348，23(2003))的治療中顯示出效力。還有幾種VLA-4拮抗劑處在哮喘、關節炎、多發性硬化和克羅恩氏病的初期臨床試驗中。
在那他珠他單抗的初期臨床試驗中，觀察到淋巴細胞增多(VLA-4功能阻斷的帶用標記)和＞80％的受體占據率。據報道，在皮下給藥后的多發性硬化動物模型中，小分子VLA-4拮抗劑在大鼠實驗性自身免疫腦脊髓炎(EAE)試驗中表現出機能性活動(D.R.Leone等人，J.Pharmacol.Exper.Therap.，305，1150(2003)。該化合物表現為誘導淋巴細胞增多，并且具有較慢的解離速率(下降速率(off-rate))，導致在帶有VLA-4的細胞上的顯著的和持續的受體占據率。在該文獻所述的EAE模型中，在受體占據率、淋巴細胞增多和效力之間存在正相關。
在G.Doherty等人，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，13，1891(2003)中報道了一系列的異煙酰基-L-氨基苯丙氨酸衍生物表現為在Jurkat細胞上具有從VLA-4的較慢解離速率(下降速率)。然而，該化合物進一步的特征在于其具有極差的藥代動力學性質，如低的口服生物利用度、中等到高度的血漿清除率和短的半衰期，使得其不適于口服給藥。本發明的化合物是VLA-4的強力拮抗劑，能夠實現和維持受體占據率持續足以用于口服給藥的時間。
發明內容
本發明的取代的N-[N-苯磺酰基-脯氨酰基]-苯丙氨酸衍生物是VLA-4整聯蛋白的拮抗劑，并且可用于治療、預防和抑制由VLA-4-結合以及細胞粘著和活化介導的疾病。另外，本發明的化合物在口服給藥后顯示出顯著的帶有VLA-4的細胞的受體占據率并且適于每天一次、兩次或三次口服給藥。本發明還涉及含有所述化合物的組合物，和使用所述化合物的治療方法。
發明詳述本發明提供了由式(I)表示的化合物 或其可藥用鹽，其中A是N或N+-O-；X和Y獨立地選自鹵素、C1-3烷基和C1-3烷氧基；R1選自(1)氫、(2)C1-10烷基、(3)-(C1-10烷基)-芳基、(4)-(C1-10烷基)-O-C1-10烷基、(5)-(C1-10烷基)-OC(O)-C1-10烷基、(6)-(C1-10烷基)-OC(O)-芳基、(7)-(C1-10烷基)-OC(O)O-C1-10烷基、和(8)-(C1-10烷基)-N+(C1-3烷基)3；其中烷基任選被1-3個獨立地選自Ra的取代基取代，并且芳基任選被1-3個獨立地選自Rb的取代基取代；R2是氫或甲基；R3和R4之一是氫，且另一個為
k是0-4；R5和R6獨立地選自氫、氟、CF3和CO2Rf，條件是R5和R6不都是氫；R7和R8獨立地選自H、-SO2-C1-3烷基、CN、CF3、OCF3和鹵素；Ra選自(1)-ORd、(2)-NRdS(O)mRe、(3)-NO2、(4)鹵素、(5)-S(O)mRd、(6)-SRd、(7)-S(O)2ORd、(8)-S(O)mNRdRe、(9)-NRdRe、(10)-O(CRfRg)nNRdRe、(11)-C(O)Rd、(12)-CO2Rd、(13)-CO2(CRfRg)nCONRdRe、(14)-OC(O)Rd、(15)-CN、(16)-C(O)NRdRe、(17)-NRdC(O)Re、(18)-OC(O)NRdRe、(19)-NRdC(O)ORe、(20)-NRdC(O)NRdRe、(21)-CRd(N-ORe)、(22)CF3、(23)-OCF3、(24)C3-8環烷基和(25)雜環基；其中環烷基和雜環基任選被1-3個獨立地選自Rc的取代基取代；Rb選自(1)選自Ra的基團、(2)C1-10烷基、(3)C2-10烯基、(4)C2-10炔基、(5)芳基、和(6)-(C1-10烷基)-芳基，其中烷基、烯基、炔基和芳基任選被1-3個選自獨立選自Rc的基團取代；Rc是(1)鹵素、(2)氨基、(3)羧基、(4)C1-4烷基、(5)C1-4烷氧基、(6)芳基、(7)-(C1-4烷基)-芳基、(8)羥基、(9)CF3、(10)OC(O)C1-4烷基、(11)OC(O)NRfRg、或(12)芳基氧基；Rd和Re獨立地選自氫、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy，其中烷基、烯基、炔基和Cy任選被1-4個獨立選自Rc的取代基取代；或者Rd和Re與它們所連接的原子一起形成含有0-2個獨立選自氧、硫和N-Rh的附加雜原子的4-7元雜環；Rf和Rg獨立地選自氫、C1-10烷基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy；或者Rf和Rg與它們所連接的碳原子一起形成含有0-2個獨立選自氧、硫和氮的雜原子的5-7元環；Rh選自Rf和-C(O)Rf；Cy選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；
m是1或2；且n是2-5。
在式I的一個子集中是其中X和Y之一是鹵素，并且另一個選自鹵素、C1-3烷基和C1-3烷氧基的化合物。在它們的一個方案中，X和Y各自是鹵素，優選各自為氯。
在式I的另一子集中是其中R1是氫、C1-4烷基、-(C1-4烷基)OC1-4烷基或-(C1-4烷基)N+(C1-3烷基)3的化合物。在一個方案中，R1選自氫、甲基、乙基、2-甲氧基乙基和2-(三甲基銨)乙基。
在式I的第三個子集中是其中R3和R4之一是氫并且另一個選自下式的化合物 和 其中R5和R6之一是F并且另一個是H或F，k是0-4，且k′是0-2。在它們的一個方案中，非氫取代基選自3，3-二氟-1-氮雜環丁基、3，3-二氟-1-吡咯烷基、3，3-二氟-1-哌啶基、3-氟-1-氮雜環丁基、3-氟-1-吡咯烷基、3-氟-1-哌啶基、4，4-二氟-1-哌啶基、4-氟-1-哌啶基、2-三氟甲基-1-吡咯烷基、2-羧基-1-吡咯烷基和2-(叔丁氧羰基)-1-吡咯烷基。
在式I的第四個子集中是由下式Ia表示的化合物 或其可藥用鹽，其中A是N或N+O-；
R1選自氫、C1-10烷基、-(C1-4烷基)-芳基、-(C1-4烷基)-O-C1-4烷基和-(C1-4烷基)-N+(C1-3烷基)3；R3和R4之一是氫并且另一個選自 和 其中R5和R6之一是F并且另一個是H或F，k是0-4，且k′是0-2；R7和R8獨立地選自H、SO2-C1-3烷基、CN、CF3、OCF3和鹵素。優選k是0-2。
在式Ia的一個方案中，是其中R3是氫并且R4選自3，3-二氟-1-氮雜環丁基、3，3-二氟-1-吡咯烷基、3，3-二氟-1-哌啶基、3-氟-1-氮雜環丁基、3-氟-1-吡咯烷基、3-氟-1-哌啶基、4，4-二氟-1-哌啶基、4-氟-1-哌啶基、2-三氟甲基-1-吡咯烷基的化合物。在式Ia的第二個方案中，是其中R4是氫并且R3選自3，3-二氟-1-氮雜環丁基、3，3-二氟-1-吡咯烷基、3，3-二氟-1-哌啶基、3-氟-1-氮雜環丁基、3-氟-1-吡咯烷基、3-氟-1-哌啶基、4，4-二氟-1-哌啶基、4-氟-1-哌啶基、2-三氟甲基-1-吡咯烷基、2-羧基-1-吡咯烷基和2-(叔丁氧羰基)-1-吡咯烷基的化合物。
在本發明的另一方面，提供了預防或治療哺乳動物的由細胞粘著介導的疾病、病癥、狀況或癥狀的方法，該方法包括對所述的哺乳動物給用有效量的式I的化合物或其可藥用鹽。這一方面包括式I的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療哺乳動物的由細胞粘著介導的疾病、病癥、狀況或癥狀的藥物中的應用。在一個方案中，所述疾病或病癥選自哮喘、變應性鼻炎、多發性硬化、動脈粥樣硬化、炎癥性腸病、類風濕性關節炎、器官移植、急性白血病和鐮狀細胞性貧血。
在本發明的另一方面，提供了用于預防哺乳動物的VLA-4的作用的方法，該方法包括對所述哺乳動物給用治療有效量的式I的化合物或其可藥用鹽。這一方面包括式I的化合物在制備用于預防哺乳動物的VLA-4的作用的藥物中的應用。
本發明的另一方面提供了包括式I的化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體的藥物組合物。
“烷基”以及具有前綴“烷”的其它基團如烷氧基、烷酰基是指可為直鏈、支鏈或它們的組合的碳鏈。烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基和叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基等。
“烯基”是指含有至少一個碳碳雙鍵并且可為直鏈、支鏈或它們的組合的碳鏈。烯基的例子包括乙烯基、烯丙基、異丙烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基等。
“炔基”是指含有至少一個碳碳三鍵并且可為直鏈、支鏈或它們的組合的碳鏈。炔基的例子包括乙炔基、炔丙基、3-甲基-1-戊炔基、2-庚炔基等。
“環烷基”是指單環或雙環的飽和碳環，其各自具有3-10個碳原子。該術語還包括與芳基稠和的單環，其中的連接點在非芳香部分上。環烷基的例子包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、四氫萘基、十氫萘基、2，3-二氫化茚基等。
“芳基”是指只含碳原子的單環或雙環的芳香環。該術語還包括與單環環烷基或單環雜環基稠和的芳基，其中的連接點在芳香部分上。芳基的例子包括苯基、萘基、2，3-二氫化茚基、茚基、四氫萘基、2，3-二氫苯并呋喃基、二氫苯并吡喃基、1，4-苯并二烷基等。
“雜芳基”是指含有至少一個選自N、O和S的雜原子的單環或雙環的芳香環，每個環含有5-6個原子。雜芳基的例子包括吡咯基、異唑基、異噻唑基、吡唑基、吡啶基、唑基、二唑基、噻二唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻吩基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、苯并唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、呋喃并(2，3-b)吡啶基、喹啉基、吲哚基、異喹啉基等。
“雜環基”是指含有至少一個選自N、O和S的雜原子的單環或雙環的飽和環，所述環各自含有3-10個原子，其中的連接點可為碳或氮。該術語還包括與芳基或雜芳基稠和的單環雜環，其中的連接點在非芳香部分上。“雜環基”的例子包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、2，3-二氫呋喃并(2，3-b)吡啶基、苯并嗪基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、二氫吲哚基等。該術語還包括部分不飽和的非芳香性單環，如通過氮連接的2-或4-吡啶酮或N-取代的-(1H，3H)-嘧啶-2，4-二酮(N-取代的尿嘧啶)。
“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。
光學異構體-非對映體-幾何異構體-互變異構體式I的化合物可包含一個或多個不對稱中心，因此可作為消旋物、外消旋混合物、單獨的對映體、非對映體的混合物和單獨的非對映體存在。本發明意在包括式I化合物的所有這些異構形式。
本文中所述的一些化合物包含烯屬雙鍵，除非另外說明，其意在包括E和Z型幾何異構體。
本文中所述的一些化合物可以作為以不同的氫連接點存在的互變異構體形式存在。其例子是酮及其烯醇形式，稱為酮-烯醇互變異構體。單獨的互變異構體及其混合物都被包括在式I的化合物內。
式I的化合物可通過例如從適當的溶劑如甲醇或EtOAc或其混合物中分步結晶而分離為對映體的非對映異構體對。如此獲得的對映體對可通過常規方法，例如通過使用光學活性胺作為拆分試劑或在手性HPLC柱上分離為單獨的立體異構體。
或者，通式I或Ia的化合物的任何對映體可通過立體選擇性合成使用具有已知構型的光學純起始原料或試劑獲得。
鹽術語“可藥用鹽”是指從無毒的可藥用堿或酸制備的鹽，包括從無機堿或有機堿和無機酸或有機酸制備的鹽。得自無機堿的鹽包括鋁、銨、鈣、銅、鐵(III)、鐵(II)、鋰、鎂、錳(III)、錳(II)、鉀、鈉、鋅的鹽等。特別優選銨、鈣、鎂、鉀和鈉的鹽。得自無毒的可藥用有機堿的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺、取代胺(包括天然存在的取代胺)、環胺和堿離子交換樹脂，如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N，N′-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、組氨酸、哈胺(hydrabamine)、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺和氨基丁三醇的鹽等。
當本發明的化合物為堿性時，其相應的鹽可從無毒的可藥用酸(包括無機酸和有機酸)制備。這些酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。特別優選檸檬酸、氫溴酸、鹽酸、馬來酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
應該理解，如本文中使用的，對式I的化合物所提及的還意在包括可藥用鹽。
實用性式I化合物能夠拮抗VLA-4整聯蛋白的作用的能力使得它們可用于預防或反轉由VLA-4與其各種配體結合誘導的癥狀、病癥或疾病。因此，這些拮抗劑將抑制細胞粘著過程，包括細胞活化、移動、增殖和分化。因此，本發明的另一方面提供了用于治療(包括預防、緩解、改善或抑制)由VLA-4結合以及細胞粘著和活化介導的疾病或病癥或癥狀的方法，該方法包括對哺乳動物給用有效量的式I的化合物。所述的疾病、病癥、狀況或癥狀例如為(1)多發性硬化；(2)哮喘；(3)變應性鼻炎；(4)變應性結膜炎；(5)炎癥性肺病；(6)類風濕性關節炎；(7)膿毒性關節炎；(8)I型糖尿病；(9)器官移植排斥；(10)再狹窄；(11)自體骨髓移植；(12)病毒感染的炎癥性后遺癥；(13)心肌炎；(14)炎癥性腸病(包括潰瘍性結腸炎和克羅恩氏病)；(15)某些類型的毒性和免疫性腎炎；(16)接觸性皮膚超敏反應；(17)銀屑病；(18)腫瘤轉移；(19)動脈粥樣硬化；(20)鐮狀細胞性貧血；(21)某些急性白血病；(22)各種黑素瘤、癌和肉瘤(包括多發性骨髓瘤)；(23)急性呼吸窘迫綜合征；(24)葡萄膜炎；(25)循環性休克；和(26)肝炎。
本發明化合物在這些疾病或病癥中的實用性可以在文獻已報道的動物疾病模型中得以證明。以下是這些動物疾病模型的例子i)實驗性變應性腦脊髓炎，類似多發性硬化的神經元脫髓鞘模型(例如參見T.Yednock等人，Nature.356，63(1993)和E.Keszthelyi等人，Neurology.47，1053(1996))；ii)在作為用于哮喘各階段的模型的羊和豚鼠中的支氣管超應答性(例如參見W.M.Abraham等人，J.Clin.Invest.93，776(1993)和A.A.Y.Milne和P.P.Piper，Eur.J.Pharmacol..282.243(1995))；iii)在作為炎性關節炎模型的大鼠中的輔助劑誘導的關節炎(參見C.Barbadillo等人，Arthr.Rheuma.(SuppL)，36 95(1993)和D.Seiffge，J.Rheumatol..23，12(1996))；iv)在NOD小鼠中的繼承性自身免疫糖尿病(參見J.L.Baron等人，J.Clin.Invest.93，1700(1994)，A.Jakubowski等人，J.Immunol..155.938(1995)，和X.D.Yang等人，Diabetes.46，1542(1997))；v)在作為器官移植模型的小鼠中的心臟異源移植幸存者(參見M.Isobe等人，Tranplant.Proc.26，867(1994)和S.Molossi等人，J.Clin Invest..95，2601(1995))；vi)在類似人潰瘍性結腸炎(其是炎癥性腸病的一種形式)的棉頂(cotton-top tamarin)中的自發性慢性結腸炎(參見D.K.Podolsky等人，J.Clin.Invest.，92，372(1993))；vii)作為皮膚過敏性反應模型的接觸性超敏反應模型(參見T.A.Ferguson和T.S.Kupper，J.Immunol..150，1172(1993)和P.L.Chisholm等人，Eur.J.Immunol.，23，682(1993))；viii)急性腎毒性腎炎(參見M.S.Mulligan等人，J.Clin.Invest.，91.577(1993))；ix)腫瘤轉移(例如參見M.Edward，Curr.Opin.Oncol.7，185(1995))；x)實驗性自身免疫甲狀腺炎(參見R.W.McMurray等人，Autoimmunity，23，9(1996)；xi)在大鼠中在動脈阻塞后的缺血性組織損傷(參見F.Squadrito等人，Eur.J.Pharmacol.，318，153(1996))；xii)通過使變應性應答減弱的VLA-4抗體抑制TH2 T細胞細胞因子產生，包括DL-4和IL-5(J.Clinical Investigation 100，3083(1997)；xiii)在靈長類和小鼠中，VLA-4整聯蛋白的抗體移動長期恢復細胞并增加細胞因子誘導的移動(Blood.90 4779-4788(1997)；xiv)附著于VCAM-1的鐮刀網織紅細胞(Blood 85 268-274(1995)和Blood 88 4348-4358(1996)；xv)因子1由來的趨化因子基質細胞調節VLA-4整聯蛋白介導的多發性骨髓瘤細胞對CS-1/纖連蛋白和VCAM-1的粘著(Blood.97.346-351 2001)。
劑量范圍式I化合物的預防性劑量或治療性劑量當然隨著治療的狀況的性質或嚴格性、使用的具體的式I化合物及其給藥途徑的不同而改變。所述劑量還根據個體患者的年齡、體重和應答的不同而改變。通常，日劑量范圍在每千克哺乳動物體重約0.001毫克到約100毫克的范圍內，優選每千克體重約0.01毫克到約50毫克，最優選為每千克體重0.1到10毫克，為單一劑量或分開劑量形式。另一方面，有時候根據需要可使用超過這些范圍的劑量。
對于使用組合物用于靜脈內給藥的應用，適當的劑量范圍為每天每千克體重約0.01毫克到約25毫克(優選0.1毫克到約10毫克)的式I化合物。
在使用口服組合物的情況下，適當的劑量范圍是例如每天每千克體重約0.01毫克到約100毫克的式I化合物，優選每千克0.1毫克到約10毫克的式I化合物。
對于組合物用于舌下給藥的應用，適當的劑量范圍為每天每千克體重約0.01毫克到約25毫克(優選0.1毫克到約5毫克)的式I化合物。
對于哮喘的治療，式I化合物的可用劑量范圍為約0.1毫克/千克到約100毫克/千克，優選約1毫克/千克到10毫克/千克，通過每天一次、兩次、三次等，經口/吸入/舌下/等途徑給用。劑量可以作為單一日劑量或每天分為兩次或三次進行給藥。
對于多發性硬化的治療，式I化合物的可用劑量范圍為約0.1毫克/千克到約100毫克/千克，優選約1毫克/千克到10毫克/千克，通過每天一次、兩次、三次等，經口/吸入/舌下/等途徑給用。劑量可以作為單一日劑量或每天分為兩次或三次進行給藥。
對于炎癥性腸病的治療，式I化合物的可用劑量范圍為約0.1毫克/千克到約100毫克/千克，優選約1毫克/千克到10毫克/千克，通過每天一次、兩次、三次等，經口/吸入/等途徑給用。劑量可以作為單一日劑量或每天分為兩次或三次進行給藥。
對于類風濕性關節炎的治療，式I化合物的可用劑量范圍為約0.1毫克/千克到約100毫克/千克，優選約1毫克/千克到10毫克/千克，通過每天一次、兩次、三次等，經口/吸入/舌下/等途徑給用。劑量可以作為單一日劑量或每天分為兩次或三次進行給藥。
藥物組合物本發明的另一方面提供包括式I的化合物以及可藥用載體的藥物組合物。藥物組合物中的術語“組合物”意在包括含有活性成分、構成載體的惰性成分(可藥用賦形劑)的產品，以及任何直接地或間接地得自任何兩種或更多種成分的組合、絡合或集合，或得自一種或多種成分的解離，或得自一種或多種成分的其它類型的反應或互相作用的產品。因此，本發明的藥物組合物包括通過將式I化合物、附加活性成分和可藥用賦形劑混合制備的任何組合物。
可使用任何適當的給藥途徑用于為哺乳動物特別是人提供有效劑量的本發明的化合物。例如，可使用經口、舌下、直腸、局部、非腸道、經眼、經肺、經鼻等途徑。劑型包括片劑、錠劑、分散劑、混懸劑、溶液劑、膠囊、霜劑、膏劑、氣霧劑等。
本發明的藥物組合物包括作為活性成分的式I化合物或其可藥用鹽，還可包括可藥用載體和任選的其它治療成分。術語“可藥用鹽”是指從無毒的可藥用堿或酸(包括無機堿或無機酸和有機堿或有機酸)制備的鹽。
組合物包括適于經口、舌下、直腸、局部、非腸道(包括皮下、肌內和靜脈內)、經眼(眼用的)、經肺(氣霧劑吸入)或經鼻給藥的組合物，但是在給定情況下的最適當的途徑將根據治療狀況的性質和嚴重性以及活性成分的性質而定。它們可方便地存在于單位劑型中并通過制藥領域公知的任何方法制備。
對于吸入給藥，本發明的化合物方便地以從增壓包裝或噴霧器中提供氣霧劑噴射的形式被遞送。化合物還可作為經配制的粉末被遞送，并且粉狀組合物可在吹入粉末吸氣器裝置的幫助下被吸入。優選的吸入用遞送系統是計量式劑量吸入(MDI)氣霧劑(其可配制成式I化合物在適當的發射劑如碳氟化合物或烴中的混懸劑或溶液)，以及干粉吸入(DPI)氣霧劑(其可配制為式I的化合物在有或無附加賦形劑條件下的干粉形式)。
式I化合物的適當的局部制劑包括透皮裝置、氣霧劑、霜劑、膏劑、洗液、粉劑等。
在實際使用中，式I的化合物可作為根據常規的藥物配合技術與藥物載體緊密混合的活性成分進行組合。載體可采取各種形式，根據給藥所需的制劑形式如口服或非腸道(包括靜脈內)而定。在制備口服劑型的組合物中，在口服液體制劑諸如例如混懸劑、酏劑和溶液劑的情況下，可使用任何常用的藥物介質，諸如例如水、二醇、油、醇、調味劑、防腐劑、著色劑等；或者，在口服固體制劑諸如例如粉劑、膠囊和片劑的情況下，使用載體諸如淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、造粒劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等，固體口服制劑相對于液體制劑是優選的。由于片劑和膠囊的容易給藥性，它們代表最有利的口服劑型單位形式，在口服劑型單位形式情況下，顯然可使用固體藥物載體。如果需要，可通過標準的水性或非水性技術對片劑包衣。
除了上述的常用劑型之外，式I化合物還可以諸如在美國專利3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；3,630,200和4,008,719中所述的控制釋放裝置和/或遞送設備給藥。
適于口服給藥的本發明的藥物組合物可以各自包含預定量的活性成分的離散單位如膠囊、錠劑或片劑形式存在，以粉末劑或粒劑或在水性液體、非水性液體中的溶液劑或混懸劑形式、水包油型乳劑或油包水型乳劑的形式存在。這些組合物可通過任何藥學方法制備，但是所有方法都包括將活性成分與構成一種或多種必要成分的載體結合的步驟。通常，藥物組合物可通過使活性成分均一地和密切地與液體載體或細粉形式的固體載體或者兩者結合，然后如有必要使產品成形為所需形式而制備。例如，片劑可通過壓縮或模制制備，任選與一種或多種輔助劑一起被制備。壓縮片可通過在適當的機器中通過壓縮任選與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、表面活性劑或分散劑混合的自由流動形式如粉末或顆粒形式的活性成分而制備。模制片可通過在適當的機器中對用惰性液體稀釋劑潤濕的粉狀化合物的混合物進行模制而制得。理想地，每片含有約1毫克到約500毫克活性成分，每個錠劑或膠囊含有約1毫克到約500毫克的活性成分。
以下是式I化合物的典型藥物劑型的例子
氣霧劑 每罐式I化合物 24mg卵磷脂，NF濃縮液1.2mg三氯氟甲烷，NF 4.025g二氯二氟甲烷，NF12.15g聯合治療式I的化合物可用于與其他可用于治療/預防/抑制或緩解式I化合物可用的疾病或狀況的藥物聯合給用。這些其它藥物可通過通常使用的途徑或量給用，因此，與式I化合物同時或者順序地給用。當式I的化合物與一種或多種其它藥物同時給用時，可使用除了式I化合物之外還含有這些其他藥物的藥物組合物。因此，本發明的藥物組合物包括那些除了式I化合物之外還包括一種或多種其他活性成分的組合物。可與式I化合物組合的其它活性成分(所述其它活性成分分開給用或在相同藥物組合物中給用)的例子包括但不限于(a)其它的諸如那些在US5,510,332、WO97/03094、WO97/02289、WO96/40781、WO96/22966、WO96/20216、WO96/01644、WO96/06108、WO95/15973和WO96/31206所述的VLA-4拮抗劑以及那他珠他單抗；(b)甾體如倍氯米松、甲潑尼龍、倍他米松、潑尼松、地塞米松和氫化可的松；(c)免疫抑制劑如環孢子菌素、他克莫司、雷帕霉素和其它FK-506型免疫抑制劑；(d)抗組胺劑(H1-組胺拮抗劑)如溴苯那敏、氯苯那敏、右氯苯那敏、曲普利啶、氯馬斯汀、苯海拉明、二苯拉林、曲吡那敏、羥嗪、甲地嗪、異丙嗪、阿利馬嗪、阿扎他定、賽庚啶、安他唑啉、非尼拉敏、美吡拉敏、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、脫羧乙氧基氯雷他定等；(e)非甾體抗氣喘藥如β2-激動劑(特布他林、奧西那林、非諾特羅、新異丙腎上腺素、沙丁胺醇、比托特羅、沙美特羅和吡布特羅)、茶堿、色甘酸鈉、阿托品、異丙托溴銨、白細胞三烯拮抗劑(扎魯司特、孟魯司特、普侖司特、伊拉司特、泊比司特、SKB-106，203)、白細胞三烯生物合成抑制劑(齊留通、BAY-1005)；(f)非甾體抗炎劑(NSAID)如丙酸衍生物(阿明洛芬、苯洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非諾洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、奧沙普秦、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫洛芬)、醋酸衍生物(吲哚美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、環氯茚酸、雙氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋羅芬酸、異丁芬酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美丁、齊多美辛和佐美酸)、芬那酸衍生物(氟芬那酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸和托芬那酸)、聯苯羧酸衍生物(二氟尼柳和氟苯柳)、昔康類(伊索昔康、吡羅昔康、舒多昔康和泰諾昔康)、水楊酸類(乙酰水楊酸、柳氮磺吡啶)和吡唑酮類(阿扎丙宗、bezpiperylon、非普拉宗、莫非布宗、羥布宗、保泰松)；(g)環加氧酶-2(COX-2)抑制劑，如塞來昔布、羅非昔布和帕來昔布；(h)IV型磷酸二酯酶(PDE-IV)抑制劑；(i)趨化因子受體特別是CCR-1、CCR-2和CCR-3的拮抗劑；(j)降膽固醇藥如HMG-CoA還原酶抑制劑(洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀和其它他汀類)、多價螯合劑(考來烯胺和考來替泊)、煙酸、非諾貝酸衍生物(吉非貝齊、安妥明、非諾貝特和苯扎貝特)、和普羅布考；(k)抗糖尿病藥物，如胰島素、磺酰脲類、雙胍類(二甲雙胍)、α-葡糖苷酶抑制劑(阿卡波糖)和格列酮類(曲格列酮、吡格列酮、恩格列酮、MCC-555、BRL49653等)；(l)干擾素β制劑(干擾素β-1a、干擾素β-1b)；(m)抗膽堿能藥物如毒蕈堿拮抗劑(異丙托銨(ipratropium)和tiatropium)；(n)目前用于多發性硬化的治療藥，包括氫化潑尼松、glatiramer、脫氧腺苷、米托蒽醌、甲氨蝶呤、和環磷酰胺；(o)p38激酶抑制劑；(p)其它化合物，如5-氨基水楊酸及其前藥，抗代謝物如硫唑嘌呤和6-巰基嘌呤，和細胞毒素性癌化療劑。
式I化合物與第二活性成分的重量比可不同并根據各自成分的有效劑量而定。通常，可使用各自的有效劑量。因此，例如，當式I的化合物與NSAID組合時，式I的化合物與NSAID的重量比通常為約1000∶1到約1∶1000，優選約200∶1到約1∶200。式I的化合物與其它活性成分的組合也通常處在上述范圍內，但是在所有情況下，應當使用各自活性成分的有效劑量。
在以下方案和實施例中可使用的縮寫包括4-DMAP4-二甲基氨基吡啶；AcCN乙腈；BOC叔丁氧羰基；BOC-ON2-(叔丁氧羰基亞胺基)-2-苯基乙腈；BOP六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-；鹽水飽和NaCl溶液；DIPEAN，N-二異丙基乙胺；DMF二甲基甲酰胺；DMSO二甲基亞砜；Et乙基；EtOAc乙酸乙酯；EtOH乙醇；g或gm克；h或hr小時；HATU六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲；HBTU六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲；HOAc醋酸；HOAt1-羥基-7-氮雜苯并三唑；HOBt1-羥基苯并三唑；HPLC高壓液相色譜法；真空旋轉蒸發；Me甲基；MeOH甲醇；mg毫克；MHz兆赫；min分鐘；mL毫升；mmol毫摩爾；MS或ms質譜；MsCl甲磺酰氯；Ph苯基；Ph3P三苯基膦；PyBOP六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基-；rt室溫；TEA三乙胺；TFA三氟乙酸；THF四氫呋喃。
本發明的化合物可根據以下圖解中所述的過程制備。在圖解1中，取代的吡啶基-4-羧酸衍生物A用亞硫酰氯處理得到羧酰氯衍生物，其然后與4-氨基-(L)-苯丙氨酸衍生物反應，得到酰胺B。B中的N-BOC保護基用強酸(TFA或HCl)除去，得到游離胺C。
圖解1 在圖解2中，適當取代的(L)-脯氨酸酯D(R′＝H)在堿(DIPEA或Na2CO3)的存在下用3-氰基-苯磺酰氯L進行磺酰化，得到磺酰胺E，如果其含有酯保護基，則用氫氧化物處理以得到游離酸。胺C和酸E一起在適當的偶聯劑(如PyBOP、HBTU/HOAt，或E可首先轉化成相應的酰基氯)的存在下反應得到酰胺F。或者，脯氨酸酯D(R′＝BOC)通過用堿如LiOH處理而水解得到相應的酸。然后該酸如上所述與C偶聯，在除去BOC基團后得到M。然后在堿的存在下用L將胺M磺酰化，得到F。F中的酯可用氫氧化物(如果R1是正烷基或異烷基)或TFA或HCl(如果R1是叔丁基)水解得到相應的酸。
圖解2 生物學評價式I的化合物是VLA-4的強力拮抗劑，在帶有VLA-4的細胞上具有顯著的和持續的受體占據率。實驗化合物在Jurkat細胞上的VLA-4的解離速率可通過在G.Doherty等人，Bioorganic & MedicinalChemistry Letters，13，1891(2003)中的所述方法測定。在該試驗中，本發明的化合物具有大于三小時的解離半衰期(t1/2＞3小時)，顯示它們是VLA-4的強結合抑制劑。
在大鼠和犬中口服劑量給藥后的VLA-4的受體占據率可通過在D.R.Leone等人，J.Pharmacol.Exper.Therap.，305，1150(2003)中的所述方法測定。本發明的化合物在口服劑量給藥后具有持續的和顯著的受體占據率(＞50％)。
本發明的化合物可通過在以下實施例中的詳細過程制備。提供這些實施例只用于說明本發明，所述實施例不以任何方式限制本發明。
參考例14-((3′，5′-二氯異煙酰基)氨基)-(L)-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽 步驟A在氮氣下在0℃在5分鐘內向500mL的絕對乙醇中添加亞硫酰氯(21mL，0.29mol)，透明溶液在0℃攪拌10分鐘，然后在室溫攪拌30分鐘，一次性添加4-硝基-L-苯丙氨酸(50.2g，0.24mol)，混合物回流過夜。得到的混合物真空濃縮，得到4-硝基-L-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(60g)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.21(d，2H)，7.54(d，2H)，4.39(dd，1H)，4.22(q，2H)，3.24-3.40(m，2H)，1.22(t，3H).
步驟B在氮氣下向步驟A的化合物(60g，0.22mol)在二氨甲烷(1.5L)中的懸浮液中添加TEA(31mL)，在室溫攪拌10分鐘后，添加二叔丁基二碳酸酯(di-t-butyl dicarbonate)(49g，0.22mol)和4-DMAP(0.1g)，反應混合物在室溫攪拌過夜，用1N HCl(2×200mL)、H2O(2×200mL)和鹽水(1×250mL)洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮，得到N-BOC-4-硝基-L-苯丙氨酸乙酯(78g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.14(d，2H)，7.28(d，2H)，4.30-4.65(m，1H)，4.15(q，2H)，3.00-3.30(m，2H)，1.35(s，9H)，1.20(t，3H).
步驟C向步驟B的化合物(78.3g，0.22mol)在絕對乙醇(300mL)中的溶液中沖入氮氣，添加10％的碳載鈀(1.0g)，在40-50psi下氫化1小時后，反應混合物通過硅藻土過濾，將濾餅用EtOH然后用EtOAc洗滌。濃縮濾液，殘余物通過硅膠上的閃柱色譜法純化，用4∶1到1∶1的EtOAc/己烷洗脫，得到N-BOC-4-氨基-L-苯丙氨酸乙酯(60g)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.90(d，2H)，6.63(d，2H)，4.20-4.50(m，1H)4.14(q，2H)，3.76-3.00(m，2H)，1.36(s，9H)，1.20(t，3H).
步驟D向充有氮氣的500mL圓底燒瓶中裝入3，5-二氯異煙酸(46.5g，0.24mol)、CH2Cl2(150mL)、DMF(0.5mL)和亞硫酰氯(20mL，33.9g 0.28mol)，在淤漿回流5小時后，添加另外的亞硫酰氯(5mL，0.70mol)和CH2Cl2(100mL)，反應混合物回流另外的45分鐘并濃縮，將殘余物與甲苯進行共沸蒸餾，得到粗品酰基氯，該粗品酰基氯立刻使用。將粗品酰基氯溶于CH2Cl2(150mL)中，并在0℃在5分鐘內添加到步驟C的化合物(60g，0.20mol)和4-甲基嗎啉(44mL，0.40mol)在CH2Cl2(400mL)中，在0℃攪拌1小時后，反應用NaHCO3稀水溶液淬滅。分離有機層，水層用CH2Cl2(500mL)提取。合并有機層，用無水MgSO4干燥并真空濃縮，將殘余物通過硅膠上的閃柱色譜法純化，用4∶1到3∶2 EtOAc/己烷洗脫，得到N-BOC-4-((3′，5′-二氯-異煙酰基)氨基)-L-苯丙氨酸乙酯(95g)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.60(s，2H)，7.54(d，2H)，7.20(d，2H)，4.20-4.36(m，1H)，4.10(q，2H)，3.02-3.12(m，1H)，2.82-2.92(m，1H)，1.34/1.30(s，9H)，1.20(t，3H).
步驟E在2小時內在室溫下將步驟D的化合物(95g，0.197mol)在EtOAc(1.2L)中的溶液用氯化氫氣流處理。得到的黃色懸浮液用己烷(250mL)稀釋，冷卻到0℃并過濾。濾餅用己烷洗滌并真空干燥，得到標題化合物，為黃色固體(80g)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，7.66(d，2H)，7.30(d，2H)4.28(dd，1H)，4.25(q，2H)，3.20(q，2H)，1.26(t，3H).
實施例1N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯-異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 步驟1(2S，4S)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-羥基吡咯烷-2-羧酸甲酯向順式-4-羥基-L-脯氨酸甲酯(10.0g，68.8mmol)、三乙胺(13.9g，138mmol)和CH2Cl2(200mL)的溶液中添加3-氰基苯-1-磺酰氯(13.9g，68.8mmol)。在1小時后，反應在飽和NaHCO3水溶液(75mL)和CH2Cl2(100mL)之間分配。分離各層，水層用CH2Cl2(3×75mL)提取。合并的有機層經干燥(MgSO4)、過濾和濃縮，殘余物在硅膠上純化(1∶99→30∶70的乙酸乙酯-己烷)，得到標題化合物，為無色結晶固體；1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.19-8.18(m，1H)，8.13-8.11(m，1H)，7.89-7.85(m，1H)，7.69-7.65(t，1H)，4.52-4.50(m，1H)，4.44-4.43(m，1H)，3.67(s，3H)，3.52(dd，1H)，3.47-3.41(m，1H)，3.1(d，1H)，2.33-2.27(m，1H)，2.20-2.17(m，1H)；LRMS(ESI)m/z 311(C13H14N2O5S，M+H，計算值311).
步驟2(2S，4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(3，3-二氟哌啶-1-基)吡咯烷-2-羧酸甲酯通過注射器泵在-60℃在30分鐘內向步驟1的化合物(19.6g，63.2mmol)、二異丙基乙胺(16.5g，127mmol)和CH2Cl2(200mL)的溶液中添加三氟甲磺酸酐(17.8g，63.2mmol)。然后使得到的溶液在1.5小時內回溫到-20℃，此時添加二異丙基乙胺(5.5g，42.5mmol)，然后添加3，3-二氟-哌啶鹽酸鹽(6.67g，42.5mmol)，然后將混合物在5小時內慢慢地回溫到室溫。在室溫12小時后，反應在H2O(150mL)和CH2Cl2(100mL)之間分配。分離各層，水層用CH2Cl2(3×100mL)提取。合并的有機層經干燥(MgSO4)、過濾和濃縮，殘余物在硅膠上純化(1∶99→99∶1的乙酸乙酯-己烷)，得到標題化合物，為無色泡沫；1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.16(s，1H)，8.10(d，1H)，7.88(d，1H)，7.68(t，1H)，4.48-4.59(m，1H)，3.73(s，3H)，3.68-3.65(m，1H)，3.22-3.17(m，2H)，2.64(brq，1H)，2.51(brq，1H)，2.42-2.41(m，2H)，2.23-2.20(m，1H)，2.13-2.04(m，1H)，1.90-1.82(m，2H)，1.74-1.72(m，2H)；LRMS(ESI)m/z 414(C18H21F2N3O4S，M+H，計算值414).
步驟3N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯在室溫下將LiOH一水合物(1.54g，64.4mmol)添加到步驟2的化合物(13.3g，32.2mmol)、CH3CN(80mL)和H2O(40mL)的溶液中。在2小時后，添加HCl的H2O溶液(65mL，65mmol，1N)，溶液在乙酸乙酯之間分配。分離各層，水層用乙酸乙酯(6×100mL)提取。合并的有機層經干燥(MgSO4)、過濾和濃縮。得到的殘余物直接在以下步驟中使用而無需進一步純化LRMS(ESI)m/z 400(C17H19F2N3O4S，M+H，計算值400)。
在室溫下將三乙胺(16.4g，161mmol)滴加到上述的殘余物(12.8g，32.2mmol)、參考例1的化合物(13.4g，32.2mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(12.3g，64.4mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(8.7g，64.4mmol)和DMF(140mL)的混合物中。在12小時后，反應在H2O(500mL)和乙酸乙酯(200mL)之間分配。分離各層，水層用乙酸乙酯(3×200mL)提取。合并的有機層用鹽水(1×150mL)洗滌，經干燥(MgSO4)、過濾和濃縮，將殘余物在硅膠上純化(5∶95→99∶1乙酸乙酯-己烷)，得到標題化合物，為無色泡沫1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.66(s，2H)，8.22-8.21(m，1H)，8.06-8.03(m，2H)，7.77(t，1H)，7.67-7.64(m，2H)，7.35-7.32(m，2H)，4.74-4.71(m，1H)，436-434(m，1H)，4.22(q，2H)，3.70-3.67(m，1H)，3.25-3.22(dd，1H)，3.11-2.95(m，3H)，2.64-2.48(m，2H)，2.40-2.38 (m，2H)，2.10-2.04(m，1H)，1.9-1.65(m，5H)，1.28(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 763(C34H34Cl2F2N6O6S，M+H，計算值763).
實施例2N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸在室溫下將氫氧化鋰一水合物(126mg，5.24mmol)添加到實施例1的化合物(1.90g，2.62mmol)、CH3CN(13mL)和H2O(7mL)的混合物中。在2小時后，添加HCl的H2O溶液(5.3mL，5.3mmol，1N)，溶液在乙酸乙酯(20mL)之間分配。分離各層，水層用乙酸乙酯(6×20mL)提取。合并的有機層經干燥(MgSO4)、過濾和濃縮。殘余物在硅膠上純化(1∶99→20∶80的甲醇-CH2Cl2)，得到標題化合物，為無色泡沫1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.65(s，2H)，8.22(s，1H)，8.04(d，2H)，7.76(t，1H)，7.65(d，2H)，7.35(d，2H)，4.73-4.70(m，1H)，4.38-4.35(m，1H)，3.71-3.68(m，1H)，3.33-3.29(dd，1H)，3.11-2.95(m，3H)，2.65-2.50(m，1H)，2.40-2.39(m，2H)，2.11-2.10(m，1H)，1.86-1.60(m，5H)；LRMS(ESI)m/z 735(C32H30Cl2F2N6O6S，M+H，計算值735).
實施例3N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟氮雜環丁-1-基]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1步驟2-3所述的一般過程，將3，3-二氟哌啶鹽酸鹽變成3，3-二氟氮雜環丁烷鹽酸鹽，在制備性反相HPLC純化(PhenomenexSynergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0乙腈-水0.01％TFA)后，得到標題化合物，為無色泡沫
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.65(s，2H)，8.21(s，1H)，8.04-8.01(m，2H)，7.75(t，1H)，7.65(app d，2H)，7.36(app d，2H)，4.74-4.72(m，1H)，4.34(t，1H)，4.20(q，2H)，3.61-3.44(m，5H)，3.33-3.10(m，4H)，2.05-2.01(m，1H)，1.92-1.88(m，1H)，1.26(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 735(C32H31C12F2N6O6S，M+H，計算值735).
實施例4N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟氮雜環丁-1-基]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，在制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0乙腈-水0.01％TFA)后，得到標題化合物，為無色泡沫1HNMR(500MHz，CD3OD)δ8.65(s，2H)，8.20(s，1H)，8.04-7.97(m，2H)，7.74(t，1H)，7.65(d，2H)，7.39(d，2H)，4.74-4.71(m，1H)，4.37(t，1H)，3.68-3.62(m，2H)，3.55-3.48(m，3H)，3.32-3.20(m，4H)，3.11-3.04(m，1H)，2.07-1.91(m，2H)；LRMS(ESI)m/z 707(C30H27Cl2F2N6O6S，M+H，計算值707).
實施例5N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1步驟2-3所述的一般過程，將3，3-二氟哌啶鹽酸鹽變為3，3-二氟吡咯烷鹽酸鹽，得到標題化合物，為無色泡沫
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.25-8.24(m，1H)，8.10-8.07(m，1H)，8.04-8.02(m，1H)，7.77(t，1H)，7.67-7.64(m，2H)，7.35-7.32(m，2H)，4.78-4.75(m，1H)，4.34-4.31(m，1H)，4.21(q，2H)，3.61-3.59(m，1H)，3.29-3.24(m，2H)，3.11(m，1H)，2.89-2.80(m，3H)，2.60-2.58(m，2H)，2.04-1.95(m，4H)，1.28(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 749(C33H32Cl2F2N6O6S，M+H，計算值749).
實施例6N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，將實施例5的化合物轉化成標題化合物，為白色固體1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.52(s，2H)，8.13(m，1H)，7.98-7.97(m，1H)，7.90-7.88(m，1H)，7.65(t，1H)，7.50(d，2H)，7.24(d，2H)，4.54(m，1H)，4.20-4.17(m，1H)，3.47-3.44(m，1H)，3.22-3.20(m，1H)，3.13-3.10(m，1H)，3.04-3.02(m，1H)，2.73-2.67(m，3H)，2.50-2.47(m，2H)，1.95-1.82(m，4H)；LRMS(ESI)m/z 721(C31H28Cl2F2N6O6S，M+H，計算值721).
實施例7N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸甲酯 在0℃向實施例6的化合物(50mg，0.07mmol)在無水甲醇(1mL)中的溶液中添加三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2M，在醚中)，直到黃色持續不變。在室溫下攪拌15分鐘后，將混合物濃縮至干燥，得到標題化合物，為無色泡沫1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.21(m，1H)，8.06-8.04(m，1H)，8.02-8.00(m，1H)，7.77(t，1H)，7.63-7.61(m，2H)，7.23-7.21(m，2H)，4.76(m，1H)，4.30-4.29(m，1H)，3.74(a，3H)，3.58-3.57(m，1H)，3.28-3.24(m，2H)，3.10-3.08(m，1H)，2.87-57(m，5H)，2.04-1.92(m，4H)；LRMS(ESI)m/z 735(C32H30Cl2F2N6O6S，M+H，計算值735).
實施例8N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(S)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氨異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1所述的一般過程，將順式-4-羥基-L-脯氨酸甲酯變為反式-4-羥基-L-脯氨酸甲酯，得到標題化合物，為無色泡沫LRMS(ESI)m/z 749(C33H33Cl2F2N6O6S，M+H，計算值749)。
實施例9N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(S)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基)-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，在制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0乙腈-水0.01％TFA)后，從實施例8的化合物得到標題化合物，為無色泡沫
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.65(s，2H)，8.24(s，1H)，8.09-8.03(m，2H)，7.77(t，1H)，7.36(d，2H)，7.37(d，2H)，4.73-4.69(m，1H)，4.41-4.38(m，1H)，3.75-3.40(m，7H)，3.30-3.25(m，2H)，3.10(dd，1H)，2.55-2.48(m，3H)，2.28-2.21(m，1H)；LRMS(ESI)m/z 721(C31H29Cl2F2N6O6S，M+H，計算值721).
實施例10N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[4，4-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1步驟2-3所述的一般過程，將3，3-二氟哌啶鹽酸鹽變為4，4-二氟哌啶鹽酸鹽，得到標題化合物，為無色泡沫1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.56(s，2H)，8.13(s，1H)，8.06(d，1H)，7.91(d，1H)7.70(t，1H)，7.64(br s，1H)，7.54(d，2H)，7.20(d，2H)，7.06(br d，1H) 4.83-4.81(m，1H)，4.25(q，2H)，4.17(d，1H)，3.64-3.61(m，1H)，3.26(dd，1H)，3.10(dd，1H)，2.90(t，1H)，2.80-2.70(m，1H)，2.48-2.39(m，4H)，2.31-2.25(dd，1H)，1.94-1.83(m，4H)，1.59-1.51(m，1H)，1.32(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 763(C34H35Cl2F2N6O6S，M+H，計算值763).
實施例11N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[4，4-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，從實施例10的化合物得到標題化合物，為無色泡沫
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.23(s，1H)，8.04-8.02(m，2H)，7.75(t，1H)，7.63(d，2H)，7.34(d，2H)，4.70-4.67(m，1H)，4.40(d，1H)，3.73-3.72(m，1H)，330(dd，1H)，3.28-3.05(m，3H)，2.58-2.54(m，4H)，2.13-2.12(m，1H)，1.95-1.80(m，5H)；LRMS(ESI)m/z 735(C32H31Cl2F2N6O6S，M+H，計算值735).
實施例12N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸-2-甲氧基乙酯 將碳酸鉀(33.0mg，0.24mmol)添加到實施例2的化合物(60.0mg，0.08mmol)、1-溴-2-甲氧基乙烷(22.0mg，0.16mmol)和DMF(1.5mL)的溶液中。在24小時后，添加三氟乙酸(45.6mg，0.40mmol)，混合物直接用制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0乙腈-水0.01％TFA)，得到標題化合物，為無色泡沫1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.49(br d，1H)，8.17(s，1H)，8.02(d，1H)，7.93(d，1H)，7.71(t，1H)，7.65(d，2H)，7.35(d，2H)，4.68-4.60(m，1H)，4.49(d，1H)，4.30-4.20(m，2H)，3.82(dd，1H)，3.67-3.60(m，3H)，3.34(s，3H)，3.32-3.30(m，1H)，3.28(dd，1H)，3.20-3.13(m，1H)，3.03-3.10(dd，1H)，2.95-2.90(m，2H)，2.27(dd，1H)，2.08-1.96(m，3H)，1.90-1.80(m，2H)；LRMS(ESI)m/z 793(C35H37Cl2F2N6O7S，M+H，計算值793).
實施例13N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸-膽堿酯
使用實施例12所述的一般過程，將1-溴-2-甲氧基乙烷變為2-溴-N，N，N-三甲基乙銨溴化物，得到標題化合物，為無色泡沫1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.60(br d，1H)，8.23(s，1H)，8.09(d，1H)，8.05(d，1H)，7.79(t，1H)，7.62(d，2H)，7.34(d，2H)，4.75-4.70(m，1H)，4.65-4.52(m，2H)，4.33-4.31(m，1H)，3.80-3.70(m，1H)，3.78-3.66(m，2H)，3.30(dd，1H)，3.16-3.10(m，13H)，2.80-2.68(m，2H)，2.54-2.52(m，2H)，1.91-1.80(m，4H)，1.65-1.70(m，2H)；LRMS(ESI)m/z 820(C37H42Cl2F2N7O6S+，M+H，計算值820).
實施例14N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)苯丙氨酸膽堿酯 使用實施例12所述的一般過程，使用實施例6的化合物和2-溴-N，N，N-三甲基乙銨溴化物，在制備性反相HPLC純化(PhenomenexSynergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0的乙腈-水0.01％TFA)后，得到標題化合物，為無色泡沫
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.65(s，2H)，8.28-8.25(m，1H)，8.14-8.12(m，1H)，8.06-8.04(m，1H)，7.80-7.77(t，1H)，7.64-7.60(m，2H)，7.34-7.32(m，2H)，4.79-4.75(m，1H)，4.65-4.50(m，2H)，4.24-4.22(m，1H)，3.70-3.61(m，3H)，3.57-3.14(m，12H)，2.87-2.55(m，5H)，2.10-1.95(m，3H)，1.80-1.78(m，1H)；LRMS(ESI)m/z 806(C36H40Cl2F2N7O6S+，M+H，計算值806).
實施例15N-{N-[(3，5二氟苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1步驟1-3所述的一般過程，將3-氰基苯-1-磺酰氯變為3，5-二氟苯-1-磺酰氯，得到標題化合物，為無色泡沫1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，7.63-7.61(m，2H)，7.48-7.45(m，2H)，7.36-7.29(m，3H)，4.73-4.70(m，1H)，4.32-4.30(m，1H)，4.22-4.17(q，2H)，3.72-3.70(m，1H)，3.23-3.22(m，1H)，3.10-3.04(m，2H)，3.00-2.94(m，1H)，2.61-2.50(m，2H)，2.38(m，2H)，2.10-2.05(m，1H)，1.83-1.77(m，3H)，1.65(m，2H)，1.28-1.25(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 774(C33H33Cl2F4N5O6S，M+H，計算值774).
實施例16N-{N-[(3，5-二氟苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，在制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0的乙腈-水0.01％TFA)后，從實施例15的化合物得到標題化合物，為白色固體
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，7.63-7.62(d，2H)7.43-7.31(m，5H)，4.64-4.60(m，2H)，4.20-4.14(m，1H)，4.00-3.96(m，1H)，3.72-3.56(m，3H)，3.46-3.01(m，4H)，2.50-2.06(m，6H)；LRMS(ESI)m/z 746(C31H29Cl2F4N5O6S，M+H，計算值746).
實施例17N-{N-[3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[2(S)-(三氟甲基)吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1步驟2-3所述的一般過程，將3，3-二氟哌啶鹽酸鹽變為2(S)-(三氟甲基)吡咯烷，得到標題化合物，為白色固體1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.17(m，1H)，8.03-8.00(m，2H)，7.77-7.74(t，1H)，7.63-7.62(d，2H)，732-7.30(d，2H)，4.72-4.70(m，1H)，4.35-4.32(m，1H)，4.22-4.18(q，2H)，3.62-3.60(m，1H)，3.48-3.42(m，1H)，3.35-3.30(m，2H)，3.09-3.01(m，2H)，2.88-2.73(m，1H)，2.52-2.44(m，1H)，2.00-1.80(m，4H)，1.76-1.74(m，2H)，1.28-1.25(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 781(C34H33Cl2F3N6O6S，M+H，計算值781).
實施例18N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[2(S)-(三氟甲基)吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，從實施例17的化合物得到標題化合物，為米白色固體1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.65(s，2H)，8.21(s，1H)，8.04-8.02(m，2H)，7.79-7.76(t，1H)，7.66-7.64(d，2H)，7.36-7.34(d，2H)，4.74-4.72(m，1H)，4.39-4.37(m，1H)，3.64-3.61(m，1H)，3.53-3.45(m，1H)，3.33-3.29(m，2H)，3.11-3.05(m，2H)，2.90-2.89(m，1H)，2.53-2.51(m，1H)，2.06-1.78(m，6H)；LRMS(ESI)m/z 753(C32H30Cl2F3N6O6S，M+H，計算值753).
實施例19N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[2-(三氟甲基)吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1步驟2-3所述的一般過程，將3，3-二氟哌啶鹽酸鹽變為2-(三氟甲基)吡咯烷，得到標題化合物，為白色固體，是非對映體的混合物1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.22-8.18(m，1H)，8.05-8.00(m，2H)，7.77-7.74(m，1H)，7.63-7.62(m，2H)，7.32-7.30(m，2H)，4.73-4.70(m，1H)，4.35-4.33(m，1H)，4.22-4.18(m，2H)，3.62-3.60(m，1H)，3.48-3.22(m，3H)，3.09-3.04(m，2H)，2.90-2.91(m，1H)，2.52-2.44(m，1H)，2.00-1.80(m，4H)，1.76-1.74(m，2H)，1.28-1.25(m，3H)；LRMS(ESI)m/z 781(C34H33Cl2F3N6O6S，M+H，計算值781).
實施例20N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[2-(三氟甲基)吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，從實施例19的化合物得到標題化合物(為非對映體的混合物)，為米白色固體1HNMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(s，2H)，8.21-8.19(m，1H)，8.02-8.00(m，2H)，7.76-7.71(m，1H)，7.63-7.61(m，2H)，7.34-7.31(d，2H)，4.71-4.69(m，1H)，4.36-4.34(m，1H)，3.61-3.58(m，1H)，334-3.27(m，3H)，3.09-3.02(m，2H)，2.89-2.87(m，1H)，2.51-2.50(m，1H)，2.03-1.75(m，6H)；LRMS(ESI)m/z 753(C32H30Cl2F3N6O6S，M+H，計算值753).
實施例21N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[(3S)-3-氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1步驟2-3所述的一般過程，將3，3-二氟哌啶鹽酸鹽變成(3S)-3-氟吡咯烷鹽酸鹽，在制備性反相HPLC純化(PhenomenexSynergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，10∶90→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)后，得到標題化合物，為白色固體1HNMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.16(s，1H)，8.09-8.07(m，1H)，7.96-7.95(m，1H)，7.77-7.71(m，2H)，7.56-7.54(m，2H)，7.34-7.30(m，1H)，5.30-5.25(m，1H)，4.89-4.87(m，1H)，4.31(q，2H)，4.23(d，1H)，3.85(t，1H)，3.55-3.46(m，2H)，3.40-3.37(dd，2H)，3.20-3.15(m，2H)，3.04-3.00(m，1H)，2.54-2.50(m，1H)，2.35-2.30(m，2H)，2.05-1.98(m，1H)，1.90-1.85(m，1H)，1.39-1.34(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 732(C33H34Cl2FN6O6S，M+H，計算值732).
實施例22N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[(3S)-3-氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，在制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，0∶100→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)后，從實施例21的化合物得到標題化合物，為白色固體1HNMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(s，2H)，8.49-8.48(m，1H)，8.11(s，1H)，8.00-7.99(m，1H)，7.82-7.80(m，1H)，7.68-7.63(m，3H)，7.38-7.36(m，2H)，5.47-5.36(m，1H)，4.63-4.58(m，2H)，4.09-4.07(m，1H)，3.94-3.91(m，1H)，3.80-3.40(m，5H)，3.3 1-3.26(m，1H)，3.04-3.00(M，1H)，2.44-2.25(m，4H)，LRMS(ESI)m/z 704(C31H30Cl2FN6O6S，M+H，計算值704).
實施例23N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[(3R)-3-氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1步驟2-3所述的一般過程，將3，3-二氟哌啶鹽酸鹽變成(3R)-3-氟吡咯烷鹽酸鹽，在制備性反相HPLC純化(PhenomenexSynergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，10∶90→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)后，得到標題化合物，為白色固體1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.65(s，2H)，8.60-8.59(m，1H)，8.16(m，1H)，8.04-8.03(m，1H)，7.90-7.89(m，1H)，7.73-7.66(m，3H)，7.38-7.36(m，2H)，5.49-5.38(m，1H)，4.64-4.62(m，2H)，4.19(q，2H)，4.10-4.00(m，1H)，3.93-3.89(m，1H)，3.80-3.70(m，1H)3.65-3.35(m，3H)，3.27-3.04(m，3H)，2.40-2.29(m，4H)，1.33-1.26(m，3H)，LRMS(ESI)m/z 732(C33H34Cl2FN6O6S，M+H，計算值732).
實施例24N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[(3R)-3-氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，在制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，0∶100→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)后，從實施例23的化合物得到標題化合物，為白色固體1HNMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.51-8.48(m，1H)，8.14(s，1H)，8.02-8.00(m，1H)，7.85-7.83(m，1H)，7.71-7.67(m，3H) 7.40-739(m，2H)，5.50-5.40(m，1H)，4.67-4.60(m，2H)，4.12-3.80(m，1H)，3.92-3.79(m，2H)，3.70-3.45(m，4H)，3.34-3.29(m，3H)，3.06-3.02(m，1H)，2.49-2.30(m，4H)，LRMS(ESI)m/z 704(C31H30Cl2FN6O6S，M+H，計算值704).
實施例25N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[4-氟哌啶]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1步驟2-3所述的一般過程，將3，3-二氟哌啶鹽酸鹽變成4-氟哌啶鹽酸鹽，在制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi 4uMax-RP 80A，100×20.2mm，10∶90→100∶0的乙腈-水0.01％TFA)后，得到標題化合物，為白色固體1HNMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(s，2H)，8.58-8.57(m，1H)，8.15(s，1H)，8.02-8.00(m，1H)，7.89-7.87(m，1H)，7.71-7.64(m，3H)，7.35-7.33(m，2H)，4.98-4.81(m，1H)，4.61-4.58(m，2H)，4.17(q，2H)，4.06-3.94(m，2H)，3.55-3.51(m，1H)，3.34-3.30(m，2H)，3.24-3.02(m，3H)，2.42-2.30(m，2H)，2.20-2.00(m，3H)，1.38-1.35(m，2H)，1.24(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 746(C34H36Cl2FN6O6S，M+H，計算值732).
實施例26N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[4-氟哌啶]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，在制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，0∶100→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)之后，從實施例25的化合物得到標題化合物(為非對映體的混合物)，為白色固體1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.48-8.47(m，1H)，8.12(s，1H)，8.00-7.99(m，1H)，7.83-7.81 (m，1H)，7.68-7.64(m，3H)，7.38-7.36(m，2H)，4.94-4.82(m，1H)，4.64-4.57(m，2H)，4.04-3.92(m，2H)，3.53-3.50(m，1H)，3.40-3.26(m，5H)，3.04-3.00(m，1H)，2.47-2.43(m，1H)，2.47-2.05(m，5H)，LRMS(ESI)m/z 718(C32H32Cl2FN6O6S，M+H，計算值718).
實施例27N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟吡咯烷]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 步驟1N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟吡咯烷]甲酯的合成 在0℃向(3S)-羥基-(L)-脯氨酸(Acros，20g，0.15mol)和碳酸鈉(26g，0.25mol)在500mL的水中的溶液中添加粉狀3-氰基苯磺酰氯(25g，0.12mol)。在室溫攪拌過夜后，反應混合物用濃鹽酸(pH＝3)酸化，產物用EtOAc(3×100mL)提取。有機提取物經干燥(MgSO4)、過濾并濃縮至干。然后將殘余物溶于二氯甲烷(100mL)和甲醇(100mL)中，在0℃添加三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2M，在醚中)，直到黃色持續不變。在室溫攪拌15分鐘后，將混合物濃縮至干，得到N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3(S)-羥基-(L)-脯氨酸甲酯(31.5g)。
在0℃向在200mL的EtOAc中的上述化合物(31.5g，0.10mol)中添加TEA(20mL，0.14mol)和MsCl(9.5mL，0.12mol)。在0℃攪拌20分鐘后，反應用100mL的碳酸氫鈉水溶液淬滅。在攪拌15分鐘后，反應混合物在EtOAc(300mL)和碳酸氫鈉水溶液(200mL)之間分配。分離有機層，用鹽水洗滌，并濃縮至干，得到N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3(S)-甲磺酰基氧基-(L)-脯氨酸甲酯(40g)。
向上述化合物(39.5g，0.10mol)在300mL的AcCN的溶液中添加TEA(35mL，0.25mol)。在75℃加熱4小時后，反應混合物冷卻到室溫并濃縮。將殘余物溶于EtOAc(600mL)中并用1N的NaOH水溶液和鹽水洗滌，濃縮至干，得到N-[(3-氰基苯)磺酰基]-2，3-脫氫脯氨酸甲酯(28g)。
向N-[(3-氰基苯)磺酰基]-2，3-脫氫脯氨酸甲酯(0.7g，2.4mmol)在5mL的DMF中的懸浮液中添加3，3-二氟吡咯烷鹽酸鹽(2g，14.0mmol)和N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)(2.4mL，14.0mmol)。在50℃加熱24小時后，使反應混合物冷卻至室溫并濃縮。殘余物在硅膠上純化(1∶99→30∶70的乙酸乙酯-己烷)，得到N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟吡咯烷]甲酯，為外消旋的無色油狀物的混合物1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.16-8.15(m，1H)，8.10-8.08(m，1H)，7.88-7.86(m，1H)，7.69-7.65(m，1H)，4.30(d，1H)，3.75(s，3H)，3.56-3.47(m，2H)，3.14-3.12(m，1H)，2.88-2.83(m，2H)，2.73-2.70(m，2H)，2.19-2.09(m，3H)1.98(M，1H)；LRMS(ESI)m/z 400(C17H19F2N3O4S，M+H，計算值400).
使用實施例1步驟3所述的一般過程，將(2S，4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(3，3-二氟哌啶-1-基)吡咯烷-2-羧酸甲酯變為N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟吡咯烷]甲酯，得到標題化合物，為白色固體，為非對映體的混合物1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64-8.63(m，2H)，8.26-8.24(m，1H)，8.16-8.09(m，1H)，8.02-8.01(m，1H)，7.77-7.73(M，1H)，7.61-7.58(m，2H)，7.31-7.29(m，2H)，4.77-4.74(m，1H)，4.24-4.21(m，2H)，4.10-4.06(m，1H)，3.61-3.49(m，1H)，3.33-3.26(m，2H)，3.09-3.06(m，1H)，2.70-2.51(m，5H)，1.94-1.88(m，4H)，1.30-1.26(m，3H)；LRMS(ESI)m/z 749(C33H32Cl2F2N6O6S，M+H，計算值749).
實施例28N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟吡咯烷]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，在制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0的乙腈-水0.01％TFA)之后，從實施例27的化合物得到標題化合物(為非對映體的混合物)，為白色固體1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.54-8.53(d，2H)，8.16-8.10(m，1H)，7.90-8.06-7.90(m，2H)，7.67-7.61(m ，1H)，7.51-7.49(m，2H)，7.24-7.22(m，2H)，4.68-4.61(m，1H)，4.09-4.05(m，1H)，3.46-3.18(m，2.5H)，3.00-2.91(m，1.5H)，2.90-2.64(m，5H)，1.95-1.82(m，4H)；LRMS(ESI)m/z 721(C31H28Cl2F2N6O6S，M+H，計算值721).
實施例29N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟哌啶基]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氨異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例27步驟1-2所述的一般過程，將3，3-二氟吡咯烷鹽酸鹽變為3，3-二氟哌啶鹽酸鹽，得到標題化合物，為白色固體，為非對映體的混合物1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.48-8.47(d，2H)，8.07-8.04(d，1H)，7.98-7.83(m，2H)，7.63-7.56(m，1H)，7.46-7.43(m，2H)，7.17-7.12(m，2H)，4.57-4.50(m，1H)，4.10-4.00(m，3H)，3.26-3.24(m，2H)，3.11-3.09(m，1H)，2.86-2.70(m，2H)，2.30-2.24(m，3H)，2.06-1.90(m，1H)，1.73-1.60(m，4H)，1.45-1.20(m，2H)，1.15-1.07(m，3H)；LRMS(ESI)m/z 763(C34H34Cl2F2N6O6S，M+H，計算值763).
實施例30N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟哌啶基]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，從實施例29的化合物得到標題化合物(為非對映體的混合物)，為白色固體
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.52-8.51(d，2H)，8.10-8.09(d，1H)，8.05-7.93(dd，1H)，7.90-7.88(m，1H)，7.66-7.61(m，1H)，7.48-7.47(d，2H)，7.22-7.21(d ,2H)，4.55-4.50(m，1H)，4.03-3.97(m，1H)，3.43-3.30(m，1H)，3.25-3.15(m，2H)，3.00-2.98(m，1H)，2.87-2.76(m，1H)，2.34-2.26(m，3H)，2.06-1.90(m，1H)，1.89-1.60(m，4H)，1.45-1.20(m，2H)；LRMS(ESI)m/z 735(C32H30Cl2F2N6O6S，M+H，計算值735).
實施例31N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[4，4-二氟哌啶基]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例27步驟1-2所述的一般過程，將3，3-二氟吡咯烷鹽酸鹽變為4，4-二氟哌啶鹽酸鹽，分離得到標題化合物的兩種異構體I和II，在各自異構體用1N鹽酸鹽在二乙醚中處理后，得到鹽酸鹽異構體I1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.65(s，2H)，8.05(s，1H)，8.01-8.00(d，1H)，7.78-7.76(d，1H)，7.69-7.66(m，3H)，7.43-7.42(d，2H)，4.87-4.84(m，1H)，4.63-4.60(m，1H)，4.23-4.20(m，2H)，4.10-4.09(m，1H)，3.85(m，1H)，3.71-3.38(m，5H) 3.29-3.25(m，1H)，3.11-3.08(m，1H)，2.52-2.38(m，5H)，2.31-2.25(m，1H)，1.30-1.26(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 763(C34H34Cl2F2N6O6S，M+H，計算值763).異構體II1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.67(s，2H)，8.22(s，1H)，8.15-8.13(d，1H)，8.04-8.03(d，1H)，7.77-7.74(t，1H)，7.60-7.59(d，2H)，7.32-7.30(d，2H)，4.74-4.71(m，1H)，4.36-4.31(m，2H)，3.85-3.82(m，1H)，3.75-3.72(m，1H)，3.52-3.29(m，7H)，3.07-3.02(m，1H)，2.47-2.30(m，6H)，1.35-1.33(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 763(C34H34Cl2F2N6O6S，M+H，計算值763).
實施例32N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[4，4-二氟哌啶基]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，將實施例31的化合物的異構體I和異構體II轉化成標題化合物，在各自異構體用1N的鹽酸在二乙醚中處理后得到鹽酸鹽。從異構體I乙酯得到的酸1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.41(s，2H)，8.05(s，1H)，7.89-7.87(d，1H)，7.83-7.81(d，1H)，7.59-7.54(t，1H)，7.36-70.34(d，2H)，7.11-7.09(d，2H)，4.35-4.32(m，1H)，3.85-3.84(m，1H)，3.43-3.10(m，3H)，2.92-2.88(m，1H)，2.77-2.76(m，1H)，2.22-2.19(m，2H)，2.08-2.06(m，2H)，1.54-1.42(m，6H)；LRMS(ESI)m/z 735(C32H30Cl2F2N6O6S，M+H，計算值735).
從異構體II乙酯得到的酸1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.41(s ，2H)，8.09(s，1H)，7.97-7.96(d，1H)，7.82-7.81(d，1H)，7.58-7.54(t，1H)，7.36-7.34(d，2H)，7.11-7.10(d，2H)，4.39-4.36(m，1H)，3.91-3.88(m，1H)，3.32-3.28(m，1H)，3.21-3.20(m，1H)，3.10-3.09(m，1H)，2.92-2.91(m 1H)，2.72-2.71(m，1H)，2.14-2.12(m，2H)，2.04-2.01(m，2H)，1.80-1.77(m，1H)，1.63-1.53(m，1H)，1.47-1.41(m，4H)；LRMS(ESI)m/z 735(C32H30Cl2F2N6O6S，M+H，計算值735).
實施例33N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[1’-吡咯烷-2’(R)-羧酸叔丁基酯]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3”，5”-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯 使用實施例1步驟2-3所述的一般過程，將3，3-二氟哌啶鹽酸鹽變成D-脯氨酸叔丁基酯，在制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→90∶10的乙腈-水0.01％TFA)后，得到標題化合物，為白色固體
1HNMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(s，2H)，8.55-8.54(m，1H)，8.13(s，1H)，8.03-8.01(m，1H)，7.87-7.85(m，1H)，7.71-7.64(m，3H)，7.35-7.33(m，2H)，4.61-4.59(m，2H)，4.22-4.16(m，3H)，4.10-4.00(m，1H)，3.88-3.84(m，1H)，3.59-3.51(m，2H)，3.24-3.20(m，2H)，3.04-3.01(m，1H)，2.50-2.41(m，1H)，2.26-2.22(m，2H)，2.12-2.10(m，2H)，2.00-1.94(m，1H)，1.50(s，9H)，1.25(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 814(C38H43Cl2N6O8S，M+H，計算值814).
實施例34N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[1’-吡咯烷-2’(R)-羧酸叔丁基酯]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3”，5”-二氨異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸使用實施例2所述的一般過程，在制備性反相HPLC純化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，0∶100→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)后，從實施例33的化合物得到標題化合物，為白色固體1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.47-8.45(m，1H)，8.10(s，1H)，8.02-8.00(m，1H)，7.81-7.79(m，1H)，7.69-7.64(m，3H)，7.37-7.36(m，2H)，4.63-4.57(m，2H)，4.32-4.29(m，1H)，4.15-4.05(m，1H)，3.88-3.84(m，1H)，3.68-3.60(m，1H)，3.56-3.52(m，1H)，3.31-3.26(m，2H)，3.02-2.98(m，1H)，2.53-2.45(m，1H)，2.31-2.10(m，4H)，2.00-1.94(m，1H)，1.50(s，9H)；LRMS(ESI)m/z 786(C36H38Cl2N6O8S，M+H，計算值786).
實施例35N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[1’-吡咯烷-2’(R)-羧酸]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3”，5”-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸 向實施例34的固體化合物(86mg，0.1mmol)中添加三氟乙酸(2.5ml)。在4小時后，將反應濃縮，在制備性反相HPLC純化(PhenomenexSynergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，0∶100→80∶20的乙腈--水0.01％TFA)，得到標題化合物，為白色固體1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.48-8.47(m，1H)，8.10(s，1H)，8.01-7.97(m，1H)，7.82-7.80(m，1H)，7.69-7.61(m，3H)，7.38-7.36(m，2H)，4.63-4.58(m，2H)，4.44-4.41(m，1H)，4.22-4.12(m，1H)，3.90-3.86(m，1H)，3.69-3.62(m，1H)，3.61-3.58(m，1H)，3.33-3.26(m，2H)，3.03-2.98(m，1H)，2.59-2.48(m，1H)，2.37-2.10(m，4H)，2.00-1.89(m ，1H)；LRMS(ESI)m/z 730(C32H31Cl2N6O8S，M+H，計算值730).
權利要求
1.式(I)表示的化合物 或其可藥用鹽，其中A是N或N+-O-；X和Y獨立地選自鹵素、C1-3烷基和C1-3烷氧基；R1選自(1)氫、(2)C1-10烷基、(3)-(C1-10烷基)-芳基、(4)-(C1-10烷基)-O-C1-10烷基、(5)-(C1-10烷基)-OC(O)-C1-10烷基、(6)-(C1-10烷基)-OC(O)-芳基、(7)-(C1-10烷基)-OC(O)O-C1-10烷基、和(8)-(C1-10烷基)-N+(C1-3烷基)3；其中烷基任選被1-3個獨立地選自Ra的取代基取代，并且芳基任選被1-3個獨立地選自Rb的取代基取代；R2是氫或甲基；R3和R4之一是氫，且另一個為 k是0-4；R5和R6獨立地選自氫、氟、CF3和CO2Rf，條件是R5和R6不都是氫；R7和R8獨立地選自H、-SO2-C1-3烷基、CN、CF3、OCF3和鹵素；Ra選自(1)-ORd、(2)-NRdS(O)mRe、(3)-NO2、(4)鹵素、(5)-S(O)mRd、(6)-SRd、(7)-S(O)2ORd、(8)-S(O)mNRdRe、(9)-NRdRe、(10)-O(CRfRg)nNRdRe、(11)-C(O)Rd、(12)-CO2Rd、(13)-CO2(CRfRg)nCONRdRe、(14)-OC(O)Rd、(15)-CN、(16)-C(O)NRdRe、(17)-NRdC(O)Re、(18)-OC(O)NRdRe、(19)-NRdC(O)ORe、(20)-NRdC(O)NRdRe、(21)-CRd(N-ORe)、(22)CF3、(23)-OCF3、(24)C3-8環烷基、和(25)雜環基；其中環烷基和雜環基任選被1-3個獨立地選自Rc的取代基取代；Rb選自(1)選自Ra的基團、(2)C1-10烷基、(3)C2-10烯基、(4)C2-10炔基、(5)芳基、和(6)-(C1-10烷基)-芳基，其中烷基、烯基、炔基和芳基任選被1-3個選自獨立選自Rc的基團取代；Rc是(1)鹵素、(2)氨基、(3)羧基、(4)C1-4烷基、(5)C1-4烷氧基、(6)芳基、(7)-(C1-4烷基)-芳基、(8)羥基、(9)CF3、(10)OC(O)C1-4烷基、(11)OC(O)NRfRg、或(12)芳基氧基；Rd和Re獨立地選自氫、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy，其中烷基、烯基、炔基和Cy任選被1-4個獨立選自Rc的取代基取代；或者Rd和Re與它們所連接的原子一起形成含有0-2個獨立選自氧、硫和N-Rh的附加雜原子的4-7元雜環；Rf和Rg獨立地選自氫、C1-10烷基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy；或者Rf和Rg與它們所連接的碳原子一起形成含有0-2個獨立選自氧、硫和氮的雜原子的5-7元環；Rh選自Rf和-C(O)Rf；Cy選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；m是1或2；且n是2-5。
2.權利要求1所述的化合物，其中X和Y之一是鹵素并且另一個選自鹵素、C1-3烷基和C1-3烷氧基。
3.權利要求1所述的化合物，其中R1是氫、C1-4烷基、-(C1-4烷基)OC1-4烷基或-(C1-4烷基)N+(C1-3烷基)3。
4.權利要求1所述的化合物，其中R3是氫并且R4是 或 其中R5和R6之一是F并且另一個是H或F，k是0-4，且k′是0-2。
5.權利要求1所述的化合物，其中R4是氫并且R3是 或 其中R5和R6之一是F并且另一個是H或F，k是0-4，且k′是0-2。
6.具有下式Ia的權利要求1所述的化合物， 或其可藥用鹽，其中A是N或N+O-；R1選自氫、C1-10烷基、-(C1-4烷基)．芳基、-(C1-4烷基)-O-C1-4烷基和-(C1-4烷基)-N+(C1-3烷基)3；R3和R4之一是氫并且另一個選自 和 其中R5和R6之一是F并且另一個是H或F，k是0-4，且k′是0-2；R7和R8獨立地選自H、SO2-C1-3烷基、CN、CF3、OCF3和鹵素。
7.權利要求6所述的化合物，其中k是0-2。
8.權利要求6所述的化合物，其中R3是氫并且R4選自3，3-二氟-1-氮雜環丁基、3，3-二氟-1-吡咯烷基和3，3-二氟-1-哌啶基。
9.權利要求7所述的化合物，其中R7是3-氰基并且R8是氫。
10.包括治療有效量的權利要求1所述的化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體的藥物組合物。
11.權利要求1所述的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預防由細胞粘著介導的疾病的藥物中的應用。
12.權利要求9所述的應用，其中所述的疾病選自哮喘、多發性硬化、炎癥性腸病、慢性阻塞性肺病、鐮狀細胞性貧血、白血病和類風濕性關節炎。
全文摘要
本發明提供了式(I)的化合物，其是VLA－4的拮抗劑并且因而可用于抑制或預防細胞粘著和細胞粘著誘導的病患。這些化合物可配制成藥物組合物并可適于炎癥性腸病(包括潰瘍性結腸炎和克羅恩氏病)、多發性硬化、哮喘和類風濕性關節炎的治療。
文檔編號A61P25/00GK101006097SQ200580027718
公開日2007年7月25日 申請日期2005年8月12日 優先權日2004年8月16日
發明者陳為橋, A·D·萊布薩克, B·穆諾斯, S·文卡特拉曼, 王波維 申請人:默克公司